医学科研方法

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1 医 学 科 研 方 法 主 讲 苏 秀 兰 细 胞 生 物 学 教 授 第 一 讲 绪 论 一 概 念 : 在 医 学 科 学 研 究 活 动 中, 运 用 科 学 的 实 践 和 理 论 思 维 的 技 巧, 充 分 发 挥 自 己 的 智 慧, 去 寻 找 观 念 世 界 与 现 实 世 界 之 间 的 联 系 或 规 律, 从 而 发 现 新 现 象, 提 出 新 理 论 的 手 段 二 医 学 科 学 研 究 的 特 征 与 任 务 主 要 特 征 (1) 医 学 科 学 与 其 他 科 学 一 样, 具 有 明 显 的 探 索 性, 创 新 性, 继 承 性, 连 续 性 (2) 构 成 医 学 科 学 研 究 的 两 个 要 素 是 科 学 实 践 与 理 论 思 维 (3) 医 学 科 学 研 究 要 求 有 科 学 性, 先 进 性, 实 践 性 和 实 用 性 良 好 的 方 法 能 使 我 们 更 好 地 发 挥 运 用 天 赋 的 才 能, 而 拙 劣 的 方 法 可 能 阻 碍 才 能 的 发 挥 贝 尔 纳 科 研 工 作 者 的 基 本 任 务 : 应 用 已 知 的 科 学 知 识 去 寻 找 提 出 和 解 决 科 学 问 题 1. 揭 示 人 体 生 命 本 质 与 疾 病 发 生 发 展 的 现 象 和 机 制 ; 2. 认 识 人 与 环 境 的 相 互 关 系 ; 3. 认 识 健 康 与 疾 病 相 互 转 化 的 客 观 规 律 ; 4. 用 理 性 的 方 法 去 整 理 感 性 的 材 料, 从 而 为 防 治 疾 病 提 高 健 康 水 平 提 供 技 术 方 法 和 手 段 三 学 习 医 学 科 研 方 法 的 意 义 1. 掌 握 正 确 的 科 研 思 维 方 法 和 研 究 工 作 方 法 2. 使 年 轻 的 医 学 科 技 工 作 者 快 速 成 长, 早 出 成 果, 多 出 成 果 3. 使 医 学 科 学 工 作 者 提 高 科 学 素 养, 增 长 才 干, 提 高 科 学 的 见 识 力, 从 而 认 识 科 学 发 展 的 主 流 和 趋 势 前 沿 和 远 景, 以 恰 当 地 安 排 研 究 工 作 第 二 讲 医 学 科 研 道 德 道 德 有 一 定 的 调 节 或 左 右 人 们 行 为 的 作 用, 通 过 道 德 观 念 可 评 价 人 们 的 行 为 和 调 整 人 们 之 间 的 关 系, 也 可 通 过 教 育 和 社 会 舆 论 的 力 量, 使 人 们 逐 渐 形 成 一 定 的 信 念 习 惯 传 统 而 发 生 作 用 道 德 属 于 社 会 文 化 的 一 部 分, 随 着 社 会 的 不 断 发 展 而 不 断 的 更 新 和 发 展 ; 随 着 不 同 行 业 的 特 点, 产 生 服 从 社 会 整 体 道 德 要 求 的 行 业 道 德 一. 科 研 道 德 的 基 础 与 核 心 纯 洁 的 动 机 高 尚 的 目 标, 对 人 类 的 责 任 感 和 事 业 心, 以 及 为 科 技 事 业 无 私 无 畏 的 献 身 精 神 ( 一 ) 有 崇 高 的 科 研 动 机 和 目 的 动 机 是 推 动 并 维 持 一 个 人 从 事 某 种 活 动 的 心 理 倾 向 或 心 理 因 素, 是 促 进 人 们 为 达 到 某 种 1

2 目 的 去 从 事 一 种 活 动 的 内 在 原 因 和 直 接 动 力 对 科 研 动 机 有 影 响 的 因 素 : 1. 性 格 特 点 : 性 格 是 行 为 特 征 的 构 成 因 素, 同 样 也 是 动 机 模 式 的 决 定 因 素 之 一 2. 价 值 观 : 指 人 们 对 客 观 事 物 的 评 估 标 准 与 态 度 体 系 3. 抱 负 水 平 : 使 工 作 能 够 达 到 某 种 质 量 水 平 或 取 得 成 果 的 心 理 因 素 ( 二 ) 科 学 研 究 是 探 索 性 活 动, 需 要 探 索 者 付 出 汗 水 鲜 血 乃 至 生 命 ( 三 ) 科 学 研 究 是 创 造 性 活 动, 研 究 者 要 具 有 首 创 精 神 ( 四 ) 科 学 研 究 是 积 累 性 的 活 动 ( 五 ) 科 学 研 究 对 象 人, 因 此, 开 展 研 究 工 作 有 着 更 高 的 要 求 ( 六 ) 科 学 研 究 具 有 社 会 性 1.: 尊 重 他 人 的 科 学 劳 动 成 果, 正 确 估 计 个 人 的 科 学 贡 献, 在 科 研 工 作 中 应 互 相 支 持 互 相 配 合, 团 结 协 作 强 调 统 一 部 署 和 相 互 配 合, 彼 此 互 通 信 息, 反 对 互 相 封 锁 信 息, 反 对 各 自 为 政, 各 行 其 是 2. 遵 守 研 究 工 作 的 规 章 制 度, 遵 守 科 研 纪 律, 反 对 利 用 协 作 单 位 或 协 作 人 的 科 研 成 果 搞 单 项 研 究 3. 仪 器 及 设 备 和 图 书 资 料 方 面 应 互 相 提 供 方 便 4. 科 研 论 文 及 成 果 应 以 贡 献 大 小 排 列 名 次 5. 科 研 负 责 人 要 具 有 良 好 的 科 研 素 质 及 品 质 广 博 的 知 识, 不 断 创 新 的 进 取 精 神 宽 容 及 敢 于 承 担 风 险 尊 重 他 人 的 劳 动 的 优 秀 品 质, 努 力 创 造 良 好 的 科 研 环 境 的 能 力 ( 七 ) 坚 持 实 事 求 是 要 保 证 科 学 研 究 中 诚 实 原 则 得 到 认 真 的 贯 彻 和 体 现 1. 确 定 科 学 研 究 的 课 题 及 进 行 的 实 验 设 计 必 须 有 事 实 依 据 或 科 学 的 理 论 根 据 2. 收 集 资 料 应 做 到 实 事 求 是 : (1) 科 学 观 察 : 要 求 准 确 而 实 事 求 是 地 记 录 实 验 的 每 一 个 过 程, 做 到 客 观 地 记 录 阴 性 和 阳 性 的 全 部 结 果, 以 避 免 去 记 录 预 想 的 结 果, 甚 至 是 捏 造 的 结 果 (2) 资 料 的 统 计 : 科 学 的 选 择 统 计 方 法, 统 计 中 要 求 实 3. 论 文 撰 写 : 科 学 求 实, 不 能 凭 主 观 想 象 杜 撰 论 文, 甚 至 假 报 成 果 4. 论 文 发 表 及 申 报 成 果 : 将 前 人 已 做 出 的 结 论 或 已 公 布 的 成 果 与 研 究 者 得 到 的 新 进 展 区 分 开, 不 能 将 他 人 之 功 据 为 已 有 科 学 技 术 的 发 展 与 道 德 进 步 具 有 一 致 性, 他 们 互 相 促 进 互 相 渗 透 互 相 制 约 道 德 与 法 规 有 直 接 关 系 二. 科 研 工 作 者 的 素 质 ( 一 ) 德 ---- 科 研 工 作 者 的 思 想 道 德 和 科 学 道 德 德 的 核 心 和 实 质 --- 学 会 做 人 1 热 爱 祖 国, 树 立 爱 国 主 义 精 神 2 追 求 真 理, 崇 尚 科 学 3 既 有 知 识, 又 有 能 力 4 既 有 学 问, 又 有 道 德 ( 二 ) 识 科 研 工 作 者 的 胆 识 指 识 别 能 力 判 断 能 力 预 见 能 力 胆 识 在 科 研 工 作 中 的 作 用 1. 科 研 意 识 的 强 弱 取 决 于 胆 识 的 大 小 ; 2. 在 科 研 选 题 中, 敢 于 选 择 前 沿 性 的 有 创 造 性 的 课 题 是 由 胆 识 决 定 的 ; 何 谓 科 学 研 究 的 前 沿 2

3 从 科 学 上 : 研 究 的 课 题 要 着 重 深 度 从 技 术 上 : 项 目 要 着 重 创 新 3. 在 观 察 和 实 验 中 根 据 一 定 的 事 实 敢 于 提 出 假 说 是 需 要 胆 识 的. ( 三 ) 才 ---- 才 干 才 能 和 能 力 发 现 才 能 ---- 敏 感 性 观 察 力 动 手 操 作 能 力 ; 创 新 才 能 ---- 辨 别 真 伪 的 能 力 发 现 及 联 想 的 能 力 抽 象 概 括 的 能 力 ; 要 勤 于 和 善 于 积 累 知 识 ( 四 ) 学 ---- 科 研 工 作 者 的 学 习 学 问 知 识 1. 学 什 麽? 知 识 经 济 时 代 的 知 识 分 类 : 第 一 类 明 确 知 识 know what 即 关 于 事 实 的 知 识 Know why 即 关 于 自 然 原 理 和 规 律 的 知 识 ( 原 理 知 识 ) 第 二 类 默 会 知 识 Know how 即 做 事 情 的 技 艺 或 能 力 Know who 即 人 力 知 识 2. 怎 样 学 精 其 选 ---- 在 内 容 上 进 行 精 选 解 其 言 ---- 在 文 字 上 弄 懂 弄 通 知 其 意 在 理 性 认 识 上 专 研 反 复 领 会 其 中 的 意 境 和 真 谛, 探 索 书 中 揭 示 的 奥 秘 和 规 律 明 其 理 在 理 解 程 度 上 读 出 自 己 的 新 见 解, 学 出 自 己 的 新 看 法, 产 生 自 己 的 新 思 想, 不 作 书 刊 的 奴 隶 善 其 用 将 理 论 应 用 于 实 践 第 三 讲 医 学 科 研 的 分 类 及 特 点 第 一 节 分 类 一 基 础 研 究 (Fundamental research ) 旨 在 增 加 科 学 技 术 知 识 和 发 现 探 索 领 域 的 任 何 创 造 性 活 动, 而 不 考 虑 任 何 特 定 的 实 际 目 的 特 点 其 成 果 对 广 泛 的 科 学 领 域 产 生 影 响, 并 常 常 说 明 一 般 的 和 普 遍 的 真 理, 其 成 果 也 常 成 为 普 遍 的 原 则 理 论 或 定 律 其 研 究 结 果 是 新 观 点 和 新 信 息, 这 类 研 究 未 知 因 素 多, 探 索 性 强, 研 究 周 期 长, 对 研 究 手 段 要 求 高 内 容 范 围 : (1) 保 持 人 体 健 康 的 规 律, 健 康 指 标 的 分 期 基 础 ; (2) 人 体 功 能 与 结 构 的 研 究 ; (3) 疾 病 发 生 发 展 转 归 全 过 程 的 规 律 及 分 子 基 础 ; (4) 人 体 衰 老 过 程 的 规 律 及 分 子 基 础 ; (5) 人 体 的 生 物 力 学 流 体 力 学 电 子 学 ; (6) 化 学 药 物 的 构 效 关 系, 植 物 药 的 亲 缘 与 有 效 成 分 关 系 举 例 3

4 (1) 精 子 膜 蛋 白 的 结 构 及 免 疫 性 ; (2) DNA 损 伤 与 修 复 过 程 中 基 因 结 构 的 变 化 ; (3) T 细 胞 E 受 体 受 刺 激 后 细 胞 内 生 化 的 变 化 (4) 经 络 本 质 的 研 究 ; 二 应 用 研 究 ( Applied research ) 任 何 旨 在 增 加 科 学 技 术 知 识 的 创 造 性 的 系 统 活 动, 但 它 考 虑 某 一 特 定 的 实 际 目 特 点 具 有 针 对 一 定 的 实 际 应 用 目 的 去 发 展 基 础 研 究 成 果 的 性 质, 又 是 为 达 到 某 些 特 定 的 和 预 先 确 定 的 实 际 目 标 提 供 新 的 方 法 或 途 径 其 成 果 对 科 学 技 术 领 域 的 影 响 是 有 限 的, 针 对 性 更 强 内 容 范 围 : (1) 有 关 疾 病 的 病 因 流 行 规 律 治 疗 及 预 防 效 果 的 机 制 研 究 ; (2) 为 实 验 研 究 需 建 立 的 新 的 动 物 模 型 细 胞 株 以 及 方 法 学 的 研 究 ; (3) 有 关 流 行 病 学 调 查 考 核 防 治 效 果 药 物 调 查 的 方 法 学 研 究 ; (4) 寻 找 新 药 物 新 生 物 制 品 新 医 用 材 料 的 方 法 有 效 药 物 的 药 理 作 用 机 制 药 代 动 力 学 医 用 材 料 的 机 体 相 容 性 的 机 制 研 究 举 例 : 不 同 抗 精 子 膜 蛋 白 抗 体 对 抗 生 育 作 用 影 响 的 比 较 研 究 ; 网 织 红 细 胞 与 骨 髓 瘤 细 胞 杂 交 系 的 染 色 体 组 型 分 带 与 恶 性 肿 瘤 的 关 系 ; 建 立 临 床 检 测 T 细 胞 功 能 的 技 术 方 法 ; 心 律 失 常 的 电 生 理 特 性 及 其 机 制 ; 新 光 辐 射 治 疗 剂 的 有 效 成 分 的 生 物 学 活 性 及 其 作 用 原 理 三 实 验 发 展 ( Experimental development) 也 称 为 开 发 研 究 特 点 : 是 运 用 基 础 研 究 与 应 用 研 究 及 实 验 的 知 识, 研 制 出 产 品 性 物 质, 或 为 了 对 现 有 的 产 品 性 物 质 进 行 重 大 改 进 的 创 造 性 活 动 内 容 有 关 疾 病 的 新 的 诊 断 治 疗 预 防 方 法 及 措 施 的 研 究 ; 有 关 新 药 物 新 生 物 制 品 新 仪 器 器 械 新 试 剂 新 医 用 材 料 实 验 室 样 品 的 研 制 ; 有 关 药 物 的 资 源 调 查 植 物 药 的 引 种 试 验 ; 心 律 失 常 的 药 物 治 疗 及 应 用 起 搏 器 手 术 的 指 征 ; 举 例 心 律 失 常 的 药 物 治 疗 及 应 用 起 搏 器 手 术 的 指 征 ; 异 常 血 红 蛋 白 病 的 产 前 诊 断 ; 肢 体 动 脉 硬 化 闭 塞 病 的 无 创 性 测 定 技 术 的 研 究 ; 第 二 代 国 产 肾 衰 专 用 必 需 氨 基 酸 的 试 制 和 临 床 观 察 ; 脉 冲 激 光 器 的 研 制 和 改 进 基 础 研 究 应 用 研 究 的 主 要 标 志 : 增 加 科 学 技 术 知 识, 以 直 接 产 生 社 会 效 益 为 主, 开 发 研 究 的 标 志 : 推 广 应 用 新 技 术 新 产 品, 以 直 接 产 生 经 济 效 益 为 主 第 二 节 医 学 科 学 发 展 的 几 个 重 大 前 沿 领 域 一 人 类 基 因 组 计 划 (HGP) 4

5 HGP 的 主 要 内 容 包 括 : 人 类 基 因 组 的 基 因 图 谱 构 建 与 序 列 分 析, 人 类 基 因 的 鉴 定, 基 因 组 研 究 技 术 的 建 立, 人 类 基 因 组 研 究 模 式, 生 物 信 息 系 统 的 建 立, 以 及 社 会, 法 律 与 伦 理 问 题, 交 叉 学 科 的 技 术 训 练, 技 术 转 让, 研 究 计 划 的 外 延 二 DNA 芯 片 技 术 ( gene chip) 芯 片 实 质 是 一 种 寡 核 苷 酸 阵 列, 是 采 用 在 位 组 合 合 成 化 学 和 微 电 子 芯 片 的 光 刻 技 术 原 理, 将 大 量 特 定 序 列 的 DNA 片 断 ( 探 针 ) 有 序 地 固 化 在 玻 片 或 硅 片 上, 快 速 并 行 地 对 DNA 进 行 序 列 测 定 和 定 量 分 析 DNA 技 术 的 最 终 目 标 : 将 人 类 的 全 部 基 因 高 度 集 成 到 1cm 2 的 芯 片 上 三 克 隆 技 术 1997 年 2 月, 维 尔 穆 特 等 利 用 成 年 绵 羊 体 细 胞 克 隆 成 功 世 界 上 第 一 只 克 隆 绵 羊 多 利 1998 年 7 月 23 日, 用 鼠 体 细 胞 成 功 培 育 出 三 代 共 50 多 只 克 隆 鼠, 是 人 类 第 一 次 用 克 隆 动 物 克 隆 出 克 隆 动 物 克 隆 羊 多 利 克 隆 牛 能 都 和 加 贺 到 克 隆 鼠 卡 缪 丽 娜, 致 使 人 类 可 利 用 转 基 因 技 术 克 隆 出 携 带 人 类 基 因 的 转 基 因 克 隆 羊 和 利 用 胚 胎 细 胞 克 隆 成 功 的 一 系 列 动 物 意 义 * 证 明 了 哺 乳 动 物 细 胞 可 以 复 制 出 新 个 体, 打 破 了 只 能 使 用 胚 胎 细 胞 克 隆 动 物 的 传 统, 为 进 一 步 提 供 了 广 阔 的 前 景 和 新 的 思 路 ; * 可 以 使 科 学 家 拥 有 一 项 新 的 有 效 技 术 深 入 研 究 一 系 列 重 要 的 生 物 学 问 题, 包 括 若 干 疾 病 的 发 病 机 制 ; * 它 将 成 为 一 项 革 命 性 的 育 种 手 段 ; * 为 人 类 通 过 遗 传 操 作 对 动 物 进 行 遗 传 改 造 提 供 一 个 新 的 途 径 ; * 标 志 着 现 代 遗 传 操 作 技 术 在 分 子 细 胞 和 整 体 水 平 上 的 最 新 进 展 四 组 织 工 程 (1)Tissue engieering: 在 组 织 水 平 上 操 作 的 生 物 工 程, 研 究 组 织 和 器 官 的 形 成 和 再 生 (2)Biomolecular engineering: 在 分 子 水 平 上 操 作 的 生 物 工 程, 包 括 基 因 工 程 蛋 白 质 工 程 酶 工 程 膜 工 程.. (3)Cellular engineering: 在 细 胞 水 平 上 操 作 的 生 物 工 程, 用 细 胞 生 物 学 方 法 或 某 些 分 子 生 物 学 技 术 来 设 计 或 再 造 变 细 胞 的 遗 传 物 质, 实 质 获 得 新 的 性 状 五 阮 病 毒 是 人 类 继 细 菌 病 毒 真 菌 和 寄 生 虫 后 发 现 的 又 一 类 传 染 性 因 子 意 义 对 于 了 解 人 和 动 物 所 患 的 几 种 与 痴 呆 有 关 的 致 命 性 脑 病 的 发 病 机 制 具 有 重 要 意 义, 为 药 物 的 研 制 与 新 的 治 疗 方 法 的 建 立 奠 定 了 基 础 六 神 经 科 学 七 细 胞 信 号 传 导 八 后 基 因 组 时 代 的 生 物 信 息 学 九 蛋 白 质 组 等 21 世 纪 将 是 分 子 医 学 及 组 织 医 学 的 世 纪 第 四 讲 科 研 方 向 专 业 目 标 和 科 研 课 题 的 选 择 一 科 研 方 向 第 一 节 确 定 科 研 方 向 及 专 业 目 标 5

6 科 研 工 作 者 在 本 学 科 或 邻 近 学 科 领 域 内, 把 那 些 自 己 基 础 理 论 较 好 学 术 造 诣 较 深 最 有 发 展 前 途, 也 有 继 续 深 入 研 究 兴 趣 的 一 个 学 科 或 两 个 及 两 个 以 上 学 科 的 交 叉 处 空 白 区 确 定 为 自 己 今 后 长 期 为 之 奋 斗 的 主 攻 方 向, 这 些 学 科 或 交 叉 处 就 是 确 定 的 科 研 方 向 二 确 定 科 研 方 向 及 专 业 目 标 的 原 则 1. 根 据 个 人 兴 趣 来 确 定 * 兴 趣 是 科 研 工 作 者 在 事 业 上 成 败 的 关 键 * 是 科 研 事 业 上 的 行 为 动 力 2. 根 据 社 会 需 要 和 科 学 发 展 趋 势 来 确 定 3. 根 据 个 人 的 才 能 和 其 他 人 的 意 见 来 确 定 WHY TO DO THIS (1) 从 战 略 上 看 * 科 研 方 向 和 专 业 目 标 决 定 了 科 研 选 题 的 方 向 与 范 围 * 科 研 方 向 和 专 业 目 标 是 培 养 与 造 就 专 家 与 学 者 的 有 效 途 径 (2) 从 战 术 上 看 确 定 科 研 方 向 和 专 业 目 标 对 科 研 方 法 的 选 择 有 直 接 的 影 响 三 确 定 科 研 方 向 和 专 业 目 标 时 应 注 意 的 问 题 1. 进 行 反 馈 调 节 科 学 准 确 和 可 靠 的 科 研 方 向 和 目 标 需 经 过 论 证 实 际 检 验 反 馈 调 节 确 定 下 来 2. 防 止 从 众 心 理, 切 忌 赶 时 髦 3. 防 止 旁 驰 博 鹜, 切 忌 朝 三 暮 四 4. 要 防 止 厌 战 情 绪, 切 忌 急 于 求 成 第 二 节 科 研 选 题 的 步 骤 及 原 则 一. 要 求 : 完 整 严 谨 具 有 明 确 目 的 性 先 进 性 与 科 学 性 海 森 堡 : 提 出 正 确 的 问 题, 往 往 等 于 解 决 了 问 题 的 大 半 爱 因 斯 坦 : 提 出 一 个 问 题 比 解 决 一 个 问 题 更 重 要, 因 为 解 决 一 个 问 题 也 许 是 一 个 数 学 上 或 实 验 的 技 能 而 已, 而 提 出 新 的 问 题 却 需 要 有 创 造 性 的 想 象 力, 而 且 标 志 着 科 学 的 进 步 如 何 选 题 是 对 研 究 者 各 方 面 能 力 的 的 检 验, 包 括 : 科 学 思 维 能 力 ; 理 论 认 识 能 力 ; 掌 握 前 沿 进 展 的 能 力 ; 实 验 能 力 以 及 检 验 研 究 是 否 能 达 到 预 期 结 果 常 出 现 的 问 题 : 缺 乏 构 思 成 熟 的 科 学 理 论, 或 目 标 不 正 确 二. 选 择 科 研 课 题 的 基 本 原 则 第 一 需 要 性 原 则 1. 考 虑 课 题 的 价 值 ---- 科 学 价 值 实 用 价 值 经 济 价 值 2. 近 期 需 要 与 长 远 需 要 的 的 关 系 3. 正 确 处 理 基 础 理 论 和 应 用 技 术 研 究 的 关 系 第 二 创 造 性 原 则 1. 选 择 应 用 技 术 研 究 课 题, 要 考 虑 课 题 能 否 成 为 新 发 明 或 技 术 革 新 根 据 的 可 能 性 2. 对 于 基 础 理 论 研 究 课 题 要 考 虑 所 选 课 题 能 否 导 致 重 大 发 现 和 理 论 创 新 的 可 能 性 3. 以 新 的 观 点 新 的 角 度 新 的 水 平 新 的 方 法 等 选 择 一 些 继 承 发 展 革 新, 创 造 性 的 研 究 课 题 做 到 : 人 无 我 有, 人 有 我 多, 人 多 我 新 第 三 科 学 性 原 则 6

7 基 础 理 论 研 究 及 应 用 技 术 研 究 的 课 题 的 选 择 和 确 立, 都 必 须 有 一 定 的 事 实 根 据 或 科 学 理 论 根 据 第 四 可 行 性 原 则 : 注 意 1 主 观 条 件 ;2 客 观 条 件 ;3 个 人 条 件 ; 1. 正 确 评 价 研 究 者 的 知 识 结 构 和 水 平, 以 及 研 究 能 力 思 维 能 力 及 个 人 的 兴 趣 2. 正 确 评 价 客 观 条 件 是 否 具 备 3. 发 挥 主 观 能 动 性, 积 极 创 造 条 件 第 五 专 一 性 原 则 1. 专 一 性 即 意 谓 着 科 研 课 题 不 宜 太 大, 要 选 择 其 未 发 现 未 涉 猎 的 领 域 ; 2. 在 深 入 专 一 性 研 究 中, 可 发 现 一 些 新 现 象 新 问 题, 而 成 为 进 一 步 研 究 或 选 题 的 新 起 点, 这 就 是 题 目 的 再 扩 大 或 科 研 的 再 深 入 ; 3. 开 展 深 入 的 专 一 研 究, 有 利 于 新 的 突 破 和 培 育 独 特 的 专 长, 使 自 己 始 终 站 在 领 先 的 高 度, 甚 至 形 成 学 派 权 威 或 学 术 思 想 体 系 第 六 效 益 性 原 则 社 会 效 益 经 济 效 益 科 技 本 身 的 效 益 生 态 效 益 选 题 常 出 现 的 问 题 : 贪 大 求 洋, 题 目 选 得 过 大 ; 手 段 方 法 定 的 过 高, 甚 至 脱 离 现 实 和 客 观 条 件 ; 三. 选 题 的 来 源 ( 一 ) 理 论 研 究 课 题 的 基 本 来 源 1. 从 社 会 生 产 和 现 实 生 活 需 要 中 提 出 来 2. 从 科 学 实 践 与 原 有 科 学 理 论 的 矛 盾 中 提 出 来 3. 从 学 科 交 叉 所 产 生 的 空 白 区 中 提 出 来 4. 从 对 已 有 的 理 论 传 统 观 点 和 结 论 的 怀 疑 中 提 出 来 5. 从 新 领 域 的 经 验 事 实 中 提 出 来 6. 从 学 术 问 题 争 论 中 提 出 来 7. 从 理 论 内 部 的 逻 辑 矛 盾 中 引 出 来 ( 二 ). 应 用 课 题 来 源 1 从 社 会 生 产 的 需 要 中 提 取 出 来 2 从 社 会 现 实 生 活 需 要 中 提 出 来 3 从 科 学 实 验 中 提 出 来 4 从 国 家 企 业 或 科 学 共 同 体 来 的 研 究 课 题 四 选 题 和 立 项 时 应 注 意 的 问 题 1. 结 合 自 身 优 势, 选 择 好 研 究 领 域 或 研 究 方 向 2. 拓 宽 思 路, 既 熟 悉 本 领 域 的 研 究 进 展, 又 熟 悉 相 关 领 域 的 研 究 进 展 3. 加 强 合 作, 利 用 他 人 的 优 势 充 实 和 发 展 自 己 4. 善 于 运 用 科 学 的 思 维 方 法, 是 提 出 新 问 题 产 生 思 想 火 花 跳 出 旧 框 框 的 最 佳 途 径 5. 选 题 的 研 究 目 标 要 具 体 举 例 高 血 压 相 关 基 因 研 究 : 评 价 : 题 目 大, 可 行 性 差 我 国 蒙 古 族 人 群 胰 岛 素 受 体 基 因 多 态 性 与 高 血 压 关 系 的 研 究 评 价 较 好 7

8 6. 选 题 要 与 工 作 基 础 技 术 条 件 及 经 费 相 结 合 7. 要 做 到 知 己 知 彼 五 选 题 的 条 件 及 评 价 标 准 1. 选 题 的 条 件 (1) 有 重 要 的 科 学 意 义 或 重 要 的 应 用 前 景 (2) 学 术 思 想 新 颖, 理 论 依 据 充 分, 研 究 目 标 明 确 具 体, 研 究 方 法 和 技 术 路 线 合 理 可 行, 渴 望 获 得 新 的 科 学 发 现, 或 近 期 可 取 得 重 要 进 展 (3) 立 项 者 和 项 目 组 成 员 具 有 实 施 项 目 的 能 力 可 可 靠 的 时 间 保 证, 并 具 有 基 本 的 研 究 条 件 2. 选 题 的 评 价 标 准 (1) 项 目 的 理 论 依 据 * 研 究 意 义 : 有 重 要 的 科 学 意 义 或 属 国 民 经 济 建 设 中 的 重 要 科 技 问 题 * 学 术 思 想 : 有 明 显 的 创 新 性 * 充 分 的 立 论 依 据 * 了 解 国 内 外 研 究 现 状 (2) 研 究 方 案 和 研 究 目 的 * 研 究 内 容 和 拟 解 决 的 关 键 问 题 : 紧 紧 围 绕 研 究 目 标, 重 点 要 突 出 * 研 究 方 法 : 可 行 且 有 创 新 * 技 术 路 线 : 合 理 可 行, 且 有 创 新 * 研 究 的 预 期 目 标 (3) 研 究 基 础 * 与 本 项 目 有 关 的 研 究 工 作 积 累 : 是 原 有 工 作 的 进 一 步 深 入 * 已 具 备 的 实 验 条 件 * 项 目 组 成 员 : 结 构 合 理 研 究 力 量 强 (4) 综 合 评 议 * 以 往 完 成 项 目 情 况, 项 目 的 创 新 性 六 选 题 前 的 准 备 工 作 ( 一 ) 占 有 充 分 资 料 第 一 初 步 选 定 一 个 研 究 方 向 或 题 目 第 二 整 理 资 料, 理 出 资 料 之 间 的 关 系 第 一 手 资 料 原 文 第 二 手 资 料 综 述 第 三 手 资 料 教 科 书 及 现 场 调 查 1. 如 何 应 用 文 献 资 料 文 献 是 知 识 的 宝 库, 汇 集 和 保 存 了 人 类 创 造 的 精 神 财 富. 它 在 实 践 上 的 传 递, 实 现 了 时 代 与 人 之 间 的 文 化 集 成 和 发 展, 它 在 实 践 上 的 传 播, 促 进 了 当 代 人 的 信 息 技 术 交 流 与 共 享, 加 速 了 社 会 的 进 步 文 献 记 载 着 研 究 成 果, 从 事 研 究 的 人 和 时 间, 使 后 人 了 解 某 一 研 究 的 起 源, 发 展, 在 借 鉴 的 基 础 上 发 展, 创 新. 加 速 科 研 工 作 的 进 程 2. 文 献 检 索 的 作 用 (1) 桥 梁 作 用 : 文 献 检 索 是 连 接 文 献 生 产 者 与 文 献 需 求 之 间 的 桥 梁, 也 是 当 代 人 继 承 前 人 的 知 识 进 行 创 新 的 桥 梁 (2) 钥 匙 作 用 : 文 献 信 息 是 知 识 的 宝 库, 检 索 工 具 就 是 启 动 科 学 研 究 工 作 的 钥 匙 (3) 节 约 作 用 (4) 导 向 作 用 8

9 3. 文 献 与 情 报 资 料 的 搜 集 第 一 文 献 与 资 料 种 类 与 来 源 书 籍 教 科 书 论 著 专 著 报 纸 ---- 快 新 期 刊 发 行 周 期 短 内 容 新 颖 论 述 深 入 发 行 数 量 达 影 响 面 广 反 应 当 前 最 高 研 究 水 平 专 利 文 献 --- 含 有 极 为 丰 富 的 技 术 研 究 用 的 资 料 科 技 报 告 和 政 府 出 版 物 --- 涉 及 尖 端 科 技 的 最 新 课 题 正 在 进 行 的 科 研 项 目 情 报 学 位 论 文 --- 有 一 定 的 独 创 性 见 解 学 术 会 议 文 献 技 术 标 准 ---- 内 容 详 实 完 整, 能 直 接 应 用, 富 有 指 导 性 产 品 样 本 ---- 一 般 技 术 可 靠 数 据 齐 全 第 二 文 献 与 情 报 资 料 的 搜 集 原 则 (1) 逆 时 法 原 则 节 约 时 间, 能 搜 集 到 更 新 更 全 面 更 可 靠 的 资 料 (2) 有 限 制 原 则 对 搜 集 资 料 的 时 间 安 排 做 出 限 制 对 资 料 的 数 量 做 出 限 制 (3) 准 确 可 靠 性 原 则 4. 如 何 阅 读 (1) 阅 读 题 目 : 选 择 切 合 需 要 的 文 献 ( 快 速 从 大 量 的 文 献 中 选 择 (2) 阅 读 摘 要 : 选 择 切 合 的 题 目 后, 可 以 阅 读 提 要 或 摘 要, 借 以 了 解 全 文 内 容 ; (3) 阅 读 序 言 : 可 以 了 解 要 解 决 的 问 题 (4) 阅 读 结 论 : 可 以 概 括 全 貌 (5) 阅 读 统 计 结 果, 分 析 和 讨 论 5. 阅 读 方 法 (1) 浏 览 : 是 阅 读 最 常 用 和 最 基 本 的 方 法 : 节 约 时 间, 受 益 匪 浅, 对 于 取 舍 选 择 文 献 是 一 种 有 效 的 方 法. (2) 粗 读 (3) 精 读 : 是 对 文 献 内 容 的 深 入 认 识, 同 时 也 是 酝 酿 科 学 的 抽 象 过 程 ( 做 题 录 或 摘 要 ) * 读 序 言 : 从 这 部 分 可 了 解 作 者 所 做 研 究 的 概 况, 或 想 要 解 决 的 问 题 * 读 结 论 : 了 解 作 者 所 做 出 的 研 究 工 作 结 果 的 概 括 和 归 纳, 从 而 根 据 自 己 掌 握 的 信 息, 对 其 取 舍 * 读 中 标 题 : 了 解 作 者 的 学 术 思 路 * 读 图 表 : 只 了 解 一 个 概 况 ( 二 ) 提 出 初 始 问 题, 建 立 假 说 假 说 是 对 科 学 上 某 一 领 域 提 出 新 问 题, 并 对 这 个 问 题 提 出 未 证 实 或 未 完 全 证 实 的 答 案 和 解 释 1. 科 学 假 说 的 提 出 与 建 立 (1) 科 学 假 说 的 显 著 特 点 : 假 说 是 以 观 察 实 验 搜 集 的 事 实 材 料 为 基 础, 以 科 学 知 识 为 依 据, 所 以 它 具 有 科 学 性 假 说 是 对 事 物 存 在 的 原 因 及 规 律 所 做 的 某 种 推 测 性 的 说 明 和 解 释, 决 定 了 任 何 假 说 都 必 然 带 有 猜 测 的 性 质 (2) 科 学 假 说 的 形 成 与 建 立 应 具 备 的 条 件 9

10 要 具 有 标 新 立 异 的 特 点 重 视 科 学 探 索 中 的 机 遇 要 有 综 合 性, 扩 大 知 识 面 及 时 提 出 新 的 假 说 假 说 的 内 容 或 推 出 的 结 论 不 应 包 含 逻 辑 矛 盾 具 有 科 学 原 理 2. 假 说 的 作 用 及 地 位 (1) 假 说 的 作 用 假 说 使 人 们 为 达 到 某 种 结 果 而 有 计 划 地 进 行 各 种 观 察 和 实 验, 是 科 学 研 究 中 的 重 要 步 骤 和 基 本 程 序 ; 假 说 是 从 观 察 的 事 实 出 发, 通 过 概 念 判 断 推 理 对 所 探 索 的 问 题 提 出 初 步 的 推 断 性 的 带 有 假 定 意 义 的 理 论 解 释 假 说 是 发 现 认 识 事 物 内 部 规 律 建 立 新 的 科 学 理 论 必 须 经 历 的 一 个 重 要 阶 段 和 不 可 缺 乏 的 形 式 与 方 法 ; 假 说 是 任 何 科 学 理 论 的 初 始 阶 段 ; 假 说 是 人 们 认 识 达 于 科 学 理 论 的 桥 梁 ; 假 说 是 未 经 实 践 证 明 的 理 论 ; 假 说 是 人 们 从 个 人 或 前 人 的 实 践 经 验 科 学 积 累 中 通 过 分 析 和 综 合, 对 所 选 课 题 可 能 得 到 的 预 期 结 果 的 解 释 假 说 是 来 源 于 实 践 中 得 到 的 事 实 或 理 论 ; 假 说 是 对 被 研 究 问 题 的 规 律 性 认 识 的 推 测 (2) 假 说 的 地 位 观 察 和 实 验 是 科 学 发 展 的 基 础, 假 说 是 科 学 发 展 的 形 式 只 要 自 然 科 学 在 思 维 着, 它 的 发 展 形 式 就 是 假 说 恩 格 斯 假 说 是 科 学 研 究 的 主 线 观 察 和 实 验 是 科 学 躯 体, 假 说 和 理 论 是 科 学 的 灵 魂, 贯 穿 于 整 个 科 研 过 程 中 科 学 研 究 的 全 过 程 就 是 提 出 假 说 和 验 证 假 说 的 过 程, 所 有 的 工 作 程 序 紧 紧 围 绕 着 这 条 主 线 有 次 序 地 有 要 求 地 严 格 进 行 安 排 科 研 过 程 可 分 为 3 个 阶 段 10 个 步 骤 第 一 阶 段 : 选 题 过 程 1)original idea or problem 2)critical review of literatures 3)formulation of hypothesis 4)statement of the problem 此 阶 段 主 要 问 题 在 于 提 出 假 说 和 选 择 验 证 手 段, 并 对 两 者 进 行 全 面 系 统 地 说 明, 是 选 题 者 和 审 题 者 更 清 楚 地 判 定 选 题 的 合 理 性 科 学 性, 即 假 说 验 证 的 合 理 性 第 二 阶 段 : 安 排 实 验 5)experimental design 6)experimental investigation 7)accumulation of raw data 此 阶 段 是 围 绕 验 证 假 说 安 排 实 验 内 容 和 从 事 试 验 工 作, 搜 取 论 证 假 说 的 根 据, 累 计 资 料 和 数 据 10

11 第 三 阶 段 : 整 理 资 料, 完 成 论 文 8)treatment of raw data 9)statistical analysis 10)conclusions 此 阶 段 是 整 理 验 证 假 说 所 需 要 的 数 据, 通 过 分 析 综 合 归 纳 演 绎 等 逻 辑 过 程, 使 假 说 ( 论 点 ) 和 资 料 ( 论 据 ) 有 机 地 按 照 逻 辑 规 律 结 合 起 来, 完 成 具 体 论 证 过 程, 假 说 成 为 结 论 第 五 讲 医 学 研 究 的 方 法 学 核 心 内 容 Design Measurement Evaluation (DME) 一 设 计 (Design) 1. 目 的 用 较 少 的 人 力 物 力 和 时 间, 获 得 较 为 可 靠 的 结 果, 使 误 差 减 少 到 最 低 限 度, 并 对 结 果 的 误 差 大 小 做 出 准 确 的 估 计, 以 达 到 研 究 高 效 的 目 的 2. 医 学 科 研 设 计 的 内 容 (1) 科 研 目 的 和 理 论 假 说 的 确 立 (2) 确 立 研 究 设 计 方 案 (3) 研 究 对 象 的 选 择 (4) 估 算 合 适 的 样 本 量 (5) 安 全 和 正 确 的 措 施 (6) 确 定 研 究 的 观 察 指 标 和 观 察 期 限 (7) 确 定 正 确 的 资 料 分 析 方 法 (8) 严 格 的 质 量 保 证 措 施 二 测 量 (Measurement) 研 究 者 使 用 科 学 的 方 法 和 技 术 来 发 现 和 度 量 发 生 在 环 境 中 和 动 物 或 人 体 中 的 某 些 效 应 1. 医 学 研 究 中 常 用 的 测 量 指 标 (1) 疾 病 发 生 的 频 数 ( 发 病 率 患 病 率 等 ) (2) 疾 病 的 后 果 ( 死 亡 率 病 死 率 并 发 症 的 发 生 率 等 ) (3) 疾 病 的 症 状 和 体 征 (4) 疾 病 对 身 体 和 精 神 的 影 响 (5) 疾 病 预 后 的 估 计 (6) 各 种 实 验 室 数 据 的 测 量 (7) 卫 生 经 济 学 的 指 标 测 量 ( 疾 病 的 预 防 治 疗 成 本 等 ) 2. 评 价 测 量 质 量 的 标 准 : (1) 真 实 性 : 测 量 结 果 与 所 测 量 的 事 物 真 实 情 况 的 符 合 程 度 ; (2) 可 靠 性 : 重 复 测 量 结 果 的 一 致 性 a) 实 验 的 措 施 要 具 有 反 应 性 和 可 度 量 性 ; b) 测 量 方 法 要 具 有 良 好 的 敏 感 性 和 特 异 性 11

12 c) 测 量 指 标 的 判 断 标 准 和 临 床 意 义 要 明 确 三 评 价 (Evaluation) 实 验 的 意 义 及 临 床 意 义 的 评 价 1. 研 究 结 果 的 统 计 分 析 和 评 价 2. 研 究 结 果 的 经 济 学 评 价 3. 卫 生 项 目 的 综 合 评 价 第 一 节 设 计 与 观 察 一 实 验 设 计 1. 实 验 设 计 的 一 般 要 求 : 科 学 性, 严 密 性, 合 理 性, 高 效 性 2 实 验 设 计 的 原 则 随 机 原 则 : - 将 随 机 抽 样 的 样 本 应 用 随 机 分 组 的 方 法 将 研 究 对 象 分 配 到 试 验 组 或 对 照 组 中, 接 受 相 应 的 处 理 常 用 的 随 机 抽 样 方 法 如 下 : 简 单 随 机 抽 样 : 抛 硬 币 抽 签 查 随 机 数 字 表 及 计 算 器 随 机 法 等 分 层 随 机 法 : 根 据 研 究 对 象 的 特 点 为 分 层 因 素, 按 照 分 层 因 素 分 层 后 再 进 行 随 机 分 组 系 统 随 机 抽 样 : 将 所 有 研 究 对 象 按 照 设 计 要 求 的 抽 样 单 位 依 次 编 号, 先 随 机 抽 取 第 一 个 观 察 单 位, 再 依 次 按 照 一 定 的 间 隔 抽 取 其 余 的 观 察 单 位 多 级 抽 样 半 随 机 法 : 将 研 究 对 象 奇 数 和 偶 数 进 行 分 组 盲 法 原 则 : 公 开 单 盲 双 盲 三 盲 ( 研 究 者 研 究 对 象 资 料 分 析 或 报 告 员 ) 重 复 的 原 则 : 重 复 是 指 处 理 组 与 对 照 组 的 受 试 者 要 有 一 定 的 数 量, 也 就 是 样 本 含 量 大 小 问 题 重 复 最 主 要 的 作 用 是 估 计 试 验 误 差 实 验 误 差 客 观 存 在, 只 有 重 复 测 量 试 验 效 应 的 指 标, 才 能 通 过 观 测 值 的 差 异 计 算 出 试 验 误 差 大 小 设 置 重 复 的 另 一 作 用 是 降 低 试 验 误 差, 从 而 提 高 精 密 度 对 照 原 则 : 设 立 条 件 相 同 诊 断 方 法 一 致 的 一 组 对 象, 接 受 某 种 与 试 验 组 不 同 的 实 验 措 施, 目 的 是 与 试 验 组 的 结 果 进 行 比 较, 以 证 明 两 组 或 多 组 间 结 果 的 差 异 及 程 度 对 照 的 意 义 在 于 鉴 别 处 理 因 素 与 非 处 理 因 素 的 差 异, 消 除 和 减 少 实 验 误 差 (1) 同 期 随 机 对 照 : 研 究 对 象 同 时 间 同 地 点 选 择, 以 随 机 分 配 方 式 分 组 ; 可 比 性 强, 避 免 了 选 择 性 偏 倚, 结 果 更 具 说 服 力 (2) 自 身 对 照 : 对 照 与 实 验 在 同 一 受 试 对 象 进 行 (3) 历 史 性 对 照 : 将 新 的 干 预 性 措 施 的 结 果 与 过 去 的 研 究 比 较, 是 将 研 究 者 以 往 的 研 究 结 果 或 他 人 的 研 究 结 果 与 本 次 研 究 结 果 作 对 照 (4) 非 随 机 同 期 对 照 : 研 究 对 象 是 同 时 间 同 地 点, 用 非 随 机 分 配 的 方 法 分 为 试 验 组 和 对 照 组, 分 组 的 方 法 不 是 随 机 的 ; (5) 配 对 对 照 : 将 试 验 组 对 象 按 照 配 对 因 素 与 对 照 组 相 配 对 (6) 空 白 对 照 : 对 照 组 不 加 任 何 处 理 因 素 (7) 实 验 对 照 : 采 用 的 与 实 验 组 条 件 一 致 的 对 照 措 施 齐 同 原 则 : 除 处 理 因 素 外, 不 同 比 较 组 研 究 对 象 的 其 它 因 素 或 条 件 相 同, 即 组 间 有 较 好 的 可 比 性 齐 同 是 进 行 比 较 的 前 提, 没 有 齐 同 就 没 有 分 析 比 较 的 价 值 齐 同 性 * 比 较 组 间 除 接 受 的 处 理 因 素 不 同 外, 其 它 条 件 应 相 同, 保 证 组 间 的 均 衡 性 * 对 实 验 效 应 的 观 察 方 式 要 相 同, 包 括 采 用 相 同 的 仪 器 设 备 测 试 手 段 观 察 方 法 等 3 专 业 设 计 12

13 * 确 定 所 采 取 的 处 理 因 素 ; * 确 定 研 究 对 象 ; * 确 定 观 察 指 标 (1) 指 标 的 客 观 性 与 重 现 性 ; (2) 指 标 的 合 理 性, 灵 敏 性 ; (3) 选 择 指 标 的 数 目 ; (4) 选 定 的 实 验 方 法 仪 器 设 备 及 环 境 等 4 统 计 设 计 * 确 定 研 究 对 象 的 数 量 ; * 设 立 对 照 组 随 机 化 分 组 ; * 制 定 原 始 纪 录 表 ; 5 结 果 的 预 测 6. 组 织 设 计 * 进 程 的 安 排 ; * 实 验 组 人 员 确 定 和 培 训 ; * 经 费 的 预 算 科 学 实 施 二 实 验 与 观 察 1. 实 验 是 积 极 干 预 被 研 究 的 过 程, 以 暴 露 现 象 中 的 特 性, 即 人 们 根 据 研 究 的 目 的, 利 用 科 学 仪 器, 人 为 地 控 制 或 模 拟 自 然 现 象, 排 除 干 扰, 突 出 主 要 因 素, 在 有 利 的 条 件 下 研 究 与 观 察 事 物 的 内 容 联 系 2 观 察 : 观 察 是 对 自 然 或 社 会 所 发 生 的 现 象 和 过 程 进 行 有 计 划, 有 目 的 考 察 的 一 种 研 究 方 法 3 实 验 与 观 察 中 的 机 遇 问 题 机 遇 可 分 为 两 种 1) 部 分 意 外 的 情 况, 即 所 要 寻 找 的 目 标 是 明 确 的, 但 发 现 的 场 合 和 方 法 却 是 非 常 意 外 的 ; 2) 完 全 意 外 的 情 况, 即 本 来 要 追 求 的 是 某 种 预 期 的 现 象, 结 果 却 意 外 的 发 现 了 完 全 不 同 的 另 一 种 重 要 的 现 象 机 遇 对 每 一 个 人 的 效 果 是 不 同 的, 问 题 的 关 键 是 能 否 抓 住 它 认 识 它, 并 能 充 分 利 用 它 三 学 科 交 叉 意 识 各 学 科 之 间 的 相 互 渗 透 已 经 成 为 现 代 科 学 发 展 的 一 个 特 点 各 学 科 的 边 缘 区 是 研 究 不 充 分 之 地 ; 而 各 门 学 科 之 间 的 交 叉 点, 往 往 是 空 白 点 但 科 学 的 无 人 区 并 非 禁 区, 而 是 带 开 垦 的 科 学 处 女 地 这 是 在 科 研 选 题 中 应 注 意 的 第 二 节 医 学 科 学 研 究 思 维 方 式 ( 一 ) 创 造 性 思 维 的 特 点 1. 独 立 性 2. 连 续 性 3. 多 向 性 4. 跨 越 性 5. 综 合 性 ( 二 ) 直 觉 模 型 直 觉 : 指 透 过 事 物 的 感 知 一 瞬 间 做 出 的 确 定 与 评 论 的 飞 跃 性 思 维 模 型 : 指 直 觉 思 维 所 形 成 的 构 成 或 直 觉 目 的, 同 时 又 对 直 觉 中 的 错 误 进 行 纠 偏 ( 三 ) 归 纳 演 绎 13

14 归 纳 : 指 从 大 量 的 实 验 结 果 中 构 造 出 新 的 模 型, 新 的 知 识, 从 而 归 纳 出 新 的 原 理 演 绎 : 指 从 某 些 概 念, 公 理 或 法 则 出 发, 运 用 逻 辑 推 理 得 出 新 结 论 的 思 维 方 式 杨 振 宁 我 很 幸 运, 归 纳 和 演 绎 这 两 种 思 维 方 式, 使 我 受 到 了 很 好 的 训 练 ( 四 ) 想 象 验 证 想 象 是 人 脑 对 已 有 表 象 进 行 加 工 改 造 而 形 成 新 形 象 的 过 程 想 象 具 有 假 设 猜 测 幻 想 的 品 格, 它 是 形 象 思 维 的 高 级 阶 段, 超 越 与 经 验 事 实, 极 富 有 创 造 性 ( 五 ) 相 似 思 维 一 切 事 物 之 间 均 存 在 着 有 条 件 ( 相 对 ) 的 相 似 性 人 们 经 常 利 用 事 物 之 间 的 相 似 性 进 行 创 新 因 此 相 似 思 维 是 一 种 重 要 的 创 新 思 维 1. 事 物 间 相 似 性 的 表 现 形 式 (1) 哲 理 相 似 或 方 法 相 似 (2) 关 系 相 似 (3) 机 制 相 似 或 行 为 相 似 (4) 性 质 相 似 (5) 功 能 相 似 (6) 组 织 结 构 相 似 2. 事 物 相 似 的 相 对 性 (1) 层 次 性 (2) 局 部 性 (3) 条 件 性 (4) 目 的 性 3 应 用 事 物 相 似 性 的 基 本 模 式 (1) 归 纳 法 * 形 成 新 的 学 科 或 学 说 * 预 见 未 知 事 物 * 将 事 物 按 某 种 相 似 性 分 类 (2) 模 仿 法 (3) 类 比 法 ( 六 ) 求 异 思 维 又 称 为 逆 反 思 维 或 求 逆 意 识 求 异 思 维 的 特 点 在 于 : 求 疑 ; 抗 压 ; 自 变 ; 标 新 求 异 思 维 常 用 的 构 思 方 式 如 下 : 1. 反 向 构 思 2. 侧 向 构 思 3. 缺 点 逆 用 构 思 ( 七 ) 系 统 思 维 研 究 事 物 ( 特 别 是 复 杂 事 物 ) 的 要 素 构 成 及 其 相 关 制 约 关 系 其 基 本 观 点 在 于 : 1. 以 技 术 融 合 为 基 本 手 段 2. 着 眼 于 总 体 目 标 3. 以 协 调 匹 配 为 关 键 4. 以 系 统 目 标 及 其 各 要 素 的 关 联 为 前 提 创 新 力 量 不 仅 要 有 科 学 知 识, 而 科 学 知 识 加 科 学 思 想 再 加 科 学 方 法 才 等 于 创 新 力 量 一 切 科 研 创 新 活 动, 不 仅 需 要 知 识 和 经 验, 更 需 要 创 新 意 识 和 创 新 思 维 可 以 说, 创 新 思 维 是 创 新 活 动 的 基 石, 更 是 医 学 科 学 研 究 的 灵 魂 14

15 第 三 节 实 验 的 基 本 要 素 及 误 差 控 制 一 实 验 的 类 型 ㈠ 预 备 实 验 1 导 向 性 实 验 : 小 规 模 实 验, 目 的 是 对 假 说 进 行 初 步 的 检 验 2 观 测 性 实 验 : 目 的 是 搜 集 实 验 所 需 数 据, 如 均 数 变 异 程 度 组 间 差 异 程 度 等 数 据 3 筛 选 性 实 验 : 用 大 量 观 察 对 象 进 行 的 初 步 简 单 实 验 ㈡ 决 定 性 实 验 是 总 括 性 关 键 性 试 验, 用 以 检 验 假 说 的 正 确 性 ㈢ 正 式 实 验 必 须 有 明 确 的 目 的 和 良 好 的 设 计 二 实 验 设 计 1 确 定 研 究 目 标 ; 2 根 据 研 究 目 的 确 定 研 究 对 象 ; 3 根 据 研 究 目 的 提 出 研 究 的 内 容 及 技 术 路 线 4 确 定 研 究 对 象 的 数 量 ( 样 本 大 小 ) 样 本 量 的 大 小 直 接 影 响 研 究 结 果 的 可 靠 性 样 本 量 太 小 的 不 到 预 期 结 果 样 本 量 太 大, 耗 费 人 力 物 力 财 力 时 间, 甚 至 不 能 完 成 项 目 5 选 择 适 合 的 研 究 方 法 及 统 计 学 方 法 : 运 用 统 计 学 知 识 和 方 法 进 行 设 计 主 要 体 现 研 究 的 可 重 复 性 高 效 性 和 准 确 性 ; 减 少 或 排 除 误 差, 保 证 样 本 的 代 表 性 样 本 间 的 可 比 性, 实 验 结 果 的 准 确 性, 使 研 究 工 作 通 过 最 小 量 的 消 耗, 取 得 最 大 量 的 信 息, 是 科 研 工 作 可 靠 性 及 高 效 性 的 有 利 保 证 6 制 定 出 完 整 的 原 始 记 录 方 案 7 研 究 组 织 工 作 和 经 费 预 算 8 注 意 误 差 与 偏 倚 的 控 制 误 差 是 指 研 究 观 察 结 果 与 真 实 情 况 之 间 的 差 异, 即 样 本 统 计 量 与 相 应 参 数 之 间 的 差 异. ㈠ 误 差 的 产 生 与 控 制 误 差 产 生 原 因 : 1. 抽 样 误 差 : 又 称 随 机 误 差, 是 由 个 体 差 异 所 造 成 解 决 方 式 (1) 增 加 样 本 量 (2) 严 格 按 要 求 进 行 试 验 设 计 2. 过 失 误 差 : 是 研 究 操 作 过 程 中 研 究 者 的 偶 然 错 误 所 造 成 3. 系 统 误 差 : 研 究 中 由 于 所 用 仪 器 不 准 或 试 剂 不 精 而 造 成 ( 二 ) 偏 倚 的 产 生 与 控 制 偏 倚 指 在 研 究 或 推 论 过 程 中 所 获 得 的 结 果 系 统 地 偏 离 真 实 值 是 在 研 究 设 计 阶 段, 实 施 阶 段, 由 于 某 种 或 某 些 因 素 的 影 响, 使 得 研 究 或 推 论 的 结 果 与 真 实 情 况 存 在 系 统 差 异, 产 生 原 因 包 括 : 1. 选 择 偏 倚 由 于 选 择 研 究 对 象 的 方 法 存 在 问 题 或 缺 点 而 使 研 究 结 果 偏 离 真 实 的 情 况 例 如 样 本 不 能 代 表 总 体 ; 研 究 入 选 者 与 未 入 选 者 的 某 些 特 征 有 系 统 差 别 ; 比 较 组 间 条 件 不 齐 同 等 2. 信 息 偏 倚 ( 观 察 偏 倚 ) 系 指 在 收 集 资 料 过 程 中, 由 于 各 比 较 组 之 间 测 量 方 法 或 指 标 观 察 的 方 法 不 可 比 而 导 致 研 究 15

16 结 果 与 真 实 情 况 的 差 异 产 生 的 原 因 主 要 有 研 究 者 主 观 认 识 原 因 被 研 究 者 心 理 因 素 的 影 响 不 同 时 间 地 点 场 合 不 同 的 人 员 开 展 的 研 究 工 作 可 能 会 产 生 一 些 误 差, 在 做 临 床 研 究 工 作 中, 研 究 者 对 被 研 究 者 进 行 暗 示 三 实 验 设 计 三 要 素 ( 一 ) 受 试 对 象 : 指 被 实 验 的 客 体, 要 符 合 试 验 目 的 1. 基 本 条 件 ⑴ 敏 感 性 : 即 受 试 对 象 对 被 施 加 的 处 理 因 素 应 有 较 高 的 敏 感 性, 容 易 显 示 效 应 ⑵ 特 异 性 : 即 受 试 对 象 对 被 施 加 的 处 理 因 素 应 有 较 强 的 特 异 性, 排 除 非 处 理 因 素 干 扰 ⑶ 稳 定 性 : 即 受 试 对 象 对 被 施 加 的 处 理 因 素 的 反 应 有 较 大 的 稳 定 性, 减 少 误 差 ⑷ 经 济 性 : 指 受 试 对 象 容 易 找 到, 费 用 低 2. 特 殊 条 件 ⑴ 动 物 : 必 须 为 纯 种 健 康 等 * 实 验 动 物 的 种 类 : 大 白 鼠 小 白 鼠 兔 豚 鼠 狗 蛙 猴 牛 羊 等 * 实 验 动 物 的 品 系 * 实 验 动 物 的 个 体 条 件 ⑵ 人 体 : 患 者 必 须 为 无 合 并 症 ( 同 质 性 ) 1 一 般 条 件 : 种 族 居 住 地 区 的 外 环 境 性 别 年 龄 嗜 好 生 活 习 惯 等 2 社 会 因 素 : 职 业 居 住 条 件 家 庭 情 况 心 理 状 况 等 3 疾 病 因 素 : 病 种 病 型 病 期 病 程 病 情 诊 断 方 法 诊 断 标 准 等 ⑶ 生 物 材 料 离 体 器 官 组 织 细 胞 部 位 采 集 条 件 新 鲜 程 度 保 存 方 法 及 培 养 条 件 等 ( 二 ) 处 理 因 素 外 加 于 受 试 对 象 上 在 实 验 中 需 要 观 察 并 阐 明 其 处 理 效 应 的 因 素 包 括 物 理 因 素 化 学 因 素 及 生 物 因 素 (1) 处 理 因 素 的 数 目 与 水 平 处 理 因 素 可 为 单 因 素 或 多 因 素 (2) 处 理 因 素 的 标 准 化 (3) 搜 索 非 处 理 因 素, 并 加 以 控 制 Attention 1 抓 住 主 要 矛 盾 : 选 择 能 反 映 假 说 的 主 要 处 理 因 素 和 恰 当 的 水 平 2 注 意 处 理 因 素 间 的 相 互 作 用 3 注 意 因 素 的 强 度 4 注 意 区 别 处 理 因 素 和 非 处 理 因 素 5 处 理 因 素 要 标 准 化 Attention 1 要 明 确 采 用 的 具 体 检 测 方 法 原 理 及 特 点, 操 作 规 程 2 仪 器 的 名 称 产 地 型 号 规 格 性 能 精 密 度 都 应 明 确, 并 制 定 标 准, 使 用 及 维 修 常 规 3 根 据 课 题 的 性 质 和 目 的 要 求, 明 确 观 察 的 时 间 ( 三 ) 实 验 效 应 : 是 处 理 因 素 作 用 于 受 试 对 象 的 反 应, 是 研 究 结 果 的 最 终 体 现, 也 是 实 验 研 究 的 核 心 内 容, 它 通 过 实 验 指 标 来 表 达, 如 果 指 标 选 择 不 当, 为 能 准 确 地 反 映 出 利 因 素 的 作 用, 获 得 的 研 究 结 果 就 缺 乏 科 学 性 选 择 好 实 验 指 标 是 关 系 研 究 成 败 的 重 要 环 节 选 择 指 标 的 依 据 如 下 16

17 1. 关 联 性 所 选 指 标 应 与 研 究 目 的 有 着 本 质 的 密 切 的 联 系, 能 够 确 切 地 反 映 处 理 因 素 的 效 应, 可 通 过 查 阅 文 献 资 料 或 理 论 推 导 来 确 定 指 标 的 有 效 性, 也 可 通 过 预 备 实 验 或 用 标 准 阳 性 对 照 来 验 证 其 有 效 性 2 客 观 性 是 借 助 检 查 检 验 方 法 等 手 段 所 观 测 记 录 的 指 标 及 检 验 数 据 等 3 灵 敏 性 所 选 指 标 对 处 理 因 素 所 产 生 的 效 应 具 有 敏 感 性 应 选 择 敏 感 程 度 高 的 指 标, 以 使 实 验 效 应 能 够 充 分 地 显 示 出 来 4 精 确 性 指 标 的 准 确 度 和 精 密 度 准 确 度 是 指 观 察 结 果 的 真 实 程 度 ; 精 密 度 是 指 观 察 结 果 的 广 度 与 深 度 5 稳 定 性 指 标 的 变 异 程 度 在 设 计 时 要 注 意 选 择 稳 定 性 好 的 指 标 6 特 异 性 指 标 的 排 它 性 特 异 性 高 的 指 标, 易 于 揭 示 出 事 物 的 本 质 特 点 而 不 易 受 其 他 因 素 的 干 扰 在 实 验 设 计 时, 应 注 意 选 择 特 异 性 强 的 指 标 第 六 讲 医 学 论 文 撰 写 医 学 论 文 是 以 医 学 科 学 及 与 之 有 关 的 现 代 科 学 知 识 为 理 论 指 导, 经 过 科 研 设 计, 实 验 与 临 床 观 察 或 现 场 调 查 后, 将 所 得 的 第 一 性 的 感 性 资 料 经 过 归 纳 分 析, 统 计 处 理 等 一 系 列 的 思 维 活 动 后 写 成 的 具 有 一 定 先 进 性 的 文 章 ; 或 者 在 第 一 性 资 料 的 基 础 上, 运 用 第 二 性 资 料 综 合 而 成 的 文 章 医 学 论 文 是 科 技 论 文 组 成 部 分, 因 其 种 类 不 同, 在 写 作 的 目 的 内 容 及 表 达 形 式 上 也 各 有 不 同, 虽 互 有 差 别, 但 它 们 的 要 求 却 是 共 同 的 作 者 在 撰 写 时 必 须 坚 持 严 肃 的 态 度 严 谨 的 学 风 严 密 的 方 法, 遵 循 其 基 本 原 则 进 行 第 一 节 医 学 论 文 撰 写 的 基 本 原 则 一 创 新 性 创 是 创 造 创 见, 指 论 文 报 道 的 主 要 内 容 是 前 人 未 发 表 过 的, 其 研 究 成 果 是 他 人 没 有 做 过 的 新 发 现 新 理 论 新 方 法 新 工 艺 等 所 谓 新 是 指 论 文 提 供 的 信 息 是 鲜 为 人 知 的 新 颖 的 非 公 知 公 用 的, 即 使 是 在 他 人 研 究 的 基 础 上, 也 应 仿 中 有 创, 仿 中 有 新, 有 所 发 现, 有 所 改 进, 推 陈 出 新, 有 新 意, 有 自 己 的 独 到 之 处, 不 能 步 人 后 尘, 低 水 平 地 重 复 二 科 学 性 是 医 学 论 文 的 核 心, 是 衡 量 医 学 论 文 水 平 的 重 要 条 件, 是 首 要 条 件 1 真 实 性, 就 是 尊 重 客 观 事 实 取 材 确 凿 可 靠, 实 验 设 计 合 理, 方 法 先 进 正 确, 研 究 结 果 忠 实 于 事 实 和 原 始 资 料, 讨 论 的 论 点 论 据 真 实 有 据 2 准 确 性, 论 文 要 客 观 准 确 地 反 映 研 究 结 果 的 真 实 情 况 3 逻 辑 性, 就 是 用 科 学 的 逻 辑 思 维 方 式 将 经 过 实 验 或 临 床 观 察 收 集 到 的 感 性 材 料 经 过 分 析 综 合 概 括 和 推 理, 来 论 证 和 阐 明 现 象 的 本 质 4 重 复 性, 亦 称 为 再 现 性 如 果 他 人 采 用 同 样 的 实 验 方 法 不 能 重 复 得 出 所 报 道 的 研 究 成 果, 则 该 论 文 既 无 科 学 性, 也 无 实 践 性, 没 有 任 何 应 用 价 值 17

18 三 实 用 性 即 实 践 性 : 指 论 文 的 实 用 价 值, 是 论 文 的 基 础 四 可 读 性 : 论 文 发 表 是 为 了 传 播 交 流 或 为 了 储 存 新 的 医 学 科 技 信 息, 以 便 为 读 者 或 后 人 所 利 用 五 规 范 性 ( 一 ) 前 导 部 分 : 题 目 (title ); 作 者 署 名 和 地 址 ; 摘 要 (summary ); 关 键 词 (key words) ( 二 ) 主 题 部 分 : 前 言 (introduction ); 材 料 与 方 法 (materials and methods ) ; 结 果 ( results ); 讨 论 (discussion ) ; 结 论 (conclusion ) ; 致 谢 (thanks ) ; 参 考 文 献 (references ) ( 三 ) 附 属 部 分 图 (chart ) ; 表 (table ) ; 照 片 (photoshop) 第 二 节 医 学 论 文 的 分 类 一 般 按 论 文 资 料 来 源 写 作 目 的 医 学 学 科 及 课 题 性 质 研 究 内 容 及 资 料 内 容 论 述 体 裁 等 进 行 分 类 一 按 论 文 资 料 来 源 分 类 ( 一 ) 原 著 : 是 根 据 具 体 选 题 所 进 行 的 调 查 研 究 实 验 研 究 临 床 研 究 及 临 床 工 作 经 验 的 总 结 ( 二 ) 编 著 : 其 内 容 主 要 来 自 己 发 表 的 资 料, 即 以 间 接 资 料 为 主, 属 于 第 三 次 文 献 二 按 论 文 写 作 目 的 分 类 ( 一 ) 学 术 论 文 是 对 医 学 科 学 领 域 中 的 问 题 进 行 总 结 研 究 探 讨, 表 述 医 学 科 学 研 究 的 成 果, 理 论 性 的 突 破, 科 学 实 验 或 技 术 开 发 中 取 得 新 成 就 的 文 字 总 结, 作 为 信 息 进 行 交 流 ( 二 ) 学 位 论 文 是 学 位 申 请 者 为 申 请 学 位 而 提 出 的 供 评 审 其 科 研 水 平 的 学 术 论 文, 是 考 核 申 请 者 能 否 被 授 予 学 位 的 重 要 依 据 和 必 备 条 件 三 按 医 学 学 科 及 课 题 的 性 质 分 类 ( 一 ) 基 础 医 学 论 文 : 包 括 实 验 研 究 和 现 场 调 查 等, 少 数 属 于 技 术 交 流 范 围, 即 介 绍 实 验 技 术, 有 关 仪 器 的 设 计 制 造 及 使 用 等 ( 二 ) 临 床 医 学 论 文 : 多 为 应 用 研 究, 可 分 为 诊 断 治 疗 护 理 等 方 面, 有 理 论 研 究 和 技 术 报 告 ( 三 ) 预 防 医 学 论 文 : 多 为 应 用 研 究 范 畴, 可 分 为 卫 生 保 健 防 疫 流 行 病 学 调 查 等 ( 四 ) 康 复 医 学 论 文 ( 恢 复 健 康 所 应 有 的 功 能 称 为 康 复 医 学 ) 它 包 括 了 基 础 医 学 临 床 医 学 的 内 容, 还 有 各 种 恢 复 功 能 的 疗 法 四 按 论 文 的 研 究 内 容 及 资 料 内 容 分 类 ( 一 ) 实 验 研 究 ( 二 ) 调 查 研 究 ( 三 ) 实 验 观 察 ( 四 ) 资 料 分 析 ( 五 ) 经 验 体 会 五 按 论 文 的 论 述 体 裁 分 为 : 论 著 经 验 交 流 技 术 方 法 与 技 术 革 新 文 献 综 术 等 一 写 作 素 材 的 获 取 ㈠ 认 真 选 题 第 三 节 医 学 论 文 写 作 步 骤 与 方 法 18

19 ㈡ 重 视 查 新 查 新 的 目 的 和 意 义 : 决 定 选 题, 了 解 历 史 现 状 动 向, 解 决 实 际 问 题, 衡 量 论 文 的 价 值 确 立 查 新 的 时 限 范 围 ㈢ 严 密 设 计 ㈣ 合 理 组 材 二 写 作 前 的 准 备 ( 一 ) 原 始 资 料 的 处 理 1 原 始 资 料 的 整 理 : 注 意 保 存 那 些 能 够 阐 明 证 实 研 究 设 计 提 出 的 假 说 或 观 点 的 部 分 ( 系 统 化 条 理 化 ) (1) 数 据 的 检 查 : 方 法 :1 逻 辑 检 查 法 ;2 计 算 检 查 法 (2) 数 据 的 分 组 分 组 法 : * 质 量 分 组 : 按 研 究 对 象 的 特 征 的 类 别 ( 性 质 ) 进 行 分 组 ( 性 别 职 业 疾 病 分 类 等 ); * 数 量 分 组 : 按 研 究 对 象 的 特 征 的 数 量 大 小 进 行 分 组 ( 年 龄 大 小 血 压 高 低 ) * 等 级 分 组 : 将 研 究 对 象 按 某 种 属 性 的 不 同 程 度 分 组 如 用 某 药 治 疗 若 干 痢 疾 病 人, 按 治 愈 好 转 无 效 进 行 分 组 分 组 时 应 注 意 的 问 题 * 分 组 只 能 在 同 质 的 基 础 上 进 行 * 进 行 数 量 分 组 时, 当 尚 不 了 解 被 研 究 对 象 的 变 化 规 律 时, 宁 可 先 分 细 一 些 * 分 组 时 应 尽 量 注 意 科 研 的 习 惯 性 * 数 量 分 组 的 界 限 要 清 楚 2 原 始 资 料 的 组 织 ⑴ 材 料 的 取 舍 * 实 验 结 果 获 得 了 预 期 效 果, 能 够 说 明 原 来 的 假 说, 为 获 取 资 料 * 实 验 结 果 基 本 上 完 成 了 假 说 中 的 项 目 和 指 标, 但 不 够 完 整 充 分 ; * 实 验 结 果 基 本 上 不 能 完 成 原 来 的 假 说, 甚 至 出 现 了 预 料 不 到 的 现 象 问 题 * 设 计 是 否 考 虑 周 全 ; * 实 验 方 法 是 否 妥 当 * 数 据 资 料 是 否 可 靠 * 补 充 试 验 解 决 * 修 正 结 论 ⑵ 注 意 对 材 料 的 深 化 及 材 料 的 表 达 方 法 ⑶ 材 料 的 层 次 以 围 绕 论 文 的 主 题, 有 层 次 地 安 排 在 论 文 的 各 部 分, 使 各 部 分 内 容 之 间 保 持 内 在 的 联 系, 由 浅 入 深, 由 非 特 异 性 到 特 异 性, 以 揭 示 事 物 的 客 观 规 律 例 如 : 文 : 电 动 工 具 工 人 手 部 骨 与 关 节 改 等 的 动 态 观 察 作 者 按 以 下 四 个 层 次 加 以 组 织 假 说 : 受 振 局 部 发 生 神 经 血 管 损 伤 第 一 层 : 自 觉 症 状 ; 第 二 层 : 受 振 工 人 的 各 种 感 觉 ; 第 三 层 : 手 部 冷 水 试 验 ; 第 四 层 : 受 振 工 人 手 外 刑 和 骨 质 ; 19

20 ( 二 ) 拟 订 提 纲 ( 三 ) 拟 定 论 文 题 目 : 命 题 时 应 考 虑 以 下 几 点 : (1) 题 目 应 反 映 研 究 成 果 的 深 度 和 广 度 : 论 文 题 目 铅 中 毒 的 实 验 初 步 观 察 铅 中 毒 与 肾 功 能 的 探 讨 修 正 后 : 铅 中 毒 对 大 白 鼠 肾 小 管 滤 过 功 能 的 影 响 (2) 题 目 应 当 体 现 提 出 的 假 说 如 : 空 腹 急 性 滑 动 平 滑 运 动 对 糖 尿 病 患 者 代 谢 的 影 响 假 说 : 空 腹 运 动 对 不 同 类 型 糖 尿 病 患 者 代 谢 有 不 同 的 影 响 (3) 实 验 性 研 究 时, 应 将 实 验 的 三 个 基 本 要 素 ( 处 理 因 素 实 验 对 象 实 验 效 应 ) 都 包 含 在 论 文 的 题 目 中 例 如 铅 对 大 白 鼠 肝 肾 组 织 病 理 学 的 影 响 (4) 题 目 应 当 用 限 定 词 指 示 出 研 究 的 性 质 ( 研 究 实 验 调 查 报 告 分 析 讨 论 作 用 影 响 关 系 等 ) (5) 题 目 的 文 字 最 好 在 20 个 汉 字 以 内, 并 与 英 文 题 目 应 当 一 致 例 : 3 种 产 生 乙 型 肝 炎 病 毒 的 裸 鼠 移 植 瘤 模 型 比 较 Study on nude mice loading transplanted tumor producing HBV 修 正 后 Comparison of three models of nude mice loading transplanted tumor producing HBV ( 四 ) 论 文 构 思 : 1 考 虑 三 方 面 : (1) 文 章 从 何 处 说 起 才 能 够 最 切 题 和 最 有 吸 引 力 ; (2) 阐 述 推 理 或 反 驳 等 论 证 的 实 质 性 问 题 如 何 穿 插 展 开 才 能 全 面 准 确 简 明 地 说 明 问 题 和 最 具 有 说 明 力 ; (3) 文 章 在 何 处 以 何 种 方 式 的 语 言 表 达 最 为 适 宜 2 拟 定 提 纲 : 提 纲 是 论 文 的 骨 架 提 纲 分 标 题 式 和 提 要 式 二 种 标 题 式 题 纲 用 名 词 或 短 语 标 出 每 一 段 的 内 容 要 点 ; 提 要 式 提 纲 则 把 标 题 或 提 纲 中 每 一 内 容 的 要 点 展 开, 对 论 文 全 部 内 容 作 粗 线 条 的 描 述 拟 定 提 纲 时 注 意 的 问 题 (1) 论 文 以 何 种 形 式 发 表, 准 备 投 送 何 种 期 刊, 该 刊 的 发 行 范 围, 读 者 对 象 是 什 么 (2) 明 确 主 题, 包 括 问 题 的 提 出 和 课 题 的 意 义, 避 免 让 人 读 后 抓 不 住 重 点 (3) 在 他 人 研 究 成 果 的 基 础 上, 或 应 用 他 人 的 实 验 结 果 时, 处 理 好 二 者 的 关 系, 不 要 使 读 者 产 生 相 互 混 淆 甚 至 互 换 的 错 误 (4) 数 据 推 导 的 结 果 或 结 论 必 须 正 确, 在 理 论 分 析 过 程 时, 不 应 出 现 前 后 矛 盾 或 牵 强 附 会 之 处 (5) 明 确 结 论 ( 或 结 果 ) 的 应 用 范 围 和 前 题, 正 确 自 处 理 好 它 们 之 间 的 相 互 关 系 (6) 论 文 的 内 容, 格 式 及 表 现 手 法 应 充 分 表 达 写 作 目 的, 围 绕 主 题 展 开 (7) 要 注 意 论 文 发 表 的 礼 节 第 四 节 医 学 论 文 撰 写 格 式 一 医 学 论 文 的 书 写 格 式, 分 三 个 主 要 部 分 : (1) 前 置 部 分 : 文 题 作 者 单 位 署 名 内 容 摘 要 关 键 题 (2) 主 体 部 分 : 前 言 材 料 与 方 法 结 果 讨 论 结 论 致 谢 参 考 文 献 外 文 摘 要 (3) 附 录 部 分 : 图 表 照 片 作 者 附 言 等 撰 写 要 术 : 20

21 (1) 熟 悉 与 写 作 主 题 有 关 的 理 论 和 基 本 概 念 ; (2) 论 点 鲜 明, 论 据 充 分, 论 证 有 力 (3) 说 理 为 主, 举 例 说 明 的 内 容 仅 是 旁 证 的 衬 托, 应 点 到 为 止, 不 可 长 篇 大 论 (4) 逻 辑 严 密, 层 次 分 明 二 论 著 撰 写 的 基 本 格 式 ㈠ 文 题 : 一 般 包 含 研 究 对 象, 论 文 所 解 决 的 问 题 及 其 贡 献 所 在 1 确 切, 即 准 确 而 贴 切 2 简 洁, 文 题 要 言 简 意 赅 地 概 括 全 文, 突 出 主 题, 具 备 检 索 性 3 醒 目 要 求 :(1) 新 颖 醒 目 (2) 具 体 确 切 (3) 简 短 精 炼 (4) 准 确 而 得 体 例 : 低 密 度 脂 蛋 白 受 体 活 性 检 测 新 方 法 注 意 : (1) 不 用 非 公 知 公 用 的 缩 略 词, 缩 写 字 符 号 代 号 公 式 等 ; (2) 避 免 用 疑 问 句 主 谓 宾 结 构 的 完 全 句, 以 及 宣 传 鼓 动 方 式 的 状 语 ; (3) 忌 冗 长 繁 杂 笼 统 夸 张 不 切 题 或 含 义 不 清 ; (4) 外 文 题 名, 不 超 过 10 个 实 词 ; (5) 一 般 不 加 标 点 符 号 副 题 : 用 于 补 充, 完 善 论 文 中 的 特 定 内 容 (1) 题 名 语 意 未 尽 (2) 研 究 报 告 论 文 分 册 ( 题 ) 出 版 (3) 其 它, 如 引 伸 说 明 等 ㈡ 作 者 及 单 位 署 名 要 求 :(1) 是 论 文 课 题 的 创 意 者, 设 计 者 和 实 施 者, 是 论 文 的 执 笔 者, 并 能 对 关 键 性 的 学 术 问 题 作 解 释 和 答 辩 (2) 按 贡 献 大 小, 工 作 主 次, 多 寡 依 次 排 名 (3) 署 真 名 全 名, 不 署 笔 名 (4) 学 术 论 文 署 名 应 实 际 求 是 地 论 功 署 名 (5) 切 忌 争 署 名, 争 名 次 注 意 : 署 名 不 宜 过 多 ㈢ 内 容 摘 要 (abstract ) 是 对 论 文 内 容 的 高 度 概 括, 是 不 加 注 释 或 评 论 的 简 短 陈 述, 起 到 画 龙 点 睛 的 作 用 ) 1 要 求 : (1) 精 炼 确 切 地 反 映 原 稿 的 精 华 要 点, 突 出 创 新 和 主 要 发 现 (2) 有 数 据 有 结 论, 是 一 篇 完 整 的 短 文, 可 独 立 使 用, 可 引 用 推 广 (3) 撰 写 应 规 范, 内 容 包 括 : 研 究 目 的 基 本 方 法 和 步 骤 主 要 结 果 和 重 要 发 现 主 要 结 论 主 要 经 验 教 训 和 应 用 价 值 (4) 简 明 扼 要, 高 度 概 括 全 文 主 要 内 容 (5) 用 电 报 体 裁 书 写 ( 即 第 三 人 称 ), 不 分 段 每 个 字 每 段 话 多 都 提 供 信 息 对. 进 行 了 研 究 报 告 了. 现 状 (6) 其 它 : 缩 略 语 略 称 代 号 在 首 次 出 现 处 必 须 加 以 说 明 ; 论 著 经 验 交 流 综 述 21

22 等 长 篇 文 稿 应 写 摘 要 ; 病 例 报 告 短 篇 报 道 等 不 写 摘 要 ( 对 论 文 内 容 的 高 度 概 括, 是 不 加 注 释 或 评 论 的 简 短 陈 述, 起 到 画 龙 点 睛 的 作 用 ) 2 一 般 原 则 : 基 础 医 学 临 床 医 学 论 著 和 重 要 论 文, 字 数 在 3000 字 以 上, 要 有 摘 要 以 第 三 人 称 形 式 写 作 3 摘 要 字 数 :200 字 左 右 4 基 本 内 容 : ⑴ 研 究 的 目 的 ; ⑵ 基 本 步 骤 ( 包 括 研 究 对 象, 实 验 动 物, 观 察 及 分 析 方 法 ); ⑶ 主 要 发 现 ( 包 括 重 要 数 据 及 统 计 学 意 义 ); ⑷ 主 要 结 论 文 慢 性 肾 盂 肾 炎 与 叵 细 胞 病 毒 感 染 关 系 摘 要 : 目 的 探 讨 叵 细 胞 病 毒 (CMV) 感 染 与 慢 性 肾 盂 肾 炎 发 病 的 关 系 方 法 应 用 免 疫 斑 点 法 检 测 慢 性 肾 盂 肾 炎 患 者 尿 液 中 CMV, 酶 免 疫 吸 附 试 验 抗 测 患 者 血 清 中 CMV 抗 体 结 果 68 例 慢 性 盂 肾 炎 患 者 中 36 例 尿 液 CMV 抗 原 检 测 阳 性 (53%);39 例 血 清 CMV 抗 体 阳 性 (57%);50 名 健 康 对 照 尿 液 CMV 抗 原 阳 性 4 例 (8%), 血 清 CMV 抗 体 阳 性 7 例 (14%), = 组 相 比 较, 差 异 有 非 常 显 著 意 义 (P<0.01) 结 论 提 示 CMV 感 染 可 能 是 肾 盂 肾 炎 病 因 中 的 一 个 重 要 因 素 5 英 文 摘 要 ⑴ 包 含 的 内 容 : 目 的 方 法 结 果 和 结 论 四 部 分 ⑵ 中 英 文 摘 要 的 一 致 性 ⑶ 选 择 适 当 的 时 态 和 语 态 1 时 态 : 叙 述 研 究 过 程, 多 采 用 一 般 过 去 时 ; 采 用 一 般 过 去 时 叙 述 研 究 过 程 中 提 及 在 此 过 程 之 前 发 生 的 事, 宜 采 用 过 去 完 成 时 ; 说 明 某 课 题 现 已 取 得 的 成 果, 宜 采 用 现 在 完 成 时 ;4 摘 要 开 头 表 示 本 文 所 报 告 或 描 述 的 内 容, 以 及 摘 要 结 尾 表 示 作 者 所 认 为 的 观 点 建 议 的 做 法 时, 可 采 用 一 般 现 在 时 2 语 态 : 多 数 情 况 下 可 采 用 被 动 语 态 The authors developed a new diagnostic nethod for syphilis. A new diagnostic method for syphilis was developed. The experts consider the drug has an excellent therapeutic effect for tonsilitis. The drug is considered to have an excellent therapeutic effect for tonsilitis by the experts. ( 四 ) 掌 握 一 定 的 遣 词 造 句 技 巧 1 用 词 : 简 单, 尽 量 用 短 词 代 替 长 词, 如 study 代 替 research, investigation 方 法 的 描 述 以 及 步 骤 的 描 述 以 用 狭 义 词 代 替 广 义 词 2 造 句 : 常 用 句 型 1 表 示 研 究 的 目 的, 常 用 在 摘 要 之 首 ; In order to This paper describes The purpose of this study is 2 表 示 研 究 的 对 象 与 方 法 curative effect drug observed The sensitivity of Kit was detected function certain organ studied 22

23 (by certain method or under certain conditions) 3 表 示 研 究 结 果 The result showed It proved that The authors found 3 尽 量 采 用 ing 分 词 和 ed 分 词 作 定 语, 少 用 关 系 代 词 which,who 等 引 导 的 定 语 从 句 A cell strain which could secrete McBbs was esablished. A cell strain secreting Mc Abs was estabilished. The titer of the virus which had been cultured in Vero cells for 24 hours was detected. The titer of the virus cultured in Vero cells for 24 hours was detected. 1 关 键 词 用 以 表 示 全 文 主 题 内 容 信 息, 是 论 文 的 信 息 点 和 检 索 点, 一 般 为 2--5 个 从 文 稿 内 容 中 提 炼 出 最 能 反 映 文 稿 的 主 要 内 容 的 名 词 词 组 或 短 语, 并 最 能 说 明 全 文 含 义 能 正 确 反 映 论 文 的 关 键 内 容 尽 量 使 用 美 国 美 国 国 立 医 学 图 书 馆 编 辑 的 Index Medicus 中 医 学 主 题 词 表 MeSH 内 所 列 的 词 关 键 词 的 排 位 : 前 言 之 前 用 原 词 而 不 用 缩 略 词 通 常 不 选 用 冠 词 介 词 连 词 代 词 情 态 动 词, 以 及 无 检 索 意 义 的 副 词 形 容 词 2 前 言 ( 引 言 导 言 绪 言 序 言 ) 简 明 扼 要 的 介 绍 研 究 工 作 的 来 龙 去 脉 及 课 题 的 概 况 价 值 和 意 义 开 门 见 山 的 交 待 * 研 究 目 的 范 围 和 主 要 收 获 ;* 历 史 背 景 及 国 内 外 现 状 ;* 本 研 究 的 设 想 方 法 理 论 根 据 预 期 结 果 和 意 义 不 涉 及 研 究 中 的 数 据 或 结 论, 减 少 与 正 文 及 提 要 的 重 复 评 价 论 文 的 价 值 要 恰 如 其 分 实 事 求 是 3 材 料 与 方 法 临 床 研 究 : 病 例 来 源 及 选 择 标 准, 诊 断 及 分 型 标 准 ; 一 般 资 料 ( 例 数 性 别 年 龄 职 业 病 程 病 因 病 理 诊 断 依 据 观 察 方 法 与 指 标 等 ); 药 物 剂 量 剂 型 等 实 验 研 究 : 实 验 条 件, 包 括 动 物 名 称 种 类 数 量 来 源 性 别 体 重 分 组 标 准 与 方 法 标 本 制 备 过 程, 试 验 与 记 录 手 段 方 法 ; 引 用 方 法 要 注 明 文 献 出 处 ; 已 公 知 公 用 的, 只 写 明 方 法 名 称 一 般 实 验 研 究 用 材 料 与 方 法, 调 查 研 究 用 对 象 与 方 法, 临 床 实 验 用 病 例 与 方 法 等 材 料 中 所 用 的 试 剂 生 产 厂 家 仪 器 规 格 与 型 号 研 究 对 象 实 验 观 察 统 计 方 法 等 要 交 待 清 楚 4 避 免 重 复 介 绍 陈 旧 过 时 的 方 法 及 无 关 材 料 1 介 绍 材 料 和 方 法 的 意 义 全 面 评 价 样 本 的 代 表 性 : 样 本 是 如 何 选 取, 对 象 是 否 按 已 确 定 的 选 择 标 准 进 行 收 集, 是 否 做 到 尽 量 典 型, 是 否 应 遵 循 随 机 化 原 则 分 组 了 解 样 本 的 组 间 均 衡 性 :( 比 较 是 科 研 方 法 中 的 重 要 手 段 ), 应 遵 循 齐 同 对 比 的 原 则 研 究 指 标 的 精 确 性 2 材 料 与 方 法 中 的 主 要 问 题 23

24 基 础 研 究 类 论 文 : 动 物 模 型 形 成 过 程 介 绍 不 清 ; 实 验 步 骤 介 绍 不 详 细 ; 涉 及 多 种 方 法 的 实 验 研 究, 各 种 方 法 介 绍 详 略 不 一 临 床 研 究 类 论 文 : 缺 少 对 象 的 选 择 标 准 ; 未 给 出 诊 断 标 准 ; 治 疗 方 法 中 药 物 剂 量 介 绍 不 详 ; 缺 少 观 察 指 标 的 描 ; 随 机 分 组 情 况 说 明 不 具 体 5 结 果 是 作 者 调 查 观 察 或 实 验 研 究 结 果 的 结 晶, 是 论 文 的 核 心 部 分, 全 文 的 结 论 由 此 得 出, 讨 论 由 此 引 发 结 果 是 结 论 的 依 据, 反 映 论 文 水 平 的 高 低 及 价 值 1 认 真 分 析 原 始 数 据, 数 据 表 达 要 完 整, 从 中 揭 示 某 些 自 然 规 律 2 根 据 内 容 的 要 求 结 合 图 表 文 字 的 特 点, 有 选 择 性 地 按 逻 辑 顺 序 在 图 表 中 描 述 研 究 结 果 3 如 实 反 映 科 研 假 说 中 所 设 计 的 主 要 指 标 研 究 结 果 中, 只 要 是 真 实 的 结 果, 都 不 可 随 意 摒 弃 4 列 表 : 重 点 突 出 内 容 精 练 栏 目 清 楚, 数 字 准 确 ; 数 字 不 多 栏 目 过 繁 文 字 过 多 均 不 宜 列 表 ; 表 文 图 内 容 避 免 重 复 ; 列 表 均 应 有 表 序 表 题 ; 栏 目 分 项 层 次 要 简 明, 主 项 ( 主 语 项 固 定 项 ) 直 左 排, 辅 项 ( 谓 语 项 活 动 项 ) 横 上 排 ; 以 数 字 为 主, 文 字 从 简, 计 量 单 位 一 致 5 统 计 学 处 理 要 真 实 可 靠 6 讨 论 论 文 的 精 华 部 分, 是 对 研 究 结 果 的 科 学 解 释 与 评 价 是 作 者 对 实 验 观 察 结 果 的 思 考 理 论 分 析 和 科 学 推 论, 阐 明 事 物 间 的 内 部 联 系 与 发 展 规 律, 揭 示 研 究 结 果 在 理 论 与 实 践 中 的 意 义, 是 作 者 学 术 思 想 的 展 示, 论 文 水 平 的 显 示 ( 反 映 了 作 者 的 理 论 思 维 学 术 素 养 知 识 的 深 度 与 广 度 专 业 写 作 技 巧 ) 1 围 绕 研 究 目 的 突 出 主 题 抓 住 重 点 阐 明 研 究 结 果 及 其 结 论 的 理 论 意 义 指 导 作 用 和 实 践 意 义 2 着 重 讨 论 研 究 中 新 的 和 重 要 的 发 现, 并 从 中 得 出 结 论 3 与 国 内 外 同 类 研 究 比 较, 突 出 研 究 的 创 新 与 先 进 之 处, 提 出 作 者 的 观 点 与 见 解 4 实 事 求 是 地 对 研 究 的 限 度 缺 点 疑 点 等 加 以 分 析 和 解 释 ( 因 果 关 系 偶 然 性 与 必 然 性 5 展 示 有 待 解 决 的 问 题 怎 样 写 讨 论 1 讨 论 的 内 容 : 紧 密 结 合 文 中 研 究 所 获 得 的 重 要 发 现, 以 及 从 中 引 出 的 结 论 进 行 讨 论 要 尽 可 能 地 将 本 文 的 结 果 提 高 到 理 论 水 平 来 认 识, 一 要 有 事 实, 二 要 有 理 论, 应 理 论 与 实 践 结 合 讲 明 实 验 条 件, 尤 其 是 未 控 制 的 部 分, 未 解 决 的 问 题, 缺 点 更 应 当 说 明 结 合 文 献 阐 明 自 己 的 结 果 与 他 人 的 结 果 之 异 同, 突 出 自 己 的 新 发 现 新 发 明 新 创 造 新 观 点 讲 述 因 果 关 系, 说 明 偶 然 性 与 必 然 性, 以 及 本 文 的 理 论 意 义 和 实 用 价 值 介 绍 尚 未 定 论 之 处, 相 反 的 结 论, 以 及 本 文 不 足 之 处 提 出 进 一 步 研 究 的 方 向 展 望 建 议 和 设 想 2 讨 论 的 禁 忌 : * 禁 忌 长 篇 综 述 参 考 文 献 ; 24

25 * 重 复 叙 述 结 果 ; * 报 喜 不 报 优, 弄 虚 作 假, 隐 瞒 缺 点 ; * 循 环 推 理, 以 假 设 来 证 明 假 设, 以 未 知 来 求 证 未 知 ; * 泛 泛 之 谈, 空 话 连 篇, 缺 乏 新 意 ; * 极 力 贬 低 他 人 的 成 果, 不 能 实 事 求 是 地 评 价 自 己 的 成 果 3 结 论 : 论 文 最 后 的 总 体 结 语, 主 要 反 映 论 文 的 目 的 解 决 的 问 题 及 最 后 得 出 的 结 论 * 进 一 步 概 括 提 炼 主 题 ; * 在 充 分 论 述 的 基 础 上, 提 出 最 后 结 论 ; * 提 出 问 题, 发 人 深 思 ; 7 展 望 未 来 要 求 简 明 扼 要 精 炼 完 整 表 达 准 确 有 条 理 性 8 致 谢 致 谢 对 象 :* 对 研 究 方 案 和 写 作 提 纲 提 出 建 议 指 导 论 文 审 阅 修 改 者 ; * 资 料 提 供 者, 技 术 协 助 者, 帮 助 统 计 人 员 ; * 提 供 实 验 材 料 仪 器 以 及 实 验 样 品 等 ; 9 参 考 文 献 为 了 标 明 论 文 中 某 些 论 点 数 据 资 料 与 方 法 的 出 处, 供 读 者 参 阅 查 找 而 引 用 的 有 关 文 献, 是 论 文 的 一 个 重 要 组 成 部 分, 有 助 于 证 实 论 文 的 科 学 性, 也 表 示 对 他 人 研 究 成 果 的 尊 重, 便 于 文 献 检 索 特 点 与 意 义 : ⑴ 继 承 性 ⑵ 真 实 性 ⑶ 准 确 性 ⑷ 限 制 性 期 刊 作 者,. 题 名. 期 刊 名 称, 年 份, 卷 ( 期 ): 起 止 页 Goter MM, Pastn I. Biochemistry of multidrug resistance mediated by the multidrug transporter, Annu Rev Biochem, 1993,62: 385. 陈 林, 王 玉. 肝 硬 变 门 脉 高 压 症 病 人 肝 组 织 中 肾 上 腺 素 受 体 的 变 化 中 华 医 学 杂 志, 1997,77(3): 第 六 节 各 种 类 型 医 学 论 文 一 基 础 医 学 论 文 探 索 自 然 界 物 质 运 动 变 化 的 基 本 现 象 及 规 律, 通 过 研 究 认 识 新 知 识 发 现 新 规 律 创 新 新 原 理 为 发 展 新 技 术 研 制 新 产 品 开 拓 新 方 法 或 新 的 生 产 领 域 提 供 理 论 依 据, 乃 至 产 生 划 时 代 意 义 的 科 研 成 果 * 选 题 * 准 备 * 撰 写 二 临 床 实 验 论 文 以 某 种 疾 病 的 病 人 为 研 究 对 象, 包 括 诊 断 和 治 疗 两 大 部 分 ( 以 应 用 为 目 的, 但 又 具 有 基 础 学 科 的 性 质 ) 三 流 行 病 学 ( 病 因 宿 主 环 境 ) 论 文 25

26 四 护 理 学 及 中 医 药 学 论 文 五 实 验 研 究 论 文 六 文 献 综 述 论 文 七 医 学 生 毕 业 论 文 ( 字 数 在 2 万 左 右 ) 是 学 生 在 即 将 完 成 学 业 时, 从 某 个 专 题 ( 或 领 域 ) 表 述 自 己 的 学 术 水 平 和 学 术 成 果 的 一 种 文 体 ; 是 教 师 或 评 审 者 对 学 生 整 个 学 业 的 一 次 检 阅 1 特 点 ⑴ 不 可 避 免 的 局 限 性 ; ⑵ 一 定 的 依 从 性 ⑶ 专 题 性 与 全 面 性 ⑷ 动 态 性 : 体 现 论 文 的 生 命 力 和 先 进 性 学 位 论 文 具 有 两 大 功 能 : 一 是 成 果, 即 学 位 论 文 是 对 某 个 专 题 ( 或 领 域 ) 表 达 自 己 的 学 术 水 平 和 学 术 成 果, 具 有 一 定 价 值 ; 二 是 考 核, 学 位 论 文 反 映 与 学 位 相 称 的 能 力 学 识, 是 审 查 者 对 作 者 学 业 及 能 力 水 平 的 全 面 检 阅 2 毕 业 论 文 撰 写 的 基 本 要 求 写 作 上 要 求 更 严 谨 的 结 构,; 内 容 上 要 求 较 大 的 容 量 和 文 字 上 较 长 的 篇 幅 以 及 学 术 上 更 高 标 准 (1) 撰 写 的 独 立 性 要 求 ; (2) 学 术 水 平 与 学 术 价 值 的 统 一 要 求 ; (3) 实 事 求 是 评 价 ; (4) 讲 究 精 湛 的 写 作 技 巧 3 如 何 写 好 毕 业 论 ⑴ 注 意 加 强 语 言 功 底 训 练 ; ⑵ 养 成 多 看 多 思 多 写 的 习 惯 ; 读 书 破 万 卷, 下 比 如 有 神 ; 要 博 观 而 略 取 ⑶ 善 于 补 捉 写 作 中 的 灵 感 ; ⑷ 树 立 写 作 的 信 心 决 心 和 认 真 求 实 的 精 神 ; ⑸ 打 好 理 论 基 础, 掌 握 专 业 知 识 4 硕 士 学 位 论 文 写 作 格 式 (1) 封 面 封 二 题 名 页 封 面 提 供 学 位 论 文 工 作 的 概 貌, 包 括 题 名, 作 者 姓 名 及 所 属 单 位 和 专 业 名 称 申 请 学 位 级 别 导 师 姓 名 及 职 称 封 二 一 般 列 出 论 文 指 导 小 组 成 员 的 姓 名 和 职 称 (2) 目 录 页 (3) 摘 要 写 法 与 科 研 论 文 相 同, 但 是 字 数 可 适 当 增 加, 并 附 相 应 的 英 文 摘 要 为 了 便 于 读 者 迅 速 了 解 论 文 内 涵, 并 有 利 于 提 高 标 引 质 量, 应 列 出 3 8 个 关 键 词 (4) 前 言 对 课 题 选 择 及 其 依 据 作 简 要 的 论 证, 对 实 验 的 设 计 研 究 工 作 的 范 围 和 内 容 作 必 要 的 说 明 (5) 正 文 材 料 与 方 法 包 括 实 验 材 料 与 实 验 方 法 结 果 : 此 乃 论 文 的 核 心 讨 论 : 是 论 文 写 作 最 主 要 的 表 达 形 式, 可 充 分 反 映 作 者 学 术 思 想 的 深 度 与 广 度 写 作 中 注 意 论 点 论 据 论 证 的 紧 密 融 合 结 论 参 开 文 献 26

27 致 谢 送 请 评 审 用 的 详 细 摘 要 ( 从 事 本 课 题 研 究 的 目 的 和 重 要 性 ; 研 究 的 内 容 和 过 程 ; 获 得 的 主 要 结 果, 应 突 出 论 文 的 新 见 解, 研 究 结 论 与 意 义 ) 前 言 : 对 课 题 的 历 史 及 其 现 状 进 行 叙 述 材 料 与 方 法 : 详 细 将 仪 器 方 法 步 骤 及 计 算 写 出 结 果 : 如 实 写 出 八 综 述 1 以 某 一 专 题 为 中 心, 收 集 大 量 的 原 始 医 学 文 献, 经 过 消 化 分 析 归 纳 综 合 整 理 而 写 成 的 一 种 专 题 性 的 学 术 论 文, 其 内 容 常 包 括 历 史 性 回 顾 目 前 状 况 争 论 焦 点 存 在 问 题 未 来 展 望 和 最 新 进 展 2 撰 写 文 献 综 述 是 积 累 理 解 和 传 播 科 学 资 料, 培 养 组 织 材 料 提 高 科 学 思 维 能 力 的 途 径, 是 做 好 科 研 工 作 的 必 经 之 路, 它 有 助 于 科 研 工 作 的 各 个 环 节 因 此, 科 研 工 作 者 在 查 阅 文 献 之 后, 实 验 设 计 之 前, 最 好 完 成 一 篇 有 关 问 题 的 文 献 综 述 3 文 献 综 述 的 特 点 : 综 合 性 新 颖 性 和 融 合 性 4 文 献 综 述 的 分 类 : (1) 动 态 性 综 述 : 内 容 安 排 上 的 特 点 是 : 时 间 顺 序 严 格, 着 重 介 绍 历 史 阶 段 性 的 成 就, 关 键 是 学 科 发 展 阶 段 要 准 确 重 点 选 择 每 一 个 阶 段 有 代 表 性 的 文 献 (2) 成 就 性 综 述 介 绍 某 一 方 面 某 一 项 目 的 新 成 就 新 技 术 新 进 展 此 类 综 述 颇 有 实 际 价 值, 对 当 前 工 作 有 指 导 意 义 (3) 学 术 观 点 争 鸣 性 综 述 : 系 统 地 总 结 出 几 种 学 术 观 点, 由 作 者 加 以 分 类 归 纳 和 总 结 要 用 原 文 的 事 实 和 观 点, 作 者 的 概 括 和 分 析 较 少 (4) 综 合 简 介 性 综 述 : 概 括 多 方 面 的 事 实 现 象, 对 某 一 问 题, 某 一 种 疾 病 的 文 献 资 料 进 行 综 合 的 叙 述, 完 全 不 考 虑 时 间 顺 序, 只 是 按 照 内 容 本 身 的 特 点, 加 以 分 段 安 排 5 格 式 : 一 般 由 前 言 主 体 结 尾 和 参 考 文 献 四 部 分 组 成 (1) 前 言 提 出 问 题, 点 出 主 题 并 指 出 意 义, 加 上 大 致 的 学 术 背 景 文 字 以 字 为 宜 (2) 主 体 部 分 说 明 主 题 所 提 出 的 问 题 根 据 文 章 的 性 质, 可 再 分 段 落 或 再 加 小 标 题, 每 一 段 落 或 小 标 题 下 面 都 是 从 不 同 侧 面 不 同 层 次 上 解 释 题 目 的 中 心 内 容, 且 各 段 落 之 间 各 有 分 工 并 保 持 内 在 联 系 主 体 部 分 每 一 段 落 开 始, 应 该 是 综 合 提 炼 出 来 的 观 点, 即 论 点, 接 着 是 继 往 文 献 提 出 的 实 验 结 果 或 调 查 事 实, 即 论 据 (3) 结 尾 部 分 把 文 章 的 结 论 再 概 括, 精 炼 地 进 行 明 确 (4) 参 考 文 献 要 求 有 近 年 的 参 考 文 献 6 写 作 前 准 备 对 本 课 题 的 研 究 动 态 发 展 方 向 研 究 水 平 都 已 了 如 指 掌 ⑴ 准 备 材 料 ⑵ 精 心 命 题 27

28 ⑶ 写 好 提 纲 7 写 作 阶 段 ⑴ 在 引 言 上 下 功 夫 ⑵ 观 点 和 材 料 统 一 运 用 1 要 防 止 材 料 堆 砌 2 2 要 注 意 一 边 倒 的 倾 向 3 3 要 禁 忌 空 泛 议 论 4 4 要 注 意 分 寸 ⑶ 写 好 结 论 要 求 : 做 到 四 贵 ㈠ 贵 新 ; ㈡ 贵 奇 ; ㈢ 贵 深 ; ㈣ 贵 精 第 七 讲 医 学 研 究 的 经 费 来 源 与 课 题 的 申 请 第 一 节 我 国 医 学 科 经 费 的 来 源 一 国 家 级 项 目 : (1) 国 家 科 技 攻 关 项 目 ; (2) 国 家 自 然 科 学 基 金 ; (3) 国 家 973 和 863 项 目 ; (4) 国 家 科 技 部 项 目 ; (5) 国 家 计 委 项 目 ; (6) 攀 登 计 划 项 目 二 部 委 级 项 目 : (1) 卫 生 部 科 学 研 究 基 金 ; (2) 卫 生 部 项 目 ; (3) 人 事 部 项 目 ; (4) 教 育 部 项 目 ; (5) 国 家 计 划 生 育 委 员 会 项 目 ; (6) 药 品 管 理 监 督 局 项 目 ; (7) 国 家 中 医 药 管 理 局 项 目 三 自 治 区 基 金 : (1) 自 治 区 自 然 科 学 基 金 ; (2) 卫 生 厅 项 目 ; (3) 教 育 厅 项 目 ; (4) 财 政 厅 四 盟 市 资 金 五 国 外 基 金 项 目 世 界 卫 生 组 织, 联 合 国 儿 童 基 金 会, 美 国 中 华 医 学 基 金 会. 六 个 人 自 筹 资 金 今 后 15 年 是 我 国 经 济 社 会 发 展 的 关 键 时 期 国 家 将 以 医 药 生 物 技 术 为 突 破 口, 重 点 资 助 重 点 研 究 领 域 * 基 因 工 程 药 物 和 疫 苗, * 重 要 疑 难 病 基 因 治 疗 技 术 28

29 * 人 口 控 制 * 新 药 创 制 * 疾 病 防 治 * 污 染 控 制 * 资 源 开 发 防 灾 减 灾 等 国 家 自 然 科 学 基 金 主 要 来 源 : 主 要 用 途 : 研 究 经 费 管 理 费 国 际 合 作 学 术 交 流 支 持 优 秀 青 年 的 研 究 工 作 资 助 范 围 : 面 向 全 国 科 学 基 金 包 括 三 个 层 次 七 个 基 本 类 型 三 个 层 次 : 面 上 项 目 重 点 项 目 重 大 项 目 七 个 基 本 类 型 : 自 由 申 请 项 目 青 年 科 学 基 金 项 目 地 区 科 学 基 金 项 目 重 点 项 目 重 大 项 目 主 任 基 金 专 项 基 金 项 目 1 面 上 项 目 (1) 自 由 申 请 项 目 (2) 青 年 科 学 基 金 (3) 地 区 科 学 基 金 : 内 蒙 古 宁 夏 青 海 新 疆 西 藏 广 西 海 南 云 南 贵 州 江 西 等 资 助 特 点 : 接 合 当 地 条 件 和 特 点 的 研 究 项 目 2 重 点 项 目 资 助 范 围 : (1) 学 科 布 局 中 关 键 问 题 及 对 学 科 发 展 有 重 要 推 动 作 用 的 学 科 前 沿 ; (2) 对 国 民 经 济 社 会 发 展 有 重 要 应 用 前 景 和 带 动 作 用 的 研 究 领 域 ; (3) 能 充 分 发 挥 我 国 资 源 或 自 然 条 件 特 色 的 研 究 领 域 1 有 先 进 的 研 究 目 标, 明 确 的 科 学 问 题, 创 新 的 学 术 思 想, 合 理 的 研 究 方 案 以 及 必 要 的 实 验 研 究 条 件 ; 2 有 高 水 平 的 活 跃 在 科 学 前 沿 的 学 术 带 头 人 和 精 干 的 研 究 队 伍 3 项 目 有 国 内 领 先 的 研 究 工 作 基 础, 近 期 可 望 取 得 重 要 成 果 或 突 破 性 进 展 等 ; 3 重 大 项 目 主 要 资 助 : 1 科 学 发 展 中 具 有 战 略 意 义, 我 国 具 有 优 势, 可 望 取 得 重 大 突 破, 达 到 国 际 先 进 或 领 先 水 平 的 前 沿 性 基 础 研 究 2 国 家 经 济 发 展 亟 待 解 决 的 重 大 科 技 问 题 对 开 拓 发 展 高 新 技 术 产 业 具 有 重 要 影 响 或 有 重 大 应 用 前 景 的 基 础 性 研 究 3 围 绕 国 家 可 持 续 发 展 战 略 目 标 或 为 国 家 重 要 宏 观 决 策 提 供 依 据 的 基 础 性 研 究, 以 及 具 有 广 泛 深 远 影 响 的 科 学 数 据 积 累 等 基 础 工 作 资 助 对 象 : 近 期 可 望 取 得 重 大 突 破 的 研 究 前 景 29

30 针 对 一 个 综 合 性 科 学 问 题, 紧 密 围 绕 项 目 总 体 目 标, 相 互 配 合 有 机 联 系 的 课 题 组 成 有 学 术 造 诣 高 组 织 能 力 强 能 率 领 研 究 队 伍 并 拓 创 新 的 学 术 带 头 人 和 相 应 的 研 究 队, 形 成 国 家 水 平 的 研 究 队 伍 资 助 特 点 : 鼓 励 联 合 研 究 4 专 项 基 金 I. 国 家 杰 出 青 年 科 学 基 金 II. 国 家 基 础 科 学 人 才 培 养 基 金 III. 高 技 术 新 概 念 新 构 思 探 索 课 题 专 项 基 金 IV. 优 秀 国 家 重 点 实 施 研 究 项 目 基 金 V. 数 学 天 元 基 金 申 报 条 件 (1) 符 合 科 学 基 金 的 资 助 范 围, 有 重 要 科 学 意 义, 有 重 要 应 用 前 景 (2) 研 究 项 目 的 学 术 思 想 新 颖, 创 新 性 强, 立 论 根 据 分, 研 究 目 标 明 确 具 体, 研 究 方 法 和 技 术 路 线 合 理 可 行, 可 获 得 新 的 科 学 发 现 或 取 得 重 要 进 展 (3) 有 稳 定 的 研 究 队 伍 (4) 经 费 预 算 实 事 求 是 (5) 申 请 者 必 须 是 项 目 的 实 际 主 持 人 (6) 申 请 者 和 具 有 高 级 专 业 技 术 职 务 的 项 目 组 主 要 成 员 的 申 请 不 超 过 两 项 (7) 申 请 手 续 必 须 完 备, 所 需 资 料 必 须 齐 全 (8) 已 承 担 项 目 结 题 (9) 在 读 研 究 生 兼 职 科 研 人 员 不 得 作 为 申 请 项 目 负 责 人 提 出 申 请 受 理 时 间 与 资 助 期 限, 自 2 月 15 日 开 始,3 月 31 止, 资 助 期 限 期 限 一 般 为 3 年 5 主 任 基 金 第 二 节 医 学 科 研 课 题 申 请 书 的 撰 写 填 写 标 书 前 准 备 充 分 占 有 文 献 资 料, 熟 悉 本 领 域 的 国 内 外 最 新 进 展 结 合 自 身 特 点, 提 出 研 究 目 标 要 充 分 重 视 所 提 问 题 的 创 新 性 注 意 : 课 题 名 称 所 反 映 的 内 容 必 须 与 申 报 内 容 相 符 简 明 : 不 繁 赘 冗 长 具 体 : 明 确 清 晰, 不 抽 象 笼 统 新 颖 : 创 新 醒 目 : 文 字 精 湛 传 神, 引 人 入 胜 ( 一 ) 课 题 名 称 的 拟 定 原 则 : 简 明 具 体 新 颖 醒 目, 并 能 确 切 反 映 课 题 的 研 究 因 素 研 究 对 象 研 究 内 容 研 究 范 围 及 互 相 间 的 联 系 例 < 细 胞 凋 亡 与 糖 尿 病 视 网 膜 病 变 发 病 机 制 > 研 究 因 素 : 细 胞 凋 亡 研 究 对 象 : 糖 尿 病 研 究 内 容 : 糖 尿 病 视 网 膜 病 变 发 病 机 制 研 究 范 围 : 从 细 胞 凋 亡 角 度 研 究, 属 基 础 研 究 30

31 < 无 偿 献 血 者 肝 炎 指 标 检 测 结 果 及 不 同 性 别 与 血 型 差 异 分 析 > 修 正 后 < 无 偿 献 血 者 肝 炎 指 标 检 测 结 果 及 相 关 因 素 分 析 > ( 二 ) 简 表 的 填 写 申 请 书 主 要 内 容 和 特 征 的 概 括 表 达 1 研 究 项 目 的 基 本 特 征 和 申 报 特 征 (1) 项 目 名 称 : (2) 研 究 类 型 : 基 础 研 究 应 用 基 础 研 究 应 用 研 究 发 展 或 开 发 研 究 (3) 申 报 项 目 类 别 : 各 归 口 部 门 所 公 布 的 项 目 类 别 (4) 申 报 学 科 : 填 写 申 请 项 目 所 属 的 最 基 础 学 科 注 意 : 申 报 学 科 要 与 申 报 课 题 的 内 容 相 符 要 了 解 所 申 报 学 科 的 资 助 特 点 ( 主 要 资 助 内 容 及 主 要 资 助 对 象 ) (5) 学 科 代 码 : (6) 申 请 金 额 : 以 万 元 为 单 位 (7) 起 止 年 月 : 一 般 重 点 重 大 项 目 研 究 年 限 为 3-5 年, 其 他 为 3 年 (8) 所 用 实 验 室 2 申 请 者 的 基 本 情 况 (1) 所 在 单 位 名 称 及 代 码 (2) 隶 属 关 系 (3) 单 位 所 在 地 3 项 目 组 成 员 的 构 成 及 分 工 (1) 参 加 单 位 数 (2) 项 目 组 主 要 成 员 (3) 项 目 中 的 分 工 : 指 项 目 组 成 员 具 体 承 担 的 工 作 和 时 间 (4) 签 章 ⑸ 身 份 证 号 码 4 研 究 内 容 和 意 义 ( 字 ) 使 用 的 主 要 方 法 研 究 内 容 预 期 结 果 理 论 意 义 及 应 用 前 景 主 题 词 数 目 不 多 于 5 个 ( 三 ) 立 论 依 据 的 撰 写 反 映 : * 你 是 否 熟 悉 该 研 究 领 域 的 进 展 * 是 否 真 正 理 解 所 研 究 的 问 题 * 资 料 掌 握 的 是 否 全 面 * 学 术 思 想 是 否 宽 广 * 立 项 是 否 可 靠 立 论 依 据 一 般 包 含 内 容 介 绍 本 课 题 的 研 究 背 景 介 绍 本 课 题 的 研 究 现 状 水 平 和 最 新 技 术 成 就 介 绍 本 课 题 当 前 国 内 外 研 究 的 动 向 和 趋 势 要 表 明 自 己 的 创 新 点 阐 明 将 使 用 何 种 技 术 条 件 和 实 验 手 段 ; 研 究 工 作 将 会 在 理 论 或 实 际 应 用 中 解 决 什 么 问 题, 将 会 给 本 领 域 贡 献 什 么? 增 加 哪 些 新 知 识? 对 学 术 理 论 或 国 民 经 济 和 社 会 发 展 起 到 什 么 作 用 及 具 有 多 大 价 值 ; 列 出 引 用 的 主 要 文 献 31

32 Attention 格 式 清 晰, 逻 辑 合 理 对 国 内 外 研 究 现 状 的 分 析 要 全 面 透 彻 ; 对 提 出 的 研 究 目 标 要 合 理 适 当 避 免 太 分 散 对 理 论 依 据 的 推 测 和 假 设 必 须 严 谨 科 学 ; 语 言 要 科 学 准 确, 切 忌 含 糊 ( 四 ) 研 究 方 案 的 撰 写 1 研 究 目 标 内 容 和 拟 解 决 的 问 题 (1) 研 究 目 标 : 通 过 研 究 要 达 到 的 具 体 目 的, 是 项 目 申 请 的 精 髓 : 准 确 具 体 明 确 可 行. 阶 段 目 标 最 终 目 标 目 标 Attention 是 课 题 的 核 心 及 靶 子 ; 是 课 题 要 解 决 的 问 题 ; 是 课 题 完 成 后 具 有 显 示 度 的 内 容 常 见 错 误 目 标 概 念 不 明 确 目 标 与 选 题 脱 节 目 标 内 容 不 明 确 或 没 有 填 写 目 标 过 多 无 的 放 矢, 目 标 过 大 无 法 实 现 预 期 水 平 笼 统, 缺 乏 根 据 忽 视 学 术 进 步 和 科 学 价 值 的 阐 述 社 会 效 益 空 泛, 经 济 效 益 计 算 不 确 切 等 (2) 研 究 内 容 ( 课 题 研 究 的 范 围 内 容 和 可 供 考 核 的 指 标 ) 注 意 : 1. 你 准 备 从 哪 几 个 方 面 的 研 究 来 论 证 提 出 的 问 题 2. 明 确 从 哪 个 角 度 哪 些 范 围 哪 个 水 平 进 行 研 究 3. 每 个 方 面 或 分 题 计 划 选 择 什 么 样 的 可 供 考 核 的 技 术 或 经 济 指 标 (3) 拟 解 决 的 关 键 问 题 : 整 个 研 究 过 程 中 的 主 要 技 术 环 节, 关 系 着 整 个 实 验 成 败 的 核 心 技 术 问 题 等 2 拟 采 取 的 研 究 方 法 技 术 路 线 实 验 方 案 及 可 行 性 分 析 A. 研 究 对 象 :* 临 床 试 验 对 象 * 实 验 动 物 Attention 敏 感 性 ; 特 异 性 ; 稳 定 性 ; 病 理 强 度 ; 标 准 化 ; 集 中 化 ; 代 表 性 ; 要 正 确 估 计 样 本 大 小 B. 技 术 路 线 : 指 具 体 实 验 中 的 技 术 路 线 及 进 行 实 验 的 程 序 和 操 作 步 骤 C. 实 验 方 法 D. 数 据 的 采 集 和 统 计 方 法 E. 可 行 性 分 析 临 床 实 验 对 象 诊 断 标 准 ; 纳 入 标 准 ; 排 除 标 准 ; 32

33 选 取 的 例 数 和 分 组 及 分 组 的 原 则, 名 称 和 方 法, 各 组 治 疗 方 案 ; 治 疗 的 疗 程 及 剂 量, 不 良 反 应 控 制 和 记 录 等 实 验 动 物 种 属 ; 品 系 来 源 ; 性 别 ; 体 重 ; 月 龄 及 一 般 条 件 ; 分 组 的 原 则 名 称 和 方 法 注 意 造 模 方 法 和 成 功 的 标 准 实 验 给 药 方 法 ; 实 验 所 用 剂 量 ; 反 应 处 置 ; 如 何 纪 录 等 撰 写 时 常 出 现 的 问 题 标 准 陈 旧 或 缺 失 对 照 组 设 置 不 合 理, 不 具 有 可 比 性 观 察 效 应 指 标 针 对 性 不 强, 技 术 路 线 缺 项 或 过 于 简 单, 或 不 具 有 可 操 作 性 研 究 方 案 与 研 究 目 标 不 一 致 借 口 保 密, 不 讲 述 关 键 问 题, 或 故 责 玄 虚, 以 假 充 真 方 法 陈 旧, 无 创 新 或 不 适 于 研 究 内 容 对 新 方 法 新 技 术 或 改 进 的 方 法 叙 述 不 详 细, 或 不 能 提 供 可 行 的 信 息 掩 饰 可 能 出 现 的 问 题 或 提 不 出 解 决 措 施 或 缺 乏 科 学 性 3. 本 项 目 的 创 新 之 处 : 选 题 设 计 方 法 技 术 路 线 成 果 应 用 等 方 面 与 众 不 同 之 处 4. 年 度 研 究 计 划 及 预 期 进 展 : 根 据 课 题 技 术 路 线 对 研 究 内 容 作 阶 段 性 的 安 排 5. 预 期 研 究 结 果 : ( 五 ) 研 究 基 础 的 撰 写 a) 研 究 工 作 基 础 : 工 作 积 累 和 成 果 b) 实 验 条 件 : 已 有 条 件 : 仪 器 试 剂 实 验 动 物 等 ; 尚 缺 少 的 条 件 和 拟 解 决 的 途 径 c) 技 术 条 件 ( 六 ) 经 费 预 算 的 填 写 (1) 科 研 业 务 费 (2) 实 验 材 料 费 (3) 仪 器 设 备 费 (4) 实 验 重 改 装 费 (5) 协 作 费 (6) 项 目 组 织 实 施 费 问 题 : 经 费 额 度 过 高 预 算 项 目 过 于 简 单 或 不 全 面 无 计 算 根 据 和 理 由 计 算 错 误 Attention 基 础 研 究 项 目 : 重 在 结 合 国 际 上 本 学 科 领 域 内 的 发 展 动 态, 论 述 项 目 的 科 学 意 义 及 创 新 的 学 术 思 想 ; 应 用 基 础 研 究 项 目 : 重 在 结 合 学 科 发 展 的 同 时, 围 绕 我 国 国 民 经 济 和 社 会 发 展 中 的 重 要 科 技 问 题, 论 述 其 潜 在 的 应 用 前 景 33

34 专 家 对 项 目 的 评 价 1. 对 科 学 技 术 生 产 实 践 的 意 义 及 应 用 价 值 对 推 动 某 一 学 科 的 发 展 有 重 要 意 义 和 应 用 价 值, 有 一 定 指 导 意 义 术 意 义 不 明 显, 理 论 或 技 术 上 无 明 显 意 义 和 价 值 2. 理 论 创 新 发 现 新 规 律 新 现 象 在 理 论 上 有 较 大 创 新 发 现 一 定 意 义 的 新 规 律 补 充 前 人 发 现 的 规 律 现 象 理 论 上 有 一 定 创 见 重 复 他 人 研 究 结 果, 未 发 现 新 规 律, 新 现 象 3. 学 术 水 平 国 际 领 先 或 先 进 水 平 国 内 领 先 或 先 进 水 平 区 内 领 先 水 平 区 内 先 进 水 平 4. 难 易 复 杂 程 度 难 点 多 复 杂 难 度 大 涉 及 学 科 多 难 点 较 多 较 复 杂 难 度 较 大 涉 及 学 科 较 多 难 点 不 多 难 点 少 5. 科 学 性 系 统 性 完 整 性 研 究 思 路 方 法 技 术 路 线 实 验 方 案 系 统 完 整 严 密 可 行 比 较 完 整 一 般 较 差 实 例 细 胞 凋 亡 与 糖 尿 病 视 网 膜 病 变 发 病 机 制 1 立 论 依 据 (1) 简 介 : 糖 尿 病 视 网 膜 病 是 世 界 致 盲 的 主 要 原 因 之 一, 在 我 国 呈 增 长 的 趋 势 (2) 目 前 的 状 况 及 自 己 的 创 新 : 尽 管 30 多 年 来 同 内 外 学 者 努 力 研 究 周 细 胞 出 现 选 择 性 死 亡 机 制, 但 没 有 重 大 突 破, 因 此, 在 防 治 糖 网 病 上 束 手 无 策 (3) 国 内 外 的 研 究 概 括 起 来 已 形 成 两 大 理 论 第 一 是 高 糖 造 成 的 可 逆 性 代 谢 障 碍, 第 二 是 高 糖 造 成 的 不 可 逆 的 代 谢 障 碍 目 前 的 理 论 仅 能 解 释 为 什 麽 患 糖 网 病 时 周 细 胞 增 殖 活 力 降 低 以 及 高 糖 记 忆 性 损 伤 作 用, 但 不 能 解 释 为 什 麽 在 临 床 上 快 速 控 制 血 糖 可 引 起 或 加 剧 糖 网 病 的 发 展 (4) 本 实 验 室 最 新 的 结 果 表 明 糖 的 波 动 可 引 起 周 细 胞 死 亡, 而 不 是 持 续 高 糖 引 起 周 细 胞 死 亡 另 一 方 面, 周 细 胞 凋 亡 的 程 度 与 原 高 糖 的 程 度 和 时 间 密 切 相 关 更 重 要 的 是, 我 们 使 用 蛋 白 合 成 抑 制 剂 和 生 长 因 子 的 作 用, 可 大 大 延 缓 周 细 胞 凋 亡 的 过 程, 展 现 了 逆 转 周 细 胞 死 亡 和 治 疗 糖 网 病 的 前 景 2 研 究 目 标 内 容 拟 解 决 的 关 键 问 题 研 究 内 容 和 拟 解 决 的 关 键 问 题 (1) 高 糖 所 造 成 的 代 谢 紊 乱 是 如 何 决 定 周 细 胞 必 然 要 进 入 凋 亡 程 序, 而 在 相 同 条 件 下 为 什 么 内 皮 细 胞 却 得 以 存 活 (2) 比 较 周 细 胞 与 内 皮 细 胞 中 多 种 信 息 传 递 通 路 和 凋 亡 相 关 基 因 表 达, 从 而 解 释 选 择 性 周 34

35 细 胞 凋 亡 主 要 拟 检 测 : (1) 细 胞 内 Ca2+ 的 变 化 (2) 蛋 白 激 酶 C(PKC) 和 蛋 白 激 酶 A(PKA) 的 活 性 (3) PKC 异 构 酶 的 表 达. (4) 凋 亡 抑 制 基 因 BC1-2, 凋 亡 激 活 基 因 bax, 肿 瘤 抑 制 基 因 P53 和 C-myc mrna 表 达 和 它 们 的 蛋 白 产 物. (5) 控 制 糖 浓 度 的 波 动, 调 控 相 应 信 息 传 递 通 路 和 凋 亡 相 关 基 因 是 防 止 周 细 胞 死 亡 的 方 法. (6) 合 理 地 缓 慢 地 控 制 糖 水 平 的 升 降 3 拟 采 取 的 研 究 方 法 技 术 路 线 实 验 方 案 可 行 性 分 析 ⑴ 视 网 膜 毛 细 血 管 周 细 胞 和 内 皮 细 胞 培 养, 按 过 去 实 验 方 法 进 行 ⑵ 周 细 胞 与 内 皮 细 胞 复 合 培 养 ( 见 附 表 ) ⑶ 细 胞 凋 亡 的 形 态 学 和 生 物 化 学 指 标 按 过 去 方 法 ⑷ NAD+ 和 ATP 测 定 按 Grant 和 Ericson 法 ⑸ 胞 内 钙 浓 度 按 过 去 方 法 ⑹ PKC 活 性 和 异 构 酶 的 测 定 按 Inoguch 和 King 法 ⑺ camp 依 赖 性 PKA 按 Kammer 法 ⑻ 凋 亡 相 关 基 因 bc1 2 bax,p53 和 c-myc 将 用 RT-PCR 方 法 进 行 ⑼ bc1-2,bax, 蛋 白 水 平 将 用 酶 标 法 测 定, 抗 血 清 可 由 Bection,Dickmson Lab. 购 到 以 上 实 验 方 法 在 本 实 验 室 均 已 成 熟, 且 周 细 胞 内 皮 细 胞 存 活 的 病 理 模 型 已 经 建 立 本 实 验 室 有 良 好 的 设 备, 估 计 可 以 按 计 划 完 成 4 创 新 之 处 1 首 次 建 立 了 糖 尿 病 条 件 下 选 择 性 周 细 胞 死 亡 的 病 理 模 型, 提 出 并 验 证 了 周 细 胞 死 亡 方 式 是 凋 亡 2 第 一 次 提 出 了 血 糖 波 动 比 持 续 性 高 糖 对 周 细 胞 存 活 具 有 更 大 的 危 害 本 课 题 一 改 过 去 国 内 外 20 余 年 只 注 意 高 糖 毒 副 作 用 的 研 究 方 向 3 本 课 题 是 周 细 胞 与 内 皮 细 胞 的 比 较 性 研 究, 包 括 两 种 细 胞 复 合 培 养 4 首 次 提 出 用 调 控 血 糖, 调 控 凋 亡 相 关 的 信 息 传 递 通 路 和 凋 亡 相 关 基 因 表 达 等 方 法 揭 示 临 床 治 疗 早 期 糖 网 的 前 景 5 年 度 研 究 计 划 预 期 进 展 预 计 用 三 年 时 间 完 成 1 在 高 糖 条 件 下 二 种 细 胞 内 的 醛 糖 还 原 酶 被 激 活, 糖 基 化 终 末 产 物 形 成, 同 时 NAD+,ATP 水 平 DNA 链 裂 水 平 和 DNA 蛋 白 交 联 水 平 发 生 变 化, 但 变 化 程 度 可 能 不 同, 这 些 将 作 为 判 断 细 胞 命 运 的 指 标 2 糖 浓 度 骤 然 波 动 可 能 造 成 胞 内 Ca2+ 浓 度 升 高, 有 可 能 激 活 一 系 列 Ca2+ 依 赖 型 酶 的 活 性 3 与 细 胞 死 亡 和 细 胞 增 殖 相 关 的 PKC 和 PKA, 是 相 互 对 立, 又 相 互 关 联 的 信 息 传 递 道 路, 糖 骤 然 波 动 后 两 种 细 胞 内 PKC PKA 通 路 的 状 况 可 能 与 细 胞 存 活 或 死 亡 有 关 4 凋 亡 相 关 基 因 的 表 达 和 产 物 的 水 平 ----Bc1-2/Bax 蛋 白 的 比 例 在 两 种 细 胞 中 可 能 不 同, 通 常 Bc1-2/Bax 比 例 高 细 胞 不 会 死 亡, 我 们 预 计 根 据 Bc1-2/Bax 比 例 可 以 解 释 为 什 么 一 种 细 胞 存 活 而 另 一 种 细 胞 尚 可 存 活 的 现 象 5 在 上 述 (1)-(4) 的 各 种 条 件 下, 使 用 信 使 (Ca2+ PKC PKA) 抑 制 剂 或 激 活 剂, 使 用 蛋 白 合 成 抑 制 剂,RNA 合 成 抑 制 剂 以 及 生 长 因 子, 为 体 外 疗 法, 同 时 观 察 上 述 指 标, 判 断 体 外 疗 法 治 疗 周 细 胞 凋 亡 的 效 果 35

36 第 九 讲 科 研 方 法 实 习 指 导 第 一 节 细 胞 培 养 基 本 知 识 一 什 么 是 细 胞 培 养? 组 织 或 细 胞 培 养 是 指 从 动 物 活 体 体 内 取 出 组 织, 模 拟 体 内 生 理 环 境, 在 特 定 的 体 外 条 件 下 使 其 生 存 并 生 长 若 以 产 生 形 成 培 养 物 的 方 法 而 言, 可 分 为 组 织 培 养 细 胞 培 养 和 器 官 培 养 组 织 培 养 指 把 活 体 的 一 小 片 组 织 置 于 底 物 上 孵 育, 细 胞 在 适 当 的 条 件 下 增 殖 生 长 细 胞 培 养 是 把 取 得 之 组 织 用 机 械 或 消 化 的 方 法 分 散 成 单 个 细 胞 悬 液, 再 进 行 培 养 生 长 由 于 这 些 培 养 物 的 主 要 成 分 均 属 细 胞, 而 这 些 细 胞 在 体 外 生 长 时, 仍 然 是 相 互 依 存 互 相 影 响 的 因 此, 细 胞 培 养 和 组 织 培 养 实 际 上 区 别 不 大 器 官 培 养, 系 将 活 体 中 器 官 或 一 部 分 器 官 取 出, 置 于 体 外 生 存 生 长 并 同 时 保 持 其 一 定 的 结 构 和 功 能 特 征 二 组 织 或 细 胞 培 养 的 主 要 优 点 ㈠ 研 究 的 对 象 是 活 的 细 胞 在 实 验 过 程 中, 根 据 要 求 可 始 终 保 持 细 胞 的 活 力, 并 可 长 时 期 的 监 控 检 测 甚 至 定 量 评 估 一 部 分 活 细 胞 的 情 况, 包 括 其 形 态 结 构 和 生 命 活 动 等 这 点 是 其 他 方 法 所 无 法 取 代 的 ㈡ 研 究 的 条 件 可 以 人 为 的 控 制 进 行 体 外 的 细 胞 培 养 实 验 时, 可 以 根 据 需 要, 通 过 控 制 PH 温 度 O2 张 力 CO2 张 力 等 物 理 化 学 的 条 件 进 行 实 验 观 察 ㈢ 研 究 的 样 本, 可 以 达 到 比 较 均 一 性 通 过 细 胞 培 养 所 得 到 的 细 胞 系 属 同 一 类 型 的 细 胞, 可 以 达 到 均 一 性 需 要 时 并 可 采 用 克 隆 化 等 方 法 使 细 胞 达 到 单 一 化 ㈣ 研 究 的 内 容 便 于 观 察 检 测 和 记 录 通 过 倒 置 相 差 显 微 镜 电 视 电 影 等 直 接 观 察 活 的 细 胞 ; 电 子 显 微 镜 分 析 细 胞 的 超 微 结 构 ; 同 位 素 标 记 放 射 免 疫 等 方 法 检 测 细 胞 内 物 质 的 合 成 代 谢 的 变 化 等 ㈤ 研 究 的 范 围 比 较 广 泛 细 胞 培 养 可 在 多 种 学 科 均 可 利 用 进 行 研 究, 如 : 细 胞 学 免 疫 学 肿 瘤 学 生 化 学 遗 传 学 分 子 生 物 学 等 可 供 实 验 的 组 织 来 源 众 多, 包 括 各 种 动 物 的 各 类 组 织, 可 以 是 动 物 的 胚 胎 或 成 体, 可 以 是 正 常 组 织 或 肿 瘤 组 织 等 ㈥ 研 究 的 费 用 相 对 较 经 济 细 胞 培 养 可 以 大 量 提 供 在 同 一 时 期 条 件 相 同 性 状 相 似 的 实 验 样 本, 因 此 有 时 可 比 体 内 实 验 经 济 的 多 例 如, 一 个 需 要 100 只 鼠 才 能 得 出 结 论 的 实 验 可 能 用 100 片 盖 玻 片 或 几 个 多 孔 培 养 板 而 获 得 具 有 相 同 统 计 学 意 义 的 结 果 细 胞 培 养 虽 然 具 有 很 多 优 点, 但 也 存 在 一 定 的 不 足 首 先, 对 于 体 外 培 养 的 细 胞, 应 该 把 他 们 视 作 一 种 既 保 持 动 物 体 内 原 细 胞 一 定 的 形 状 结 构 和 功 能 又 具 有 某 些 改 变 的 特 定 的 细 胞 群 体, 而 不 能 将 之 与 体 内 细 胞 完 全 等 同 其 次, 细 胞 培 养 存 在 一 定 的 不 稳 定 性, 尤 其 是 反 复 传 代 长 期 培 养 者, 有 可 能 发 生 染 色 体 非 二 倍 体 改 变 等 情 况 另 外, 细 胞 培 养 对 人 员 设 备 等 条 件 都 要 求 较 高 三 细 胞 培 养 的 应 用 ㈠ 病 毒 学 近 年 来 病 毒 学 中 很 多 发 展 与 能 在 培 养 细 胞 中 生 长 病 毒 的 技 术 有 关 由 于 很 多 病 毒 疾 病 可 用 抗 体 血 清 治 疗, 因 此 需 要 能 够 生 长 大 量 病 毒 以 用 于 产 生 疫 苗 及 鉴 定, 这 些 工 作 常 可 利 用 培 36

37 养 的 细 胞 进 行 ㈡ 免 疫 学 杂 交 瘤 - 单 克 隆 抗 体 技 术 极 大 的 促 进 了 免 疫 学 的 发 展, 而 这 种 技 术 就 是 在 细 胞 培 养 技 术 的 基 础 上 发 展 起 来 的 ㈢ 遗 传 学 可 以 利 用 细 胞 培 养 技 术 进 行 染 色 体 分 析 细 胞 融 合 技 术 与 遗 传 学 技 术 相 结 合 建 立 了 体 细 胞 遗 传 学, 已 成 为 包 括 人 在 内 的 高 等 脊 椎 动 物 遗 传 学 分 析 的 一 个 重 要 的 组 成 部 分 ㈣ 肿 瘤 学 细 胞 培 养 技 术 已 广 泛 应 用 于 肿 瘤 学 的 领 域, 促 进 了 对 肿 瘤 的 了 解 例 如 : 利 用 细 胞 培 养 进 行 的 细 胞 转 化 作 用 改 变 细 胞 原 来 的 性 质, 被 认 为 是 研 究 肿 瘤 发 生 的 良 好 方 法 ㈤ 分 化 及 发 育 高 等 动 物 真 核 细 胞 分 化 的 研 究 是 比 较 困 难 的 现 在 利 用 体 外 培 养 对 分 化 进 行 研 究, 例 如 : 经 一 已 知 的 外 界 因 素 刺 激 后 有 些 细 胞 群 体 可 发 生 改 变, 这 些 改 变 可 以 被 确 认 并 进 行 监 测, 可 研 究 细 胞 分 化 及 发 育 过 程 中 相 互 作 用 及 细 胞 内 控 制 的 机 制 ㈥ 细 胞 毒 试 验 在 细 胞 培 养 技 术 的 应 用 中, 日 益 广 泛 的 是 进 行 多 种 物 质 的 毒 性 试 验 ㈦ 临 床 医 学 及 生 物 技 术 方 面 的 应 用 例 如 : 从 子 宫 取 得 细 胞 作 染 色 体 分 析 可 揭 示 尚 未 出 生 胎 儿 的 遗 传 性 疾 病 ; 在 合 适 的 宿 主 细 胞 的 培 养 可 做 病 毒 感 染 的 定 性 及 定 量 分 析 ; 以 细 胞 培 养 作 克 隆 微 量 分 析 或 其 他 体 外 监 测 分 析 方 法 检 测 药 物 的 效 应 ; 经 体 外 刺 激 生 长 的 淋 巴 细 胞 可 用 以 改 善 对 肿 瘤 的 免 疫 反 应 LaK 细 胞 的 应 用 等 四 培 养 细 胞 的 生 长 方 式 及 类 型 ㈠ 贴 附 生 长 型 细 胞 必 须 贴 附 于 底 物 才 能 生 长 的 细 胞 从 形 态 上 大 体 分 为 上 皮 细 胞 型 及 成 纤 维 细 胞 型, 还 有 一 些 难 以 确 定 其 稳 定 形 态 的 细 胞 ㈡ 悬 浮 生 长 型 细 胞 不 需 要 附 着 于 底 物 而 于 悬 浮 状 态 下 即 可 生 长 五 培 养 细 胞 的 生 长 过 程 ㈠ 单 个 细 胞 的 生 长 过 程 : 细 胞 周 期 细 胞 周 期 可 分 为 间 期 和 M 期 ( 分 裂 期 ) 两 个 阶 段 间 期 =G1 期 +S 期 + G2 期 细 胞 周 期 = 间 期 +M 期 = G1 期 +S 期 + G2 期 +M 期 G1 期 :DNA 合 成 前 期 ( 细 胞 分 裂 后 期 ) S 期 :DNA 合 成 期 G2 期 :DNA 合 成 后 期 ( 细 胞 分 裂 前 期 ) M 期 : 有 丝 分 裂 期 ㈡ 细 胞 系 的 生 长 过 程 体 外 培 养 细 胞 寿 命 的 过 程 一 般 可 分 为 三 个 阶 段 1 原 代 培 养 或 初 代 培 养 期 : 为 新 鲜 组 织 自 体 内 取 出 并 在 体 外 培 养 生 长 至 第 一 次 传 代 的 时 期 2 传 代 期 : 原 代 培 养 的 细 胞 生 长 一 定 时 间 之 后, 如 贴 附 型 细 胞 即 融 合 成 片 而 逐 渐 铺 满 底 物 的 表 面, 此 时, 便 应 将 原 代 细 胞 分 开 接 种 至 2 个 或 更 多 的 新 的 培 养 器 皿 中, 即 传 代, 此 即 成 细 胞 系 3 衰 退 期 : 一 般 有 限 细 胞 系 在 此 期 的 细 胞 开 始 时 虽 仍 然 存 活, 但 增 殖 已 很 缓 慢 并 逐 渐 完 全 停 止, 进 而 细 胞 发 生 衰 退 死 亡 ㈢ 每 代 细 胞 的 生 长 过 程 37

38 原 代 细 胞 传 代 后 即 为 细 胞 系 细 胞 自 接 种 传 代 至 新 培 养 皿 中 至 其 下 一 次 再 传 代 接 种 的 时 间 为 细 胞 的 一 代 每 代 细 胞 的 生 长 过 程 可 分 为 三 个 阶 段 : 1 滞 留 期 : 当 细 胞 接 种 入 新 的 培 养 器 皿, 不 论 是 何 种 细 胞 类 型 其 原 来 的 形 态 如 何, 此 时 细 胞 的 胞 质 回 缩, 胞 体 均 呈 圆 球 形 先 悬 浮 于 培 养 液 中, 短 时 间 后, 那 些 尚 可 能 存 活 的 细 胞, 即 开 始 附 着 于 底 物, 并 逐 渐 伸 展, 恢 复 其 原 来 的 形 态 在 经 过 一 潜 伏 期, 此 时 细 胞 已 存 活, 具 有 代 谢 及 运 动 活 动 但 尚 无 增 殖 发 生 以 后 出 现 细 胞 分 裂 并 逐 渐 增 多 而 进 入 指 数 生 长 期 一 般 细 胞 滞 留 期 的 时 间 不 长, 约 为 24~96h 肿 瘤 细 胞 则 更 短, 可 少 于 24h 2 指 数 生 长 期 : 此 期 细 胞 增 殖 旺 盛, 成 倍 增 长, 活 力 最 佳, 适 用 于 进 行 实 验 研 究 此 期 时 间 的 长 短 因 细 胞 本 身 特 性 及 培 养 条 件 而 不 完 全 相 同, 一 般 约 可 持 续 3~5 天 3 平 台 期 : 有 称 生 长 停 止 期 此 期 可 供 细 胞 生 长 的 底 物 面 积 已 被 生 长 的 细 胞 所 占 满, 细 胞 虽 尚 有 活 力 但 已 不 再 分 裂 增 殖 若 及 时 分 离 培 养 进 行 传 代, 将 细 胞 分 开 接 种 至 新 的 培 养 器 皿 并 补 充 以 新 鲜 培 养 液, 细 胞 将 于 新 的 培 养 器 皿 中 成 为 下 一 代 的 细 胞 而 再 次 繁 殖 否 则, 若 传 代 不 及 时, 细 胞 将 因 中 毒 而 发 生 改 变, 甚 至 脱 落 死 亡 六 培 养 细 胞 生 长 的 条 件 体 外 培 养 的 细 胞 需 要 合 适 的 环 境 和 必 需 的 条 件 才 能 生 存 繁 殖 ㈠ 细 胞 的 营 养 需 要 1 基 本 营 养 物 质 : 体 外 培 养 细 胞 的 生 长 必 需 一 些 基 本 的 营 养 物 质, 包 括 氨 基 酸 维 生 素 碳 水 化 合 物 及 一 些 无 机 离 子 2 促 生 长 因 子 等 物 质 : 体 外 培 养 细 胞 既 需 要 上 述 基 本 营 养 物 质, 还 需 要 促 细 胞 生 长 因 子 等 物 质 才 能 正 常 生 长 繁 殖 血 清 中 含 有 多 种 这 类 物 质, 有 利 于 多 数 细 胞 的 存 活 和 生 长, 但 同 时 也 有 些 组 成 不 明 对 细 胞 有 害 的 成 分 ㈡ 细 胞 的 生 存 环 境 1 温 度 : 体 外 培 养 的 细 胞 需 在 保 持 一 定 恒 温 的 环 境 中 才 能 生 长 哺 乳 动 物 包 括 人 类 体 外 培 养 细 胞 的 理 想 温 度 是 35~37 培 养 温 度 如 不 适 当, 将 会 影 响 细 胞 的 代 谢 及 生 长, 甚 至 发 生 死 亡 一 般 说, 高 温 比 低 温 对 细 胞 的 影 响 更 为 明 显 2 气 相 及 PH: 体 外 培 养 细 胞 采 用 开 放 培 养 时, 其 气 体 环 境 一 般 应 为 95% 空 气 加 5%CO2 的 混 合 气 体 CO2 为 细 胞 生 长 所 需 要, 同 时 又 是 细 胞 代 谢 的 产 物, 并 与 维 持 培 养 基 的 PH 有 关 大 多 数 细 胞 适 于 在 PH7.2~7.4 条 件 下 生 长 一 般 来 说, 细 胞 对 碱 性 不 如 对 酸 性 的 变 化 耐 受, 偏 酸 的 条 件 比 偏 碱 的 环 境 对 生 长 有 利 ㈢ 无 污 染 及 无 毒 体 外 培 养 的 细 胞 必 须 生 长 于 无 污 染 及 无 毒 的 环 境 无 毒 是 培 养 细 胞 的 必 需 条 件 凡 与 细 胞 直 接 或 间 接 接 触 的 东 西 都 必 须 是 无 毒 的 细 胞 培 养 中 的 污 染 问 题 包 括 细 菌 等 微 生 物 的 污 染 不 同 细 胞 类 型 的 交 叉 污 染 及 其 他 有 害 物 质 的 污 染 这 些 是 细 胞 培 养 工 作 中 要 非 常 重 视 的 问 题 可 能 导 致 微 生 物 的 污 染 包 括 细 菌 霉 菌 及 支 原 体 第 二 节 Beckman DU-640 系 列 紫 外 分 光 光 度 计 之 原 理 及 应 用 一 原 理 紫 外 分 光 光 度 分 析 法, 是 依 据 物 质 分 子 或 离 子 团 对 紫 外 的 特 征 吸 收 而 建 立 起 来 的 分 析 方 法 我 们 应 用 的 主 要 范 围 在 紫 外 区 和 可 见 光 区 将 不 同 波 长 的 单 色 光 依 次 通 过 被 分 析 的 物 质, 分 别 测 到 不 同 波 长 下 的 吸 光 度 或 透 光 率, 以 波 长 为 横 坐 标, 以 物 质 对 不 同 波 长 的 光 的 吸 光 度 为 纵 坐 标, 即 绘 成 该 物 质 的 吸 收 光 谱 曲 线, 称 光 谱 图 38

39 DU-640 系 列 紫 外 分 光 光 度 计 的 测 定 波 长 范 围 为 190~1100nm, 设 有 三 种 常 规 测 量 功 能, 即 固 定 波 长 分 析 全 波 长 扫 描 和 时 间 动 力 学 测 定 核 酸 分 析 ㈠ 原 理 : 由 于 核 酸 通 常 和 蛋 白 以 核 蛋 白 的 形 式 结 合, 所 以 在 提 纯 核 酸 的 过 程 中, 要 测 定 其 中 蛋 白 质 杂 质 的 含 量 通 过 两 个 波 长 (260nm/280nm) 的 吸 收 读 数 比 率 和 空 白 的 校 正, 即 可 估 算 核 酸 的 纯 度 DNA 比 值 为 1.8,RNA 比 值 为 2.0 对 核 酸 来 说,260nm/280nm 的 比 值 越 小, 说 明 蛋 白 杂 质 越 多, 两 个 波 长 吸 收 比 率 小 于 所 规 定 的 最 小 值, 则 核 酸 纯 度 不 符 合 要 求 常 涉 及 到 用 于 测 定 核 酸 样 品 的 波 长 有 4 个 a.230nm: 肽 键 的 吸 收 波 长, 用 此 波 长 检 测 蛋 白 质 的 含 量 比 280nm 处 更 灵 敏, 但 常 用 缓 冲 液 ( 如 Tris 等 ) 对 测 定 有 干 扰 b.280nm: 蛋 白 质 中 芳 香 族 氨 基 酸 的 吸 收 波 长, 由 于 干 扰 少, 被 经 常 使 用 c.260nm: 专 用 来 检 测 核 酸 的 含 量 d.320nm: 用 于 本 底 校 正, 核 酸 和 蛋 白 在 此 波 长 下 无 吸 收, 一 些 干 扰 因 素 ( 如 散 射 光 ) 可 产 生 吸 收, 故 常 用 于 本 底 吸 收 波 长 ㈡ 分 析 举 例 : 测 定 核 酸 样 品 在 有 本 底 校 正 时 的 260nm/280nm 的 比 率 操 作 : 在 核 酸 分 析 窗 口, 用 鼠 标 器 打 开 分 析 类 型 [Assay typt], 选 择 [260nm/280nm Ratio: Bkg=320nm] 项, 在 取 样 装 置 [Sampling device] 项 中 选 取 取 样 方 式 为 [None], 仪 器 即 可 进 入 分 析 状 态 在 此 测 定 方 式 下, 可 同 时 获 得 样 品 在 260nm 和 280nm 处 的 光 密 度 及 260/280 及 280/260 的 比 率 由 于 在 实 验 室 制 备 的 核 酸 样 品 很 宝 贵, 此 时 可 选 用 与 仪 器 配 套 的 50μι 比 色 杯, 可 用 极 少 的 样 品 进 行 测 定 二 蛋 白 质 分 析 蛋 白 质 的 定 量 分 析 是 生 物 化 学 和 其 他 生 物 学 科 食 品 检 验 临 床 诊 断 等 领 域 中 最 常 涉 及 到 的 分 析 检 测 手 段 由 于 蛋 白 质 种 类 很 多, 分 子 组 成 结 构 分 子 量 差 别 很 大, 功 能 各 异, 因 此 目 前 测 定 蛋 白 质 含 量 的 方 法 很 多, 各 有 其 特 点, 在 了 解 每 种 方 法 特 点 的 基 础 上, 选 用 适 用 于 自 己 试 验 的 方 法 本 仪 器 采 用 Biuret,Bradford,Lowry Hs,Lowry Ls,UV 法,BCA,Collooidal Gold, Usre defined 等 8 种 最 常 用 的 测 定 蛋 白 质 的 方 法 程 序 化, 只 要 将 选 定 的 方 法 调 出, 其 余 各 种 计 算 均 由 软 件 自 动 完 成 计 算 结 果 既 迅 速 又 准 确 ㈠ Biuret( 双 缩 脲 法 ) 原 理 : 双 缩 脲 反 应, 肽 蛋 白 质 与 二 价 铜 离 子 在 碱 性 溶 液 中 形 成 紫 色 络 合 物, 最 大 吸 收 波 长 在 540nm, 可 测 定 含 10~1200μg/ml 蛋 白 质 的 样 品, 标 准 曲 线 的 线 性 关 系 和 重 复 性 都 较 好, 但 灵 敏 度 较 差, 低 于 Lowry 法 和 直 接 UV 法 ㈡ Bradford( 考 马 斯 亮 兰 G-250 染 色 法 ) 原 理 : 考 马 斯 亮 兰 G-250 在 酸 性 溶 液 中 为 棕 红 色, 它 和 蛋 白 质 通 过 疏 水 作 用 结 合 后 产 生 颜 色 反 应 呈 蓝 色 在 595nm 处 有 最 大 光 吸 收, 在 一 定 的 范 围 内, 蛋 白 质 含 量 与 595nm 的 吸 收 值 成 正 比, 测 定 蛋 白 质 浓 度 范 围 为 1~140μg/ml, 几 乎 无 测 定 干 扰, 灵 敏 度 是 Lowry 法 的 4 倍 ㈢ Lowry( 包 括 高 灵 敏 度 Lowry Hs, 低 灵 敏 度 Lowry Ls 两 种 方 法 ) 原 理 : 蛋 白 质 先 与 碱 性 铜 试 剂 反 应, 测 定 形 成 蓝 色 络 合 物 的 吸 光 度, 蛋 白 质 浓 度 低 于 25μg/ml 的 样 品 用 波 长 750nm 测 定, 即 Lowry Hs 法 ; 高 于 25μg/ml 的 样 品 用 波 长 500nm 39

40 测 定, 即 Lowry Ls 法 该 方 法 的 灵 敏 度 比 在 280nm 波 长 下 测 定 高 10~20 倍, 是 Biuret 法 的 100 倍 ㈣ UV 法 ( 紫 外 法 ) 1 原 理 : 利 用 蛋 白 质 因 含 有 酪 氨 酸, 色 氨 酸 ( 有 苯 环 共 轭 双 键 ) 的 特 点 在 280nm 处 有 一 吸 收 峰, 光 吸 收 值 与 其 蛋 白 浓 度 成 正 比 但 不 同 的 蛋 白 质 由 不 同 的 氨 基 酸 组 成, 所 以 这 仅 仅 是 一 种 近 似 的 方 法, 除 非 制 作 标 准 曲 线 的 蛋 白 质 和 样 品 的 蛋 白 质 是 一 样 的, 此 法 的 灵 敏 度 低 于 任 何 一 种 方 法 多 用 于 柱 层 析 分 析 中 ㈤ BCA 法 1 原 理 : 用 BCA 试 剂 与 Cu + 特 异 结 合 的 特 点, 在 碱 性 溶 液 中, 蛋 白 质 将 Cu 2+ 还 原 成 Cu +, 后 者 与 BCA 形 成 紫 色 复 合 物, 为 一 种 水 溶 性 的 盐, 在 562nm 处 有 很 强 的 吸 收, 强 度 与 蛋 白 浓 度 成 正 比 标 准 法 适 用 于 蛋 白 浓 度 在 20~1200μg/ml 范 围 内 的 样 品 分 析, 而 微 量 法 适 用 于 浓 度 在 0.5~20μg/ml 范 围 内 的 样 品, 用 非 线 性 标 准 曲 线 可 进 行 全 范 围 测 定 ㈥ Collooidal Gold( 胶 体 金 法 ) 原 理 : 蛋 白 质 与 胶 体 金 亲 和, 光 吸 收 在 595nm 处, 可 测 出 范 围 为 5~200μg/ml 的 蛋 白 质 含 量 ㈦ Usre defined 法 ( 用 户 自 行 设 定 分 析 波 长 ) 用 户 根 据 自 己 测 定 蛋 白 质 的 特 许 需 要, 自 行 设 定 分 析 波 长 等 参 数, 只 要 将 自 行 设 计 的 方 法 调 出, 即 可 以 像 上 述 其 他 方 法 一 样 使 用 第 三 节 毛 细 管 电 泳 / 电 色 谱 一. 概 述 : 色 谱 现 象 从 二 十 世 纪 初 由 俄 国 植 物 学 家 Tsweet 发 现 并 逐 渐 发 展 有 了 非 常 大 的 规 模, 其 分 类 越 来 越 细, 已 经 成 为 分 析 化 学 领 域 中 发 展 最 快 应 用 最 广 的 分 析 方 法 之 一 因 为 色 谱 法 具 有 分 离 与 分 析 两 种 功 能, 能 够 排 除 组 分 间 的 相 互 干 扰, 逐 个 将 组 分 进 行 定 性 定 量 分 析, 而 且 还 可 以 制 备 纯 组 分 因 此 在 药 物 分 析 方 面 具 有 极 高 的 应 用 频 率 二. 基 本 概 念 及 参 数 1. 电 泳 : 电 介 质 中 带 电 离 子 在 电 场 作 用 下 以 不 同 的 速 度 向 电 荷 相 反 方 向 迁 移 的 现 象 利 用 这 种 现 象 对 化 学 / 生 物 化 学 组 分 进 行 分 离 分 析 的 技 术 称 之 为 电 泳 技 术 2. 毛 细 管 电 泳 (capillary electrophoresis,ce), 泛 指 在 极 细 的 毛 细 管 内 实 现 的 一 大 类 电 泳 技 术 是 以 毛 细 管 为 分 离 通 道 以 高 压 直 流 电 为 驱 动 力 的 新 型 液 相 分 离 分 析 技 术 3. 高 效 液 相 色 谱 :(high performance liquid chromatography,hplc): 以 高 压 泵 为 流 动 相 驱 动 力, 以 细 粒 径 的 固 定 相 微 粒 填 充 到 分 离 柱 中 溶 质 根 据 它 们 在 流 动 相 与 固 定 相 中 分 配 系 数 不 同 得 以 分 离 的 一 种 高 效 微 分 离 技 术 4. 毛 细 管 电 色 谱 : 将 HPLC 中 固 定 相 微 粒 填 充 到 毛 细 管 中, 以 电 渗 流 或 电 渗 流 与 高 压 泵 结 合 为 流 动 相 驱 动 力, 溶 质 根 据 它 们 在 流 动 相 与 固 定 相 中 分 配 系 数 不 同 和 自 身 电 泳 淌 度 的 差 异 得 以 分 离 的 一 种 新 型 高 效 微 分 离 技 术 40

41 图 1: CEC 结 合 了 两 种 高 效 的 分 离 技 术 CE 和 micro-hplc. HPLC 是 用 压 力 驱 动 流 动 相, 流 速 是 随 填 充 微 粒 的 大 小 和 柱 长 而 变 化 的 流 体 在 柱 管 中 呈 抛 物 线 轮 廓 ( 见 图 2), 因 而 造 成 了 色 谱 峰 谱 带 的 展 宽, 降 低 了 柱 效 而 CEC 采 用 了 电 场 推 动 流 动 相, 其 线 速 度 与 柱 管 直 径 和 填 充 微 粒 的 大 小 无 关, 流 体 在 毛 细 管 中 呈 塞 状 ( 见 图 2), 因 此 在 CEC 中 几 乎 没 有 流 速 梯 度, 谱 带 展 宽 效 应 相 应 的 就 十 分 小 正 是 基 于 上 述 原 因,CEC 的 分 离 效 率 明 显 高 于 HPLC 图 2: 在 CEC 和 micro-hplc 中 流 体 的 轮 廓 比 较 5. 色 谱 流 出 曲 线 : 即 色 谱 图, 是 样 品 被 流 动 相 冲 洗, 通 过 色 谱 柱, 流 经 检 测 器, 所 形 成 的 浓 度 信 号 随 洗 脱 时 间 变 化 而 形 成 的 曲 线, 称 为 色 谱 流 出 曲 线 ( 简 称 流 出 曲 线 ), 即 浓 度 - 时 41

42 间 曲 线 6. 基 线 : 当 没 有 样 品 进 入 色 谱 仪 检 测 器 中 或 有 样 品 通 过, 但 其 浓 度 变 化 不 能 被 检 测 器 所 检 测 时, 所 测 出 的 流 出 曲 线 称 为 基 线 (base line). 1. 正 常 基 线 : 应 为 一 条 平 行 于 横 轴 ( 时 间 轴 ), 基 线 反 映 仪 器 及 操 作 条 件 的 恒 定 程 度 基 线 的 高 低 反 映 检 测 器 的 本 地 高 低 主 要 有 流 动 相 中 杂 质 等 因 素 决 定 2 噪 声 : 各 种 未 知 的 偶 然 因 素 引 起 基 线 起 伏 的 现 象 称 为 噪 声 (noise,r)r 的 大 小 可 用 噪 声 带 ( 峰 - 峰 值 ) 的 宽 度 来 衡 量 通 常 记 录 1h 的 极 限, 取 噪 声 带 的 最 宽 处 来 衡 量 噪 声 R 的 大 小 单 位 mv 7. 保 留 时 间 : 从 进 样 开 始 到 某 个 组 分 的 色 谱 峰 顶 的 时 间 间 隔, 称 为 该 组 分 的 保 留 时 间 (retention time,tr) 即 从 进 样 后 某 组 分 出 现 浓 度 极 大 点 的 时 间 间 隔 8. 死 时 间 调 整 保 留 时 间 : 不 被 固 定 相 吸 附 或 溶 解 的 组 分 的 保 留 时 间 保 留 时 间 减 去 死 时 间 即 为 调 整 保 留 时 间 三. 基 本 原 理 CE 的 基 本 原 理 就 是 电 泳 与 色 谱 电 泳 : 亦 叫 电 迁 移, 表 现 为 介 质 的 导 电 色 谱 : 1 色 谱 法 的 产 生 由 来 2 指 物 质 因 在 两 相 中 分 配 并 运 动 而 发 生 分 离 或 层 析 的 现 象 / 它 利 用 混 合 物 中 各 组 分 在 两 相 间 分 配 系 数 的 差 别, 当 溶 质 在 两 相 间 做 相 对 移 动 时, 各 物 质 在 两 相 间 进 行 多 次 分 配, 从 而 使 各 组 分 得 以 分 离 分 配 系 数 大 的 组 分 迁 移 速 度 慢, 反 之 迁 移 速 度 快 而 被 分 离 现 在 常 指 运 用 这 一 现 象 进 行 物 质 分 离 分 析 的 技 术 手 段 四. 色 谱 法 的 特 点 优 缺 点 : 1. 特 点 : 高 超 的 分 离 能 力, 其 分 离 效 能 远 远 高 于 其 他 分 离 技 术 如 : 蒸 馏 萃 取 离 心 等 2. 优 点 :1. 分 离 效 能 高 2. 应 用 范 围 广 它 几 乎 可 用 于 所 有 化 合 物 的 分 离 和 测 定, 无 论 是 有 机 物 无 机 物 低 分 子 或 高 分 子 化 合 物, 甚 至 有 生 物 活 性 的 生 物 大 分 子 也 可 以 进 行 分 离 和 分 析 3. 分 析 速 度 快 一 般 在 积 分 中 到 即 使 分 钟 就 可 以 完 成 一 次 复 杂 样 品 的 分 离 和 分 析 4. 样 品 用 量 少 用 及 少 的 样 品 就 可 以 完 成 一 次 分 离 和 测 定 5. 灵 敏 度 高 如 GC 可 以 分 析 几 纳 克 的 样 品, 火 焰 离 子 化 检 验 器 (FID) 可 达 g/s, 检 测 限 为 10-9 g/s 6. 分 离 和 测 定 一 次 完 成 可 以 和 多 种 波 谱 分 析 仪 器 联 用 7. 易 于 自 动 化 分 离 和 分 析 自 动 完 成, 可 以 在 工 业 流 程 中 使 用 3. 缺 点 : 对 所 分 析 对 象 的 鉴 别 力 是 较 差 的, 一 般 来 说 色 谱 的 定 性 分 析 是 靠 保 留 值 定 性, 但 在 一 定 的 色 谱 条 件 下, 一 个 保 留 值 可 能 对 应 多 个 化 合 物, 所 以 色 谱 方 法 要 和 其 他 方 法 配 合 才 能 发 挥 更 大 的 作 用 五. 毛 细 管 电 色 谱 法 的 分 类 填 充 毛 细 管 电 色 谱 法 : 将 细 粒 径 固 定 相 填 充 在 毛 细 管 柱 中 开 管 毛 细 管 电 色 谱 法 : 把 固 定 相 的 官 能 团 键 和 在 毛 细 管 内 壁 表 面 上 而 形 成 的 色 谱 柱 六. 应 用 ( 一 ) 在 环 境 分 析 中 的 应 用 : 主 要 是 环 境 污 染 物 ( 二 ) 在 生 物 医 学 分 析 中 的 应 用 1. 蛋 白 质 分 离 分 析 结 构 鉴 定 2. 核 酸 及 其 碎 片 分 析 : 核 酸 成 分 : 核 苷 酸 核 苷 碱 基 的 分 析 核 酸 片 段 ; 核 酸 序 列 分 析 3. 糖 及 其 缀 合 物 分 析 4. 离 子 与 大 细 胞 分 析 5. 药 物 分 析 : 药 物 成 分 分 析 ; 生 物 材 料 中 药 物 及 其 代 谢 产 物 分 析 ; 手 性 分 离 6. 临 床 分 析 : 由 于 代 谢 紊 乱 而 引 起 的 代 谢 产 物 分 布 异 常 时, 多 组 分 的 同 时 检 测 ( 三 ) 在 食 品 分 析 中 的 应 用 42

43 1. 食 品 本 身 成 分 2. 食 品 添 加 剂 3. 食 品 污 染 物 ( 四 ) 在 石 油 化 工 产 品 分 析 中 的 应 用 : 染 料 等 第 四 节 基 因 芯 片 1. 什 么 是 基 因 芯 片 : 基 因 芯 片 指 对 数 以 千 记 的 DNA 片 段 同 时 进 行 处 理 分 析 的 技 术, 诸 如 基 因 组 DNA 突 变 谱 和 mrna 表 达 谱 的 检 测 等 (Trends in Biotechnology) 基 因 是 载 有 生 物 体 遗 传 信 息 的 基 本 单 位, 存 在 于 细 胞 的 染 色 体 上 将 大 量 的 基 因 片 段 有 序 地 高 密 度 地 排 列 在 玻 璃 片 或 纤 维 膜 等 载 体 上, 称 之 为 基 因 芯 片 在 一 块 1 平 方 厘 米 大 小 的 基 因 芯 片 上, 根 据 需 要 可 固 定 数 以 千 计 甚 至 万 计 的 基 因 片 段, 以 此 形 成 一 个 密 集 的 基 因 方 阵, 实 现 对 千 万 个 基 因 的 同 步 检 测 基 因 芯 片 是 90 年 代 中 期 发 展 起 来 的 一 项 前 沿 生 物 技 术, 它 融 合 了 生 命 科 学 化 学 微 电 子 技 术 计 算 机 科 学 统 计 学 和 生 命 信 息 学 等 多 种 学 科 的 最 新 技 术 要 完 成 基 因 芯 片 的 制 备 直 至 获 得 检 测 结 果, 需 要 的 设 备 包 括 点 样 仪 自 动 杂 交 系 统 扫 描 仪 和 计 算 机 工 作 站 基 因 芯 片 的 创 意 来 自 于 计 算 机 芯 片 它 和 计 算 机 芯 片 一 样, 具 有 超 微 化 高 度 集 成 信 息 贮 存 量 大 等 特 点, 所 不 同 的 是, 计 算 机 芯 片 采 用 的 是 半 导 体 集 成 电 路, 而 基 因 芯 片 是 以 基 因 片 段 作 为 探 针 进 行 工 作 所 谓 探 针, 是 利 用 碱 基 配 对 的 原 理 检 测 基 因 的 一 种 技 术 它 就 好 比 是 用 鱼 杆 钓 鱼 以 前 的 基 因 检 测 技 术 均 只 有 一 个 鱼 钩, 一 次 只 能 钓 到 一 条 鱼 ( 即 找 到 一 种 基 因 ) 而 基 因 芯 片 突 出 的 优 点 是 能 在 庞 大 的 基 因 库 中, 一 次 发 现 众 多 的 异 常 基 因, 就 好 比 在 一 根 鱼 杆 上 垂 有 成 千 上 万 个 钓 钩, 可 同 时 捕 捉 许 多 不 同 的 鱼, 从 而 实 现 快 速 多 样 化 检 测 2. 芯 片 技 术 的 主 要 特 点 基 因 芯 片 就 犹 如 一 面 超 高 倍 率 放 大 镜, 映 射 出 被 测 患 者 基 因 结 构 与 正 常 人 基 因 结 构 上 的 细 微 差 异, 从 而 诊 断 出 疾 病 归 纳 起 来, 基 因 芯 片 技 术 具 有 高 度 并 行 性 多 样 性 微 型 化 和 自 动 化 这 四 大 特 点 高 度 并 行 性 有 利 于 基 因 芯 片 所 示 图 谱 的 快 速 对 照 和 阅 读, 效 率 大 为 提 高 ; 多 样 性 则 提 供 了 样 品 的 多 指 标 测 定 ; 微 型 化 的 好 处 在 于 对 样 品 的 需 要 量 非 常 少, 而 且 还 能 节 省 试 剂 用 量, 降 低 成 本 ; 自 动 化 使 得 人 力 投 入 减 少 并 保 证 了 质 量 同 时, 它 还 具 有 操 作 简 便 信 息 综 合 处 理 能 力 强 结 果 可 靠 和 仪 器 配 套 齐 全 等 优 势, 因 而 备 受 青 睐 基 因 芯 片 的 主 要 类 型 鉴 于 信 号 的 获 取 与 解 读 具 有 通 用 性, 所 以 此 处 不 予 特 别 介 绍 从 点 阵 的 制 备 方 法 来 分 主 要 有 两 类 : 原 位 合 成 型 与 点 膜 型 原 位 合 成 型 指 根 据 预 先 设 计 的 点 阵 序 列 在 每 个 位 点 通 过 有 机 合 成 的 方 式 直 接 聚 合 得 到 所 要 求 的 探 针 分 子 聚 合 之 后 芯 片 片 基 的 制 作 即 告 结 束 该 方 法 有 两 类 : 光 引 导 原 位 聚 合 技 术 与 压 电 打 印 原 位 聚 合 技 术 光 引 导 原 位 聚 合 技 术 的 简 要 过 程 为 : 首 先 使 支 持 物 羟 基 化, 并 用 光 敏 保 护 基 团 将 其 保 护 起 来, 选 取 择 适 当 的 蔽 光 膜 (mask) 使 需 要 聚 合 的 部 位 透 光, 其 它 部 们 不 透 光 这 样, 光 通 过 蔽 光 膜 照 射 到 支 持 物 上, 受 光 部 位 的 羟 基 解 保 护, 进 而 与 单 体 分 子 共 价 结 合 因 为 合 成 所 用 的 单 体 分 子 一 端 按 传 统 固 相 合 成 方 法 活 化, 另 一 端 受 光 敏 保 护 基 的 保 护, 所 以 发 生 偶 联 的 部 位 反 应 后 仍 旧 带 有 光 敏 保 护 基 团 因 此, 每 次 通 过 控 制 蔽 光 膜 的 图 案 ( 透 光 与 不 透 光 ) 决 定 哪 些 区 域 应 被 活 化, 以 及 所 用 单 体 的 种 类 和 反 应 次 序 就 可 以 实 现 在 待 定 位 点 合 成 大 量 预 定 序 列 寡 聚 体 的 目 的 优 点 : 合 成 效 率 高, 点 阵 密 度 高 缺 点 : 设 备 昂 贵, 技 术 复 杂, 反 应 产 率 低 3. 基 因 芯 片 技 术 进 展 及 应 用 43

44 (1) 基 因 表 达 检 测 (2) 突 变 检 测 如 BRCAⅠ 基 因 外 显 子 11] CFTR 基 因 β- 地 中 海 贫 血 酵 母 突 变 菌 株 HIV-1 逆 转 录 酶 及 蛋 白 酶 基 因 等 的 突 变 检 测 等 (3) 基 因 组 多 态 性 分 析 例 如 人 类 基 因 组 单 核 苷 酸 多 态 性 的 鉴 定 及 分 型, 人 线 粒 体 16.6kb 基 因 组 多 态 性 的 研 究 等 (4) 基 因 文 库 作 图 通 过 确 定 重 叠 克 隆 的 次 序 从 而 对 酵 母 基 因 组 进 行 作 图 (5) 杂 交 测 序 (6) Etc. 基 因 芯 片 的 体 积 虽 小, 但 其 工 作 效 率 之 高, 是 任 何 传 统 的 医 学 诊 断 方 法 所 无 法 相 比 的 例 如, 胰 腺 癌 普 遍 有 一 种 或 多 种 包 括 p16 p53 和 K-ras 等 在 内 的 一 种 或 多 种 癌 基 因 和 抑 癌 基 因 结 构 异 常 改 变, 而 假 瘤 性 胰 腺 炎 一 般 没 有 这 些 变 化 用 基 因 芯 片 诊 断 技 术 对 患 者 进 行 一 次 性 采 血 化 验, 便 可 发 现 一 些 与 癌 相 关 基 因 有 无 突 变 或 缺 失, 十 分 明 确 地 将 这 两 种 疾 病 区 分 开 来 除 此 之 外, 用 基 因 芯 片 监 测 胎 儿 发 育, 有 助 于 产 前 发 现 遗 传 性 疾 病 ; 用 其 检 测 癌 相 关 基 因, 即 可 及 时 发 现 癌 症 ; 用 其 鉴 定 感 染 源, 则 能 避 免 抗 菌 素 的 滥 用 更 为 重 要 的 是, 基 因 芯 片 诊 断 技 术 有 着 慧 眼 金 睛 般 的 洞 察 力, 能 发 现 那 些 貌 似 健 康 的 人 体 内 各 种 水 平 上 蛛 丝 马 迹 的 变 化 因 此, 这 一 技 术 的 广 泛 开 展 能 查 出 绝 大 多 数 处 于 萌 牙 期 而 无 临 床 症 状 的 疾 病, 从 而 使 它 们 得 到 及 时 而 有 效 的 防 治 随 着 人 类 基 因 组 计 划 ( Human Genome Project) 即 全 部 核 苷 酸 测 序 的 即 将 完 成, 人 类 基 因 组 研 究 的 重 心 逐 渐 进 入 后 基 因 组 时 代 ( Postgenome Era) 向 基 因 的 功 能 及 基 因 的 多 样 性 [1,2] 倾 斜 通 过 对 个 体 在 不 同 生 长 发 育 阶 段 或 不 同 生 理 状 态 下 大 量 基 因 表 达 的 平 行 分 析, 研 究 相 应 基 因 在 生 物 体 内 的 功 能, 阐 明 不 同 层 次 多 基 因 协 同 作 用 的 机 理, 进 而 在 人 类 重 大 疾 病 如 癌 症 心 血 管 疾 病 的 发 病 机 理 诊 断 治 疗 药 物 开 发 等 方 面 的 研 究 发 挥 巨 大 的 作 用 它 将 大 大 推 动 人 类 结 构 基 因 组 及 功 能 基 因 组 的 各 项 基 因 组 研 究 计 划 目 前 的 应 用 范 围 主 要 包 括 基 因 表 达 和 转 录 图 谱 分 析 及 靶 序 列 中 单 碱 基 多 态 位 点 (single nucleotide polymorphism,snp) 或 突 变 点 的 检 测, 表 达 型 芯 片 的 目 的 是 在 杂 交 实 验 中 对 多 个 不 同 状 态 样 品 ( 不 同 组 织 或 不 同 发 育 阶 段 不 同 药 物 刺 激 ) 中 数 千 基 因 的 表 达 差 异 进 行 定 量 检 测, 探 针 序 列 一 般 来 自 于 已 知 基 因 的 cdna 或 EST 库, 设 计 时 序 列 的 特 异 性 应 放 在 首 要 位 置, 以 保 证 与 待 测 目 的 基 因 的 特 异 结 合, 对 于 同 一 目 的 基 因 可 设 计 多 个 序 列 不 相 重 复 的 探 针, 使 最 终 的 数 据 更 为 可 靠 基 因 单 碱 基 多 态 检 测 的 芯 片 一 般 采 用 等 长 移 位 设 计 法 [5], 即 按 靶 序 列 从 头 到 尾 依 次 取 一 定 长 度 的 互 补 的 核 苷 酸 序 列 形 成 一 探 针 组 合, 这 组 探 针 是 与 靶 序 列 完 全 匹 配 的 野 生 型 探 针, 然 后 对 于 每 一 野 生 型 探 针, 将 其 中 间 位 置 的 某 一 碱 基 分 别 用 其 它 三 种 碱 基 替 换, 形 成 三 种 不 同 的 单 碱 基 变 化 的 核 苷 酸 探 针, 这 种 设 计 可 以 对 某 一 段 核 酸 序 列 所 有 可 能 的 SNPs 位 点 进 行 扫 描 待 分 析 样 品 的 制 备 是 基 因 芯 片 实 验 流 程 的 一 个 重 要 环 节, 靶 基 因 在 与 芯 片 探 针 结 合 杂 交 之 前 必 需 进 行 分 离 扩 增 及 标 记 标 记 方 法 根 据 样 品 来 源 芯 片 类 型 和 研 究 目 的 的 不 同 而 有 所 差 异 通 常 是 在 待 测 样 品 的 PCR 扩 增 逆 转 录 或 体 外 转 录 过 程 中 实 现 对 靶 基 因 的 标 记 对 于 检 测 细 胞 内 mrna 表 达 水 平 的 芯 片, 一 般 需 要 从 细 胞 和 组 织 中 提 取 RNA, 进 行 逆 转 录, 并 加 入 偶 联 有 标 记 物 的 dntp, 从 而 完 成 对 靶 基 因 的 标 记 过 程 [11], 对 于 阵 列 密 度 较 小 的 芯 片 可 以 用 同 位 素, 所 需 仪 器 均 为 实 验 室 常 规 使 用 设 备, 易 于 开 展 相 关 工 作, 但 是 在 信 号 检 测 时, 一 些 杂 交 信 号 强 的 点 阵 容 易 产 生 光 晕, 干 扰 周 围 信 号 的 分 析 高 密 度 芯 片 的 分 析 一 般 采 用 荧 光 素 标 记 靶 基 因, 通 过 适 当 内 参 的 设 置 及 对 荧 光 信 号 强 度 的 标 化 可 对 细 胞 内 mrna 的 表 达 进 行 定 量 检 测 近 年 来 运 用 的 多 色 荧 光 标 记 技 术 可 更 直 观 地 比 较 不 同 来 源 样 品 的 基 因 表 达 差 异, 即 把 不 同 来 源 的 靶 基 因 用 不 同 激 发 波 长 的 荧 光 素 标 记, 并 使 它 们 同 时 与 基 因 芯 片 杂 交, 通 过 44

45 比 较 芯 片 上 不 同 波 长 荧 光 的 分 布 图 获 得 不 同 样 品 间 差 异 表 达 基 因 的 图 谱, 常 用 的 双 色 荧 光 试 剂 有 Cy3- dntp 和 Cy5- dntp 对 多 态 性 和 突 变 检 测 型 基 因 芯 片 采 用 多 色 荧 光 技 术 可 以 大 大 提 高 芯 片 的 第 五 节 流 式 细 胞 术 流 式 细 胞 术 是 集 激 光 技 术 电 子 物 理 技 术 光 电 测 量 技 术 电 子 计 算 机 技 术 细 胞 荧 光 化 学 技 术 单 克 隆 抗 体 技 术 为 一 体 的 一 种 新 型 高 科 技 仪 器 是 对 处 在 快 速 直 线 流 动 状 态 中 的 细 胞 或 生 物 颗 粒 进 行 多 参 数 快 速 定 量 分 析, 同 时 对 特 定 群 体 加 以 分 选 的 一 门 技 术 其 结 构 十 分 精 密 复 杂, 但 完 全 由 计 算 机 控 制, 使 用 亦 十 分 方 便 流 式 细 胞 仪 一 般 由 主 机 计 算 机 及 其 应 用 软 件 和 打 印 机 组 成 流 式 细 胞 仪 主 要 由 光 学 系 统 液 流 系 统 和 电 子 系 统 组 成 三 个 系 统 密 切 配 合, 最 终 将 信 号 传 入 计 算 机 ( 图 2) 细 胞 与 荧 光 素 标 记 的 单 克 隆 抗 体 (McAb) 或 与 某 些 分 子 有 特 殊 亲 和 力 的 荧 光 染 料 结 合 后 制 成 一 定 浓 度 的 悬 液 并 放 入 流 式 细 胞 仪 的 样 本 管 中, 细 胞 在 气 体 的 压 力 下 进 入 流 动 室 流 动 室 内 充 满 鞘 液, 在 鞘 液 的 约 束 下, 细 胞 排 成 单 列 从 流 动 室 的 喷 嘴 高 速 喷 出 成 为 细 胞 液 柱 细 胞 液 柱 与 入 射 激 光 束 垂 直 相 交, 相 交 点 为 测 量 区 通 过 测 量 区 的 细 胞 被 激 光 照 射 后 产 生 光 散 射 并 发 出 荧 光, 光 散 射 与 荧 光 穿 过 滤 光 片, 被 光 电 倍 增 管 (PMT) 或 光 电 二 极 管 接 收 并 转 变 为 电 信 号, 这 些 信 号 经 加 工 处 理 储 存 于 计 算 机 中 用 专 门 的 计 算 机 软 件 对 其 储 存 数 据 进 行 图 像 显 示 分 析 统 计 运 算, 即 可 灵 敏 准 确 特 异 地 获 得 细 胞 的 一 系 列 重 要 的 物 理 生 化 及 免 疫 学 特 征 和 功 能 状 态 等 参 数 仪 器 还 可 根 据 预 先 设 定 的 参 数 把 指 定 的 细 胞 亚 群 从 整 群 中 分 选 出 来, 供 细 胞 培 养 原 位 杂 交 DNA 分 析 等 运 用 FACSCalibur 流 式 细 胞 仪 的 特 点 1. 双 激 光 2. 四 色 荧 光 3. 自 动 化 程 度 高 精 确 度 高 4. 分 析 速 度 快 准 确 性 好 5. 灵 活 的 设 计 6. 细 胞 分 选 系 统 细 胞 富 集 系 统 : 当 代 最 先 进 的 细 胞 定 量 分 析 技 术 45

46 流 式 细 胞 术 的 应 用 细 胞 生 物 学 免 疫 学 遗 传 学 药 理 学 肿 瘤 学 血 液 学 病 理 学 临 床 检 验 植 物 学 海 洋 生 物 学 肿 瘤 学 中 的 应 用 医 学 中 应 用 最 早 的 一 个 领 域 用 荧 光 染 料 ( 碘 化 吡 啶 ;PI) 染 色 后 对 细 胞 的 DNA 含 量 进 行 分 析, 将 不 易 区 分 的 群 体 细 胞 分 成 三 个 亚 群 (G1 期,S 期 和 G2 期 ). 1. 肿 瘤 DNA 倍 体 的 分 析 2. 细 胞 DNA 周 期 分 析 3.DNA 分 析 的 临 床 意 义 4.DNA 分 析 诊 断 肿 瘤 DNA 非 整 倍 体 细 胞 峰 突 出 的 四 倍 体 细 胞 峰 SPF>10-15% S 期 比 率 与 肿 瘤 组 织 学 分 级 密 切 相 关 : 肺 癌 乳 腺 癌 Hodgkin 卵 巢 癌 直 肠 癌 甲 状 腺 癌 睾 丸 癌 脑 型 星 形 细 胞 瘤 DNA 倍 体 分 析 : 结 合 临 床 病 理 的 形 态 学 诊 断, 对 一 些 恶 性 肿 瘤 进 行 早 期 诊 断, 跟 踪 随 访 和 早 期 治 疗, 大 大 提 高 一 些 肿 瘤 的 治 愈 率 和 生 存 率 尤 其 对 一 些 细 胞 抽 吸 物 体 液 组 织 液 的 脱 落 细 胞 的 分 析, 意 义 尤 为 重 要 增 殖 状 态 分 析 : 反 映 了 肿 瘤 的 生 长 速 度 和 侵 袭 性 DNA 非 整 倍 体 的 出 现 可 能 是 癌 前 病 变 发 生 早 期 癌 变 的 一 个 重 要 标 志 在 病 理 形 态 学 不 能 做 出 诊 断 前 可 提 供 确 切 诊 断 信 息 形 态 学 表 现 良 性 的 肿 瘤 出 现 非 整 倍 体 提 示 恶 变 可 能 DNA 指 数 可 作 为 判 断 间 叶 组 织 肿 瘤 良 恶 性 的 辅 助 指 标 DNA 及 倍 体 分 析 在 某 些 肿 瘤 有 预 后 价 值 : 膀 胱 癌 前 列 腺 癌 卵 巢 癌 子 宫 内 膜 癌 皮 肤 黑 色 素 瘤 肿 瘤 细 胞 DNA 倍 体 分 析 对 病 人 预 后 的 判 断 有 重 要 作 用, 异 倍 体 肿 瘤 恶 性 病 变 的 复 发 率 高 转 移 率 高 死 亡 率 也 高, 而 二 倍 体 及 近 二 倍 体 肿 瘤 的 预 后 则 较 好 根 据 化 疗 过 程 中 肿 瘤 DNA 分 布 直 方 图 的 变 化 去 评 估 疗 效, 了 解 细 胞 动 力 学 变 化, 对 肿 瘤 化 疗 具 有 重 要 的 意 义 临 床 医 师 可 以 根 据 细 胞 周 期 各 时 相 的 分 布 情 况, 依 据 化 疗 药 物 对 细 胞 动 力 学 的 干 扰 理 论, 设 计 最 佳 的 治 疗 方 案 Apoptosis( 凋 亡 ): 增 殖 和 凋 亡 的 平 衡, 决 定 肿 瘤 的 生 长 速 度 1. 凋 亡 研 究 与 疾 病 的 关 系 HIV 感 染, 引 起 CD4+ 细 胞 程 序 性 死 亡 46

47 程 序 性 死 亡 异 常, 导 致 肿 瘤 发 生 凋 亡 是 自 身 免 疫 疾 病 的 发 病 机 制 之 一 2. 流 式 细 胞 术 检 测 凋 亡 的 研 究 内 容 Caspases 细 胞 酶 的 检 测 Annexin V 细 胞 膜 磷 脂 酰 丝 氨 酸 检 测 DNA 碎 片 分 析 :Apo-BrdU 线 粒 体 分 析 :JC-1 凋 亡 相 关 蛋 白 :Fas Bcl-2 多 药 耐 药 : 是 肿 瘤 病 人 化 疗 失 败 的 主 要 原 因,FCM 对 多 药 耐 药 基 因 ( P170 等 ) 和 凋 亡 抑 制 基 因 及 凋 亡 活 化 基 因 表 达 的 测 定, 可 为 临 床 治 疗 效 果 分 析 提 供 有 力 依 据 细 胞 表 面 抗 原 分 析 :FCM 通 过 荧 光 抗 原 抗 体 检 测 技 术 对 细 胞 表 面 抗 原 分 析, 进 行 细 胞 分 类 和 亚 群 分 析 这 一 技 术 对 于 人 体 细 胞 免 疫 功 能 的 评 估 以 及 各 种 血 液 病 及 肿 瘤 的 诊 断 和 治 疗 有 重 要 作 用 T 细 胞 分 化 抗 原 测 定 临 床 意 义 CD4+T 细 胞 下 降 常 见 于 某 些 病 毒 感 染 性 疾 病, 如 AIDS MCV 严 重 创 伤 全 身 麻 醉 大 手 术 应 用 免 疫 抑 制 剂 等 ; 升 高 见 于 类 风 湿 性 关 节 炎 活 动 期 CD8+ T 细 胞 下 降 常 见 于 类 风 湿 性 关 节 炎 Sjogren 综 合 征 重 症 肌 无 力 DM(II 型 ) 以 及 膜 型 肾 小 球 肾 炎 等 ; 升 高 见 于 传 染 性 单 核 细 胞 增 多 症 急 性 期 MCV 以 及 慢 性 乙 肝 CD4 +/CD8+ 比 值 下 降, 常 见 于 AIDS 瘤 型 麻 风 病 恶 性 肿 瘤 进 行 期 和 复 发 时 也 见 于 部 分 感 染 性 疾 病 如 传 染 性 单 核 细 胞 增 多 症 血 吸 虫 病 等 ; 增 高 见 于 类 风 湿 性 关 节 炎 活 动 期 SLE Sjogren 综 合 征 重 症 肌 无 力 膜 型 肾 小 球 肾 炎 以 及 器 官 移 植 后 排 斥 反 应 等 B 淋 巴 细 胞 表 面 标 志 物 检 测 B 细 胞 分 化 抗 原 CD19 CD20 CD21 CD22 测 定 参 考 值 :FACS:CD19+ 细 胞 11.74%±3.73% 临 床 意 义 CD19 为 全 部 B 细 胞 共 有 的 表 面 标 志, 增 高 见 于 B 细 胞 系 统 的 恶 性 种 瘤, 减 低 见 于 体 液 免 疫 缺 陷 病 NK 细 胞 活 性 测 定 临 床 意 义 活 性 升 高 常 见 于 病 毒 感 染 的 早 期,Down 综 合 征, 接 受 器 官 移 植 骨 髓 移 植 的 患 者 等 及 免 疫 增 强 剂 治 疗 患 者 活 性 降 低 常 见 于 恶 性 肿 瘤 重 症 联 合 免 疫 缺 陷 病,AIDS 和 免 疫 抑 制 剂 治 疗 者 等 肿 瘤 疗 效 观 察 及 预 后 评 价 免 疫 调 节 功 能 NK 细 胞 可 释 放 INF-γ INF-β 和 GM-CSF 等 细 胞 因 子 血 液 病 :FCM 通 过 对 外 周 血 细 胞 或 骨 髓 细 胞 表 面 抗 原 和 DNA 的 检 测 分 析, 对 各 种 血 液 病 的 诊 断 预 后 判 断 和 治 疗 起 着 举 足 轻 重 的 作 用 白 血 病 的 诊 断 和 治 疗 :FCM 采 用 各 种 抗 血 细 胞 表 面 分 化 抗 原 (CD) 的 单 克 隆 抗 体, 借 助 于 各 种 荧 光 染 料 ( 异 硫 氰 基 荧 光 素 FITC, 藻 红 蛋 白 PE 等 ) 进 行 测 定, 获 得 多 参 数 信 息, 正 确 地 判 断 出 细 胞 的 属 性 47

48 干 细 胞 表 达 CD34, 髓 系 表 达 CD13 CD14,B 细 胞 系 表 达 CD10 CD19 CD20 等,T 细 胞 系 表 达 CD2 CD3 CD5 CD7, 利 用 FCM 可 以 测 定 出 血 细 胞 表 达 各 种 抗 原 的 水 平, 协 助 临 床 确 诊 目 前 应 用 与 临 床 的 造 血 干 细 胞 移 植 技 术 在 对 急 性 白 血 病 和 一 些 疑 难 性 疾 病 治 疗 中, 可 应 用 FCM 技 术 ] 通 过 对 人 白 细 胞 抗 原 (HLA) 配 型 的 测 定, 为 异 体 干 细 胞 移 植 病 人 选 择 出 最 合 适 的 供 体 通 过 FCM 测 定 CD34 HLA-DR CD33 等 细 胞 表 面 标 志 物, 已 成 为 干 细 胞 移 植 技 术 重 要 的 监 测 手 段 阵 发 性 睡 眠 性 血 红 蛋 白 尿 症 是 一 种 造 血 干 细 胞 克 隆 病, 细 胞 CD55 CD59 抗 原 表 达 减 低 是 该 病 的 一 个 特 点 该 抗 原 属 于 血 细 胞 表 面 磷 脂 酰 肌 醇 锚 连 蛋 白 家 族, 是 重 要 的 补 体 调 节 蛋 白, 它 通 过 与 补 体 C8 C9 的 结 合 以 阻 止 补 体 膜 攻 击 复 合 物 的 形 成, 从 而 抑 制 细 胞 被 补 体 激 活 溶 解 FCM 采 用 荧 光 标 记 的 单 克 隆 抗 体 对 血 细 胞 CD59 的 表 达 做 定 量 分 析, 可 以 协 助 临 床 做 出 诊 断 并 判 断 疾 病 的 严 重 程 度 网 织 红 细 胞 计 数 是 反 映 骨 髓 造 血 功 能 的 重 要 指 标,FCM 通 过 某 些 荧 光 染 料 ( 吖 啶 橙 噻 唑 橙 等 ) 与 红 细 胞 中 RNA 结 合, 定 量 测 定 网 织 红 细 胞 中 RNA, 得 到 网 织 红 细 胞 占 成 熟 红 细 胞 的 百 分 比 FCM 还 可 以 测 量 出 网 织 红 细 胞 的 成 熟 度, 对 红 细 胞 增 殖 能 力 的 判 断 很 有 意 义 为 干 细 胞 移 植 术 后 恢 复 的 判 断 贫 血 的 治 疗 监 测 肿 瘤 病 人 放 化 疗 对 骨 髓 的 抑 制 状 况 等 提 供 依 据 在 血 栓 与 出 血 性 疾 病 中 的 应 用 血 小 板 功 能 的 测 定 : 正 常 情 况 下 血 小 板 以 分 散 状 态 在 血 管 内 运 行, 但 当 血 管 损 伤 血 流 改 变 或 受 到 化 学 物 质 刺 激 时 血 小 板 被 活 化 而 发 生 一 系 列 改 变 FCM 测 定 血 小 板 膜 糖 蛋 白 的 表 达 情 况 成 为 检 查 血 小 板 功 能 的 一 种 新 手 段 该 方 法 灵 敏 特 异 性 高, 如 果 采 用 全 血 法 测 定, 只 需 微 量 标 本, 适 合 于 儿 童 及 血 小 板 减 少 性 疾 病 的 患 者 血 小 板 活 化 使 用 流 式 细 胞 仪, 同 时 分 析 血 小 板 多 个 活 化 指 标, 灵 敏 特 异 地 检 测 全 血 中 的 血 小 板, 了 解 血 小 板 的 反 应 性 和 活 化 进 程 血 小 板 表 面 膜 糖 蛋 白 (GP):PAC-1 颗 粒 膜 GP 的 表 达 量 变 化 :CD62P 直 接 使 用 全 血, 样 本 更 接 近 生 理 状 况 操 作 步 骤 简 便 用 血 量 少 避 免 体 外 活 化 与 血 小 板 亚 群 丢 失 血 小 板 减 少 患 者 也 能 精 确 分 析 临 床 意 义 直 接 测 量 循 环 血 小 板 活 化 状 态 与 反 应 性 可 测 定 凝 血 酶 等 诱 导 剂 活 化 的 血 小 板, 即 通 过 血 小 板 体 外 活 化, 评 估 病 人 血 小 板 的 活 化 能 力 血 小 板 活 化 与 临 床 的 关 系 : 监 测 血 小 板 活 化 相 关 疾 病 过 程, 抗 血 小 板 药 物 疗 效 或 治 疗 药 物 的 影 响, 预 测 血 栓 形 成 心 肌 缺 血 ( 心 绞 痛 心 肌 梗 塞 ) 与 血 小 板 活 化 有 关 预 测 冠 状 动 脉 成 形 术 后 发 生 急 性 缺 血 事 件 的 危 险 性 缺 血 性 脑 血 管 病 与 血 小 板 活 化 有 关 子 痫 前 期 外 周 血 管 疾 病 等 均 有 血 小 板 活 力 增 加 抗 血 小 板 治 疗 疗 效 监 测 同 时 分 析 血 小 板 的 多 种 表 面 标 志 流 式 细 胞 仪 分 析, 高 度 灵 敏 使 用 全 血 分 析, 标 本 用 量 少 操 作 简 便 快 捷, 将 血 小 板 人 工 激 活 减 至 最 低 48

49 血 小 板 相 关 抗 体 的 测 定 : 免 疫 性 血 小 板 减 少 性 紫 癜 病 人 血 浆 中 可 产 生 血 小 板 自 身 抗 体, 结 合 在 血 小 板 表 面, 称 为 血 小 板 相 关 抗 体, 其 分 子 可 以 是 IgG IgA 或 IgM, 用 羊 抗 人 IgG IgA IgM 荧 光 抗 体 标 记 被 测 血 小 板,FCM 可 以 测 定 血 小 板 相 关 抗 体 含 量 直 接 法 检 测 血 小 板 表 面 的 相 关 抗 体, 间 接 法 可 测 定 血 清 中 的 相 关 抗 体 该 方 法 用 于 该 病 的 诊 断 及 治 疗 监 测, 具 有 检 测 速 度 快 灵 敏 度 高 的 优 点 T 淋 巴 细 胞 亚 群 测 定 ( 生 理 或 病 理 ):T 淋 巴 细 胞 各 亚 群 之 间 相 互 制 约 相 互 协 助, 处 于 平 衡, 一 旦 哪 一 方 增 多 或 减 少 都 影 响 另 一 方, 形 成 失 调, 导 致 各 种 免 疫 损 伤 和 疾 病 妊 娠 高 血 压 综 合 征 (prognany induced hypertension syndrome,pih) 孕 期 特 有 而 又 常 见 的 产 科 疾 病 CD3 代 表 总 T 淋 巴 细 胞, 有 二 个 主 要 亚 群 : 即 辅 助 性 T 细 胞 和 抑 制 性 T 细 胞 CD4 代 表 辅 助 性 T 细 胞 亚 群, 其 主 要 功 能 为 调 节 免 疫 反 应 的 活 性, 通 过 其 分 泌 的 淋 巴 因 子, 增 强 和 扩 大 免 疫 应 答 过 程, 辅 助 诱 导 其 它 免 疫 细 胞 如 杀 伤 性 T 细 胞,B 细 胞 来 共 同 发 挥 免 疫 作 用 ;CD8 代 表 抑 制 性 T 细 胞 亚 群, 它 能 抑 制 B 淋 巴 细 胞 产 生 抗 体, 抑 制 细 胞 毒 性 T 细 胞 的 杀 伤 功 能 妊 高 症 与 正 常 妊 娠 相 比 CD8+ 及 CD4+/CD8+ 无 明 显 差 异,CD3+ CD4+ 有 显 著 性 差 异, 提 示 妊 高 症 免 疫 失 调 可 能 与 T 辅 助 细 胞 亚 群 增 加 密 切 相 关 T 辅 助 细 胞 又 可 分 为 三 种 亚 类 : 即 促 进 细 胞 免 疫 的 Th1 细 胞 促 进 体 液 免 疫 的 Th2 细 胞 Th1 和 Th2 在 妊 娠 期 母 胎 间 细 胞 因 子 网 络 平 衡 的 调 控 中 起 重 要 作 用,Th1:Th2 的 比 例 与 妊 高 症 存 在 重 要 联 系 因 此, 从 免 疫 学 方 面 分 析 PIH 病 因, 探 索 治 疗 方 案 将 是 一 个 重 要 的 突 破 口 何 种 因 素 直 接 导 致 PIH 尚 无 定 论 分 析 淋 巴 细 胞, 特 别 是 T 辅 助 性 细 胞 亚 群 的 比 例 是 一 个 研 究 方 向 在 强 直 性 脊 柱 炎 中 的 应 用 : 强 直 性 脊 柱 炎 (ANKY LOSING SPONDY LITIS,AS) 是 目 前 已 知 与 HLA 有 强 关 联 的 一 种 疾 病 HLA-B27 试 剂 盒 与 HLA-B27 自 动 软 件 配 套 使 用, 为 我 们 提 供 了 一 种 快 速 准 确 的 检 测 病 人 T 淋 巴 细 胞 表 面 的 HLA-B27 抗 原 表 达 的 方 法 与 传 统 方 法 相 比, 用 流 式 细 胞 仪 检 测 HLA B27 的 表 达, 无 须 分 离 淋 巴 细 胞, 操 作 简 单, 自 动 化 程 度 高 ; 灵 敏 度 可 达 100%, 特 异 性 达 97.4%; 结 果 稳 定, 不 同 仪 器 之 间, 不 同 实 验 之 间 可 比 性 高 49

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