第卷 3 $ 家族是由以及这四个成员组成该家族蛋白可以参与肿瘤细胞增殖浸润以及血管生成研究显示家族蛋白与多种肿瘤的临床病例特征及预后相关如胃癌乳腺癌及非小细胞肺癌等国内外目前关于家族蛋白在结直肠癌中的报道还相对较少而且绝大多数是关于单个家族成员的研究如等关于家

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运知招水
5 years ago
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1 第卷第期年月!"#!# $%# 临床医学 $ 家族蛋白在结直肠癌中的表达及其临床意义刘传渊钟武夏来阳王建肖荷芳余路虎江西省赣州市人民医院南昌大学附属赣州医院胃肠疝外科病理科检验科江西赣州摘要目的通过检测表皮生长因子受体家族蛋白在结直肠癌组织中的表达水平探讨家族蛋白在结直肠癌发生发展中的作用及其临床意义方法采用免疫组化及荧光定量方法检测例手术切除的结直肠癌组织及正常肠黏膜组织中家族蛋白及转录水平的表达情况并分析家族蛋白表达水平与结直肠癌临床病理特征之间的关系结果结果显示结直肠癌组织中的家族蛋白基因的表达水平明显高于正常组织并且与基因的表达强度与肿瘤浸润深度淋巴转移和 5 分期有显著相关性免疫组织化学结果显示家族蛋白的表达水平明显高于正常组织其中的阳性表达率为 & 9 的阳性表达率为 9 的阳性表达率为 9 的阳性表达率为 9 和蛋白的表达强度与浆膜浸润和淋巴结转移显著相关而与患者年龄性别组织学类型 5 分期肿瘤部位及大小均无关系结论家族蛋白与结直肠癌的发生发展可能有关与有可能成为临床上评价结直肠癌恶性程度的指标关键词表皮生长因子受体家族结直肠癌临床意义中图分类号文献标志码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结直肠癌的高发病率和致死率使得其在恶性肿瘤中的排名位于前列全球每年新增病例高达收稿日期修回日期作者简介刘传渊男汉族硕士副主任医师研究方向结直肠肿瘤的基础与临床诊疗万目前临床上还没有研发出治疗结直肠癌的特效药物因而导致其死亡率仍在不断上升这给临床工作带来了巨大的挑战研究表明信号通路参与了结直肠癌的发生发展以及转移等生物学过程表皮生长因子受体 ( 2.)6)$2.$3(.43 $$)4)6

2 第卷 3 $ 家族是由以及这四个成员组成该家族蛋白可以参与肿瘤细胞增殖浸润以及血管生成研究显示家族蛋白与多种肿瘤的临床病例特征及预后相关如胃癌乳腺癌及非小细胞肺癌等国内外目前关于家族蛋白在结直肠癌中的报道还相对较少而且绝大多数是关于单个家族成员的研究如等关于家族蛋白在结直肠癌中的表达情况更是鲜有研究本研究采用实时定量法及免疫组织化学方法分别检测家族蛋白在例结直肠癌组织及例正常组织中的表达情况并分析其表达水平与结直肠癌一些主要临床病理特征之间的相关性以期为结直肠癌的临床治疗提供依据 * 资料与方法 *+* 标本来源选取年月年 & 月期间江西省赣州市人民医院胃肠疝外科收治的结直肠癌手术切除标本例结肠癌 & 例直肠癌例男性 & 例女性例平均年龄 >& 岁有淋巴结转移者 & 例无淋巴结转移者例所有研究对象在术前均未经放化疗治疗同时选取例正常的结直肠黏膜组织作为对照组所有肿瘤标本均经福尔马林固定石蜡包埋染色组织学确诊所有参与者均签署知情同意书 *+, 主要试剂实验所用鼠抗人单克隆抗体兔抗人单克隆抗体鼠抗人单克隆及抗体均购自 "!4.2 公司 # 试剂盒购自 *.8 公司 $ < 试剂和引物 + $ 3$) 反转录以及实时荧光定量试剂盒购自美国 ))6 )$. 公司 *+- 方法 *+-+* 免疫组化染色法及结果判定采用免疫组织化学 # 二步法严格按照说明书进行操作家族蛋白出现棕黄色颗粒的部位分别是表达于细胞膜和细胞质部位表达于细胞膜部位和主要在胞质着色实 & 验结果判定参照许良中及 1))$ 等的方法根据标本显色程度判断阳性强度标本无色为分淡黄色为分棕黄色为分棕黑色为分其中为不表达 A A 为阳性表达 A 为低表达 A A 为高表达所有切片均由名病理科专家进行结果判定核实 *-, 结直肠癌组织家族蛋白 2" 表达测定采用实时定量 ).3 2) 技术 " 提取和逆转录反应严格按照试剂盒操作步骤进行紫外分光光度仪测定所提取核酸浓度和纯度进行扩增采用 $ 2)$ 设计引物引物由上海生工生物工程公司合成以.43 基因作为内参基因引物序列详见表反应条件为 D 预变性 2 D 变性 # D 退火 # D 延伸 # 共个循环最后 D 延伸 2 表 * 6 各引物对序列引物引物序列 $.$ """" "" "" ) )$#)"" " " " " $.$" " "" " ) )$#) " " "" " $.$ """ " " " ) )$#)"" " " " "" """ $.$ """ "" ) )$#)""" " "" " "43 $.$"" " ) )$#)"""" "" *+. 统计学分析采用 / // 软件进行统计学处理并行检验以为差异有统计学意义, 结果,+*$ 家族在结直肠组织中的表达实时荧光定量检测结果显示结直肠癌组织中和 2" 的表达均明显高于正常结直肠黏膜组织中的表达水平值均和 2" 在癌组织中的表达与正常黏膜组织中的表达无明显差别值均,+, 结直肠癌组织中 $ 家族表达与临床病理参数间的关系根据家族 2" 在结直肠癌组织中的表达情况即和 2 " 的表达水平与正常组织中的表达水平有显著性差异我们进一步分析了和 2" 的表达水平与患者临床病理参数之间的关系结果显示与表达与结直肠癌患者淋巴结转移肿瘤浸润深度 5 分期间均有明显相关性值均而与患者的性别年龄肿瘤部位肿瘤大小肿瘤分化程度等临床病理参数之间没有明显的相关性值均见表

3 第卷刘传渊钟武夏来阳等家族蛋白在结直肠癌中的表达及其临床意义表, 结直肠癌中 $ 家族的表达与临床病理参数的关系临床病例参数阳性表达高表达低表达值值阳性表达高表达低表达值值年龄岁 & & & 性别男 & & 女 & 部位结肠癌 & 直肠癌 & & 肿瘤大小 42 & & & & & & & 组织学类型高 A 中分化 & 低分化 & 浆膜浸润无有 & & & && 淋巴结转移无 & 有 & & & & && 5 分期 A 期 A 期 & & & 组内比较,+-$ 家族蛋白在结直肠癌和正常肠黏膜组织中的表达情况家族蛋白在例结直肠癌组织中见不同程度的表达的阳性表达率为 &; 9 的阳性表达率为 9 的阳性表达率为 9 的阳性表达率为 9 而在正常肠黏膜组织中均未见家族蛋白表达见表,+.$ 家族蛋白与结直肠癌临床病理特征的相关性由表可以得出家族蛋白阳性表达率与患者年龄性别组织学类型 5 分期肿瘤部位及大小均无关系与蛋白表达与结直肠癌患者浆膜浸润和淋巴结转移显著相关见表,+/ 结直肠癌组织中 $ 家族蛋白表达与患者术后生存期的关系从患者接受手术日开始对患者进行电话随访随访时间为 & 个月至随访结束 & 例患者存活例患者死亡无失访病例本研究分析了与表达与患者预后之间的关系结果显示结直肠癌组织中与表达与患者术后总生存时间均无关见表表 -$ 家族蛋白在结直肠癌组织中的表达 9 家表达水平阳性族蛋白 A A A 表达率 & &

4 & 第卷表.$ 家族蛋白与结直肠癌临床病理特征的关系临床病例参数年龄岁 & & & & & & & 性别男 & 女 & & && & 部位结肠癌 & & 直肠癌 & & 肿瘤大小 42 & & & & & & 组织学类型高 A 中分化低分化 5 分期 A 期 A 期 & & & 浆膜浸润无有 & & & & & 淋巴结转移无有 & & & 组内比较表 / 结直肠癌组织中 $ 家族蛋白表达与患者术后总生存时间的关系 9 分组年生存率年生存率年生存率生存时间月阳性 & &> 阴性 & > 值 & 值阳性 & && > 阴性 &&& &> 值值 & - 讨论结直肠癌是一种常见的恶性消化道肿瘤具有高发病率高病死率预后差以及易发生转移等临床特征近年来分子靶向药物治疗已成为癌症治疗的热点因此研究肿瘤的分子靶向药物具有重要的临床意义肿瘤血管生成是实体肿瘤进展的一个关键点因此调节血管生成的信号分子必然会成为目前研究的热点表皮生长因子受体属于酪氨酸激酶家族在细胞增殖凋亡血管生成和转移中起重要作用是型受体酪氨酸激酶它可通过引起酪氨酸蛋白激酶途径的激活而促进肿瘤细胞生长以及肿瘤血管生成本研究结果显示在结

5 第卷刘传渊钟武夏来阳等家族蛋白在结直肠癌中的表达及其临床意义直肠癌组织中的阳性率为 & 9 2" 的阳性表达率为 &9 在研究结果与国内外多数研究结果相一致临床病例特征相关分析表明蛋白的表达与浆膜浸润和淋巴结转移密切相关这说明的阳性表达可以促进肿瘤侵袭与增长因此它可以作为临床上判断结直肠癌转移和预后的指标蛋白可以参与正常细胞的信号转导它不仅可以促进肿瘤细胞生长还可以促进肿瘤血管生成这主要是因为蛋白可以上调血管内皮生长因子 = 的表达实验结果显示蛋白在结直肠癌中的阳性率为 9 其 2" 的阳性表达率也相对较低此外病理特征分析表明蛋白阳性表达率与患者的年龄性别组织学类型 5 分期肿瘤部位及大小浆膜浸润和淋巴结转移等临床病例特征均无关系这可能提示蛋白可能与结直肠癌的发生发展过程无相关性蛋白具有调节多种组织细胞的生物学功能如近期研究发现蛋白可作为信号受体调节多种肿瘤组织的生物进程本研究中蛋白阳性表达率高达 9 检测显示其 2" 在结直肠癌组织的表达水平也相对较高且明显高于其他家族蛋白的表达水平同时在结直肠癌组织中的表达程度与结直肠癌的浆膜浸润和淋巴结转移具有相关性因此蛋白亦可作为结直肠癌临床预测结直肠癌预后的一项重要指标基因又称 )$! 基因是家族蛋白的第四个成员在不少肿瘤组织中存在过度表达的现象也是引起肿瘤发生的重要因素本研究发现在结直肠癌组织中的阳性表达率为 9 蛋白 2" 的阳性表达率在结直肠癌组织中也较高为 9 本研究未发现与结直肠癌临床病理特征之间的关联性蛋白目前在肿瘤中的研究还相对较少这可能是由于其特殊的结构决定的此外在肿瘤中的阳性表达不稳定而且缺乏一定的特异性和灵敏度综上所述本研究结果表明家族蛋白在结直肠癌组织中均有不同程度的阳性表达而在正常组织中未见家族蛋白的表达说明家族蛋白可能参与了结直肠癌的病理发展过程提示家族蛋白有望成为临床上治疗结直肠癌的新靶点此外本研究没有发现家族蛋白表达与结直肠癌患者术后生存期之间的关系虽然本研究系统地分析了家族蛋白在结直肠癌及其正常组织中的表达水平也发现了一些家族蛋白表达水平与结直肠癌某些病理特征之间的相关性但是本研究也存在一些不足之处比如样本量相对较小因此在后续研究中本研究将会使用更多的临床数据和更大的样本量来验证这一研究结果此外没有发现家族蛋白分子表达之间的相关性因此在后续的研究中仍然会继续这一部分的研究以期为结直肠癌的分子靶向治疗提供更好的临床依据参考文献 $ $" && / $/ " #( $' ) ))# ( $'" (& # $' $ "$/ ( $) "#.$'$1%'$!(!-)&$&+ / ( '$ $%)!'!(-$' ( $%$( $())' ( -!'/$ %&$(!)*%$)!$"# $" && & # 杨柳鹏张子恒等 # 以表皮生长因子受体 ', 为靶点的抗体药物研究进展 # 新乡医学院学报 & &# 王露何常胡斌等 # 结直肠癌组织中 $0 及蛋白表达及意义 # 贵州医科大学学报 # 张伟华郝丽萍 # 大肠癌的分子靶向治疗进展 # 兰州大学学报医学版 & # & 许良中 # 实用肿瘤病理方法学 # 上海医科大学出版社 # 3$($'# +''$()% )&!"! /$)&!-!'/$+' (()' )+ /!' "/'!.$$" $()* )& (,'$)'(!/(!)&$'!")+/!'# '$)( $' $'$ ) && # 刘汉富范桂香 # 饮食结肠直肠腺瘤和结肠直肠癌 # 国外医学医学地理分册 # 李文婷赵峰 # 和在大肠癌中的表达及其临床意义 # 新疆医科大学学报 & # '"!+&'5 $'! ) ($) "# % )&*) ' $) ( $().$$"(!'/ " )!( ( )+/!' '+ +%) 0$-'!/,$( &)!,$$ #(!) ' $)&&# $&! $' #' $) ( %'!)$ ((( $' )&$' %* ( )&$'!"$!-)&$(!( ) ' $) # ' ( $' # 邓在春张敦华 #$', 基因和肿瘤 # 中国肿瘤临床 & &#

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