第 期 万译文等 分散固相萃取 液相色谱串联质谱法测定水产品中磺胺类 喹诺酮类 青霉素类多种兽药残留 )- "0 (-# #"0,"#- - -#0 ( +-,1 ( +0 磺胺类 ( 2 # )- "0 80 喹诺酮类 (-# #"0 0 和青霉素类 $"#- - -#0$ 0 均属于抗菌类药物

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1 年 月湖南师范大学自然科学学报 & & 第 卷第 期 = (1# 2 +(1 -"# " 23(# # 1) >#- "10-+ ' & /* & ;&-0#& &&& 分散固相萃取 液相色谱串联质谱法测定水产品中磺胺类 喹诺酮类 青霉素类多种兽药残留 万译文 黄向荣 伍远安 肖 维 杨 霄 & 湖南省水产科学研究所 中国长沙 & 水产健康生产湖南省协同创新中心 中国常德 & 农业部渔业产品质量监督检验测试中心 中国长沙 摘 要 为建立一种简单 快速测定水产品中磺胺类 喹诺酮类 青霉素类的分散固相萃取 液相色谱串联质谱的分析方法 将样品经酸化乙腈提取 与中性氧化铝净化后 采用 3$ ' ' 选择反应监测 6' 正离子模式进行定性 定量分析 & 结果表明 在 &? #.. 范围内 峰面积与浓度线性良好 相关系数均大于 & 方法的检出限, 为 &?& #.. 定量限, 为 &? & #.. 检测结果的相对标准偏差为 &E?&E 平均加标回收率达到 &E? &E& 该方法具有较高的重现性和选择性 适用于水产品中磺胺类 喹诺酮类 青霉素类的残留分析检测 & 关键词 分散固相萃取 质谱法 磺胺类 喹诺酮类 青霉素类 水产品中图分类号 9 & 文献标识码 8 文章编号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收稿日期 基金项目 湖南省科技重大专项资金 湖南省农业科技创新资金 : 通讯作者 ) - #;0A & )

2 第 期 万译文等 分散固相萃取 液相色谱串联质谱法测定水产品中磺胺类 喹诺酮类 青霉素类多种兽药残留 )- "0 (-# #"0,"#- - -#0 ( +-,1 ( +0 磺胺类 ( 2 # )- "0 80 喹诺酮类 (-# #"0 0 和青霉素类 $"#- - -#0$ 0 均属于抗菌类药物 具有广谱抗菌性且抗菌效果好 在畜牧 水产养殖中 常被不法养殖业者在饲料中违规添加 以预防动物类疾病或者促进动物生长 & 这 类抗生素的不合理使用导致药物在水产品中蓄积 对消费者的身体健康造成危害 也对渔业生产和生态环境具有潜在的危害 & 世界上大部分国家对磺胺类 喹诺酮类及青霉素类药物残留具有严格的限量要求 有的甚至严禁使用 & 目前 水产品中磺胺类 青霉素类及喹诺酮类药物残留的分析方法主要有微生物法 酶联免疫法 气相色谱法 高效液相色谱法 液相色谱串联质谱法等 由于液相色谱串联质谱法定性能力强的特点 在水产品检测中被广泛应用 & 磺胺类 喹诺酮类及青霉素类残留的同时检测多见于牛奶 蜂蜜及畜禽肉中 尚无针对水产品的检测方法 & 在前处理过程中 大多数的方法均采用较大的称样量 &. 和较多的提取溶剂 ) 净化过程中采用固相萃取的方式使用较多的溶剂 前处理繁琐复杂且容易污染环境 在定量的过程中 大多数的方法采用外标法来定量 对样品的提取过程要求较高 有些目标物的回收率不太理想 & 本文建立了同时测定水产品中 种磺胺类药物 种喹诺酮药物及 种青霉素类药物残留检测的液相色谱串联质谱法 & 本方法在前处理中采用分散式固相萃取来净化 只需称样 &. 样品和 ) 提取溶液 减少对环境的污染 本文采用内标法以氘代青霉素 氘代磺胺邻二甲氧嘧啶 氘代磺胺间二甲氧嘧啶 氘代诺氟沙星 氘代环丙沙星 氘代恩诺沙星为内标进行定量分析 不仅可提高检测效率且能提高目标物的回收率 & 该方法前处理简单快速 拥有较高的选择性和重现性 能快速准确地检测出水产品中磺胺类 喹诺酮类 青霉素类的残留量 更加有效地打击养殖过程中的非法添加行为 对水产品进行有效的监督 & 23 材料与方法 2523 材料与试剂 磺胺二甲异恶唑 磺胺噻唑 磺胺甲恶唑 磺胺二甲基嘧啶 磺胺甲基嘧啶 磺胺多辛 磺胺嘧啶 磺胺喹 啉 磺胺间甲氧嘧啶 磺胺甲噻二唑 磺胺间二甲氧嘧啶 磺胺氯哒嗪 诺氟沙星 环丙沙星 恩诺沙星 氧氟沙星 洛美沙星 培氟沙星 阿莫西林 氨苄西林 青霉素 5 青霉素 苯唑西林 氯唑西林 萘夫西林 双氯西林 氘代磺胺邻二甲氧嘧啶 氘代磺胺间二甲氧嘧啶 氘代诺氟沙星 氘代环丙沙星 氘代恩诺沙星 氘代青霉素均购自德国 /1& 1"#0+ 12"1 公司 纯度不低于 &E 乙腈 二氯甲烷 甲醇 乙酸乙酯 均为色谱纯 德国 '"1 公司 吸附剂 &?& )) 上海安谱科学仪器有限公司 中性氧化铝 分析纯 8 2 8"0 1 天津化学有限公司 超纯水 美国 '- - 纯水系统制水 空白样品 草鱼 取自湖南省水产科学研究所渔场 将鱼去磷去皮沿脊背取肌肉部分 捣碎样品均质 & 2543 仪器与设备 9 ( #+() 液相色谱质谱联用仪 美国 9"1) 公司 ' :6 高速冷冻离心机 美国 9"1) 公司 ': 旋涡混匀仪 美国 -." 公司 8> / 超精密电子天平 日本岛津公司 超声波清洗器 昆山超声波仪器厂 & 253 方法 && 标准溶液配制 分别称取一定量的 种磺胺类 80 种喹诺酮类 0 种青霉素类 $ 0 标准品 用甲醇溶解定容配置成 &. 的标准储备液 & 使用时分别取适量的储备液 用甲醇稀释配成 & ). 的混合标准溶液待用 & 分别称取 & ). 氘代磺胺邻二甲氧嘧啶 氘代磺胺间二甲氧嘧啶 氘代恩诺沙星 氘代环丙沙星 氘代恩诺沙星 氘代青霉素 用甲醇溶解定容配置成 ). 的内标标准储备液 G 下避光保存 & 准确吸取上述各内标储备液 用甲醇稀释配成 & ). 的混合内标使用液待用 & && 样品处理 准确称取鱼肉制品 &. 于离心管中 准确加入 内标混合液 加入 &. 烘干备用的无水硫酸钠和 ) 乙腈 含 &E 甲酸 混匀器上混匀后超声 )-# 放入离心机以 1 )-# 离心

3 湖南师范大学自然科学学报 第 卷 )-# 转移上清液至 ) 具塞离心管中 & 往残渣中再次加入 ) 乙腈重复提取一次 合并乙腈提取液 并用 乙腈定容至 ) & 取上述提取液 ) 于 ) 离心管中 将 &. 吸附剂及 &. 中性氧化铝加入到离 心管中 涡旋混匀 充分吸附样品中的杂质和色素 1 )-# 离心 )-# 取上清液经 & )) 滤头过滤至 进样瓶中 3$ ' ' 测定 & 253 仪器条件 && 色谱条件 采用色谱柱为赛默飞 8$ $8 ))D& ))& ) 流动相 8 为 &E 甲 酸乙腈 为 )) 的乙酸铵溶液 含 &E 的甲酸 柱温 G 进样量为 流动相采用梯度洗脱 程序 见表 & 表 23 梯度洗脱程序 & 523 (+- #,1 "0 2+"0", 1 +- # 时间 )-# 流速 ) 流动相比例 E 88 8 & & & & & & & & & & && 离子化参数 采用大气压电喷雾离子源 正离子模式 毛细管电压为 鞘气流速为 & 辅助气流量为 & 采用!'6' 多反应监测模式进行离子监测 各种磺胺类 喹诺酮类 青霉素类药 物和内标物的监测离子对 碰撞能量 线性方程及相关系数见表 & 43 结果 4523 提取剂的选择和优化水产品中磺胺类 喹诺酮类及青霉素类常用的提取剂有乙腈 正己烷 乙酸乙酯 石油醚等有机溶剂 本文采用这 种不同有机溶剂提取样品 得到上述目标物的回收率 & 由结果可知 石油醚对青霉素类药物提取的效率低 回收率为 E? E 采用正己烷提取时 回收率能满足要求 但是样品基质中含有大量脂肪溶解于正己烷中 不利于后期的净化 造成对质谱离子源的污染 采用乙腈和乙酸乙酯提取也能取得较好的效果 乙腈能有效提取大多数农残及药残的目标物 提取效果好且能有效地沉淀样品中的蛋白质和脂肪 乙酸乙酯的提取液中含有少量杂质 容易造成乳化现象 不利于净化过程 造成色谱柱堵塞 & 因此本文采用甲酸化乙腈作为目标物的提取剂 & 4543 净化方式的选择目前对动物源性食品中常用的净化方式有使用正己烷去脂 固相萃取两种方式 & 分散型固相萃取是在固相萃取的基础上研制出的一种新型净化方法 该方法原理是将吸附剂直接加入提取液中震荡净化 比固相萃取更节约试剂且节省时间 & 本文采用分散型固相萃取 ( 6 法 进行净化 由于水产品中含有大量的脂肪和蛋白质 本文选择 与中性氧化铝的组合作为吸附剂 具有良好的除脂能力 而中性氧化铝能去除色素和水分 & 通过添加不同质量的吸附剂进行试验比较 结果表明 当采用 &. 吸附剂及 &. 中性氧化铝时 溶液清澈 基质干扰小 & 通过该净化方式可节约试剂 提高实验效率 也能得到满意的回收率 & 453 色谱条件的确定水产品鱼肉中蛋白质含量高 色素和杂质多 通过前处理净化降低色谱的本底值后 采用合适的梯度洗脱程序 能使目标物得到有效的分离和最佳的质谱响应信号 & 水 &E 甲酸 水 &E 甲酸 乙腈 &E 乙酸铵水溶液 &E 甲酸 甲醇 &E 乙酸铵水溶液 &E 甲酸 种不同的流动相对目标物的电离喷雾影响 & 实验发现 当采用乙腈 &E 乙酸铵水溶液 &E 甲酸

4 第 期 万译文等 分散固相萃取 液相色谱串联质谱法测定水产品中磺胺类 喹诺酮类 青霉素类多种兽药残留 作为流动相时 目标物色谱峰峰形尖锐 对称性好 色谱峰的响应强度高 & 表 43 种化合物的 6' 采集参数 标准曲线及相关系数 & 543 6', 1 )"+"10 -#" 1" ( +- #0 # 1" +- # "2- -"# # 0 2 1(.0 目标物 分子式 母离子 -47 子离子 -47 碰撞能量 " 线性方程 相关系数 磺胺二甲异恶唑 3 * ) 6!6 & 磺胺嘧啶 3 * & 磺胺多辛 3 * ) 6!6 & 磺胺甲基嘧啶 3 * & 磺胺二甲基嘧啶 3 * ) 6!6 & 磺胺甲恶唑 3 * ) 6!6 & 磺胺噻唑 3 * ) 6!6 & 磺胺喹恶啉 3 * ) 6!6 & 磺胺间甲氧嘧啶 3 * ) 6!6 & 磺胺甲噻二唑 3 * ) 6!6 & 磺胺间二甲氧嘧啶 3 * ) 6!6 & 磺胺氯哒嗪 3 * ) 6!6 & 诺氟沙星 3 4 * ) 6!6 & 环丙沙星 3 4 * ) 6!6 & 恩诺沙星 3 4 * ) 6!6 & 氧氟沙星 3 4 * ) 6!6 & 洛美沙星 3 4 * ) 6!6 & 培氟沙星 3 4 * ) 6!6 & 阿莫西林 3 * ) & 氨苄西林 3 * ) & 青霉素 5 3 * ) 6!6 & 青霉素 3 * ) & 苯唑西林 3 * ) & 氯唑西林 3 * ) & 萘夫西林 3 * ) & 双氯西林 3 * ) & 磺胺邻二甲氧嘧啶 / 3 * / 磺胺间二甲氧嘧啶 / 3 * / 诺氟沙星 / 3 4 * / 环丙沙星 / 3 4 * / 恩诺沙星 / 3 4 * / 青霉素 / 3 * / 注 表示定量子离子 & 453 质谱条件的确定根据磺胺类 80 喹诺酮类 0 及青霉素类 $ 0 各种目标物的结构特征 选择 正离子电离模式对 种目标物的混合标液进行一级质谱全扫描分析 得到每个目标物的母离子 & 再选择丰度最大的二级碎片离子作为定量离子 丰度次强的碎片离子为定性离子 & 在此基础上对锥孔电压和碰撞能量进行优化 使选定的母离子和子离子组成的特征离子的丰度和比例达到最佳 & 在使用液质法进行检测时 本方法选择的子离子均符合欧盟 规定的识别点要求 & 453 线性范围和相关性系数本实验的标准曲线采用基质加标法进行 称取相同质量的空白样品 分别加入不同体积的混合标准工作液 制备成含有磺胺类 80 喹诺酮类 0 及青霉素类 $ 0 的 && #.. 样品 按样品前处理方法操作 采用内标法定量 & 磺胺喹恶啉 磺胺二甲异恶唑 磺胺间二甲氧嘧啶以氘代磺胺间二甲氧嘧啶

5 湖南师范大学自然科学学报 第 卷 为内标 磺胺间甲氧嘧啶 磺胺甲恶唑 磺胺氯哒嗪 磺胺噻唑 磺胺二甲基嘧啶 磺胺嘧啶 磺胺甲基嘧啶 磺 胺甲噻二唑 磺胺多辛以氘代磺胺邻二甲氧嘧啶为内标 氧氟沙星 诺氟沙星以氘代诺氟沙星为内标 洛美沙 星 环丙沙星以氘代环丙沙星为内标 培氟沙星 恩诺沙星以氘代恩诺沙星为内标 & 阿莫西林 氨苄西林 青霉 素 5 青霉素 苯唑西林 氯唑西林 萘夫西林 双氯西林以氘代青霉素为内标 & 以待测物的质量浓度和待测 物与内标物峰面积比值相对应制作标准曲线 回归方程 相关系数见表 & 453 回收率 精密度及检出限 采用内标法定量 在样品中添加低浓度 & #.. 中浓度 #.. 高浓度 #.. 个梯度的目 标化合物 按本文上述前处理条件分别进行回收率和精密度实验 & 每个添加水平平行测定 次 结果回收率 为 &E? &E 相对标准偏差为 &E?&E 由结果可知各种目标物的加标回收率和精密度均较好 见表 & 以 倍信噪比为检出限, 倍信噪比为定量限, 结合样品的前处理过程 经过样品添加实 验计算后确定方法的检出限和定量限 & 表 3 种目标物在空白样品中的添加回收率 相对标准偏差, 和, 6 /0 & 536" "1-"0 1" +- "0+ # 1 " - +- #0, #, 2 ), (# 0-# # 0 ), "0 目标物,, & #.. #.. #.. 6" "1 6 / 6" "1 6 / 6" "1 6 / 磺胺二甲异恶唑 & & & & & & & & 磺胺嘧啶 & & & & & & & & 磺胺多辛 & & & & & & & & 磺胺甲基嘧啶 & & & & & & & & 磺胺二甲基嘧啶 & & & & & & & & 磺胺甲恶唑 & & & & & & & & 磺胺噻唑 & & & & & & & & 磺胺喹恶啉 & & & & & & & & 磺胺间甲氧嘧啶 & & & & & & & & 磺胺甲噻二唑 & & & & & & & & 磺胺二甲氧嘧啶 & & & & & & & & 磺胺氯哒嗪 & & & & & & & & 诺氟沙星 & & & & & & & & 环丙沙星 & & & & & & & & 恩诺沙星 & & & & & & & & 氧氟沙星 & & & & & & & & 洛美沙星 & & & & & & & & 培氟沙星 & & & & & & & & 阿莫西林 & & & & & & & & 氨苄西林 & & & & & & & & 青霉素 5 & & & & & & & & 青霉素 & & & & & & & & 苯唑西林 & & & & & & & & 氯唑西林 & & & & & & & & 萘夫西林 & & & & & & & & 双氯西林 & & & & & & & & 453 实际样品测定 采用本文所建立的方法 对长沙市水产品批发市场 农贸市场 超市代售的草鱼 鲤鱼 甲鱼 乌鳢 对虾 等 个样品进行了抽样检测 按照本文的前处理方法和仪器条件进行了上机测定 & 由结果可知 磺胺类 80 喹诺酮类 0 及青霉素类 $ 0 在样品中均有不同程度检出 磺胺类 80 检出范围为?& #.. 检出最高的是磺胺甲基嘧啶 喹诺酮类 0 检出范围是? & #.. 其中恩诺沙星的残留量最高达

6 第 期 万译文等 分散固相萃取 液相色谱串联质谱法测定水产品中磺胺类 喹诺酮类 青霉素类多种兽药残留 & #.. 青霉素类 $ 0 未检出 & 这说明市场上代售的水产品在生产 加工 运输及储藏等过程中 磺胺类 80 和喹诺酮类 0 被作为杀菌剂使用 & 为了确保市民的饮食安全和人身健康 需要相关行政部门加强对水产品中的磺胺类 80 喹诺酮类 0 及青霉素类 $ 0 加强监管与检测 & 3 小结本文建立了同时测定水产品中磺胺类 80 喹诺酮类 0 及青霉素类 $ 0 多种药物残留检测的液相色谱串联质谱法 & 该方法前处理简单快速 拥有较高的选择性和重现性 可以为磺胺类 80 喹诺酮类 0 及青霉素类 $ 0 在水产品中的残留及毒理评价提供灵敏 准确的分析手段 保障食品安全 & 参考文献 张可煜 王大菊 袁宗辉 等 & 猪和鸡可食性组织中氨苄青霉素残留的微生物学检测法 =& 中国兽医学报 & 顾 欣 & 牛奶中青霉素残留的微生物学检测方法研究进展 =& 中国兽药杂志 & 谢瑜杰 呼秀智 孙晓铮 等 & 胶体金免疫层析技术在水产品磺胺类药物残留检测中的应用研究进展 =& 食品安全质量检测学报 & 高 进 & 毛细管气相色谱法测定蜂蜜中磺胺噻唑残留量 =& 湖北大学学报 自然科学版 & 张 尹 杨亚玲 张丹扬 等 & 牛奶中 种青霉素残留的高效液相色谱柱前衍生法检测 =& 分析测试学报 & 王 静 李 萍 马 昊 &8 3$ 柱后衍生荧光检测法测定水产品中 种磺胺类 =& 食品工业 & 李 存 江海洋 吴银良 等 & 高效液相色谱 荧光 紫外法测定动物肌肉组织中多类药物残留 =& 分析化学研究报告 & 尹燕敏 沈颖青 朱月芳 等 & 超高效液相色谱 串联质谱法同时测定水和沉积物中磺胺类 喹诺酮类和氯霉素类抗生素残留 =& 分析科学学报 & 何 强 孔祥虹 李建华 等 & 超高效液相色谱 串联质谱法同时测定蜂蜜中硝基咪唑类 磺胺类 喹诺酮类兽药残留 =& 分析试验室 & 黄子敬 王晓玲 杨钦沾 等 & 超高效液相色谱 串联质谱法同时测定畜禽肉中磺胺类 喹诺酮类 硝基咪唑类兽药残留 =& 分析试验室 & 曹 慧 陈小珍 朱 岩 等 & 多壁碳纳米管净化 超高效液相色谱串联质谱 技术同时测定牛奶中青霉素类药物残留 =& 质谱学报 & 张 燕 舒 平 阚海勋 等 & 超高效液相色谱 串联质谱法测定乳制品中 种青霉素类抗生素残留 =& 食品安全质量检测学报 & 郭萌萌 李兆新 王 智 等 & 通过式固相萃取净化 液相色谱串联质谱法快速检测水产品中 种青霉素残留 =& 分析测试学报 & 金 钥 孙延斌 崔 进 等 & 水产品中喹诺酮类和磺胺类兽药残留检测方法的建立 =& 食品研究与开发 & 余丽梅 张 聪 宋 超 等 & 分散固相萃取 超高效液相色谱质谱测定水产品中磺胺类抗生素的残留量 =& 中国农学通报 & 编辑 =

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