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杀评柏
5 years ago
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1 附件 3 BJS 范围本方法适用于食用植物油 ( 花生油大豆油玉米油植物调和油橄榄油葵花籽油芥花油菜籽油香油棕榈油等 ) 是否存在异常的检测及识别 2 方法原理将样品甲酯化, 采用气相色谱 - 串联质谱内标法定量测定 13 种脂肪酸甲酯含量, 再根据脂肪酸甲酯含量判定油脂是否存在异常, 对异常样品进一步排查确认 3 试剂和材料除另有规定外, 本方法所用试剂均为分析纯, 水为 GB/T 6682 规定的一级水 3.1 试剂正己烷 (C 6 H 14 ): 色谱纯甲醇 (CH 3 OH): 色谱纯无水硫酸钠 (Na 2 SO 4 ): 分析纯氢氧化钠 (NaOH): 分析纯三氟化硼甲醇溶液 :50% 3.2 溶液配制含 2% 氢氧化钠的甲醇溶液 : 准确称取 2 g 氢氧化钠 (3.1.4) 于烧杯中, 加入甲醇 (3.1.2), 超声至氢氧化钠完全溶解, 移入 100 ml 容量瓶中, 用甲醇定容至刻度 % 的三氟化硼甲醇溶液 : 取 50% 三氟化硼甲醇溶液 (3.1.5)30 ml, 缓慢加入到装有 70 ml 甲醇 (3.1.2) 的烧杯中, 用玻璃棒搅拌均匀 3.3 标准物质十一碳酸甘油三酯 (C 36 H 68 O 6,CAS: ) 标准品, 纯度 >98% 十一碳酸甲酯 (C 12 H 24 O 2,CAS: ) 标准品, 纯度 >99% 种脂肪酸甲酯混合标准溶液标准品, 各组分浓度参考附录 A 3.4 标准溶液配制十一碳酸甘油三酯内标溶液 (1000 mg/l) 称取 0.10 g( 精确至 g) 十一碳酸甘油三酯, 加入 50 ml 甲醇溶解, 移入 100 ml 容量瓶中, 以甲醇定容, 制成储备液储备液于 -20 可冷藏保存三个月使用时以甲醇稀释成 50 mg/l 的中间液, 现用现配十一碳酸甲酯内标溶液 (1000 mg/l) 1

2 称取 0.10 g( 精确至 g) 十一碳酸甲酯, 加入 50 ml 正己烷溶解, 移入 100 ml 容量瓶中, 以正己烷定容, 制成储备液储备液于 -20 可冷藏保存三个月使用时以正己烷稀释成 50 mg/l 的中间液, 现用现配种脂肪酸甲酯标准溶液将脂肪酸甲酯混合标准溶液从安瓿瓶中完全转移至 10 ml 容量瓶中, 用正己烷定容, 于 -20 冷藏可保存一周根据需要稀释成适当浓度的含 5.00 mg/l 十一碳酸甲酯内标的标准工作溶液, 现用现配 4 仪器与设备 4.1 气相色谱 - 质谱联用仪 (GC/MS) 4.2 恒温水浴 :(40 ~100 )±1 4.3 分析天平 : 感量 0.1 mg 4.4 涡旋振荡器 4.5 烘箱 5 分析步骤 5.1 样品前处理称取样品 0.1 g( 精确至 0.1 mg) 于 250 ml 烧瓶中, 加入 50 mg/l 十一碳酸甘油三酯内标 1mL ( 相当于 50 μg), 加入含 2% 氢氧化钠的甲醇溶液 (3.2.1)8 ml, 混合摇匀, 连接回流冷凝器并在 80 水浴上回流, 直至油滴消失 ; 从回流冷凝器上端加入 15% 三氟化硼甲醇溶液 (3.2.2)7 ml, 继续回流 2 min; 用去离子水冲洗回流冷凝器, 继续加热 1 min; 从水浴上取下烧瓶, 迅速冷却至室温, 准确加入 10 ml 正己烷, 振摇 2 min, 吸取上层正己烷相, 使其通过无水硫酸钠吸水后, 过 0.22 μm 的有机相滤膜, 待 GC/MS 检测 5.2 仪器条件 a. 色谱柱 : 毛细管色谱柱 (DB-23,60 m 0.25 mm 0.25 μm), 或性能相当者 b. 载气 : 高纯氦气 c. 载气流量 :1.0 ml/min d. 进样口温度 :270 e. 程序升温 : 初始温度 60 持续 3.0 min; 60 ~160, 升温速率 15 /min; 保持 0 min; 160 ~210, 升温速率 8 /min; 保持 0 min; 210 ~230, 升温速率 3.15 /min; 保持 10 min f. 进样方式 : 分流进样, 分流比 5 1 g. 进样体积 :1.0 μl h. 离子源 :EI,70 ev i. 离子源温度 :230 j. 四极杆温度 :150 k. 接口温度 :270 2

3 l. 定量分析为选择离子扫描 (SIM),14 种脂肪酸甲酯的保留时间定性及定量离子见表 1 表 1 14 种脂肪酸甲酯的保留时间定性离子和定量离子序号脂肪酸甲酯定量离子 (m/z) 定性离子 (m/z) 保留时间 (min) 1 C6: C8: C10: C11:0( 内标 ) C12: C13: C14: C14:1n C15: C16:1n C17: C18:2n6t C20:3n C20:4n 结果计算按下式 (1) 计算样品中脂肪酸的含量 ( 以脂肪酸甲酯计 ): c V X = (1) m 式中 : X 样品中脂肪酸的含量 ( 以脂肪酸甲酯计 ), 单位为毫克每千克 (mg/kg) c 样品溶液中脂肪酸甲酯的浓度, 单位为微克每毫升 (µg/ml) V 样品溶液定容体积, 单位为毫升 (ml) m 样品称取的质量, 单位为克 (g) 计算结果保留三位有效数字 6 结果判定依据脂肪酸甲酯含量判定油脂是否存在异常, 判定异常时提示油脂中可能存在反复高温处理并经高度精炼获得的异常油脂判定依据见表 2 3

4 表 2 依据脂肪酸甲酯含量判定油脂是否异常化合物判定依据 (mg/kg) C6:0 x>30, 油脂可能存在异常, 若确认不是棕榈油 (1), 可判定为异常油脂样品 C8:0 x>120, 油脂可能存在异常, 若排除棕榈油干扰 (4), 且确认不是葵花籽油 (1), 可判定为异常油脂样品 C10:0 x>100, 油脂可能存在异常, 若排除棕榈油干扰 (2), 且确认不是芥花油和菜籽油 (1), 可判定为异常油脂样品 C12:0 400>x>130, 油脂可能存在异常, 若排除棕榈油和菜籽油干扰 (2), 且确认不是芥花油和香油 (1), 可判定为异常油脂样品 x>400, 油脂可能存在异常, 若排除棕榈油干扰 (2), 可判定为异常油脂样品 C13:0 x>10, 可判定为异常油脂样品 C14:0 x>1200, 油脂可能存在异常, 若排除棕榈油干扰 (2), 可判定为异常油脂样品 C14:1n5 x>10, 可判定为异常油脂样品 C15:0 600>x>240, 油脂可能存在异常, 若排除棕榈油干扰 (2), 且确认不是芥花油和菜籽油 (1), 可判定为异常油脂样品 x>600, 油脂可能存在异常, 若排除棕榈油干扰 (2), 可判定为异常油脂样品 C16:1n7 x>2000, 油脂可能存在异常, 若排除芥花油菜籽油橄榄油和棕榈油干扰 (1~2), 可判定为异常油脂样品 C17:0 x>1800, 油脂可能存在异常, 若排除橄榄油干扰 (1), 可判定为异常油脂样品 C18:2n6t x>800, 可判定为异常油脂样品 C20:3n6 450>x>220, 油脂可能存在异常, 若排除菜籽油干扰 (2), 可判定为异常油脂样品 x>450, 可判定为异常油脂样品 C20:4n6 120>x>36, 油脂可能存在异常, 若排除菜籽油干扰 (2), 可判定为异常油脂样品 x>120, 可判定为异常油脂样品注 :(1) 确认不是干扰油的方法 : 采用气相色谱法测定样品中 37 种脂肪酸含量, 根据 37 种脂肪酸含量分布结合附录 C 进行确认, 检测方法参考 GB (2) 排除棕榈油菜籽油干扰的方法 : 参考表 3 表 3 排除干扰油的方法化合物方法说明 (mg/kg) C8:0 x>( 样品中肉豆蔻酸 C14:0 的含量 0.04), 可排除棕榈油干扰 C10:0 x>( 样品中肉豆蔻酸 C14:0 的含量 0.072), 可排除棕榈油干扰 4

5 C12:0 x>( 样品中肉豆蔻酸 C14:0 的含量 1.00), 可排除棕榈油干扰 x>( 样品中芥酸 C22:1n9 的含量 0.08), 可排除菜籽油干扰 C15:0 x>( 样品中肉豆蔻酸 C14:0 的含量 0.12), 可排除棕榈油干扰 C20:3n6 C20:4n6 C14:0/C12:0 比值 x>( 样品中芥酸 C22:1n9 的含量 0.15), 可排除菜籽油干扰 x>( 样品中芥酸 C22:1n9 的含量 0.04), 可排除菜籽油干扰 x>20, 可排除棕榈油干扰 7 质量控制 7.1 方法空白以十一碳酸甘油三酯为空白, 进行脂肪酸过程空白对照 7.2 质控样品以正常食用植物油 ( 纯大豆油菜籽油花生油 ) 做对照, 每批样品处理过程均以这三种作为阴性对照以已确定为异常油脂的样品作阳性对照, 同时以不同稀释度进行对照 7.3 质谱仪的质量数校正采用仪器自动调谐 PFTBA 进行质量数校正 5

6 附录 A 表 A 脂肪酸甲酯混合标准溶液各组分浓度序号组分中文名称组分英文名称 CAS No. 简称纯度浓度 /(mg/ml) 1 丁酸甲酯 Methyl butyrate C4: 己酸甲酯 Methyl hexanoate C6: 辛酸甲酯 Methyl octanoate C8: 癸酸甲酯 Methyl decanoate ( caprate ) C10: 十一碳酸甲酯 Methyl undecanoate C11: 十二碳酸甲酯 Methyl laurate C12: 十三碳酸甲酯 Methyl tridecanoate C13: 十四碳酸甲酯 Methyl myristate C14: 顺 -9- 十四碳一烯酸甲酯 Myristoleic acid methyl ester C14:1n 十五酸甲酯 Methyl pentadecanoate C15:

7 11 顺 -10- 十五烯酸甲酯 Cis-10-pentadecenoic acid methyl ester C15:1n 十六碳酸甲酯 Methyl palmitate C16: 顺 -9- 十六碳一烯酸甲酯 Methyl palmitoleate C16:1n 十七碳酸甲酯 Methyl heptadecanoate C17: 顺 -10- 十一烯酸甲酯 Cis-10-heptadecenoic acid methyl ester C17:1n 十八碳酸甲酯 Methyl stearate C18: 反 -9- 十八碳一烯酸甲酯 Trans-9-elaidic methyl ester C18:1n9t 顺 -9- 十八碳一烯酸甲酯 Cis-9-oleic methyl ester C18:1n9c 反, 反 -9,12- 十八碳二烯酸甲酯 Linolelaidic acid methyl ester C18:2n6t 顺, 顺 -9,12- 十八碳二烯酸甲酯 Methyl linoleate C18:2n6c 二十碳酸甲酯 Methyl arachidate C20: 顺, 顺, 顺 -6,9,12- 十八碳三烯酸甲酯 GAMMA-linolenic acid methyl ester C18:3n 顺 -11- 二十碳一烯酸甲酯 Methyl eicosenoate C20:1n 顺, 顺, 顺 -9,12,15- 十八碳三烯酸甲酯 Alpha-Methyl linolenate C18:3n

8 25 二十一碳酸甲酯 Methyl heneicosanoate C21: 顺, 顺 -11,14- 花生二烯酸甲酯 Cis-11,14-eicosadienoic acid methyl ester C20:2n 二十二碳酸甲酯 Methyl behenate C22: 顺, 顺, 顺 -8,11,14- 花生三烯酸甲酯 Cis-8,11,14-eicosatrienoic acid methyl ester C20:3n 顺 -13- 二十二碳一烯酸甲酯 Methyl erucate (cis-13-docosenoic acid methyl ester) C22:1n 顺 -11,14,17- 花生三烯酸甲酯 Cis-11,14,17-eicosatrienoic acid methyl ester C20:3n 顺 -5,8,11,14- 花生四烯酸甲酯 Methyl cis-5,8,11,14-eicosatet C20:4n 二十三碳酸甲酯 Methyl tricosanoate C23: 顺 -13,16- 二十二碳二烯酸甲酯 Cis-13,16-docosadienoic acid methyl ester C22:2n 二十四碳酸甲酯 Methyl lignocerate C24: 顺 -5,8,11,14,17- 花生五烯酸甲酯 Methyl cis-5,8,11,14,17-eicosatet C20:5n 顺 -15- 二十四一烯酸甲酯 Methyl nervonate C24:1n 顺 -4,7,10,13,16,19 - 二十二碳六烯酸甲酯 cis-4,7,10,13,16,19-docosahexaenoic acid methyl ester C22:6n

9 附录 B 图 B.1 37 种脂肪酸甲酯标准物质 SIM 图 9

10 图 B.2 典型菜籽油中脂肪酸甲酯 SIM 图图 B.3 典型大豆油中脂肪酸甲酯 SIM 图图 B.4 典型花生油中脂肪酸甲酯 SIM 图 10

11 图 B.5 典型玉米油中脂肪酸甲酯 SIM 图图 B.6 典型棕榈油中脂肪酸甲酯 SIM 图图 B.7 典型植物调和油中脂肪酸甲酯 SIM 图 11

12 图 B.8 典型异常油脂中脂肪酸甲酯 SIM 图 12

13 附录 C 图 C.1 实验室普查 6 个棕榈油样本结果 13

14 图 C.2 实验室普查 7 个菜籽油样本结果 14

15 图 C.3 实验室普查 12 个葵花籽油样本结果 15

16 图 C.4 实验室普查 8 个芥花油样本结果 16

17 本方法负责起草单位 : 中国检验检疫科学研究院浙江九安检测科技有限公司本方法参与验证单位 : 中国食品药品检定研究院主要起草人 : 仲维科李礼许秀丽张峰任荷玲黄传峰 17

结果与讨论

结果与讨论苏德森陈涵贞林虬对花生油大豆油菜籽油玉米油和葵花籽油分别进行加热试验采用气相色谱法测定其不同加热温度和不同加热时间脂肪酸组成分析研究食用油中反式脂肪酸形成和变化特点及其影响因素结果表明食用油加热至时其反式脂肪酸含量是未加热时的倍以上随着加热温度的升高或加热时间的延长食用油中反式脂肪酸种类和含量都增加加热温度加热时间和食用油中脂肪酸组成均是影响反式脂肪酸形成和变化的因素