第 1 期 陈庆庆等 : 纤维素酶对豆粕异黄酮提取的影响 137 (glycitein), 其中黄豆黄素含量极低 ; 糖苷包括三 大类, 为 7 葡萄糖苷 6 狅 乙酰基葡萄糖苷和 6 狅 丙二酰基葡萄糖苷 豆粕是食用油加工中产生的副 产品, 绝大多数被用作饲料, 而其中的大豆异黄酮 留在豆粕中未被

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1 第 58 卷第 1 期化工学报 Vol.58 No 年 1 月 Journal of Chemical Industry and Engineering (China) January 2007 檭檭檭檭檭檭檭檭檭檭檭檭檭檭 研究论文 纤维素酶对豆粕异黄酮提取的影响 陈庆庆, 夏黎明 ( 浙江大学化学工程与生物工程学系, 浙江杭州 ) 摘要 : 在常规的醇提工艺前用不同微生物来源的纤维素酶对豆粕进行预处理, 研究结果发现 : 细菌纤维素酶能使异黄酮的提取率提高 1.4 倍, 产物以糖苷型异黄酮为主, 与直接醇提得到的产物组成相类似 ; 来自黑曲霉的纤维素酶对大豆异黄酮的提取率没有影响, 但能将糖苷型异黄酮转化为苷元型异黄酮 ; 里氏木霉纤维素酶能使醇提液中大豆异黄酮的提取率提高 1.6 倍, 并能把以糖苷型为主的异黄酮转化为具有更高生理活性的苷元型异黄酮 里氏木霉纤维素酶的最适用量为 15FPIU (g 豆粕 ) -1, 酶作用时间为 36h 采用弱极性的大孔树脂精制苷元型异黄酮, 效果较好 关键词 : 豆粕 ; 纤维素酶 ; 糖苷型异黄酮 ; 苷元型异黄酮 ; 大孔树脂中图分类号 :TQ 文献标识码 :A 文章编号 : (2007) 犈犳犲犮狋狊狅犳犮犲犾狌犾犪狊犲狅狀犲狓狋狉犪犮狋犻狀犵犻狊狅犳犾犪狏狅狀犲犳狉狅犿狊狅狔犫犲犪狀狉犲狊犻犱狌犲 犆犎犈犖犙犻狀犵狇犻狀犵, 犡犐犃犔犻犿犻狀犵 ( 犇犲狆犪狉狋犿犲狀狋狅犳犆犺犲犿犻犮犪犾犈狀犵犻狀犲犲狉犻狀犵犪狀犱犅犻狅犲狀犵犻狀犲犲狉犻狀犵, 犣犺犲犼犻犪狀犵 犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔, 犎犪狀犵狕犺狅狌 , 犣犺犲犼犻犪狀犵, 犆犺犻狀犪 ) 犃犫狊狋狉犪犮狋 :Soybeanresiduefrom soybeanoilmanufacturerscanbeusedtoextractisoflavone.soybean residuewaspre hydrolyzedbycelulasefromdiferentmicrobes,thenthehydrolyzatewasobtainedandthe solidresiduewasextractedbyusing70% ethanol.whenusingthecelulasefrom 犅犪犮犻犾狌狊 spzu 4,the isoflavoneyieldwas1.4timesasthatbynormalethanolextractionandtheisoflavonecomposition was unchanged.whenusingthecelulasefrom 犃狊狆犲狉犵犻犾狌狊狀犻犵犲狉 ZU 7,theisoflavoneyieldwasnotincreased but glucoside isoflavones were transformed to aglycones.by pre hydrolysis with celulase from 犜狉犻犮犺狅犱犲狉犿犪狉犲犲狊犲犻 ZU 5,theisoflavoneyield wasincreased by1.6timesandatthesametimethe isoflavonecompositionwastransformedtoaglyconeswithhigherphysiologicalactivity.theoptimaldosage ofcelulasefrom 犜狉犻犮犺狅犱犲狉犿犪狉犲犲狊犲犻 ZU 5was15FPIU (FilterPaperInternationalUnits) (gsoybean residue) -1 andthetreatingtimewas36h.whenselectingmacroporousresinforisoflavonesabsorptionand desorption,themacroporousresinwithweakpolaritywasproperforpurifyingaglyconeisoflavones. 犓犲狔狑狅狉犱狊 :soybeanresidue;celulase;glucosideisoflavone;aglyconeisoflavone;macroporousresin 引言 大豆异黄酮是一类植物雌激素, 它在抗癌防癌 预防心血管疾病 预防骨质疏松和改善妇女更 [1 5] 年期综合征等方面有重要作用 大豆异黄酮主要由 12 种化合物组成, 并可分为游离型的苷元和结合型的糖苷两类, 苷元包括染料木黄酮 (genistein) 黄豆苷元 (daidzein) 和黄豆黄素 究生 收到初稿, 收到修改稿 联系人 : 夏黎明 第一作者 : 陈庆庆 (1972 ), 男, 博士研 犚犲犮犲犻狏犲犱犱犪狋犲 : 犆狅狉狉犲狊狆狅狀犱犻狀犵犪狌狋犺狅狉 : XIA Liming. 犈 - 犿犪犻犾 : zju.edu.cn

2 第 1 期 陈庆庆等 : 纤维素酶对豆粕异黄酮提取的影响 137 (glycitein), 其中黄豆黄素含量极低 ; 糖苷包括三 大类, 为 7 葡萄糖苷 6 狅 乙酰基葡萄糖苷和 6 狅 丙二酰基葡萄糖苷 豆粕是食用油加工中产生的副 产品, 绝大多数被用作饲料, 而其中的大豆异黄酮 留在豆粕中未被利用, 造成豆粕资源的极大浪费 在大豆异黄酮的常规乙醇提取过程中, 由于细胞壁 的作用, 有效成分不易溶出, 降低了醇提的效果 而纤维素酶能破坏细胞壁的结构, 从而增加细胞内 物质的溶出 大孔吸附树脂是一类新型的非离子型 高分子吸附剂, 广泛应用于中草药有效成分的分离 和纯化 本文主要探讨了不同微生物来源的纤维素 酶的预处理对脱脂豆粕中异黄酮乙醇提取率以及对 异黄酮组成成分的影响, 并初步考察了大孔树脂 对不同组成的异黄酮吸附和解吸效果, 为纤维素 酶在植物中有效成分的提取和分离提供一定的 依据 1 材料与方法 1 1 原料和试剂 不同微生物来源的纤维素酶由本实验室自制 由细菌 ( 犅犪犮犻犾狌狊 spzu 4) 液体发酵制成的纤维 素酶制剂 [6], 经硫酸铵沉淀后制成粗酶粉, 其内切 型 β 葡聚糖酶活力为 U g -1, 未测出滤 纸酶活和 β 葡萄糖苷酶酶活 ; 由黑曲霉 ( 犃狊狆犲狉 犵犻犾狌狊狀犻犵犲狉 ZU 7) 固态发酵制备而成的纤维素酶制剂 [7], 每克干酶曲含 β 葡萄糖苷酶活力为 432IU, 未测出滤纸酶活和内切型 β 葡聚糖酶酶 活 ; 由里氏木霉 ( 犜狉犻犮犺狅犱犲狉犿犪狉犲犲狊犲犻 ZU 5) 固态 发酵制备而成的纤维素酶 [8], 每克干酶曲含 146 个 滤纸酶活力国际单位 (FPIU),CMC 活力为 U g -1, β 葡萄糖苷酶活力为 22IU g -1 脱脂豆粕购于山东 大孔树脂 NKA 9 AB 8 和 S 8 购于南开大学化工厂,HZ 816 和 HZ 801 由上海华震科技有限公司赠送,SD 200 由杭州增 光树脂厂赠送 标准品染料木黄酮 (genistein, Ge) 黄豆苷元 (daidzein, De) 染料木苷 (genistin,g) 和黄豆苷 (daidzin,d) 购于上海 同田生化技术有限公司 乙醇为分析纯,HPLC 分析用流动相乙腈为色谱纯, 水为娃哈哈瓶装纯 净水 1 2 纤维素酶的活力测定 纤维素酶总活力 ( 滤纸酶活 ) 和 β 葡萄糖苷 酶按 Ghose [9] 方法测定 : 一个滤纸酶活力国际单位 (FPIU) 等于酶促反应中每分钟生成 1.0μmol 葡 萄糖 ( 以还原糖表示 ) 的酶量 ; 一个 β 葡萄糖苷 酶活力国际单位等于标准酶促反应条件下每分钟生 成 2.0μmol 葡萄糖的酶量, 以 IU ml -1 表示, 用 纤维二糖作为底物 ; 内切型 β 葡聚糖酶活力单位 定义为在酶促反应中每小时生成 1 mg 还原糖所需 要的酶量 ( 以葡萄糖量表示 ), 以 U ml -1 表示, 用羧甲基纤维素钠 (CMC Na) 作为底物 [6] 1 3 酶对脱脂豆粕的预处理和常规的乙醇提取 工艺 称取 10g 脱脂豆粕, 加入适量的经稀释的不 同微生物来源的纤维素酶液, 使豆粕的底物浓度为 100g L -1, 调 ph 值为 4.8 ( 细菌纤维素酶的为 9.5),50 反应 作用一定时间后, 离心, 得上清 液 ( 酶解液 ), 用 HPLC 法测定上清液中的异黄酮 含量和组分, 离心残渣加入 95% 乙醇 100 ml, 50 水浴振荡 4.5h, 过滤, 用紫外分光光度法测 定醇提液中的异黄酮含量, 并用 HPLC 法分析溶 液中各异黄酮成分 1 4 不同大孔树脂对异黄酮吸附和解吸效果的 影响 称取 6 种大孔树脂 ( 表 1) 各 10g 于三角瓶 中, 分别加入经酶预处理和未经酶预处理的 100 ml 浓度为 0.8 mg ml -1 的大豆异黄酮醇提浓缩 液,25 振荡 24h ( 振荡频率为每分钟 90 次 ) 过 滤, 保留滤液, 用蒸馏水洗涤树脂, 再将树脂浸泡 在 100ml95% 的乙醇中,25 振荡解吸 24h, 用紫 外分光光度法测定滤液即吸附上清液和解吸液中异 黄酮的浓度 吸附率和解吸率分别为 树脂吸附率 = ( 犆 0- 犆 1)/ 犆 O 100% 树脂解吸率 = 犆 2/ ( 犆 0- 犆 1) 100% 式中犆 0 为吸附前样液中异黄酮的浓度,mg ml -1 ; 犆 1 为吸附后上清液中异黄酮的浓度,mg ml -1 ; 犆 2 为解吸液中异黄酮的浓度,mg ml 大豆异黄酮总含量测定 采用 751GW 紫外分光光度计 ( 上海分析仪器 [10] 厂 ) 大豆异黄酮的总含量测定按张玉梅等的方 法测定, 以其中的染料木黄酮作为标准品, 在其最 大紫外吸收峰 259nm 处测定 1 6 犎犘犔犆测定大豆异黄酮成分组成 高效液相色谱仪来自于美国 syltech 公司 Model500G 型的高压梯度系统 该系统包括 : 两 个蠕动泵, 紫外检测器,7725i 手动进样阀, 微孔

3 138 化工学报第 58 卷 滤膜过滤器, 超声波脱气机, 柱温箱 分析用柱子 为 YMC 公司的反相 C 18 柱 ( 4.6mm 150 mm) 测定条件如下 : 进样量 20μl, 检测波长 254nm, 柱温 40, 流速 1.0ml min -1 溶剂 A:10% 乙 腈 ( 含 0.1% 三氯乙酸 ), 溶剂 B:90% 乙腈 ( 含 0.1% 三氯乙酸 ), 梯度 : 在 30 min 内溶剂 A 从 100% 下降到 30% 上样前用溶剂 A 平衡 10min 采用浙江大学智达信息工程有限公司的 N2000 色谱工作站, 以外标法计算大豆异黄酮含量 表 1 大孔树脂的物理性质和类型 犜犪犫犾犲 1 犘犺狔狊犻犮犪犾狆狉狅狆犲狉狋犻犲狊犪狀犱狋狔狆犲狊狅犳犿犪犮狉狅狆狅狉狅狌狊狉犲狊犻狀狊 Resin types Radius /mm Surfacearea Average -1 /m 2 g diameter/nm Polarity AB weak NKA strong S strong HZ weak HZ none SD strong 2 结果与讨论 2 1 犃狊狆犲狉犵犻犾狌狊狀犻犵犲狉犣犝 7 纤维素酶对豆粕异黄 酮提取的影响 由表 2 可以看出, 经酶作用 24h 后, 黑曲霉 纤维素酶对异黄酮提取得率没有促进作用, 但能把 糖苷型为主的异黄酮转化为以苷元型为主的异黄 酮 这是因为黑曲霉纤维素酶中以 β 葡萄糖苷酶 为主, 而滤纸酶活和内切型 β 葡聚糖酶活未测出, 因此对豆粕细胞壁的破坏作用很小, 对提高通透性 作用有限 ; 而 β 葡萄糖苷酶能把糖苷型的异黄酮 切掉葡萄糖基, 变成游离的苷元型异黄酮 表 2 犃狊狆犲狉犵犻犾狌狊狀犻犵犲狉犣犝 7 纤维素酶对 豆粕异黄酮提取的影响 犜犪犫犾犲 2 犈犳犲犮狋狊狅犳犮犲犾狌犾犪狊犲犳狉狅犿犃狊狆犲狉犵犻犾狌狊狀犻犵犲狉犣犝 7 Enzyme 狅狀犻狊狅犳犾犪狏狅狀犲犲狓狋狉犪犮狋犻狅狀狅犳狊狅狔犫犲犪狀狉犲狊犻犱狌犲 Totalisoflavone content g -1 Isoflavonecomposition/% Glucoside (D+G) Aglycone (De+Ge) 犅犪犮犻犾狌狊狊狆犣犝 4 纤维素酶对豆粕异黄酮提取 的影响 由表 3 可以发现, 经酶作用 24h 后, 随着酶 用量的增加, 总异黄酮含量也提高, 这是因为细菌 纤维素酶以内切型 β 葡聚糖酶酶活为主, 但是未 测出滤纸酶活, 所以能在一定程度上破坏细胞壁的 结构, 提高通透性, 从而提高提取率 当酶用量为 1.44g 和 1.92g 时, 醇提液中异黄酮含量已接近 说明增加酶量已不能进一步提高总异黄酮提取率 另外, 由于 β 葡萄糖苷酶活性未测出, 因此经细 菌纤维素酶作用后, 异黄酮结构组成基本没有发生 变化 表 3 犅犪犮犻犾狌狊狊狆犣犝 4 纤维素酶对豆粕异黄酮提取的影响 犜犪犫犾犲 3 犈犳犲犮狋狊狅犳犮犲犾狌犾犪狊犲犳狉狅犿犅犪犮犻犾狌狊狊狆 犣犝 4 狅狀犻狊狅犳犾犪狏狅狀犲犲狓狋狉犪犮狋犻狅狀狅犳狊狅狔犫犲犪狀狉犲狊犻犱狌犲 Enzyme Totalisoflavone content g -1 Isoflavonecomposition/% Glucoside (D+G) Aglycone (De+Ge) 犜狉犻犮犺狅犱犲狉犿犪狉犲犲狊犲犻犣犝 5 纤维素酶对豆粕异 黄酮提取的影响 里氏木霉纤维素酶酶系比较齐全, 包括内切 型 β 葡聚糖酶 (EC ), 外切型 β 葡聚糖酶 (EC ) 和 β 葡萄糖苷酶 (EC ), 它们不仅能协同降解纤维素, 破坏细胞壁的结构, 提高通透性, 而且由于 β 葡萄糖苷酶的作用, 可 以增加苷元型异黄酮含量 下面主要研究里氏木霉 纤维素酶的不同酶用量和处理时间对豆粕异黄酮提 取和组成的影响 酶水解液中异黄酮含量和组成的变化情况 由图 1 (a) 的 HPLC 图谱可以看出, 在酶水解液 中, 染料木黄酮 (genistein) 黄豆苷元 (daid zein) 染料木苷 (genistin) 和黄豆苷 (daidzin) 含量都很低, 这是由于它们在水溶液中的溶解度比 较低, 因此, 在紫外分光光度法中表现出来的吸收 可能为丙酰基或乙酰基糖苷型大豆异黄酮, 因为它 们在水溶液中溶解度良好 当然, 也有可能是别的在 254nm 处有光吸收的物质, 这有待于进一步研究 乙醇提取液中异黄酮含量和组成的变化情 况 豆粕经里氏木霉纤维素酶预处理后, 按照常规

4 第 1 期 陈庆庆等 : 纤维素酶对豆粕异黄酮提取的影响 139 工艺进行乙醇提取 4.5h 醇提液中异黄酮的含量 变化情况见表 4 表 4 纤维素酶预处理对乙醇提取液中异黄酮含量的影响 犜犪犫犾犲 4 犈犳犲犮狋狊狅犳狆狉犲狋狉犲犪狋犿犲狀狋犫狔犮犲犾狌犾犪狊犲狅狀狔犻犲犾犱狅犳 犻狊狅犳犾犪狏狅狀犲犻狀犲狋犺犪狀狅犾犲狓狋狉犪犮狋狅犳狊狅狔犫犲犪狀狉犲狊犻犱狌犲 / 犿犵 Enzymedosage/FPIU (gsoybeanresidue) -1 Treatingtime/h 从表 4 可以看出, 经里氏木霉纤维素酶预处理, 再经相同时间的乙醇提取, 大豆异黄酮的含量有一定程度的提高, 这说明纤维素酶对细胞壁的降解破坏对醇提有促进作用 且可以看出, 经 36h 不同剂量酶预处理后, 对醇提的促进效果最明显, 其中,15FPIU (g 豆粕 ) -1 的酶剂量和 20 FPIU (g 豆粕 ) -1 的酶剂量的促进效果已基本一致, 和不经纤维素酶预处理相比, 增加 1.6 倍 而且, 经过酶的处理, 糖苷型异黄酮已经转化为苷元型异黄酮 [ 见图 1 (c)] 而越来越多的研究表明, 异黄酮以游离的苷元型在体内发挥作用, 而且苷元型异黄酮和糖苷型异黄酮相比, 具有更高的生物利 [11 14] 用度 所以, 在大豆异黄酮的分离提取过程中, 不仅要关注总的异黄酮含量, 更要注意其结构形式 因此, 经过里氏木霉纤维素酶的预处理, 不仅能提高醇提的效果, 而且能改变异黄酮成分的组成, 使其以苷元型为主, 从而提高其生理活性, 增加了附加值, 这一点具有十分重要的意义 因此, 里氏木霉纤维素酶对豆粕异黄酮有双重功能, 一是破坏细胞壁, 提高乙醇提取率 ; 二是转化异黄酮, 使异黄酮具有更高生理活性 图 1 犜狉犻犮犺狅犱犲狉犿犪狉犲犲狊犲犻 ZU 5 纤维素酶处理前后的 HPLC 图谱 Fig.1 HPLCchromatogramsofbefore/aftercelulasetreatmentfrom 犜狉犻犮犺狅犱犲狉犿犪狉犲犲狊犲犻 ZU 5 1 genistin;2 daidzin;3 genistein;4 dadzein

5 140 化工学报第 58 卷 2 4 不同大孔树脂对异黄酮吸附和解吸效果的影响 由表 5 可以看出, 不同大孔树脂对苷元型异黄 酮和糖苷型异黄酮的吸附和解吸作用是不同的 对 于苷元型为主的异黄酮,AB 8 和 HZ 801 具有良 好的精制效果, 而对于以糖苷型为主的异黄酮, HZ 816 和 SD200 具有较好的精制效果 这是由于 苷元型异黄酮失去葡萄糖基而极性较小, 从而容易 被弱极性的大孔树脂吸附和解吸, 而糖苷型异黄酮 由于葡萄糖基的作用, 具有一定的极性, 因此极性 的 SD200 大孔树脂对其精制效果较好, 对于 HZ 816, 虽然为非极性树脂, 但是由于其比表面积较 大, 而大孔树脂吸附以物理吸附为主, 因而吸附效 果也较好 在已发表的有关大孔树脂精制大豆异黄 酮的文献中, 一般都以总异黄酮含量作为指标, 很 少关注异黄酮的结构组成, 从而造成大孔树脂吸附 效果的差别 因此, 在使用大孔树脂精制大豆异黄 酮时, 必须首先考察异黄酮的具体组成成分, 这样 才能有针对性地筛选出精制效果良好的大孔树脂 表 5 不同大孔树脂对异黄酮吸附和解吸的影响 犜犪犫犾犲 5 犈犳犲犮狋狊狅犳犱犻犳犲狉犲狀狋犿犪犮狉狅狆狅狉狅狌狊狉犲狊犻狀狅狀 Macroporous resin 犻狊狅犳犾犪狏狅狀犲犪犫狊狅狉狆狋犻狅狀犪狀犱犱犲狊狅狉狆狋犻狅狀 Aglyconeisoflavone Absorption Desorption Glucosideisoflavone Absorption Desorption AB NKA HZ S SD HZ 结论 对于细菌纤维素酶, 经其预处理后, 异黄酮的 提取得率提高 1.2 倍 [1.44g (10g 底物 ) -1 ]; 而经黑曲酶纤维素酶的预处理后, 大豆异黄酮的提 取得率没有改变, 但是却能把以糖苷型为主的异黄 酮转化为苷元型异黄酮 而来自里氏木霉的纤维素 酶最适酶用量为 15FPIU (g 豆粕 ) -1, 经其预 处理 36h 后, 能使醇提液中大豆异黄酮的提取得 率提高 1.6 倍, 并能把以糖苷型为主的异黄酮转化 为具有更高生理活性的苷元型异黄酮 来自里氏木 酶的纤维素酶在大豆异黄酮的提取中具有双重功 能 另外, 在吸附和解吸大豆异黄酮时, 要考虑异 黄酮的结构组成, 才能有针对性地筛选大孔树脂, 从而提高提纯效果 采用弱极性的大孔树脂精制苷 元型异黄酮, 效果较好 犚犲犳犲狉犲狀犮犲狊 [1] Song Yongsheng ( 宋永生 ),Zhang Bingwen ( 张炳文 ), HaoZhenghong ( 郝征红 ), 犲狋犪犾.Researchprogresson thesoybeanisoflavone. 犑狅狌狉狀犪犾狅犳犆犺犻狀犲狊犲犐狀狊狋犻狋狌狋犲狅犳 犉狅狅犱犛犮犻犲狀犮犲犪狀犱犜犲犮犺狀狅犾狅犺狔 ( 中国食品学报 ),2002,6 (6):61 68 [2] Fred Brouns. Soya isoflavones:a new and promising ingredientfor the health foods sector. 犉狅狅犱犚犲狊犲犪狉犮犺 犐狀狋犲狉狀犪狋犻狅狀犪犾,2002,35: [3] PaulNestel.Isoflavones:efectsoncardiovascularriskand functions. 犐狀狋犲狉狀犪狋犻狅狀犪犾犆狅狀犵狉犲狊犛犲狉犻犲狊,2004,1262: [4] AlysonL.Huntley,EdzardErnst.Soyforthetreatment of perimenopausal symptoms a systematic review. 犕犪狋狌狉犻狋犪狊,2004,47:1 9 [5] Uzzan M,Labuza T P.Criticalissuesin R&D ofsoy isoflavone enrichedfoodsanddietarysupplements. 犑狅狉狌狀犪犾 狅犳犉狅狅犱犛犮犻犲狀犮犲,2004,69 (3):77 86 [6] ShenXuelian ( 沈雪亮 ),XiaLiming ( 夏黎明 ).Studieson screening of celulase producing bacteria and enzymatic charactersticsthereof. 犆犺犲犿犻狊狋狉狔犪狀犱犐狀犱狌狊狋狉狔狅犳犉狅狉犲狊狋 犘狉狅犱狌犮狋狊 ( 林产化学和工业 ),1999,19 (1):6 10 [7] XiaLiming ( 夏黎明 ).Celobiaseproductionbyaselected 犃狊狆犲狉犵犻犾狌狊狀犻犵犲狉 straininsolidstatefermentation. 犉狅狅犱犪狀犱犉犲狉犿犲狀狋犪狋犻狅狀犐狀犱狌狊狋狉犻犲狊 ( 食品与发酵工业 ),1999, 25 (2):1 5 [8] XiaLiming,CenPeilin.Celulaseproductionbysolidstate fermentation on lignocelulosic waste from the xylose industry. 犘狉狅犮犲狊狊犅犻狅犮犺犲犿犻狊狋狉狔,1999,34 (9): [9] GhoseT K.Measurementofcelulaseactivities. 犘狌狉犲犪狀犱 犃狆狆犾. 犆犺犲犿.,1987,59 (2): [10] Zhang Yumei ( 张玉梅 ),Zhang Xuebin ( 张学斌 ),Gao Xunian ( 高旭年 ), 犲狋犪犾.Detectionofsoybeanisoflavone bythe method ofultravioletspectrophotometry. 犆犺犻狀犲狊犲犑狅狌狉狀犪犾狅犳犉狅狅犱犎狔犵犻犲狀犲 ( 中国食品卫生杂志 ),2000, 12 (4):7 9 [11] KennethD R Setchel,Nadine M Brown,LindaZimmer Nechemias, 犲狋犪犾. Evidenceforlackofabsorptionofsoy isoflavoneglycosidesinhumans,supportingthecrucialrole ofintestinalmetabolism forbiovailability. 犃犿. 犑. 犆犾犻狀. 犖狌狋狉.,2002,76: [12] Mariusz K Piskula, Jun Yamakoshi, Yukihiko Iwai. Daidzeinandgenisteinbutnottheirglucosidesareabsorbed fromtheratstomach. 犉犈犅犛犔犲狋犲狉狊,1999,447: [13] ToruIzumi, Mariusz K Piskula,Sachiko Osawa, 犲狋犪犾. Soyisoflavoneaglyconesareabsorbedfasterandinhigher amountsthantheirglucosidesinhumans. 犜犺犲犑狅狌狉狀犪犾狅犳犖狌狋狉犻狋犻狅狀,2000,130: [14] HeFujin ( 河福金 ),WangJian ( 王健 ),NiuJianzhao ( 牛建昭 ), 犲狋犪犾.Experimetalstudyongrowthinhibitionand angiogenesisintransplantedtumorcaused by genistein 犻狀狏犻狏狅. 犆犺犻狀犲狊犲犘犺犪狉犿犪犮狅犾狅犵犻犮犪犾犅狌犾犲狋犻狀 ( 中国药理学通报 ),2003,19 (1):73 76

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