第 1 期鲁保才, 等 : 干扰性小核糖核酸靶向抑制趋化因子受体 4 基因表达对鼻咽癌细胞增殖和侵袭的影响 31 adjacenttisueswas0.522±0.047,0.053±0.011respectively.theexpresionofcxcr4mrnaandproteininnaso

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1 30 第 35 卷第 1 期 2018 年 1 月新乡医学院学报 JournalofXinxiangMedicalUniversity Vol.35 No.1 Jan.2018 欁欁本文引用 : 鲁保才, 卢振民, 张爱民, 等. 干扰性小核糖核酸靶向抑制趋化因子受体 4 基因表达对鼻咽癌细胞增殖和侵袭的影响 [J]. 新乡医学院学报,2018,35(1):30 34.DOI: /xxyxyxb 干扰性小核糖核酸靶向抑制趋化因子受体 4 基因表达对鼻咽癌细胞增殖和侵袭的影响鲁保才, 卢振民, 张爱民, 余文发, 连荣, 史海旭, 李靖, 王慧敏, 袁东杰 ( 新乡医学院第一附属医院耳鼻咽喉科, 河南卫辉 ) 欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁临床研究摘要 : 目的探讨干扰性小核糖核酸 (sirna) 靶向抑制鼻咽癌细胞趋化因子受体 4(CXCR4) 基因表达对癌细胞增殖侵袭的影响及机制方法收集新乡医学院第一附属医院 2014 年 1 月至 2016 年 12 月保存的鼻咽癌及相应的癌旁组织标本各 42 例, 采用实时荧光定量聚合酶链式反应 (RT PCR) 和 Westernblot 法分别检测鼻咽癌及相应的癌旁组织中 CXCR4mRNA 及蛋白表达将人鼻咽癌细胞系 CNE 2Z 分为空白对照组 ( 细胞未做任何处理 ) 阴性对照组 ( 细胞转染无义 sirna 序列 ) 和 CXCR4 转染组 ( 细胞转染 CXCR4 的靶向 sirna 序列 ), 转染 48h 后采用 Westernblot 法检测各组细胞中 CXCR4 基质金属蛋白酶 (MMP) 2 MMP 9 β 连环蛋白 (β catenin) 和细胞周期素 D1(CyclinD1) 蛋白表达 ; 应用细胞计数试剂盒和 Transwel 小室分别检测细胞的增殖和侵袭能力结果鼻咽癌及相应的癌旁组织中 CXCR4mRNA 表达分别为 5.526± ±0.091, 蛋白表达分别为 0.522± ±0 011, 鼻咽癌组织中 CXCR4mRNA 及蛋白表达均显著高于癌旁组织 (P<0.05) CXCR4 转染组细胞中 CXCR4 MMP 2 MMP 9 β catenin CyclinD1 蛋白表达及细胞存活率细胞侵袭数均显著低于空白对照组和阴性对照组 (P<0.05), 但空白对照组和阴性对照组细胞中 CXCR4 MMP 2 MMP 9 β catenin CyclinD1 蛋白表达及细胞存活率细胞侵袭数比较差异均无统计学意义 (P>0.05) 结论抑制鼻咽癌 CNE 2Z 细胞中 CXCR4 基因表达可显著降低肿瘤细胞的增殖与侵袭能力, 其机制可能与下调 Wnt/β catenin 信号通路有关关键词 : 鼻咽癌 ; 趋化因子受体 4 基因 ; 干扰性小核糖核酸 ; 基质金属蛋白酶 2; 基质金属蛋白酶 9;β 连环蛋白 ; 细胞周期素 D1;Wnt/β catenin 信号通路中图分类号 :R739.6 文献标志码 :A 文章编号 : (2018) Efectoftargetedinhibitionoftheexpresionofchemokinereceptor4genebysmalinterferingRNA ontheinvasionandproliferationofnasopharyngealcarcinomacels LUBao cai,luzhen min,zhangai min,yuwen fa,lianrong,shihai xu,lijing,wanghui min, YUANDong jie (DepartmentofOtorhinolaryngology,theFirstAfiliatedHospitalofXinxiangMedicalUniversity,Weihui453100,HennanProv ince,china) Abstract: Objective Toinvestigatetheefectanditsmechanismoftargetedinhibitionoftheexpresionofchemokine receptor4(cxcr4)genebysmalinterferingrna(sirna)ontheinvasionandproliferationofnasopharyngealcarcinoma cels.methods Forty twonasopharyngealcarcinomatisueanditsadjacenttisuesinthefirstafiliatedhospitalofxinxiang MedicalUniversityfromJanuary2014toDecember2016werecolected.TheexpresionofCXCR4mRNAandproteininnaso pharyngealcarcinomatisueanditsadjacenttisuesweredetectedbyrealtime polymerasechainreactionandwesternblot. ThehumannasopharyngealcarcinomacellineCNE 2Zweredividedintoblankcontrolgroup,negativecontrolgroupandCX CR4transfectiongroup.Thecelsinblankcontrolgroupwerenotgivenanytreatment;thecelsinnegativecontrolgroupwere transfectednonsensesirnasequence;thecelsincxcr4transfectiongroupweretransfectedcxcr4targetingsirna se quence.theproteinexpresionofcxcr4,matrixmetaloproteinases 2(MMP 2),MMP 9,β catenin,cyclind1weredetected bywesternblotingafter48hoftransfection.theproliferationandinvasionabilityofthecelsweredetectedbycelcounting kitandtranswelchamber.results TheexpresionofCXCR4mRNAinnasopharyngealcarcinomatisueandadjacenttis sueswas5.526±0.143,0.953±0.091respectively;theexpresionofcxcr4proteininnasopharyngealcarcinomatisueand DOI: /xxyxyxb 收稿日期 : 基金项目 : 河南省科技攻关计划资助项目 ( 编号 : ) 作者简介 : 鲁保才 (1981-), 男, 河南周口人, 硕士, 主治医师, 主要从事耳鼻咽喉头颈部肿瘤的诊治通信作者 : 余文发 (1972-), 男, 河南信阳人, 博士, 主任医师, 主要从事耳鼻咽喉头颈部肿瘤的防治 ;E mail:venturerlu@163.com

2 第 1 期鲁保才, 等 : 干扰性小核糖核酸靶向抑制趋化因子受体 4 基因表达对鼻咽癌细胞增殖和侵袭的影响 31 adjacenttisueswas0.522±0.047,0.053±0.011respectively.theexpresionofcxcr4mrnaandproteininnasopha ryngealcarcinomatisueweresignificantlyhigherthanthoseinadjacenttisues(p<0 05).Theproteinexpresionof CXCR4,MMP 2,MMP 9,β catenin,cyclind1incels,celsurvivalrateandthenumberofcelinvasionincxcr4trans fectiongroupweresignificantlylowerthanthoseintheblankcontrolgroupandnegativecontrolgroup(p<0 05);however, therewasnosignificantdiferenceinaboveindexesbetweentheblankcontrolgroupandnegativecontrolgroup(p>0.05). Conclusion InhibitingofCXCR4geneexpresioninnasopharyngealcarcinomaCNE 2Zcelscansignificantlydecreasethe proliferationandinvasionabilityofcancercels,andthemechanismmayberelatedtodownregulationofwnt/β cateninsig nalingpathway. Keywords: nasopharyngealcarcinoma;cheminereceptor4gene;smalinterferingrna;matrixmetaloproteinase 2; matrixmetaloproteinase 9;β catenin;cyclind1;wnt/β cateninsignalingpathway 鼻咽癌是一种地方性高发的鼻咽部鳞状上皮癌, 常发生在鼻咽部顶壁和咽隐窝主要治疗方法是放射治疗或放射治疗联合化学治疗, 但对于晚期病灶转移及局部复发患者的治疗效果很差, 且不良反应重 [1] 鼻咽癌的发生是包括环境因素癌基因抑癌基因基因的易感性埃巴二氏病毒 (Ep stein Barvirus,EBV) 在内的多因素作用的结果因此, 阐明鼻咽癌发生的分子机制及寻找新的治疗靶点是该病治疗的关键趋化因子受体 4(chemine receptor4,cxcr4) 是基质细胞衍生因子 1 唯一的趋化因子受体, 参与各种生理及病理过程 [2] 近年来研究显示, 乳腺癌胰腺癌肝癌等多种肿瘤中 CX CR4 高表达, 其表达与肿瘤细胞的播散正常细胞的恶性转化及肿瘤细胞的非随机转移等有关 [3 5] 也有研究指出, 鼻咽癌中 CXCR4 也有高表达, 其表达与鼻咽癌转移有关 [6] 本研究拟采用 RNA 干扰技术, 通过靶向沉默人鼻咽癌细胞系 CNE 2Z 中 CX CR4 基因的表达, 观察其对鼻咽癌细胞增殖侵袭的影响, 并进一步研究其作用机制 1 资料与方法 1.1 一般资料收集新乡医学院第一附属医院 2014 年 1 月至 2016 年 12 月保存的鼻咽癌及相应的癌旁组织各 42 例, 男 28 例, 女 14 例, 年龄 19~85 (42.2±12.1) 岁鼻咽癌患者经病理证实均为鼻咽部低分化鳞癌, 均未接受任何治疗, 且为首次确诊, 所有样本的实验均经过医院伦理委员会审查 1.2 试剂和仪器人鼻咽癌细胞系 CNE 2Z 购自广州吉妮欧生物科技有限公司, 胎牛血清 RPMI 1640 培养基购于美国 Hyclone 公司,Transwel 小室购自美国 Corning 公司, 细胞计数试剂盒 (cel countingkit 8,CCK 8) 和二喹啉甲酸 (bicinchoninic acid,bca) 蛋白定量试剂盒购自江苏碧云天生物技术研究所,Lipofectamine TM 2000 试剂盒购自美国 In vitrogen 公司, 基质金属蛋白酶 (matrixmetaloprotei nase,mmp) 2 MMP 9 β 连环蛋白 (β catenin) 细胞周期素 D1(CyclinD1) 抗体均购自美国 Abcam 公司 ; 多功能酶标仪 (SynergyHT) 购自美国 Bio Tec 公司, 流式细胞仪购自美国 BectonDickinson 公司 1.3 实时荧光定量聚合酶链式反应 (realtime pol ymerasechainreaction,rt PCR) 检测鼻咽癌及癌旁组织中 CXCR4mRNA 表达参照 Trizol 试剂盒操作说明提取患者鼻咽癌组织和癌旁组织中的总 RNA, 反转录为 cdna, 参照 GenBank 中的基因序列, 利用 PrimerPremier6.0 引物设计软件设计目的基因 CXCR4 及内参基因磷酸甘油醛脱氢酶 (glyc eraldehyde 3 phosphate dehydrogenase,gapdh) 的 RT PCR 引物, 送上海生工生物工程有限公司合成 CXCR4 引物序列 : 上游为 5 TGGCCTTATCCTGCCT GGTAT 3, 下游为 5 GGAGTCGATGCTGATCCCAAT 3 内参 GAPDH 引物序列 : 上游为 5 GAAGGT GAAGGTCGGAGTC 3, 下游为 5 GAAGATGGTGAT GGGAT TTC 3 定量 PCR 扩增条件 :95 2min; 95 30s;55 30s,72 60s, 以上共 35 个循环 72 延伸 10min,4 保存根据相对模板量 2 -ΔΔCt 计算 CXCR4mRNA 相对表达量 1.4 细胞转染人鼻咽癌细胞系 CNE 2Z 在 37,95% 湿度, 含体积分数 5% CO 2 培养箱中用含体积分数 10% 胎牛血清的 RPMI 1640 细胞培养基培养收集对数生长期的细胞, 以 L -1 接种于 6 孔细胞培养板中, 细胞生长至孔底面积达 85% ~90% 时进行转染, 分为空白对照组 ( 细胞未做任何处理 ) 阴性对照组 ( 细胞转染无义 sirna 序列 ) 和 CXCR4 转染组 ( 细胞转染 CXCR4 的靶向 sir NA 序列 ) 具体操作按照 Lipofectamine TM 2000 试剂盒的操作说明进行

32 新乡医学院学报 htp://www.xxyxyxb.com 2018 年第 35 卷 1.

9 β catenin CyclinD1( 均按照 1 500 稀释 ) 和 GAPDH(1 1000 稀释 ) 一抗,4 过夜, 洗膜缓冲液 (trisbufered saline tween,tbst) 洗涤 (3 次 10min), 加入 1 5000 稀释的辣根过氧化物酶 (horseradishperoxidase,hrp) 标记的羊抗鼠 IgG,37 孵育 1h, 洗膜后在暗室 X

3 32 新乡医学院学报 htp:// 年第 35 卷 1.5 Westernblot 法检测鼻咽癌组织癌旁组织及各组细胞中 CXCR4 MMP 2 MMP 9 β catenin 及 CyclinD1 蛋白表达用细胞裂解液分别处理鼻咽癌组织癌旁组织和细胞中的蛋白,BCA 试剂盒检测蛋白浓度, 取 50μg 上样蛋白至十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳分离, 转移至硝酸纤维素膜, 质量分数 5% 脱脂奶粉封闭, 分别加入 CXCR4 MMP 2 MMP 9 β catenin CyclinD1( 均按照稀释 ) 和 GAPDH( 稀释 ) 一抗,4 过夜, 洗膜缓冲液 (trisbufered saline tween,tbst) 洗涤 (3 次 10min), 加入稀释的辣根过氧化物酶 (horseradishperoxidase,hrp) 标记的羊抗鼠 IgG,37 孵育 1h, 洗膜后在暗室 X 片曝光 1min 左右, 显影定影后成像拍照 1.6 CCK 8 检测细胞增殖能力以 L -1 浓度将对数生长的 CNE 2Z 细胞接种至 96 孔细胞培养板, 每孔设置 3 个复孔, 培养 24h 进行同步化处理, 分别于转染后 48h 每孔细胞中加入 CCK 8 试剂 10μL, 培养箱孵育 1h 酶标仪测定 450nm 的吸光度, 重复 3 次细胞增殖率 =( 转染组细胞 / 对照组细胞 ) 100% 1.7 Transwel 小室检测细胞侵袭能力 4 融化 Matrigel 胶, 与 RPMI 1640 培养液按照 1 4 比例稀释, 取 50μL 稀释后的胶铺在 Transwel 小室上层常温放置 10~15min 风干, 转染 48h 的各组细胞以每孔个细胞接种于 Transwel 小室的上层, 下室中加入含体积分数 10% 胎牛血清的 RPMI 1640 培养基, 培养 18h, 洗涤, 棉球轻轻擦掉上室内的细胞, 甲醛固定 30min, 结晶紫染色 5min, 磷酸盐缓冲液冲洗, 随机取不同的 6 个视野 ( 200) 观察 ; 并记录穿膜的细胞数, 重复 3 次, 求均值 1.8 统计学处理应用 SPSS21.0 软件进行统计分析, 实验数据以均数 ± 标准差 ( x±s) 珋表示, 各组间差异比较采用单因素方差分析,P<0.05 为差异有统计学意义 2 结果 2.1 CXCR4mRNA 和蛋白在鼻咽癌及癌旁组织中的表达结果见图 1 鼻咽癌及相应的癌旁组织中 CXCR4 mrna 表达分别为 ± ±0 091, 蛋白表达分别为 0.522± ±0.011, 鼻咽癌组织中 CXCR4mRNA 及蛋白表达均显著高于癌旁组织, 差异有统计学意义 (P< 0 05) A:CXCR4mRNA 表达 ;B:CXCR4 蛋白表达图 1 CXCR4 在鼻咽癌中的表达 Fig.1 ExpresionofCXCR4in human nasopharyngeal carcinomatisue 2.2 转染 CXCR4 sirna 后 CNE 2Z 细胞中 CX CR4 蛋白表达结果见图 2 空白对照组阴性对照组和 CXCR4 转染组细胞中 CXCR4 蛋白表达分别为 0.383± ±0.029 和 0.037±0 010, CXCR4 转染组细胞中 CXCR4 蛋白表达显著低于空白对照组和阴性对照组, 差异有统计学意义 (P< 0 05), 阴性对照组细胞中 CXCR4 蛋白表达与空白对照组比较差异无统计学意义 (P>0.05) 图 2 各组 CNE 2Z 细胞中 CXCR4 蛋白表达 Fig.2 ExpresionofCXCR4proteininCNE 2Z celsin eachgroup 2.3 各组细胞增殖能力比较空白对照组阴性对照组和 CXCR4 转染组的细胞存活率分别为 (95.62±3.23)% (93.45±3.13)% 和 (61.18± 4 44)%,CXCR4 转染组细胞存活率显著低于空白对照组和阴性对照组, 差异有统计学意义 (P< 0 05), 阴性对照组细胞存活率与空白对照组比较差异无统计学意义 (P>0.05) 2.4 各组细胞侵袭能力比较空白对照组阴性对照组和 CXCR4 转染组细胞 Transwel 侵袭数分别为 225±15 217±14 和 102±12,MMP 2 蛋白表达分

第 1 期鲁保才, 等 : 干扰性小核糖核酸靶向抑制趋化因子受体 4 基因表达对鼻咽癌细胞增殖和侵袭的影响 33 别为 0.475±0.042 0.498±0.041 和 0.223± 0 027,MMP 9 蛋白表达分别为 0.481±0.036 0.462±0 034 和 0.

4 第 1 期鲁保才, 等 : 干扰性小核糖核酸靶向抑制趋化因子受体 4 基因表达对鼻咽癌细胞增殖和侵袭的影响 33 别为 0.475± ±0.041 和 0.223± 0 027,MMP 9 蛋白表达分别为 0.481± ±0 034 和 0.330±0 010,CXCR4 转染组细胞侵袭数 MMP 2 和 MMP 9 蛋白表达均显著低于空白对照组和阴性对照组, 差异有统计学意义 (P< 0.05), 阴性对照组细胞侵袭数 MMP 2 和 MMP 9 蛋白表达与空白对照组比较差异均无统计学意义 (P>0 05) MMP 蛋白表达结果见图 3 图 3 各组 CNE 2Z 细胞中 MMP 2 和 MMP 9 蛋白表达 Fig.3 ExpresionofMMP 2andMMP 9proteininCNE 2Zcelsineachgroup 2.5 转染 CXCR4 sirna 对 Wnt/β catenin 信号通路中 β catenin 和 CyclinD1 蛋白表达的影响结果见图 4 空白对照组阴性对照组和 CXCR4 转染组细胞中 β catenin 蛋白表达分别为 0.412± ±0.038 和 0.174±0.025,CyclinD1 蛋白表达分别为 0.153± ±0.022 和 0.036±0.010,CXCR4 转染组细胞中 β catenin 和 CyclinD1 蛋白表达均显著低于空白对照组和阴性对照组, 差异有统计学意义 (P<0.05), 阴性对照组细胞中 β catenin 和 CyclinD1 蛋白表达与空白对照组比较差异均无统计学意义 (P>0.05) 图 4 各组 CNE 2Z 细胞中 β catenin 和 CyclinD1 蛋白表达 Fig.4 Expresionofβ cateninandcyclind1proteinin CNE 2Zcelsofeachgroup 3 讨论趋化因子及其受体在大部分肿瘤中有表达, 其表达影响肿瘤的发生发展, 因此, 以趋化因子或其受体为靶点, 通过抑制趋化因子受体的信号传导而调节趋化因子系统的功能对于恶性肿瘤的防治具有重要意义研究显示,CXCR4 是在组织中表达最广泛的细胞趋化因子受体之一, 与其配体结合激活后可形成假伪足, 影响多种恶性肿瘤的生长侵袭迁移 [7] 在多种恶性肿瘤中有 CXCR4 基因的异常表达 [8 9] 研究显示, 抑制 CXCR4 基因的表达可显著降低卵巢癌胃癌肾癌等多种肿瘤细胞的增殖侵袭及迁移能力 [10 12] CXCR4 基因在鼻咽癌中也呈现高表达, 其表达与鼻咽癌的转移放射治疗史有关, 可作为判断鼻咽癌预后的指标 [13] 但 CXCR4 对鼻咽癌侵袭及其机制研究尚未清楚 RNA 干扰是由 RNA 介导的转录后沉默调控, 具有高度的特异性和有效性, 是研究基因功能有效的途径 [14] 肿瘤细胞的侵袭能力是恶性肿瘤的一个重要生物学特性, 也是治疗失败的重要因素恶性肿瘤细胞的侵袭是由多步骤多阶段控制的复杂过程, 其中细胞外基质降解是侵袭的关键 MMPs 可降解细胞外基质及基膜中的大多数蛋白质, 在肿瘤中由于其表达增强, 促进细胞外基质降解, 进而增强细胞的转移侵袭能力 [15 16] MMP 2 和 MMP 9 在 MMPs 家族中研究的较多, 既往研究表明, 鼻咽癌中 MMP 2 和 MMP 9 过表达与鼻咽癌的浸润生长淋巴转移不良预后等有关, 抑制其表达可降低鼻咽癌细胞的侵袭和迁移能力 [17 18] 本实验通过转染 CXCR 4 sir NA 抑制鼻嗯癌细胞中 CXCR4mRNA 和蛋白水平, 抑制了 MMP 2 和 MMP 9 的表达, 显著降低了鼻咽癌细胞的侵袭能力, 提示 CXCR4 基因在鼻咽癌的侵袭能力可能与其调控 MMP 2 和 MMP 9 密切相关 Wnt/β catenin 信号通路由 Wnt 蛋白核内转录因子跨膜受体胞质蛋白和下游的靶基因组成, 是一条经典的 Wnt 信号通路, 与肿瘤衰老和退化骨质疏松等疾病有关 [19] β catenin 是 Wnt 信号通路的核心原件, 在细胞膜及细胞质中均有分布, 当有 Wnt 信号刺激时, 可导致 β catenin 的大量聚集并进入细胞核, 最终激活和启动下游的 CyclinD1 c myc 基因的表达, 从而影响肿瘤的发生发展既往研究认为, 抑制 Wnt/β catenin 信号通路可降低人鼻咽癌细胞的增殖侵袭, 促进细胞的凋亡能力 [20] 本研究结果提示, 抑制 CXCR4 表达后 β catenin CyclinD1 蛋白表达水平显著降低, 同时鼻咽癌细胞的增殖和侵袭能力也对应降低因此,CXCR4 基因可能通过 Wnt/β catenin 信号通路参与到鼻咽癌细胞的恶性增殖和侵袭能力的调控 ; 另外, 本研究也观察到鼻咽癌细胞的恶性侵袭能力与 MMP 2 和 MMP 9 表达相

5 34 新乡医学院学报 htp:// 年第 35 卷关, 但其具体调控方式和机制仍需进一步探讨综上所述, 抑制鼻咽癌 CXCR4 表达可通过下调 Wnt/β catenin 信号通路来降低鼻咽癌细胞的增殖及侵袭能力 CXCR4 基因可能成为鼻咽癌检测的一个重要指标及作为分子治疗的潜在靶点, 但其作用机制仍需进一步深入研究参考文献 : [1] BLANCHARDP,LEEA,MARGUETS,etal.Chemotherapyand radiotherapyinnasopharyngealcarcinoma:anupdateofthemac NPCmeta analysis[j].lancetoncol,2015,16(6): [2] QINL,KUFAREVAI,HOLDENLG,etal.Crystalstructureofthe chemokinereceptorcxcr4incomplexwithaviralchemokine [J].Science,2015,347(6226): [3] YIT,ZHAIB,YUY,etal.Quantitativephosphoproteomicanalysis revealssystem widesignalingpathwaysdownstreamofsdf 1/CX CR4inbreastcancerstem cels[j].procnatlacadsciusa, 2014,111(21):E2182 E2190. [4] 李鹏, 刘冰, 王志向, 等. 肾癌转移相关基因 CXC 趋化因子受体 4 核定位信号的结构分析与功能鉴定 [J]. 新乡医学院学报,2017,34(2): [5] LIUJY,CHIANGT,LIUCH,etal.DeliveryofsiRNAusingCX CR4 targetednanoparticlesmodulatestumormicroenvironmentand achievesapotentantitumorresponseinlivercancer[j].molther, 2015,23(11): [6] LUJ,LUOH,LIUX,etal.miRNA 9targetsCXCR4andfunctions asapotentialtumorsuppresorinnasopharyngealcarcinoma[j]. Carcinogenesis,2013,35(3): [7] TREONSP,CAOY,XUL,etal.SomaticmutationsinMYD88 andcxcr4aredeterminantsofclinicalpresentationandoveral survivalinwaldenstr m macroglobulinemia[j].blood,2014,123 (18): [8] CHENY,RAMJIAWANRR,REIBERGERT,etal.CXCR4inhi bitionintumormicroenvironmentfacilitatesanti programmeddeath receptor 1immunotherapyinsorafenib treatedhepatocelularcarci nomainmice[j].hepatology,2015,61(5): [9] GRAVINAGL,MANCINIA,MUZIP,etal.CXCR4pharmacogi calinhibitionreducesboneandsofttisuemetastaticburdenbyaf fectingtumorgrowthandtumorigenicpotentialinprostatecancer preclinicalmodels[j].prostate,2015,75(12): [10] LIUW,WANGY,WANGH,etal.Anticancerefectsofchemo kinereceptor4(cxcr4)genesilencedbycxcr4 sirna in nudemicemodelofovariancancer[j].celbiochem Biophys, 2014,70(3): [11] KINOSHITA H,YASHIRO M,FUKUOKA T,etal.Difuse type gastriccancercelsswitchtheirdriverpathwaysfromfgfr2sig nalingtosdf1/cxcr4axisinhypoxictumormicroenvironments [J].Carcinogenesis,2015,36(12): [12] TANGB,TANGF,LIY,etal.Clinicopathologicalsignificanceof CXCR4expresioninrenalcelcarcinoma:ameta analysis[j]. AnnSurgOncol,2015,22(3): [13] TAOH,WEIY,WANGC,etal.Expresionofchemokinerecep torcxcr4iscloselycorelatedwithclinicaloutcomeinhuman nasopharyngealcarcinoma[j].tumourbiol,2016,37(5): [14] DENGY,WANGCC,CHOYKW,etal.Therapeuticpotentials ofgenesilencingbyrnainterference:principles,chalenges,and newstrategies[j].gene,2014,538(2): [15] 毛治尉, 李巧玲, 王平, 等. 曲美他嗪对慢性心力衰竭患者心功能和血清 MMP 9,TIMP 1 的影响 [J]. 中国老年学杂志, 2015,35(10): [16] MERDADA,KARIMS,SCHULTENHJ,etal.Expresionofma trixmetaloproteinases(mmps)inprimaryhumanbreastcancer: MMP 9asapotentialbiomarkerforcancerinvasionandmetasta sis[j].anticancerres,2014,34(3): [17] SUNW,LIUDB,LIW W,etal.Interleukin 6promotesthemi grationandinvasionofnasopharyngealcarcinomacellinesand upregulatestheexpresionofmmp 2andMMP 9[J].IntJOn col,2014,44(5): [18] ZERGOUNAA,ZEBBOUDJA,SELLAM SL,etal.IL 6/NOS2 inflammatorysignalsregulatemmp 9andMMP 2activityanddis easeoutcomeinnasopharyngealcarcinomapatients[j].tumour Biol,2016,37(3): [19] HUANGJ,XIAOD,LIG,etal.EphA2promotesepithelial mes enchymaltransitionthroughthewnt/β cateninpathwayingastric cancercels[j].oncogene,2014,33(21): [20] WUD,ZHANGY,HUANGJ,etal.Salinomycininhibitsprolifer ationandinducesapoptosisofhumannasopharyngealcarcinoma celinvitroandsuppresestumorgrowthinvivo[j].biochem BiophysResCommun,2014,443(2): ( 本文编辑 : 徐刚珍英文编辑 : 孟月 )

12 (autophagy),imagej,,, 3 [1-4] (self-eating) Transwelinvasion, 20μmol L -1 LY A549 [5] PI3K/AKT 24h,PBS, [6-8],, ml -1 ( ) 600μL

12 (autophagy),imagej,,, 3 [1-4] (self-eating) Transwelinvasion, 20μmol L -1 LY A549 [5] PI3K/AKT 24h,PBS, [6-8],, ml -1 ( ) 600μL ( )2017 57 5JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)2017,Vol.57No.5 11 LY294002, (, 330006) : LY294002 PI3K/AKT 0 10 15 20 25 30μmol L -1 LY294002(LY294002 ) A549,PBS CCK8 LY294002 A549 ; Westernblot

第 1 期 鲁保才, 等 : 干扰性小核糖核酸靶向抑制趋化因子受体 4 基因表达对鼻咽癌细胞增殖和侵袭的影响 31 adjacenttisueswas0.522±0.047,0.053±0.011respectively.theexpresionofcxcr4mrnaandproteininnaso

第 1 期鲁保才, 等 : 干扰性小核糖核酸靶向抑制趋化因子受体 4 基因表达对鼻咽癌细胞增殖和侵袭的影响 31 adjacenttisueswas0.522±0.047,0.053±0.011respectively.theexpresionofcxcr4mrnaandproteininnaso