80 功能因而在研究二恶英类化合物的作用机制时, 大量的研究集中于研究 AhR 的结构功能和化学物 [3,4] 对 AhR 的亲和性如二恶英 (TCDD) 与 C57BL/6 小鼠 AhR 的亲和性是与 DBA/ 小鼠 AhR 的 6 倍, 对于 DBA/ 小鼠, 需要 10~0 倍或更高的

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栈宦
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1 复旦学报 ( 医学版 ) Fudan UnivJ Med Sci 008Nov,35(6) 819 二恶英染毒诱导相同芳香烃受体小鼠肝脏基因的差异表达吴庆 1 常秀丽 1 周志俊 1 大迫诚一郎远山千春 ( 1 复旦大学公共卫生学院劳动卫生教研室上海 0003; 东京大学大学院医学系研究科日本东京都文京区本乡 ) 摘要目的用 cdna 微阵列分析 (microaray) 探查具有相同芳香烃受体 (AhR) 的不同种系小鼠对二恶英 (TCDD) 反应的基因表达谱方法用 TCDD 染毒具有相同 AhR 受体表型的 BALB,CBA 和 C3H 种系小鼠, 染毒剂量为 40μg/kg 4h 后取肝脏样品, 提取 RNA, 用 cdna 微阵列法, 分析肝脏基因表达的差异结果用测序法确认了 BALB,CBA 和 C3H3 种系小鼠的芳香烃受体的基因型完全相同 cdna 微阵列分析结果显示了 TCDD 诱导 3 系小鼠基因变化总数各系小鼠共同的诱导基因和独特的诱导基因结论本文数据提供了在不同遗传背景下具有相同 AhR 受体种系小鼠的不同 TCDD 诱导基因表达谱, 提示了 TCDD 染毒后 3 系小鼠的基因表达特异性, 为探讨不同种系小鼠对化学物毒性作用的不同反应提供了基础数据关键词二恶英 ; 芳香烃受体 ; 基因中图分类号 Q786 文献标志码 A 犜犆犇犇犻狀犱狌犮犲犱犱犻犳犲狉犲狀狋犵犲狀犲犲狓狆狉犲狊犻狅狀狆狉狅犳犻犾犲狊犻狀犿狅狌狊犲狊狋狉犪犻狀狊狑犻狋犺犻犱犲狀狋犻犮犪犾犃犺犚犵犲狀狅狋狔狆犲 WU Qing 1,CHANGXiu li 1,ZHOUZhi jun 1,OHSAKOSeichiroh,TOHYAMAChiharu ( 1 犇犲狆犪狉狋犿犲狀狋狅犳犗犮犮狌狆犪狋犻狅狀犪犾犎犲犪犾狋犺, 犛犮犺狅狅犾狅犳犘狌犫犾犻犮犎犲犪犾狋犺, 犉狌犱犪狀犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔, 犛犺犪狀犵犺犪犻 0003, 犆犺犻狀犪 ; 犆犲狀狋犲狉犳狅狉犇犻狊犲犪狊犲犅犻狅犾狅犵狔犪狀犱犐狀狋犲犵狉犪狋犻狏犲犕犲犱犻犮犻狀犲, 犌狉犪犱狌犪狋犲犛犮犺狅狅犾狅犳犕犲犱犻犮犻狀犲, 犜犺犲犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔狅犳犜狅犽狔狅, 犎狅狀犵狅, 犅狌狀犽狔狅犽狌, 犜狅犽狔狅 , 犑犪狆犪狀 ) 犃犫狊狋狉犪犮狋犗犫犼犲犮狋犻狏犲 Toinvestigategeneexpressionmodulatedby,3,7,8 tetrachlorodibenzo p dioxin(tcdd)inaspecificgeneticbackgroundwithidenticalahr. 犕犲狋犺狅犱狊 Asingleoraldoseof TCDD (40μg/kg)wasadministeredtoBALB/cAnNCrj(BALB),C3H/HeNCrj(C3H),andCBA/ JNCrj(CBA)mice.HepaticRNAswerecolected4hourslater.cDNA microarrayswereperformed tocomparetheprofileofgeneexpressionofthreestrainmice. 犚犲狊狌犾狋狊 BALB,C3HandCBAhadan identicalahr genotype,characterizedbyahighafinityforligandbinding.theresultsofcdna microarraylistedthesameandthediferentgeneexpressionsin BALB,C3H and CBA mice. 犆狅狀犮犾狌狊犻狅狀狊 ThepresentstudyanalyzedandcomparedthegeneexpressionprofilesafterTCDD exposureindiferentmousestrainswiththesameahraminoacidsequence,andfoundsomeunique alterationsingeneexpressionineachmousestrain.theresultsprovidefundamentalinformationfor furtherstudyofthesusceptibilitytotcddtoxic endpoint. 犓犲狔狑狅狉犱狊 TCDD; AhR; geneexpressions 二恶英类 (dioxin) 化合物主要由制造含氯化学品废物焚烧三废排放以及在农药生产和处理过程中产生二恶英类化合物可存在于食品和空气污染物中, 经呼吸道, 消化道和皮肤进入人体, 对免疫系统发育中的神经系统内分泌系统生殖和肝脏功 [1,] 能造成损害然而, 动物实验发现不同种属 (species) 不同品系 (strain) 对二恶英类化合物毒性的易感性 (susceptibility) 有着质与量的差异二恶英类化合物的主要作用机制是通过芳香烃受体 (AhR) 诱导基因表达, 改变激酶活性, 改变蛋白质国家自然科学基金项目 ( ; ) Correspondingauthor E mail:qingwu@fudan.edu.cn

2 80 功能因而在研究二恶英类化合物的作用机制时, 大量的研究集中于研究 AhR 的结构功能和化学物 [3,4] 对 AhR 的亲和性如二恶英 (TCDD) 与 C57BL/6 小鼠 AhR 的亲和性是与 DBA/ 小鼠 AhR 的 6 倍, 对于 DBA/ 小鼠, 需要 10~0 倍或更高的 TCDD 剂量才能产生与 C57BL/6 小鼠相同 [5] 的诱导毒性然而, 已有研究发现即使具有相同基因型芳香烃受体, 不同种系对 TCDD 的毒性敏感性仍有不同如用数量性状位点 (QTL) 分析发现, 高剂量的 TCDD 和铁离子染毒所引起的晚发型皮肤黄胆症 (hepaticporphyria) 和芳香烃受体以外的 [6] 遗传基因相关, 由 TCDD 引起的胎儿死亡和胎盘血管收缩只能发生在 Holztman 大鼠而不能发生在 SD 大鼠, 而这两个种系的芳香烃受体的一次构造以及胎盘内芳香烃受体和细胞色素 P4501A1 的基因 [7] 表达量相同这些结果提示了在 AhR 及下游通路中, 还存在着修饰因子介导 TCDD 的毒性明确这些修饰因子, 对认识不同种系脏器和细胞组织的毒性易感性, 进而进行健康危险评价具有重要意义小鼠的芳香烃受体根据其生物化学构造, 有 4 种类型, 其中小鼠 BALB/c,C3H/He, 和 CBA/J 的芳香烃受体属于同一的 AhR b 类型, 对配体有着高的 [8] 亲和力利用这 3 类小鼠分析 TCDD 染毒后的不同反应, 可以明确与 TCDD 有相同芳香烃受体亲和性的情况下不同的基因表达谱因此, 本研究利用 cdna 微阵列, 分析了具有相同芳香烃受体类型的 3 类小鼠 BALB/cAnNCrj (BALB) C3H/He NCrj (C3H) 和 CBA/J NCrj (CBA) 在 TCDD 暴露后的基因表达谱, 目的在于寻找芳香烃受体及下游通路中的不同基因表达, 为探讨不同种系和器官对 TCDD 毒性作用的不同易感性的机制奠定基础材料和方法实验动物与处理 6 周龄的雌性 BALB C3H, 和 CBA 小鼠, 购于日本 CharlesRiver 动物中心各系小鼠均分为对照组和 TCDD 染毒组 TCDD 的染毒剂量为 40μg/kg 经口投入 4h 后, 窒息处死,-80 保存肝脏样品犮犇犖犃微阵列分析用 RNeasy Mini Kit (Qiagen) 提取总 RNA, 并根据犇 60/80 紫外吸收率确定其纯度, 琼脂糖凝胶电泳观察其完整性双链 cdna 的合成和纯化, 生物素标记 cdna 的合成, 转录产物的纯化和定量均根据 Afymetrix 试剂盒提供的操作程序进行将 cdna 片段化, 和测试芯复旦学报 ( 医学版 ) 008 年 11 月,35(6) 片 MouseExpresionAray430A(Afymetrix) 进行杂交, 洗染和扫描数据用 Afymetrix GeneChip OperatingSoftware(GCOS,Afymetrix) 进行分析样本量对照和染毒各组分别使用一枚芯片,3 系小鼠共用 6 枚芯片从每一组的 3 个不同小鼠 RNA 中取相同数量 RNA 形成混合样品标记一枚芯片在不同的时间染毒重复实验, 因此本次结果来自于 1 枚芯片数据的选择标准用 GCOS 软件分析, 枚染毒组芯片分别和枚对照组芯片相比, 显示表达量 SignalLogRatio 均大于 1 者, 为有显著意义升高, SignalLog Ratio 均小于 -1 者, 为有显著意义下降犚犜犘犆犚运用 SuperScript Ⅱ reverse transcriptase(lifetechnologies,rockvile,md) 和 HotStarTaqpolymerase (Qiagen) 进行 RT PCR 分析,PCR 条件为 95,15min1 循环,94 30s,55 30s,7 45s,8 循环芳香烃受体引物序列为 :ATCCCACATCCGCATGATTAAG; GGGAGCCCAGTCTTTCCTGCTA 芳香烃受体核转位子蛋白引物序列为 :CAGGCTACAGCCA AGACTCGTT;TGTGTCTGCTGAACATGCTG CT 谷胱甘肽 S 转移酶 mu6 亚型引物序列为 TCGAATTCAGATGGGCATGCTT,GTACACA GGACTTGGAAGGAAGC 细胞色素 P4501A1 引物序列为 :TGTTCACCCTACATAGAAACA, CAAGAGCTGATGCAGTAGTCTA G3PDH 引物序列为 :TGTTCACCCTACATAGAAACA; CAAGAGCTGATGCAGTAGTCTA 芳香烃受体的犮犇犖犃测序 ( 狊犲狇狌犲狀犮犻狀犵 ) 运用 LA Taq TM polymerase (TaKaRa Biomedicals, Otsu,Japan), 从肝脏 cdna 扩增芳香烃受体编码区域的全长,PCR 产品用 DYEnamicETterminator cyclesequencingkit(amersham BiosciencesCo., Piscataway,NJ) 在 Applied Biosystem AutomatedSequencer 上测序结果芳香烃受体的犮犇犖犃测序结果 BALB C3H 和 CBA3 种系小鼠均为近交系小鼠它们的芳香烃受体蛋白分子量均为犕 r104000, 对配体有高亲和性, 对热稳定性低通过克隆并测序这 3 类小鼠芳香烃受体编码区域的全长, 证实了这 3 类小鼠的芳香烃受体的氨基酸序列完全相同犜犆犇犇染毒后的基因表达变化表 1 显示了

3 84 复旦学报 ( 医学版 ) Fudan UnivJ Med Sci 008Nov,35(6) 婴儿早期血浆磷脂脂肪酸水平对体质指数的影响王琴 1 周婷婷张婷艳 StrandvikB 3 Zeterstr mr 4 彭咏梅 ( 1 常州市妇幼保健院江苏常州 13003; 复旦大学附属儿科医院儿童保健科上海 0110; 3 瑞典哥德堡大学儿科系哥德堡 41685; 4 瑞典卡罗林斯卡医院儿科系斯德哥尔摩 17176) 摘要目的研究婴幼儿早期血浆磷脂脂肪酸水平对于 18 月内体质指数的影响作用方法常州地区母亲及配对婴儿作为研究对象, 分别采集脐血,5d 4d 及 1 岁时婴儿静脉血样本, 采用高效毛细液气相色谱分析技术检测血浆磷脂脂肪酸含量在婴儿出生,4d, 及 18 月时对小儿进行体重身长等体格生长指标的测量, 计算体质指数 (bodymassindex,bmi) 及其 Z 分值结果 6 1 及 18 月龄婴幼儿 BMIZ 分值与脐血 n 6/n 3 多不饱和脂肪酸 (polyunsaturatedfatyacids,pufas) 比例呈正相关而与 n 3PUFAs 及二十二碳六烯酸 (docosahexaenoicacid,dha) 含量呈负相关 ( 犘 <0.05; 犘 <0.01; 犘 <0.01);1 月龄 BMIZ 分值与 5d 血 n 6/n 3 PUFAs 比例呈正相关而与 n 3PUFAs 及 DHA 含量呈负相关 ( 犘均 <0.01); 及 18 月龄 BMIZ 分值与 4d 血 n 6/n 3PUFAs 比例呈正相关而与 n 3PUFAs( 犘 <0.01; 犘 <0.01; 犘 <0.01; 犘 <0.01; 犘 <0.05) 及 DHA 含量 ( 犘均 <0.01) 呈负相关结论婴幼儿早期血浆磷脂 n 3PUFAs 水平可能对婴幼儿晚期生长具有显著影响 :n 3PUFAs( 主要 DHA) 水平越高而 n 6/n 3 比例越低, 则在婴儿晚期可以得到更为理想的体质指数关键词脂肪酸类 / 必需 ; 长链多不饱和脂肪酸 ; 血浆 ; 体质指数中图分类号 R 文献标志码 B 犜犺犲犲犳犲犮狋狅犳犳犪狋狔犪犮犻犱狊狋犪狋狌狊狅犳狆犾犪狊犿犪狆犺狅狊狆犺狅犾犻狆犻犱狊犱狌狉犻狀犵犲犪狉犾狔犻狀犳犪狀犮狔狅狀犫狅犱狔犿犪狊犻狀犱犲狓 WANGQin 1,ZHOUTing ting,zhangting yan,strandvikb 3, Zeterstr mr 4,PENGYong mei ( 1 犇犲狆犪狉狋犿犲狀狋狅犳犆犺犻犾犱犎犲犪犾狋犺犆犪狉犲, 犆犺犪狀犵狕犺狅狌犠狅犿犲狀犪狀犱犆犺犻犾犱狉犲狀犎犲犪犾狋犺犆犲狀狋狉犲, 犆犺犪狀犵狕犺狅狌 13000, 犑犻犪狀犵狊狌犘狉狅狏犻狀犮犲, 犆犺犻狀犪 ; 犇犲狆犪狉狋犿犲狀狋狅犳犆犺犻犾犱犎犲犪犾狋犺犆犪狉犲, 犆犺犻犾犱狉犲狀狊犎狅狊狆犻狋犪犾, 犉狌犱犪狀犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔, 犛犺犪狀犵犺犪犻 0110, 犆犺犻狀犪 ; 3 犇犲狆犪狉狋犿犲狀狋狅犳犘犲犱犻犪狋狉犻犮狊, 犌狅狋犺犲狀犫狌狉犵犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔, 犌狅狋犺犲狀犫狌狉犵 41685, 犛狑犲犱犲狀 ; 4 犇犲狆犪狉狋犿犲狀狋狅犳犘犪犲犱犻犪狋狉犻犮狊, 犓犪狉狅犾犻狀狊犽犪犎狅狊狆犻狋犪犾, 犓犪狉狅犾犻狀狊犽犪犐狀狊狋犻狋狌狋犲, 犛狋狅犮犽犺狅犾犿 17176, 犛狑犲犱犲狀 ) 犃犫狊狋狉犪犮狋犗犫犼犲犮狋犻狏犲 Toinvestigatetherelationshipbetweenfatyacid(FA)compositionofblood phospholipidsandtheinfants bodymassindex(bmi)intheirfirst1.5years. 犕犲狋犺狅犱狊 Pregnant motherswererecruitedduringtheirlasttrimesterofpregnancyinchangzhou.umbilicalcordblood sampleswereobtainedfrom motherswhentheumbilicalcordwascutofatdelivery.bloodsamples fromday5,day4andmonth1oftheinfantswereobtainedbyvenipuncture.thefacompositionof blood plasma phospholipids was analyzed by capilary gas liquid chromatography. Meanwhile, anthropometricindiceslikebodyweightandheightweremeasuredatbirth,onday4andmonth,4, 6,1,18.ThecorespondingBMIandBMIZscoreswerecalculated. 犚犲狊狌犾狋狊 6,1and18 month oldinfantbmizscoreswaspositivelycorelatedwithumbilicalcordbloodn 6/n 3polyunsaturated fatyacids(pufas)ratioandwasnegativelycorelatedwithn 3PUFAsanddocosahexaenoicacid (DHA)content( 犘 <0.05; 犘 <0.01; 犘 <0.01);1 month oldbmizscorewaspositivelycorrelated 常州市科技局项目 (CS006), 达能营养基金项目 (DIC004 05) Correspondingauthor E mail:ympeng99@yahoo.com.cn

4 王琴, 等. 婴儿早期血浆磷脂脂肪酸水平对体质指数的影响 85 with5dbloodn 6/n 3PUFAsratioandwasnegativelycorelatedwithn 3PUFAsandDHAcontent ( 犘 alwere<0.01);,4,6,1and18 month oldbmizscorewaspositivelycorelatedwithwith4d bloodn 6/n 3PUFAsratiobutwasnegativelycorelatedwithn 3PUFAs( 犘 <0.01; 犘 <0.01; 犘 < 0.01; 犘 <0.01; 犘 <0.05)andDHAcontent( 犘 alwere<0.01). 犆狅狀犮犾狌狊犻狅狀狊 Then 3PUFAs contentinplasmaphospholipidsduringearlyinfancy mayhavegreatimpactonchildgrowthlater. Highlightthebloodn 3PUFAs (especialydha)contentanddecreasethen 6/n 3ratioinearly infancymayhelptheinfantstoachieveoptimalbodymassindex(bmi)later. 犓犲狔狑狅狉犱狊 fatyacids/essential; long chainpolyunsaturatedfatyacids(lc PUFAs); plasma; bodymassindex(bmi) 围生期是人生最重要的关键窗口期之一, 这一时期的某些刺激或损伤可能会导致组织结构生理及代谢的永久性改变, 从而为成年期疾病的发生发 [1] 展埋下隐患, 如 : 心血管疾病肥胖型糖尿病等胎儿及婴儿早期营养作为一个强有力的环境因素对早期生长发育可能起着重要作用, 甚至可以影响整个生命历程长链多不饱和脂肪酸 (long chain polyunsaturatedfatyacids,lc PUFAs) 对生长发 [] 育的作用已经部分被人们所认识目前, 很少有研究将体质指数 (body mass index,bmi) 作为生长指标来评价早期营养 ( 主要是脂肪酸 ) 对于儿童生长情况的影响作用 Heland [3] 等的研究未发现婴儿早期血 ( 脐血,4 周,3 月 ) 脂肪酸水平与 7 岁时的 BMI 值有相关性而在肥胖儿童, 其体内脂肪酸水平与 BMI 之间的关系仍存在 [4,5] 争议为了解婴幼儿早期脂肪酸水平对其生长的影响, 我们对常州地区婴幼儿早期血脂肪酸水平与其后 18 月内的生长情况 ( 体质指数 ) 进行了调查和分析对象和方法研究对象以江苏常州孕晚期孕母及配对婴儿共计 15 例作为研究对象母亲入组标准包括 : 单卵单生健康母亲 ; 年龄 19~35 岁早产儿出生体重 <500g 或 4000g 有先天畸形或疾病出生窒息史出生感染者予剔除分别采集脐血,5d 4d 1 岁时婴儿静脉血进行血浆磷脂脂肪酸检测并在以下 7 个时点 : 出生,4d, 及 18 月对小儿进行体格生长测量由于各年龄点回访人数不同以及个别数据 ( 如出生身长 ) 或血乳样本的缺失, 因而造成相应样本例数存在差异研究得到相关伦理委员会批准及受试者知情同意研究方法基线资料的收集基线资料由父母填写婴儿及家庭一般情况登记表完成, 主要内容包括 : 胎龄胎产次, 父母年龄体重身高体质指数等生长指标监测在出生,4d, 月龄 (1 岁以内随访时点为正月龄点前后一周,1 岁以后为前后周 ) 对小儿体格生长指标进行了监测按生长测量常规进行测量并据公式计算体质指数 (body massindex,bmi)= 体重 (kg)/ 身长 (cm ) 血样本采集方法母生产过程中获取脐血 0.4 ~0.6mL; 在小儿 5d 4d 时通过头皮静脉采集静脉血 0.4~0.6mL;1 月时颈部采集静脉血 1~ ml 血样本经抗凝离心,-70 冻存待用样本测定方法血浆总脂肪按照 Folch 和 Sloane Stanle 的方法进行提取, 并在单 Sep Pak 氨基酸筒上进行分馏 (WatersCorp.,Milford,MA, U.S.A.) 脂肪酸甲酯通过毛细液气色谱技术, 在 Hewlet Packard6890 气相色谱仪上进行分离分离结果用 HP GC Chem Station 软件 (HP GC, Wilmington,DE,U.S.A.) 记录以 C1:1 作为内在标准, 分离出的每种脂肪酸保留时间与 C1:1 的保留时间相比较, 得出每种脂肪酸的含量 (mol%) 统计学方法用 SPSS11.5 统计软件分析, BMIZ 分值计算公式如下 : 测量数据 - 同年龄同性别参考标准中位数 Z= 参考标准的标准差采用的参考标准为 : 上海地区 0~6 岁儿童的体块指数的参考值 [6], 根据文献内容, 先将 BMI 原始数据进行 Log 转化 :Log(BMI)=Log(BMI-8), 再按公式进行 Z 分计算在对男女性婴儿 BMI 值进行比较时, 采用 Mann WhitneyU 检验在对 4 个时点血浆磷脂 n 3LC PUFAs 水平进行比较时, 采用 Friedman 检验 ; 而对任意两个时点血浆 n 3LC PUFAs 进行比较时, 采用 Wilcoxon 符号秩和检验在对各年龄 BMIZ 分值与脐血,5d 4d 及 1 岁血的血浆磷脂脂肪酸水平进行相关性分析时采用 Spearman 秩相

5 86 复旦学报 ( 医学版 ) 008 年 11 月,35(6) 关分析结果随访率达到 88%, 随后分别在 90% 至 70% 之间波动,18 个月时随访率为 64% 具体随访状况见图 1 一般情况研究对象平均胎龄为 39.5 周, 男婴占 56.1% 父母平均年龄分别为 9.6 与 6.98 岁, 平均身高体重及 BMI 分别为 174.7cm 69.79kg 3 和 161.1cm 57.13kg 1.99( 表 1) 表 1 常州地区婴儿及父母一般情况犜犪犫 1 犅犪狊犲犾犻狀犲犆犺犪狉犪犮狋犲狉犻狊狋犻犮狊狅犳狆犪狉犲狀狋狊犪狀犱狋犺犲犻狉犻狀犳犪狀狋狊犻狀犆犺犪狀犵狕犺狅狌 Characteristic Subject( 狀 ) Mothers Meanage(y) 6.98±.79(13) Meanheight(cm) ±4.58(1) Prepregnancyweight(kg) 57.13±7.88(1) Bodymassindex(kg/m ) 1.99±.67(10) Fathers Meanage(y) 9.6±3.70(11) Meanheight(cm) 174.7±4.07(1) Weight(kg) 69.79±8.59(11) Bodymassindex(kg/m ) 3.00±.66(10) Newborns Gestationalage(wk) 39.5±0.98(13) Male, 狀 (%) 69(56.1%) Female, 狀 (%) 54(43.9%) 样本随访率变化情况从出生到 18 个月共对研究对象随访 7 次, 出生时与 BMI 有关的体格指标图 1 婴幼儿随访率变化趋势犉犻犵 1 犜犺犲犮犺犪狀犵犲狊狅犳犳狅犾狅狑狌狆狉犪狋犲婴幼儿体质指数常州地区研究对象中, 出生以及 4d 时男婴 BMI 值显著大于女婴 ( 犘 >0.05), 其余年龄点, 虽然男婴 BMI 值均数都大于女婴, 但两者差异无统计学意义 ( 犘 >0.05); 并且从出生至 6 月龄, 其 BMI 值逐渐增大,1 月龄起开始逐渐下降 [6] ( 表 ), 这一趋势与参考标准相似同时, 与参考标准相比, 常州地区男女婴 BMI 在出生时均小于参考标准, 此后逐渐上升,4d 时接近 +0.6SD~ +0.7SD, 至 6 月龄 BMI 始终大于参考标准, 但 1 月龄 BMI 小于参考标准, 而 18 月龄又升高大于参考标准 ( 图 ) 表常州地区婴幼儿不同年龄犅犕犐值及犅犕犐犣分值犜犪犫犅狅犱狔犿犪狊犻狀犱犲狓 ( 犅犕犐 ) 犪狀犱犅犕犐犣狊犮狅狉犲狊狅犳犮犺犻犾犱狉犲狀犫狔犪犵犲犻狀犆犺犪狀犵狕犺狅狌 Time Boys Girls BMI( 狀 ) BMIZScores( 狀 ) BMI( 狀 ) BMIZScores( 狀 ) Born 13.48±1.10(64) -0.7±1.15(64) 13.01±1.09(46) (1) -0.8±1.03(46) 4days 15.9±1.31(66) 0.56±0.96(66) 15.47±0.99(51) (1) 0.7±0.95(51) months 17.05±1.36(46) 0.8±1.14(46) 16.5±1.5(44) 0.19±1.10(44) 4months 18.15±1.39(51) 0.1±1.07(51) 17.75±1.55(39) 0.5±1.05(39) 6months 18.49±1.46(55) 0.±1.08(55) 18.19±1.55(49) 0.8±0.97(49) 1months 17.4±1.3(51) -0.4±1.09(51) 17.0±1.1(47) -0.17±0.8(47) 18months 16.96±1.0(46) 0.13±1.16(46) 16.7±1.17(34) 0.4±0.91(34) 亚麻酸 (α linolenicacid,ala) 及二十碳五烯酸 (eicosapentaenoicacid,epa) 含量在出生不久开始图婴幼儿犅犕犐犣分值变化趋势犉犻犵犜犺犲犮犺犪狀犵犲狊狅犳犅犕犐犣狊犮狅狉犲狊血浆磷脂狀 3 系列犘犝犉犃狊水平血浆磷脂 α 升高至 4d 并维持到 1 岁, 两时点均值接近, 分别较出生时上升 175% 及 53.9% 血 DHA 及 n 3PUFAs 含量在出生后先有大幅下降 ( 至 5d 时分别下降 30.5% 与 6.8%), 之后再缓慢上升 ( 至 4d 时分别上升 8.% 与 8.0%), 1 岁时接近脐血水平 ; 血 n 6/n 3 比例先有上升, 在 5 与 4d 血时均值接近 ( 较出生时升高 4% 左右 ), 但在 1 岁时下降

6 王琴, 等. 婴儿早期血浆磷脂脂肪酸水平对体质指数的影响 87 接近脐血水平 ( 表 3, 图 3) 表 3 4 个时点血浆磷脂脂肪酸水平比较犜犪犫 3 犜犺犲犮犺犪狀犵犲狊狅犳犉犃犮狅犿狆狅狊犻狋犻狅狀狅犳犫犾狅狅犱狆犺狅狊狆犺狅犾犻狆犻犱狊犪狋犱犻犳犲狉犲狀狋狋犻犿犲狊 ( 狓 ± 狊,mol%) Fatyacids Cordblood(10) Day5(96) Day4(103) 1year(9) 犘 ALA 0.04± ±0.03 (1) 0.11±0.04 () 0.11±0.05 <0.001 EPA 0.6± ±0.13 (1) 0.37± ± DHA 6.50± ±0.89 (1) 4.89±0.97 () 6.4±1.17 (3) <0.001 n 3PUFAs 6.80± ±0.89 (1) 5.38±1.04 () 6.98±1.40 (3) <0.001 n 6/n ± ±1.46 (1) 7.38± ±1.8 (3) <0.001 (1) Wilcoxonsignedranktest:Comparisonbetweenumbilicalcordbloodandday5blood; () Wilcoxonsignedranktest:Comparisonbetween day5bloodandday4blood; (3) Wilcoxonsignedranktest:Comparisonbetweenday4bloodand1yearblood 图 3 血浆磷脂狀 3 犘犝犉犃狊水平变化趋势犉犻犵 3 犜犺犲犮犺犪狀犵犲狊狅犳狀 3 犘犝犉犃狊犮狅犿狆狅狊犻狋犻狅狀狅犳犫犾狅狅犱狆犺狅狊狆犺狅犾犻狆犻犱狊血浆磷脂脂肪酸水平与婴幼儿犅犕犐 6 1 及 18 月龄婴幼儿 BMIZ 分值与脐血 n 6/n 3 比例呈正相关 ( 犘 <0.05; 犘 <0.01; 犘 <0.01) 而与 n 3PUFAs ( 犘 <0.05; 犘 <0.01; 犘 <0.01) 及 DHA 含量 ( 犘 < 0.05; 犘 <0.01; 犘 <0.01) 呈负相关 ;1 月龄 BMIZ 分值与 5d 血 n 6/n 3 比例 ( 犘 <0.01) 呈正相关而与 n 3 PUFAs( 犘 <0.01) 及 DHA 含量呈负相关 ( 犘 <0.01); 及 18 月龄 BMIZ 分值与 4d 血 n 6/n 3 比例呈正相关 ( 犘 <0.01; 犘 <0.01; 犘 <0.01; 犘 <0.01; 犘 <0.05) 而与 n 3PUFAs( 犘 <0.01; 犘 <0.01; 犘 < 0.01; 犘 <0.01; 犘 <0.05) 及 DHA 含量 ( 犘均 <0.01) 呈负相关 ( 表 4) 婴幼儿 1 月和 18 月 BMIZ 分值与 1 岁血 DHA n 3PUFAs 及 n 6/n 3 比例之间均未见相关性 ( 犘 >0.05) 当血浆 n 6/n 3 比例较高, 而 n 3 PUFAs 及 DHA 含量较低时, 婴幼儿 BMIZ 分值较高 ( 图,3) Parameter n 6/n 3 表 4 婴幼儿犅犕犐犣分值与血浆磷脂脂肪酸水平相关性分析犜犪犫 4 犆狅狉狉犲犾犪狋犻狅狀犫犲狋狑犲犲狀犮犺犻犾犱狉犲狀狊犅犕犐犣狊犮狅狉犲狊犪狀犱犉犃犮狅犿狆狅狊犻狋犻狅狀狅犳犫犾狅狅犱狆犺狅狊狆犺狅犾犻狆犻犱狊 BMIZScores 4d( 狀 ) mo( 狀 ) 4mo( 狀 ) 6mo( 狀 ) 1mo( 狀 ) 18mo( 狀 ) Cordblood 0.006(97) 0.183(69) 0.18(73) 0.37 (1) (87) () (84) () (67) Day (9) 0.185(66) 0.194(70) 0.103(84) () (8) 0.3(65) Day (103) () (75) () (79) () (93) 0.99 () (90) 0.75 (1) (7) n 3PUFAs Cordblood (97) (69) -0.(73) (1) (87) () (84) () (67) Day (9) -0.5(66) (70) -0.19(84) () (8) (1) (65) Day (103) () (75) (79) () (93) () (90) (1) (7) DHA Cordblood -0.03(97) -0.04(69) -0.30(73) -0.4 (1) (87) () (84) () (67) Day (9) -0.9(66) -0.19(70) (84) () (8) -0.15(65) Day (103) () (75) () (79) () (93) () (90) () (7) Describedbycorrelationcoeficient(r).Spearman srankcorelation: (1) 犘 <0.05, () 犘 <0.01 讨论本研究发现, 婴幼儿时期多个时点如及 18 月龄的 BMIZ 分值分别与婴儿早期脐血 5d 血 4d 血中的 DHA n 3PUFAs 呈负相关与 n 6/n 3 比例呈正相关 ; 但未见与婴儿 1 岁血 DHA n 3PUFAs 及 n 6/n 3 比例存在相关性因此认为, 婴儿早期血浆磷脂 n 3PUFAs 水平可能对其后期生长具有显著影响 : 早期血浆磷脂中 n 3PUFAs ( 主要是其中的 DHA) 水平越高, 则在婴儿晚期可以得到更为理想的体质指数 (BMI) 如果婴儿早期血浆磷脂 n 3PUFAs 水平对婴幼儿体质指数的影响确实存在, 那么我们就可以通过孕期干预的形式

7 88 复旦学报 ( 医学版 ) 008 年 11 月,35(6) 来调节婴儿早期血浆磷脂 n 3PUFAs 水平, 从而预防婴幼儿出生后非适宜生长的出现, 这对于婴幼儿的健康成长有重大意义在配方奶研究中, 很少有研究者考察添加 LC [8] PUFAs 对婴幼儿 BMI 的影响, 仅 Birch 等将相应身长的体重作为生长结局之一, 他们发现无论在出 [7] 生后 17 周内或是母乳喂养至 4~6 月龄后再以添加 AA+DHA 的配方奶喂养至 1 岁, 对其 1 岁以内相应身长的体重无影响作用在云南河庆, 研究人员发现当地学龄前儿童相应身高的体重与 AA 的日 [9] [10] 摄入呈负相关 Lauritzen 等给哺乳期母亲补充鱼油后发现, 其小儿.5 岁时的腰围和 BMI 值较大且与 4 月龄时的母乳 DHA 水平正相关也就是说, 婴儿所摄入的母乳 DHA 水平越高, 其.5 岁的 BMI 越大, 这在某种程度上与我们的研究结果相反由于目前这方面的研究较少, 研究结果仍然有待更多研究的证据支持关于儿童 BMI 与体内脂肪酸水平的研究多集 [11] 中在肥胖人群早在 1996 年,Decsi 等就已发现肥胖儿童血浆磷脂 AA n 6PUFAs 含量较正常儿童高, 而 ALA 含量较低 ; 血浆三酰甘油中 n 3 PUFAs 则较低此后, 也有研究证实肥胖青少年血浆磷脂 n 6/n 3 比例较高, 而 DHA n 3PUFAs 含 [1,13] [4] 量较低并且,Scaglioni 等还发现肥胖儿童 BMIZ 分值与血浆 n 3PUFAs 及 DHA 呈负相关 [5] 但也存在不同的研究结论,Okada 等发现肥胖儿童血浆 LA n 6PUFAs 含量及 n 6/n 3 比例较低, [14] 而 ALA n 3PUFAs 含量较高而郑东旖等的研究则表明肥胖儿童血浆 EPA 显著增高,LA AA 明显降低,ALA DHA n 6/n 3 比例及 SFA 与正常体重儿童无显著差异由于目前尚未能得出肥胖儿童体内脂肪酸改变的确切模式, 因而关于通过干预膳食脂肪酸摄入来调节体内脂肪酸组成, 从而实现减少体重的研究并 [15] 不多见 Kunesová 等的一项研究显示, 在低卡路里膳食治疗的同时增加 n 3LC PUFAs 摄入可以增强肥胖女性减重的效果,DHA 可能是其作用因子在儿童肥胖日益严重的今天, 对脂肪酸的研究也是极其重要的一个方面而在肥胖儿童体内脂肪酸组成存在较大争议的情况下, 有必要首先了解正常儿童体质指数与血浆脂肪酸水平的关系我们的研究结果显示婴儿早期血浆磷脂 n 3PUFAs 水平对其晚期生长具有显著影响这与一些关于肥胖儿童的研究结论一致, 并提示孕期干预可能可以降低儿童后期肥胖的发生率参考文献 [1] LucasA,FewtrelMS,ColeTJ.Fetaloriginsofadultdisease thehypothesisrevisited[j]. 犅犕犑,1999,319(704): [] 周韫珍. 脂类 [M]// 葛可佑. 中国营养科学全书. 北京 : 人民卫生出版社,004: [3] HelandIB,SmithL,BlomenB, 犲狋犪犾.Efectofsupplementing pregnantandlactatingmotherswithn 3very long chainfaty acidsonchildren siqandbodymassindexat7yearsofage [J]. 犘犲犱犻犪狋狉犻犮狊,008,1():e [4] ScaglioniS,VerduciE,SalvioniM, 犲狋犪犾.Plasmalong chain fatyacidsandthedegreeofobesityinitalianchildren[j]. 犃犮狋犪犘犪犲犱犻犪狋狉,006,95(8): [5] OkadaT,SatoNF,KuromoriY, 犲狋犪犾.Characteristicsofobese childrenwithlowcontentofarachidonicacidinplasmalipids [J]. 犘犲犱犻犪狋狉犐狀狋,007,49(4): [6] 徐秀, 郭志平, 王卫平. 上海地区 0~6 岁儿童体质指数的参考值 [J]. 中国儿童保健杂志,003,11(4): [7] BirchEE,HofmanDR,UauyR, 犲狋犪犾.Visualacuityandthe essentialityofdocosahexaenoicacidandarachidonicacidinthe dietofterminfants[j]. 犘犲犱犻犪狋狉犚犲狊,1998,44(): [8] BirchEE,Castaneda YS, Wheaton DH, 犲狋犪犾.Visual maturationofterm infantsfedlong chain polyunsaturated fatyacid supplementedorcontrolformulafor1mo[j]. 犃犿犑犆犾犻狀犖狌狋狉,005,81(4): [9] AssisiA,BanziR,BuonocoreC, 犲狋犪犾.Polyunsaturatedfaty acidsandanthropometricindicesofchildreninruralchina [J]. 犈狌狉犑犆犾犻狀犖狌狋狉,006,60(9): [10] LauritzenL,HoppeC,StraarupEM, 犲狋犪犾.Maternalfishoil supplementationinlactationandgrowthduringthefirst.5 yearsoflife[j]. 犘犲犱犻犪狋狉犚犲狊,005,58():35-4. [11] DecsiT,MolnárD,KoletzkoB.Long chainpolyunsaturated fatyacidsinplasmalipidsofobesechildren[j]. 犔犻狆犻犱狊, 1996,31(3): [1] Klein PlatatC,DraiJ,Oujaa M, 犲狋犪犾.Plasmafaty acid compositionisassociated withthe metabolicsyndromeand low gradeinflammationinoverweightadolescents[j]. 犃犿犑犆犾犻狀犖狌狋狉,005,8(6): [13] KarlssonM,M rilds,brandbergj, 犲狋犪犾.Serumphospholipid fatyacids,adiposetissue,and metabolicmarkersinobese adolescents[j]. 犗犫犲狊犻狋狔 ( 犛犻犾狏犲狉犛狆狉犻狀犵 ),006,14(11): [14] 郑东旖, 樊超男, 朱海燕, 等. 肥胖儿童血浆长链脂肪酸的变化 [J]. 中国儿童保健杂志,007,15(3):4-6. [15] Kunesov M,Braunerov R,Hlavat P, 犲狋犪犾.Theinfluenceof n 3polyunsaturatedfatyacidsand verylow caloriediet duringashort term weightreducingregimenonweightloss andserumfatyacidcompositioninseverelyobese women [J]. 犘犺狔狊犻狅犾犚犲狊,006,55(1):63-7. ( 收稿日期 : ; 编辑 : 张秀峰 )

复旦学报医学版年月关分析结果随访率达到随后分别在至之间波动个月时随访率为具体随访状况见图研究对象平均胎龄为周男婴占父母平均年龄分别为与岁平均身高体重及分别为和表从出生到个月共对研究对象随访次出生时与有关的体格指标常州地区研究对象中出生

复旦学报医学版年月关分析结果随访率达到随后分别在至之间波动个月时随访率为具体随访状况见图研究对象平均胎龄为周男婴占父母平均年龄分别为与岁平均身高体重及分别为和表从出生到个月共对研究对象随访次出生时与有关的体格指标常州地区研究对象中出生王琴等婴儿早期血浆磷脂脂肪酸水平对体质指数的影响围生期是人生最重要的关键窗口期之一这一时期的某些刺激或损伤可能会导致组织结构生理及代谢的永久性改变从而为成年期疾病的发生发展埋下隐患如心血管疾病肥胖型糖尿病等胎儿及婴儿早期营养作为一个强有力的环境因素对早期生长发育可能起着重要作用甚至可以影响整个生命历程长链多不饱和脂肪酸对生长发育的作用已经部分被人们所认识目前

80 功能 因而在研究二恶英类化合物的作用机制时, 大量的研究集中于研究 AhR 的结构 功能和化学物 [3,4] 对 AhR 的亲和性 如二恶英 (TCDD) 与 C57BL/6 小鼠 AhR 的亲和性是与 DBA/ 小鼠 AhR 的 6 倍, 对于 DBA/ 小鼠, 需要 10~0 倍或更高的

80 功能因而在研究二恶英类化合物的作用机制时, 大量的研究集中于研究 AhR 的结构功能和化学物 [3,4] 对 AhR 的亲和性如二恶英 (TCDD) 与 C57BL/6 小鼠 AhR 的亲和性是与 DBA/ 小鼠 AhR 的 6 倍, 对于 DBA/ 小鼠, 需要 10~0 倍或更高的