286 江苏农业科学 2016 年第 44 卷第 1 期初始温度 70, 恒温 1min, 以 8 /min 的速率升温至 210, 再以 20 /min 的速率升温至 290, 保持 12min; 进样口温度 280 ; 进样方式 : 脉冲不分流 ; 载气 : 高纯度氦气 ; 流速 :1.2mL

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母横邓
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1 林祥群, 卢春霞, 罗小玲, 等. 气相色谱 - 质谱法测定枸杞中 28 种农药残留 [J]. 江苏农业科学,2016,44(1): doi: /j.isn 气相色谱 - 质谱法测定枸杞中 28 种农药残留林祥群 1, 卢春霞 2, 罗小玲 2 2, 唐宗贵 [1. 新疆石河子职业技术学院, 新疆石河子 ; 2. 新疆农垦科学院分析测试中心 / 农业部食品质量监督检验测试中心 ( 石河子 ), 新疆石河子 ] 摘要 : 建立了气相色谱 - 质谱法检测枸杞中 28 种农药残留的分析方法样品经乙腈提取,carb/NH 2 固相萃取柱净化,DB-17MS(30m 0.25mm 0.25μm) 色谱柱分离, 选择离子监测模式 (SIM) 检测, 外标法定量结果表明,28 种农药在 0.01~5.00μg/mL 范围内呈良好线性 (r 2 >0.99), 方法检出限为 0.008~0.085μg/g, 定量限为 0.027~ 0.280μg/g, 加标回收率为 71.0% ~106.0%, 相对标准偏差为 0.96% ~12.30% 该方法灵敏度高定性定量准确, 可满足枸杞样品中农药多残留的检测要求关键词 : 枸杞 ; 农药残留 ; 气相色谱 - 质谱法 (GC-MS); 多残留检测 ; 固相萃取 ; 前处理中图分类号 :TQ 文献标志码 :A 文章编号 : (2016) 枸杞是我国传统的药食同源植物, 具有补肾养肝润肺明目之功效, 同时也是我国主要的出口创汇农产品, 主要出口韩国日本东南亚及欧美地区等枸杞属于香甜细嫩的花果类植物, 在生长过程中, 病虫害种类多发生频率高, 往往大量使用多种农药进行防治, 造成枸杞农药残留严重, 致使枸杞食用药用安全性受到影响目前, 农药残留已成为当前影响我国枸杞质量安全出口创汇的主要因素 [1] 我国目前仍未规定枸杞中农药残留的限量标准因此, 探讨简单快速准确的枸杞农药多残留分析方法对控制枸杞农药残留污染促进枸杞产业健康发展具有重要意义目前, 关于枸杞中农药残留分析方法的研究报道较少, 主要有液相色谱法 [2-3] 液相色谱 - 串联质谱法 [4-5] 气相色谱法 [6-7] 气相色谱 - 质谱 [8-10] 法等 ; 但以上方法均是针对每一类药物进行检测, 目前枸杞中使用的农药多达几十种, 无法满足农药多残留分析要求本试验以枸杞生长过程中常用的农药为研究对象, 采用气相色谱 - 质谱法 (GC-MS) 结合固相萃取技术, 建立简单准确可靠的枸杞中 28 种农药多残留分析方法, 该方法前处理简单快速净化效果好定性准确灵敏度高回收率稳定, 各项检测指标均能满足目前我国农药残留监测要求 1 材料与方法 1.1 材料与试剂 carb/nh 2 固相萃取柱 (500mg/500mg/6mL, 德国 CNW 公司 ); 丙酮正己烷 ( 色谱级, 美国 J.T.Baker 公司 ); 乙腈 ( 色谱级, 德国 Merck 公司 ); 甲苯 ( 色谱级, 德国 CNW 公司 ); 收稿日期 : 基金项目 : 国家特色农产品质量安全风险评估项目 ( 编号 : GJFP ) 作者简介 : 林祥群 (1980 ), 女, 新疆沙湾人, 硕士, 讲师, 主要从事食品质量安全研究 @qq.com 通信作者 : 唐宗贵, 实验师, 主要从事农药残留分析研究 zongguitang@163.com 敌敌畏敌百虫乙酰甲胺磷甲拌磷氧乐果久效磷乐果百菌清毒死蜱对硫磷三唑酮马拉硫磷三氯杀螨醇丙溴磷联苯菊酯甲氰菊酯氯氟氰菊酯氟氯氰菊酯哒螨灵氯氰菊酯氰戊菊酯溴氰菊酯苯醚甲环唑二甲戊乐灵克螨特丙环唑戊唑醇咪鲜胺均购自中国国家标准物质中心, 浓度均为 1000mg/L 其余试剂为分析纯, 试验用水为超纯水 1.2 仪器与设备 Agilent7890A 气相色谱仪,7000BTripleQuadGC/MS 质谱仪 (Agilent 公司 );MasHunter 数据处理软件 ;RapidTrace 全自动固相萃取工作站 ( 美国 Biotage 公司 );MS3basic 涡旋混合器 ( 德国 IKA 公司 );T18ULTRATURRAX( 德国 IKA 公司 ); R-210 旋转蒸发器 ( 瑞士步琦公司 );KQ-500DB 超声波清洗器 ( 昆山市超声仪器公司 ) 1.3 方法溶液配制单标储备液的制备 : 分别量取标准溶液各 1.0mL, 用丙酮稀释成 100mg/L 的标准储备液,-20 下保存备用混合标准工作液的制备 : 吸取一定量的各标准储备液置于同一容量瓶中, 用丙酮稀释成合适浓度的工作溶液样品前处理称取 (5.00±0.01)g 枸杞于 50mL 离心管中, 加入 5mL 水和 15mL 乙腈,15000r/min 匀浆提取 1min, 加入 2g 氯化钠, 涡旋混合 1min,6000r/min 离心 5min, 取上层有机相至浓缩瓶中离心管中再加 15mL 乙腈, 重复提取 1 次, 抽取并合并上层有机相,40 旋转蒸发至 1~2mL, 待净化 carb/nh 2 固相萃取柱用 4mL 乙腈 + 甲苯 ( 体积比 3 1) 预淋洗, 待液面到达柱吸附层时, 迅速将上述待净化液转移至净化柱上, 再用 2mL 乙腈 + 甲苯 ( 体积比 3 1) 洗涤样液瓶并转移上柱, 重复 3 次, 用 25mL 乙腈 + 甲苯 ( 体积比 3 1) 洗涤净化柱, 收集流出液于浓缩瓶中,40 旋转蒸发至近干, 加入 5mL 正己烷再旋转蒸发至干, 用正己烷 + 丙酮 ( 体积比 1 1) 定容至 1mL, 过 0.22μm 有机相滤膜, 用于气质测定色谱质谱条件色谱条件 : 色谱柱 :DB-17MS (30m 0.25mm 0.25μm, 美国 Agilent 公司 ); 升温程序 :

2 286 江苏农业科学 2016 年第 44 卷第 1 期初始温度 70, 恒温 1min, 以 8 /min 的速率升温至 210, 再以 20 /min 的速率升温至 290, 保持 12min; 进样口温度 280 ; 进样方式 : 脉冲不分流 ; 载气 : 高纯度氦气 ; 流速 :1.2mL/min; 进样量 :1.0μL 质谱条件 : 电子轰击 (EI) 电离模式 ; 电离能量 70eV; 扫描方式 : 选择离子监测 (SIM); 离子源温度 :230 ; 四级杆温度 :150 ;GC-MS 接口温度 :280 ; 溶剂延迟 :3.75min 标准曲线方法检出限及定量限将 28 种农药混合溶液稀释成 μg/mL 系列标准工作液, 采用节的方法进行分析, 以进样质量浓度为横坐标, 峰面积为纵坐标, 进行线性回归计算, 求得 28 种农药的线性方程相关系数在阴性样品中添加 28 种农药标准品, 计算 3 倍信噪比 (S/N 3) 和 10 倍信噪比 (S/N 10) 时所对应的样品质量浓度, 分别作为方法的检出限 (LOD) 定量限 (LOQ) 方法回收率及精密度试验采用对阴性样品进行加标回收试验来考察方法的准确度精密度, 对空白枸杞样品, 分别添加不同浓度的农药混合标准溶液, 按照节的方法进行样品前处理, 在节条件下测定, 计算样品加标回收率每个添加水平重复 6 次, 测得各的峰面积, 计算其相对标准偏差 2 结果与分析 2.1 色谱条件优化选择合适的色谱柱是农药多残留分析的前提, 本试验考察了 DB-5MS DB-17MS 等 2 种不同极性的色谱柱, 通过标准工作液进样来比较两者对 28 种农药的分离效果结果显示,DB-5MS DB-17MS 均能实现的基本分离, 但乙酰甲胺磷久效磷等有机磷农药在 DB-17MS 色谱柱上的峰形 ( 图 1) 优于 DB-5MS 色谱柱 2.2 质谱条件优化按照出峰顺序对测物进行分组, 分时段完成所有离子的检测保留时间接近的化合物被分进一组进行多离子同时扫描采用 SIM 方法, 每种化合物分别选择 1 个定量离子 2~3 个, 以响应值较高且干扰较少的离子进行定量, 以特征离子及离子间的相对丰度比进行定性 28 种化合物优化的定量离子及等参数见表 1 SIM 扫描每个定量离子流图见图 2 定量离子 (m/z) 1(m/z) 2(m/z) 表 1 28 种农药质谱检测参数驻留时间 3(m/z) (ms) 定量离子 (m/z) 1(m/z) 2(m/z) 驻留时间 3(m/z) (ms) 敌敌畏联苯菊酯敌百虫甲氰菊酯乙酰甲胺磷氯氟氰菊酯甲拌磷氟氯氰菊酯氧乐果哒螨灵久效磷氯氰菊酯乐果氰戊菊酯百菌清溴氰菊酯毒死蜱苯醚甲环唑对硫磷二甲戊乐灵三唑酮克螨特马拉硫磷丙环唑三氯杀螨醇戊唑醇丙溴磷咪鲜胺注 : 根据保留时间出峰顺序为 : 敌敌畏敌百虫乙酰甲胺磷甲拌磷氧乐果久效磷乐果百菌清三唑酮毒死蜱马拉硫磷对硫磷三氯杀螨醇二甲戊乐灵丙溴磷克螨特联苯菊酯丙环唑戊唑醇甲氰菊酯氯氟氰菊酯哒螨灵咪酰胺氟氯氰菊酯氯氰菊酯氰戊菊酯溴氰菊酯苯醚甲环唑

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4 288 江苏农业科学 2016 年第 44 卷第 1 期 2.3 样品前处理条件优化比较了乙腈丙酮丙酮 + 正己烷 (5 5) 等溶剂对 28 种农药的提取效果, 结果表明, 枸杞复水后加乙腈提取效果最好, 这可能与样品中加入水促进了枸杞中糖分溶解, 从而提高了乙腈的渗透能力有关 [5] 加入 NaCl 后, 乙腈可从混合溶液中快速分离, 有利于后续操作丙酮提取液中干扰物较多, 不利于下一步净化丙酮 + 正己烷 (5 5) 的提取效率低于以上 2 种提取溶剂因此, 本试验采用乙腈作为提取溶剂目前多农残分析主要采用固相萃取柱吸附杂质方式来净化, 本试验对比了 C18 Florisil carb/nh 2 3 种吸附剂的净化效果由于枸杞基质复杂, 含有较多的糖类蛋白质及色素等, C18 对这些杂质的吸附能力弱, 净化效果较差 Florisil 柱虽然对杂质有较强的吸附能力, 但对极性较强的有机磷农药也有吸附能力, 增强洗脱液极性, 可将此类洗脱, 但杂质也会被同步洗脱 carb/nh 2 的净化效果最好, 但对百菌清等含有芳香族结构的农药也产生明显吸附效果, 在洗脱液中加入 25% 左右的甲苯可以破坏吸附剂和此类农药的相互作用同时, 甲苯的存在可防止碱性敏感的农药在碱性吸附剂 (NH 2 ) 上的降解因此, 本试验选择 carb/nh 2 作为固相萃取柱, 乙腈 + 甲苯 ( 体积比 3 1) 为洗脱溶剂 2.4 标准曲线方法检出限和定量限 28 种农药混合标准溶液, 采用外标法定量, 在节条件下分析, 以定量离子峰面积 (y) 对质量浓度 (x) 得出校正曲线, 通过回归分析得出回归方程决定系数 ( 表 2) 结果表明,28 种农药在 0.01~5.00μg/mL 范围内线性关系良好 (r 2 >0.99), 方法的检出限 (LOD) 和定量下限 (LOQ) 分别为 0.008~0.085μg/g 和 0.027~0.280μg/g, 满足农药残留定量分析要求表 2 28 种农药的线性方程决定系数检测限和定量限线性方程线性范围决定系数 LOD LOQ (μg/ml) (r 2 ) 敌敌畏 y= x ~ 敌百虫 y=119.26x ~ 乙酰甲胺磷 y=95.64x ~ 甲拌磷 y=865.58x ~ 氧乐果 y=289.82x ~ 久效磷 y=638.06x ~ 乐果 y=764.52x ~ 百菌清 y=2983.1x ~ 毒死蜱 y= x ~ 对硫磷 y=952.43x ~ 三唑酮 y= x ~ 马拉硫磷 y= x ~ 三氯杀螨醇 y= x ~ 丙溴磷 y= x ~ 联苯菊酯 y= x ~ 甲氰菊酯 y= x ~ 氯氟氰菊酯 y= ~ 氟氯氰菊酯 y=764.37x ~ 哒螨灵 y= x ~ 氯氰菊酯 y=654.38x ~ 氰戊菊酯 y=763.69x ~ 溴氰菊酯 y=326.82x ~ 苯醚甲环唑 y=425.33x ~ 二甲戊乐灵 y= x ~ 克螨特 y= x ~ 丙环唑 y= x ~ 戊唑醇 y= x ~ 咪鲜胺 y=870.54x ~ 方法的回收率与精密度分别在空白样品中添加不同浓度水平的混合农药标准工作溶液, 每个添加水平平行分析 6 次, 添加后按节和节所述步骤进行提取净化测定, 样品加标回收率相对标准偏差见表 3 结果显示, 在 3 个加标水平下,28 种农药的平均回收率范围为 71.0% ~106.0%, 相对标准偏差为 0 96% ~12.3%, 表明该方法准确可靠 2.6 实际样品测定利用本试验方法, 分别对来自农贸市场超市农户枸杞加工企业生产基地的 27 个枸杞样品进行检测, 其中有 11 个样品检出 23 次农药残留检出的农药和检出量分别为 : 毒死蜱 (0.091~0.275mg/kg) 丙溴磷 (0.528mg/kg) 联苯菊酯 (0.016 mg/kg) 三氟氯氰菊酯 (2.22 mg/kg) 哒螨灵 (1.09mg/kg) 氯氰菊酯 (0.194~0.434mg/kg) 氰戊菊酯 (0.284~0.616mg/kg) 溴氰菊酯 (3.11~3.59mg/kg) 苯醚甲环唑 (0.0780~0.212mg/kg) 甲氰菊酯 (0.148mg/kg) 克螨特 (0.145mg/kg) 戊唑醇 (0.412mg/kg) 3 结论本研究建立了枸杞中 28 种农药多残留的气相色谱 - 质谱联用检测方法, 包括 11 种有机磷杀虫剂 1 种有机硫杀虫剂 1 种有机氮杀虫剂 3 种有机氯杀虫剂 7 种拟除虫菊酯类杀虫剂 4 种含氮杀菌剂 1 种除草剂, 该方法灵敏度高结果准确可靠, 重复性好, 为枸杞中农药多残留的测定提供了简

5 289 表 3 28 种农药在枸杞样品中的加标回收率及变异系数 (n=6) 添加量测定值回收率 RSD 敌敌畏敌百虫乙酰甲胺磷甲拌磷氧乐果久效磷乐果百菌清毒死蜱对硫磷三唑酮马拉硫磷三氯杀螨醇丙溴磷联苯菊酯甲氰菊酯氯氟氰菊酯氟氯氰菊酯哒螨灵续表 1 添加量测定值回收率 RSD 氯氰菊酯氰戊菊酯溴氰菊酯苯醚甲环唑二甲戊乐灵克螨特丙环唑戊唑醇咪酰胺单可靠的前处理方法和检测手段参考文献 : [1] 苟金萍, 宋奎奇. 枸杞质量安全存在的问题及对策 [J]. 甘肃农业科技,2005(12): [2] 罗娟, 谢云. 高效液相色谱法检测枸杞子中吡虫啉残留量 [J]. 湖北中医药大学学报,2011,13(1): [3] 王晓菁, 潘灿平, 张艳, 等. 枸杞中吡虫啉阿维菌素农药残留量的测定 [J]. 西北农业学报,2007,16(2): ,256. [4] 梁月香, 王晓菁, 姜瑞, 等. 固相萃取液相色谱串联质谱测定枸杞中有机磷农药残留 [J]. 山东林业科技,2011,41(6):1-4. [5] 张艳, 王晓菁. 液相色谱串联质谱法测定枸杞中氨基甲酸酯类农药残留量 [J]. 河南农业科学,2011,40(2): [6] 张艳, 王晓菁, 姜瑞. 枸杞中有机氯农药残留量的测定 [J]. 宁夏农林科技,2005(2):16-17,61. [7] 张艳, 苟金萍, 程淑华, 等. 枸杞中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的测定 [J]. 西北农业学报,2005,14(2): [8] 李莉, 江树人, 潘灿平, 等. 分散固相萃取 - 气相色谱 - 质谱方法快速净化测定枸杞中 12 种农药残留 [J]. 农药学学报,2006,8 (4): [9] 曹殿洁.GC-MS 检测中药枸杞中有机磷类农药残留 [J]. 赤峰学院学报 : 自然科学版,2013,29(11):6-7. [10] 尹秀莲, 游庆红, 罗程文. 凝胶渗透色谱 - 气质联用法同时测定枸杞中 7 种有机磷农药残留 [J]. 中国实验方剂学杂志,2011, 17(11):83-85.

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print p 真 (3Cx, 0535-(388435 第 1 页 - w 5 页 1 戊菌隆 0.0125 OI/MI 4//T 19(48-200( :1 2 甲拌磷 0.00(3 OI/MI 4//T 19(48-200( :1 3 k 氯硝基苯 0.0125 OI/MI 4//T 19(48-200( :1 4 地虫硫磷 0.00(3 OI/MI 4//T 19(48-200( :1 5 艾氏剂 0.0125

286 江苏农业科学 2016 年第 44 卷第 1 期 初始温度 70, 恒温 1min, 以 8 /min 的速率升温至 210, 再以 20 /min 的速率升温至 290, 保持 12min; 进样口温度 280 ; 进样方式 : 脉冲不分流 ; 载气 : 高纯度氦气 ; 流速 :1.2mL

286 江苏农业科学 2016 年第 44 卷第 1 期初始温度 70, 恒温 1min, 以 8 /min 的速率升温至 210, 再以 20 /min 的速率升温至 290, 保持 12min; 进样口温度 280 ; 进样方式 : 脉冲不分流 ; 载气 : 高纯度氦气 ; 流速 :1.2mL