waters.com 洞悉原料品质, 确保食品饮料安全优质 5 waters.com/food 212 Waters The Science of What's Possible

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1 食品安全应用文集

2 waters.com 洞悉原料品质, 确保食品饮料安全优质 5 waters.com/food 212 Waters The Science of What's Possible

3 [ 目录 ] 目录固相萃取 (SPE) 策略以及操作方法... 6 沃特世固相萃取和样品前处理产品介绍... 8 样品制备解决方案...1 氨基酸分析完整解决方案...11 色谱分离解决方案...12 食品中的兽药残留分析 使用 UPLC-MS/MS 检测肉制品中常见的 β- 受体激动剂的残留量...16 ACQUITY UPLC/Xevo TQ-S 同时测定猪尿液中的 21 种 β- 受体激动剂...18 牛奶中四环素 土霉素 金霉素 强力霉素残留分析...2 鱼肉中孔雀石绿的分析...21 蜂蜜中硝基呋喃及其代谢物残留分析...22 QuEChERS-UPLC-MS/MS 快速测定鸡肝中七种磺胺类药物残留...23 牛奶中六种青霉素类抗生素残留分析...25 蜂蜜中氯霉素的分析...26 牛奶中大环内酯类抗生素残留分析...27 蜂王浆中 18 种磺胺残留量的测定...28 蜂蜜中头孢唑啉 头孢匹林 头孢氨苄 头孢洛宁 头孢喹肟残留量的测定...3 环境水样中 16 种磺胺类抗生素和甲氧苄氨嘧啶残留分析...31 肉类和牛奶中的氨基糖苷类抗生素...33 使用 QuEChERS 方法检测膳食和牛奶中的阿维菌素类...35 鸡肉中的恩诺沙星 (BAYT RIL )...37 食用肌肉组织中多种兽药多残留测定...38 牛奶中兽药的多残留测定...4 牛奶中的青霉素 四环素和磺胺类药物...42 使用 QuEChERS 检测肉类和牛奶中的类固醇激素...43 农药和污染物 水果和婴儿食品中 42 种农药残留的同时定性和确证分析...45 使用 DisQuE 净化和 Xevo TQ-S 进行蔬菜中多种农药残留筛查分析...46 使用 QuEChERS-UPLC/MS/MS 分析婴幼儿食品中的多农残...47 使用 AOAC QuEChERS 方式结合 UPLC MS/MS 分析茶叶中的多农残...49 土豆中苯胺灵残留分析...5 蔬菜水果中氨基甲酸酯类农药多残留分析 ( 柱后衍生法 )...51 [ 3 ]

4 [ 目录 ] 蔬菜水果中农药多残留分析...52 对苯并咪唑类杀真菌剂多组分残留的检测...53 饮用水中草甘膦的分析...54 采用超灵敏 UPLC/MS/MS 对饮用水样品中的酸性除草剂进行定量分析...55 使用 QuEChERS 检测婴儿食品和婴儿配方奶粉中的双酚 A B 和 E...57 橙汁中的多菌灵和其它康唑类杀菌剂...59 饮用水中的敌草快和百草枯...62 使用 QuEChERS 检测牛肉中的有机磷农药...64 食品测试和质量控制 (QC) 婴幼儿乳粉中的核苷酸分析...66 牛磺酸牛乳和婴幼儿配方食品中氨基酸分析...67 UPLC 测定烟叶中的氨基酸含量...68 ACQUITY UPLC-ELSD 测定奶粉和牛奶中八种糖的含量...7 动物饲料水解产物中的氨基酸...71 啤酒生产中的氨基酸...72 强化食品中的脂溶性维生素...74 人参根粉提取物中的人参皂苷 RB 掺假菠萝汁中的橙皮甙...77 软饮料的快速分析...78 食品和膳食补充剂中的大豆异黄酮...79 婴儿配方奶粉中的维生素 A 和 E...81 水溶性维生素 咖啡因和食用色素...82 动物性食品中糖皮质激素类兴奋剂的测定...83 液相色谱 - 质谱联用测定乳及乳制品中 29 种性激素...85 水体中微囊藻毒素的分析...87 水和动物组织中辛烷磺酸 (PFOS) 分析...88 环境水样中痕量雄激素和孕激素残留分析...9 液质法测定饮用水中丙烯酰胺时应对水体基质干扰的办法...92 违禁添加物和生物毒素分析 使用液相色谱荧光检测器快速检测多环芳烃 (PAHs) 确保海产品的安全...94 婴幼儿配方奶粉和液态奶中三聚氰胺和三聚氰酸含量测定...96 苹果汁中棒曲霉素 ( 展青霉素 ) 的分析...98 火锅底料中的罂粟壳分析...99 沃特世食品中 18 种邻苯二甲酸盐 UPLC/MS/MS 分析解决方案 乳及乳制品中 L- 羟脯氨酸残留的测定 乳和乳制品中黄曲霉毒素 M1 的测定 (LC-MS) 使用 UPLC 和荧光检测器, 无需衍生反应的黄曲霉毒素快速分析 [ 4 ]

5 [ 目录 ] 饮料中 4- 甲基咪唑和 2- 甲基咪唑分析方法 烘烤和油炸食品中丙烯酰胺的分析 花生中黄曲霉素 B1,B2,G1,G2 的分析 辣椒产品中苏丹红的分析 应用文献索引 多农药残留分析 污染物分析 兽药残留分析 水分析 食品功能组分分析 生物毒素分析 POPs( 持久性污染物 ) 分析 [ 5 ]

6 固相萃取 (SPE) 策略以及操作方法 固相萃取 (SPE) 一般有三个策略 : 样品分离净化的具体步骤 1. 保留 - 清洗 - 洗脱策略 : 被测物首先在吸附剂上吸附, 随后用弱清洗剂除去基质干扰 最后, 被测物被强溶剂洗脱 被测物的洗脱体积小于上样体积, 这被称为样品富集 n 样品上样到固相提取吸附剂上, 被测物保留在吸附剂上 n 干扰基质被清洗 n 被测物被洗脱 2. 通过净化策略 : 被测物无保留的直接通过吸附剂, 而干扰基质保留在吸附剂上 运用该策略没有样品富集效果 n 样品直接通过吸附剂, 没有富集作用 n 干扰基质保留在吸附剂上 表格 1. SPE 小柱规格选择指南 LP= 大颗粒 (6 µm) 3. 基质分散策略 : n 吸附剂粉末加入样品后振摇 n 样品过滤和离心 n 上清液收集后分析 Step Elute 1 样品量小柱规格 ( 以 Oasis 为例 ) 1-1 ml 1 cc/3 mg 或者 3 cc/6 mg 1-1 ml 3 cc/6 mg 或者 6 cc/2 mg 1. 上样 2. 清洗 3. 洗脱 通过 Step Elute ml 6 cc/2 mg 或者 6 cc/5 mg (LP) 5-1 ml 6 cc/5 mg (LP) 或者 12 cc/1 g (LP) Step Elute 3 1. 样品的预处理 固体样品 ( 土壤, 组织, 等等 ) n 振摇, 超声或者索氏提取 - 用极性有机溶剂 ( 甲醇, 乙腈 ) 提取样品中的极性化合物 - 用非极性有机溶剂 ( 二氯甲烷, 丙酮 ) 提取样品中的非极性的化合物非水的液体 n 如果这个样品可溶于水, 用水稀释它后上样于反相模式 ( 或者混合模式 ) 的 SPE n 如果这个样品可溶于正己烷, 用正己烷稀释后上样于正相 SPE 废水 n 根据需要过滤或者离心 2. 平衡步骤 就反相吸附剂而言, 需要用有机溶剂 ( 例如甲醇, 乙腈, 异丙醇或四氢呋喃 ) 对吸附剂做预处理以得到重现的结果 如果没有这步, 水溶液不能完全进入吸附剂孔内和浸湿表面 因此, 只有一小部分表面面积可与分析物相互作用 相同原理, 对于硅胶基质吸附剂, 在整个流程中不能让吸附剂干涸是非常重要的 反相吸附剂的整个平衡步骤包括用有机溶剂活化吸附剂和用水或缓冲盐等平衡吸附剂 3. 上样步骤 当吸附剂不能保留被测物时, 这被称为穿透 如遇以下情况, 穿透会在上样步骤发生 : n 用高比例有机溶剂上样极性化合物 解决办法是在上样之前将样品用水稀释至含有机溶剂 <1 n 被测物和蛋白结合, 将穿透吸附剂 通过将样品酸化或碱化确保被测物不与蛋白结合 n 吸附剂因基质而过载 因此, 选择正确规格的吸附剂 ( 参阅表格 1 或表格 2) 是重要的 n 如果上样的流速太快 被测物和吸附剂之间没有足够的接触时间 观测并且调整真空, 以便你看见分离的小滴, 并非一连串液体 样品量小柱规格 ( 以 Spe-Pak 为例 ) 1-1 ml 3 cc/2 mg 或者 6 cc/5 mg 1-5 ml 3 cc/2 mg 或者 6 cc/5 mg (LP) 5-1 ml 6 cc/5 mg (LP) 或者 12 cc/1 g 表格 2. SPE 小柱规格选择指南 LP= 大颗粒 (6 µm) [ 6 ]

7 固相萃取 (SPE) 策略以及操作方法 4. 清洗步骤 清洗被保留在吸附剂上的比被测物保留弱的干扰杂质, 并且冲洗上样带来的干扰基质 理想的清洗溶剂能除去所有干扰物而对被测物的保留和回收没有影响 因此, 清洗溶剂必须强度适中, 介于上样和洗脱溶剂之间 5. 洗脱步骤 洗去干扰物后, 用强洗脱剂洗脱被测物 需要精确控制洗脱溶剂的量和流速以确保重现性的结果 ( 参见表格 3) 目标分析物性质 样品基质 活化 / 平衡步骤 反相模式正相模式离子交换模式 低至中等极性 / 疏水性 水性样品 1. 有机溶剂活化 2. 水平衡 中等至强极性 / 不带电荷非极性有机溶剂 非极性有机溶剂 清洗步骤水相缓冲溶液非极性溶剂 洗脱步骤 逐步提高极性有机溶剂的比例 逐步提高中等至强极性有机溶剂比例 带电荷 / 可离子化水性样品 / 离子强度低 低离子强度的缓冲溶液 低离子强度的缓冲溶液更强的缓冲溶液 - 离子强度更高或者通过调节 ph 值来中和电荷 表格 3. 不同 SPE 分离模式选择指南 沃特世 LC/MS 检验合格样品瓶业界唯一经 LC/MS 认证的样品瓶 沃特世公司深知高品质样品瓶对 LC/MS 分析的重要性, 因此我们专门为 MS 用户提供 LC/MS 检验合格样品瓶, 所有样品瓶都经过 MS 检验, 符合对离子总数和高质量范围离子簇的规格要求 所推出的产品比我们测试过的全球供应商的任何一种产品都更洁净 使用专业认证的样品瓶, 能够避免下面的问题对分析结果的影响 : n LC 图谱中的 鬼峰 以及 MS 图谱中无法解释的质量数峰 ; n 密封垫脱落 ; n 进样针损坏 去活玻璃样品瓶 (DV) 和内插管沃特世全部回收样品瓶沃特世最大回收样品瓶 在进行生物样品 药物 天然产物 杀虫剂或除草剂分析时, 可有效避免样品瓶对目标化合物的吸附作用 其表面改性是永久性的, 无有效期限制 专门设计用于侧取样口进样针设计, 以及沃特世 Alliance 269/2695HPLC 系统的出厂针头取样深度设置 此样品瓶具有最大的样品容量 ( 约 1mL) 和最小的残留体积 ( 约 9μL) 专门设计用于 ACQUITY UPLC 和 Alliance HT HPLC 系统的底部取样口进样针设计 此样品瓶具有最大的样品容量 ( 约 1.5mL) 和最小的残留体积 9mm 瓶盖也适合用于其他品牌的 HPLC 和 GC 系统 最新沃特世样品瓶选择软件 根据您的仪器系统和应用要求, 帮助您快捷迅速地选择最合适的样品瓶! 输入包括系统类型 样品体积 检测方法以及目标分析物是否对光敏感的信息, 软件会自动帮您选择出合适的样品瓶! 同时沃特世将会将最新的软件更新信息以及产品信息及时发给注册用户! 欲了解更多的沃特世专业认证样品瓶信息, 或者下载免费的样品瓶选择软件, 请登陆 [ 7 ]

8 沃特世固相萃取和样品前处理产品介绍 Oasis 产品系列 传统 C 18 固相萃取产品具有下述难以解决的问题, 包括硅羟基活性 ; 吸附剂害怕 干涸 ;ph 局限性以及极性分析物或代谢物的 不保留 问题等, 这些问题会造成分析结果重现性不好以及回收率差 Oasis 系列产品以其高洁净度 高重现性和稳定性以及独特的保留特性独树一帜, 确保用户开发出耐用的 SPE 方法 n 固相萃取著名品牌 n 小柱 96 孔板和 µelution 板多种产品形式 n 吸附剂为共聚物, 不怕 干涸, 重现性好 n 比传统 C 18 小柱载荷量高 3 倍, 解决了极性化合物保留的问题 Oasis 2x4 方法 - 最简便, 快捷, 干净的 SPE 方法开发策略 n 确定目标化合物的性质 ( 根据结构和 pka 值判断目标化合物是酸, 碱, 或中性?) n 根据目标化合物的性质选择四种 Oasis 吸附剂中的一种 MCX 碱性化合物 (pka2-1) 选择 MCX( 复合模式 : 强阳离子交换和反相保留机理 ) WCX 强碱性化合物 (pka>1, 如季铵盐 ) 选择 WCX( 复合模式 : 弱阳离子交换和反相保留机理 ) MAX 酸性化合物 (pka2-8) 选择 MAX( 复合模式 : 强阴离子交换和反相保留机理 ) WAX 强酸性化合物 (pka<1, 如磺酸 ) 选择 WAX( 复合模式 : 弱阴离子交换和反相保留机理 ) Oasis MCX Oasis MAX O N SO 3 O N N Oasis HLB pka <1 1 meq/g O N pka >18.25 meq/g Oasis WCX Oasis WAX O N pk a ~5.75 meq/g O OH O O H ph -14 O N N N H pka ~6.6 meq/g H N N H H [ 8 ]

9 沃特世固相萃取和样品前处理产品介绍 n 传统的 SPE 相 n 产品形式多样 n 存在各类参考文献和可借鉴的有效方法 n 通过经认证的 Sep-Pak 提取小柱可获得超低量的可萃取物 n 更小的干扰和更高的灵敏度 Sep-Pak 固相萃取小柱的便捷设计和功能克服了传统小柱液 - 固萃取的程序困难, 使固相萃取的巨大优势得以实现 智能的产品设计 合理 的产品管理和严格的质量测试保证了吸附剂和填充层的优质 可重复性 多功能性和使用便捷性 Sep-Pak 小柱分离模式选择指南 分离模式正相反相离子交换 吸附剂 Silica, Florisil, Alumina, Diol, NH 2, CN C, tc, C, Diol, PoraPak, RDX, NH, CN Accell Plus QMA, Accell Plus CM, NH 2 吸附剂极性 高 低 高 使用溶剂极性范围 低到中等极性 中等极性到高极性 高极性 样品上样溶剂 正己烷, 甲苯, 二氯甲烷 去离子水 水或者缓冲盐 洗脱溶剂 乙酸乙酯, 丙酮, 乙腈 甲醇, 乙腈, 二氯甲烷 缓冲盐, 高离子强度盐溶液 样品洗脱顺序 低极性物质先流出 高极性物质先流出 离子交换力弱的物质先流出 可改变溶剂强度洗脱被保留物质增加溶剂极性降低溶剂极性 增加离子强度或者增加 PH 值 ( 阴离子交换 ) [ 9 ]

10 样品制备解决方案 n 方法实施简便, 几乎不需任何培训即可上手 n 符合 AOAC 和 CEN 果蔬农药残留测定官方方法 n 成本效益高 n 以简单的试剂盒形式提供可靠的高质量产品 DisQuE 分散样品制备试剂盒 分散样品制备通常称为 QuEChERS, 是一种简单 直接的样品制备技术, 适用于多种食品和农产品中的多残留农药分析 沃特世的 DisQuE 分散样品制备试剂盒含有包装便利的离心管, 管内有预先称量的吸附剂和缓冲液, 专为配合 AOAC 和欧洲标准化委员会 (CEN) 官方方法使用而设计 DisQuE 分散样品制备技术是一种经充分验证的 可用于宽范围农药残留分析的高通量样品制备方法 过滤器 过滤步骤可以为分析系统组件提供即时的保护, 同时还能最大程度缩短停工时间 沃特世与 Pall Life Sciences 合作开发了通过合规性认证的过滤产品, 其设计和开发均符合法规要求和质量目标 认证样品瓶 样品瓶是样品制备的一个关键部分, 在使用时应确保其中不会引入不必要的污染和干扰物 沃特世提供了各种各样的认证样品瓶选择, 包括 TruView LCMS 认证样品瓶, 经测试可以最大程度提高 LC/UV/MS 和 LC/MS 的灵敏度并改善检测限 这些样品瓶不会对您的测试结果产生任何不利影响 ; 并且还能避免鬼峰 隔片移位和进样针的损坏 分析标准品和试剂 沃特世非常清楚优质的分析标准品和试剂对于确保分析仪器不断进步 工作流程取得成功的重要性 这正是沃特世提供高纯度 精确配制 可重现和可追溯至具体参数的标准品和试剂的原因 无论是系统性能标准品还是特定于应用的标准品, 您都可以依赖于领先的分析仪器创新者 沃特世 [ 1 ]

11 氨基酸分析完整解决方案 UPLC 氨基酸分析解决方案包括 : n Waters ACQUITY UPLC 系统和可变波长紫外检测器 n 全系统和应用级支持文档 n 特定应用的性能校验 n Connections INSIGHT 远程智能服务 n Empower 2 软件的预配置项目 方法和报告格式 n AccQ Tag Ultra 衍生化学品, 包括色谱柱 试剂和洗脱液 氨基酸分析 氨基酸组成是体现食品和饲料营养价值的关键部分 氨基酸的定性和定量分析是为了确定蛋白质的浓度并对其进行鉴定, 或根据特定商品的游离氨基酸含量, 确认天然产品的来源 在食品安全测试中, 氨基酸分析可确定加工食品是否缺乏蛋白质, 以及检测出掩盖了实际蛋白质含量的掺假食品 氨基甲酸酯分析试剂盒 该试剂盒内含有沃特世氨基甲酸酯色谱柱 Oasis HLB 小柱 样品瓶和参比标准品, 经优化可简 化分析过程, 并提高结果的可靠性 饮料分析试剂盒 该试剂盒用于分析含有乙酰磺胺酸钾 ( 安赛蜜 ) 糖精 咖啡因 苯甲酸盐 山梨酸酯和阿斯巴甜的软饮料配方, 经设计可提高实验室工作效率 改善数据质量 最大程度降低成本和增加产品一致性 可配合 HPLC 和 UPLC 系统使用 三聚氰胺分析套装这类分析套装以美国食品药品监督管理局 (US FDA) 实验室信息公告第 4422 号为基础, 提供了一种用于筛查食品 ( 包括婴儿配方奶粉和乳制品 ) 中三聚氰胺及其相关化合物的综合解决方案 提供有 HPLC 和 UPLC 两种方案可选 [ 11 ]

12 色谱分离解决方案 色谱柱选择指南 沃特世一直致力于材料科学研究, 凭借对 HPLC 和 HPLC 色谱柱填料的不懈钻研, 我们开发出了各种突破性的色谱柱技术 随着不同科学挑战的出现, 沃特世始终以创新的色谱柱技术来满足不断变化的市场需求 XSelect C 18 CSH 苯己基 CSH 氟苯基 选择性特征 : 通用型反相色谱柱, 为方法开发提供了杰出的 ph 稳定性并可实现快速的流动相再平衡 表面带电杂化颗粒 (CSH ) 技术可得到完美的峰形, 提高了碱性化合物加载量 键合 : 三官能化 C 18 配体, 完全封端, 与 CSH 颗粒键合 选择性特征 : 与通用型互补的选择性配体, 可提供与多环芳烃化合物之间的 π-π 相互作用, 并且在 ph 极值下能保持出色的重现性 CSH 技术可获得完美的峰形, 提高了碱性化合物加载量 键合 : 三官能化 C 6 苯基配体, 完全封端, 与 CSH 颗粒键合 选择性特征 : 通用型色谱柱, 拥有非常高的分离选择性, 尤其是在使用低 ph 值流动相时 CSH 技术可获得完美的峰形, 提高了碱性化合物加载量 键合 : 三官能化丙基氟苯基配体, 未封端, 与 CSH 颗粒键合 选择性特征 : 高性能 C 18 填料, 保留时间更长, 峰形完美, 在低 ph 值下耐酸水解 专为需要硅基 C 18 选择性的 UPLC 分离而设计 HSS C 18 HSS C 18 SB HSS T3 键合 : 高覆盖率三官能化 C 18, 完全封端, 与高强度硅胶 (HSS) HPLC 颗粒键合 选择性特征 : 独特的未封端 C 18 填料, 专为方法开发科学家而设计 在低 ph 值条件下使用时, 可表现出独特的碱选择性 (SB), 并且可在 UPLC 和 HPLC 之间进行转换 键合 : 三官能化键合 C 18 中等覆盖率, 未封端, 与 HSS HPLC 颗粒键合 选择性特征 : 水性流动相兼容 HPLC 色谱柱, 拥有杰出的保留性能 不仅具有对极性化合物的保留能力, 还可在 UPLC 和 HPLC 分离之间进行转换 键合 :T3(C 18 ) 键合和封端, 与 HSS HPLC 颗粒键合 XBridge C 18 Shield RP18 C 8 Phenyl HILIC 选择性特征 : 通用型色谱柱, 由于其在极限 ph 下的稳定性和对多种化合物的广泛适用性, 是方法开发的理想选择 键合 : 三官能化键合 C 18, 完全封端, 与亚乙基桥杂化 (BEH) 颗粒键合 选择性特征 : 与直链 C 18 相比具有互补选择性, 尤其是对于酚类分析物 与 1 水相组分兼容 键合 : 单官能化内嵌极性 C 18, 完全封端, 与亚乙基桥杂化颗粒键合 选择性特征 : 通用型色谱柱, 由于其在 ph 极值下的稳定性和对多种化合物的广泛适用性, 是方法开发的理想选择 键合 : 三官能化 C 8, 完全封端, 与 BEH 颗粒键合 选择性特征 : 出色的方法开发色谱柱, 可提供互补选择性, 尤其适合多环芳烃化合物 相对于其他苯基键合相, 具有独特的 ph 稳定性 键合 : 三官能化 C 6 苯基, 完全封端, 与 BEH 基质键合 选择性特征 : 对于强极性 碱性 水溶性分析物具有出色的保留性能 专用于使用高浓度有机溶剂流动相的 HILIC 分离, 并已经过测试 键合 : 未与 BEH 基质键合 [ 12 ]

13 色谱分离解决方案 XBridge( 续 ) Amide 选择性特征 : 稳定的 HILIC 固定相, 设计用于分离多种强极性化合物 尤其适用于在高温和高 ph 值下, 使用高浓度有机改性剂 分离碳水化合物 ( 糖类 ) 兼容所有现代检测器, 包括 MS ELSD 紫外和荧光检测器 键合 : 三官能化酰胺基, 与 BEH 颗粒键合 Atlantis T3 HILIC C 18 选择性特征 : 可保留极性化合物, 兼容 1 的水性流动相, 在低 ph 值条件下具有出色的稳定性 专为增强极性分析物保留性能而设计 键合 :T3 (C 18 ) 键合和封端, 与高纯度硅胶基质键合 选择性特征 : 对于强极性 碱性 水溶性分析物具有出色的保留性能 专用于使用高浓度有机溶剂流动相的 HILIC 分离, 并已经过测试 键合 : 未键合高纯度硅胶基质 选择性特征 : 可保留极性化合物 经设计可兼容 1 的水性流动相 键合 : 双官能化 C 18 键合, 完全封端, 与高纯度硅胶基质键合 SunFire C 18 C 8 选择性特征 : 通用型方法开发色谱柱 具有非常高的加载量, 尤其适用于低 ph 流动相中的碱性分析物, 是纯化和杂质分析的理想选择 键合 : 双官能化 C 18, 完全封端, 与高纯度硅胶基质键合 选择性特征 : 通用型方法开发色谱柱 具有非常高的加载容量, 尤其适用于低 ph 流动相中的碱性分析物 其疏水性较弱, 因此对大多数分析物的保留能力不及 C 18 键合 : 双官能化 C 8, 完全封端, 与高纯度硅胶基质键合 ACQUITY UPLC CSH C 18 CSH Phenyl-Hexyl CSH Fluoro-Phenyl 选择性特征 : 通用型反相色谱柱, 为方法开发提供了杰出的 ph 稳定性并可实现快速的流动相再平衡 表面带电杂化颗粒 (CSH) 技术可得到完美的峰形, 提高了碱性化合物加载量 键合 : 三官能化 C 18 配体, 完全封端, 与 CSH 颗粒基质键合 选择性特征 : 与通用型互补的选择性配体, 可提供与多环芳烃化合物之间的 π-π 相互作用, 并且在 ph 极值下能保持出色的重现 性 CSH 技术可获得完美的峰形, 提高了碱性化合物加载量 键合 : 三官能化 C 6 苯基配体, 完全封端, 与 CSH 颗粒基质键合 选择性特征 : 通用型色谱柱, 拥有非常高的分离选择性, 尤其是在使用低 ph 值流动相时 CSH 技术可获得完美的峰形, 提高了 碱性化合物加载量 键合 : 三官能化丙基氟苯基配体, 未封端, 与 CSH 颗粒基质键合 选择性特征 : 通用型色谱柱, 由于其在 ph 极值下的稳定性和对多种化合物的广泛适用性, 是方法开发的理想选择 BEH C 18 BEH Shield RP18 键合 : 三官能化 C 18, 完全封端, 与亚乙基桥杂化 (BEH) 基质键合 选择性特征 : 与直链 C 18 相比具有互补选择性, 尤其是对于酚类分析物 与 1 水相组分兼容 键合 : 单官能化内嵌极性 C 18, 完全封端, 与 BEH 基质键合 [ 13 ]

14 色谱分离解决方案 ACQUITY UPLC( 续 ) 选择性特征 : 通用型色谱柱, 由于其在 ph 极值下的稳定性和对多种化合物的广泛适用性, 是方法开发的理想选择 BEH C 8 键合 : 三官能化 C 8, 完全封端, 与 BEH 基质键合 选择性特征 : 出色的方法开发色谱柱, 可提供互补选择性, 尤其适合多环芳烃化合物 对于苯基键合相具有独特的 ph 稳定性 BEH 苯基水平 键合 : 三官能化 C 6 苯基, 完全封端, 与 BEH 基质键合 选择性特征 : 对于强极性 碱性 水溶性分析物具有出色的保留性能 专用于使用高浓度有机溶剂流动相的 HILIC 分离, 并已经 BEH HILIC 过测试 键合 : 未与基质键合 选择性特征 : 超性能 C 18 填料, 保留时间更长, 峰形完美, 在低 ph 值下耐酸水解 专为需要硅基 C 18 选择性的 UPLC 分离而设计 BEH HSS C 18 键合 : 高覆盖率三官能化 C 18, 完全封端, 与高强度硅胶 (HSS) UPLC 颗粒基质键合 BEH Amide HSS C 18 HSS C 18 SB HSS T3 选择性特征 : 稳定的 HILIC 固定相, 设计用于分离多种强极性化合物 尤其适用于在高温和高 ph 值下, 使用高浓度有机改性剂分离碳水化合物 ( 糖类 ) 兼容所有现代检测器, 包括 MS ELSD 紫外和荧光检测器 键合 : 三官能化酰胺, 与 BEH 基质键合 选择性特征 : 超性能 C 18 填料, 保留时间更长, 峰形完美, 在低 ph 值下耐酸水解 专为需要硅基 C 18 选择性的 UPLC 分离而设计 键合 : 高覆盖率三官能化 C 18, 完全封端, 与 HSS UPLC 颗粒基质键合 选择性特征 : 独特的未封端 C 18 填料, 专为方法开发科学家而设计 在低 ph 值条件下使用时, 可表现出独特的碱选择性 (SB) 键合 : 中等覆盖率三官能化键合 C 18, 未封端, 与 HSS UPLC 颗粒基质键合 选择性特征 : 水性流动相兼容 UPLC 色谱柱, 拥有杰出的保留性能 不仅具有对极性化合物的保留能力, 还可充分发挥 UPLC 的效率与性能 键合 :T3 (C 18 ) 键合和封端, 与 HSS UPLC 颗粒基质键合 食品测试专用色谱柱 除了整个 UPLC 和 HPLC 色谱柱填料产品系列, 沃特世还提供了已针对特定食品测试分析进行优化的色谱柱 这类色谱柱是发酵分析 有机酸 酒精和碳水化合物 甘油三酸酯和胆固醇分析以及脂肪酸分析的理想之选 保护柱 VanGuard 预柱 Sentry 保护柱和 Guard-pak 柱芯可通过清除样品中的污染物, 延长色谱柱的使用寿命, 为您带来更高的重现性和性能 它们采用了与沃特世分析柱相同的高性能固定相 [ 14 ]

15 食品中的兽药残留分析 对动物使用兽药是为了预防或治疗疾病 帮助疾病或损伤的恢复 还可以促进动物的生长 肉类 牛 奶或其它供人类摄入的产品中存在这些药物或其代谢物将对人类健康构成严重的威胁 例如 氯霉素的残留可在易感个体中导致再生障碍性贫血 此外 对于长时间摄入低水平抗生素后 出现抗生素耐药性也存在着担忧 本章中的部分应用涉及分析在特定食品中禁止存在的抗生素 其 它一些药物尽管允许使用 但必须符合停药期规定 以确保食品的安全性 本章还将介绍一些用于 促进生长的化合物以及不同种类兽药的多残留分析 [ 15 ]

16 使用 UPLC-MS/MS 检测肉制品中常见的 β- 受体激动剂的残留量 简介 与当前所采用的 GB/T LC 法相比, 采用本 UPLC-MS/MS 法时, 样品制备步骤更为简单 运行时间可减少 73( 本法运行一次仅需 7 分钟, 而目前的 GB 法运行时间为 26 分钟 ) 溶剂使用量更少 相当于节省了 1,925 小时的仪器运行时间 样品制备 A B C 图 1. 1A) 盐酸克伦特罗 1B) 莱克多巴胺 1C) 沙丁胺醇 图 2 说明了样品制备步骤 将 5. g 肉样品 5 µl 内标物 (5 ng/ml) 和 1 ml 醋酸钠 - 醋酸缓冲液 (ph=5.2) 混合 加入 1 µl ß- 葡萄糖醛酸酶 / 酰基硫酸酯酶 (3 µ/ml), 置于 37 C 中水解过夜 搅匀 3 分钟 超声波处理 3 分钟 离心 1 分钟 (15, rpm), 收集上清液 利用 1 ml.1 M 高氯酸溶液对余下部分再萃取一次 合并两次所得的上清液, 并利用 Oasis MCX 色谱柱纯化 : 以 6 ml 甲醇 6 ml 水平衡色谱柱, 上样后, 先以 6 ml 水 后以 6 ml 甲醇冲洗, 随后以 5 的氨甲醇溶液洗脱 利用氮气将所获得的流出液吹干, 然后将残质重新溶解到 1 ml.1 甲酸水溶液中, 再利用.22 µm 过滤膜将其过滤 质谱条件 质谱系统 : Xevo TQ-S MS 电离模式 : ESI+ 毛细管电压 : 3.5 kv 锥孔电压 : 3 V 离子源温度 : 15 C 脱溶剂温度 : 55 C 脱溶剂气体流速 : 9 L/H 碰撞气体流速 :.19 ml/min 化合物名称 母离子 (m/z) 盐酸克伦特罗 D9- 盐酸克伦特罗 莱克多巴胺 32.1 D5- 莱克多巴胺 37.1 沙丁胺醇 D3- 沙丁胺醇 243. 子离子 (m/z) 锥孔电压 (V) 表 1. 分析 β- 受体激动剂及其稳定同位素内标物的 MRM 参数 碰撞能量 (ev ) 图 2. 样品制备步骤一览 色谱条件 液相色谱系统 : ACQUITY UPLC 运行时间 : 7. min 色谱柱 : ACQUITY UPLC HSS T3, 1.8 μm, 2.1 x 1 mm 柱温 : 3 C 进样器温度 : 1 C 进样量 : 5 μl 流速 :.4 ml/min 结果 盐酸克伦特罗 莱克多巴胺 流动相 A: 含.1(v/v) 甲酸的水溶液 B: 含.1(v/v) 甲酸的乙腈溶液梯度 时间 流速 A B 梯度线型 初值 初值 沙丁胺醇 图 3. 对 β- 受体激动剂的肉加标样品进行 UPLC-MS/MS 分析时所得到的色谱图实例 (β- 受体激动剂的加标浓度为 1 ng/ml, 相当于每 kg 肉样中含有.2 µg/kg) [ 16 ]

17 使用 UPLC-MS/MS 检测肉制品中常见的 β- 受体激动剂的残留量 盐酸克伦特罗 莱克多巴胺 沙丁胺醇 图 4. 肉样品的 UPLC-MS/MS 色谱图 在样品中仅检测到盐酸克伦特罗 检测到盐酸克伦特罗样品的含量为 1.9 μg/kg 加标量 盐酸克伦特罗莱克多巴胺沙丁胺醇 回收率 相对标准偏差 回收率 相对标准偏差 回收率 相对标准偏差.1 µg/kg µg/kg µg/kg 参考文献 1. Illegal use of beta-adrenergic agonists: European Community, J. Anim. Sci.1998, 76: ill after eating tainted pig organs, China Daily, February 23, Chinese Ministry of Agriculture Bulletin 176, February 9th, Chinese Ministry of Agriculture Bulletin 235, December 24th, Determination of beta-agonists residues in foodstuff of animal origin, liquid chromatography with tandem-mass spectrometric method, China National standard GB/T Controlling Contamination in UltraPerformance LC/MS and HPLC/MS Systems, Waters Literature EN, Rev. F. 表 2. 三种浓度下的回收率 盐酸克伦特罗 莱克多巴胺 沙丁胺醇 图 5. 比较了在进行 β- 受体激动剂混标分析时, 不同进样次数的 UPLC-MS/ MS 色谱图 三种 β- 受体激动剂的浓度均为 1. ng/ml 每两个色谱图分别是在第 1,6 次进样及第 5,5 次进样时, 由同一根 ACQUITY UPLC 色谱柱上采集的数据 ( 如色谱图中所示 ) 订购信息 描述 部件号 Oasis MCX, 6cc/15mg ACQUITY UPLC HSS T3, 2.1 x 1 mm, 1.8 µm ACQUITY UPLC HSS T3 VanGuard Pre-column, 2.1 x 1 mm, 1.8 µm LC/MS 认证样品瓶 CV [ 17 ]

18 ACQUITY UPLC/Xevo TQ-S同时测定猪尿液中的21种β-受体激动剂 1: 2 2 ml 样品预处理 样品制备参照GB/T 动源性食品中多种β-受体激动剂残留 量的测定 进行 1. 量取2. ml猪尿液样品 加入8 ml.2 M的pH为5.2的乙酸钠缓冲液 充分混匀 2. 加入5 µl β-glucuronidase/aryl sulfatase混匀 于37 C水浴水解过夜 3. 水解液振荡15 min 在5 r/min条件下离心分离1 min后 取4 ml上 2 ml Initial : ml 5 NH4 OH-MeOH : 清液中添加1 µl 1 ng/ml的内标溶液混匀, 加入5 ml.1 M高氯酸 µl 混合均匀 并调节溶液pH值到1±.3 以5 r/min条件下离心分离 min后 移取上清液并用1 M的氢氧化钠溶液调节pH值到 加入1 ml饱和氯化钠溶液和1 ml异丙醇-乙酸乙酯(6:4)混合溶液 质谱条件 离心分离后取有机相 在4 C水浴下用氮气将其吹干 MS系统 Xevo TQ-S 离子模式 ESI+ 6. 样品净化(如下图所示) 使用Oasis MCX(3 cc/6 mg)小柱 毛细管电压 3.5 kv 7. 净化后的洗脱液用氮气吹干 用流动相溶解定容至1. ml 源温度 15 C 雾化气温度 5 C 雾化气流速 MS/MS 9 L/hr 5. 提取残渣中加入5 ml.2 M乙酸钠缓冲液(pH 5.2) 超声混匀溶解残 渣 过.22 μm滤膜 待进样分析 PICs 固相萃取净化过程Oasis MCX(3 cc/6 mg) Xevo TQ-S.5ug/L 2 L/hr 锥孔气流速 样品制备 21 MRM 结果 活化/平衡 2 ml甲醇 2 ml水 24: MRM of 2 Channels ES+ TIC (Salmeterol) E _18 上样 清洗1 2 ml水 2甲酸水溶液2 ml甲醇 I 负压下抽干 洗脱 2 ml 5NH4OH-MeOH 1 Oasis MCX ACQUITY BEH C μm, 2.1 x 特征离子 流动相 / A.1甲酸水 B 乙腈 流速.4 ml/min 进样体积 5 µl 2 ml : 2 ml A 流速 B 曲线 # '! # 1: 2 ml 2 2 ml 基质中克伦特罗子离子扫描图 [ 18 ] Time P 3cc/6mg 色谱柱 1 mm 时间 种β-受体激动剂总离子流图 4 C水浴用氮气吹干溶剂后加入2 µl 含.1甲酸的甲醇水溶液(5:95) 超声混匀 色谱条件 2.5 '!!!!#!!' \ i

19 : 2 ml 5 NH4 OH-MeOH # ' 2 µl 4.1! # ' ACQUITY UPLC/Xevo TQ-S同时测定猪尿液中的21种β-受体激动剂!!!!#! \ i!' 5:95 特征离子 特征离子 21 Xevo TQ-S MS/MS.5ug/L PICs MRM 基质中莱克多巴胺子离子扫描图 21 基质中沙丁胺醇子离子扫描图 MRM 21-24: MRM of 2 Channels ES+ TIC (Salmeterol) E _18 Q-S IntelliStart Quanpedia Time PICs - MRM 21 - MS/MS hannels ES+ (Salmeterol) 1.73E5 15 IntelliStart Quanpedia Time PICs MS/MS 15 订购信息 [ 19 ] 描述 部件号 Oasis MCX, 3cc/6mg ACQUITY UPLC BEH C18, 2.1 x 1 mm, 1.7 µm VanGuard Pre-column, ACQUITY UPLC BEH C18, 2.1 x 1 mm, 1.7 µm LC/MS认证样品瓶 6751CV

20 牛奶中四环素 土霉素 金霉素 强力霉素残留分析 样品制备 1. 取 1.5 ml 牛奶样品, 加入 6 ml ph 4 McIivaine 缓冲液 *, 涡旋混匀 2. 8 rpm 离心 1 分钟 3. 取上清液, 用 1 M NaOH 溶液将 ph 调节至 11 * McIivaine 缓冲液的配制 : 将 1 ml.1 mol/l 柠檬酸溶液与 625 ml.2 mol/l 磷酸氢二钠溶液混合, 必要时用 NaOH 或 HCl 调节 ph 值 =4.±.5 分析物 MRM 锥孔电压 (V) 碰撞能量 (ev ) 土霉素 461> 四环素 445> 金霉素 479> 强力霉素 445> 结果 固相萃取过程 (Oasis MAX 1cc/3mg) 活化 / 平衡 A.1 ml 甲醇 B.1 ml 水 上样 所有上清液 清洗 1.5 ml5 氨水 清洗 2.5mL1 甲醇 色谱条件 仪器 : 沃特世 ACQUITY UPLC 系统 色谱柱 : ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1x5 mm, 1.7 μm, 流动相 A: 25 mm 草酸水溶液 流动相 B: 乙腈 流速 :.4 ml/min 梯度 ( 线性梯度 ): 时间 (min) A B 质谱条件 洗脱.5 ml 45:55 乙腈 /75 mm 草酸洗脱液用流动相 A 稀释 3 倍, 过.2 μm 滤膜后进行 LC/MS/MS 分析 仪器 : 沃特世 ACQUITY TQD 检测器 电离模式 : ESI + 总离子流图 添加不同浓度水平的回收率数据 (n=6) 2 μg/l 添加水平 8 μg/l 添加水平 化合物 回收率 (RSD) 回收率 (RSD) 土霉素 88(8.3) 83(8.6) 四环素 87(13) 84(3.2) 金霉素 65(13) 62(4.9) 强力霉素 93(5.2) 88(5.6) 订购信息 描述 部件号 Oasis MAX, 1 cc/3 mg ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1 x 5 mm, 1.7 µm VanGuard Pre-column, ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1 x 5 mm, 1.7 µm, 3 pcs/pack LC/MS 认证样品瓶 CV [ 2 ]

21 鱼肉中孔雀石绿的分析 样品制备 1. 精称 1. ±.1 g 水产品, 放入 3 ml 旋口塑料离心管中 2. 加入 5 μl TMPD 溶液 (1 mg/ml) 3. 加入标准样品溶液 ( 孔雀石绿 MG, 无色孔雀石绿 LMG,.1 μg/ml) 及 氘代内标, 并放置 1 min 4. 加入 McIlvaines 缓冲液 (ph 2.6)/ 甲醇 (5:5v/v) 溶液 1 ml; 匀浆 45 s 5. 离心 5 rpm, 2 min, 提取上清液, 移入试管中 6. 重复步骤 4,5, 将两次上清液合并, 该提取液即为 SPE 上样液 ( 体积约 2 ml)* 固相萃取过程 (Oasis MCX 3 cc/6 mg) 活化 / 平衡 A.2 ml 甲醇 B.2 ml 水 C.2 ml McIlvaines 缓冲液 (ph 2.6) 色谱条件 仪器 : 沃特世 Alliance 2695 系统,2487 双波长紫外 检测器 色谱柱 : SunFire C 18, 4.6 x 15 mm, 5 μm 自填 PbO 2 氧化小柱 : 4.6 x 2 mm(pbo 2 : 硅藻土 =3:1), 两端覆以 2 μm 的不锈钢筛板 氧化小柱连接在色谱柱 与检测器之间 流动相 A: 125 mm 乙酸铵, 用乙酸调 ph 4.5 流动相 B: 乙腈 流速 : 2 ml/min 梯度 : 时间 (min) A B 检测波长 : 619 nm 进样量 : 5 µl 上样 加入提取液 *, 约 2 ml 清洗 A. 2 ml.1 M HCl 酸化 B. 纯水清洗两次, 每次 2.5 ml C. 2 ml 5 甲醇 / 水 D. 3 ml 正己烷, 真空抽干 ABS 洗脱 5 ml 5 乙酸乙酯 :45 甲醇 :5 氨水 (v/v/v) 5 C, 氮气吹扫至干 用 5 乙腈 / 水定容 (1 μl) 纳米 缓冲液的配制 : McIlvaines 缓冲液 (ph 2.6): 1. 溶液 A:.1 M 柠檬酸单水合物 g 柠檬酸单水化合物溶解在 5 ml 水中 2. 溶液 B:.2 M 磷酸氢二钠二水合物 g 磷酸氢二钠二水合物溶解在 5 ml 水中 3. 用溶液 B 将 5 ml 溶液 A 调至 ph 2.6 ABS 纳米 提取溶剂的配制 : 25 ml McIlvaines 缓冲液 (ph 2.6) 与 25 ml 甲醇混匀 经氧化后 MG-LMG 的紫外光谱图 鱼肉中孔雀石绿 (MG), 无色孔雀石绿 (LMG) 的回收率为 5-8, 精密度良好 订购信息描述部件号 Oasis MCX 6 cc/15 mg SunFire C 18, 4.6 x 15 mm, 5 μm SunFire C 18, 4.6 x 15 mm, 5 μm 保护柱 2 pcs/pack Sentry Guard Holder WAT4691 全回收样品瓶 675CV [ 21 ]

22 蜂蜜中硝基呋喃及其代谢物残留分析 样品制备 2 g 蜂蜜样品用 5 ml.12 M 盐酸稀释 固相萃取过程小柱 I(Oasis HLB 3 cc/6 mg) 活化 / 平衡 A. 2 ml 甲醇 B. 2 ml 水 通过 * 2 g 经处理的蜂蜜样品 质谱条件 仪器 : 沃特世 Quattro micro API 电离模式 : ESl + 分析物 MRM 锥孔电压 (V) 碰撞能量 (ev ) AMOZ 335.> Aminohydantion AH 28.9> Semicarbizide SC 248.9> AOZ 236.> 清洗 * 2 ml 水 定量收集前两步流出液 * 1. 收集两步流出液于 15 ml 试管中 2. 加入 3 μl 5 mm 2-nitrobenzaldehyde 的 DMSO 溶液衍生化, 样品在 37 C 下水解衍生 18 小时 3. 冷却至室温, 加入 6 ml.1m K 2 HPO 4 调节 ph 值到 7 4. 上小柱流程 II 小柱 II(Oasis HLB 3 cc/ 6 mg) 活化 / 平衡 A. 1 ml 甲醇 B. 1 ml 水 上样制备的样品溶液, ph 7 清洗 A. 2 ml 水 B. 2 ml 含 3 甲醇水溶液 四种化合物的 MRM 图谱 吹干 2 min 洗脱 3 ml 含 2 甲酸的 MTBE/ 甲醇溶液 (9:1) 吹干再定容至 2 µl 流动相 色谱条件 仪器 : 沃特世 ACQUITY UPLC 系统 色谱柱 : ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1 x 1 mm, 1.7 µm 流动相 : 7 2 mm 甲酸铵水溶液 (ph 4.) 和 3 乙腈, 等度洗脱 流速 :.8 ml/min 温度 : 3 C 进样体积 : 2 µl 订购信息 描述 Oasis HLB, 3 cc/6 mg 部件号 WAT94226 ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1x1 mm,1.7 µm VanGuard Pre-column, ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1 x 5 mm, 1.7 µm LC/MS 认证样品瓶 CV [ 22 ]

23 QuEChERS-UPLC-MS/MS 快速测定鸡肝中七种磺胺类药物残留 样品预处理 取适量新鲜或冷冻的空白或供试鸡肝组织, 经均质器绞碎并使之均匀化 样品制备 称取鸡肝组织试样 5 g, 加入 DisQuE 萃取管中, 加入内标工作液 1 μl 和乙腈 2 ml, 涡旋使之充分混合, 振荡提取 3 min,4 C 下 1 r/min 离心 5 min, 移取上清液 1 ml 至 DisQuE 净化管中, 振荡 2 min,1 r/min 离心 5 min, 取上清液 5 ml,5 C 下氮气流吹干, 加入 2 ml.1 甲酸水溶液 - 甲醇 (1:9) 溶解残渣,.45 μm 滤膜过滤至进样瓶中 UPLC-MS/MS 测定 结果 七种磺胺类药物的标准溶液色谱图见图 1, 空白鸡肝的色谱图见图 2, 空白鸡肝阳性添加 (1 μg/kg) 的色谱图见图 3, 由图可知, 七种磺胺类药物分离良好, 空白鸡肝中不含有干扰测定物质 色谱条件 色谱柱 : 流动相 A: 流动相 B: 梯度洗脱 : 流速 : 柱温 : 进样量 : ACQUITY UPLC BEH C 18, 1.7μm, 2.1 x 1 mm.1 甲酸水溶液.1 甲酸甲醇溶液 ~1 min, 1 B~6 B 1~1.2 min,6 B~1 B 1.2~14 min,1 B~1 B.2 ml/min 25 C 1 μl 图 1. 七种磺胺类药物的标准溶液色谱图 (62.5 ng/ml) 质谱条件 电喷雾离子化, 正离子扫描喷雾电压 : 35 V 离子传输管温度 : 35 C 鞘气流速 : 1 L/min 辅助气流速 : 5 L/min 选择性离子监测见表 1 药物名称 保留时间 (min) 磺胺嘧啶 4.2 磺胺二甲基嘧啶 6. 磺胺甲氧嗪 6.5 磺胺甲恶唑 7.2 磺胺间甲氧嘧啶 磺胺二甲氧嘧啶 磺胺喹恶啉 9.6 定性 定量离子 (m/z) 碰撞能量 (ev) 251>156* > >186* > >156* > >156* > >156* > >156* > >156* 24 31>18 3 磺胺二甲氧嘧啶 -D >162* 25 表 1. 五种磺胺类药物的色谱保留时间和定量离子参数 注 :* 表示定量离子 [ 23 ] 图 2. 空白鸡肝的色谱图

24 QuEChERS-UPLC-MS/MS 快速测定鸡肝中七种磺胺类药物残留 基质效应 高中低浓度的基质效应结果见表 3, 基质效应在 9~11 之间, 说明经 DisQuE 净化管净化后, 基本上没有基质效应 图 3. 空白鸡肝阳性添加 (1 µg/kg) 的色谱图 线性范围 七种磺胺类药物在 2~2 μg/kg 范围内线性关系良好, 最低定量限 在 2 μg/kg, 各药物的回归方程及相关系数见表 2 药物名称 标准曲线方程 相关系数 (R 2 ) 磺胺嘧啶 y=.69x 磺胺二甲基嘧啶 y=.152x 磺胺间甲氧嘧啶 y=.83x 磺胺甲恶唑 y=.51x 磺胺甲氧嗪 y=.65x 磺胺二甲氧嘧啶 y=.322x 磺胺喹恶啉 y=.16x 表 2. 猪肉中五种磺胺类药物的标准曲线 添加浓度 (µg/kg) 药物名称 精密度 () 回收率 () 基质批内批间效应绝对相对 (RSD) (RSD) () 磺胺嘧啶 磺胺二甲基嘧啶 磺胺间甲氧嘧啶 磺胺甲恶唑 磺胺甲氧嗪 磺胺二甲氧嘧啶 磺胺喹恶啉 磺胺嘧啶 磺胺二甲基嘧啶 磺胺间甲氧嘧啶 磺胺甲恶唑 磺胺甲氧嗪 磺胺二甲氧嘧啶 磺胺喹恶啉 磺胺嘧啶 磺胺二甲基嘧啶 磺胺间甲氧嘧啶 磺胺甲恶唑 磺胺甲氧嗪 磺胺二甲氧嘧啶 磺胺喹恶啉 表 3. 七种磺胺类药物的精密度 回收率和基质效应测定结果 参考资料 耿士伟 1, 曲斌 1 *, 姜加华 1, 贡玉清 1 2, 温海燕 1. 江苏省畜产品质量检验测试中心 2. 沃特世科技 ( 上海 ) 有限公司 订购信息 描述 部件号 DisQuE 5 ml 提取管 (4 g 硫酸镁 1 g 氯化钠 1 g 无水柠檬酸钠.5 g 柠檬酸二钠盐倍半水合物 ) DisQuE 15 ml 净化管 (9 mg 无水硫酸镁 15 mg PSA 15 mg C 18 ) ACQUITY UPLC BEH C 18, 1.7 μm, 2.1 x 1 mm VVanGuard Pre-column, ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1 x 5 mm, 1.7 μm, 3 pcs/pack LC/MS 认证样品瓶 6751CV [ 24 ]

25 牛奶中六种青霉素类抗生素残留分析 样品制备 1. 吸取 5 ml 牛奶样品于 5 ml 离心管中, 摇匀, 加入 5 ml 乙腈, 涡流混合 6 s, 再加入 1 ml 乙腈涡流,18 r/min 离心 5 min, 取 1 ml 上清液, 氮气吹干 2. 加入 3 ml 磷酸缓冲盐 (PH 4.5), 涡流 15 s 固相萃取过程 Oasis HLB 固相萃取柱 :6 mg/3 cc 活化 / 平衡 A.3 ml 甲醇 B. 3 ml 水 上样 加入制备样品 (1-2 ml/min 流速 ), 抽干 结果与谱图 组分名称 原样中测得量 (ng) 加标后测得量 (ng) 6 种青霉素类抗生素回收率测定结果 标准加入量 (ng) 回收率 () 青霉素 G 青霉素 V 苯唑西林 氯唑西林 奈夫西林 双氯唑西林 洗脱 : 8 ml 7 乙腈水溶液 收集洗脱液定容至 1mL 经.3 µm 滤膜过滤后上机分析 色谱条件 图 1. 空白牛奶样品图 系统 : Alliance 2695 系统 色谱柱 : Atlantis T3, 2.1x15 mm, 5 µm 柱温 : 3 C 流动相 A:.1 甲酸水溶液 流动相 B:.1 甲酸乙腈溶液 流速 :.2 ml/min 进样量 : 1 µl 梯度 : 时间 (min) 水 ( 含.1 甲酸 )() 结果 乙腈 ( 含.1 甲酸 )() 梯度变化曲线 图 2. 牛奶加标样品图 (2 ng/ml) 质谱条件 系统 : 离子源 : Quattro Ultima 电喷雾离子源 订购信息 扫描方式 : ESI + 检测方式 : 多反应监测 描述 Oasis HLB, 3 cc/6 mg 部件号 WAT94226 Atlantis T3, 2.1 x 15 mm, 5 µm VanGuard Pre-column, Atlantis T3, 2.1 x 1 mm, 2 pcs/pack Sentry Guard Holder WAT97958 LC/MS 认证样品瓶 6751CV [ 25 ]

26 蜂蜜中氯霉素的分析 样品制备 1. 精称 5 g 蜂蜜,( 添加内标 D 5 -CAP) 溶解在 5 ml 水中 2. 加入 15 ml 乙酸乙酯提取, 离心 3. 转移上清液至另一试管中,5 C 氮气吹干 4. 用 1 ml 甲醇再定容, 用 2 ml 水稀释 固相萃取过程 (Oasis HLB 6 cc/2 mg) 分析物 MRM 锥孔电压 (V) 碰撞能量 (ev) 氯霉素 (CAP) 甲枫氯霉素 (TAP) 氟苯尼考 (FP) 内标 D 5 -CAP 活化 / 平衡 A. 5 ml 甲醇 B. 5 ml 水 结果 上样 2 ml 样品 ( 速度 :2 滴 / 秒 ) 清洗 5 ml 水 洗脱 2 x 2.5 ml 甲醇 在 5 C 氮气吹干 用 9:1 水 / 甲醇 (5 μl) 再定容 CAP, TAP, FP 2 μg/kg 的叠加图谱 色谱条件 仪器 : 沃特世 Alliance 2695 系统 色谱柱 : Symmetry C 8, 2.1 x 5 mm, 3.5 μm 色谱柱温度 : 3 C 保护柱 : Symmetry Sentry C 8, 2.1 x 1 mm, 3.5 μm 流动相 A: 水 流动相 B: 甲醇 流速 :.3 ml/min 进样量 : 2 μl 梯度 : 时间 (min) A B 分析物 平均回收率 () RSD (n = 5) 氯霉素 甲枫氯霉素 氟苯尼考 CAP, TAP, FP.3 ug/kg 的回收率 质谱条件 仪器 : 沃特世 Quattro micro API 电离模式 : ESI - 多反应监测 (MRM) 订购信息描述 Oasis HLB, 6 cc/2 mg Symmetry C 8, 2.1 x 5 mm, 3.5 µm Symmetry Sentry 保护柱 C 8, 2.1 x 1 mm, 3.5 µm, 2/pk Sentry Guard Holder 全部回收样品瓶 部件号 WAT1622 WAT2624 WAT16128 WAT CV [ 26 ]

27 牛奶中大环内酯类抗生素残留分析 样品制备 1. 取 5mL 牛奶样品放入 5mL 离心管中, 加入 15mL 乙腈, 摇晃,32 rpm 离心处理 15min 2. 将上清液转移到另一个 5 ml 离心管中, 加入 2 ml 正己烷, 摇晃 15 min,32 rpm 离心处理 15 分钟 3. 弃去正己烷层, 将乙腈 / 牛奶的上清液蒸发至体积为 3 ml, 加入 15 ml.1m 的磷酸盐缓冲溶液 (ph 8.) 固相萃取过程 Oasis HLB 6 cc/15 mg 活化 A.1 ml 甲醇 B.1 ml 水 C.1 ml 2 氯化钠溶液 D.2 ml.1 M 磷酸盐缓冲溶液 (ph 8.) 上样 5 ml 经均质处理的牛奶 清洗 1 5 ml 水 清洗 2 5 ml 4 甲醇水溶液 抽干小柱 5 min 在线 SPE 和色谱分离条件 : 上样泵 A 路 : 1 水 上样泵 B 路 : 1 甲醇 上样流速 : 4 ml/min 清洗 : 2 甲醇 / 乙腈 (3/7,v/v)+.5 甲酸 再平衡泵 A: 5/5 甲醇 / 丙酮 再平衡泵 B: 8/2 乙酸乙酯 / 丙酮 再平衡泵 C: 8/2 正己烷 / 丙酮 流速 : 4 ml/min 流动相 A:.1 甲酸 / 水 流动相 B:.1 甲酸 / 甲醇, 梯度分析 电离模式 : 电喷雾正离子 (ESI + ), 多反应监测 (MRM) 六种大环内酯类抗生素的 MRM 参数如下 : 化合物 母离子 (m/z) 子离子 (m/z) 红霉素 克拉霉素 罗红霉素 阿奇霉素 乙酰螺旋霉素 替考米星 ppb 添加水平的牛奶样品 LC/MS/MS 图谱 (MRM) 洗脱 5 ml 95 甲醇水溶液 氮气吹至近干, 用 1 ml 流动相 A 溶解 用.45 μm PVDF 滤膜过滤, 进行 LC/MS 分析 在线 SPE 方法 : 1. 取 1 ml 牛奶样品放入 5 ml 离心管中, 加入 2 μl 浓氨水, 再加入 2 ml 乙腈 min,35 rpm 离心处理 15 分钟 3. 取 2 ml 上清液放入 2 ml 样品瓶中, 加入 18 ml 水, 取 5 ml 进样分析 仪器条件 仪器 : 在线 SPE 柱 : 色谱柱 : 沃特世 Aqua-Analysis 在线 SPE-LC/MS/MS 水分析系统 Oasis HLB 2.1 x 2 mm, 25 μm XBridge C 18, 2.1 x 5 mm, 3.5 μm 订购信息描述部件号 Oasis HLB, 6 cc/ 15 mg XBridge C 18, 2.1 x 5 mm, 3.5 μm Oasis HLB, 2.1 x 2 mm, 25 μm LC/MS 认证样品瓶 6751CV [ 27 ]

28 蜂王浆中 18 种磺胺残留量的测定 样品制备 1. 准确称取 2 g( 精确到.1 g) 测试样品于 5 ml 离心管内, 加入 2 µl 内标工作溶液, 然后加入 2 ml 水, 快速混匀 1 min, 震荡提取 1 min 2. 加入.5 ml 5 三氯乙酸溶液, 快速摇动 3 s,3 r/min 离心 5 min 3. 移取上清液至三角瓶中, 再向残渣中加入 15 ml 水, 待净化 色谱条件 固相萃取过程 Oasis MCX 固相萃取柱 :6 cc/15 mg 活化 / 平衡 A.5 ml 甲醇 B.1 ml 水 上样 加入制备样品 清洗 A.5 ml 2 甲酸 B.5 ml 甲醇 洗脱 5 ml 5 氨水甲醇溶液 5 C 氮气吹干溶剂 加乙腈.1 mol/l 乙酸胺溶液 1. ml 过.2 µm 滤膜后, 上机 色谱柱 : Atlantis T3, 15 x 2.1 mm, 3 µm 柱温 : 流动相 A: 流动相 B: 流动相 C: 流速 : 35 C 乙腈.1 甲酸水溶液 甲醇.2 ml/min 进样量 : 2 µl 梯度 : 时间 (min) A B C 种磺胺的定性离子对和定量离子对 化合物中文名称 磺胺嘧啶 磺胺噻唑 磺胺吡啶 磺胺甲基嘧啶 磺胺间甲氧嘧啶 磺胺甲噻二唑 磺胺二甲嘧啶 磺胺甲氧哒嗪 磺胺对甲氧嘧啶 磺胺氯哒嗪 化合物英文名称 sulfadiazine sulfathiazine sulfapyridine sulfamethoxypyridazine sulfamonomethoxine sulfamethizole sulfamethazine sulfamethoxypyridazine sulfameter sulfachloropyridazine 磺胺甲基异唑 sulfamethoxazole 磺胺邻二甲氧嘧啶 sulfadoxine 磺胺二甲异唑 sulfisoxazole 磺胺苯酰 磺胺氯吡嗪 磺胺苯吡唑 磺胺间二甲氧嘧啶 sulfabenzamide sulfachloropyrazine sulfaphenazole sulfadimethoxine 磺胺喹啉 sulfaquinoxaline 定性离子对 (m/z) 251/ / / /17 25/156 25/ / / / / / /17 279/ /24 281/ / / / / /18 254/ / / /18 268/ / / /18 285/ /18 315/ /16 311/ /218 31/156 31/28 定量离子对 (m/z) 251/ /156 25/ / / / / / / / / / / / / / /156 31/156 质谱条件 离子源 : 扫描方式 : 检测方式 : 电喷雾离子源 正离子扫描 多反应监测 (MRM) [ 28 ]

29 蜂王浆中 18 种磺胺残留量的测定 18 种磺胺添加浓度及其平均回收率实验数据 磺胺嘧啶 磺胺噻唑 磺胺吡啶 化合物名称添加浓度 /(µg/kg) 平均回收率 磺胺甲基嘧啶 磺胺间甲氧嘧啶 磺胺甲噻二唑 磺胺二甲嘧啶 磺胺甲氧哒嗪 磺胺对甲氧嘧啶 磺胺氯哒嗪 磺胺甲基异 唑 磺胺邻二甲氧嘧啶 磺胺二甲异 磺胺苯酰 唑 磺胺氯吡嗪 磺胺苯吡唑 磺胺间二甲氧嘧啶 磺胺喹 订购信息 描述 啉 部件号 Oasis MCX, 6 cc/15 mg Atlantis T3, 2.1 x 15 mm, 3 µm VanGuard Pre-column, Atlantis T3, 2.1 x 1 mm, 2 pcs/pack Sentry Guard Holder 全部回收样品瓶 WAT CV [ 29 ]

30 蜂蜜中头孢唑啉 头孢匹林 头孢氨苄 头孢洛宁 头孢喹肟残留量的测定 样品制备准确称取 5 g( 精确到.1 g) 测试样品于 15 ml 三角瓶中, 加入 25 ml.15 mol/l 磷酸二氢钠缓冲溶液, 混匀, 用氢氧化钠溶液, 调节 PH= 8.5 色谱条件 固相萃取过程 Oasis HLB 固相萃取柱 :6 cc/5 mg 活化 / 平衡 A.5 ml 甲醇 B.5 ml 水 C.1 ml 磷酸二氢钠 上样 加入 25 ml 样品制备液 清洗 A.5 ml 磷酸二氢钠 B.2 ml 水 洗脱 2 ml 乙腈 4 C 氮气吹干溶剂 2 ml 水溶解残渣, 摇匀 过.2 µm 滤膜, 上机 色谱柱 : XBridge C 18, 2.1x15 mm, 3.5 µm 柱温 : 流动相 A: 流动相 B: 流速 : 3 C.1 甲酸水溶液 乙腈溶液.2 ml/min 进样量 : 2 µl 梯度 : 时间 (min) 流速 (µl/min) 水 / 含.1 乙酸乙醚 / 种头孢菌素的定性离子对和定量离子对 化合物中文名称 头孢唑啉 头孢匹林 头孢氨苄 头孢洛宁 头孢喹肟 化合物英文名称 cefazolin cephapirin cephalexin cefalonium cefquinome 定性离子对 (m/z) 456/ / / / / / / / / /396 定量离子对 (m/z) 456/ / / / /134 5 种头孢菌素添加浓度及其平均回收率实验数据 头孢唑啉 头孢匹林 头孢氨苄 头孢洛宁 头孢喹肟 化合物名称添加浓度 /(µg/kg) 平均回收率 质谱条件 离子源 : 扫描方式 : 检测方式 : 电喷雾离子源 正离子扫描 多反应监测 (MRM) 订购信息 描述 部件号 Oasis HLB, 6 cc/5 mg XBridge C 18, 2.1 x 15 mm, 3.5 µm VanGuard Pre-column, XBridge C 18, 2.1 x 1 mm, 3.5 µm, 2 pcs/pack LC/MS 认证样品瓶 CV [ 3 ]

31 环境水样中 16 种磺胺类抗生素和甲氧苄氨嘧啶残留分析 固相萃取过程固相萃取柱 1 (Oasis HLB 6 cc/5 mg) 活化 / 平衡 A.6 ml 二氯甲烷 B.6 ml 甲醇 C.12 ml 5 mm 的 Na 2 EDTA 水溶液 上样.25 至 1 L 水样 ( 预先用玻璃纤维过滤除去悬浮颗粒杂质 ), 流速 5-1 ml/min 清洗 1 ml 水 通氮气将小柱吹干 洗脱 6 ml 二氯甲烷 / 甲醇 2/1 (v/v) 氮气流吹干, 用.2 ml 氯仿溶解, 加入 1.8 ml 正己烷用于第二步固相萃取 固相萃取过程固相萃取柱 2 (Sep-Pak Silica 3 cc/5 mg) 活化 / 平衡 4 ml 正己烷 上样 2 ml 第一步固相萃取得到的溶液 清洗 A.3 ml 正己烷 B.3 ml 正己烷 / 乙酸乙酯 9/1 (v/v) C.3 ml 正己烷 / 乙酸乙酯 3/2 (v/v) 洗脱 A.3 ml 甲醇 / 丙酮 1/1 (v/v) B.3 ml 丙酮 氮气流吹干, 用.5 ml 甲醇将残渣重新溶解, 经.2 μm 滤膜过滤后进行 LC/MS/MS 分析 色谱条件 仪器 : 色谱柱 : 流动相 A: 流动相 B: 沃特世 ACQUITY UPLC 系统 ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1x1 mm, 1.7 μm.1 甲酸水溶液 甲醇, 含.1 甲酸 梯度 : 时间 (min) A B 曲线 流速 : 柱温 : 进样量 : 质谱条件 仪器 : ml/min 4 C 5 μl 电离源 : ESI + 毛细管电压 : 离子源温度 : 脱溶剂气温度 : 锥孔气流速 : 脱溶剂气流量 : 沃特世 ACQUITY TQD 检测器 3. kv 12 C 4 C 5 L/h 9 L/h 16 种磺胺类抗生素和甲氧苄氨嘧啶的 MRM 参数 : 化合物 SCP SDM SDMD SDZ SIA SIM SME SMO SMP SMR MRM 285> >27 311> >92 279> > > >92 268> > > > > >18 268> >18 281> >18 265> >11 [ 31 ]

32 环境水样中 16 种磺胺类抗生素和甲氧苄氨嘧啶残留分析 16 种磺胺类抗生素和甲氧苄氨嘧啶的 MRM 参数 ( 续 ): 化合物 SMT SMX MRM 271> >92 254> >92 SNT 336> >198 SPD 25>156 25>184 SQX 31>156 31>18 STZ 256> >18 TMP 291>23 291> C 6 -SMA 285>186 结果 河水样品的 UPLC /MS/MS MRM 图谱 :(a) 经过 SPE 净化 ;(b) 没有经过 SPE 净化 其它详细信息请参考原文 订购信息 描述 部件号 Oasis HLB, 6 cc/5 mg Sep-Pak Silica, 3 cc/5 mg WAT281 ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1 x 5 mm,1.7 µm VanGuard Pre-column, ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1 x 5 mm, 1.7 µm, 3 pcs/pack LC/MS 认证样品瓶 CV [ 32 ]

33 肉类和牛奶中的氨基糖苷类抗生素 简介 氨基糖苷类抗生素在兽医学中常被用于治疗产肉和产奶动物 由于人类会摄入这些产品, 因此需要一种行之有效的方法来检测这些抗生素的残留量 人们已经开发了一种从牛肉和牛奶中快速简便地提取这类化合物的方法 经证实, 牛奶的定量限 (LOQ) 为 1 ppb, 而肉组织的 LOQ 为 5 ppb 样品制备 提取缓冲液 (1 mm NH 4 OOCH 3 /.4 mm Na 2 EDTA/1 NaCl/2 TCA): 将.77 g 醋酸铵 (NH 4 OOCH 3 ) 加入 1 L 容量瓶中 加入大约 9 ml 试剂水以溶解醋酸铵 用 1 N HCl 或 1 N NaOH 将 ph 值调节至 4. 加入.15 g 乙二胺四乙酸二钠 (Na 2 EDTA.2H 2 O) 5 g 氯化钠 (NaCl) 和 2 g 三氯乙酸 (TCA) 充分混合至溶解, 并用试剂水定容 初步提取 向一支 5 ml 离心管中加入 2 g 牛肉组织匀浆或 1 ml 牛奶 加入 2 ml 提取缓冲液, 涡旋混合 1 秒, 然后充分振荡 1 分钟 在 4 RPM 下离心样品 5 分钟, 收集上清液 根据需要, 使用稀释的 HCl 或 NaOH 将上清液的 ph 值调节至 6.5±.5 SPE 净化 在本研究中, 使用了 Oasis HLB 96 孔板 (3 mg) 如有必要可以使用 1 cc/3 mg 的小柱 HLB 96 孔板或 1 cc/3mg 小柱活化 / 平衡 A.1.5 ml 甲醇 B.1.5 ml 水流速为 1 ml/min 或更小上样组织样品 1 ml, 牛奶 1.5 m 清洗.5 ml 1:5:85 甲酸 / 异丙醇 / 水洗脱液加 1.5 μl HFBA 进 UPLC/MS/MS 分析 LC 条件 系统 : ACQUITY UPLC 色谱柱 : ACQUITY HSS PFP, 1.7 μm, 2.1 x 1 mm 进样体积 : 3 μl 柱温 : 35 C 流动相 A: 2 mm HFBA 水溶液 流动相 B: 2 mm HFBA 乙腈溶液 流速 :.5 ml/min 梯度 : 初始条件为 2 的流动相 B, 在 7 min 内以线性 梯度增加至 8, 保持 8 min, 在 8.1 min 时返回 到 2 保持并重新平衡系统 1 min MS 条件 MS 系统 : 模式 : 毛细管 : 提取器 : 源温度 : 锥孔气 : 脱溶剂气温度 : 脱溶剂气 : 碰撞气 : 氨基糖苷类 链霉素 双氢链霉素 庆大霉素 C1a 庆大霉素 C1 庆大霉素 C2C2a 新霉素 ACQUITY TQD 电喷雾正离子 (ES+) 3. kv 3. V 13 C 2 L/h 45 C 9 L/h 氩气,.2 ml/min MRM > > > > > > > > > > > > 本研究使用的锥孔和碰撞参数以及 MRM 通道 锥孔电压 (V) 碰撞能量 (ev) [ 33 ]

34 肉类和牛奶中的氨基糖苷类抗生素 结果 氨基糖苷类 回收率 RSD 回收率 RSD n=6 n=6 1 ppb 2 ppb 链霉素 双氢链霉素 Gentamicin C1a 庆大霉素 C 庆大霉素 C2C2a 新霉素 加标至牛奶中的氨基糖苷类的回收率数据总结 氨基糖苷类 回收率 RSD 回收率 RSD n=6 n=6 5 ppb 16 ppb 链霉素 双氢链霉素 庆大霉素 C1a 庆大霉素 C 庆大霉素 C2C2a 新霉素 : MRM of 3 Channels ES > (Neomycin) e min 2: MRM of 7 Channels ES > (Gentamincin_C1) 2.29e min 2: MRM of 7 Channels ES > 16.1 (Gentamincin_C2a,C2) 2.9e min 2: MRM of 7 Channels ES > (Gentamincin_C1a) 4.49e min : MRM of 4 Channels ES > (Dihydrostreptomycin) 6.74e min 1: MRM of 4 Channels ES > (Streptomycin) 1.6e min 加标浓度为 1 µg/kg (ppb) 的牛奶所获得的 UPLC/MS/MS 色谱图 加标至牛奶中的氨基糖苷类的回收率数据总结 订购信息描述部件号 ACQUITY HSS PFP, 1.7 μm, 2.1 x 1 mm Oasis HLB 96 孔板, 3 mg WAT58951 Atlantis dc 18, 5 μm, 2.1 x 1 mm Sentry 2.1 mm 保护柱套 WAT97958 Qsert 样品瓶,LCGC 认证组合包 C 参考资料 : 沃特世应用资料 EN 212 年沃特世公司 Waters Oasis ACQUITY UPLC 和 ACQUITY 是沃特世公司的注册商标 [ 34 ]

35 使用 QuEChERS 方法检测膳食和牛奶中的阿维菌素类 简介 由于牛奶和肉类等食品具有复杂的基质, 因此要对其中的阿维菌素进行灵敏地检测会有一定的挑战性 利用 QuEChERS 方法制备样品可实现高通量和高灵敏度的食品分析 虽然 QuEChERS 通常被用于水果和蔬菜中的农药多残留分析, 但它也可以用于分析家畜产品中的兽药 本应用资料使用 QuEChERS 方法和 LC-MS/MS 技术制备并分析牛奶和碎牛肉中 ppb 水平的阿维菌素 样品制备 初步提取 (QuEChERS): 向一根 5 ml 离心管中加入 1 ml 全脂牛奶 ( 经巴氏灭菌 ), 或加入 8 g 碎牛肉 (8 瘦肉 ) 和 2 ml 水 加入 1 ml 乙腈, 用力振荡离心管 1 分钟 加入欧洲标准委员会 (CEN) QuEChERS 用 DisQuE TM 盐包的内容物 ( 部件号 : ), 用力振荡 1 分钟 在 4 rpm 下离心 15 分钟, 取 1 ml 上清液 ( 最上层 ) 用于 d-spe 纯化 d-spe 净化 将 1 ml 上清液转移至一支 2 ml 的 d-spe 净化管中, 管内含有 15 mg 硫酸镁和 5 mg C 18 吸附剂, 用力振荡 1 分钟 在 12 RPM 下离心 5 分钟, 取.5 ml 样品用于 LC-MS/MS 分析 LC 条件 系统 : ACQUITY UPLC 色谱柱 : XSelect CSH TM C 18 XP, 2.5 μm, mm 部件号 : 进样体积 : 5 µl 温度 : 5 C 流动相 A: 5 mm 醋酸铵水溶液 流动相 B: 5 mm 醋酸铵甲醇溶液 流速 :.4 ml/min 梯度 : 初始条件为 7 的流动相 B, 在 5 min 内以线性梯 度增加至 97, 保持 8 min, 在 8.1 min 时返回到 7 保持并重新平衡系统 1 min 样品瓶 : 最大回收样品瓶 部件号 : 667CV MS 条件 MS 系统 : Xevo TQ-S 电离模式 : 电喷雾正离子 (ESI+) 结果 平均回收率 (RSD) n=5 浓度范围 (ppb) 碎牛肉 全脂牛奶 浓度水平 低水平 高水平 低水平 高水平 低水平 高水平 Abamectin (3.6) 88(3.6) 86(14.) 89(3.7) Ivermectin (17.7) 85(3.1) 84(5.3) 83(14.8) Doramectin (4.8) 85(4.2) 11(11.7) 9(5.) Epinomectin (2.9) 91(1.5) 94(3.9) 93(3.) Moxidectin 1 1 9(4.2) 87(1.8) 1(2.4) 9(5.6) 表 1. 碎牛肉和全脂牛奶样品中的阿凡曼菌素回收率 _ : MRM of 1 Channel ES _75 3: MRM of 1 Channel ES _ TIC (Abamectin) 1 TIC (Ivermectin) e3 9.93e3 5: MRM of 1 Channel ES TIC (Dramectin) 3.42e4 (a) (b) (c) min min min _67 2: MRM of 1 Channel ES _67 1 TIC (Abamectin) e3 3: MRM of 1 Channel ES+ TIC (Ivermectin) 9.93e _ : MRM of 1 Channel ES+ TIC (Dramectin) 3.42e min min min _75 4: MRM of 1 Channel ES _ TIC (Epinomectin) e5 (d) (e) : MRM of 1 Channel ES+ TIC (Moxidectin) 4.85e min min _67 4: MRM of 1 Channel ES _67 1 TIC (Epinomectin) e5 1: MRM of 1 Channel ES+ TIC (Moxidectin) 4.85e min min 图 1. 从碎牛肉样品获得的阿维菌素 LC-MS/MS 色谱图 ; 上面的谱线是低水平加标样品, 下面的谱线是碎牛肉空白样 (a) 阿维菌素 (b) 伊维菌素 (c) 多拉菌素 (d) 依普菌素 (e) 莫昔克丁 [ 35 ]

36 使用 QuEChERS 方法检测膳食和牛奶中的阿维菌素类 _ : MRM of 1 Channel ES+ TIC (Abamectin) 5.45e3 3: MRM of 1 Channel ES _ _ TIC (Ivermectin) 1.28e4 5: MRM of 1 Channel ES+ TIC (Dramectin) 7.4e4 (a) (b) (c) min min min _19 1 2: MRM of 1 Channel ES+ TIC (Abamectin) 5.45e _19 3: MRM of 1 Channel ES _19 TIC (Ivermectin) e4 5: MRM of 1 Channel ES+ TIC (Dramectin) 7.4e min min min _ min min _19 4: MRM of 1 Channel ES _19 1 TIC (Epinomectin) e _28 1 (d) 4: MRM of 1 Channel ES TIC (Epinomectin) 1.76e5 (e) : MRM of 1 Channel ES+ TIC (Moxidectin) 7.3e4 1: MRM of 1 Channel ES+ TIC (Moxidectin) 7.3e min min 图 2. 从全脂牛奶样品获得的阿维菌素 LC-MS/MS 色谱图 ; 上面的谱线是低水平加标样品, 下面的谱线是全脂牛奶空白样 (a) 阿维菌素 (b) 伊维菌素 (c) 多拉菌素 (d) 依普菌素 (e) 莫昔克丁 (d) eprinomectin (e) moxidectin 订购信息 描述 部件号 XSelect CSH C 18 XP 色谱柱, 2.5 μm, 2.1 x 1 mm CEN QuEChERS DisQuE 试剂袋 DisQuE 5 ml 离心管 最大回收样品瓶 667CV 参考资料 : 沃特世应用资料 72444EN 213 年沃特世公司 Waters ACQUITY UPLC XSelect 和 Xevo 是沃特世公司的注册商标 DisQuE 是沃特世公司的商标 [ 36 ]

37 鸡肉中的恩诺沙星 (BAYTRIL) 前处理 1. 用 3 ml 乙醇 / 乙酸 (99:1,v/v) 对 1.5 g 匀浆样品进行提取, 并在 4 rpm 下离心 5 分钟 2. 取 1 ml 上清液, 用于 SPE 净化和富集 3. 对于肌肉样品, 在进行 SPE 之前用 5 ml 水稀释 1 ml 上清液 ; 肝脏样 品则无需稀释 固相萃取过程小柱 I:Oasis MCX, 6 cc/15 mg 活化 / 平衡 : A. 3 ml 甲醇 B. 3 ml 水 C. 3 ml 乙醇 进样体积 : 1 µl 柱温 : MS 条件 MS 系统 : 电离模式 : MRM 方法参数 分析物 恩诺沙星 环丙沙星 3 C Waters Quattro micro API 电喷雾正离子 (ESI+) 多重反应监测 MRM 通道 上样 : 1 ml 样品 清洗 : A.3 ml 1 乙酸 / 乙醇 B. 3 ml 水 C. 3 ml 甲醇 结果 比较样品制备前后加标鸡肌肉样品的结果, 测得平均回收率为 75 加标浓度为 2 μg/kg 的六份重复样品的精度为 12 环丙沙星 小柱 II:Sep-Pak Accell QMA 3 cc/5 mg 活化 / 平衡 : 3 ml 5 氨的甲醇溶液 将 Sep-Pak Accell QMA 小柱连接至 MCX 小柱的出口 从 MCX 小柱洗脱至 Sep-Pak Accell QMA 小柱中 (6 cc 小柱位于顶部 ) 恩诺沙星 洗脱 *: 3 ml(5:95,v/v) 氨的甲醇溶液 取下 Oasis MCX 小柱 清洗 : 3 ml 乙醇 洗脱 : 3 ml 乙醇的甲酸溶液 (98:2,v/v) 图 1. 加标 (2 ng/kg) 鸡肌肉的典型 UPLC /MS/MS 色谱图 蒸发溶剂并复溶于 15 μl 乙腈水溶液 (15:85,v/v) 中 * 注 : 分析物从小柱 I 中洗脱后, 通过阴离子交换保留在小柱 II 上 因此, 来自小柱 I 的洗脱液成为了小柱 II 的上样 UPLC 条件 系统 : ACQUITY UPLC 色谱柱 : ACQUITY UPLC BEH C 18, 1.7 μm,1 x 5 mm 流速 :.12 ml/min 流动相 A: 1 甲酸水溶液 流动相 B: 乙腈 梯度 : 时间 (min) A B 订购信息 描述 部件号 Oasis MCX, 6 cc/15 mg, 6 µm, 3/ 盒 Sep-Pak Accell Plus QMA, 3 cc/5 mg, 5/ 盒 WAT285 ACQUITY UPLC BEH C 18, 1.7 µm, 1 x 5 mm ACQUITY UPLC BEH C 18, 1.7 μm, 1 x 5 mm,3/ 包 Qsert 样品瓶 参考资料 : 沃特世应用 WA 年沃特世公司 Waters Oasis Sep-Pak ACQUITY UPLC 和 UPLC 是沃特世公司的注册商标 Quattro micro 和 Accell 是 沃特世公司的商标 其他所有商标均归各自的拥有者所有 [ 37 ]

38 食用肌肉组织中多种兽药多残留测定 简介 目前, 针对组织样品中多种兽药残留的 LC/MS/MS 检测, 已经开发出优化 的样品制备和分析方案 本研究选择了三种肌肉组织样品 ( 猪肉 鸡肉和三文鱼 ) 来证实该方法的适用性 用酸化乙腈 / 水溶剂处理样品, 以沉淀蛋白质并提取目标兽药 然后使用 Sep-Pak C 18 小柱或 96 孔板进行简单的 SPE 纯化 蒸发并复溶后, 通过 LC/MS/MS 分析样品 从主要的兽药种类中选择具有代表性的化合物, 包括四环素 氟喹诺酮 磺胺类 大环内酯 B- 内酰胺 NSAID 类固醇和 B- 肾上腺素药物 样品制备初步提取 / 沉淀 在一支 5 ml 离心管中加入 5 g 组织匀浆样品 加入 1 ml.2 甲酸的 8:2 乙腈 / 水溶液 漩涡混合 3 秒, 置于摇床上 3 分钟 在 12 rpm 下离心 5 分钟 在提取 / 沉淀步骤中, 大多数目标化合物都表现出良好的回收率, 但同时还提取出了大量的脂肪 SPE 净化 取 1 ml 上清液 ( 来自步骤 1), 使用 Sep-Pak C 18 小柱或样品板进行 SPE 净化 ( 有关 SPE 的详细信息, 请参见图 1) 该步骤可以除去脂肪和非极性干扰物 固相萃取过程 (Sep-Pak C 18, 1 cc/1 mg) 活化 : 1 ml 8:2 乙腈 / 水 安装收集管 通过 / 收集 : 1 ml 蛋白沉淀后样品 LC 条件 系统 : ACQUITY UPLC 色谱柱 : 流动相 A: 流动相 B: 进样体积 : 进样模式 : 柱温 : 弱清洗液 : 强清洗液 : 密封清洗液 : ACQUITY UPLC CSH C 18, 1.7 μm, 2.1 x 1 mm.1 甲酸水溶液.1 甲酸的乙腈溶液 7 μl 部分定量环进样 3 C 1:9 乙腈 / 水 (6 μl) 5:3:4 水 / 乙腈 /IPA(2 µl) 1:9 乙腈 / 水 梯度 : 时间 流速 溶剂 A 溶剂 B 曲线 (min) (ml/min) () () MS 条件 检测器 : 电离模式 : 源温度 : 脱溶剂气温度 : 脱溶剂气流速 : 锥孔气流速 : 碰撞气流速 : 数据管理 : 初始 初始 Xevo TQ 电喷雾正离子 ( 仅氯霉素采用负离子模式 ) 15 C 5 C 1, L/h 3 L/h.15 ml/min Masslynx 4.1 版 安装收集容器 冲洗 / 收集 :.5 ml 8:2 乙腈 / 水 加入.25 ml 甲酸铵的 5:5 乙腈 / 甲醇溶液, 对样品进行缓冲, 以保护对酸敏感的分析物冲洗 / 收集.5 ml 8:2 乙腈 / 水 图 1. SPE 纯化方案 [ 38 ]

39 食用肌肉组织中兽药的多残留测定 结果 化合物 加标浓度 (ng/g) 猪肉回收率 (RSD) n=5 鸡肉回收率 (RSD) n=6 三文鱼回收率 (RSD) n=6 卡巴氧 1. 9 (36) 17 (14) 21 (13) 氯霉素 (2) 51 (2) 89 (2) 金霉素 (11) 49 (6) 54 (7) 环丙沙星 (21) 61 (8) 88 (2) 地塞米松 1. 7 (7) 61 (8) 91 (4) 恩诺沙星 (4) 62 (9) 9 (2) 红霉素 (9) 33 (4) 43 (8) 林可霉素 (17) 59 (1) 83 (8) 苯唑西林 (4) 48 (6) 55 (4) 土霉素 (8) 5 (1) 6 (5) 1 1 S/N:RMS= S/N:RMS= min : MRM of 1 Channels ES > (Erthromycin) 4.85e : MRM of 1 Channels ES > (Erthromycin) 4.55e3 青霉素 (7) 45 (8) 54 (9) 保泰松 (16) 44 (1) 38 (8) 图 2. 红霉素加标浓度为 1 ng/g 的猪肉的典型 LC-MS/MS 色谱图 ( 上方的图为主要 MRM 通道 ) 莱克多巴胺 (7) 62 (11) 88 (3) 沙丁胺醇 (14) 66 (12) 78 (7) 磺胺甲基嘧啶 (5) 59 (7) 82 (3) 磺胺二甲嘧啶 (5) 6 (8) 84 (3) 磺胺 (21) 65 (21) 74 (11) 四环素 (1) 53 (8) 69 (2) 泰乐霉素 (11) 36 (12) 63 (14) 表 1. 从三种加标组织样品获得的回收率数据 订购信息 描述 部件号 ACQUITY UPLC CSH C 18, 1.7 µm, mm Sep-Pak C 18 小柱, 1 cc, 1 mg LCMS 认证样品瓶 WAT CV 参考资料 : 沃特世应用资料 EN 213 年沃特世公司 Waters ACQUITY UPLC Xevo Masslynx 和 Sep-Pak 是沃特世公司的注册商标 CSH 是沃特世公 司的商标 [ 39 ]

40 牛奶中兽药的多残留测定 简介 目前, 针对牛奶样品中多种兽药残留开发了经过优化的样品制备和分析方案的 LC/MS 检测方法 首先将样品用等体积的乙腈进行初步沉淀和提取 然后用酸化乙腈处理提取过程中的上清液, 以沉淀残留的蛋白质, 然后使用 Sep-Pak C 18 小柱进行简单的 SPE 纯化, 洗脱液蒸干并复溶后, 通过 LC/MS 分析样品 待测物质为主要的兽药种类中有代表性的化合物, 包括四环素 氟喹诺酮 磺胺类 大环内酯 β- 内酰胺 非甾体抗炎药 类固醇和 β- 肾上腺素药物 样品制备方案初步提取 / 沉淀 ( 步骤 1): 转移 : 向一支 15 ml 离心管中加入 2 ml 样品 活化 :1 ml 8:2 乙腈 / 水 上样通过 / 收集 :1 ml 蛋白沉淀后的样品 清洗 / 收集 :.5 ml 8:2 乙腈 / 水 放置收集管 加入.25 ml 含有 2 mm 甲酸铵的 5:5 乙腈 / 甲醇, 缓冲样品并保护酸不稳定的待测物 蒸干 / 复溶 :.2 ml 25:75 乙腈 / 缓冲液 (25mM 甲酸铵缓冲液,PH 4.5) 图 1. SPE 纯化方案 加入 :2 ml 乙腈 (ACN) 并漩涡混合 3 秒 离心 :8 x g,4 分钟 1 1 在该步骤中, 大多数目标化合物都得到了很好的提取, 但同时还提取出了大量蛋白质和一些脂肪, 这些物质可能会干扰 LC/MS 分析 残留蛋白质沉淀 ( 步骤 2): 转移 : 向第二支离心管中加入 2 ml 上清液 ( 来自步骤 1) 加入 :3 ml 酸化乙腈 (.2 甲酸 ) 离心 :3 秒 2 2 该步骤可以有效沉淀残留蛋白质 LC 条件 系统 : ACQUITY UPLC 色谱柱 : ACQUITY UPLC CSH C 18, 1.7 µm, 2.1 x 1 mm 流动相 A:.1 甲酸水溶液 流动相 B:.1 甲酸乙腈溶液 进样体积 : 7 μl 进样模式 : 部分定量环进样 柱温 : 3 C 弱洗针液 : 1:9 乙腈 / 水 (6 μl) 强洗针液 : 5:3:2 水 / 乙腈 / 异丙醇 (2 µl) 密封清洗液 : 1:9 乙腈 / 水 梯度 : 时间 流速 组成 曲线 (min) (ml/min) A B 初始 SPE 净化 ( 步骤 3): 取 1 ml 上清液 ( 来自步骤 2), 使用 Sep-Pak C 18 小柱进行 SPE 纯化 ( 有关 SPE 的详细信息, 请参见图 1) 3 3 该步骤可以除去脂肪和非极性干扰物 MS 条件 MS 系统 : 源温度 : 脱溶剂气温度 : 脱溶剂气流速 : 锥孔气流速 : 碰撞气流速 : 数据管理 : ACQUITY TQD 15 C 5 C 1 L/H 3 L/h.15 ml/min Masslynx 4.1 版 [ 4 ]

41 牛奶中兽药的多残留测定 结果 化合物 加标浓度 (ng/g) 回收率 (RSD) (n=3) 抑制 * 卡巴氧 (27) -43 环丙沙星 (2) 32 氯霉素 (16) 1 金霉素 (2) 7 地塞米松 (6) MRL 2 stage PPT 3 VET8june211_4 Sm (Mn, 2x2) min VET8june211_4 Sm (Mn, 2x2) : MRM of 8 Channels ES >158.1 (erythromycin) 3.71e4 4: MRM of 8 Channels ES >576.3 (erythromycin) 1.11e4 恩诺沙星 (11) 26 红霉素 (1) 5 林可霉素 (9) 25 苯唑西林 (12) min 土霉素 (16) -9 青霉素 G (8) -8 保泰松 (18) 2 图 2. 红霉素加标浓度为 6.7 ng/g 的牛奶样品的典型 LC-MS/MS 色谱图 ( 上方的图为主要 MRM 通道 ) 莱克多巴胺 (14) 沙丁胺醇 (3) 96 磺胺甲基嘧啶 (4) -16 磺胺二甲嘧啶 (6) -74 磺胺 (3) 6 四环素 (18) -21 表 1. 回收率和基质效应 * 负数表示基质增强 订购信息 描述 部件号 ACQUITY UPLC CSH C 18, 1.7 µm, mm Sep-Pak C 18 小柱, 1 cc, 1 mg LCMS 认证样品瓶 WAT CV 参考资料 : 沃特世应用资料 72489EN 213 年沃特世公司 Waters ACQUITY ACQUITY UPLC Masslynx 和 Sep-Pak 是沃特世公司的注册商标 CSH 是沃特世 公司的商标 [ 41 ]

42 牛奶中的青霉素 四环素和磺胺类药物 简介 许多国际组织都十分关注抗生素和抗菌药物的滥用问题 本方法可用于监测牛奶中的抗菌药物 结果 前处理 首先用 3 ml 乙腈提取牛奶 (1 ml)( 振荡 1 分钟 ) 离心样品, 收集上清液 在 45 C 的水浴中, 用温和的氮气流将乙腈提取液 ( 提取液 1) 蒸发 3 至刚好 1 ml 以下 ( 该步骤将提取青霉素以及部分磺胺类药物 ) 然后用 3 ml ph 5 琥珀酸盐 /EDTA 缓冲液提取牛奶固体颗粒 离心样品并收集上清液 ( 提取液 2, 该步骤将提取四环素和剩余的磺胺类药物 ) 将 提取液 2 与蒸发后的提取液 1 混合, 加水使体积变成 1 ml 然后使用 Oasis HLB 小柱处理混合后的提取液 固相萃取过程 Oasis HLB 1 cc/3 mg LC 条件 色谱柱 : 流速 : 流动相 A: 流动相 B: 活化 / 平衡 : 1 ml 甲醇,1 ml 水 上样 : 来自样品前处理步骤 清洗 :.5 ml 5 甲醇 / 水 洗脱 : 含有 6 mm 醋酸的 6:4 甲醇 / 水 ACQUITY UPLC BEH Shield RP18, 1.7 µm, 2.1 x 1 mm 4 ml/min.1 甲酸水溶液 乙腈 梯度 : 时间 (min) A B 初始 min 1 ppb 加标牛奶 化合物 MRM 通道 回收率 土霉素 四环素 金霉素 磺胺嘧啶 磺胺噻唑 磺胺吡啶 磺胺甲基嘧啶 磺胺二甲嘧啶 磺胺甲氧哒嗪 磺胺氯哒嗪 磺胺甲恶唑 磺胺二甲氧嘧啶 青霉素 G 苯唑西林 氯唑西林 MRM 方法参数和回收率数据 订购信息描述部件号 Oasis HLB,1 cc/3 mg,1/ 盒 WAT94225 ACQUITY UPLC BEH Shield RP18, 1.7 µm, 2.1 x 1 mm LCMS 认证样品瓶 6751CV 211 年沃特世公司 Waters Oasis 和 ACQUITY UPLC 是沃特世公司的商标 [ 42 ]

43 使用 QuEChERS 检测肉类和牛奶中的类固醇激素 简介 在食品分析中, 利用 QuEChERS 方法制备样品可实现高通量和高灵敏度 虽然 QuEChERS 通常被用于水果和蔬菜中的多农药残留分析, 然而本应用使用 QuEChERS 方法和 UPLC /MS/MS 技术制备并分析牛奶和碎牛肉中 ppb 水平的类固醇激素 样品初步提取 (QuEChERS): 向一支 5 ml 离心管中加入 1 ml 全脂牛奶 ( 经巴氏灭菌 ) 或 1 g 碎牛肉 (85 瘦肉 ) 加入 1 ml 乙腈, 用力振荡离心管 1 分钟 加入符合欧洲委员会 (CEN)QuEChERS 标准方法的 DisQuE TM 袋装盐 ( 部件号 : ), 用力振荡 1 分钟 在 4 rpm 下离心 3 分钟, 取 1 ml 上清液 ( 最上层 ) 用于 d-spe 纯化 d-spe 净化 将 1 ml 上清液转移至一支 2 ml 的 d-spe 纯化试管中, 试管内含有 15 mg 硫酸镁 5 mg PSA 吸附剂和 5 mg C 18 吸附剂 ( 部件号 :186483), 用力振荡 1 分钟 在 4 rpm 下离心 3 分钟, 取.5 ml 样品用于 UPLC/MS/MS 分析 LC 条件 系统 : ACQUITY UPLC 色谱柱 : ACQUITY BEH C 18, 1.7 µm, mm 进样体积 : 3 µl 柱温 : 4 C 流动相 A: 水 流动相 B: 甲醇 流速 :.4 ml/min 梯度 : 初始条件为 3 的流动相 B, 在 5 min 内以线性梯度 增加至 97, 保持 8 min, 在 8.1 min 时返回到 3 保 持并重新平衡系统 1 min MS 条件 系统 : Xevo TQ-S 电离模式 : 电喷雾正离子 (ESI+) 结果 平均回收率 (RSD) n=5 浓度范围 (ppb) 碎牛肉 全脂牛奶 浓度水平 低水平 高水平 低水平 高水平 低水平 高水平 睾睾酮 (2.5) 89(2.2) 89(5.4) 95(1.1) 孕酮 (1.9) 92(3.7) 94(1.4) 95(.8) 地塞米松 (4.3) 91(3.2) 9(3.9) 91(4.4) 表 1. 碎牛肉和全脂牛奶样品中的类固醇激素回收率 _ MRM of 3 Channels ES > e min _ MRM of 3 Channels ES > e7 (a) (b) (c) _ MRM of 3 Channels ES > min min 2.16e _39 MRM of 3 Channels ES > e _39 MRM of 3 Channels ES > e _39 MRM of 3 Channels ES > e min min min 图 1. 碎牛肉样品中类固醇 UPLC/MS/MS 色谱图 ; 上面的图谱是低水平加标样品, 下面的图谱是碎牛肉空白样 (a) 睾酮 (b) 孕酮 (c) 地塞米松 _ MRM of 3 Channels ES > _ e min MRM of 3 Channels ES > e min _ MRM of 3 Channels ES > e min MRM of 3 Channels ES > e min _67 (a) (b) (c) _ MRM of 3 Channels ES > e min _43 MRM of 3 Channels ES > e min 图 2. 牛奶样品中类固醇 UPLC/MS/MS 色谱图 ; 上面的图谱是低水平加标样品, 下面的图谱是牛奶空白样 (a) 睾酮 (b) 孕酮 (c) 地塞米松 订购信息 描述 部件号 ACQUITY BEH C 18, 1.7 µm, 2.1 x 1 mm 色谱柱 CEN QuEChERS DisQuE 试剂袋 DisQuE 2 ml d-spe 纯化管 (15 mg MgSO 4, 5 mg PSA, 5 mg C 18 ) DisQuE 5 ml 离心管 最大回收样品瓶 667CV 参考资料 : 沃特世应用资料 EN 213 年沃特世公司 Waters ACQUITY ACQUITY UPLC UPLC 和 Xevo 是沃特世公司的注册商标 DisQuE 是沃特世公司的商标 [ 43 ]

44 农药和污染物 食品中存在的各种污染物 例如农药 除草剂 非法添加的染料 霉菌毒素和三聚氰胺 都是监管单 位 公共卫生机构和广大民众所担心的问题 本章中包含的方法涉及 样品前处理 样品制备 仪器方法和结果 这些方法达到甚至超过了政府机构所要求的检测和定量水平 本章还包括采用QuEChERS和其它官方方法的多残留农药分析应用 此外 还提供了关于多种不同样品 的QuEChERS*应用方法 以举例说明可满足以下要求 不同的前处理要求 例如 在提取步骤之前浸泡干燥样品 d-spe吸附剂是一种选择 例如 用于去除脂肪 * 关于该方法的更多详细信息 请参见我们网站上的沃特世QuEChERS白皮书(文献编号723643en) [ 44[ ]44 ]

45 水果和婴儿食品中 42 种农药残留的同时定性和确证分析 样品制备 / 固相萃取过程 1. 添加 15 g 样品到离心管 I 中 2. 加入 15 ml 1 的醋酸乙腈溶液 3. 提取前基质加标 4. 摇动 1 min, 大于 4 rpm 转速离心 1 min 5. 转移 1 ml 乙腈提取液到 2 ml 离心管 II 中 6. 摇晃 3 s, 大于 4 rpm 转速离心 1 min 7. 转移 25 μl 提取液到自动进样瓶中 8. 提取后基质加标 9. 根据需要可以用适当的缓冲盐或溶液稀释 色谱条件 仪器 : 沃特世 ACQUITY UPLC 系统 色谱柱 : ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1x1 mm, 1.7 μm 柱温 : 4 C 样品温度 : 4 C 流速 :.45 ml/min 流动相 A: 98/2 水 / 甲醇 ( 体积比 ) 含.1 甲酸 流动相 B: 甲醇 +.1 甲酸 梯度 : 时间 (min) A B 结果 min 色谱图 1 分钟内分离 42 种农残的分析 弱洗针溶液 : 强洗针溶液 : 总运行时间 : 进样量 : 98/2 水 / 甲醇 ( 体积比 ) 含.1 甲酸甲醇 +.1 甲酸 1 min 2 μl, 满环进样 三种基质的回收率数据 质谱条件 仪器 : 沃特世 ACQUITY TQ 检测器 电离模式 : ES + 毛细管电压 : 1 kv 脱溶剂气 : 氮气,8 L/Hr, 4 C 锥孔气 : 氮气,5 L/Hr 离子源温度 : 12 C 检测方式 : 多反应监测 (MRM) 碰撞气 : 氩气 3.5 x 1-3 mbar 使用沃特世 MassLynx V.4.1 软件采集数据, 使用 TargetLynx TM 应用软件 处理数据 订购信息描述部件号 DisQuE 基质分散样品制备产品 (1 pcs/pack) ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1 x 1 mm, 1.7 μm VanGuard Pre-column, ACQUITY UPLC BEH C 18, x 5 mm, 1.7 µm, 3 pcs/pack LC/MS 认证样品瓶 6751CV [ 45 ]

46 使用 DisQuE 净化和 Xevo TQ-S 进行蔬菜中多种农药残留筛查分析 样品前处理 使用 Waters DisQuE Kit 多农残分析前处理方案对蔬菜样品进行净化, 快速高效 样品提取样品匀浆后, 转移 15 g 匀浆后样品至 5 ml 离心管中, 在离心管中加入 15 ml1 乙酸乙腈, 加入内标, 震荡离心管 1 min, 在大于 15 rcf 转速下离心 1 min 净化转移 2 ml 上清液至离心管 2, 震荡 3 s, 在大于 15 rcf 转速下离心 1 min,lc / MC / MS 分析用流动相, 稀释提取液进样分析 ACQUITY UPLC I-Class 超高效液相色谱分离条件 色谱柱 : ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1 x 1 mm, 1.7 μm 流动相 A: 甲醇 流动相 B: 5 mm 乙酸铵水溶液 柱温 : 4 C 进样量 : 3 μl 运行时间 : 12 min 质谱条件 系统 : Xevo TQ-S 电离模式 : ESI± 电喷雾电压 : 3. kv 脱溶剂气温度 : 5 C 离子源温度 : 15 C 脱溶剂气流速 : 1 L/hr 采集方法 : MRM 农残筛查库 名称 电离模式 名称 电离模式 乙酰甲胺磷 + 氰戊菊脂 + 啶虫脒 + 氟虫腈 - 涕灭威 + 氟氰菊脂 + 涕灭威砜 + 氟胺氰菊脂 + 锑灭威 + 吡虫啉 + 阿维菌素 + 异菌脲 + 联苯菊脂 + 水胺硫磷 + 甲奈威 + 甲基异硫磷 + 多菌灵 + 马拉硫磷 + 克百威 + 甲胺磷 + 3- 羟基克百威 + 灭多威 + 灭幼脲 - 氧化乐果 + 百菌灵 + 对硫磷 + 毒死蜱 + 甲基对硫磷 + 氟氯氰菊脂 + 甲拌磷 + 氯氟氰菊脂 + 伏杀硫磷 + 氟氰菊脂 + 亚胺硫磷 + 溴氰菊脂 + 辛硫磷 + 二嗪磷 + 腐霉利 + 敌敌畏 + 丙溴磷 + 苯醚甲环唑 + 哒螨灵 + 除虫脲 - 嘧霉胺 + 乐果 + 三唑酮 + 杀螟硫磷 + 三唑磷 + 甲氰菊脂 + 表 种农药残留列表 结果 本实验使用 DisQuE Kit 前处理方法, 并用 Xevo TQ-S 的多农残筛查方法库, 结合 ACQUITY UPLC I-CLASS 超高效液相色谱分离系统对不同蔬菜中 49 种农药残留进行了快速筛查分析 其中 Xevo TQ-S 的 PICs( 子离子确认扫描 ) 数据采集功能, 在得到每种农残 MRM 定量色谱峰的同时得到其子离子扫描质谱图, 将样品的 PICs 质谱图与 TargetLynx TM 库中标准 PICs 参比质谱图进行匹配, 对阳性样品进行定性确认 订购信息 描述 部件号 DisQuE 分散固相萃取试剂盒 (5 ml 离心管 :1.5 g 乙酸钠 6 g 硫酸镁 ml 离心管 :15 mg 硫酸镁 5 mgpsa) ACQUITY UPLC BEH C μm, 2.1 x1 mm VanGuard Pre-column, ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1 x 5 mm, 1.7 µm, 3 pcs/pack LC/MS 认证样品瓶 6751CV 图 1. 黄瓜样品中嘧霉胺的 PCIs 图与库中标准图的匹配结果 [ 46 ]

47 使用 QuEChERS-UPLC/MS/MS 分析婴幼儿食品中的多农残 简介 应用 QuEChERS 这种简便的萃取技术加上 UPLC/MS/MS 分析以水果和肉制品为基质的婴儿食品中的农残 这种方法超越了欧洲以致全世界法规的需求 结果 萃取步骤 1. 把 15 g 经过离心的样品加入到 5 ml DisQuE TM 萃取管中, 管中包括 1.5 g 醋酸钠和 6 g 硫酸镁 2. 加入 15 ml1 的醋酸乙腈 3. 加入样品处理前的内标物 4. 振摇 1 分钟然后离心 (>15 rcf)1 分钟 5. 将 25 µl 的萃取液转移到 2 ml DisQuE 萃取管中, 管中包含 5 mg PSA 和 15 mg 硫酸镁 6. 振摇 3 秒然后离心 (>15 rcf)1 分钟 7. 将 25 µl 的萃取液转移到自动进样的样品瓶中 8. 加入萃取后的内标物 9. 加入适当的缓冲溶液和溶剂稀释 LC 条件 LC 系统 : Waters ACQUITY UPLC System 色谱柱 : ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1 x 5 mm, 1.7 µm 柱温 : 4 C 样品温度 : 4 C 流速 :.7 ml/min 流动相 A: 水 +.1 甲酸 流动相 B: 甲醇 +.1 甲酸 梯度 : 时间 (min) A B 色谱峰序号 农药名称 Omethoate 氧乐果 oxydemeton- S-methyl 亚砜磷 Demeton- S-methyl sulfone 磺吸磷 Dimethoate 乐果 Fensulfothionoxon 丰索磷氧 RT MRM 通道 驻留时间 (s) 锥孔电压 (V) 碰撞能量 (ev ) Fensulfothionoxon-sulfone 丰索磷氧化砜 总运行时间 : 进样体积 : MS 条件 MS 系统 : 离子化模式 : 8 分钟 5 µl, 满环进样 Waters Xevo TQ MS 正离子 (ESI+) 多反应监测 Demeton-Smethyl 甲基内吸磷 Disulfoton sulfoxide 乙拌磷亚砜 Disulfoton sulfone 乙拌磷砜 Fensulfothion 丰索磷 Xevo TQ MS MRM 方法参数 [ 47 ]