前言本标准代替 GB/T 婴幼儿食品和乳品脂肪酸的测定 GB/T 婴幼儿配方食品和乳粉 DHA EPA 的测定 GB/T 婴幼儿配方食品和乳粉亚油酸的测定本标准与原标准相比主要修改如下 : 将 GB/T

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1 ICS m C 53 中华人民共和国国家标准 GB 代替 GB/T GB/T GB/T 婴幼儿食品和乳品中脂肪酸的测定 Determination of fatty acids in foods for infants and young children, raw milk and dairy products ( 征求意见稿 ) - - 发布 - - 实施中华人民共和国卫生部发布

2 前言本标准代替 GB/T 婴幼儿食品和乳品脂肪酸的测定 GB/T 婴幼儿配方食品和乳粉 DHA EPA 的测定 GB/T 婴幼儿配方食品和乳粉亚油酸的测定本标准与原标准相比主要修改如下 : 将 GB/T GB/T GB/T 合并为本标准第一法氨水 - 乙醇提取法 ; 新增第二法乙酰氯 - 甲醇甲酯化法本标准中附录 A 为资料性附录本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口本标准所代替标准的历次版本发布情况为 : GB/T ; GB/T ; GB/T I

3 婴幼儿食品和乳品中脂肪酸的测定 1 范围本标准规定了婴幼儿食品和乳品中脂肪酸的气相色谱测定方法第一法为氨水 - 乙醇提取法, 第二法为乙酰氯 - 甲醇甲酯化法本标准适用于婴幼儿食品和乳品中脂肪酸的测定, 第一法不适用被包埋脂肪酸的测定 2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款凡是注日期的引用文件, 其随后所有的修改单 ( 不包括勘误的内容 ) 或修订版均不适用于本标准, 然而, 鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本凡是不注日期的引用文件, 其最新版本适用于本标准 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 第一法氨水 - 乙醇提取法 3.1 原理乳与乳制品中的脂肪经皂化处理后生成游离脂肪酸, 在三氟化硼催化下进行甲酯化反应, 经甲酯化后的脂肪酸通过气相色谱柱分离, 以氢火焰离子化检测器检测, 外标法定量 3.2 试剂除另有说明外, 所用试剂均为分析纯或以上规格, 水为 GB/T 6682 规定的三级水甲醇无水乙醚石油醚, 沸程 30 ~ 乙醇, 体积分数 95% 氨水, 体积分数为 25 % 正己烷 (C6H14), 色谱纯高峰氏淀粉酶 (Taka-Diastase),128 U/mg 三氟化硼甲醇溶液 : 质量分数为 14% 饱和氯化钠溶液 : 溶解 360 g 氯化钠 (NaCl) 于 1.0 L 水中, 搅拌溶解, 澄清备用氢氧化钾甲醇溶液 [c(koh)=0.5 mol/l]: 称取 2.8 g 氢氧化钾 (KOH), 用无水甲醇 (3.2.1) 溶解, 并稀释定容至 100 ml, 混匀脂肪酸甲酯标准物质 : 纯度 99 % 贮存于-18 冰箱中, 参见表脂肪酸甲酯标准工作溶液 : 按试样中各脂肪酸含量及所要分析脂肪酸的种类适当配制其浓度, 正己烷定容并贮存于 -18 冰箱中, 有效期三个月 3.3 仪器设备气相色谱仪 : 带 FID 检测器分析天平 : 感量 g 旋转蒸发仪 2

4 3.3.4 离心机,5000 r/min 以上恒温水浴锅抽脂管,100 ml 磨口具塞试管 3.4 分析步骤试样制备预先将需冷藏的试样从冰箱中取出, 放至室温液态试样准确称取 10 g( 精确到 0.1mg) 样品于抽脂管中, 待测固态试样含淀粉样品称取试样 1.0 g( 精确到 0.1 mg) 至抽脂管中, 加入 0.1 g 高峰氏淀粉酶 (3.2.7), 加入 45 ~ 50 的蒸馏水 10 ml, 混合均匀后, 用氮气排除瓶中空气, 盖上瓶塞, 置 45 烘箱内 30 min, 取出不含淀粉样品称取试样 1.0 g( 精确到 0.1 mg) 至抽脂管 (3.3.6) 中, 加入 65 的蒸馏水 10mL 溶解试样, 振摇, 使样品完全分散于上述样品 ( 和 ) 中加入 2 ml 氨水 (3.2.5), 置于 65 水浴 15 min, 取出轻摇, 冷至室温黄油准确称取试样 0.2 g( 精确到 0.1 mg) 于磨口平底烧瓶中, 按 (3.4.3) 所述进行皂化酯化脂肪提取在制备好的样品中 ( ) 加入 10 ml 乙醇 (3.2.4), 混匀加入 25 ml 无水乙醚 (3.2.2), 加塞振摇 1 min 加入 25 ml 石油醚 (3.2.3), 加塞振摇 1 min, 静置分层, 有机层转入磨口平底烧瓶中再加入 25 ml 无水乙醚 (3.2.2) 及 25 ml 石油醚 (3.2.3), 加塞振摇 1 min, 静置分层, 有机层转入磨口平底烧瓶中, 按再加入 25 ml 无水乙醚.. 静置分层, 重复操作一次合并抽提液于磨口平底烧瓶中, 用旋转蒸发仪浓缩至干皂化酯化浓缩物 (3.4.2) 或黄油 ( ) 加入 10 ml 氢氧化钾甲醇溶液 (3.2.10) 置于 80 水浴上回流 5 min~ 10 min 再加入 5 ml 三氟化硼甲醇溶液 (3.2.8), 继续回流 15 min 冷却至室温, 将平底烧瓶中的液体转入 50 ml 离心管中, 用 3 ml 饱和氯化钠溶液 (3.2.9) 清洗平底烧瓶三次, 合并饱和氯化钠溶液于 50 ml 离心管, 加入 10 ml 正己烷 (3.2.6), 振摇后, 以 5000 r/min 离心 5 min, 取上层清液作为试液, 供气相色谱仪 (3.3.1) 测定注 1: 甲酯化后的试样应尽快进行气相色谱分析如需保存, 应用惰性气体保护, 密封并冷藏于冰箱中注 2: 三氟化硼甲醇溶液为强腐蚀性试剂, 使用时应注意防护色谱参考条件色谱柱 : 固定液 100% 二氰丙基聚硅氧烷,100 m 0.25 mm,0.20 μm, 或性能相当的色谱柱载气 : 氮气进样口温度 :220 分流比 :30:1 检测器温度 :260 柱温箱温度 : 初始温度 140, 保持 5 min, 以 4 /min 升温至 240, 保持 15 min 载气流速 :1.0 ml/min 测定 3

5 准确吸取各不少于两份的 2 μl 脂肪酸甲酯标准工作液 (3.2.12) 及试液 (3.4.3) 进样, 以色谱峰面积积分定量典型色谱图参见附录 A 3.5 结果计算表述试样中各脂肪酸含量计算试样中各脂肪酸的含量按公式 (1) 计算 : Xi= 式中 : Asi Cstdi V Fi Astdi m (1) 100 Xi 试样中各脂肪酸的含量, 单位为毫克每百克 (mg/100g); Asi 试样溶液中各脂肪酸甲酯的峰面积 ; Cstdi 脂肪酸甲酯标准工作液中各脂肪酸甲酯的浓度, 单位为毫克每毫升 (mg/ml); V 定容的体积, 单位为毫升 (ml); Astdi 混合标准工作液中各脂肪酸甲酯的峰面积 ; Fi 各脂肪酸甲酯转化为脂肪酸的换算系数, 见表 1; m 试样的称样量, 单位为克 (g) 测定结果用平行测定的算术平均值表示, 脂肪酸含量大于等于 100 时, 保留至整数位, 测定值小于 100 时保留三位有效数字试样中总脂肪酸的含量计算试样中总脂肪酸的含量按公式 (2) 计算 : X Total FA = X i (2) 式中 : XTotal FA 试样中总脂肪酸的含量, 单位为毫克每百克 (mg/100g); Xi 试样中各脂肪酸的含量, 单位为毫克每百克 (mg/100g); 测定结果用平行测定的算术平均值表示, 保留至整数位试样中某个脂肪酸占总脂肪酸的百分比 (%)Y 按公式 (3) 计算 : Y= X i / X Total FA 或 Y= A si Fi/ ( Asi Fi ) (3) 3.6 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 15 % 3.7 检出限本方法最低检出限见表 1 4 第二法乙酰氯 - 甲醇甲酯化法 4.1 原理乙酰氯与甲醇反应得到的盐酸 - 甲醇使试样中的脂肪和游离脂肪酸甲酯化, 用甲苯提取后, 经气相色谱仪分离检测, 外标法定量 4.2 试剂材料除另有说明外, 所用试剂均为分析纯或以上规格, 水为 GB/T 6682 规定的三级水无水碳酸钠 4

6 4.2.2 甲苯 (C7H8), 色谱纯乙酰氯乙酰氯甲醇溶液, 体积分数为 10 % GB 量取 40 ml 甲醇于 100mL 干燥的烧杯中, 准确吸取 5.0 ml 乙酰氯逐滴缓慢加入, 不断搅拌, 冷却后转移并定容至 50 ml 干燥的容量瓶中现用现配注 3: 乙酰氯为刺激性试剂, 配制乙酰氯甲醇溶液时应不断搅拌防止喷溅, 注意防护碳酸钠溶液, 质量分数为 6 % 准确称取 6 g 无水碳酸钠于 100 ml 烧杯中, 加水溶解, 转移并用水定容至 100 ml 容量瓶中脂肪酸甘油三酯标准物质, 纯度 99 %, 脂肪酸种类参见表脂肪酸甘油三酯标准工作液 : 按试样中各脂肪酸含量及所要分析脂肪酸的种类配制适当浓度的标准工作液, 用甲苯定容并分别保存于 -18 冰箱中, 有效期三个月 4.3 仪器设备常用实验室仪器及下列仪器设备 : 螺口玻璃管 ( 带用聚四氟乙烯做内垫的螺口盖 ),15mL 分析天平 : 感量 0.01 g 和 g 恒温热水浴槽离心分离机 : 转速 5000r/min 以上气相色谱仪 ( 带 FID 检测器 ) 4.4 分析步骤试样处理试样含水量大于 5 % 时, 冷冻干燥至含水量小于 5 % 称取试样 0.5g( 精确到 0.1 mg) 于 15 ml 干燥螺口玻璃管 (4.3.1) 中, 加入 5.0 ml 甲苯黄油试样称取 0.2 g( 精确到 0.1 mg) 于 15 ml 干燥螺口玻璃管 (4.3.1) 中, 加入 5.0 ml 甲苯甲酯化 - 提取试样测定液的制备在试样 (4.4.1) 中加入 10 % 乙酰氯甲醇溶液 6.0 ml(4.2.4), 充氮气后, 旋紧螺旋盖, 振荡混合后 80 水浴 2h, 期间每隔 20 min 取出振荡一次, 水浴后取出冷却至室温将反应后的样液转移至 50 ml 离心管中, 分别用 3.0 ml 碳酸钠溶液 (4.2.5) 清洗玻璃管三次, 合并碳酸钠溶液于 50 ml 离心管中, 混匀,5000 r/min 离心 5 min 取上层清液作为试液, 用于气相色谱仪测定标准测定液的制备准确吸取脂肪酸甘油三酯标准工作液 (4.2.7)0.5 ml 于 15 ml 螺口玻璃管 (4.3.1) 中, 加入 4.5 ml 甲苯, 其他操作步骤同 ( ) 参考色谱条件 : 同 (3.4.4) 中条件试样溶液的测定准确吸取各不少于两份的 2μL 标准测定液 ( ) 及试液 ( ) 进样, 以色谱峰面积积分定量典型色谱图参见附录 A 中 A 结果计算表示试样中各脂肪酸的含量按公式 (1) 计算 : 5

7 式中 : X I X = A si C A stdi stdi F m j 100 GB i (1) 试样中各脂肪酸的含量, 单位为毫克每百克 (mg/100g); Asi 试样测定液中各脂肪酸的峰面积 ; Cstdi 在标准测定液的制备 ( ) 中吸取的脂肪酸甘油三酯标准工作液中所含有的标准物质的质量, 单位为毫克 (mg) ; Fj 各脂肪酸甘油三酯转化为脂肪酸的换算系数, 见表 1; Astdi 标准测定液中各脂肪酸的峰面积 ; m 试样的称样质量, 单位为克 (g) ; 结果表示 : 测定结果用平行测定的算术平均值表示, 脂肪酸含量大于等于 100 时, 保留至整数位, 测定值小于 100 时保留三位有效数字试样中总脂肪酸的含量计算试样中总脂肪酸的含量按公式 (2) 计算 : X Total FA = X i (2) 式中 : XTotal FA 试样中总脂肪酸的含量, 单位为毫克每百克 (mg/100g); Xi 试样中各脂肪酸的含量, 单位为毫克每百克 (mg/100g); 测定结果用平行测定的算术平均值表示, 保留至整数位试样中某个脂肪酸占总脂肪酸的百分比 (%)Y 按公式 (3) 计算 : Y= X i / X Total FA 或 Y= A si Fj/ ( A si Fj) (3) 4.6 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10% 4.7 检出限本方法最低检出限见表 1 6

8 附录 A ( 资料性附录 ) 气相色谱法测定各脂肪酸的典型图谱图 A.1 37 种脂肪酸标准溶液典型图谱各脂肪酸种类检出限及脂肪酸甲酯或脂肪酸甘油三酯转化为脂肪酸的换算系数一览表表 A.1 各脂肪酸种类检出限及脂肪酸甲酯或脂肪酸甘油三酯转化为脂肪酸的换算系数一览表序号脂肪酸名称最低检出限 (mg/kg) Fi 转换系数 Fj 转换系数 1 丁酸 (C4:0) 己酸 (C6:0) 辛酸 (C8:0) 葵酸 (C10:0) 十一碳酸 (C11:0) 月桂酸 (C12:0) 十三碳酸 (C13:0) 肉豆蔻酸 (C14:0) 肉豆蔻油酸 (C14:1n5) 十五碳酸 (C15:0) 十五碳一烯酸 (C15:1n5) 棕榈酸 (C16:0) 棕榈油酸 (C16:1n7) 十七碳酸 (C17:0) 十七碳一烯酸 ( C17:1n7) 硬脂酸 (C18:0) 反式油酸 (C18:1n9t) 油酸 (C18:1n9c)

9 19 反式亚油酸 (C18: 2n6t) 亚油酸 ( C18: 2n6c) 花生酸 ( C20:0) γ- 亚麻酸 ( C18:3n6) 二十碳一烯酸 ( C20:1) α- 亚麻酸 ( C18:3n3) 二十一碳酸 ( C21:0) 二十碳二烯酸 ( C20:2) 二十二碳酸 ( C22:0) 二十碳三烯酸 ( C20:3n6) 芥酸 (C22:1n9) 二十碳三烯酸 ( C20:3n3) 花生四烯酸 ARA ( C20:4n6) 二十三碳酸 (C23:0) 二十二碳二烯酸 ( C22:2n6) 二十四碳酸 (C24:0) 二十碳五烯酸 EPA (C20:5n3) 二十四碳一烯酸 (C24:1n9) 二十二碳六烯酸甲酯 DHA (C22:6n3) 注 : Fi 是脂肪酸甲酯转换成脂肪酸的系数 Fj 是脂肪酸甘油三酯转换成脂肪酸的系数 8

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<4D F736F F D203233D3A4D3D7B6F9CAB3C6B7BACDC8E9C6B7D6D0D6ACB7BECBE1B5C4B2E2B6A82E646F63> 中华人民共和国国家标准 GB 5413.27 2010 食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中脂肪酸的测定 Natonal food safety standard Determnaton of fatty acds n foods for nfants and young chldren, mlk and mlk products 2010-03-26 发布 2010-06-01 实施中华人民共和国卫生部

前 言 本标准代替 GB/T 婴幼儿食品和乳品脂肪酸的测定 GB/T 婴幼儿配方食品和乳粉 DHA EPA 的测定 GB/T 婴幼儿配方食品和乳粉亚油酸的测定 本标准与原标准相比主要修改如下 : 将 GB/T

前言本标准代替 GB/T 婴幼儿食品和乳品脂肪酸的测定 GB/T 婴幼儿配方食品和乳粉 DHA EPA 的测定 GB/T 婴幼儿配方食品和乳粉亚油酸的测定本标准与原标准相比主要修改如下 : 将 GB/T