山 藥 雌 激 素 活 性 成 份 分 析 與 研 究 Study of Estrogenic Compounds in Yam Tuber 鄭 瑋 宜 黃 青 真 義 守 大 學 醫 學 營 養 學 系 台 灣 大 學 生 化 科 技 系 e-mail : wicheng@isu.edu.tw 摘 要 Abstract 婦 女 停 經 後 因 卵 巢 逐 漸 萎 縮, 分 泌 雌 激 素 功 能 劇 降, 產 生 更 年 期 症 狀 ; 長 期 更 使 骨 質 疏 鬆 且 心 血 管 疾 病 危 險 率 提 高 山 藥 (Dioscorea spp. ) 是 薯 蕷 科 (Dioscoreaceae) 薯 蕷 屬 (Dioscorea) 多 年 生 蔓 性 根 莖 類 植 物, 某 些 品 系 山 藥 ( 如 D. villosa) 製 劑 已 在 北 美 地 區 供 為 停 經 後 婦 女 之 膳 食 補 充 品, 但 功 效 不 明 有 研 究 顯 示, 山 藥 能 改 善 停 經 後 婦 女 之 生 理 狀 況, 暗 示 山 藥 可 能 含 植 物 雌 激 素 活 性 成 份 本 實 驗 主 要 目 的 為 建 立 一 分 子 篩 選 模 式 (transactivation assay), 用 以 篩 選 具 雌 激 素 活 性 之 食 材 分 別 選 殖 含 有 ERα 及 ERβ LBD chimeric receptor 質 體, 將 其 與 ALP 表 現 基 因 質 體 短 暫 共 同 轉 染 入 CHO-K 細 胞, 測 定 表 現 基 因 活 性, 以 探 討 樣 品 中 雌 激 素 活 性 結 果 顯 示 : 以 不 同 濃 度 E 處 理, 可 增 加 ALP 活 性 約 5 倍 ; 另 以 黃 豆 異 黃 酮 處 理, 發 現 黃 豆 異 黃 酮 對 ERβ 有 較 好 的 活 性, 與 文 獻 相 符 因 此, 我 們 所 建 立 之 轉 錄 活 性 分 析, 可 用 於 SERM ( Selective Estrogen Receptor Modulator) 之 篩 選 將 台 農 二 號 山 藥 經 矽 膠 管 柱 層 析 與 製 備 式 HPLC 分 離 純 化, 經 NMR 及 mass 鑑 定 結 構, 找 出 山 藥 中 能 活 化 ER 之 成 份 包 括 兩 個 新 化 合 物 :Hydro-Q 9 chromene 與 γ-tocopherol-9, 以 及 四 個 已 知 化 合 物 RRR-α-tocopherol coenzyme Q 9 cycloartenol 及 -feruloyl glycerol 本 研 究 鑑 定 出 山 藥 具 有 雌 激 素 活 性 之 成 份, 也 發 現 一 些 新 類 型 的 植 物 雌 激 素 活 性 化 合 物, 可 供 發 展 為 停 經 後 婦 女 保 健 食 品 之 基 礎 Yam (Dioscorea spp.) is a common food in tropical area and has been shown to improve the status of sex hormone in postmenopausal women. However, phytoestrogenic activity and active compound have never been reported. In this study, estrogenic activity of yam was examined and active compounds were isolated and identified based on the ligand-dependent transcriptional activation through estrogen receptors. Ethyl acetate extracts of various species/varieties of yam were found to activate estrogen receptors α and β to various extents. The extract of Dioscorea alata cv. Tainung No. tuber was fractionated by repeated silica gel column chromatography. The active compounds were isolated and purified by preparative HPLC. Based on NMR and mass spectrometry, two new compounds, hydro-q 9 chromene and γ-tocopherol-9, together with four known compounds, RRR-α-tocopherol, coenzyme Q 9, cycloartenol and -feruloyl glycerol were isolated from the TNG EA extract. Except for cycloartenol, all of the remaining five compounds showed estrogenic activities. These results provide basic evidence for the beneficial effect of yam for menopausal women. Keywords: Discorea alata, phytoestrogen, estrogen receptor, transactivation assay, CHO-K cell
前 言 停 經 婦 女 為 了 治 療 停 經 期 種 種 不 適 症 狀 ( 如 熱 潮 紅 盜 汗 心 悸 等 等 ), 會 接 受 賀 爾 蒙 補 充 治 療 (Hormone replacement therapy, HRT)(Genazzani and Gambacciani 00) 因 單 獨 服 用 雌 激 素 會 增 加 子 宮 內 膜 癌 危 險 率, 故 目 前 所 使 用 之 HRT 除 了 包 含 雌 激 素 (conjuhated equine estrogens 0.65 mg/d) 外, 亦 加 上 黃 體 素 (medroxypeogesterone acetate.5 mg/d), 以 預 防 子 宮 內 膜 癌 停 經 婦 女 減 少 分 泌 雌 激 素 後, 若 沒 有 外 來 雌 激 素 的 幫 助, 婦 女 會 有 更 年 期 症 狀 心 臟 病 與 骨 質 疏 鬆 危 險 率 提 高, 故 尋 找 可 以 取 代 雌 激 素, 且 能 持 續 三 四 十 年 的 其 他 藥 物 或 保 健 食 品 為 一 迫 切 的 工 作 分 子 生 物 學 研 究 結 果 指 出, 雌 激 素 之 作 用 乃 透 過 與 其 專 一 性 核 受 器 (Estrogen Receptor,ER) 結 合, 並 啟 動 雌 激 素 所 調 控 基 因 ( 啟 動 子 具 有 Estrogen Responsive Element, ERE, 之 基 因 ) 之 表 現, 而 呈 現 其 作 用 活 性 目 前, 有 兩 種 ER 被 鑑 定 出 來, 即 ERα 與 ERβ, 其 組 織 分 佈 有 相 當 之 不 同 改 變 雌 激 素 作 用 之 分 子 若 能 選 擇 性 作 用 於 血 管 與 骨 組 織 中 之 細 胞, 但 對 乳 腺 子 宮 內 細 胞 作 用 微 弱, 即 為 理 想 之 SERM (Selective Estrogen Receptor Modulator), 對 停 經 後 婦 女 之 保 健, 將 有 莫 大 貢 獻 國 內 推 動 山 藥 研 究 已 有 相 當 成 果 尤 其 在 品 系 篩 選 栽 培 及 推 廣 方 面, 目 前 幾 乎 所 有 市 場 均 可 買 到 各 式 各 樣 山 藥 國 人 的 接 受 程 度 也 相 當 高 而 山 藥 之 保 健 功 效 方 面, 由 於 被 列 入 跨 部 會 保 健 食 品 推 動 計 畫 重 點 食 材 之 一, 也 有 一 些 不 錯 之 成 果 其 生 理 效 用 包 括 () 降 血 糖 () 調 節 免 疫 功 能 (3) 抗 氧 化 (4) 抗 癌 (5) 雌 激 素 活 性 (6) 影 響 腸 道 在 雌 激 素 活 性 方 面, Komesaroff 等 學 者 針 對 3 名 健 康 停 經 婦 女 為 研 究 對 象, 採 取 雙 盲 有 安 慰 劑 的 交 叉 實 驗 設 計, 實 驗 期 塗 抹 wild yam cream 3 個 月, 與 安 慰 劑 期 比 較, 無 顯 著 副 作 用, 且 無 論 在 體 重 血 壓 血 漿 脂 質 及 葡 萄 糖 量 皆 沒 有 顯 著 的 改 變, 也 不 會 影 響 血 漿 中 FSH E progesterone 濃 度, 但 可 減 緩 更 年 期 不 適 的 症 狀 (Komesaroff et al. 00), 唯 此 研 究 採 用 塗 抹 藥 膏 方 式 進 行, 不 經 腸 肝 代 謝 作 用, 也 不 影 響 肝 的 生 化 效 應, 可 能 因 此 效 果 不 顯 著, 需 進 一 步 探 討 Wu 等 學 者 以 3 位 停 經 婦 女 為 實 驗 對 象, 每 日 /3 主 食 以 山 藥 餐 點 取 代,9 天 後, 受 試 者 血 膽 固 醇 顯 著 降 低, 尿 中 isoprostane 排 出 量 顯 著 減 少,LDL 於 體 外 被 銅 離 子 氧 化 之 延 滯 期 顯 著 延 長, 血 清 中 Estrone Estradiol 及 SHBG 濃 度 增 加 顯 示 山 藥 攝 取 對 停 經 後 婦 女 之 保 健 有 所 助 益 (Wu et al. 005) Russell 等 學 者 亦 指 出 野 生 墨 西 哥 山 藥 常 用 來 治 療 如 熱 潮 紅 急 躁 沮 喪 及 失 眠 等 更 年 期 症 狀 (Russell et al. 00) 本 研 究 以 山 藥 為 食 材 進 行 分 離 與 純 化, 並 且 建 立 一 分 子 篩 選 模 式 (transactivation assay), 用 以 篩 選 山 藥 中 具 雌 激 素 活 性 成 分 之 區 分 物, 並 且 進 一 步 純 化 及 確 認 結 構 以 NMR 及 分 別 選 殖 含 有 ERα 及 ERβ LBD chimeric receptor 質 體, 將 其 與 ALP 表 現 基 因 質 體 短 暫 共 同 轉 染 入 CHO-K 細 胞, 測 定 表 現 基 因 活 性, 以 探 討 樣 品 中 雌 激 素 活 性
細 胞 株 : 材 料 與 方 法 CHO-K 細 胞 株 (ATCC, CCL 6) 購 自 食 品 工 業 研 究 所 菌 種 中 心 / 國 家 衛 生 研 究 院 細 胞 庫, 菌 種 中 心 編 號 : CCRC60006, 組 織 來 源 :ovary, Chinese hamster, Cricetulus grise 培 養 基 為 含 0% 胎 牛 血 清 (FBS) 及 Ham s F nutrient mixture (GIBCOBRL 765-054) 培 養 液, 約 每 二 至 三 天 長 滿 需 繼 代 培 養 試 劑 : 實 驗 中 所 用 的 positive control 為 7β-estradiol( 購 自 Sigma 公 司, 產 品 編 號 為 E758) 細 胞 培 養 用 之 培 養 基 與 血 清 購 自 GIBCO 公 司 Transactivation assay: a. 含 receptor 與 reporter 之 質 體 製 備 : 含 GAL4-ERα( 或 β)lbd Chimeric receptors cdna 之 pbkcmv (mammalian cell Expression vector) 質 體, 由 本 實 驗 室 選 殖 得 之 ; 含 (UAS) 4 - Alkaline phosphatase Reporter gene cdna 之 pbkcmv, 自 Dr. Gustaffson 之 實 驗 室 取 得 用 以 轉 型 大 腸 菌 XLblue, 經 篩 選 後, 挑 出 有 表 現 之 菌 株, 大 量 培 養 並 抽 取 質 體 DNA. b. 轉 染 實 驗 : 進 行 轉 染 實 驗 前 一 天 將 長 至 confluence 之 細 胞 植 入 96 孔 培 養 盤, 當 天 將 含 血 清 之 培 養 基 洗 除 乾 淨 將 兩 種 質 體 DNA 定 量 加 入 Fugene 6 轉 染 劑 及 轉 染 專 用 培 養 基 使 形 成 DNA-liposome complex 再 加 入 上 述 洗 淨 之 細 胞 中, 轉 染 5 小 時. c. 活 化 實 驗 : 直 接 加 入 待 測 的 ER activators, 培 養 天 後 後, 吸 取 定 量 培 養 基 測 定 Alkaline phosphatase(ap) 活 性 AP 活 性 係 以 4-Nitrophenyl phosphate disodium salt hexahydrate(pnpp) 於 96 孔 微 盤 中 測 定 已 知 之 ER 活 化 劑 以 nm 7β-estradiol 為 正 對 照 山 藥 製 備 與 萃 取 將 台 農 號 山 藥 去 皮 切 片 凍 乾, 磨 粉 取 0 公 斤 山 藥 粉, 加 入 0 倍 體 積 (w / w) 的 乙 酸 乙 酯 (Ethyl acetate, EA), 於 室 溫 下 以 磁 石 (stir bar) 攪 拌 兩 日, 經 抽 氣 過 濾 ( 白 磁 漏 斗 上 方 放 Whatman No. 濾 紙 ) 濾 渣 重 複 萃 取 一 次 後, 合 併 兩 次 萃 取 之 濾 液 以 減 壓 濃 縮 機 於 45 ~ 50 進 行 濃 縮, 除 去 溶 劑 後 可 得 乙 酸 乙 酯 萃 物 山 藥 化 學 區 分 將 山 藥 乙 酸 乙 酯 萃 物 以 EA 溶 解 後, 使 用 silica gel 進 行 正 相 管 柱 分 離 沖 堤 液 由 正 己 烷 與 乙 酸 乙 酯 不 同 比 例 組 成, 從 00% 正 己 烷 開 始 直 到 00% 乙 酸 乙 酯 ( 含 % 甲 醇 ) 為 止, 每 00 毫 升 收 集 一 瓶 進 行 TLC 分 析 並 以 減 壓 濃 縮 去 除 溶 劑, 最 後 得 到 之 區 分 物 以 無 水 酒 精 或 DMSO 溶 解 後 進 行 ER 活 性 測 試 具 活 性 區 分 物 再 以 製 備 式 HPLC 分 離 統 計 分 析 細 胞 實 驗 皆 重 複 三 次 且 結 果 類 似, 每 次 實 驗 中 每 一 處 理 皆 進 行 三 重 覆, 總 共 至 少 9 次 重 覆 之 數 據 以 平 均 值 ± 標 準 誤 表 示 樣 品 處 理 後 對 轉 染 細 胞 AP 活 性 的 影 響 之 實 驗 結 果 以 T-test ( Student t-test ) 分 析 樣 品 與 vehicle 間 之 差 異 當 樣 品 與 vehicle 有 顯 著 差 異 時 (p<0.05), 於 圖 或 表 上 標 示 星 號 () 另 部 分 結 果 以 鄧 肯 氏 多 變 域 測 驗 (Duncan's Mutiple Range Test) 測 定 各 處 理 下 不 同 濃 度 各 組 之 間 顯 著 差 異 性, 當 各 組 間 的 英 文 字 不 同, 表 示 有 顯 著 差 異, 即 p < 0.05
結 果 與 討 論 各 種 山 藥 品 系 對 herα 與 herβ 轉 錄 活 性 之 之 影 響 將 山 藥 分 別 以 甲 醇 乙 酸 乙 酯 及 正 己 烷 進 行 萃 取, 結 果 顯 示 甲 醇 萃 物 所 得 之 萃 取 率 最 高, 乙 酸 乙 酯 次 之,n-Hexane 萃 取 率 最 低 圖 一 為 各 種 山 藥 品 系 不 同 萃 取 溶 劑 與 不 同 處 理 細 胞 濃 度 對 herα 與 herβ 之 活 化 情 形 圖 一 A. 為 山 藥 對 ERα 的 活 化 情 形, 結 果 顯 示, 七 個 品 系 的 EA 萃 物 活 化 ERα 效 果 皆 顯 著 高 於 vehicle 組, 而 甲 醇 與 正 己 烷 萃 物 沒 有 活 化 效 果 由 此 可 知, 山 藥 有 活 化 ERα 的 成 分 可 被 乙 酸 乙 酯 萃 出, 相 對 nm E 活 化 ERα 百 分 比, 約 介 於.73 ~ 7.33% 之 間, 以 70W0 70W34 90W0 及 83CM 等 四 種 品 系 均 達 nm E 之 0% 以 上 圖 一 B. 為 山 藥 對 ERβ 的 活 化 情 形, 結 果 顯 示, 七 個 品 系 的 EA 萃 物 活 化 ERβ 效 果 皆 顯 著 高 於 vehicle 組, 而 甲 醇 萃 物 亦 沒 有 活 化 ERβ 效 果 其 中, 以 90DN0 有 顯 著 較 高 的 活 化 倍 數 (p<0.0), 約 為 nm E 之 30.59% 由 不 同 極 性 溶 劑 萃 取 結 果 可 知, 山 藥 樣 品 以 甲 醇 萃 取 後 活 化 效 果 不 及 EA, 可 能 原 因 為 :) 甲 醇 萃 取 物 中 含 大 量 的 糖 類, 相 對 活 性 濃 度 較 低 ;) 具 有 活 化 ER 的 物 質 為 較 非 極 性, 不 易 被 甲 醇 萃 出 另 一 方 面, 由 黃 豆 黑 豆 等 富 含 異 黃 酮 類 植 物 雌 激 素 實 驗 結 果 可 證 實, 其 活 性 主 要 存 在 甲 醇 萃 物 中, 而 山 藥 之 ER 活 性 主 要 存 在 於 EA 萃 物 中 初 步 推 測 其 並 非 是 異 黃 酮 所 造 成 的 現 象 為 了 找 出 山 藥 中 具 有 ER 轉 錄 活 性 之 成 份, 本 研 究 購 買 大 量 台 農 二 號 山 藥 進 行 成 分 分 離 實 驗, 由 純 化 得 到 足 夠 量 的 純 物 質 進 行 光 譜 及 結 構 鑑 定 台 農 二 號 山 藥 中 所 分 離 出 之 六 種 具 雌 激 素 活 性 之 化 合 物 對 herα 與 herβ 轉 錄 活 性 之 之 影 響 由 多 次 純 化 分 離 後, 目 前 由 山 藥 中 分 離 出 六 個 具 有 ER 轉 錄 活 性 之 化 合 物, 分 別 為 RRR-α-tocopherol Hydro-Q 9 Chromene Coenzyme Q 9 Cycloartane -Feruloyl glycerol 及 γ-tocopherol-9 其 中, Hydro-Q 9 Chromene 與 γ-tocopherol-9 為 新 化 合 物 六 種 化 合 物 之 雌 激 素 活 性 如 圖 二 所 示 將 RRR-α-tocopherol 以 培 養 基 稀 釋 成 不 同 濃 度 進 行 活 性 測 定, 結 果 示 於 圖 二 A, 可 發 現 隨 著 樣 品 濃 度 增 加,AP 活 性 隨 之 增 加, 有 劑 量 效 應 當 濃 度 為 5 μg/ml 達 活 化 ERα 最 大 值 ; 濃 度 為 0 μg/ml 達 活 化 ERβ 最 大 值, 計 算 其 EC 50 為 :ERα =.08 μg/ml (.5 μm);erβ = 3.96μg/mL (9. μm) 將 hydro- Q 9 chromene 以 培 養 基 稀 釋 成 不 同 濃 度 進 行 活 性 測 定, 結 果 如 圖 二 B 所 示, 可 發 現 隨 著 樣 品 濃 度 增 加,AP 活 性 有 隨 之 增 加 的 趨 勢, 有 劑 量 效 應 當 濃 度 為 40 μg/ml 達 活 化 ERα (3.68 倍 ) 及 ERβ(3.8 倍 ) 最 大 值, 計 算 其 EC 50 為 : ERα = 8.54 μg/ml (0.8 μm);erβ = 5.85μg/mL (7.4 μm) 以 Coenzyme Q 9 處 理 細 胞, 可 發 現 隨 著 樣 品 濃 度 增 加,ALP 活 性 有 隨 之 增 加 的 趨 勢, 有 劑 量 效 應 當 濃 度 為 0μg/mL 時, 達 活 化 ERα 及 ERβ 之 最 大 值, 計 算 其 EC 50 分 別 為 0.54 μg/ml(3.3 μm) 與 0.84 μg/ml(.06 μm) ( 圖 二 C) 將 γ-tocopherol-9 稀 釋 成 不 同 濃 度 進 行 活 性 測 試, 結 果 如 圖 二 D 所 示 結 果 顯 示, 隨 著 γ-tocopherol-9 樣 品 濃 度 之 增 加,
AP 活 性 亦 有 增 加 趨 勢, 有 劑 量 效 應 在 ERα 方 面, 當 濃 度 為 0 μg/ml 達 最 大 活 化 倍 數 (.9 倍 ), 相 對 nm E 百 分 比 為 77%; 在 ERβ 方 面, 濃 度 為 0 μg/ml 達 最 大 活 化 倍 數 (3.6 倍 ), 相 對 nm E 百 分 比 為 84% 分 別 計 算 其 活 化 之 EC 50, ERα:9.56 μg/ml (.7 μm) ERβ:.40 μg/ml (3. μm) 將 cycloartenol 以 培 養 基 稀 釋 成 不 同 濃 度 進 行 活 性 測 試, 結 果 如 圖 二 E 所 示, 當 濃 度 為 0μg/mL 時,cycloartenol 可 分 別 活 化 ERα 及 ERβ 約.3 及.66 倍, 但 與 vehicle 無 統 計 上 之 差 異 將 -feruloyl glycerol 以 培 養 基 稀 釋 成 不 同 濃 度 進 行 活 性 測 試, 結 果 如 圖 二 F 所 示 在 ERα 方 面, 於 濃 度 40μg/mL 達 最 大 活 化 倍 數 (.66 倍 ), 相 對 nm E 百 分 比 為 3%; 在 ERβ 方 面, 濃 度 為 40 μg/ml 達 最 大 活 化 倍 數 (3.0 倍 ), 相 對 nm E 百 分 比 為 7% 其 活 化 ERβ 之 EC 50 為 5.39 μg/ml (0. μm) 植 物 雌 激 素 (phytoestrogen) 之 雌 激 素 相 關 效 應, 相 信 是 來 自 其 構 造 與 雌 二 醇 相 似, 特 別 是 構 造 中 兩 個 -OH 基 之 距 離 與 雌 二 醇 類 似, 故 可 與 雌 激 素 受 器 結 合, 經 由 雌 激 素 受 器 產 生 雌 激 素 效 應 在 本 章 實 驗 所 鑑 定 出 來 之 結 構 中, 唯 有 -feruloyl glycerol 有 此 特 性 (ferulic acid 苯 環 上 的 OH 與 glycerol 二 號 碳 上 的 OH 距 離 與 雌 二 醇 相 近 ), 其 餘 皆 無 此 特 性 美 國 FDA 所 認 可 之 抗 雌 激 素 活 性 之 藥 物 如 tamoxifen Raloxifene 與 ICI 8,780 等, 與 本 實 驗 之 結 果 比 較 發 現,cycloartane 主 結 構 有 三 個 六 員 環, 一 個 五 員 環 的 構 造, 似 乎 與 ICI 8,780 相 似, 唯 ICI 8,780 在 第 二 個 六 員 環 上 有 一 長 鏈 結 構, 而 cycloartenol 的 碳 鏈 較 短 且 接 在 五 員 環 上 除 此 之 外, 山 藥 分 離 出 之 其 餘 化 合 物 結 構 都 與 目 前 抗 雌 激 素 活 性 藥 物 不 同 結 論 本 實 驗 由 山 藥 乙 酸 乙 酯 萃 物 中 找 出 六 個 具 有 雌 激 素 活 性 之 化 合 物, 主 要 分 佈 在 兩 個 極 性 範 圍 (5~0% EA/Hex 及 50% EA/Hex), 以 NMR 及 D NMR 鑑 定 其 結 構 分 別 為 RRR-α-tocopherol coenzyme Q 9 cycloartenol 兩 個 新 化 合 物 (hydro-co Q 9 chromene 及 γ-tocopherol-9 ) 及 -feruloyl glycerol 經 由 短 暫 轉 染 細 胞 促 轉 錄 活 性 分 析 實 驗 結 果, 得 知 此 六 化 合 物 皆 具 有 活 化 ER 轉 錄 之 活 性, 文 獻 上 未 曾 報 告 過 本 章 實 驗 鑑 定 出 山 藥 具 有 雌 激 素 活 性 之 成 份, 也 發 現 一 些 新 類 型 的 植 物 雌 激 素 活 性 化 合 物 參 考 文 獻 Genazzani, A. R. and Gambacciani, M. (00). HRT in the third millennium. Maturitas 38 Suppl, S49-S55. Komesaroff, P. A., Black, C. V., Cable, V., and Sudhir, K. (00). Effects of wild yam extract on menopausal symptoms, lipids and sex hormones in healthy menopausal women. Climacteric. 4, 44-50. Russell, L., Hicks, G. S., Low, A. K., Shepherd, J. M., and Brown, C. A. (00). Phytoestrogens: a viable option? Am. J Med. Sci 34, 85-88. Wu, W. H., Liu, L. Y., Chung, C. J., Jou, H. J., and Wang, T. A. (005). Estrogenic effect of yam ingestion in healthy postmenopausal women. J Am. Coll. Nutr. 4, 35-43.
6 5 A. herα 4 Fold activation 3 Conc. (μg/ml) 0 Veh 0 50 0 50 0 50 0 50 0 50 0 50 0 0 500 0 30 0 0 0 50 0 50 0 50 0 50 nm E EA EA EA MeOH EA n-hex MeOH EA n-hex MeOH EA n-hex EA Strain of Yam 7 70W0 70W34 70W59 90W0 90DN0 83CM TNG 6 B. herβ 5 Fold activation 4 3 0 Conc. (μg/ml) Veh Strain of Yam 0 50 0 50 0 50 0 50 0 50 0 0 50 5 0 0 30 0 0 0 50 0 50 0 50 0 50 EA EA EA MeOH EA MeOH EA n-hex MeOH EA n-hex EA nm E 70W0 70W34 70W59 90W0 90DN0 83CM TNG 圖 一 不 同 山 藥 品 系 萃 取 物 對 (A) herα 與 (B) herβ 之 活 化 情 形 Fig. Transactivation of (A) herα and (B) herβ by extracts of yam. Lyophilized powder of seven species/varieties (70W0, 70W34, 70W59, 90W0, 90DN0, 83CM, TNG) of yam was extracted with methanol (MeOH), ethyl acetate (EA) or n-hexane (n-hex) and tested for ER activities using the transactivation assay as described in the text. Values are means ± SD (n=3~9). and denotes significantly different from vehicle (Veh.) at p<0.05 ( ) or p< 0.0 ( ) analyzed by Student s t-test.
圖 二 山 藥 EA 萃 物 區 分 物 經 製 備 式 HPLC 流 洗 出 之 六 種 化 合 物 對 herα 與 herβ 之 劑 量 反 應 曲 線 Fig.. Dose response curves of six estrogenic compounds isolated from yam EA extract. (A) RRR-α-tocopherol, (B) Hydro-Q 9 chromene, (C) Coenzyme Q 9, (D) γ-tocopherol-9, (E) Cycloartenol and (F) -feruloyl glycerol. Values are means ± SD of triplicate wells in a representative experiment. Data shown are representative of at least three separate experiments with similar results. 7β-estradiol ( nm) is the positive control. (ERα), and # (ERβ) significant different at the 0.05 level compared with vehicle analyzed by student s t-test.