2 化学品与试剂 Fisher Scientific TM HPLC 级正己烷 Fisher Scientific HPLC 级水 Fisher Scientific HPLC 级甲醇 Fisher Scientific HPLC 级氢氧化钾 Thermo Scientific 14% 三氟化硼 -

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1 GC-FID 对比三种食用油中脂肪酸转化为脂肪酸甲酯 (FAME) 的酸催化与碱催化衍生方法 Application Notes Anila I. Khan, Thermo Fisher Scientific, Runcorn, UK 介绍气相色谱法是测定脂肪酸甲酯 (FAME) 的优选分析方法 衍生成甲酯产物后对食物中的脂肪酸含量进行分析 该转化涉及到酸酯化法或碱酯化法 本应用中, 在 TRACE TR-FAME 100 m 0.25 mm 0.2 μm 气相色谱柱上实现了 37 种脂肪酸甲酯标准样品混合物的分离 标准样品包含各种碳链长度 (C4-C24), 浓度在 2-6%wt/wt 之间 对高极性气相色谱柱进行优化, 分离由顺式和反式脂肪酸组成的复杂混合物 [1] 使用了碱酯化法衍生三种脂肪基质 ( 棕榈油 人造奶油 黄油 ) 中的脂肪酸, 并在同等条件下将该方法与酸催化酯 [2] 化法作了比较 然后按照 37 种成分标准品的保留时间确定了三种脂肪基质中脂肪酸甲酯成分 三氟化硼 - 甲醇是将脂肪酸转化成甲酯衍生物的最快 最方便的方式之一 试剂通过易于使用 采用隔垫密封的 Hypo-Vial 样品储存管提供, 可在试剂不接触空气的情况下, 用进样器取液 三氟化硼 - 甲醇试剂可在保持良好色谱峰形的同时改善脂肪基质中脂肪酸的检测 实验详情 消耗品 色谱柱 : TRACE TR-FAME 气相色谱柱,100 m 0.25 mm 0.20 μm 260M238P 隔垫 : Thermo Scientific BTO, 17 mm 衬管 : Thermo Scientific TM 分流式 FocusLiner TM 衬管, mm 色谱柱卡套 : 100% 石墨卡套, 用于 Thermo Scientific TM TRACE TM 注射器 mm ( 内径 ) 色谱柱卡套 : 石墨 /Vespel 卡套, 用于输送管路 mm ( 内径 ) 进样器 : 10 μl 固定针头进样器, 用于 Thermo Scientific TM TriPlus TM 自动进样器 样品瓶和瓶盖 : Thermo Scientific TM Chromacol TM 9 mm 螺口盖 0.3 ml 一体式棕色微量样品瓶 03-FISV (A) Chromacol 9 mm 螺口盖, 带硅胶 / 聚四氟乙烯隔垫 9-SC(B)-ST101 注射器 : Thermo Scientific TM National TM 30 mm 玻璃微纤维 (GMF) 针筒式滤膜,3.1 μm 孔径 F Thermo Scientific TM National TM Target TM 3 ml 一次性塑料注射器 S 样品处理设备 Thermo Scientific TM Reacti-Therm TM III 加热 / 搅拌模块 TS Thermo Scientific TM Reacti-Vap TM III 氮吹仪 TS Thermo Scientific Reacti-Vap 加热块 TS Thermo Scientific TM Reacti-Vial TM 反应样品瓶 10 ml TS-13225

2 2 化学品与试剂 Fisher Scientific TM HPLC 级正己烷 Fisher Scientific HPLC 级水 Fisher Scientific HPLC 级甲醇 Fisher Scientific HPLC 级氢氧化钾 Thermo Scientific 14% 三氟化硼 - 甲醇酯化剂 H/0403/15 W/0106/17 M/4056/17 S/9220/PB08 TS 样品制备 黄油 人造黄油和棕榈油均用两种衍生方法作了处理 在第一种方法中, 使用氢氧化钾 / 甲醇酯化脂肪样品 [1] 然后将该方法与 [2] 涉及三氟化硼三氟化硼 - 甲醇的酸衍生法作了比较 碱酯化 : 酸酯化 : 称取 50mg 液态脂肪样品放入装有磁力搅拌器的反应样品瓶 Reacti-Vial 内, 并添加 1mL 的正己烷和 2mL 的 4mol / L 氢氧化钾 / 甲醇溶液 盖好反应样品瓶 Reacti-Vial 并将其置于 Reacti-Therm 模块 30 分钟, 模块内温 度为 50 将混合物冷却至室温, 然后添加 1mL 水 相分离后, 将有机层的等分试样转移到样品瓶 称取 50mg 液态脂肪样品放入装有磁力搅拌器的反应样品瓶 Reacti-Vial 内, 并添加 1mL 的正己烷和 0.5mL 的 Thermo Scientific 14% 三氟化硼 - 甲醇 盖好反应样品瓶 Reacti-Vial 并将其置于 Reacti-Therm 模块 30 分钟, 模 块内温度为 50 将混合物冷却至室温, 然后添加 1mL 水 相分离后, 将有机层的等分试样转移到样品瓶 分离条件 仪器 : Thermo Scientific TM TRACE TM GCUltra 气相色谱仪 载气 : 氦气 分流流量 : 10 ml/min 分流比 : 10:1 柱流量 : 1.0 ml/min, 恒流 柱箱温度 : 100 (0.2 min),2 /min,240 (15 min) 注射器类型 : 分流式 / 不分流式 注射器工作方式 : 分流式, 恒定隔垫吹扫 注射器温度 : 240 检测器类型 : 火焰离子化检测器 (FID) 检测器温度 : 250 检测器空气流量 : 350 ml/min 检测器氢气流量 : 35 ml/min 检测器氮气流量 : 30 ml/min 注射条件 : 仪器 : 注射体积 : TriPlus 自动进样器 1 μl 结果 使用 TR-FAME 气相色谱柱成功分析了由 37 种成分构成的脂肪酸甲酯 (FAME) 标准品 ( 图 1) TRACE TR-FAME 气相色谱柱上的高极性固定相得到了除不完全分离的 C20:3 [ 顺 -8, 11, 14] C22:1 [ 顺 -13] 和 C20:3 [ 顺 -8, 14, 17] 外绝大多数脂肪酸甲酯的基线分离 这些化合物中的两种属于同分异构体, 众所周知, 由于其结构上相似, 难以用气相色谱 分离, 所以分辨率差 所有脂肪酸甲酯成分表现出极佳的色谱峰形 通过比较两种衍生方法, 对脂肪基质中脂肪酸甲酯峰值进行了定性分析 按照脂肪酸甲酯标准样品中的保留时间确定了成分 ( 图 1) 在同等条件下在图 2 和图 3 中比较了使用两种方法获得的结果 ( 比较详见表 2)

3 3 图 1. 在 TR-FAME 100 m 0.25 mm 0.20 μm 气相色谱柱上分离由 37 种成分构成的脂肪酸甲酯混合物 ( 标准样品 ) 的色谱图 洗脱顺序 化合物 浓度 %wt/wt tr/min 1 丁酸甲酯 (C4:0) 己酸甲酯 (C6:0) 辛酸甲酯 (C8:0) 癸酸甲酯 (C10:0) 十一烷酸甲酯 (C11:0) 十二烷酸甲酯 (C12:0) 十三烷酸甲酯 (C13:0) 十四烷酸甲酯 (C14:0) 十四碳烯酸甲酯 (C14:1 [ 顺 -9]) 十五烷酸甲酯 (C15:0) 十五碳烯酸甲酯 (C15:1 [ 顺 -10]) 棕榈酸甲酯 (C16:0) 棕榈油酸甲酯 (C16:1 [ 顺 -9]) 十七烷酸甲酯 (C17:0) 十七碳烯酸甲酯 (C17:1 [ 顺 -10]) 硬脂酸甲酯 (C18:0) 十八碳烯酸甲酯 (C18:1 [ 反 -9]) 油酸甲酯 (C18:1 [ 顺 -9]) 反亚油酸甲酯 (C18:2 [ 反 -9,12]) 亚油酸甲酯 (C18:2 [ 顺 -9,12]) 二十烷酸甲酯 (C20:0) 亚麻酸甲酯 (C18:3 [ 顺 -6,9,12]) 甲基 (C20:1 [ 顺 -11]) 亚麻酸甲酯 (C18:3 [ 顺 -9,12,15]) 二十一烷酸甲酯 (C21:0) 二十碳二烯酸甲酯 (C20:2 [ 顺 -11,14]) 二十二烷酸甲酯 (C22:0 FAME) 二十碳三烯酸甲酯 (C20:3 [ 顺 -8,11,14) 芥酸甲酯 (C22:1 [ 顺 -13]) 二十碳三烯酸甲酯 (C20:3 [ 顺 -11,14,17])

4 4 31 二十碳四烯酸甲酯 (C20:4 [ 顺 -5,8,77,14]) 二十三烷酸甲酯 (C23:0) 二十二碳二烯酸甲酯 (C22:2 [ 顺 -13,16]) 二十四烷酸甲酯 (C24:0) 顺式 -5,8,11,14,17- 二十碳五烯酸甲酯 二十四碳一烯酸甲酯 (C24:1 [ 顺 -15]) 顺 -4,7,10,13,16- 二十二碳六烯酸甲酯 表 1. 按洗脱顺序和标准样品保留时间为标准样品确定的脂肪酸甲酯 关于在脂肪样品中观察到的 FAME 峰值, 与酸酯化法相比, 碱酯化法产生的 FAME 峰值少 ( 比较详见表 2) 相分离期间出现部分乳化, 酯化后的溶液需要使用针筒式过滤器进行过滤, 然后才可进行气相色谱分析 相反, 酸酯化法产生的 FAME 峰值比碱酯化法多 与碱酯化法相比, 强路易斯酸三氟化硼 - 甲醇可以更有效地酯化脂肪酸, 当在水中反应时, 不会出现白色乳液 图 2. 由氢氧化钾 / 甲醇衍生出的黄油 ( 上 ) 人造黄油 ( 中 ) 棕榈油 ( 下 ) 样品的色谱图 图 3. 由 Thermo Scientific 试剂三氟化硼 - 甲醇衍生出的黄油 ( 上 ) 人造黄油 ( 中 ) 棕榈油 ( 下 ) 样品的色谱图

5 基质 使用氢氧化钾 / 甲醇获得的碱酯化 使用三氟化硼 - 甲醇获得的酸酯化 脂肪酸甲酯 ( 图 2) 脂肪酸甲酯 ( 图 3) (8)C14:0 (8)C14:0 黄油 - (20)C18:2 [ 顺 -9,12] - (22)C18:3 [ 顺 -6,9,12] - (2)C6:0 - (3)C8:0 - (4)C10:0 - (8)C14:0 - (9)C14:1 [ 顺 -9] - (10)C15:0 人造黄油 - (13)C16:1 [ 顺 -9] - (17)C18:1 [ 反 -9] (20)C18:2 [ 顺 -9,12] (20)C18:2 [ 顺 -9,12] (22)C18:3 [ 顺 -6,9,12] (22)C18:3 [ 顺 -6,9,12] (23)C20:1 [ 顺 -11] (23)C20:1 [ 顺 -11] (24)C18:3 [ 顺 -9,12,15] - - (8)C14:0 棕榈油 (20)C18:2 [ 顺 -9,12] (20)C18:2 [ 顺 -9,12] - (22)C18:3 [ 顺 -6,9,12] Application Notes 表 分钟反应时间内为两种衍生方法观察到的 FAME 峰值 结论 Thermo Scientific 试剂 BF3- 甲醇提供了一种将脂肪样品中的脂肪酸转化成其甲酯的快速 高效方法 TRACE TR-FAME 气相色谱柱能分离 37 种峰形极佳的脂肪酸甲酯构成的复杂混合物 参考文献 [1] 中国官方方法 SN/T1945 年 ~2007 年, 食品中脂肪酸测定 毛细管气相色谱法 [2] Thermo Scientific 试剂 溶剂和附件手册, 参考号 : BR20535_E06/12S Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. ISO is a trademark of the International Standards Organization. All other trademarks are the property of Thermo Fisher Scientific Inc. and its subsidiaries. This information is presented as an example of the capabilities of Thermo Fisher Scientific Inc. products. It is not intended to encourage use of these products in any manners that might infringe the intellectual property rights of others. Specifications, terms and pricing are subject to change. Not all products are available in all countries. Please consult your local sales representative for details. 上海上海浦东新金桥路 27 号 6 号楼 北京北京东城区安定门东大街 28 号雍和大厦西楼 F 楼 7 层 广州广州市东风中路 号时代地产中心 室 服务热线 成都成都市武侯区临江西路 1 号锦江国际大厦 1406 沈阳沈阳市沈河区惠工街 10 号卓越大厦 3109 室 西安西安市高新区科技路 38 号林凯国际大厦 单元 AN20733_E 05/13S

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