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妮刁
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1 第 35 卷第 3 期 2018 年 3 月新乡医学院学报 JournalofXinxiangMedicalUniversity Vol.35 No.3 Mar 欁欁本文引用 : 张英, 马瑞霞, 杜艳云, 等.MicroRNA 15b 在子宫内膜癌组织中的表达及其对子宫内膜癌细胞增殖的影响 [J]. 新乡医学院学报,2018,35(3): DOI: /xxyxyxb MicroRNA 15b 在子宫内膜癌组织中的表达及其对子宫内膜癌细胞增殖的影响张英 1, 马瑞霞 1, 杜艳云 2 3, 史亚男 (1. 新乡市中心医院妇瘤一科, 河南新乡 ;2. 河南省荣康医院妇产科, 河南新乡 ;3. 中山大学第一附属医院妇产科, 广东广州 ) 欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁基础研究摘要 : 目的探讨 microrna 15b(miR 15b) 在子宫内膜癌组织中的表达及其对子宫内膜癌细胞增殖的影响方法选取 2013 年 2 月至 2017 年 2 月新乡市中心医院收治的 87 例子宫内膜癌患者手术切除的子宫内膜癌组织, 另选取 45 例因子宫肌瘤行子宫全切术患者的正常子宫内膜组织作为对照, 采用实时荧光定量聚合酶链反应 (PCR) 检测子宫内膜癌组织和正常子宫内膜组织中 mir 15b 的表达, 并分析 mir 15b 表达与患者临床病理特征的关系培养人子宫内膜癌 HEC 1A 细胞, 随机分为 mir 15b 模拟物组对照序列组和空白对照组, 采用实时荧光定量 PCR 检测各组细胞中 mir 15b 表达, 四甲基偶氮唑盐 (MTT) 法检测各组细胞增殖能力, 流式细胞术检测各组细胞凋亡率和细胞周期变化结果子宫内膜癌组织和正常子宫内膜组织中 mir 15b 相对表达量分别为 1.32± ±0.16, 子宫内膜癌组织中 mir 15b 相对表达量低于正常子宫内膜组织 (t=46.184,p<0.05); 子宫内膜癌组织中 mir 15b 相对表达量与国际妇产科联合会分期肌层浸润深度和淋巴结转移有关 (P<0.05), 与年龄组织学类型分化程度是否累及淋巴管和血管无关 (P>0.05) 与空白对照组和对照序列组比较,miR 15b 模拟物组人子宫内膜癌细胞中 mir 15b 相对表达量显著增加 (P<0.05), 培养 h 时细胞增殖能力均降低 (P<0.05), 细胞凋亡率升高 (P<0.05), G 0 +G 1 期细胞比例显著增加 (P<0.05), 而 G 2 +M 期细胞比例减少 (P<0.05) 空白对照组与对照序列组人子宫内膜癌细胞中 mir 156 相对表达量培养 h 时细胞增殖能力细胞凋亡率及 G 0 +G 期 S 期和 G 2 +M 期细胞比例比较差异均无统计学意义 (P>0.05) 结论 mir 15b 在子宫内膜癌组织中呈低表达, 上调子宫内膜癌细胞中 mir 15b 基因表达可抑制细胞增殖, 其机制可能与阻滞细胞周期及促进细胞凋亡有关关键词 : 子宫内膜癌 ;microrna 15b; 细胞增殖 ; 细胞凋亡中图分类号 :R 文献标志码 :A 文章编号 : (2018) ExpresionofmicroRNA 15binendometrialcarcinomaanditsefectonproliferationofendometrial carcinomacels ZHANGYing 1,MARui xia 1,DUYan yun 2,SHIYa nan 3 (1.DepartmentofGynecologicOncologyOneDivision,XinxiangCentralHospital,Xinxiang453000,HenanProvince,China; 2.DepartmentofObstetricsandGynecology,RongkangHospitalofHenanProvince,Xinxiang453000,HenanProvince,China; 3.DepartmentofObstetricsandGynecology,theFirstAfiliatedHospitalofSunYat senuniversity,guangzhou510000,guang dongprovince,china) Abstract: Objective ToinvestigatetheexpresionofmicroRNA 15b(miR 15b)inendometrialcarcinomaandits efectonproliferationofendometrialcarcinomacels.methods Eighty sevencasesofendometrialcancertisueswereselected astheresearchobjectsfrompatientswithendometrialcancerundergoingendometrialcancerstagingsurgeryinxinxiangcentral HospitalfromFebruary2013toFebruary2017.Another45casesofnormalendometrialtisuesfrompatientswithuterinefi broidsundergoinglinehysterectomywerecolectedasthecontrol.theexpresionsofmir 15binendometrialcarcinomatisues andnormalendometrialtisuesweredetectedbyreal timequantitativepolymerasechainreaction(pcr)andrelationshipbe tweenthemir 15bexpresionandclinicopathologicalfeaturewasanalyzed.TheHEC 1Acelswereculturedandwererandom lydividedintomir 15bmimicsgroup,controlsequencegroupandblankcontrolgroup.TheexpresionofmiR 15binHEC 1A celswasdetectedbyreal timequantitativepcr.tetramethylazolazoleblue(mtt)asaywasusedtodetectthecelprolifera tion.flowcytometrywasusedtodetecttheapoptoticrateandcelcycle.results TherelativeexpresionlevelsofmiR 15bin DOI: /xxyxyxb 收稿日期 : 基金项目 : 广东省自然科学基金资助项目 ( 编号 :2014A ) 作者简介 : 张英 (1979-), 女, 河南新乡人, 硕士, 主治医师, 研究方向 : 妇科肿瘤

2 178 新乡医学院学报 htp:// 年第 35 卷 endometrialcarcinomatisuesandnormalendometrialtisueswere1.32±0.13and2.49±0.16,respectively.therelativeex presionlevelofmir 15binendometrialcarcinomatisueswaslowerthanthatinthenormalendometrialtisues(t=46.184, P<0.05).TherelativeexpresionlevelofmiR 15binendometrialcarcinomawascorelatedwithInternationalfederationof gynecologyandobstetricsstaging,myometrialinvasionandlymphnodemetastasis(p<0.05),butitwasnotcorelatedwith age,histologicaltype,diferentiateddegree,infiltratinglymphveselandbloodveselornot.comparedwiththeblankcontrol groupandthecontrolsequencegroup,therelativeexpresionlevelofmir 15binmiR 15bmimicsgroupwassignificantlyin creased(p<0.05),thecelproliferationabilitiesatcultured24,48,72and96hweredecreased(p<0.05),whiletheapop tosisrateincreased(p<0.05),theproportionofg 0 +G 1 phasewassignificantlyincreased,whiletheproportionofg 2 +M phasewasdecreased(p<0.05).therewasnosignificantdiferenceintherelativeexpresionlevelofmir 156,thecelpro liferationabilityatcultured12,24,48,72,96h,theapoptosisrate,theproportionofg 0 +G 1,SandG 2 +Mphasebetweenthe blankcontrolgroupandthecontrolsequencegroup(p>0.05).conclusion mir 15bislowexpresioninendometrialcarci nomatisue.up regulationofmir 15bexpresioninendometrialcarcinomacelscaninhibitcelproliferation,itmayberelated toblockcelcycletopromotecelapoptosis. Keywords: endometrialcarcinoma;microrna 15b;celproliferation;celapoptosis 子宫内膜癌是影响女性健康的常见恶性肿瘤, 约占生殖系统恶性肿瘤的 30%, 近年来发病率呈升高趋势, 且出现低龄化 [1] 由于该肿瘤恶性程度高侵袭力强复发转移率高 [2], 已成为威胁女性健康的重要疾病微小 RNA(microRNA,miRNA) 作为机体内广泛存在的非编码短链 RNA [3], 在细胞增殖分化生长凋亡器官发育代谢等多种生理过程中发挥重要作用 [4 8] 研究表明,miRNA 可发挥癌基因或抑癌基因的作用而参与多种恶性肿瘤发生进展 [9 12] mir 15b 是 mir 15 家族的重要成员, 在调节细胞凋亡中发挥重要作用 [13] 本研究对子宫内膜癌组织中 mir 15b 表达进行分析, 探讨其与子宫内膜癌患者临床病理特征的关系, 并通过上调子宫内膜癌 HEC 1A 细胞中 mir 15b 表达, 观察其对细胞增殖的影响, 以期为子宫内膜癌发病机制研究提供基础资料 1 材料与方法 1.1 一般资料选取 2013 年 2 月至 2017 年 2 月在新乡市中心医院行子宫内膜癌分期手术治疗的 87 例患者为研究对象, 年龄 31~75(55.7±11.5) 岁, 均经病理学检查确诊为子宫内膜癌, 且术前均未接受放射化学治疗国际妇产科联盟 (federation internationalofgynecologyandobstetrics,figo) 分期 [14] :Ⅰ ~Ⅱ 期 71 例,Ⅲ ~Ⅳ 期 16 例 ; 组织学类型 :Ⅰ 型 67 例,Ⅱ 型 20 例 ; 组织分化程度 : 低分化 31 例, 中高分化 56 例 ; 肌层浸润深度 : 1/2 肌层 25 例,<1/2 肌层 62 例 ; 发生淋巴结转移 15 例, 其中累及淋巴管 13 例患者均留取新鲜子宫内膜癌组织, 置于液氮中保存于 -80 冰箱备用同时, 选取 45 例因子宫肌瘤行子宫全切术患者的正常子宫内膜组织作为对照, 年龄 33~74(56.2±11.9) 岁 2 组患者年龄比较差异无统计学意义 (P> 0 05) 本研究通过医院伦理委员会批准, 研究对象均知情同意 1.2 细胞试剂与仪器人子宫内膜癌 HEA 1A 细胞购自中国科学院上海细胞学研究所 ;TRIzol 总 RNA 提取试剂盒 Lipfectamine2000 转染试剂盒购自美国 Invitrogen 公司, 达尔伯克改良伊格尔培养基 /F12 培养基 (Dulbecco smodifiedeaglemedium: nutrientmixturef 12,DMEM/F12) 胎牛血清胰蛋白酶购自美国 HyClone 公司,miR 15b 及内参引物均由上海生工生物公司设计合成,miR 15b 模拟物及对照序列均由福州迈新生物技术开发有限公司设计合成, 反转录聚合酶链反应 (polymerasechainre action,pcr) 试剂盒购自日本 TaKaRa 公司, 四甲基偶氮唑蓝 (tetramethylazolazoleblue,mtt) 细胞增殖试剂盒购自南京建成生物工程研究所,AnnexinV 异硫氰酸荧光素 (fluoresceinisothiocyanate,fitc)/ 碘化丙锭 (propidium iodide,pi) 细胞凋亡检测试剂盒购自北京百奥莱博科技有限公司,PI 购自美国 Sigma 公司 ; 实时荧光定量 PCR 仪购自美国 ABI 公司, 流式细胞仪购自美国 Bio Rad 公司 1.3 实时荧光定量 PCR 检测子宫内膜癌和正常子宫内膜组织中 mir 15b 表达取子宫内膜癌和正常子宫内膜组织, 研磨后, 加入细胞裂解液, 用 TRIzol 总 RNA 提取试剂盒提取细胞中总 RNA 并检测纯度和浓度取总 RNA2μg, 以 mir 15b 茎环结构 :5 GTCGTATCCAGTGCGTGTCGTGGAGTCGGCA ATTGCACTGGATACGACTGTAAAC 3 进行反转录, 以 cdna 为模板进行 PCR mir 15b 上游引物序列为 5 ATGAACTTTCTCTGTCTTGG 3, 下游引物序列为 5 TCACCGCCTCGGCTTGTCACA 3 ;U6 上游引物序列为 5 GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT 3, 下游引物序列为 5 CGCTTCACGAATTTGCGT GTCAT 3 PCR 反应条件 :92 5min,92 30s, 60 30s,76 30s, 连续 36 个循环 ; 每个样本均设 3 个平行反应复孔采用 2 - Ct 法计算子宫内膜

3 第 3 期张英, 等 :MicroRNA 15b 在子宫内膜癌组织中的表达及其对子宫内膜癌细胞增殖的影响 179 癌和正常子宫内膜组织中 mir 15b 相对表达量 1.4 细胞培养与处理细胞培养和分组将人子宫内膜癌 HEC 1A 细胞置于含体积分数 10% 胎牛血清的 DMEM/F12 培养基中, 于含体积分数 5% CO 2 37 培养箱中恒温培养待细胞融合度在 80% 以上时, 胰蛋白酶消化, 传代培养, 取对数生长期细胞, 利用 Lipfectamine2000 转染试剂盒进行转染, 根据转染物不同分为 mir 15b 模拟物组对照序列组和空白对照组 mir 15b 模拟物组细胞转染 mir 15b 模拟序列为 5 TGTAAAC CATGATGTGCTGCTA 3 ; 对照序列组细胞转染对照序列为 5 GTGTAACACGTCTATACGCCCA 3 ; 空白对照组细胞不作任何处理转染后继续恒温培养实时荧光定量 PCR 检测各组人子宫内膜癌细胞中 mir 15b 表达取各组转染后培养 48h 细胞, 加入细胞裂解液, 其余操作步骤与 1.3 项相同 MTT 法检测各组人子宫内膜癌细胞增殖能力取各组细胞, 胰蛋白酶消化后, 重悬成单细胞悬液, 调整细胞密度为 L -1, 按每孔 100μL 细胞悬液接种于 96 孔板, 继续恒温培养分别于培养 h 时, 将 20μLMTT(5g L -1 ) 加入各孔, 孵育 4h, 将孔内上清液弃去, 各孔加入 150μL 二甲基亚砜, 振荡 15min, 待结晶物完全溶解后, 用酶标仪于 570nm 波长处检测吸光度值, 并根据吸光度值判定细胞增殖能力重复实验 3 次流式细胞术检测各组人子宫内膜癌细胞凋亡率取各组细胞, 胰蛋白酶消化后, 调整细胞浓度为 L -1, 将细胞接种于 6 孔板, 继续培养 48h, 以 1500r min -1 离心 10min, 收集细胞, 磷酸盐缓冲液 (phosphatebufersaline,pbs) 冲洗 3 次, 用 1 结合缓冲液 100μL 重悬细胞, 分别加入 Annexin V FITC 和 PI 各 5μL, 室温下避光孵育 20min, 于 60min 内上机检测细胞凋亡情况流式细胞术检测各组细胞周期取各组细胞, 胰蛋白酶消化后, 调整细胞浓度为 L -1, 将细胞接种于 6 孔板, 继续培养 48h, 以 1500r min -1 离心 10min, 室温下用体积分数 70% 乙醇固定 60min, 以 500r min -1 离心 5min, 加入 PI 和 RNA 酶, 孵育 60min, 于 60min 内上机检测各组细胞周期 1.5 统计学处理应用 SPSS17.0 软件进行数据分析, 计量资料以均数 ± 标准差 ( x±s) 珋表示,2 组间比较采用 t 检验, 多组间比较采用单因素方差分析, 两两比较采用 LSD t 检验,P<0.05 为差异有统计学意义 2 结果 2.1 子宫内膜癌和正常子宫内膜组织中 mir 15b 表达比较子宫内膜癌组织和正常子宫内膜组织中 mir 15b 相对表达量分别为 1.32±0.13,2.49± 0 16, 子宫内膜癌组织中 mir 15b 相对表达量低于正常子宫内膜组织, 差异有统计学意义 (t=46.184, P<0.05) 2.2 子宫内膜癌组织中 mir 15b 表达与患者临床病理特征的关系结果见表 1 子宫内膜癌组织中 mir 15b 相对表达量与患者的年龄组织学类型分化程度是否累及淋巴管和血管无关 (P>0.05), 与 FIGO 分期肌层浸润深度和淋巴结转移有关 (P< 0.05) 表 1 子宫内膜癌组织中 mir 15b 相对表达量与患者临床病理特征的关系 Tab.1 Relationshipbetweentherelativeexpresionlevelof mir 15binendometrialcarcinomatisuesandclinicopatho logicalfeaturesofpatients ( x±s) 珔指标 n mir 15b 表达量 t P 年龄 / 岁 ±0.15 < ± FIGO 分期 Ⅰ ~Ⅱ 期 ±0.16 Ⅲ ~Ⅳ 期 ± 组织学类型 Ⅰ 型 ±0.10 Ⅱ 型 ± 分化程度低分化 ±0.09 中高分化 ± 肌层浸润深度 1/2 肌层 ±0.09 <1/2 肌层 ± 淋巴结转移是 ±0.11 否 ± 累及淋巴管和血管是 ±0.09 否 ± 各组人子宫内膜癌细胞中 mir 15b 表达比较 mir 15b 模拟物组对照序列组和空白对照组人子宫内膜癌细胞中 mir 15b 相对表达量分别为 2 73± ±0.10 和 1.31±0.16, 空白对照组与对照序列组 mir 15b 相对表达量比较差异无统计学意义 (P>0.05);miR 15b 模拟物组人子宫内膜癌细胞中 mir 15b 相对表达量高于空白对照组和对照序列组, 差异有统计学意义 (P<0.05) 2.4 各组人子宫内膜癌细胞增殖能力比较结果见表 2 空白对照组对照序列组和 mir 15b 模拟物组细胞培养 h 时的增殖能力两两比较差异均有统计学意义 (P<0 05) mir 15b 模拟物组人子宫内膜癌细胞培养 12h 时细胞增殖能力与空白对照组和对照序列组比较差异无统计学意义 (P>0.05) mir 15b 模拟物组人子宫内膜癌细胞培养 h 时细胞增殖能力低于空白对照组和对照序列组, 差异均有统计学意义 (P<0 05); 空白对照组与对照

4 180 新乡医学院学报 htp:// 年第 35 卷序列组细胞培养 h 时细胞增殖能力比较差异均无统计学意义 (P>0.05) 表 2 不同培养时间 3 组人子宫内膜癌细胞增殖能力比较 Tab.2 Comparisonoftheproliferationabilityofendometrialcancercelsamongthethreegroupsatdiferenttimepoints ( 珔 x±s) 组别 n 人子宫内膜癌细胞增殖能力 12h 24h 48h 72h 96h F P 空白对照组 ± ±0.15 a 0.62±0.13 ab 0.71±0.10 abcd 0.90±0.12 abcd 对照序列组 ± ±0.08 a 0.58±0.15 ab 0.67±0.15 abc 0.82±0.08 abcd mir 15b 模拟物组 ± ±0.03 aef 0.41±0.03 abef 0.49±0.09 abcef 0.61±0.10 abcdef F P 注 : 与培养 12h 时比较 a P<0.05; 与培养 24h 比较 b P<0.05; 与培养 48h 比较 c P<0.05; 与培养 72h 比较 d P<0.05; 与空白对照组比较 e P<0.05; 与对照序列组比较 f P< 各组人子宫内膜癌细胞凋亡率比较结果见图 1 mir 15b 模拟物组对照序列组和空白对照组人子宫内膜癌细胞凋亡率分别为 (15.5±3.0)% (6.5±1.6)% 和 (8.1±2.6)%,3 组人子宫内膜癌细胞凋亡率比较差异有统计学意义 (F=22.090, P=0.000) 与空白对照组和对照序列组比较, mir 15b 模拟物组人子宫内膜癌细胞凋亡率升高, 差异有统计学意义 (P<0.05) 空白对照组与对照序列组人子宫内膜癌细胞凋亡率比较差异无统计学意义 (P>0.05), 2.6 各组人子宫内膜癌细胞周期变化比较结果见表 3 和图 2 mir 15b 模拟物组对照序列组和空白对照组 G 0 +G 1 G 2 +M 期细胞比例比较差异均有统计学意义 (P<0.05), 而 S 期细胞比例比较差异无统计学意义 (P>0.05); 空白对照组 G 0 +G 1 G 2 +M 期细胞比例与对照序列组比较差异无统计学意义 (P> 0 05); 与空白对照组和对照序列组比较,miR 15b 模拟物组 G 0 +G 1 期细胞比例显著增加, 而 G 2 +M 期细胞比例显著减少, 差异均有统计学意义 (P<0 05) 表 3 各组人子宫内膜癌细胞周期变化比较 Tab.3 Comparisonofcelcyclechangesofendometrial carcinomacelsineachgroup 组别 G 0 +G 1 /% S/% G 2 +M/% 空白对照组 47.9± ± ±3.1 对照序列组 53.1± ± ±2.2 mir 15b 模拟物组 63.3±3.6 ab 31.2± ±1.6 ab A: 空白对照组 ;B: 对照序列组 ;C:miR 15b 模拟物组图 1 流式细胞术检测各组细胞凋亡情况 Fig.1 Celapoptosiswasdetectedbyflowcytometry F P 注 : 与空白对照组比较 a P<0.05; 与对照序列组比较 b P<0.05 A: 空白对照组 ;B: 对照序列组 ;C:miR 15b 模拟物组图 2 流式细胞术检测各组细胞周期变化 Fig.2 Celcyclechangeswasdetectedbyflowcytometryineachgroup 程度高侵袭力强, 肿瘤复发转移率高, 多数患者预 3 讨论后不良 [16] 研究表明, 子宫内膜癌组织中 mirna 子宫内膜癌作为好发于绝经后女性的常见恶性表达谱发生改变, 可能在子宫内膜癌的发病机制中肿瘤, 发病因素较为复杂, 且近年来出现发病率升发挥潜在作用 [17] mir 15b 作为 mirna 重要类型, 高发病年龄年轻化趋势 [15], 同时, 由于该肿瘤恶性参与了多种恶性肿瘤的发生发展,miR 15b 既可以

5 第 3 期张英, 等 :MicroRNA 15b 在子宫内膜癌组织中的表达及其对子宫内膜癌细胞增殖的影响 181 发挥抑癌基因功能参与胰腺癌 [18] [19] 口腔癌等恶性肿瘤的发生, 又可以作为癌基因参与胃癌结直肠癌等恶性肿瘤的发生, 提示 mir 15b 可能通过不同的调控机制而参与不同恶性肿瘤的发生同时, mir 15b 又可以作为判定肿瘤患者预后的标志物 [20] 本研究结果显示, 子宫内膜癌组织中 mir 15b 相对表达量低于正常子宫内膜组织, 说明 mir 15b 在子宫内膜癌组织中呈低表达, 提示 mir 15b 可能在子宫内膜癌发生中发挥抑癌基因的功能本研究结果显示, 子宫内膜癌组织中 mir 15b 相对表达量与 FIGO 分期肌层浸润深度和淋巴结转移有关, 在 FIGO 分期 Ⅲ ~Ⅳ 期肌层浸润深度 1/2 肌层和发生淋巴结转移的子宫内膜癌组织中呈低表达, 说明 mir 15b 参与了子宫内膜癌病程进展, 随着子宫内膜癌病情进展,miR 15b 表达逐渐减少, 进一步提示 mir 15b 可能在子宫内膜癌发生中发挥抑癌基因的功能本研究为进一步探讨 mir 15b 在子宫内膜癌进程中的作用, 采用转染 mir 15b 模拟物的方式提高子宫内膜癌细胞中 mir 15b 的表达, 结果显示,miR 15b 模拟物组子宫内膜癌细胞中 mir 15b 相对表达量显著增加, 提示构建的细胞模型成功 MTT 实验结果显示, 与空白对照组和对照序列组比较,miR 15b 模拟物组子宫内膜癌细胞培养 h 时细胞增殖能力降低, 说明上调子宫内膜癌细胞中 mir 15b 表达可有效降低细胞增殖能力本研究结果显示,miR 15b 模拟物组子宫内膜癌细胞凋亡率显著高于空白对照组和对照序列组, 说明上调子宫内膜癌细胞中 mir 15b 表达可促进细胞凋亡进一步对细胞周期进行检测显示, mir 15b 模拟物组子宫内膜癌细胞 G 0 +G 1 期细胞比例显著增加, 说明上调 mir 15b 可能通过细胞周期阻滞而最终促进细胞凋亡的发生综上所述,miR 15b 在子宫内膜癌组织中呈低表达, 且参与了子宫内膜癌病程进展, 上调子宫内膜癌细胞中 mir 15b 表达可抑制细胞增殖, 其机制可能与阻滞细胞周期及促进细胞凋亡有关参考文献 : [1] SIMONYA,HANSENEJ,CHRISTENSENSB,etal.Incidenceof cancerinadolescentidiopathicscoliosispatientstreated25years previously[j].eurspinej,2016,25(10): [2] ZANFAGNINV,FERREROA,BIGLIAN,etal.Theroleofsur geryinrecurentendometrialcancer[j].expertrevanticancert her,2016,16(7): [3] 郝义, 孙笑, 刘玉秋, 等.miRNA146a 在视网膜色素上皮细胞老化及老年性黄斑变性中的功能研究 [J]. 眼科新进展,2017,37 (2): [4] 黄芳延, 杨蕾, 尤梁慧, 等.miR 1908 过表达的人脂源性多能干细胞基因表达谱分析 [J]. 中华实用儿科临床杂志,2016,31 (7): [5] 季青山, 俞茜, 孙思勤, 等.miR 34a/SIRT1 在 H 2 O 2 诱导人晶状体上皮细胞氧化应激中的表达 [J]. 眼科新进展,2017,37 (8): [6] 汤有才, 李恩耀, 魏明, 等.MicroRNA 146a 对寻常型银屑病患儿血 CD4 + T 淋巴细胞的调控作用 [J]. 中华实用儿科临床杂志,2016,31(17): [7] LIUX,LIUX,WUY,etal.MicroRNAsinbiofluidsarenoveltools forbladdercancerscreening[j].oncotarget,2017,8(19): [8] 符春艳.miR 93 及 mir 21 在糖尿病视网膜病变患者中的表达及其临床价值 [J]. 眼科新进展,2017,37(12): [9] VARAMOC,OCCELLIM,VIVENZAD,etal.miRNAsandtheir roleinthecorelationbetweenschizophreniaandcancer(review) [J].MolMedRep,2016,14(6): [10] 丁肖媛, 蔡红, 王嵩, 等. 玉屏风散对支气管哮喘小鼠微小 RNA 表达的影响 [J]. 中华实用儿科临床杂志,2016,31(4): [11] 李娜, 曹娟, 郁继国, 等.miR26a 对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖凋亡迁移和侵袭的影响及机制研究 [J]. 眼科新进展,2017, 37(7): [12] 马岳, 伍俊, 廖旺, 等.miRNA 100 通过抑制羧基末端区域小磷酸化酶样蛋白表达促进人白血病细胞 HL 60 增殖 [J]. 中华实用儿科临床杂志,2016,31(3): [13] ZHAOC,WANGG,ZHUY,etal.AberantregulationofmiR 15binhumanmalignanttumorsanditsefectsonthehalmarksof cancer[j].tumourbiol,2016,37(1): [14] 刘薇, 马静茹, 张春雨. 低频脉冲电刺激干预对宫颈癌根治术后尿潴留的影响 [J]. 新乡医学院学报,2017,34(4): [15] SURIV,ARORAA.Managementofendometrialcancer:areview [J].RevRecentClinTrials,2015,10(4): [16] BOGANIG,DOWDYSC,CLIBYW A,etal.Incisionalrecur rencesafterendometrialcancersurgery[j].anticancerres,2015, 35(11): [17] 周胤健, 杜英, 梅丽娜, 等. 子宫内膜癌 microrna 表达谱的初步研究 [J]. 中华实验和临床病毒学杂志,2014,28(4): [18] ZHANGW L,ZHANGJH,WUXZ,etal.miR 15bpromotesep ithelial mesenchymaltransitionbyinhibitingsmurf2inpancre aticcancer[j].intjoncol,2015,47(3): [19] WANGX,GUOH,YAOB,etal.miR 15binhibitscancer initia tingcelphenotypesandchemoresistanceofcisplatinbytargeting TRIM14inoraltonguesquamouscelcancer[J].OncolRep, 2017,37(5): [20] JIW B,LIUX,LUOY,etal.HighexpresionofmiR 15bpre dictspoorprognosisforhepatocelularcarcinomaaftercurative hepatectomy[j].oncolrep,2016,36(4): ( 本文编辑 : 杨博英文编辑 : 杨博 )

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福建农业学报材料与方法毒株主要仪器主要试剂引物设计的培养反应条件的建立荧光定量检测临床样本结果与分析福建农业学报林甦朱春华陈珍刘斌琼施少华江斌蔡国漳林羽黄瑜甦男硕士助理研究员主要从事病毒学和动物传染病学研究福建农业学报材料与方法毒株主要仪器主要试剂引物设计的培养反应条件的建立荧光定量检测临床样本结果与分析林甦等鸡亚型白血病病毒荧光定量检测方法的建立福建农业学报讨论林甦等鸡亚型白血病病毒荧光定量检测方法的建立责任编辑