目录 03 极性化合物保留策略 03 ILI 保留机制 制药 05 有机酸 06 甲基咪唑 06 转化糖 ( 葡萄糖 / 果糖 ) 07 二甲双胍 07 阿昔洛韦和鸟嘌呤分析 08 核酸类分析 09 小肽分析 0 有机膦酸 合成氨基酸 糖肽 糖 3 抗坏血酸及异抗坏血酸 4 人参皂苷 4 复方丹参滴

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1 极性化合物典型应用文集

2 目录 03 极性化合物保留策略 03 ILI 保留机制 制药 05 有机酸 06 甲基咪唑 06 转化糖 ( 葡萄糖 / 果糖 ) 07 二甲双胍 07 阿昔洛韦和鸟嘌呤分析 08 核酸类分析 09 小肽分析 0 有机膦酸 合成氨基酸 糖肽 糖 3 抗坏血酸及异抗坏血酸 4 人参皂苷 4 复方丹参滴丸 5 维生素 (T3) 6 维生素 (Amide) 生物分析 / 临床检测 7 乙酰胆碱 8 一元胺类神经递质 8 卡因类局部麻醉药 9 血浆中儿茶酚胺及肾上腺素 0 吗啡代谢物 去氨加压素 检测血浆中脂类物质如 : 卵磷脂 食品 / 环境 三聚氰胺 3 氨基糖苷类抗生素 4 糖异构体的分离 5 检测自来水中的丙烯酰胺 6 百草枯与敌草快

3 极性保留策略树 ( 反相 亲水作用色谱 ) XBridge ShieldRP8 or XSelect SS T3, Atlantis T3 Yes Yes XSelect SS T3, Atlantis T3 Yes o o XBridge Amide XBridge ILI Atlantis ILI RTES ILI Yes o 首试条件 : T3 柱 低 p(p3), 高水相 (>95%);T3 柱可兼容 00% 水相, 可筛选 p -7 XBridge Shield RP8 柱 碱性分析物高 p(p0), 高水相 (>95%); 该柱可兼容 00% 水相, 可筛选 p3~0 XBridge Amide 柱 乙腈 : 水 95:5, 中等 p(p5, 流动相含 0mM 醋酸铵和 0.0% 醋酸 ); 酸性 中性与混合分析物首选该柱, 该柱可筛选条件 p3~0 XBridge ILI 柱 乙腈 : 水 95:5, 中等 p(p5, 流动相含 0mM 醋酸铵和 0.0% 醋酸 ); 碱性分析物首选该柱, 该柱可筛选条件 p~8 Atlantis /RTES ILI 柱 乙腈 : 水 95:5, 低 p(p3, 流动相含 0mM 甲酸铵和 0.% 甲酸 ); 碱性分析物首选该柱 了解 ILI 的工作原理保留机制一如色谱学中的所有机制作用, 任何一种分离总是受各种溶质之间的相互作用以及这些溶质在流动相和固定相之间的动态平衡所支配 在 ILI 中, 保留机制是液 液分配 吸附作用 离子相互作用和亲水性保留作用的复杂的多模式组合, 从而使 ILI 与 RPL 相比具有独特的选择性和保留特性 [ 图 ] 然而, 单一的保留机制并非主导所有分离 分析物的成功保留主要取决于流动相的组成 [ 有机溶剂和 p] 流动相与固定相的相互作用及分析物的化学性质和结构组成 ß-D- V 0 =0.5 XBridge 8 3 V 0 =0.6 ILI XBridge ILI min 图 : 因 ILI 因其多模式保留机制, 具有相对于反相色谱的正交性的选择性, 在 ILI 的色谱条件下, 吗啡的葡萄糖苷酸代谢物继吗啡之后被洗脱 3

4 了解 ILI 的工作原理 ILI 是正相色谱的变体, 其保留强度与溶质极性成正比, 而与流动相极性成反比 因所使用的固定相为极性 [ 即 : 未衍生化硅胶或杂化颗粒 酰胺基 氨基 二醇 两性离子等 ], 故可轻易吸附水及其它极性溶剂 极性分析物随固定相极性的增加和流动相极性的降低表现出更强的保留 这是基于相似相容的原理 如果固定相比流动相具有更强的亲水性, 则极性分析物倾向于与固定相作用, 从而增加保留 然后, 通过逐渐增加流动相的极性而使分析物依次洗脱 [ 在 ILI 中, 水是最强的洗脱溶剂 ] 尽管在流动相中增加极性溶剂的量可促进洗脱过程, 然而, 该极性溶剂的存在还可使固定相表面吸附上一层极性层, 对于建立液 液分配从而获得对极性分析物的保留是必不可少的 [ 图 ] 3 + A/ (90:0) 3 + /90: % A 图 : 在固定相表面吸附一层极性溶剂对于保留极性化合物而言是必不可少的 在这里, 我们观察到极性碱性化合物 [ 胞嘧啶 ] 在流动相和固定相表面吸附水层之间的液 液分离 在 ILI 中, 吸附和分配保留机制相互关联 吸附保留机制只是简单的溶质与流动相之间对于固定相上的极性吸附位点的竞争 而分配保留机制则是由于分析物在流动相和固定相表面的吸附水层上的溶解度差异 为使填料表面形成亲水层, 流动相中至少包含 3% 的极性溶剂, 才可使固定相充分的与水结合 [ 溶剂化 ] 各填料色谱柱特点 Atlantis ILI lica (p -5) 规格 :3 µm, 5 µm 及制备 RTES ILI lica (p -5) 规格 :.6 µm,.7 µm Linker AQUITY UPL BE Amide XBridge Amide (p -) 规格 :.7 µm,.5 µm, 3.5 µm, 5 µm 及制备 AQUITY UPL BE ILI XBridge ILI (p -9) 规格 :.7 µm,.5 µm, 3.5 µm, 5 µm 及制备 4

5 制药 有机酸 色谱条件 色谱柱 : SS T3 4.6 x 50 mm, 5 µm 部件编号 : ml/min 流动相 : 0 mm 磷酸二氢钠 p.7 注入体积 : 0 µl 柱温 : 30 波长 : 0 nm 仪器 : Alliance 695 with 996 PDA 草酸 苹果酸 ompounds: USP Tailing Sample oncentrations (µg/ml). 草酸 丙酮酸 酒石酸 苹果酸 乳酸 乙酸 马来酸 富马酸 琥珀酸.6 58 琥珀酸 酒石酸 丙酮酸 乙酸乳酸 马来酸 富马酸 7 V 0 =

6 制药 甲基咪唑 ( 具体条件参考应用资料 : E) 色谱条件 液相系统 : Alliance 695 运行时间 : 0.5 分钟 色谱柱 : RTES ILI.7 µm. x 00 mm 流动相 A: 0mM 甲酸铵用甲酸调至 p4 流动相 B: 0.% 甲酸乙腈 注入体积 : 5 µl 梯度 : Time Flow %A %B. Initial Intensity m/z MEI -MEI 质谱条件检测器 : 离子源 : 毛细管电压 : 锥孔电压 : 探针温度 : 源温度 : 采集 : AQUTITY Qda ESI+ 0.8 kv 5 V SIR of 69., 83. z Intensity Imidazole (IS) m/z Minutes 转化糖 ( 具体条件参考应用资料 : 国家食品药品监督管理局国家药品标准 ) 国家食品药品监督管理局国家药品标准注射用转化糖 Zhu she yong Zhuan hua tang Invert Sugar for Injection 含量测定 : 照高效液相色谱法 ( 中国药典 00 年版二部附录 VD) 测定 色谱条件与系统适用性试验 : 用酰胺基三键合亚乙基桥杂化颗粒为填充剂 ( 推荐色谱柱为 :Waters XBridge Amide, 4.6 mm x 50 mm, 3.5 µm 或效能相当的色谱柱 ), 以乙腈 - 水 - 浓氨溶液 (80:0:0.) 为流动相, 示差折光检测器, 检测器温度和柱温均为 40 取果糖与无水葡萄糖适量, 用乙腈溶液 (75 00) 制成每 ml 中含果糖和无水葡萄糖分别约为 5 mg 的溶液, 量取 0 µl, 注入液相色谱仪, 果糖峰与无水葡萄糖的分离度应符合要求 6

7 制药 二甲双胍 ( 具体条件参考应用资料 : Z) 色谱条件色谱柱 : AQUITY UPL BE 酰胺. x 50 mm,.7 µm 部件编号 : 流动相 A: 0 mm 磷酸钠,p.3 流动相 B: 乙腈 药典级 : 80% B 0.5 ml/min 注入体积 : µl 柱温 : 40 检测 : UV@8 nm 仪器 : AQUITY UPL -LASS 配 AQUITY UPL PDA 检测器 AU A I E D B 全部条件请参考应用资料 E min 阿昔洛韦和鸟嘌呤分析 ( 具体条件参考应用资料 : Z_RTES 色谱柱应用文集 _WA64666) 色谱条件 仪器 : AQUITY UPL 配置 PDA 检测器 色谱柱 : RTES ILI.6 µm. x 00 mm 分离模式 : 等度 ( 流动相 A:B 5:85) 流动相 A: 0.% 甲酸水 流动相 B: 0.% 甲酸乙腈 检测波长 : 54 nm 0.6 ml/min 柱温 : 30 稀释剂 : 0.0 a 的乙腈 / 水 60:40 Acyclovir and Guanine 0.08 鸟嘌呤 Guanine 羟乙氧甲鸟 Acyclovir ( 即峰 ) 嘌呤 ( 即峰 ) ompounds:. Acyclovir (50 µg/ml). Guanine (50 µg/ml) 0.06 AU Min 7

8 制药 核酸类分析 ( 具体条件参考应用资料 : Z_RTES 色谱柱应用文集 _WA64663) 色谱条件 仪器 : AQUITY UPL I-lass 配置 PDA 色谱柱 : RTES ILI.6 µm. x 50 mm 部件编号 : 流动相 A: 乙腈 / 甲醇 / 含 0.05% 乙酸的 0mM 乙酸铵 50:40:0 流动相 B: 乙腈 / 甲醇 / 含 0.0% 乙酸的 4mM 乙酸铵 90:5:5 波长 : 54 nm 0.45 ml/min 注入体积 : 0.4 µl 柱温 : 30 稀释剂 : 含 0.% 甲酸的乙腈 / 甲醇 75:5 梯度 : Time Flow %A %B S Thiourea T hymine ytosine F 氟胞嘧啶 ( 即峰 4) 5-Fluorocytosine 硫脲 ( 即峰 ) 胸腺嘧啶 ( 即峰 ) 胞嘧啶 ( 即峰 5) 胸 ( 腺嘧啶脱氧核 ) 苷 Thymidine ( 即峰 3) ucleic Acid Bases ompounds:. Thiourea (0.05 mg/ml). Thymidine (0. mg/ml) 3. Thymine (0. mg/ml) 4. 5-Fluorocytosine (0. mg/ml) 5. ytosine (0. mg/ml) AU Min 8

9 制药 小肽分析 ( 具体条件参考应用资料 : Z_RTES 色谱柱应用文集 _WA64668) 色谱条件 仪器 : AQUITY UPL -lass 配置 TQD 色谱柱 : RTES ILI.6 µm. x 50 mm 部件编号 : 流动相 A: 乙腈 / 含 0.5% 甲酸的 0mM 甲酸铵 50:50 流动相 B: 乙腈 / 含 0.5% 甲酸的 0mM 甲酸铵 95:5 检测器 : ESI+ scan m/z ml/min 毛细管电压 : kv 锥孔电压 : 30 v 探针温度 : 300 注入体积 : 5 µl 样品稀释剂 : 含 0.% 甲酸的乙腈 / 甲醇 75:5 梯度 : Time Flow %A %B istidine Dipeptides reatine Anserine arnosine 肌氨酸 ( 即峰 ) 肌肽 ( 即峰 ) 鹅肌肽 ( 即峰 3) ompounds:. reatine, m/z 3 ( µg/ml). arnosine, m/z 7 ( µg/ml) 3. Anserine, m/z 4 (5 µg/ml) % Min 9

10 制药 有机膦酸 ( 具体条件参考应用资料 :AQUITY UPL BE Amide 色谱柱应用文集 _WA6004) 色谱条件色谱柱 : AQUITY BE Amide. x 00 mm.7 µm 部件编号 : 流动相 A: 乙腈 / 含 0.04% 氨水的 0mM 乙酸铵 p9.0 50:50 流动相 B: 乙腈 / 含 0.04% 氨水的 0mM 乙酸铵 p9.0 95:5 0.5 ml/min 梯度 : Time %A %B 注入体积 : 5.0 µl 样品浓度 : µg/ml 稀释剂 : 乙腈 / 甲醇 75:5 柱温 : 65 3 y cl o hexyl met hyl p hosp honic a c id ( M PA) P 3 P 3 P I sopro pyl m et hyl p ho s p honic a c id (IM PA) (m et hyl) pro pyl m et hyl p hosp honic a c id (MM PA) P P inac olyl m et hyl p ho s p honic a c id ( P M PA) P Et hyl m et hyl p hosp honic a c id ( EM PA) 3 质谱条件检测器 : ES 毛细管电压 :.5 kv 离子源温度 : 0 采集 SIR(M/Z):.9(EMPA) 36.95(IMPA) 79.0(PMPA) 77.0(MPA) 50.95(MMPA) 00 Intensity % 4.63e MPUDS. Pinacolyl methylphosphonic acid (PMPA). -(methyl)propyl methylphosphonic acid (MMPA) 3. yclohexyl methylphosphonic acid (MPA) 4. Isopropyl methylphosphonic acid (IMPA) 5. Ethyl methylphosphonic acid (EMPA) min 0

11 制药 合成氨基酸 ( 具体条件参考应用资料 : 高效液相色谱法测定门冬氨酸鸟氨酸注射液的含量 ) 高效液相色谱法测定门冬氨酸鸟氨酸注射液的含量缪宁梅, 马婕 江苏省药品检验所, 江苏南京 0008; 中国药科大学, 江苏南京 0009 色谱柱和流动相的选择经反复试验, 用氨基键合硅胶色谱柱 ; 以乙腈 mol/l 磷酸二氢钾溶液 (50:50) 为流动相 ; 流速为.0 ml/min 理论塔板数按鸟氨酸峰计算应不低于 5000 在此色谱条件下, 供试品及对照品的 PL 色谱图见图 鸟氨酸与门冬氨酸及氯离子峰的分离度均大于 9.0 备注 : 由于硅胶氨基柱耐受性差, 很难达到理论塔板数的要求, 所以客户使用 XBridge Amide 4.6 x 50 mm, 5 µm, 按照上述方法, 耐受性及理论塔板数均符合要求 谱图见 : min 糖肽 ( 具体条件参考应用资料 :06 耗材手册 P64) 选择能够兼顾分离度需要与样品分析通量要求的色谱柱柱长 注 : 具体应用请见应用纪要 E Amide-Bonded BE ILI olumns for igh Resolution, PL-ompatible Separations of -Glycans

12 制药 糖 ( 纤维水解物 )( 具体条件参考应用资料 :AQUITY UPL BE Amide 色谱柱应用文集 _WA607) 色谱条件 色谱柱 : AQUITY BE Amide. x 00 mm.7 µm 部件编号 : 流动相 A: 乙腈 /0.% 三乙胺水溶液 80:0 流动相 B: 乙腈 /0.% 三乙胺水溶液 30:70 0. ml/min 梯度 : Time %A %B 进样体积 :.3 µl 样品浓度 : mg/ml 稀释剂 : 乙腈 / 水 50:50 柱温 : 35 仪器 : UPL 配置 ELSD Xylose Fructose Glucose Mannose Xylose Fructose Glucose Mannose ellobiose Sucrose ellobiose Sucrose Raffinose Raffinose n n = to 5 Melezitose Maltooligosaccharides n Melezitose n = to 5 Maltooligosaccharides ELSD 的参数设置 设值 : 00 压力 : 40 psi 漂移管温度 : 40 数据频率 : 0 pps. Xylose. Fructose 3. Mannose 4. Glucose 5. Sucrose 6. ellobiose 7. Melezitose 8. Raffinose 9. Maltotriose 0. Maltotetraose. Maltopentaose. Maltohexaose 3. Maltoheptaose , min 还有牛奶 / 提子麦片 / 啤酒 / 食用糖 / 蜂蜜 / 炸土豆 / 止咳糖浆 (BE Amide 文集 )

13 制药 抗坏血酸及异抗坏血酸 ( 具体条件参考应用资料 :WA600) 色谱条件 色谱柱 : AQUITY BE Amide. x 00 mm.7 µm 部件编号 : 流动相 A: 乙腈 / 含 0.0% 乙酸的 0mM 乙酸铵 p5.0 50:50 流动相 B: 乙腈 / 含 0.0% 乙酸的 0mM 乙酸铵 p5.0 90:0 0.ml/min 梯度 : Time %A %B 注入体积 : 5.0 µl 样品浓度 : 30 µg/ml 稀释剂 : 0.% 甲酸的乙腈 / 甲醇 75:5 柱温 : 5 检测波长 : 60 nm I so a s c orbic a c id( 即峰 ) A s c orbic a c id ( 即峰 ) AU min 3

14 制药 人参皂苷 ( 具体条件参考应用资料 :BE Amide_Ginseng Root Powder_wa64083) 色谱条件 色谱柱 : AQUITY BE Amide. x 50 mm.7 µm 部件编号 : 流动相 : 乙腈 : 水 80:0 0.6 ml/min 柱温 : 60 注入体积 :.5 µl 检测波长 : 03 nm Ginsenoside Rb.75e-.5e-.5e-.0e- 7.5e- 5.0e-.5e- 0.0 G ginseng root powder extract Tailing factor =.03 USP plate count = 778 Ginsenoside Rb () PDA h 03 nm Range: min 复方丹参滴丸 复方丹参滴丸 Fu Fang Danshan Diwan 处方 丹参三七冰片 含量测定 照高效液相色谱法 ( 通则 05) 测定 色谱条件与系统适应性试验 用 Waters AQUITY UPL SS T3( 柱长为 00 mm, 内径为. mm, 粒径为.8 µm) 色谱柱, 以含 0.0% 磷酸的 80% 乙腈溶液为流动相 A, 以 0.0% 磷酸溶液为流动相 B, 按下表中的规定进行梯度洗脱, 流速为每分钟 0.4 ml; 检测波长为 80 nm; 柱温为 40 理论板数按丹参素峰计算应不低于

15 制药 维生素 (T3) 色谱条件 色谱柱 : SS T3 4.6 x 50 5 µm 流动相 A: 0.% 三氟乙酸水 流动相 B: 0.% 三氟乙酸乙腈.4 ml/min 梯度 : Time %A %B 注入体积 : 0 µl 柱温 : 30 波长 : 68 nm 3 L-ascorbic acid (Vitamin ) (iacin) ( 即峰 ) ( 即峰 ) Pyridoxal ( 即峰 4) affeine ( 即峰 7) icotinic acid S + 3 Thiamine (Vitamin B) ( 即峰 3) Riboflavin (Vitamin B) ( 即峰 8) 3 3 Tocopherol (Vitamin E) ( 即峰 0) Pyridoxine ( 即峰 5) Folic acid ( 即峰 6) (Vitamin B) 3 3 Retinol (Vitamin A) ( 即峰 9) Ergocalciferol (Vitamin D) ( 即峰 ) V 0 = Minutes 5

16 制药 维生素 (Amide)( 具体条件参考应用资料 :AQUITY UPL BE Amide 色谱柱应用文集 _WA60093) 色谱条件 色谱柱 : AQUITY BE Amide. x 50 mm.7 µm 部件编号 : 流动相 A: 乙腈 / 含 0.04% 氨水的 0mM 乙酸铵 p9.0 50:50 流动相 B: 乙腈 / 含 0.04% 氨水的 0mM 乙酸铵 p9.0 90:0 0.5 ml/min Time %A %B 注入体积 : 5 µl 稀释剂 : 0.% 甲酸乙腈 / 甲醇 75:5 柱温 : 30 波长 : 65 nm P ic otin amid e ( 即峰 ) ic otinic a c id ( 即峰 4) 3 P yridoxal ( 即峰 ) + 3 S T hiamine ( 即峰 5) F olic Acid ( 即峰 8) Ribof l avin ( 即峰 3) A s c orbic a c id ( 即峰 6) AU B ( 即峰 7) min 6

17 生物分析 / 临床检测 乙酰胆碱 ( 具体条件参考应用资料 :L /MS Isocratic Separation of eurotransmitters on XBridge ILI) 色谱条件 色谱柱 : XBridge ILI. x 50 mm 3.5 µm 部件编号 : 流动相 A: 含 0.5% 甲酸的 0mM 甲酸铵水溶液 流动相 B: 含 0.5% 甲酸的 0mM 甲酸铵 在乙腈 : 甲醇 : 水 90:5:5 等度的模式 流动相比列 : 0%A:90%B 0.5 ml/min 注入体积 : 0 µl 稀释剂 : 0.% 甲酸乙腈 : 甲醇 75:5 样品浓度 : 5 ng/ml 柱温 : 30 检测器 : 质谱 仪器 : AQUITY UPL 配置 TQD Acetylcholine (Ach) holine (h) ( 即峰 ) ( 即峰 ) V 0 = 0.35 min 0 min 7

18 生物分析 / 临床检测 一元胺类神经递质 ( 具体条件参考应用资料 : Z_ 使用 XBridge BE Amide XP 色谱柱, 按 ILI 色谱机理对一元胺类神经递质进行 L/MS/MS 分析 ) L 条件 仪器 : AQUITY UPL 系统 色谱柱 : XBridge BE Amide XP,. x 75 mm,.5 µm 货号 : 流动相 A: 95:5 :A w/00mm 4 (p 3.0) 流动相 B: 85:5 :A w/30mm 4 (p 3.0) A 00 0% XBridge BE Amide XP 初始的流动相条件是 00% 的流动相 A, 在 3.5 分钟内流动相 B 升高到 30% 然后在 0. 分钟内流动相 A 回到 00%, 运行.4 分钟 流速为 0.5 ml/min 进样体积为 0 µl 质谱条件 : 仪器 : 离子源 : Waters Xevo TQ-S 质谱仪 ESI+ B 00 0% 4 XBridge BE ILI XP min 图. 分别使用 Waters XBridge BE Amide XP 和 XBridge BE ILI XP 色谱柱分析一元胺类化合物的色谱图 分析物 :-MS,-5-T,3-DA,4-EP,5-E 卡因类局部麻醉药 ( 具体条件参考应用资料 : Z_ 利用 RTES UPL 色谱柱改善分离度 ) AU 全多孔 ILI.7 µm,. x 50 mm 分离度 :.8,3 利多卡因 布他卡因 ( 即峰 ) ( 即峰 ) 丁卡因 ( 即峰 3) 普鲁卡因 ( 即峰 4) AU RTES UPL ILI.6 µm,. x 50 mm 分离度 :.5,3 普鲁卡因胺 ( 即峰 5) Minutes 8

19 生物分析 / 临床检测 血浆中儿茶酚胺及肾上腺素 ( 具体条件参考应用资料 : Z_ 使用针对临床研究的复合模式 SPE 和亲水作用色谱 (ILI) 对血浆儿茶酚胺和变肾上腺素进行快速 同步分析 ) L 条件 L 系统 : AQUITY UPL 色谱柱 : AQUITY UPL BE Amide,.7 m,. x 00 mm 柱温 : 30 样品温度 : 0 流动相 A(MPA): 95:5 水 : 乙腈, 含有 30 mm 4,p 3.0 流动相 B(MPB): 5:85 水 : 乙腈, 含有 30 mm 4,p 3.0 洗针液 : 强洗针液和弱洗针液同流动相 B 去甲肾上腺素 logp =-0.68 肾上腺素 logp =-0.43 多巴胺 logp =-0.03 梯度条件如表 所示, 包含初始平衡条件, 随后缓慢上升且流速增大, 以重新平衡色谱柱 整个循环时间为 4.0 min 异丙肾上腺素 logp =-0.39 变肾上腺素 logp = 0.00 图. 儿茶酚胺和变肾上腺素的名称 分子结构和 logp 值 3- 甲氧酪胺 logp = 0.68 MS 条件 MS 系统 : Xevo TQ-S 电离模式 : ESI+ 毛细管电压 : 0.5 kv 锥孔电压 : 视化合物而定 ( 见表 ) 去溶剂气 900 L/h 锥孔气 50 L/h 去溶剂气温度 : 550 源温度 : 50 MT 3-MT MT DA EP E 梯度 : 时间 流速 %A %B 图 B. 儿茶酚胺和变肾上腺素在 AQUITY UPL BE Amide 色谱柱 (.7 m,. x 00 mm) 上得到的色谱图 代表性方法空白 所有化合物的内源性浓度列于表 3 中 还有不同的基质, 尿液里的儿茶酚胺及肾上腺素的 Z 9

20 生物分析 / 临床检测 吗啡代谢物 ( 具体条件参考应用资料 : Z_RTES 色谱柱应用文集 _WA6466) 色谱条件 仪器 : AQUITY UPL I-lass 配置 PDA 色谱柱 : RTES ILI. x 50mm.6 µm 部件编号 : 流动相 A: 乙腈 / 含 0.5% 甲酸的 0mM 甲酸铵水溶液 50:50 流动相 B: 乙腈 / 含 0.5% 甲酸的 0mM 甲酸铵水溶液 90:0 波长 : 80 nm.35 ml/min 注入体积 : 5 µl 柱温 : 30 稀释剂 : 流动相 B 梯度 : 时间 流速 %A %B Acetylmorphine 3 Morphine + Morphine--oxide 3 Morphine-3β-glucuronide Morphine Metabolites ompounds:. 6-Acetylmorphine (0. mg/ml). Morphine (0. mg/ml) 3. Morphine--oxide (0. mg/ml) 4. Morphine-3β-glucuronide (0. mg/ml) AU Min 0

21 生物分析 / 临床检测 去氨加压素 ( 具体条件参考应用资料 : E) L 条件 色谱条件 : AQUITY UPL System with Binary Solvent Manager, olumn Manager, and Sample Manager 色谱柱 : AQUITY UPL SS T3.8 µm. x 00 mm 柱温 : 45 梯度 : 30 to 95% organic over 3.5 min 质谱条件 质谱系统 : Xevo TQ-S 质谱模式 : Positive ion electrospray MS/MS 质谱切换 : Figure. L/MS/MS chromatogram of the desmopressin Mid-Level Q. 检测血浆中脂类物质如 : 卵磷脂 ( 具体条件参考应用资料 : E) 色谱条件 色谱柱 : AQUITY UPL BE ILI. x 00 mm,.7 µm 流动相 A: 95 乙腈 5 水与 0 mm 乙酸铵,p 8 流动相 B: 50 乙腈 50 水与 0 mm 乙酸铵,p ml/min 梯度 : 时间 A% B% 注入体积 : 3 微升 温度 : 30 仪器 : AQUITY UPL, 配 Xevo Q-Tof MS er P P SM LP A B 质谱条件 : 电离模式 : 毛细管电压 : 锥孔电压 : 除溶剂温度 : 除溶剂气体 : 源温度 : 采集 : ESI 正模式和负模式.8 kv/ -.9 kv 35 V L/ 小时 m/z PG PI, PE LP

22 食品 / 环境 三聚氰胺 ( 具体条件参考应用资料 : 婴幼儿配方乳粉和液态奶中三聚氰胺的测定 ) 色谱条件 仪器 : Waters AQUITY UPL 超高效液相色谱系统 检测器 : Waters UPL TUV 紫外检测器 /TQD 串联四极 杆质谱 色谱柱 : AQUITY UPL BE ILI. x 50 mm,.7 µm 流动相 : A 0mM 醋酸铵 B 乙腈 进样体积 : 5 µl 检测波长 : 40 nm 柱温 : 35 梯度方法 : 时间 (min) 流速 %A %B 曲线 TQD 质谱方法 离子化方式 : ESI+ 毛细管电压 (kv): 3.0 脱溶剂气流量 (L/r): 900 锥孔气 (L/r): 50 离子源温度 ( ): 50 脱溶剂气温度 ( ): 400 MRM 条件 MRM Transitions Dwell Time one Voltage ollision Energy (sec) (V) (ev) 7 > >

23 食品 / 环境 氨基糖苷类抗生素 (PFP)( 具体条件参考应用资料 :700045Z_UPL/MS/MS 测定肉类和乳品中的氨基糖苷类抗生素 ) UPL 条件 系统 : 色谱柱 : AQUITY UPL AQUITY SS PFP. x 00 mm,.8 µm 部件号 : 进样量 : 30 µl 温度 : 35 流动相 A: 0 mm FBA 水溶液 流动相 B: 0 mm FBA 乙腈溶液 0.50 ml/min 梯度 : 0% B 初始条件,7 分钟内线性梯度增至 80% B, 保持 8 分钟, 浓度降回至 0% B, 持续 8. 分钟 重新平衡, 保持 0 分钟 新霉素 庆大霉素 质谱条件质谱仪 : AQUITY TQD 模式 : 正离子电喷雾 (ESI+) 毛细管电压 : 3.0 kv 萃取锥孔电压 : 3.0 V 离子源温度 : 30 锥孔气体 0 L/h 脱溶剂温度 : 450 脱溶剂气体900 L/h 碰撞气体 : 氩气, 流速 0.0 ml/min 00 % 0 00 % 0 00 % 0 00 % 0 00 % 0 00 % 0 链霉素 图. 氨基糖苷类的化学结构 双氢链霉素 3: MRM of 3 hannels ES > 6. (eomycin) e : MRM of 7 hannels ES > 57.5 (Gentamincin_).9e : MRM of 7 hannels ES > 60. (Gentamincin_a,).90e : MRM of 7 hannels ES > 60.6 (Gentamincin_a) 4.49e : MRM of 4 hannels ES > (Dihydrostreptomycin) 6.74e : MRM of 4 hannels ES > 46. (Streptomycin).06e5 Min 图. 由加样浓度为 0 µg/kg(ppb) 的牛奶得到的 UPL/MS/MS 色谱图 3

24 食品 / 环境 氨基糖苷类抗生素 (ILI)( 具体条件参考应用资料 : 使用 RTES ILI 色谱柱快速高效分析 0 种常见氨基糖苷类抗生素 ) 液相条件 色谱系统 : AQUITY UPL I-lass 色谱柱 : RTES ILI 00 x. mm,.6 µm 流动相 A : (00 mm 甲酸铵,p=.5) 流动相 B : 70% 乙腈水溶液 (00 mm 甲酸铵,p=4.0) 质谱条件 质谱系统 : Xevo TQ-S 离子源 : ESI+ 毛细管电压 : 3.0 kv 源温度 : 50 雾化气温度 : 450 雾化气 900 L/h ompound 妥布霉素庆大霉素卡那霉素潮霉素 B 安普霉素丁胺卡那霉素新霉素大观霉素链霉素双氢链霉素 English ame Tobramycin Gendamicin Kanamycin ygromycin B Apramycin Amikacin eomycin Spectinomycin Streptomycin Dihydrostreptomycin MRM Transition 468.3/ / / / / / / / / / / / / / / / / / / /45.7 Retention Time(min) LQ (ng/ml) 表. 十种常见氨基糖苷抗生素检测结果信息 糖异构体的分离 ( 参考文献 : Z) L 条件 L 系统 : AQUITY Arc 数据系统 : Empower 3 运行时间 : 40.0 min 色谱柱 : XBridge XP BE Amide.5 µm, 3.0 x 50 mm 柱温 : 85 流动相 A: 90% 乙腈 :5% 异丙醇 :5% 水 * 流动相 B: 80% 乙腈 :0% 水 * 0.8 ml/min 进样体积 : µl 时间 流速 %A %B 初始 * 均含有 500 ppb 盐酸胍和 0.05% 二乙胺 4

25 食品 / 环境 检测自来水中的丙烯酰胺 ( 具体条件参考应用资料 : 检测自来水中的丙烯酰胺 ) 仪器 : 色谱条件 : 色谱柱 : Waters UPL/TQD 超高效液质系统流动相 A 0.0% 甲酸水流动相 B 甲醇 98%A:%B(0min) 90%A:0%B(.5min) 98%A:%B(.6min) 98%A:%B(min) 0.5 ml/min SS T3.8 µm. x 50 mm 色谱条件流动相 A 为 0.0% 甲酸水, 流动相 B 为甲醇, 流速 0.5 ml/min, 初始流动相为 98%A 和 %B, 到.5 分钟线性变化到 90%A 和 0%B,.6 min 变回到起始梯度, 样品分析总时间为 min 样品 ( 根据需要加内标 0.75 µg/l) 过膜后直接进样, 进样量 0 µl 质谱条件采用 ESI 正离子模式, 毛细管电压 3.5kV, 离子源温度 0, 脱溶剂温度 450, 脱溶剂气 600L/h, 锥气体 0L/h, 碰撞气 0.7ml/min 内烯酰胺 (Acrylamide) 和丙烯酰胺 -d 3 (D3-Acrylamide) 定量离子对分别为 7.9>54.9 和 74.9>57.9, 定性离子对均为 7.9>43.5, 锥孔电压和碰撞能分布都为 4V 和 9eV 5

26 食品 / 环境 百草枯与敌草快 ( 小麦土豆中 )( 具体条件参考应用资料 : Z_ 利用 RTES UPL ILI 色谱柱进行土豆与小麦中百草枯与敌草快的 UPL-MS/MS 测定 ) 液相条件 L 系统 : AQUITY UPL -lass 色谱柱 : RTES ILI 色谱柱.6 µm,. x 00 mm ( 部件号 ) 流动相 ( 等度 ): 50:50 A/B 流动相 A: 00 mm 甲酸铵 缓冲液, p 3.7 流动相 B: 乙腈 进样体积 : 0 µl 柱温 : 30 清洗溶剂 : 50:50 乙腈 / 水 清除溶剂 : 50:50 乙腈 / 水 0.5 ml/min 样品瓶 : 聚丙烯 自动进样器样品瓶 ( 部件号 ) 质谱条件 MS 系统 : AQUITY TQD 质谱仪 电离模式 : 电喷雾正离子 源温度 : 50 脱溶剂气温度 : 350 脱溶剂气 800 L/h 锥孔气 30 L/h 碰撞气 0.0 ml/min 数据管理 : MassLynx 4. 版 敌草快 图. 敌草快和百草枯的结构式 百草枯 化合物 MRM 锥孔电压 (V) ID (ev) 敌草快 百草枯 83. > > > > 表. UPL-MS/MS 分析中敌草快和百草枯所用的 MRM 通道 Quats_9Aug03_0 Sm (Mn, x) 95 % Quats_9Aug03_0 Sm (Mn, 3x) MRM of 4 hannels ES+ 83. > 57. ( 敌草快 ).44e3 MRM of 4 hannels ES+ 85. > 70. ( 百草枯 ) 647 % Time 图. 0 ppb 加标小麦面粉样品的 UPL-MS/MS 提取离子色谱图 经证实,RTES UPL ILI 分离适合与 EU 所采用的快速筛选法配合使用 在 UPL-MS/MS 分析前, 提取样品仅经过了过滤与稀释 RTES UPL ILI 法采用了等度方法 (50:50 乙腈 / 缓冲液 ) 因此, 萃取样品仅需使用乙腈进行 : 的稀释即可实现优异的色谱性能 土豆与小麦面粉中敌草快的定量限 (LQ) 低于 0 ng/g 土豆中百草枯的 LQ 低于 0 ppb, 而小麦面粉中百草枯的 LQ 约为 0 ppb 想要了解更多的应用及解决方案, 请联系当地的沃特世销售人员或电话咨询 :800(400)

27 参考应用文集 AQUITY UPL BE AMIDE 色谱柱应用文集文件编号 :WA6408 RTES 色谱柱应用文集文件编号 : Z ILI 综合指南文件编号 :

28 沃特世科技 ( 上海 ) 有限公司地址 : 上海市浦东新区金海路 000 号金领之都 3 栋邮编 :006 电话 : 传真 : 北京分公司地址 : 北京市朝阳区铜牛国际大厦光华路 5 号院 号楼 9 层邮编 :0006 电话 : 传真 : 广州分公司地址 : 广州市荔湾区中山七路 50 号西门口广场 室邮编 :5070 电话 : 传真 : 成都分公司地址 : 成都市高新区科园南路 88 号天府生命科技园孵化楼 栋 4 室邮编 :6003 电话 : 传真 : 沃特斯中国有限公司 地址 : 香港新界沙田科学园 科技大道西 6 号 室 电话 : 传真 : 扫一扫, 关注沃特世微信 全国免费售后服务热线 : 800(400) Waters, XBridge, Atlantis, RTES, Alliance, AQUITY, QDa, AQUITY UPL, Xevo, MassLynx 和 The Science of What s Possible 沃特世公司的注册商标 所有其他商标属于各自所有者 07 沃特世公司中国印制 07 年 6 月 Z

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壹 實 驗 動 機 : 市 面 上 很 多 飲 料 店 都 標 榜 他 們 的 果 汁 很 有 效 用, 是 最 純 的, 而 對 於 維 他 命 C 含 量, 更 是 不 輸 給 水 果, 為 了 區 別 每 家 店 家 的 檸 檬 汁 是 否 真 正 是 天 然 的, 因 此 我 們 採 了 新 檸 檬 C 不 C 名 次 : 第 二 名 學 校 名 稱 : 東 區 忠 孝 國 中 作 者 : 黃 詩 淇 王 于 嘉 王 敬 淳 施 博 堯 林 哲 佑 余 承 哲 指 導 教 師 : 許 暉 東 摘 要 經 由 我 們 實 驗 發 現,1 毫 升 的 純 檸 檬 汁 約 含 1.83 mg 的 維 他 命 C, 而 檸 檬 中 的 維 他 命 C 並 不 會 因 為 溫 度 增 高 而 遭

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