前言 药剂学 (pharmaceutics) 是将原料药制备成用于治疗 诊断 预防疾病所需药物制剂的一门科学 即以药物制剂为中心研究其基本理论 处方设计 制备工艺 质量控制和合理应用的综合性应用技术科学 随着医学 药学及相邻学科的发展, 药剂学的发展也非常迅速 目前药剂学的分支学科包括物理药剂学 工

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1 药剂学实验与指导 中国医科大学药学院药剂学教研室 二〇一三年五月

2 前言 药剂学 (pharmaceutics) 是将原料药制备成用于治疗 诊断 预防疾病所需药物制剂的一门科学 即以药物制剂为中心研究其基本理论 处方设计 制备工艺 质量控制和合理应用的综合性应用技术科学 随着医学 药学及相邻学科的发展, 药剂学的发展也非常迅速 目前药剂学的分支学科包括物理药剂学 工业药剂学 药用高分子材料学及生物药剂学等 药剂学实验是药剂学课程的重要组成部分 本书以强调基础理论 基本知识和基本技能为宗旨, 使学生通过药剂学实验进一步掌握主要剂型的理论知识 处方设计原理及制备方法 ; 掌握主要剂型的质量控制 影响因素及考察方法 ; 熟悉生物药剂学和药代动力学基本参数的测定方法 ; 了解常用制剂设备 培养学生独立进行试验 分析问题和解决问题的能力, 引导学生面向未来 面向技术进步和技术创新 限于编者水平有限 时间仓促, 书中疏漏 错误之处再所难免, 敬请读者批评指正 中国医科大学药剂学教研室 2013 年 5 月

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4 实验二混悬剂的制备 一 目的和要求 1. 掌握混悬剂的一般制备方法 2. 熟悉根据药物性质选择适宜的稳定剂, 用以制备稳定混悬剂的方法 3. 了解混悬剂质量评定方法, 掌握沉降容积比的概念并熟悉测定方法 二 基本概念和实验原理混悬剂 (suspensions) 系指难溶性固体药物以微粒状态分散于分散介质中形成的非均匀的液体制剂, 可供口服 局部外用和注射 混悬剂的质量要求 : 药物化学性质稳定, 在使用或贮存期间含量符合要求 ; 根据用途不同, 混悬剂中微粒大小有不同要求 ; 粒子沉降速度较慢 沉降后不应有结块现象, 振摇能迅速再均匀分散 ; 微粒大小及液体的粘度, 均应符合用药要求, 易于倾倒且分剂量准确 ; 外用混悬型液体制剂应易于涂布, 不易流失 在重力作用下, 混悬液中微粒在静置时会发生沉降, 沉降速度遵循 Stoke s 定律, 即 : V= 2r 2 (ρ 1 -ρ 2 ) g 9η 式中 :V - 微粒沉降速度 (cm/s);r - 粒子半径 (cm);ρ 1 和 ρ 2 分别为微粒和分散介质的密度 (g/cm 2 );g - 重力加速度 (980cm /s 2 );η- 分散介质的粘度 [g/(cm s)] 从上式可以看出, 减少粒子半径, 增加分散介质粘度可降低粒子的沉降速度 混悬剂的稳定剂一般分为三类 :1. 助悬剂 ;2. 润湿剂 ;3. 絮凝剂与反絮凝剂 助悬剂 (suspending agents) 系指能增加分散介质的粘度以降低微粒的沉降速度或增加微粒亲水性的添加剂 润湿剂 (humectants) 系指能增加疏水性药物微粒被水润湿能力的附加剂 最常用的润湿剂是 HLB 值在 7~11 之间的表面活性剂, 如聚山梨酯类 聚氧乙烯蓖麻油类 泊洛沙姆等 絮凝剂能中和微粒电荷, 降低微粒 ζ 电位, 减小微粒间电荷的排斥力,ζ 电位降低至一定程度后, 混悬剂中微粒形成疏松的絮状聚集体, 使混悬剂处于稳定状态 由于形成的絮凝物体积大, 沉降速度快, 振摇后易于再分散, 因此克服了某些混悬颗粒沉淀后形成紧密的饼块而难以再分散的困难 反絮凝剂则能增加微粒 ζ 电位, 使微粒间斥力增加, 降低絮凝程度, 使液体保持较低粘度和良好的流动性或涂展性 1

5 混悬剂的配制方法有分散法和凝聚法 分散法是将粗颗粒的药物粉碎成符合粒径要求的微粒, 再根据主药的性质加入适宜的稳定剂, 分散于分散介质中制得混悬剂的方法 采用分散法制备混悬剂时 :1 亲水性药物 : 一般先将药物粉碎到一定细度, 再加处方中液体适量, 研磨到适宜的分散度, 最后加入处方中的剩余液体至全量 ;2 疏水性药物不易被水润湿, 必须先加一定量的润湿剂与药物研匀后再加液体研磨混匀 ;3 小量制备可用乳钵, 大量生产可用乳匀机 胶体磨等机械 ;4 对于质量 硬度大的药物, 可采用 水飞法 凝聚法是将离子或分子状态的药物借助物理或化学方法凝聚成微粒, 再混悬于分散介质中形成混悬剂 三 实验内容 ( 一 ) 亲水性药物混悬剂的制备及沉降容积比的测定 1. 处方表 1 不同氧化锌混悬剂的处方组成处方组成 氧化锌 (g) 甘油 (ml) 3.0 甲基纤维素 (g) 0.1 西黄蓍胶 (g) 0.1 蒸馏水加至 (ml) 制法上表中的 4 个处方均采用加液研磨制备 (1) 处方 1 2 的配制 : 称取氧化锌细粉 ( 过 120 目筛 ) 置乳钵中, 分别加 0.3 ml 蒸馏水或甘油研磨至糊状, 再各加少量蒸馏水或余下甘油研磨均匀, 最后加蒸馏水稀释并转移至 10 ml 刻度试管中, 加蒸馏水至刻度 (2) 处方 3 的配制 : 称取甲基纤维素 0.1 g, 加入蒸馏水研成溶液后, 加入氧化锌细粉并研成糊状, 再加蒸馏水研匀, 稀释并转移至 10ml 刻度试管中, 加蒸馏水至刻度 (3) 处方 4 的配制 : 称取西黄蓍胶 0.1 g, 置乳钵中, 加乙醇几滴润湿均匀, 加少量蒸馏水研成胶浆, 加入氧化锌细粉, 以下操作同处方 3 配制 3. 沉降容积比的测定 : 将上述 4 个装有混悬剂的试管, 塞住管口, 同时振摇相同次数 ( 或时间 ) 后放置, 分别记录 min 沉降物的高度 (ml), 计算沉降容积比, 结果填入 2

6 表 2 中 ( 注 :H 0 为混悬剂的初始高度 ;H u 为沉降物的高度 ) 以沉降容积比 (H u /H 0 ) 为 纵坐标, 时间 t 为横坐标, 绘制各处方的沉降曲线 表 2 氧化锌混悬剂各处方沉降容积比比与时间的关系 处方 时间 (min) H u H u /H 0 H u H u /H 0 H u H u /H 0 H u H u /H 0 ( 二 ) 絮凝剂对混悬剂再分散性的影响 1. 处方 (1) 碱式硝酸铋 1.0 g 蒸馏水 适量共制成 10 ml (2) 碱式硝酸铋 1.0 g 1% 枸橼酸钠溶液 1.0 ml 蒸馏水适量共制成 10 ml 2. 制法 (1) 处方 (1): 取碱式硝酸铋置乳钵中, 加 0.5 ml 蒸馏水研磨, 然后分次用余下的蒸馏水转移至试管中, 加蒸馏水至 10 ml; 处方 (2): 取碱式硝酸铋置乳钵中, 加 0.5 ml 蒸馏水研磨, 然后分次用蒸馏水转移至试管中, 加蒸馏水至约 8 ml, 再加 1% 枸橼酸钠溶液 1 ml, 最后加蒸馏水至 10 ml 两处方振摇后放置 2 h (2) 首次观察试管中沉降物状态, 然后再将试管上下翻转, 观察沉降物再分散状况, 记录翻转次数与现象 3

7 ( 三 ) 疏水性药物混悬剂的制备, 比较几种润湿剂的作用 1. 处方 表 3 硫磺洗剂处方组成 处方 精致硫磺 (g) 乙醇 (ml) 2.0 甘油 (ml) 1.0 软皂液 (ml) 1 聚山梨酯 -80(g) 0.03 蒸馏水加至 (ml) 制法称取精制硫磺置乳钵中, 各处方分别按加液研磨法依次加入少量蒸馏水 乙醇 甘油 软皂液或聚山梨酯 80( 加少量蒸馏水 ) 研磨, 再向各处方中缓缓加入蒸馏水至全量 振摇, 观察硫磺微粒的混悬状态, 记录 ( 四 ) 凝聚法制备硫磺洗剂取 4% 盐酸 (W/V) 与 20% 硫代硫酸钠 (W/V) 溶液各 5 ml, 置 10 ml 具塞试管中, 振摇, 观察硫磺存在状态, 记录 四 实验指导 ( 一 ) 预习要求 1. 掌握影响混悬剂稳定性的因素 2. 了解混悬剂稳定剂的类型和常用品种 3. 熟悉混悬剂的一般制备方法 ( 二 ) 操作要点和注意事项 1. 配制氧化锌混悬剂各处方时, 加液量 研磨时间及研磨用力应尽可能一致 2. 用于测定沉降容积比的试管, 直径应一致 3. 在絮凝剂对混悬剂再分散性影响的实验中, 用上下翻转试管的方式振摇沉降物, 两 4

8 管用力要一致, 用力不要过大, 切勿横向用力振摇 五 思考题 1. 亲水性药物与疏水性药物在制备混悬剂时有什么不同? 2. 根据氧化锌混悬剂各处方沉降曲线, 比较几种助悬剂的助悬能力 3. 根据硫磺洗剂各处方的混悬情况, 讨论不同润湿剂的稳定作用 4. 根据 Stoke s 定律并结合处方分析影响混悬剂稳定性的主要因素有哪些? 应采取什么措施? 5

9 实验三乳剂的制备与评价 一 目的和要求 1. 掌握乳剂的一般制备方法 2. 比较不同乳化剂及乳化方法对乳剂分散相粒度及稳定性的影响 3. 熟悉离心分光光度法在评价乳剂物理稳定性研究中的应用 4. 熟悉乳剂类型的鉴别方法, 了解乳剂转型的条件 二 基本概念和实验原理乳剂 (emulsions) 系指互不相溶的两相液体混合, 其中一相液体以液滴状分散于另一相液体中而形成的非均相分散体系 制备时加乳化剂, 通过外力作功, 使其中一种液体以小液滴形式分散在另一种液体中 乳剂的类型有水包油 (O/W) 型和油包水 (W/O) 型等 乳剂的类型主要取决于乳化剂的性质和乳化剂的 HLB 值, 其次是形成乳化膜的牢固性 相体积比 温度 制备方法等 乳剂的制备方法主要有 :1 油中乳化剂法 ( 干胶法 ) 2 水中乳化剂法 ( 湿胶法 );3 新生皂法 ;4 机械法 ( 乳匀机 胶体磨 ) 乳剂类型的鉴别, 一般用稀释法或染色法 乳剂的分散液滴一般为 μm, 微小液滴表面积大, 表面自由能大, 因而具有热力学不稳定性, 乳剂的破坏是其必然结果, 只是方式与时间上的差异而已 乳剂的物理不稳定性表现为分散液滴可自动由小变大或分层等, 其每种形式都是乳剂稳定性发生改变的表征 本实验采用离心法加速乳剂的分层, 由于不同处方组成的乳剂在相同的离心条件下乳滴合并或分层速度不同, 因而表现出乳剂的浊度或对光的吸收程度不同, 因此, 通过测定样品被离心前后在一定波长下对光吸收大小的改变, 可计算乳剂的稳定性参数 (K e ), 用以快速比较与评价乳剂的稳定性 乳剂的稳定性参数 (K e ) 计算如下 : Ke ( A0 A) A 式中 :K e 稳定性参数 ;A 0 未离心乳剂稀释液的吸光度 ;A 离心后乳剂稀释液的吸光度 当 A 0 -A>0( 或 A 0 -A<0) 时, 分散相油滴上浮 ( 或下沉 ), 乳剂不稳定 ; 当 A 0 -A=0, 即 A 0 =A 时, 分散相基本不变化, 乳剂稳定 即 K e 值越小, 说明分散油滴在离心力作用下上浮或下沉的越少, 此乳剂越稳定 由此可见,K e 值的大小, 可用于比较乳剂的 0 0 6

10 物理稳定性, 为筛选处方及选择最佳工艺条件提供科学依据 三 实验内容 ( 一 ) 手工法制备乳剂 I. 用阿拉伯胶为乳化剂 1. 处方豆油 (ρ=0.91) 13 m1 阿拉伯胶 ( 细粉 ) 3.1 g 蒸馏水适量共制成 50 ml 2. 制法 (1) 取豆油置干燥研钵中, 加阿拉伯胶粉研磨均匀 按油 : 水 : 胶 (4:2:1) 的比例, 首次加入蒸馏水 6.5 ml, 迅速向一个方向研磨, 直至产生 劈裂 的乳化声, 即成初乳 ( 初乳稠厚 色浅 ) (2) 用蒸馏水将初乳分次转移至带刻度的烧杯或量杯中, 加水至 50 ml, 搅匀即得 3. 显微镜法测定乳滴的直径取乳剂少许置载玻片上, 加盖玻片后在显微镜下测定乳滴大小, 记录最大和最多乳滴的直径 II. 用聚山梨酯 -80 为乳化剂 1. 处方豆油 (ρ=0. 91) 6 m1 聚山梨酯 80 3 m1 蒸馏水适量共制成 50 m1 2. 制法 (1) 取聚山梨酯 80 与豆油置乳钵中, 研磨均匀, 加入蒸馏水 4 m1 研磨, 形成初乳 (2) 用蒸馏水将初乳分次转移至带刻度的烧杯中, 加水至 50 ml, 搅匀即得 (3) 镜检 记录最大和最多乳滴的直径 7

11 ( 二 ) 机械分散法制备乳剂 I. 用豆磷脂为乳化剂 1. 处方豆油 (ρ=0. 91) 1l ml 豆磷脂溶液 25 ml 蒸馏水适量共制成 100 ml 2. 制法 (1) 豆磷脂溶液的制备 : 取豆磷脂 1.1 g, 加甘油 1.8 ml 研匀, 再加少量蒸馏水研磨, 用蒸馏水稀释至 25 ml (2) 取豆油 豆磷脂溶液和蒸馏水共置组织捣碎机中, 以 8000~12000 r/min 速度匀化 2 min( 匀化 1min, 停机 1min, 再匀化 1min), 即得 (3) 镜检 : 记录最大和最多乳滴的直径 (4) 将制得的乳剂置于乳匀机中, 在 136~181 Mpa(3000~4000 lb/cm 2 ) 压力下匀化 3 次, 收集乳剂 (5) 镜检 : 记录最大和最多乳滴的直径 II. 聚山梨酯 -80 为乳化剂 1. 处方豆油 (ρ=0. 91) 11 ml 聚山梨酯 80 5 m1 蒸馏水适量共制成 100 ml 2. 制法 (1) 取聚山梨酯 80, 加适量蒸馏水搅匀, 加至组织捣碎机中, 再加入豆油及余下的蒸馏水以 8000~12000 r/min 速度搅拌 2 min, 即得 (2) 镜检 : 记录最大和最多乳滴的直径 (3) 将制得的乳剂置乳匀机中, 在 136~181 Mpa(3000~4000 lb/cm 2 ) 压力下, 乳化 3 次, 即得 (4) 镜检 : 记录最大和最多乳滴的直径 8

12 ( 三 ) 乳剂稳定性参数的测定分别取前述用组织捣碎机制备的乳剂样品 I 与样品 II, 盛于 4~6 支 1 ml 特制的离心管 ( 以 1 ml 注射器改造 ), 将其调平后, 放入离心机 调节离心机转数为 2000 r/min, 离心 15 分钟后, 取出离心管, 由底端将样品滴入小烧杯适量 ( 约 20 滴 ), 以微量取样器吸取 50.0 μl 于 25 ml 容量瓶中加水稀释至刻度, 混匀 以水为空白在 550 nm 波长下, 测定其吸光度值 (A) 同法取 50.0 μ1 原乳剂样品, 稀释 定容, 在同一波长下测定吸光度值 (A o ), 计算乳剂的稳定性参数 K e ( 四 ) 乳剂类型鉴别及转型实验 I. 类型鉴别 1. 稀释法 : 取乳剂少许, 加水稀释, 如能用水稀释的为 O/W 型, 否则为 W/O 型 2. 染色法 : 将乳剂样品涂在载玻片上, 用油溶性染料苏丹 III 以及水溶性染料亚甲蓝各染色一次, 在显微镜下观察, 苏丹 III 均匀分散的乳剂则为 W/O 型, 亚甲兰均匀分散的为 O/W 型 II. 转型实验取含有 20% 油酸的植物油 3 ml 置小烧杯中, 滴加 0.1 mol/l NaOH 溶液约 10 ml, 边加边振摇, 制成 O/W 型乳剂 取该乳剂半量, 边振摇边滴加 mol/l CaCl 2 溶液 ( 约加入 5 ml 时 ) 即形成 W/O 型乳剂 ( 五 ) 实验结果 1. 绘制显微镜下乳剂的形态图 2. 将用不同制备方法和不同乳化剂制得的乳剂其在显微镜下测定的乳滴直径填于表 1, 并对结果加以分析讨论 表 l 乳滴直径数据制备方法手工法组织捣碎机高压乳匀机乳化剂阿拉伯胶聚山梨酯 80 豆磷脂聚山梨酯 80 豆磷脂聚山梨酯 80 最大粒径 (μm) 最多粒径 (μm) 3. 将以相同制备方法和不同乳化剂制得乳剂的 K e 值填于表 2, 并评价该乳剂的物理稳定性 9

13 表 2 两种乳剂的物理稳定性参数 吸光度 (λ 550 nm ) 乳剂 Ⅰ 乳剂 Ⅱ 离心前 ( A o ) 离心后 ( A ) 稳定性参数 (K e ) 四 实验指导 ( 一 ) 预习要求 1. 了解乳剂形成的理论 2. 熟悉常用的乳化剂 3. 复习乳剂的一般制备方法 ( 二 ) 操作要点和注意事项 1. 制备初乳的乳钵应干燥, 其表面应粗糙 研磨时用力均匀, 向一个方向不停地研磨, 直至初乳形成 关键是用力, 不停歇 2. 在制备初乳时, 加入水量不足或加水过程缓慢, 则极易形成 W/O 型初乳, 此时即使加水稀释也难以转变 O/W 型 ; 若加水量过多, 水相的粘滞度降低, 以致降低油相的分散度, 使制成的乳剂大多不稳定或易破裂 3. 镜检时注意分清乳滴和气泡 五 思考题 1. 乳化剂有哪几类? 制备乳剂时应如何选择乳化剂? 2. 影响乳剂物理稳定性因素有哪些? 如何制备与评价稳定的乳剂? 10

14 实验四 5% 维生素 C 注射剂的制备及质量评价 一 目的和要求 1. 掌握注射剂的制备过程和操作要点 2. 熟悉注射剂成品质量检查的标准和方法 3. 掌握注射剂稳定化方法 4. 了解无菌与灭菌制剂生产工艺中的关键操作 二 基本概念和实验原理注射剂 (injections) 系指药物与适宜的溶剂或分散介质制成的供注入体内的溶液 乳状液或混悬液及供临用前配制或稀释成溶液或混悬液的粉末或浓溶液的无菌制剂 以溶液型注射剂制备过程为例, 其工艺流程如下 : 主药 附加剂 溶解 过滤 补加溶剂 灌装 质检 包装 成品 80% 溶剂 安瓿 检查 洗涤 干燥 注射剂的质量要求 : 无菌 无热原 可见异物和不溶性微粒检查应符合药典规定 安全性合格 ( 无毒性 溶血性和刺激性 ) 在贮存期内稳定有效,pH 值 渗透压和药物含量应符合要求 注射液的 ph 值应接近体液, 一般控制在 4~9 范围内, 特殊情况下可以适当放宽 凡大量静脉注射或滴注的输液, 应调节渗透压与血浆等渗或接近等渗 凡在水溶液中不稳定的药物常制成注射用灭菌粉末即无菌冻干粉针或无菌粉末分装粉针, 以保证注射剂在贮存期内稳定 安全 有效 三 实验内容 1. 处方维生素 C 碳酸氢钠乙二胺四乙酸二钠焦亚硫酸钠注射用水 5.0 g 约 2.4 g( 调 ph ) g 0.2 g 加至 100 ml 11

15 2. 制法 (1) 原辅料质检与投料计算供注射用的原料药与辅料必须经检验达到注射用原料标准才能使用 按处方计算投料量, 如注射剂灭菌后含量下降, 应酌情增加投料量 (2) 空安瓿的处理空安瓿在用前先用常水冲刷外壁, 然后将安瓿中灌入常水甩洗 2 次 ( 如果安瓿清洁度差, 须用 0.5% 醋酸或盐酸溶液灌满,100 加热 30 min), 再用过滤的蒸馏水或去离子水甩洗两次, 最后用澄明度合格的注射用水洗一次,120~140 烘干, 备用 (3) 注射液的配制 1) 容器处理 : 配制用的一切容器使用前要用洗涤剂或硫酸清洁液处理洗净, 临用前用新鲜注射用水荡洗或灭菌, 不得引入杂质及热原 2) 滤器等的处理垂熔玻璃滤器 : 常用的垂熔玻璃滤器有漏斗和滤球,G3 号可用于常压过滤,G4 号可用于减压或加压过滤,G6 号可用于除菌过滤 处理时可先用水反冲, 除去上次滤过留下的杂质, 沥干后用洗液 (1-2% 硝酸钠硫酸洗液 ) 浸泡处理, 用水冲洗干净, 最后用注射用水过滤, 至滤出水检查 ph 值不显酸性, 并检查澄明度至合格为止 微孔滤膜 : 常用的是由醋酸纤维素 硝酸纤维素混合酯组成的微孔滤膜 经检查合格的微孔滤膜 (0.22 μm 可用于除菌滤过 0.45 μm 可用于一般滤过 ) 浸泡于注射用水中 1 h, 煮沸 5 min, 如此反复三次 ; 或用 80 注射用水温浸 4 h 以上, 室温则需浸泡 12 h, 使滤膜中纤维充分膨胀, 增加滤膜韧性 使用时用镊子取出滤膜且使毛面向上, 平放在膜滤器的支撑网上, 平放时注意滤膜不皱摺且无刺破, 使滤膜与支撑网边缘对齐以保证无缝隙, 无泄漏现象, 装好盖后, 用注射用水过滤, 滤出水澄明度合格, 即可备用 乳胶管 : 先用水揉洗, 再用 0.5%-1% 氢氧化钠液适量, 煮沸 30 min, 洗去碱液 ; 再用 0.5%-1% 盐酸水适量, 煮沸 30 min, 用蒸馏水洗至中性, 再用注射用水煮沸即可 3) 惰性气体处理 : 因维生素 C 极易氧化, 故配制时需通惰性气体, 常用的是二氧化碳或氮 使用纯度较低的二氧化碳时依次通过分别装有浓硫酸 ( 除去水分 ) 1% 硫酸铜 ( 除去有机硫化物 ) 1% 高锰酸钾溶液 ( 除去微生物 ) 和注射用水 ( 除去可溶性杂质和二氧化硫 ) 目前生产常用的高纯氮( 含氮气 99.99%), 可不经处理, 或仅分别通过 50% 甘油 注射用水洗气瓶即可使用 二氧化碳在水中溶解度及密度都大于氮气, 故药物与二氧化碳不发生作用时通入二氧化碳比通入氮气好, 但注意二氧化碳会使药液的 ph 值下降, 要考虑到 ph 值对药物稳定性的影响, 故对酸敏感的药物不宜通二氧化碳 12

16 4) 配液 : 取注射用水 120 ml, 煮沸, 放置至室温, 或通入二氧化碳 ( 约 min) 使其饱和, 以除去溶解其中的氧气, 备用 按处方, 称取乙二胺四乙酸二钠加于处方量 80% 的注射用水中, 溶解, 加维生素 C 使溶解, 分次缓慢地加入碳酸氢钠固体, 不断搅拌至完全溶解, 继续搅拌至无气泡产生后, 加焦亚硫酸钠溶解, 加碳酸氢钠固体调节药液 ph 值至 , 最后加用二氧化碳饱和的注射用水至全量 先用 G3 垂熔玻璃漏斗预滤, 再用 0.45 μm 孔径的微孔滤膜精滤, 滤液做澄明度检查, 合格后即可灌装 (4) 灌注与熔封 1) 灌封器的处理 : 首先要检查灌注器玻璃活塞是否严密不漏水, 用洗液浸泡再分别用常水 蒸馏水抽洗灌装器直至不显酸性, 最后用注射用水抽洗至流出水澄明度检查合格, 即可用于灌装药液 2) 装量调节 : 在灌装前先调节灌注器装量, 按 中国药典 2010 版二部附录 I B 的规定, 为了保证在使用时能够满足临床剂量要求, 应适当增加装量 不同标示装量应增加的装量见表 1 表 1 注射液的装量增加装量 (ml) 增加装量 (ml) 标示装量 (ml) 标示装量 (ml) 易流动液粘稠液易流动液粘稠液 ) 熔封灯火焰调节 : 熔封时要求火焰细而有力, 燃烧完全 单焰灯在黄蓝两层火焰交界处温度最高 ; 双焰灯的两火焰应有一定夹角, 火焰交点处温度最高 4) 灌装操作 : 将过滤合格的药液, 立即灌装于 2 ml 安瓿中,2.15 ml/ 支, 通入二氧化碳于安瓿上部空间, 随灌随封 灌装时要求装量准确 药液不沾颈壁, 以免熔封时产生焦头 一般措施是使药液瓶略低于灌注器位置, 灌注针头先用硅油处理, 快拉慢压可以防止焦头 5) 熔封 : 熔封分顶封和拉封, 因顶封时可能封口不严, 近年来已不用 拉封时可将颈部置于火焰温度最高处, 掌握好安瓿在火焰中停留时间, 待玻璃完全烧红软化, 先用镊子夹住顶端慢拉, 拉细处继续在火焰上烧片刻, 再拉断, 避免出现细丝 熔封后的安瓿顶部应圆滑 无尖头或鼓泡等现象 6) 灭菌与检漏 : 灌封好的安瓿, 应及时灭菌, 小容量针剂从配制到灭菌应在 12 小时内完成, 大容量针剂应在 4 小时内灭菌 小容量针剂可采用 100 流通蒸汽灭菌 15 min 13

17 大容量针剂一般采用 115 热压灭菌 30 min 灭菌完毕立即将安瓿放入 1% 亚甲蓝或曙红溶液中, 挑出药液被染色的安瓿 将合格安瓿外表面用水洗净, 擦干, 供质量检查 3. 质量检查与评定 (1) 装量 : 按 中国药典 2010 版二部附录 I B 检查方法进行,2ml 安瓿检查 5 支, 每支装量均不得少于其标示量装量 (2) 可见异物检查 ( 澄明度 ): 按 中国药典 2010 版第二部附录 IX H 项可见异物检查法的规定检查 采用伞棚式装置 日光灯光源, 用无色透明容器包装的无色供试品溶液, 检查时被观察样品所在处的光照度应为 1000~1500 lx; 用透明塑料容器包装或用棕色透明容器包装的供试品溶液或有色供试品溶液, 被观察样品所在处的光照度应为 2000~ 3000 lx; 混悬型供试品或乳状液仅检查色块 纤毛等明显可见异物, 被观察样品所在处的光照度为 4000 lx, 检品至人眼的距离通常为 25 cm 取检品数支, 擦净安瓿外壁, 集中置于伞棚边缘处, 手持安瓿颈部轻轻旋转和翻转容器使药中可能存在的可见异物悬浮 ( 但应避免产生气泡 ), 轻轻翻摇后即用目检视药液中有无肉眼可见的玻璃屑 白点 纤维等异物, 重复 3 次, 总时限为 20 s 结果列于表 2 中 表 2 可见异物检查结果 检查总数 ( 支 ) 废品数 ( 支 ) 玻璃屑纤维白点焦头其它总数 合格数 ( 支 ) 合格率 (%) (3)pH 值测定 : 应为 按 中国药典 2010 版二部附录 VI H 检查方法进行 (4) 含量测定 : 应为标示量的 90.0%-110.0% (5) 热原 : 取本品依法检查 (2010 版 中国药典 二部附录 XI D), 剂量按家兔体重每 1kg 注射 2ml, 应符合规定 ( 此项免做 ) (6) 无菌检查 : 按 中国药典 2010 版二部附录 XI H 检查, 应符合规定 ( 此项免做 ) (7) 颜色 : 取本品, 加水稀释成每 1ml 中含维生素 C 50 mg 的溶液, 照紫外 - 可见分光光度法 (2010 版 中国药典 二部附录 IV A 项 ), 在 420 nm 的波长处测定, 吸光度不得过 0.06 四 实验指导 ( 一 ) 预习要求 1. 了解注射剂生产上常用的洁净技术 2. 了解常用滤器的特性与使用方法 14

18 3. 复习注射剂成品质量检查的标准与方法 ( 二 ) 操作要点和注意事项 1. 由于注射剂直接注入人体组织或血管, 吸收快, 作用迅速, 特别是静脉注射, 无吸收过程, 常用于抢救危重病人, 所以对注射剂的生产原料 生产工艺和质量控制的要求都极其严格 在注射剂制备过程中, 除了生产操作区符合 GMP 要求, 操作者严格遵守 GMP 规程外, 药物 附加剂及溶剂等均需符合注射用质量标准, 其处方必须采用法定处方, 其制备方法必须严格遵守拟定的产品生产工艺规程, 不得随意更改 2. 维生素 C 易氧化变色 含量下降, 尤其当金属离子 ( 特别是铜离子 ) 存在时变化更快, 同时 ph 值对其稳定性影响也较大 故在处方中加入焦亚硫酸钠作抗氧剂, 乙二胺四乙酸二钠作金属离子络合剂, 同时加入碳酸氢钠 ( 维生素 C 显强酸性, 加入碳酸氢钠使其部分中和成钠盐, 既可调节至维生素 C 较稳定的 ph 值 6.0 左右, 又可避免酸性太强, 在注射时产生疼痛 ), 并在药液内和灌封时均通 CO 2 气, 尽量避免药液与金属器具接触, 以减少氧化 3. 加入碳酸氢钠至维生素 C 溶液中时应缓慢, 以防止产生大量气泡使溶液溢出, 并应充分搅拌以避免局部碱性过强 五 思考题 1. 将质量检查各项结果进行分析讨论 2. 制备易氧化药物的注射液应注意哪些问题? 3. 用 NaHCO 3 调节维生素 C 注射液的 ph 值, 应注意什么问题? 为什么? 4. 为什么可以采用分光光度法检查颜色, 目的是什么? 15

19 实验六片剂的制备及影响片剂质量因素的考察 一 目的和要求 1. 通过片剂的制备, 熟悉湿法制粒压片的基本工艺过程 2. 掌握片剂的质量检查方法 3. 了解单冲压片机的基本构造和使用方法 二 基本概念和实验原理片剂 (tablets) 系指将药物与适宜的辅料混匀压制而成的片状固体制剂, 是现代药物制剂中应用最为广泛的剂型之一 片剂的制法分为制粒压片法 ( 干法制粒压片和湿法制粒压片 ) 直接压片法( 粉末直接压片和半干式颗粒压片法 ) 除对湿 热不稳定的药物之外, 多数药物采用湿法制粒压片 现将传统湿法制粒压片的生产工艺过程介绍如下 : 辅料 粘合剂 主药粉碎过筛混合制软材制粒 润滑剂 崩解剂 ( 外加法 ) 干燥 整粒 称重 混合压片片剂 整个流程中各工序都直接影响片剂的质量 制备片剂的药物和辅料在使用前必须经过干燥 粉碎和过筛等处理, 方可投料生产 为了保证药物和辅料的混合均匀性以及适宜的溶出速度, 药物的结晶须粉碎成细粉, 一般要求粉末细度在 100 目以上 向已混匀的粉料中加入适量的粘合剂或润湿剂, 用手工或混合机混合均匀制软材, 软材的干湿程度应适宜, 除用微机自动控制外, 也可凭经验掌握, 即以 握之成团, 轻压即散 为度 软材可通过适宜的筛网制成均匀的颗粒, 颗粒应以无长条 块状和过多的细粉为宜 过筛制得的颗粒一般要求较完整, 如果颗粒中含细粉过多, 说明粘合剂用量过少, 若呈线条状, 则说明粘合剂用量过多 这两种情况制成的颗粒烘干后, 往往出现太松或太硬的现象, 都不符合压片对颗粒的要求 制好的湿颗粒应尽快干燥, 干燥的温度由物料的性质而定, 一般为 50~60, 对湿热稳定者, 干燥温度可适当提高 湿颗粒干燥后, 需过筛整粒以便将粘结 16

20 成块的颗粒散开, 同时加入润滑剂和需外加法加入的崩解剂并与颗粒混匀 整粒用筛的孔径与制粒时所用筛孔相同或略小 单冲压片机基本结构见图 1 制成的片剂需按照 中国药典 规定的片剂质量标准进行检查 检查的项目, 除片剂的外观应完整 光洁 色泽均匀 硬度适当 含量准确外, 必须检查重量差异和崩解时限 对有些片剂产品药典还规定检查溶出度和含量均匀度, 并规定凡检查溶出度的片剂, 不再检查崩解时限, 凡检查含量均匀度的片剂, 不再检查重量差异 1. 硬度 : 片剂应有足够的强度, 以免在包装 运输等过程中破碎或被磨损, 以保证剂量准确 2. 崩解时限 : 片剂服用后, 必须破碎成小颗粒, 形成较大的比表面积, 以利于药物的溶出 崩解是溶出的前提条件 3. 溶出度 : 药物从崩解后的颗粒中溶出后才能吸收而发挥治疗作用 对于一些难溶性药物的片剂, 溶出是图 1 单冲压片机主要构造示意图吸收的限速过程 因此片剂的溶出度是体外和生产中重要的质量指标 4. 片重差异 : 片重差异, 直接影响片剂的剂量准确性 另外, 在片剂的制备过程中, 所施加的压片力不同, 所用的润滑剂 崩解剂等的种类不同, 都会对片剂的硬度或崩解时间产生影响 三 实验内容 ( 一 ) 压片力对乙酰水杨酸片剂硬度和崩解性能的影响 1. 处方 乙酰水杨酸 20 g 淀粉 2 g 枸椽酸 适量 10% 淀粉浆 适量 滑石粉 适量 压制 45 片 17

21 2. 制法 (1)10% 淀粉浆的制备 : 将 0.2 g 枸椽酸 ( 或酒石酸 ) 溶于约 20 ml 蒸馏水中, 再加入 淀粉约 2 g 分散均匀, 加热糊化, 制成 10% 淀粉浆 (2) 制颗粒 : 取处方量乙酰水杨酸与淀粉混匀, 加适量 10% 淀粉浆制软材, 过 16 目 筛制粒, 将湿颗粒于 干燥,16 目筛整粒, 称重, 加 3% 的滑石粉, 混匀 (3) 在不同压力下压片 : 将上述乙酰水杨酸颗粒分别在高 低两个不同压力下压片, 测定各压力下片剂的硬度和崩解时间, 结果记录入表 1 表 1 压片力对片剂硬度和崩解性能的影响 编号 压力 硬度 (kg) 崩解时间 (min) 平均 平均 1 2 高低 结论 ( 二 ) 崩解剂 表面活性剂对对乙酰氨基酚片剂崩解性能的影响 1. 处方对乙酰氨基酚 20 g 15% 淀粉浆适量崩解剂适量硬脂酸镁适量压制 40 片 2. 制法 (1) 聚山梨酯淀粉的制备 : 称取 0.5 g 聚山梨酯 80, 溶于 15 ml 乙醇中, 加 15 g 淀粉, 搅拌均匀, 于 70 干燥, 过 100 目筛, 备用 (2)15% 淀粉浆的制备 : 称取淀粉 3 g 于 20 ml 蒸馏水中均匀分散, 加热糊化, 即可 (3) 对乙酰氨基酚颗粒的制备 : 取对乙酰氨基酚细粉 20 g, 加入 15% 淀粉浆适量, 制成软材, 过 16 目筛制粒, 湿粒在 60 干燥, 干颗粒过 16 目筛整粒 (4) 加入不同的崩解剂或表面活性剂 : 将 (3) 中的对乙酰氨基酚干颗粒平均分为三份, 颗粒称重, 第一份中加入 6% 干淀粉 ( 干淀粉应在 105 干燥约 2 小时, 使含水量在 8~ 10% 之间 ), 第二份中加入 6% 羧甲基淀粉钠, 第三份中加入 6% 聚山梨酯淀粉, 再分别加入 1% 硬脂酸镁, 混匀, 三份颗粒在相同压力下压片, 测定三种片剂的硬度和崩解时间 18

22 表 2 崩解剂 表面活性剂对片剂崩解性能的影响 编号 结论 崩解剂 6% 干淀粉 6% 羧甲基淀粉钠 6% 聚山梨酯淀粉 硬度 (kg) 崩解时间 (min) 平均 平均 ( 三 ) 疏水性润滑剂对碳酸氢钠片剂崩解的影响 1. 处方碳酸氢钠 20 g 淀粉 2 g 10% 淀粉浆适量硬脂酸镁适量压制 40 片 2. 制法 (1)10% 淀粉浆的制备 : 称取淀粉 2 g, 加入到 20 ml 蒸馏水中均匀分散, 加热糊化, 即可 (2) 碳酸氢钠颗粒的制备 : 称取碳酸氢钠细粉 20 g 与淀粉 2 g, 混匀, 加 10% 淀粉浆适量, 制软材, 过 16 目筛制粒, 湿颗粒在 50 干燥, 干颗粒过 16 目筛整粒 (3) 加入不同比例疏水性润滑剂 : 将 (2) 中碳酸氢钠干颗粒平均分为两份, 称重, 其中一份中加入 0.6% 硬脂酸镁, 另一份加入 3% 硬脂酸镁, 混匀, 在相同压力下压片, 测定两种片剂的硬度和崩解时间 表 3 疏水性润滑剂对片剂崩解性能的影响 编号 1 2 结论 崩解剂 0.6% 硬脂酸镁 3% 硬脂酸镁 硬度 (kg) 崩解时间 (min) 平均 平均 19

23 ( 四 ) 质量检查与评定本实验检查硬度 脆碎度 崩解时限和片重差异 1. 硬度 : 采用破碎强度法, 采用片剂四用测定仪进行测定 方法如下 : 将药片径向固定在两横杆之间, 其中的活动柱杆借助弹簧沿水平方向对片剂径向加压, 当片剂破碎时, 活动柱杆的弹簧停止加压, 仪器刻度盘所指示的压力即为片的硬度 测定 3~6 片, 取平均值 结果列于表 1 表 2 2. 脆碎度 : 取药片, 按 中国药典 2010 版二部附录 X G 项下检查法, 置片剂四用测定仪脆碎度检查槽内检查, 记录检查结果 检查方法及规定如下 : 片重为 0.65 g 或以下者取若干片, 使其总重量约为 6.5 g; 片重大于 0.65 g 者取 10 片 用吹风机吹去脱落的粉末, 精密称重, 置圆筒中, 转动 100 次 取出, 同法除去粉末, 精密称重, 减失重量不得过 1%, 且不得检出断裂 龟裂及粉碎的片 3. 崩解时限 : 应用片剂四用测定仪进行测定 采用吊篮法, 方法如下 : 取药片 6 片, 分别置于吊篮的玻璃管中, 每管各加一片, 开动仪器使吊篮浸入 37±1.0 的水中, 按一定的频率 (30-32 次 /min) 和幅度 (55±2 mm) 往复运动 从片剂置于玻璃管开始计时, 至片剂破碎并全部固体粒子都通过玻璃管底部的筛网 (Φ2 mm) 为止, 该时间即为该片剂的崩解时间, 应符合规定崩解时限 ( 一般压制片为 15 min) 如有 1 片不符合要求, 应另取 6 片复试, 均应符合规定 结果列于表 1 表 2 4. 片重差异 : 取药片 20 片, 精密称定总重量, 求得平均片重后, 再分别精密称定各片的重量 每片重量与平均片重相比较 ( 凡无含量测定的片剂, 每片重量应与标示片重比较 ) 超出重量差异限度 ( 见表 4) 的药片不得多于 2 片, 并不得有 1 片超出限度 1 倍 表 4 重量差异限度平均片重重量差异限度 0.30 g 以下 ±7.5% 0.30 g 或 0.30 g 以上 ±5% 四 实验指导 ( 一 ) 预习要求 20

24 1. 复习湿法制粒压片的方法 2. 复习片重的计算方法 3. 熟悉片剂常用辅料的性质 ( 二 ) 操作要点和注意事项 1. 乙酰水杨酸在湿热条件下易水解成水杨酸和醋酸, 增加对胃肠粘膜的刺激, 严重者可发生溃疡和出血等症状 故在淀粉浆中加入枸橼酸或酒石酸, 以形成酸性环境, 减少乙酰水杨酸的降解 在实际生产中, 亦可采用直接粉末压片以完全避免湿热的影响 2. 乙酰水杨酸在润湿状态下遇铁器易变为淡红色 因此, 宜尽量避免铁器, 如过筛时宜用尼龙筛网, 并迅速干燥 在干燥时温度不宜过高, 以避免药物加速水解 3. 在实验室中配制淀粉浆 : 可用直火加热, 也可以水浴加热 若用直火时, 需不停搅拌, 防止焦化而使片面产生黑点 加浆的温度, 以温浆为宜, 温度太高不利药物稳定, 太低不宜分散均匀 五 思考题 1. 分析并讨论实验结果, 总结出影响片剂崩解的因素及原理 2. 制备乙酰水杨酸片时, 如何避免乙酰水杨酸分解? 应选择何种润滑剂, 可不可以用硬酯酸镁代替? 3. 片剂的崩解时限合格, 是否其溶出度一定合格? 为什么? 4. 片剂的制备过程中, 物料必须具备的三大要素是什么? 为什么? 21

25 实验七片剂薄膜包衣及质量评价 一 目的和要求 1. 熟悉用锅包衣法制备包薄膜衣片的技术 2. 了解包衣材料的配制方法 二 基本概念和实验原理为了掩盖药物的不良味道 防潮 遮光 提高药物稳定 定位释放 控制药物释放速度 避免药物在胃中破坏和改善片剂外观等原因, 在片剂表面上包一适宜材料的衣层, 即包衣片 基本的包衣工艺有 1 糖包衣 ;2 薄膜包衣 ;3 压制包衣 其中前两种为最常用的方法 糖衣片近年来在新产品中应用的愈来愈少, 已有的糖衣片也在逐渐转制为薄膜衣片 薄膜衣片可分为普通薄膜衣片 肠溶薄膜衣片及缓控释包衣片 ( 胃肠不溶薄膜包衣片 ) 等 用于包衣的片剂称素片 素片应有足够的硬度, 且具有良好的崩解性能, 以免在包衣时因磨擦而使素片松裂或粉尘过多, 影响包衣片的光洁, 或因包衣造成片剂崩解迟缓 常用的薄膜衣包衣工艺有有机溶剂包衣法和聚合物水分散体包衣法 采用有机溶剂包衣时包衣材料的用量较少, 表面光滑 均匀, 但必须严格控制有机溶剂的残留量 聚合物的水分散体包衣法不使用有机溶剂, 安全, 因此日趋普及 制成的薄膜衣有胃溶的, 有肠溶的, 还有胃肠均不溶的 包衣材料的主要成分有高分子包衣材料 增塑剂 释放速度调节剂 增光剂 色素 固体物料 溶剂等 包薄膜衣的特点 : 包衣材料用量少, 片增重小, 易操作, 自动化程度高, 可控性强, 生产周期短 包衣的方法有滚转包衣法 流化床包衣法及压制包衣法等 薄膜包衣常用的方法有滚转包衣法 高效包衣机法, 糖衣锅法属滚转包衣法 用糖衣锅包薄膜衣, 需在锅内设置几块挡板, 以增高素片的流动状态, 使素片更好地形成散落状态 用糖衣锅包薄膜衣的大致工艺过程如下 : 1. 锅内增加 3~5 块挡板 ; 2. 素片温度控制在 40~60 ; 3. 锅转动后将膜衣液喷入片床内, 直至达到要求厚度即可出锅干燥 包薄膜衣应注意几个重要环节 1. 热风交换率要好 ; 22

26 2. 喷液输出量要调节好 : 3. 喷枪的雾化效果要好 ; 4. 素片翻滚速度可调 上述因素都会因设备不同而需要改变或因热风交换 雾化压力 输液速度等变化而变化, 但总的原则是 : 雾化液滴对素片的附着力要大于素片与锅壁 素片与素片之间的附着力, 才能在素片的表面形成完整的膜衣层 影响包衣的主要因素有 : 素片硬度 ; 片面吸水能力及吸湿后膨胀程度 ; 片表面疏水性 ; 热风交换率 ; 雾化压力及喷枪距片床的距离 ; 输液速度等 三 实验内容 ( 一 ) 膜衣塑性比较取 4% 羟丙基甲基纤维素 (80% 乙醇 )10 滴置玻璃板上 (A), 再取 4% 羟丙基甲基纤维素 (80% 乙醇 ) 内含蓖麻油 0.5% 的膜衣液 10 滴置玻璃板上 (B) A B 两板平行震荡相同次数 (5-10 次 ), 热风吹干, 取下膜折叠, 观察二者的脆碎程度 ( 二 ) 包薄膜衣 (1) 彩色包衣液配制 1 包衣处方 HPMC 2 g 95% 乙醇 50 g H 2 O 40 ml PEG g 蓖麻油 1 ml 滑石粉 3 g 钛白粉 2 g 色素 0.5 g 共约 100ml 2 包衣液配制方法将 HPMC 粉末 2 g 用 95% 乙醇 50 g 溶解, 以不结块为宜 ; 将 1g PEG4000 用 40 ml 蒸馏水溶解, 搅拌均匀, 不要产生气泡 将两溶液混合均匀, 再加入处方量的蓖麻油 滑石粉 钛白粉和色素, 继续搅拌 30 min 23

27 (2) 包衣操作取素片约 200 g 置糖衣锅内, 锅内置三块挡板 吹热风使素片温度达到 40-60, 调节气压, 使喷枪喷出雾状 再调好输液速度即可开启糖衣锅,( 每分钟 30~50 转 ), 喷入包衣液直至达到片面色泽均匀一致, 停喷包衣液, 视片面粘连程度决定是否继续转动糖衣锅, 取出片剂,60 干燥 ( 三 ) 质量检查与评定 (1) 外观检查 : 主要检查片剂的外形是否圆整 表面是否有缺陷 ( 碎片粘连和剥落 起皱和桔皮膜 起泡和桥接 色斑和起霜等 ) 表面粗糙程度和光洁度 (2) 确定包衣片的重量和硬度等, 并与素片进行比较 (3) 比较素片与包衣片的崩解时限和溶出度 (4) 被复强度试验 ( 抗热试验 ): 将包衣片 50 片置 250W 的红外灯下 15 cm 处受热 4 小时, 观察并记录片面变化情况 注 : 合格品片面应无变化 (5) 耐湿耐水性试验 : 将包衣片置于恒温 恒湿装置中经过一定时间, 以片剂增重为指标, 表示耐湿耐水性 表 1 包衣前后片剂的质量检查结果编号外观片重 /mg 硬度 /Kg 崩解时限 /min 溶出度 /% 抗热试验耐湿试验包衣前包衣后比较结果 四 实验指导 ( 一 ) 预习要求 1. 复习片剂包衣的工艺 2. 复习薄膜包衣常用的材料 3. 了解包衣的方法与设备 ( 二 ) 操作要点和注意事项 1. 要求素片较硬 耐磨, 包衣前筛去细粉, 以使片面光洁 2. 包衣操作时, 喷速与吹风速度的选择原则是, 使片面略带润湿, 又要防止片面粘连 温度不宜过高或过低 温度过高则干燥太快, 成膜不均匀 ; 温度太低则干燥太慢, 造成粘连 24

28 3. 操作中防止产生大量气泡 4. 如果有粒状物, 可用 150~200 目筛过滤 5. 如果稠度大, 可用约 60%~70% 乙醇稀释后再使用 ( 一般薄膜衣溶液中含固体量 3%~8% 不等 ) 6. 使用过程中, 应保持搅拌, 防止产生气泡 五 思考题 1. 薄膜包衣材料应具备哪些条件, 在包衣过程中哪些因素对包衣质量影响较大, 如何控制 调整? 2. 什么情况下需要包衣? 25

29 实验九软膏剂的制备及不同基质对药物释放的影响 一 目的要求 1. 掌握不同类型软膏基质的制备方法 2. 根据药物和基质的性质, 了解药物加入基质中的方法 3. 掌握软膏中药物释放的测定方法, 比较不同基质对药物释放的影响 二 基本概念和实验原理软膏剂 (ointments) 系指药物与油脂性或水溶性基质均匀混合制成的半固体外用制剂 它可在局部发挥疗效或起保护和润滑皮肤的作用, 药物也可透过皮肤吸收进入体循环, 产生全身治疗作用 在软膏剂中, 基质占软膏的绝大部分 基质不仅是软膏的赋型剂, 同时也是药物载体, 对软膏剂的质量 药物的释放以及药物的吸收都有重要影响 常用的软膏基质可分为三类 :1. 油脂性基质 : 此类基质包括烃类 类脂及动植物油脂 此类基质中除植物油和蜂蜡加热熔合制成的单软膏和凡士林可单独用作软膏基质外, 其它油脂性成分如液体石蜡 羊毛脂等多用于调节软膏稠度, 以得到适宜的软膏基质 2. 乳剂型基质 : 系由半固体或固体油溶性成份 水溶性成份和乳化剂制备而成 根据使用不同的乳化剂, 可制得 O/W 型和 W/O 型软膏 用乳剂型基质制备的软膏剂也称乳膏剂 3. 水溶性及亲水性基质 : 水溶性基质是由天然或合成的高分子水溶性物质所组成 常用的有甘油明胶 纤维素衍生物及聚乙二醇 聚丙烯酸等 软膏剂可根据药物与基质性质的不同采用研和法 熔合法或乳化法制备 1. 由半固体和液体成分组成的软膏基质常用研和法制备, 即先取药物与部分基质或适宜液体研磨成细腻糊状, 再递加其它基质研匀 ( 取少许涂于手上无砂砾感 ) 2. 若软膏基质由熔点不同的成分组成, 在常温下不能均匀混合时, 采用熔合法制备, 即基质中可溶性的药物可直接加到熔化的基质中, 不溶性药物可粉筛入熔化或软化的基质中, 搅匀至冷凝即得 3. 乳剂型软膏剂采用乳化法制备, 即将油脂性或油溶性成分一起加热至 80 左右成油溶液, 另将水溶性成分溶于水中, 一起加热至较油相成分相同或略高温度, 将水相在不断搅拌下慢慢加入油相中, 继续搅拌至冷凝, 水 油均不溶解的成分最后加入, 搅匀, 必要时再加香精, 搅匀即得 对于软膏基质的质量评价, 除应检查其熔点 酸碱度 粘度 稳定性和刺激性外, 其 26

30 释药性能也是重要检查项目, 软膏剂中药物的释放及透皮吸收主要依赖于药物本身的性质, 但基质在一定程度上影响药物的这些特性 根据制备工艺条件的不同, 各种基质对药物的释放产生影响而得到不同结果, 但在多数情况下, 水溶性基质和乳剂型基质中药物释放最快, 烃类基质中的释放最差 考察不同基质对软膏剂中药物释放性能的影响, 可通过测定软膏剂中药物透过无屏障性半透膜到释放介质的速度来评定, 也可采用凝胶扩散法和离体皮肤法来评定 软膏剂中药物的释放一般遵循 Higuchi 公式, 即药物的累积释放量 M 与时间 t 的平方根成正比, 即 M = kt 1/2 总之, 药物的理化性质与基质组成会影响药物释放速度 三 实验内容 ( 一 ) 单软膏的制备 1. 处方蜂蜡 6.6 g 植物油 15 ml(6.7 g) 2. 制法取处方量蜂蜡于蒸发皿中, 置水浴上加热, 熔化后, 缓缓加入植物油, 搅拌均匀, 自水浴上取下, 不断搅拌至冷凝, 即得 ( 二 )O/W 乳剂型软膏基质的制备 1. 处方硬脂醇 1.8 g 白凡士林 2.0 g 液体石蜡 1.3 ml 月桂醇硫酸钠 0.2 g 尼泊金乙酯 0.02 g 甘油 1 g(5 d) 蒸馏水适量 ( 约 15 ml) 制成 20 g 2. 制法取油相成分 ( 硬脂醇 白凡士林和液体石蜡 ) 于蒸发皿中, 置水浴上加热至 80 使其 27

31 熔化 ; 取水相成分 ( 月桂醇硫酸钠, 尼泊金乙酯, 甘油和计算量蒸馏水 ) 于蒸发皿 ( 或小 烧杯 ) 中加热至 80, 在搅拌下将水相成分以细流状加入油相成分中, 在水浴上继续保持 恒温并搅拌几分钟, 然后在室温下继续搅拌至冷凝, 即得 O/W 型乳剂型基质 ( 三 ) W/O 乳剂型软膏基质的制备 1. 处方 单硬脂酸甘油酯 0.85 g 蜂蜡 0.25 g 石蜡 3.75 g 硬脂酸 g 液体石蜡 24.3 ml 白凡士林 3.35 g 司盘 g 氢氧化钙 0.05 g 尼泊金乙酯 0.1 g 蒸馏水 20.0 g 香精 适量 2. 制法 将单硬脂酸甘油酯 蜂蜡 石蜡 硬脂酸置蒸发皿中, 于水浴上加热熔化, 再加入白 凡士林 液状石蜡 司盘 80, 加热至 80 ; 另将氢氧化钙 尼泊金乙酯溶于蒸馏水中加热 至 80, 在搅拌下将水相成分以细流状加入油相成分中, 在水浴上继续保持恒温并搅拌几 分钟, 然后在室温下继续搅拌至冷凝, 再加香精, 搅匀即得 ( 四 ) 水溶性软膏基质的制备 1. 处方甘油 24.4 g 水 20 g 1% 苯甲酸钠水溶液 1 ml 卡波姆 g 三乙醇胺 0.25 g 2. 制法 (1)1% 苯甲酸钠水溶液的配制 : 称取苯甲酸钠 1 g, 用蒸馏水定容至 100 ml, 即得 28

32 (2) 水溶性软膏基质的制备 : 在搅拌下, 将卡波姆 940 缓慢加入水中, 搅拌至卡波姆 940 全部分散 加甘油, 搅拌均匀后, 加三乙醇胺水溶液, 加热至胶体沸腾, 以驱尽空气 泡, 煮沸 10 分钟, 冷却至室温, 加入苯甲酸钠水溶液, 搅拌均匀, 即得 ( 五 )5% 双氯酚酸钾软膏剂的制备 1. 制法 (1) 双氯酚酸钾单软膏剂的制备 : 称取双氯酚酸钾粉末 ( 过 100 目筛, 下同 )0.5 g 置于研钵中, 分次加入单软膏基质 9.5 g, 研匀, 即得 (2) 双氯酚酸钾凡士林软膏剂的制备 : 称取凡士林 9.5 g 于蒸发皿中, 置水浴上加热熔化, 搅拌下加入双氯酚酸钾粉末 0.5 g, 搅匀, 冷却凝固, 即得 (3) 双氯酚酸钾 O/W 乳剂型软膏剂的制备 : 称取双氯酚酸钾粉末 0.5 g 置于研钵中, 分次加入 O/W 型乳剂基质 9.5 g, 研匀, 即得 (4) 双氯酚酸钾 W/O 乳剂型软膏剂的制备 : 称取双氯酚酸钾粉末 0.5 g 置于研钵中, 分次加入 W/O 型乳剂基质 9.5 g, 研匀, 即得 (5) 双氯酚酸钾水溶性软膏剂的制备 : 称取双氯酚酸钾粉末 0.5 g 置于研钵中, 分次加入水溶性基质 9.5 g, 研匀, 即得 ( 六 ) 不同基质的软膏剂中药物释放速度的比较操作步骤 : (1) 取已制备的 5 种双氯酚酸钾软膏剂, 分别填装于内径约为 2 cm 的短玻璃管内 ( 管高约为 2 cm), 装填量约为 1.5 cm 高, 管口用玻璃纸包扎, 使管口的玻璃纸无皱褶且与软膏紧贴无气泡 (2) 将上述短玻璃管按封贴玻璃纸面向下置于装有 100 ml 37 蒸馏水的大试管中 ( 大试管置于 37 ±1 的恒温水浴中 ), 软膏的下面浸于水面下约 1 mm( 定面积释放 ), 分别于 min 取样, 每次取出 5 ml( 每次取前应搅拌均匀 ), 并同时补加 5 ml 蒸馏水, 按 (3) 中含量测定方法测定释放液中双氯酚酸钾含量 (3) 含量测定精密称取经 105 干燥至恒重的双氯酚酸钾对照品适量, 加水溶解并定量稀释成每 1ml 中含 μg 的溶液, 照分光光度法 ( 中国药典 2010 版二部附录 ⅣA), 在 275nm 的波长处测定吸光度, 以浓度为横坐标, 吸光度为纵坐标进行线性回归, 得标准曲线 另将各时间样品液 5 ml 置 50 ml 量瓶中, 加水稀释至刻度, 摇匀, 同法测定吸光度, 将吸光度代入标准曲线中计算, 得出累积释放量 记录不同时间药物的释放 29

33 量, 列于表 1 中 以释药量对时间作图, 得不同基质双氯酚酸钾软膏的释放曲线 表 1 不同软膏基质双氯酚酸钾的释放量 基质时间 (min) 凡士林 单软膏 O/W 乳剂型基质 W/O 乳剂型基质 水溶性基质 四 实验指导 ( 一 ) 预习要求 1. 熟悉常用软膏基质的主要性质 2. 了解软膏剂体外释药实验的方法 3. 了解软膏剂的一般制法 ( 二 ) 操作要点和注意事项 1. 制备单软膏时, 加入植物油后应不断搅拌混匀, 再从水浴取下搅拌至冷凝, 否则容易分层, 混合不匀 2. 本实验制备 W/O 型或 O/W 型乳剂基质时, 油相和水相应分别于水浴上加热并保持温度在 80, 然后将水相缓缓加入油相溶液中, 边加边按顺向搅拌 若不是沿一个方向搅拌, 往往难以制得合格的乳剂基质 3. 卡波姆在搅拌时容易产生气泡, 所以胶体加热时间一般应以除尽气泡为度 4. 在测定释放样品时, 如果吸光度超过 0.8, 则用水适当稀释后, 再行测定, 测定后要将稀释的倍数代入结果中 接收池中释放液注意要加满, 不应有气泡 五 思考题 1. 软膏剂制备过程中药物如何加入? 2. 将制得的五种双氯酚酸钾软膏涂布在自已的皮肤上, 评价是否细腻, 比较五种软膏的粘稠性与涂布性, 讨论五种软膏中各组分的作用 30

34 3. 由不同基质的双氯酚酸钾软膏的释放曲线, 讨论五种基质中药物释放速度的差异 4. 影响药物从软膏基质中释放的因素有哪些? 31

35 实验十栓剂的制备 一 目的和要求 1. 了解各类栓剂基质的特点和适用情况 2. 掌握热熔法制栓剂的特点及方法 3. 掌握置换价测定的方法和意义 二 基本概念和实验原理栓剂 (suppositories) 系指药物与适宜基质制成供人体腔道给药的固状制剂 常用的有肛门栓和阴道栓 栓剂中的药物与基质应混合均匀, 栓剂无刺激性, 外型完整光滑, 塞入腔道内应能熔化 软化或溶解并和分泌液混合释放出药物, 产生局部或全身作用, 并应有适宜的硬度, 以免在包装和贮存中变形 栓剂由药物和基质两部分组成, 常用基质有油脂性基质和水溶性基质两类 栓剂的制备方法主要有冷压法 ( 挤压法 ) 和热熔法 其中热熔法最为常用 为保证在栓剂处方的设计和制备中确定基质用量, 保证剂量准确, 常需预先测定药物置换价 置换价 (displacement value, DV) 是药物的重量与同体积栓剂基质重量的比值 通常情况下栓剂模型容积一般是固定的, 但对于不同处方, 它会因基质与药物密度的不同而可容纳不同的重量 根据置换价我们可对药物置换基质的重量进行计算 当药物与基质的密度相差较大或处方中药物含量较高时, 测定其置换价更有实际意义 同一种药物针对不同基质有不同的置换价, 所以, 谈及药物的置换价时应指明基质类别 三 实验内容 ( 一 ) 置换价的测定以阿斯匹林为模型药物, 用半合成脂肪酸酯为基质进行置换价测定 1. 制备纯基质栓称取 10 g 半合成脂肪酸酯置蒸发皿中, 于水浴上加热至 2/3 基质熔化时停止加热, 搅拌使其全熔, 待基质呈粘稠状态时, 倒入涂有润滑剂 ( 软皂乙醇液 ) 的栓剂模型中至稍有溢出, 冷却凝固后, 用刀削去溢出部分, 脱模, 得完整纯基质栓数枚, 称重, 每粒平均重 G(g) 32

36 2. 制备含药栓称取基质 6 g 置蒸发皿中, 于水浴上加热 当 2/3 基质熔化时, 停止加热, 搅拌使全熔 ; 另取研细的阿司匹林粉末 ( 过 100 目筛 )3 g, 分次加入熔化的基质中, 搅拌均匀, 待此混合物呈粘稠状时注模 ( 为了保证所测得置换价的准确性, 制备含药栓时应和纯基质栓采用同一模型 ), 得完整含药栓数枚, 称重, 每枚含药栓的平均重量为 M(g) 每枚含药栓含药量 W(g) W 等于 M 与含药百分量的乘积 3. 置换价的计算利用置换价公式算出阿司匹林的置换价 DV: DV W G ( M W ) 再用测得置换价计算出制备这种含药栓需要的基质重量 B: y B ( G ) n DV 式中,y 为处方中每枚栓含有药物的剂量 ;n 为拟制备栓剂的枚数 4. 根据置换价计算下一处方所需基质的用量 阿司匹林 半合成脂肪酸酯 制成圆椎形肛门栓 3.0 g 适量 5 枚 ( 二 ) 甘油栓的制备 1. 处方甘油 10 g 氢氧化钠 0.24 g 硬脂酸 1.6 g 蒸馏水 1.0 ml 制成圆椎形肛门栓 5 枚 2. 制法取氢氧化钠溶于蒸馏水, 再加到含甘油 ( 相对密度 1.25) 的蒸发皿中混合, 置水浴上加热至 100, 缓缓加入硬脂酸细粉, 随加随搅拌, 保温至溶液澄明, 趁热注入涂过润滑剂 ( 液体石蜡 ) 的栓模中至稍有溢出, 待冷, 用刀削去溢出部分, 脱模, 得甘油栓 3. 质量检查 (1) 栓剂的外观 ( 包括外表和内部 ) 33

37 (2) 栓剂重量差异检查参照 中国药典 2010 版二部附录 I D 项进行 : 取供试品 10 粒, 精密称定总重量, 求得平均粒重后, 再分别精密称定各粒的重量, 每粒重量与平均粒重相比较, 按表 1 的规定, 超出重量差异限度的药粒不得多于 1 粒, 并不得超出限度 1 倍 表 1 栓剂重量差异限度表平均粒重重量差异限度 1 g 及 1 g 以下 ±10% 1 g 以上至 3 g ±7.5% 3 g 以上 ±5% (3) 栓剂的融变时限参照参照 中国药典 2010 版二部附录 X B 融变时限检查法栓剂项进行 取供试品 3 粒, 在室温放置 1h 后, 分别放在栓剂融变实验仪的 3 个金属架的下层圆板上, 装入各自的套筒内, 并用挂钩固定 除另有规定外, 将上述装置分别垂直浸入盛有不少于 4L 的 37.0 ±0.5 水的容器中, 其上端位置应在水面下 90 mm 处 容器中装一转动器, 每隔 10 min 在溶液中翻转该装置 1 次 结果判断 : 除另有规定外, 脂肪性基质的栓剂 3 粒均应在 30 min 内全部熔化 软化或触压无硬心 ; 水溶性基质的栓剂 3 粒均应在 60 min 内全部溶解 如有 1 粒不符合规定, 应另取 3 粒复试, 均应符合规定 ( 三 ) 醋酸氯己定栓的制备 1. 处方 (1) 含药栓处方醋酸氯己定 ( 过 100 目筛 ) 聚山梨酯 80 冰片醑甘油明胶蒸馏水制成鸭舌形阴道栓 (2) 纯基质栓处方甘油明胶蒸馏水制成鸭舌形阴道栓 g 0.5 g(ρ:1.06~1.09) 1.25 ml 16.0 g(ρ=1.25) 5 g 加到 25 g 5 枚 16.0 g(ρ=1.25) 5 g 加到 23.5 g 5 枚 34

38 2. 制法 (1) 冰片醑的配制 : 称取冰片 0.5 g, 用 95% 乙醇稀释至 25 ml 即得 (2) 甘油明胶溶液的制备 : 称取处方量的明胶, 置称重的蒸发器中 ( 连同使用的玻棒一起称重 ), 加入相当明胶量 1.5~2 倍的蒸馏水浸泡, 使明胶溶胀变软, 于 100 水浴上加热, 使充分融熔制得明胶溶液 再加入处方量的甘油 ( 称重 ), 轻搅使之混匀, 继续加热搅拌, 使水份蒸发至处方量为止 ( 称重净重约为 23.5 g) (3) 含药栓的制备 : 将醋酸氯己定 聚山梨酯 80 冰片醑混合均匀, 然后在搅拌下将其加入上述的甘油明胶溶液中, 搅匀, 趁热灌入已涂有润滑剂 ( 液体石蜡 ) 的栓模中至稍有溢出, 冷却, 削去模口溢出部分, 脱模, 得醋酸氯己定栓数枚 (4) 纯基质栓的制备 : 将 (2) 中溶液趁热灌入已涂有润滑剂 ( 液体石蜡 ) 的栓模中至稍有溢出, 冷却, 削去模口溢出部分, 脱模, 得纯基质栓数枚 (5) 计算醋酸氯己定对该基质的置换价 四 实验指导 ( 一 ) 预习要求 1. 掌握置换价的计算方法 2. 掌握甘油明胶溶液制备时的注意点 ( 二 ) 操作要点和注意事项 1. 半合成脂肪酸酯为油溶性基质, 随着温度变化, 其体积增大, 灌模时应注意混合物的温度, 温度太高, 冷却后栓剂易发生中空和顶端凹陷 另外, 若药物混杂在基质中, 灌模温度太高则药物易于沉降, 影响含量均匀度 故最好在混合物粘稠度较大时灌模, 灌至模口稍有溢出为度, 且要一次完成 灌好的模型应置适宜的温度下冷却一定时间, 冷却的温度不足或时间短, 常发生粘模 ; 相反, 冷却温度过低或时间过长, 则又可发生栓剂破碎 2. 甘油明胶由明胶 甘油和水三者按一定比例组成 明胶需先用水浸泡使之膨胀变软, 再加热时才容易溶解 否则, 无限溶胀时间延长, 且含有一些未溶解的明胶小块或硬粒 甘油明胶多用作阴道栓剂基质, 具有弹性, 在体温时不溶解, 但能缓缓溶于体液中, 释出药物 其溶解速度与明胶 甘油和水三者比例有关, 甘油和水的含量高时则容易溶解 实 35

39 验中需控制甘油明胶基质中水份含量, 必须蒸发至处方量, 水量过多栓剂太软 ; 相反水量过少, 栓剂太硬 在上述整个操作过程中, 均应不断轻轻搅拌, 切勿剧烈搅拌, 以免胶液中产生气泡, 使栓剂中含有气泡, 影响产品质量 3. 为了使栓剂冷却后易从模型中推出, 栓模内须预先涂润滑剂 润滑剂有两类 :(1) 油溶性基质的栓剂选用软肥皂 甘油各 1 份及 95% 乙醇 5 份的混合液 (2) 水溶性基质的栓剂则用油类为润滑剂, 如液体石蜡 植物油等 五 思考题 1. 热熔法制备阿司匹林栓应注意什么问题? 2. 结合实验说明计算置换价有何意义? 3. 甘油栓的制备原理是什么? 操作时有哪些注意点? 4. 甘油明胶作为栓剂基质的特点是什么? 哪些药物可以选用甘油明胶基质, 哪些药物不适于此基质? 36

40 实验十五固体分散体的制备 一 目的和要求 1. 掌握共沉淀法及溶剂 - 熔融法制备固体分散体的制备工艺 2. 初步掌握固体分散体形成的验证方法 二 基本概念和实验原理固体分散体 (solid dispersion) 系指药物高度分散在适宜的载体材料中形成的一种固态物质, 又称固体分散物 固体分散体的主要特点是利用不同性质的载体使药物高度分散以达到不同要求的用药目的 : 提高难溶性药物的溶解度和溶出速率, 从而提高药物的生物利用度 ; 或控制药物在小肠释放等 固体分散体作为一种制剂的中间体, 可以根据需要进一步制成胶囊剂 片剂 软膏剂 栓剂以及注射剂等 固体分散体所用载体材料可分为水溶性载体材料 难溶性载体材料 肠溶性载体材料三大类 载体材料在使用时可根据制备目的选择单一载体或混合载体 若以增加难溶性药物的溶解度和溶出速率为目的时, 一般可选择水溶性载体材料, 如聚乙二醇类, 聚维酮类等 固体分散体的类型有 : 固体溶液 简单低共熔混合物 共沉淀物 固体分散体制备方法主要有熔融法 溶剂法 机械分散法等 固体分散体中药物分散状态可呈现分子状态 无定形态 微晶状态 物相的鉴别方法有溶解度及溶出速率法 热分析法 粉末 X 射线衍射法 红外光谱法等, 必要时可同时采用几种方法进行鉴别 固体分散体的速释原理是药物分散状态, 即药物所形成的高能态可增加药物溶出度, 同时载体材料对药物的溶出具有促进作用 三 实验内容 ( 一 ) 布洛芬 -PVP 共沉淀物的制备 1. 处方布洛芬 0.5 g PVPk g 2. 制法 (1) 布洛芬 -PVP 共沉淀物的制备 : 取 PVPk g, 置蒸发皿内, 加入无水乙醇 10 ml, 在 80~90 水浴上加热溶解, 加入布洛芬 0.5 g, 搅拌, 使溶解, 在搅拌下蒸去溶剂, 取下蒸发皿, 置氯化钙干燥器内干燥 粉碎, 过 80 目筛, 即得 37

41 (2) 布洛芬 -PVP 物理混合物的制备 : 取 PVPk g, 布洛芬 0.5 g, 置蒸发皿内混匀, 过 80 目筛, 即得 3. 共沉淀物物相鉴别精密称取相当于 20 mg 布洛芬的固体分散体于 100 ml 的容量瓶中, 用无水乙醇定容 ; 取 1 ml 上述溶液于 25 ml 容量瓶中, 用溶出介质定容 将该溶液于 222 nm 处测定吸光度, 计算固体分散体中布洛芬的含量 试验样品 : 布洛芬 200 mg, 相当于布洛芬 200 mg 的布洛芬 -PVP 共沉淀物 (1:5) 及物理混合物 除溶出速度测定外,(2) (3) (4) 项另增加 PVP 样品 (1) 溶出速度测定 1 溶出介质 (ph 7.2 磷酸盐缓冲液 ) 的配制 : 取 0.2 mol/l 磷酸二氢钾溶液 250 ml, 0.2 mol/l NaOH 溶液 175 ml, 加新煮沸过的冷蒸馏水定容至 1000 ml, 摇匀, 即得 2 标准曲线的制作 : 精密称取干燥至恒重的布洛芬约 20 mg, 置 100 ml 量瓶中, 加无水乙醇溶解 定容, 摇匀 ; 吸取溶液 ml 分别置 100 ml 量瓶中, 加溶出介质定容 ; 以溶出介质为空白, 在 222 nm 的波长处测定吸光度, 以吸光度对浓度回归, 得标准曲线方程 3 测定 : 按 中国药典 2010 版附录 X C 溶出度测定方法第二法 转速 75 r/min, 溶出介质为 ph7.2 磷酸盐缓冲液 900ml, 温度 37±0.5 当介质温度恒定为 37±0.5, 加入精密称取的样品, 分别在 min 取样, 每次取样 4 ml( 同时补入溶出介质 4 ml), 过滤, 弃去初滤液, 取续滤液 0.4 ml, 置 10 ml 量瓶中, 加上述缓冲液定容, 摇匀, 在 222 nm 的波长处测定吸光度, 按标准曲线方程计算不同时间内药物溶出的累积百分量 根据溶出速度结果绘制溶出曲线 (2) 差热分析 (DTA): 工作条件, 气氛为氮气或空气, 升温速度 10 /min, 扫描范围 (3)X- 射线粉末衍射 : 工作条件,CuKa 石墨单色器衍射单色化, 高压 30kV, 管流 50 ma, 扫描速度 2 /min (4) 熔点测定 : 按 中国药典 2010 版二部附录 VI C 第一法测定 ( 二 ) 葛根大豆甙元 -Poloxamer188 固体分散体的制备 1. 处方葛根大豆甙元 0.1 g Poloxamer g 38

42 2. 制法 (1) 葛根大豆甙元 - Poloxamer188 固体分散体的制备 : 取 Poloxamer g, 置蒸发皿内, 在 60 水浴上加热熔融, 另取葛根大豆甙元 0.1 g, 溶于适量的 N,N- 二甲基甲酰胺中, 与上述熔融的 Poloxamer188 混匀, 在搅拌下蒸去溶剂, 迅速冷凝固化, 置氯化钙干燥器内干燥 粉碎, 过 80 目筛, 即得 (2) 葛根大豆甙元 - Poloxamer188 物理混合物的制备 : 取 Poloxamer g, 葛根大豆甙元 0.1 g, 置蒸发皿内混匀, 即得 3. 固体分散物物相鉴别试验样品 : 葛根大豆甙元 5 mg, 相当于葛根大豆甙元 5 mg 的葛根大豆甙元 - Poloxamer188 固体分散物 (1:10) 及物理混合物 除溶出速度测定外,(2) (3) (4) 项另增加 Poloxamer188 样品 (1) 溶出速度测定 1 溶出介质的配制 : 按 中国药典 2010 版二部附录 X A 人工胃液方法配制 2 标准曲线的制作 : 精密称取干燥恒重的葛根大豆甙元约 10 mg, 置 100 ml 量瓶中, 加无水乙醇溶解 定容, 摇匀 ; 吸取溶液 ml 分别置 10 ml 量瓶中, 溶出介质定容 ; 以溶出介质为空白, 在 250 nm 的波长处测定吸光度, 以吸光度对浓度回归, 得标准曲线方程 3 测定 : 按 中国药典 2010 版附录 X C 溶出度测定方法第二法 转速 75 r/min, 溶出介质为人工胃液 900 ml, 温度 37±0.5 当介质温度恒定为 37±0.5, 加入精密称取的样品, 分别在 min 取样, 每次取样 5 ml( 同时补入溶出介质 5 ml), 过滤, 弃去初滤液, 取续滤液 3 ml, 置 10 ml 量瓶中, 加溶出介质定容, 摇匀, 在 222 nm 的波长处测定吸光度, 按标准曲线方程计算不同时间累积溶出百分量 根据溶出速度结果绘制溶出曲线 (2) 差热分析 (DTA): 工作条件, 气氛为氮气, 升温速度 10 /min, 扫描范围 (3)X- 射线粉末衍射 : 工作条件,CuKa 石墨单色器衍射单色化, 高压 30 kv, 管流 50 ma, 扫描速度 2 /min (4) 熔点测定 : 按 中国药典 2010 版二部附录 VI C 第一法测定 四 实验指导 ( 一 ) 预习要求 1. 掌握影响固体药物溶解度和溶出速度的因素 2. 复习溶出度测定操作规程及注意事项 39

43 ( 二 ) 操作要点和注意事项 1. 制备布洛芬 -PVP 共沉淀物时, 溶剂蒸发速度是影响共沉淀物均匀性及防止药物结晶析出的重要因素, 常在搅拌下快速蒸发, 均匀性好, 结晶不易析出, 否则共沉淀物均匀性差, 如果有药物结晶析出, 将影响所制备固体分散物的溶出度 2. 制备葛根大豆甙元 - Poloxamer188 固体分散物时, 溶剂蒸发速度及熔融的固体分散物的冷凝速度是影响固体分散物均匀性的重要因素, 常在搅拌下快速蒸发, 均匀性好, 否则固体分散物均匀性差 3. 本实验中, 共沉淀物及固体分散物蒸去溶剂后, 倾入不锈钢板上 ( 下面放冰块 ) 迅速冷凝固化, 有利于提高其溶出速度 五 思考题 1. 固体分散体的类型有哪些? 2. 固体分散体的制备工艺有哪些? 各种方法在什么情况下适合选用 3. 根据绘制的溶出曲线, 比较原料 物理混合物 固体分散体的溶出度差异 4. 根据差热分析 X- 射线粉末衍射 熔点测定结果分析药物的分散状态 40

44 实验十七微型胶囊的制备 一 目的和要求 1. 掌握复凝聚法制备微囊的基本原理和方法 2. 掌握复凝聚法中影响微囊成型的因素 二 基本概念和实验原理 微囊 (microcapsules) 系指天然或合成的高分子材料 ( 囊材 ) 作为囊膜 (membrane wall), 将固态药物或液态药物包裹而成的微型胶囊 微囊的制备方法很多, 可分为物理化学法 物理机械法及化学法 根据囊心物和囊材 的性质 微囊要求的粒径 释放性能以及靶向特点, 可选择不同的微囊制备方法 在实验 室中制备微囊常选用物理化学法中的凝聚法 凝聚法又分为单凝聚法和复凝聚法 后者系 指使用两种带相反电荷的高分子材料作为复合囊材, 在一定条件下交联且与囊心物凝聚成 囊的方法, 其常用明胶 阿拉伯胶为囊材 本实验制备微囊的机理如下 : 明胶为蛋白质, 在水溶液中, 分子链上含有 -NH 2 和 -COOH 及其相应解离基团 -NH 3 + 与 -COO -, 但含有 -NH 3 + 与 -COO - 离子多少, 受介质 ph 值的影响 当 ph 值低于明胶的等电点时,-NH 3 + 数目多于 -COO -, 溶液荷正电 ; 当溶液 ph 高于明胶等 电时,-COO - 数目多于 -NH 3 +, 溶液荷负电 明胶溶液在 ph4.0 左右时, 其正电荷最多 阿 拉伯胶为多聚糖, 在水溶液中, 分子链上含有 -COOH 和 -COO -, 具有负电荷 因此在明胶 与阿拉伯胶混合的水溶液中, 调节 ph 约为 4.0 时, 明胶和阿拉伯胶因荷电相反而中和形成 复合物, 其溶解度降低, 自体系中凝聚成囊析出, 当溶液中存在药物时, 就包在药物粒子 周围形成微囊 此时囊膜较松软, 当降低温度使达到胶凝点以下时, 则逐渐胶凝 硬化, 再加入固化剂甲醛, 甲醛与明胶产生胺醛缩合反应, 明胶分子交联成网状结构, 保持微囊 的形状, 成为不可逆的微囊 ; 加 20%NaOH 调节介质 ph 至 8~9, 有利于胺醛缩合反应进行 完全, 其反应表示如下 : R-NH 2 + H 2 N-R + HCHO ph8-9 R-NH-CH 2 -HN-R + H 2 O 41

45 三 实验内容与操作 ( 一 ) 复凝聚法制备液体石蜡微囊 1. 处方液体石蜡 (ρ=0.91) 6 ml 阿拉伯胶 5 g 明胶 5 g 37% 甲醛溶液 2.5 ml 10% 醋酸溶液适量 20%NaOH 溶液适量蒸馏水适量 2. 制法 (1) 明胶溶液的配制 : 称取明胶 5 g, 用蒸馏水适量浸泡溶胀后, 加热溶解, 加蒸馏水至 100 ml, 搅匀,50 保温备用 (2) 阿拉伯胶溶液的配制 : 取蒸馏水 80 ml 置小烧杯中, 加阿拉伯胶粉末 5 g, 加热至 80 左右, 轻轻搅拌使溶解, 加蒸馏水至 100 ml (3) 液体石蜡乳剂的制备 : 取液体石蜡 6 ml 与 5% 阿拉伯胶溶液 100 ml 置组织捣碎机中, 乳化 10 秒钟, 即得乳剂 (4) 乳剂镜检 : 取液体石蜡乳剂一滴, 置载玻片上镜检, 绘制乳剂形态图 (5) 混合 : 将液体石蜡乳转入 1000 ml 烧杯中, 置 50~55 水浴上加 5% 明胶溶液 100ml, 轻轻搅拌使混合均匀 (6) 微囊的制备 : 在不断搅拌下, 滴加 10% 醋酸溶液于混合液中, 调节 ph 至 3.8~4.0( 广泛试纸 ) (7) 微囊的固化 : 在不断搅拌下, 将约 30 蒸馏水 400 ml 加至微囊液中, 将含微囊液的烧杯自 50~55 水浴中取下, 不停搅拌, 自然冷却, 待温度为 32~35 时, 加入冰块, 继续搅拌至温度为 10 以下, 加入 37% 甲醛溶液 2.5 ml( 用蒸馏水稀释一倍 ), 搅拌 15min, 再用 20%NaOH 溶液调其 ph8~9, 继续搅拌 20 min, 观察至析出为止, 静置待微囊沉降 (8) 镜检 : 显微镜下观察微囊的形态并绘制微囊形态图, 记录微囊的大小 ( 最大和最多粒径 ) (9) 过滤 ( 或甩干 ): 待微囊沉降完全, 倾去上清液, 过滤 ( 或甩干 ), 微囊用蒸馏水洗至无甲醛味, 抽干, 即得 42

46 四 实验指导 ( 一 ) 预习要求 1. 复习微囊的一般制法, 特别是复凝聚法制备微囊的原理和操作注意点 2. 复习复凝聚法制备微囊时影响其粒子大小的因素 3. 了解微囊的应用和特点 ( 二 ) 操作要点和注意事项 1. 操作过程所用的水均应蒸馏水或去离子水, 以免干扰凝聚 2. 复凝聚法制备微囊, 用 10% 醋酸溶液调节 ph 是操作关键 调 ph 时,10% 醋酸溶液应逐渐滴入, 并且一定要把溶液搅拌均匀, 使整个溶液的 ph 为 3.8~ 制备微囊的过程中, 始终伴随搅拌, 但搅拌速度以产生泡沫最少为度, 必要时加入几滴戊醇或辛醇消泡, 可提高收率 4. 当降温接近凝固点时, 微囊容易粘连, 故应不断搅拌并用适量水稀释 5. 用 20% 氢氧化钠液调节 ph 至 8~9, 可增强甲醛与明胶的交联作用, 使凝胶的网状结构孔隙缩小而提高热稳定性 五 思考题 1. 绘制乳剂和微囊在显微镜下的形态图, 并说明两者之间的差别 2. 记录微囊的直径 ( 最大粒径和最多粒径 ) 3. 影响复凝聚法制备微囊的关键因素是什么? 4. 在操作时应如何控制使微囊形状好, 收率高? 43

47 实验十八 小丸的制备 一 目的和要求 1. 掌握小丸的制备方法 2. 熟悉小丸质量的评价方法 3. 熟悉小丸的常用辅料及其作用 二 基本概念和实验原理 44 ( 一 ) 小丸的定义 特点与类型 小丸 (pellets) 系指将药物与适宜的辅料均匀混合, 选用适宜的黏合剂或润湿剂以适当 方法制成的球状或类球状固体颗粒 小丸粒径一般为 mm 可根据不同需要制成快 速 慢速或控制释放药物的小丸, 一般填充于硬胶囊中, 袋装或压制成片剂后服用 小丸的释药特点由药物与辅料的性质和制备工艺决定 通过调节处方组成, 制得不同 释放速率的小丸, 一般有速释 缓释与控释 3 种 速释小丸在 3min 内释药一般不低于 70%, 缓释和控释小丸在服用后缓慢释放和控速释放, 避免胃内局部浓度过高, 可减少药物对胃 肠道的刺激性 小丸根据其处方组成 结构与释药机制, 可分为包衣小丸与骨架型小丸两 大类 此外, 包衣小丸也是控制释放的有效手段, 将几种不同释放速率的小丸按需要装入 胶囊, 达到要求的药效 它是多单元给药系统, 通过包衣层厚度或分组包衣来达到缓控释 制剂的要求, 尤其是它以每个小丸为 1 个释放单元, 个别单元不规则的释药对 1 个剂量的 释药行为影响不大, 控制释药重现性好, 减少药物突释, 对于缓控释制剂采用小丸很有意 义 ( 二 ) 小丸的辅料 分骨架型辅料和衣膜型辅料 亲水性骨架材料有蔗糖 乳糖 淀粉 微晶纤维素 甲基纤维素 聚乙烯醇 聚维酮 羟丙纤维素 羟丙甲纤维素等 等 疏水性骨架材料有单硬脂酸酯 硬脂酸 硬脂醇 蜂蜡 巴西棕榈蜡及脂肪酸甘油酯 常用的衣膜材料有醋酸纤维素 乙基纤维素 聚丙烯酸树脂 虫胶 纤维醋法酯 羟 丙甲纤维素酞酸酯 包衣材料用增塑剂有甘油 丙二醇 聚乙二醇 枸橼酸三乙酯 邻苯 二甲酸二甲酯 癸二酸二丁酯 甘油三醋酸酯 蓖麻油等 有时根据释放度的需要加入一 定量的致孔剂 润滑剂和表面活性剂等 制备小丸或包衣时常用的抗黏剂有滑石粉 微粉

48 硅胶 硬脂酸镁等 ( 三 ) 小丸的制备方法目前小丸的常用制备法主要有以下两种, 根据需要选择适宜制丸方法 1. 挤出 - 滚圆法该工艺包括 3 个单元操作, 首先将药物和辅料制成湿软材, 再将软材移入挤压机械中挤压成高密度的条状物, 最后在离心球形化机械中将条状物打碎成颗粒并滚圆成丸 常用以制备空白小丸或含药小丸 挤出 - 滚圆法的成丸机制有两种 :1 如图 1(a) 所示, 从挤压机出来的条状物料被整齐地切断成圆柱形, 其高度与圆柱直径大体相等或略长一些 在滚圆过程中圆柱体的棱角被墩圆, 再被墩成哑铃形, 然后墩成椭球形, 在滚制过程中被墩成圆球 ;2 如图 1(b) 所示, 条状物被切断后形成圆柱形, 被墩弯, 并在扭力和剪切力的作用下, 中部变细 破断, 再被墩圆成圆球 影响因素包括挤出速度 筛板孔径 滚圆速度 滚圆时间和处方因素 图 1 用挤出滚圆法制备小丸的机制 2. 粉末层积法将丸核加入于旋转容器 ( 离心造粒机 ) 中旋转, 并把黏合剂溶液喷在丸核上, 随后加入药物和赋形剂的混合粉末, 使粉末黏附在丸核表面, 随着黏合液和粉末的不断喷入, 更多的粉末黏附在丸核上, 直至制得适宜大小的小丸 由于旋转容器的离心作用和从器壁上的抛射作用, 使丸核逐步被粉末层积的同时被麻花样轨迹滚圆成小丸 这里供粉及供浆之比例以及速度关系到最终产品微丸的质量 这种方法常用于空白小丸 含药小丸及包衣小丸的制备 三 实验内容 ( 一 ) 挤出 - 滚圆法制备空白小丸 1. 处方 45

49 微晶纤维素 60.0 g 蒸馏水 60 ml 制成小丸 2. 制法 (l) 按处方量称取微晶纤维素 60.0 g, 分次加入蒸馏水约 60 ml, 混匀 (2) 挤出滚圆机调节 : 从控制面板上设置挤出速度 l00r/min(50 挡位 ) 和滚圆速度约 300r/min(25 挡位 ) (3) 将混合物料投入于加样漏斗, 启动挤出机制成圆柱形物料 (4) 将所制得的圆柱形物料加入于滚圆机的转盘中, 打开进气开关, 启动滚圆机, 制得球形微丸, 放料 (5) 关闭机器, 及时进行清洗 3. 质量检查小丸性状的检查 : 脆碎度 休止角 粒径分布 圆整度与有无缺陷 4. 注意事项 (l) 水作为黏合剂, 用量多少直接关系微丸质量的好坏, 若加入太多, 则滚圆时易黏合形成大球, 影响粒径均一度 ; 若加入太少, 则所得微丸成哑铃形, 影响所制微丸的圆整度 (2) 注意操作安全 应穿戴工作衣帽操作, 避免手触及旋转的滚圆机转盘, 以免划伤 ( 二 ) 盐酸小檗碱骨架型小丸的制备 ( 挤出一滚圆法 ) 1. 处方盐酸小檗碱 3.0 g 微晶纤维素 15 g 乳糖 12 g 蒸馏水适量制成小丸 2. 制备 (1) 按处方量称取盐酸小檗碱 微晶纤维素和乳糖, 混匀后加入蒸馏水适量, 混匀, 备用 (2) 调节挤出机和滚圆机的控制面板, 设置挤出速率 (45r/min) 和滚圆速率 (850r/min) (3) 将混合物料投入加样漏斗, 启动挤出机, 制成圆柱形物料, 备用 (4) 将制得的圆柱形物料加入滚筒中, 启动滚圆机, 滚圆 10 min 即得球形小丸 46

50 3. 质量检查小丸性状的检查 : 脆碎度 休止角 粒径分布 圆整度与有无缺陷 4. 注意事项 (1) 用蒸馏水制备软材, 便于准确记录所用润湿剂用量 选用量筒装蒸馏水, 用滴管适当滴入蒸馏水, 用力揉捏软材, 增加其塑性, 以 团而不黏, 裂而不散 为度 (2) 以挤出机挤出的速度应适当, 挤出速率过快会导致条状湿料直径不相等 ; 挤出速率过慢, 耗时长, 前后含水量有差异, 会影响小丸的滚圆结果 (3) 软材质量好, 直接滚圆效果好 否则滚圆阶段可有较多粉粒出现 这时可用蒸馏水增加润湿性, 注意用量, 过多则易黏合呈大球, 影响小丸的圆整度与均一性 (4) 操作完毕要及时清洁设备与仪器 ( 三 ) 粉末层积法制备空白微丸 1. 处方微晶纤维素丸核 (26-32 目 ) 适量微晶纤维素适量蒸馏水 ( 浆液 ) 适量制成小丸 2. 制法将离心包衣造粒机的空气压缩机及其他电源接通, 调整压力至 0.8MPa 以上, 调整主机转速 r/min, 喷气压力 0.5 MPa, 喷气流量 10 L/min, 鼓风流量 (20 20)L/min, 鼓风温度为室温, 喷浆泵转速 15-25r/min, 供粉速度 r/min 调整如上各参数后, 关闭各控制开关 ( 风机开关要一直打开 ), 调整搅拌刀至合适位置, 取蒸馏水适量置浆液输入缸内, 微晶纤维素细粉 500 g 置加料斗内, 称取空白丸核 (26-32 目的微晶纤维素丸核 )200 g 置主机料室内, 开动开关开始层积制丸, 待微晶纤维素细粉加完后, 停止喷浆和供粉, 主机继续转动 1 min, 打开出料口, 取出成品微丸, 烘干, 筛分 3. 质量检查 (1) 小丸与丸核的性状对比 : 光泽度 圆整度与有无缺陷 (2) 小丸性状的检查 : 脆碎度 休止角 粒径分布 4. 注意事项以上是常规操作过程, 喷气压力通常调节到 0.5 MPa 或更小, 以不吹散粒子为标准 主机转速大概显示为 200 r/min 左右, 喷浆和供粉的速度根据粒子的干湿程度及粉尘的多少来调节, 即干了多喷, 湿了少喷 机器的开关机顺序 : 最好按照风机 - 主机的顺序开机, 关机 47

51 顺序相反, 在清洗仪器时风机务必打开, 否则水会漏入机器内部 在开机试验前, 可先调 试喷枪的雾化效果, 使其喷雾的扇面较大即可 四 实验结果与讨论 1. 记录所制备的三种小丸的性状 外观 脆碎度 休止角 粒径分布 圆整度 2. 描述盐酸小檗碱骨架型小丸的性状, 并讨论影响其释放性能的主要因素 3. 讨论两种制备小丸的方法及其异同 五 思考题 1. 小丸有哪些制备方法? 小丸在应用上有何特点? 2. 制备盐酸小檗碱骨架型小丸的关键有哪些? 设想不同的挤出速率与滚圆速率对盐酸小檗碱骨架型小丸的性状有何影响? 48

52 实验十九脂质体的制备及包封率的测定 一 目的和要求 1. 掌握薄膜分散法制备脂质体的工艺 2. 掌握用阳离子交换树脂法测定脂质体包封率的方法 3. 熟悉脂质体形成原理 作用特点 4. 了解 主动载药 与 被动载药 的概念 二 基本概念和实验原理 脂质体 (liposomes) 是将药物包封于类脂质双分子层薄膜中所制成的超微球形载体制 剂, 一般由磷脂和胆固醇构成 常见的磷脂分子结构中有两条较长的疏水烃链和一个亲水 基团, 将适量的磷脂加至水或缓冲溶液中, 磷脂分子定向排列, 其亲水基团面向两侧的水 相, 疏水的烃链彼此相对缔和为双分子层, 构成脂质体 用于制备脂质体的磷脂有天然磷 脂, 如豆磷脂 卵磷脂等 ; 合成磷脂, 如二棕榈酰磷脂酰胆碱, 二硬脂酰磷脂酰胆碱等 常用的附加剂为胆固醇 胆固醇也是两亲性物质, 与磷脂混合使用, 可制得稳定的脂质体, 其作用是调节双分子层的流动性, 降低脂质体膜的通透性 其它附加剂有十八胺 磷脂酸 等, 这两种附加剂能改变脂质体表面的电荷性质, 从而改变脂质体的包封率和体内外其它 参数 脂质体可分为三类 : 小单室 ( 层 ) 脂质体, 最小粒径约 20 nm, 经超声波处理的脂质 体, 绝大多数为小单室脂质体 ; 大单室 ( 层 ) 脂质体, 粒径一般大于 100 nm; 多室 ( 层 ) 脂质体, 粒径一般为 100 nm~5 μm, 显微镜下可观察到尤如洋葱断面或人手指纹的多层结 构 ; 大单室脂质体, 粒径一般大于 100 nm, 用乙醚注入法制备的脂质体多为这一类 脂质体的制法有多种, 根据药物的性质或需要进行选择 1. 薄膜分散法 : 这是一种经 典的制备方法, 它可形成多室脂质体, 经超声处理后得到小单室脂质体 此法优点是操作 简便, 脂质体结构典型, 但包封率较低 2. 过膜挤压法 : 将磷脂等脂质材料溶于适量的氯 仿或其他有机溶剂, 脂溶性药物可加在有机溶剂中, 减压蒸去溶剂, 使脂质在器壁形成薄 膜, 加入含药水性缓冲液, 振摇, 形成大多层脂质体, 将脂质体粗分散液依次通过不同孔 径大小的聚碳酸酯膜, 挤压, 即可得到粒径均一的小粒径的脂质体 3. 逆相蒸发法 : 系指 磷脂等膜材溶于有机溶剂, 如氯仿中, 再按一定比例与含药的缓冲液混合 乳化, 然后减 压蒸去有机溶剂即可形成脂质体 该法可用于包裹基因和耐受有机溶剂的物质 在制备含 药脂质体时, 根据药物装载的机理不同, 可分为主动载药与被动载药两大类 所谓主动载 药, 即通过内外水相的不同离子或化合物梯度进行载药, 主要有 K + -Na + 梯度和 H + 梯度 ( 即 49

53 ph 梯度 ) 等 传统上, 人们采用最多的方法是被动载药 所谓被动载药, 即首先将药物溶于水相或有机相 ( 脂溶性药物 ) 中, 然后按所选择的脂质体制备方法制备含药脂质体, 其共同特点是 : 在装载过程中脂质体的内外水相或双分子层膜上的药物浓度基本一致, 决定其包封率的因素为药物与磷脂膜的作用力 膜材的组成 脂质体的内水相体积 脂质体数目及药脂比 ( 药物与磷脂膜材比 ) 等 对于两亲性药物, 其油水分配系数受介质的 ph 值和离子强度的影响较大, 包封条件的较小变化, 就有可能使包封率有较大的变化 评价脂质体质量的指标有粒径 粒径分布和包封率等 其中脂质体的包封率是衡量脂质体内在质量的一个重要指标 常见的包封率测定方法有透析法 柱色谱分离法 离心法和鱼精蛋白凝聚法等 本文采用阳离子交换树脂法测定包封率 阳离子交换树脂法是利用离子交换作用, 将荷正电的未包进脂质体中的药物 ( 即游离药物 ), 如本实验中的游离的小檗碱, 被阳离子交换树脂吸附除去 而包封于脂质体中的药物 ( 如小檗碱 ), 由于脂质体荷负电, 不能被阳离子交换树脂吸附, 从而达到分离目的, 用以测定包封率 三 实验内容 ( 一 ) 空白脂质体的制备 1. 处方 注射用豆磷脂 0.45 g 胆固醇 g 无水乙醇 5 ml 磷酸盐缓冲液适量制成 15 ml 脂质体 2. 制法 (1) 磷酸盐缓冲液 (PBS) 的配制 : 称取磷酸氢二钠 (Na 2 HPO 4 12H 2 O)0.37g 与磷酸二氢钠 (NaH 2 PO 4 2H 2 O)2.0 g, 加蒸馏水适量, 溶解并稀释至 1000 ml(ph 约为 5.7) (2) 称取处方量磷脂 胆固醇于 50 ml 小烧杯中, 加无水乙醇 5 ml, 置于 60~65 水浴中, 搅拌使溶解, 旋转该小烧杯使磷脂的乙醇液在杯壁上成膜, 用吸耳球轻吹风, 将乙醇挥去 (3) 另取磷酸盐缓冲液 20 ml 于小烧杯中, 同置于 60~65 水浴中, 保温, 待用 (4) 取预热的磷酸盐缓冲液 15 ml, 加至含有磷脂和胆固醇脂质膜的小烧杯中,60~ 65 水浴中搅拌水化 10 min 随后将小烧杯置于磁力搅拌器上, 室温下搅拌 30 min, 如果溶液体积减少, 可补加水至 15 ml, 混匀, 即得 50

54 (5) 取样, 在油镜下观察脂质体的形态, 画出所见脂质体结构, 记录最多和最大的脂 质体的粒径 ( 二 ) 被动载药法制备盐酸小檗碱脂质体 1. 处方注射用豆磷脂 0.3 g 胆固醇 0.05 g 无水乙醇 5 ml 盐酸小檗碱溶液 (1mg/ml) 15 ml 制成 15 ml 脂质体 2. 制备 (1) 盐酸小檗碱溶液的配制 : 称取适量的盐酸小檗碱溶液, 用磷酸盐缓冲液配成 1mg/ml 和 3 mg/ml 的两种浓度的溶液 (2) 盐酸小檗碱脂质体的制备 : 按处方量称取豆磷脂 胆固醇置 50 ml 的小烧杯中, 加无水乙醇 5 ml, 余下操作除将磷酸盐缓冲液换成盐酸小檗碱溶液外, 同 空白脂质体制备, 即为被动载药法制备的小檗碱脂质体 ( 三 ) 主动载药法制备盐酸小檗碱脂质体 1. 柠檬酸缓冲液 : 称取柠檬酸 31.5 g 和柠檬酸钠 21 g 置于 1000 ml 量瓶中, 加水溶解并稀释至 1000 ml, 混匀, 即得 2.NaHCO 3 溶液 : 称取 NaHCO g, 置于 1000 ml 量瓶中, 加水溶解并稀释至 1000 ml, 混匀, 即得 3. 空白脂质体制备 : 称取磷脂 0.45 g 和胆固醇 g, 置于 50 ml 烧杯中, 加 5ml 无水乙醇, 于 60~65 水浴中溶解并挥散乙醇, 于烧杯上成膜后, 加入同温的柠檬酸缓冲液 15 ml,60~65 水浴中搅拌水化 10 分钟, 随后将烧杯取出, 置于电磁搅拌器上, 在室温下搅拌 30 分钟, 充分水化, 补加蒸馏水至 15 ml 4. 主动载药 : 准确量取空白脂质体 2 ml 药液(3 mg/ml)1 ml NaHCO 3 溶液 0.5 ml, 在振摇下依次加于 10 ml 西林瓶中, 混匀,70 水浴中保温 20 分钟 ( 振摇 30 秒, 间歇 30 秒 ), 随后 51

55 立即用冷水降温, 即得 ( 四 ) 盐酸小檗碱脂质体包封率的测定 1. 阳离子交换树脂分离柱的制备 : 称取已处理好的阳离子交换树脂适量, 装于底部已垫有少量玻璃棉的 5 ml 注射器筒中, 加至 4ml, 加入 PBS 水化阳离子交换树脂, 自然滴尽 PBS, 即得 2. 柱分离度的考察 : (1) 阳离子交换树脂柱的预饱和过程 : 用 0.2 ml 空白脂质体加于阳离子交换树脂柱上, 用 PBS 冲洗至滴出液澄清 (2) 盐酸小檗碱与空白脂质体混合液的制备 : 精密量取 3 mg/ml 盐酸小檗碱溶液 0.1ml, 置小试管中, 加入 0.2 ml 空白脂质体, 混匀, 即得 (3) 对照品溶液的制备 : 取 (2) 中制得的混合液 0.1 ml 置 10 ml 量瓶中, 加入 95% 乙醇 6 ml, 振摇使之溶解, 再加 PBS 至刻度, 摇匀, 过滤, 弃去初滤液, 取续滤液 4ml 于 10 ml 量瓶中, 加 PBS 至刻度, 摇匀, 得对照品溶液 (4) 样品溶液的制备 : 取 (2) 中制得的混合液 0.1 ml 至分离柱顶部, 待柱顶部的液体消失后, 放置 5 分钟, 仔细加入 PBS( 注意不能将柱顶部离子交换树脂冲散 ), 进行洗脱 ( 约需 2~3 ml PBS), 同时收集洗脱液于 10 ml 量瓶中, 加入 95% 乙醇 6 ml, 振摇使之溶解, 再加 PBS 至刻度, 摇匀, 过滤, 弃去初滤液, 取续滤液为样品溶液 (5) 空白溶媒的配制 : 取乙醇 (95%)6 ml, 置 10 ml 量瓶中, 加 PBS 至刻度, 摇匀, 即得 (6) 吸光度的测定 : 以空白溶媒为对照, 在 345 nm 波长处分别测定样品溶液与对照品溶液的吸光度, 计算柱分离度 分离度要求大于 0.95 A样柱分离度 =1- A 对 2.5 式中 A 样 - 样品溶液的吸光度,A 对 - 对照品溶液的吸光度,2.5- 对照品溶液的稀释倍数 3. 包封率的测定精密量取盐酸小檗碱脂质体 0.1 ml 两份, 一份置 10 ml 量瓶中, 按 柱分离度考察 项下 (3) 进行操作, 另一份置于分离柱顶部, 按 柱分离度考察 项下 (4) 进行操作, 所得溶液于 345nm 波长处测定吸光度, 按下式计算包封率 AL 包封率 (%) = 100% A 2.5 T 52

56 式中 A L - 通过分离柱后收集脂质体中盐酸小檗碱的吸光度,A T - 盐酸小檗碱脂质体中总 的药物吸光度 四 实验指导 ( 一 ) 预习要求 了解脂质体制备方法和常用材料的性能 ( 二 ) 操作要点和注意事项 1. 制备空白脂质体时, 要注意 : (1) 在整个实验过程中禁止用火 (2) 磷脂和胆固醇的乙醇溶液应澄清, 不能在水浴中放置过长时间 (3) 磷脂 胆固醇形成的薄膜应尽量薄 (4)60~65 水浴中搅拌水化 10min 时, 一定要充分保证所有脂质水化, 不得存在脂质块 2. 主动载药法制备盐酸小檗碱脂质体实验时, 应注意 : (1) 主动载药过程中, 加药顺序一定不能颠倒, 加三种液体时, 随加随摇, 确保混合均匀, 保证体系中各部位的梯度一致 (2) 水浴保温时, 也应注意随时轻摇, 只需保证体系均匀即可, 无需剧烈摇 (3) 用冷水冷却过程中, 也应轻摇 五 思考题 1. 在显微镜下观察脂质体, 从形态上看, 脂质体 乳剂 及 微囊 有何差别 2. 讨论以脂质体作为药物载体的机理和特点 讨论影响脂质体形成的因素 3. 以包封率为指标, 对 主动载药 与 被动载药 法制备的盐酸小檗碱脂质体评价方法的优劣 4. 如何提高脂质体对药物的包封率? 5. 包封率测定方法如何选择? 本文所用的方法与 分子筛法 超速离心法 相比, 有何优缺点? 6. 讨论本实验方案还有哪些方面有待改进, 并设计一个有关脂质体的实验方案 53

57 实验二十茶碱缓释制剂的制备及释放度测定 一 目的和要求 1. 通过制备茶碱缓释制剂, 熟悉缓释制剂的基本原理与设计方法 2. 掌握缓释制剂释放度的测定方法及要求 二 基本概念和实验原理缓释制剂 (sustained-release preparation) 系指用药后能在机体内缓慢释放药物, 使药物在较长时间内维持有效血药浓度的制剂, 药物的释放多数情况下符合一级或 Higuchi 动力学过程 缓释制剂的种类很多, 按给药途径有口服 肌注 透皮及腔道用制剂等 口服缓释制剂在人体胃肠道的转运时间一般可维持 8~12 小时, 根据药物用量及药物的吸收代谢性质, 其作用时间可达 12~24 小时, 患者口服 1~2 次 缓释制剂改善药物的有效性和安全性, 可减少普通剂型给药后血药浓度的峰谷比, 从而具有降低药物的毒副作用发生率和强度及减少给药频率等优点 茶碱在临床上主要用于平喘, 因其治疗范围窄 (10~20 ng/ml), 制成缓释制剂可以减少血药浓度的波动, 避免毒性作用, 并减少服药次数 本实验制备一种茶碱溶蚀性骨架胶囊剂和水凝胶骨架片, 通过延缓药物的溶解和扩散达到缓释的目的 缓释制剂的释放度测定 : 所用仪器和方法同一般制剂的溶出度测定 一般采用 3 个取样点作为药物释放度的标准 第一个点为开始 0.5~2 小时的取样时间点, 主要考察制剂有无突释效应 第 2 个点为中间时间取样点, 用于确定释药特性, 最后的取样时间点, 用于考察释药是否完全 本实验用市售茶碱片进行溶出度测定 而用自制缓释制剂进行释放度测定 将两者的结果进行比较, 以评价缓释作用 54

58 三 实验内容 ( 一 ) 茶碱缓释胶囊剂的制备 1. 处方 表 1 茶碱缓释胶囊剂的组成 处方 茶碱 (g) 聚乙二醇 (g) 十八醇 (g) (4000) (4000) (1500) (4000)5 1 (6000) 制法按表 1 处方制备茶碱缓释制剂, 操作如下 : (1) 称取 PEG 置 50 ml 烧杯中, 70 水浴中熔化 在搅拌下将茶碱药粉 ( 过 100 目筛 ) 加入熔化的 PEG 中, 不断搅拌, 使药物分散均匀, 然后加入十八醇, 并使其与茶碱及 PEG 混匀 (2) 将上述熔融物趁热滴入 2 号胶囊中, 灌满为止, 室温自然冷却, 待凝固后戴上胶囊帽即得, 每一个胶囊含茶碱 100 mg ( 二 ) 茶碱缓释片剂 1. 处方 表 2 茶碱缓释片的组成 处方 1 片量 (mg) 50 片量 (g) 茶碱 羟丙基甲基纤维素 (E-50) 40 2 乳糖 % 乙醇溶液 适量 适量 硬脂酸镁 制法 (1) 将茶碱 乳糖粉碎过 100 目筛 (2) 羟丙基甲基纤维素过 80 目筛 (3)80% 乙醇溶液的配制 : 取 95% 乙醇溶液加蒸馏水稀释, 即得 55

59 (4) 缓释片的制备 : 按处方量称取茶碱 羟丙基甲基纤维素及乳糖于乳钵中, 将其混 匀, 加 80% 乙醇溶液制软材, 过 18 目筛制粒, 湿颗粒在 50~60 下干燥, 干颗粒经 16 目 筛整粒, 称重加硬脂酸镁, 混匀, 压片, 即得 每片含茶碱 100 mg ( 三 ) 茶碱缓释制剂释放度的测定 1. 标准曲线的制备 : 精密称取茶碱对照品约 20 mg 至 100 ml 量瓶中, 加 0.1 mol/l 盐酸溶液溶解并稀释至刻度 精密吸取 10 ml, 置 50 ml 量瓶中, 加同溶剂定容 然后取溶液 ml, 分别置 25 ml 量瓶中, 加同溶剂定容 按分光光度法, 在波长 270nm 处测定吸光度, 以吸光度对浓度进行回归分析, 得到标准曲线回归方程 2. 释放度的测定 : 取自制的茶碱缓释胶囊一粒, 用水润湿囊壁, 待囊壁软化后, 小心将其剥去, 称定重量, 进行释放度实验 取缓释胶囊 1 粒或缓释片 1 片 ( 抛片之前测定片重 ), 照 中国药典 2010 版二部附录 X D 释放度测定法第二法, 释放介质为水 900 ml, 温度 37±0.5, 转速为 100 r/min 依法操作, 经 小时分别取样 3 ml, 同时补加同体积释放介质, 样品经微孔滤膜滤过, 取续滤液 1 ml 置 10 ml 量瓶中, 加水至刻度, 在 270 nm 处测定吸光度 结果填于表 3 绘制累积百分释放量- 时间曲线图 ( 纵坐标为累积释放量, 横坐标为时间 ) 表 3 缓释制剂的累积释放量 (%) 样品缓释胶囊缓释片取样时间 (h) 稀释倍数测定值 (A) 累积释放量 (%) C D 释放量 = 100% 标示量式中 C- 溶出介质中药物浓度,D- 溶出介质的毫升数 四 实验指导 ( 一 ) 预习要求 1. 复习缓控释制剂内容, 了解缓控释制剂的类型及其临床意义 2. 了解口服缓释制剂的一般制备原理及方法 3. 复习溶出度实验的方法 对象及意义, 并参阅 中国药典 附录中的有关内容 56

60 ( 二 ) 操作要点和注意事项 1. 对所用的溶出度测定仪, 应预先检查其是否运转正常, 并检查温度 转速的控制等是否精确 2. 样液用微孔滤膜过滤时, 应注意滤膜安装是否正确 五 思考题 1. 比较不同处方茶碱缓释胶囊剂的释放曲线, 作出评价 2. 比较缓释片剂和缓释胶囊的释放曲线, 并分析之 3. 普通茶碱在上述实验条件下 30 分钟释放量 80%, 以此评价你的缓释制剂 4. 设计口服缓释制剂时主要考虑哪些影响因素? 5. 缓释制剂的释放度实验有何意义? 如何使其具有实用价值? 57

61 实验二十一经皮渗透实验 一 目的和要求 1. 掌握体外药物经皮渗透实验的方法 2. 熟悉药物经皮渗透实验中数据的处理方法 3. 了解经皮渗透实验中所用皮肤的处理方法 二 基本概念和实验原理药物通过皮肤 ( 或人工膜 ) 渗透的体外实验是经皮给药系统开发的必不可少的研究步骤, 它可以预测药物经皮吸收的速度 研究介质 处方组成和经皮吸收促进剂等对药物经皮速度的影响, 是药物经皮制剂有效性和安全性的前提保障 药物经皮渗透实验是将剥离的皮肤 ( 或人工膜 ) 夹在扩散池中, 角质层面向给药池 ; 将药物置于给药池中 于给定的时间间隔测定皮肤另一侧接受池内的介质中药物浓度, 分析药物经皮肤渗透的动力学 皮肤由角质层 表皮 真皮 皮下组织等组成 药物置于皮肤表面后向皮肤内渗透, 通过表皮达到真皮, 由于真皮内有丰富的毛细血管, 药物能很快吸收进入体循环, 因此药物在皮肤内表面的浓度很低, 即符合所谓 漏槽 条件, 药物的浓度接近于零 在体外实验条件下, 如果置于皮肤表面的药物浓度保持不变, 而接受介质中的药物满足漏槽条件, 即接受池中的药物浓度远远小于给药池中的药物浓度 如果以 t 时刻药物通过皮肤的累积量 M 对时间作图, 则在达到稳态后可以得到一条直线, 直线的斜率为药物的稳态流量 ( 稳态经皮吸收速度 ) 为了处理问题的简单化, 可以将皮肤可看作简单的膜, 用 Fick s 扩散定律分析药物在皮肤内的渗透行为, 药物的稳态流量 J 与皮肤中药物浓度梯度呈正比, 可以用下式表示 : dm DK J ( C 0 Ct) Adt h (1) 式中 A- 药物的有效扩散面积 ;D- 药物在皮肤中的扩散系数 ;K- 药物在皮肤 / 介质中的分配系数 ;h- 药物在皮肤中的扩散路径 ;C o - 给药池中药物的浓度 ;C t -t 时刻接受池中药物的浓度 如果接受池中的药物浓度远远小于给药池中的药物浓度, 即 C o >> C t, 式 (1) 则可以改写为 dm DK J C 0 (2) Adt h 58

62 系数 所以对于特定的皮肤和介质来说,D K 和 h 均为常数, 所以可以令 Dk P, 称渗透 h 式 (2) 可写作 : J PC 0 (3) 渗透系数是扩散阻力的倒数, 单位为 cm/s 或 cm/h, 其大小由皮肤与药物的性质决定, 即由 D K 和 h 所决定, 而与药物浓度无关,P 值大, 表示药物容易透过皮肤 根据求得 的稳态流量 给药池中药物的浓度和有效扩散面积, 可以求出药物经皮渗透系数 M-t 曲线中直线部分反向延长线与时间轴的交点处的时间称为滞后时间 ( 简称时滞 T L ), 2 h T L (4) 6D 经皮渗透实验所用的皮肤除人的皮肤外, 常用一些动物, 如猴 乳猪 无毛小鼠 豚 鼠和大鼠等动物皮肤 实验装置可以是单室 双室或流通扩散池 常用的接受介质是 ph7.4 的磷酸盐缓冲液和生理盐水, 有时为增加药物溶解度, 可采用一定浓度不影响皮肤渗透性 的非水溶剂 三 实验内容 ( 一 ) 水杨酸溶解度的测定 1. 饱和溶液的制备 : 取 100 ml 的锥形瓶, 放置在 32 恒温水浴中, 加入 1g 研细的水杨酸与 100 ml 煮沸放冷至室温的蒸馏水, 用磁力搅拌器不断搅拌, 分别于 h 取样, 过滤, 弃去初滤液, 取续滤液测定水杨酸浓度 如最后两次测得的浓度相同, 即可计算该室温条件下水杨酸的溶解度 ; 反之, 还需继续搅拌, 直至溶液浓度不再增大为止 2. 硫酸铁铵显色剂的配制 : 称取 8g 硫酸铁铵溶于 100 ml 蒸馏水中, 取 2 ml 加 1 mol/l HCl 1 ml, 加蒸馏水至 100ml 即得 ( 本品需新鲜配制 ) 3. 标准曲线的绘制 : 精密称取水杨酸适量, 配制成浓度为 μg/ml 的标准溶液, 分别精密量取 5ml, 加硫酸铁铵显色剂 1 ml, 以蒸馏水 5 ml 加硫酸铁铵显色剂 1 ml 为空白, 于 530 nm 波长处测定吸光度, 将吸光度对水杨酸浓度回归得标准曲线方程 4. 水杨酸浓度的测定 : 取过滤后的水杨酸饱和溶液用蒸馏水稀释 100 倍, 取稀释液 5 ml 加硫酸铁铵显色剂 1ml, 于 530 nm 波长处测定吸光度, 用标准曲线计算水杨酸浓度, 乘以稀释倍数即等于水杨酸在 59

63 室温下的溶解度 ( 二 ) 水杨酸的经皮渗透 1. 皮肤的处理取体重为 150~200g 的雄性大鼠, 处死后立即用电动剪毛刀剪去腹部皮肤毛, 剥离去毛部位皮肤, 去除皮下组织后用生理盐水冲洗干净, 置于生理盐水中浸泡约 30min, 取出, 用滤纸吸干, 备用 2. 经皮渗透实验将处理好的鼠皮置于水平扩散池的两个半池之间, 用夹子固定好 角质层面向的半池为给药池, 真皮面向的半池为接受池 接受池中加入生理盐水 10 ml, 给药池加入水杨酸的饱和水溶液或 30% 乙醇中的饱和溶液 10 ml, 并分别在两个半池中加入小搅拌子, 夹层通 32 的水, 在持续搅拌下, 在 h 于接受池中取样, 取样体积为 8 ml, 并立即加入等体积新生理盐水 取出接受液用微孔滤膜过滤, 弃去初滤液, 用于测定水杨酸浓度 3. 水杨酸浓度的测定 : 按照实验 ( 一 ) 中水杨酸浓度测定项的方法配制硫酸铁铵显色剂及制备标准曲线, 取接受介质 5 ml 加硫酸铁铵显色剂 1 ml, 于 530 nm 的波长处测定吸光度 A, 用标准曲线回归方程计算水杨酸浓度 4. 实验结果与数据处理 : (1) 累积渗透量的计算应注意水杨酸浓度的校正, 校正公式为 : n 1 V C n Cn Ci (n 2; 当 n=1 时,C n = C 1 =C 1 ) (5) V 0 i 1 式中 C n - 校正的浓度 ;C n -n 时间点的测得浓度 ;V- 取样体积 ;V 0 - 接受池中的接受液的总体积 则, 单位面积累计渗透量 M C n V0 /A (6) 式中,A 为有效渗透面积 (2) 经皮渗透曲线的绘制以单位面积累积渗透量为纵坐标, 时间为横坐标, 绘制水杨酸经皮曲线 曲线尾部的直线部分外推与横坐标相交, 求得时滞 (3) 渗透速度与渗透系数的计算将渗透曲线尾部直线部分的 M-t 数据进行线性回归, 求得直线斜率即为渗透速度 J[μg/(cm 2 h)] 将渗透速度除以给药池的药物浓度得渗透系数 P(cm/h) 60

64 四 实验指导 ( 一 ) 预习要求复习 Fick s 扩散定律及有关的扩散基本理论 ( 二 ) 操作要点和注意事项 1. 动物处死后, 应立即去毛和剥离皮肤, 剥离皮肤的皮下组织时应注意不要剪破皮肤 2. 每次抽取接受介质后应立即加入新的接受介质, 并排尽与皮肤接触界面的气泡 3. 用水杨酸的 30% 乙醇饱和溶液作为给药池的药物溶液时, 能在 4h 的实验时间内得到较好的渗透曲线, 而作为对照的水杨酸饱和水溶液渗透速度小, 如要得到理想的渗透曲线需延长取样的时间间隔和实验持续时间, 如每隔 1h 取样, 持续 6h 以上 4. 测定接受介质中水杨酸浓度时, 如溶液混浊需过滤 五 思考题 1. 影响药物透皮渗透速度和渗透系数的因素有哪些? 2. 讨论水杨酸饱和水溶液和 30% 乙醇饱和溶液渗透系数的差异 61

65 实验二十二大鼠在体小肠吸收实验 一 目的和要求 1. 掌握大鼠在体小肠吸收的实验方法 2. 掌握计算药物的吸收速度常数 ( k a ), 以及每小时吸收率的计算方法 二 基本概念和实验原理大多数药物以被动扩散方式从生物膜的高浓度侧通过膜向低浓度侧转运 被动扩散可用 Fick s 第一定律来描述 该定律指出, 扩散速度 dc dt 正比于膜两侧的浓度差 ( C), 因此有 : dc k a C ( C C b) (1) dt 式中 C 是消化道中药物浓度, C b 是血液中药物浓度, k a 是吸收速度常数, 其值大小取决于药物的扩散常数, 吸收膜的厚度与面积, 及药物对膜的穿透性 胃肠道吸收的生物学过程包括这样一个系统, 即药物从胃肠道屏障的一侧 ( 吸收部位 ) 向另一侧 ( 血液 ) 扩散 因为进入血液的药物很快分布到全身, 故与吸收部位比较, 血中药物浓度维持在很低的水平 几乎在所口服给药的情况下, 对于胃肠道来说, 血液 ( 室 ) 的作用尤如一个 水槽 (sink) 并且在整个吸收相保持很大的浓度梯度,C >> 式可以简化为 dc dt C b, 则 C C, 于是 (1) k a C (2) 此为一级速度方程式的标准形式 胃肠道按一级动力学从溶液中吸收大多数药物 用消化液中药物量的变化 ( dxa dt ) 表示扩散速度, 则 : dx dt 将 (3) 式积分, 并在方程两侧同取对数 以 ln 式中 X a 为消化液中药物量, X a(0) a kax (3) ln Xa ln Xa(0) kat (4) 为零时刻消化液中药物量, k a 为药物吸收速度常数 X a 对 t 作图得一条直线, 其斜率为药物在小肠中的吸收速度常数 ( k a ) 62

66 三 实验内容 1. 仪器和器材蠕动泵, 紫外分光光度仪, 红外灯, 手术剪, 止血钳, 乳胶管, 烧杯, 兔鼠固定台, 手术镊, 注射器, 电推子, 大鼠手套, 沙布, 脱脂棉, 法郎盘, 手术线, 三角烧瓶, 试管架, 移液管, 具塞试管, 吸耳球电热恒温水浴锅 2. 试剂 (1)0.1%NaNO 2 液 ;(2)0.5% 氨基磺酸铵 (NH 2 SO 3 NH 4 ) 溶液 ;(3)0.1% 二盐酸萘乙二胺溶液 ( 偶合试剂 );( 以上置冰箱保存 ),(4)1 mol/l HCl;(5)0.2 mol/l NaOH;(6) 生理盐水 ;(7)Krobs-Ringer 试液 ( 每 1000 ml 内含 NaCl 7.8 g,kcl 0.35 g,cacl g, NaHCO g,NaH 2 PO g,mgcl g, 葡萄糖 1.4 g);(8) 戊巴比妥钠溶液 (10 mg/ml, 大鼠每 l00 g 腹腔注射 0.4 ml 麻醉 );(9) 磺胺嘧啶 (Sulfadiazine,SD) 3. 操作 (1) 取 100 ml 供试液 (100 ml Krobs Ringer 试液含 SD2 mg 酚红 2 mg) 加入循环装置的烧瓶中 (2) 将实验前禁食一夜, 体重 200 g 左右的雄性大鼠, 称重, 腹腔注射戊巴比妥钠 ( 剂量为 l00 g 体重注射 0.4 m1), 麻醉后并加以固定 (3) 沿腹中线打开腹腔 ( 约 3 厘米长 ) 自十二指肠上部及回肠下部各剪开一个小口, 各插入直径为 0.5 cm 的玻璃管, 用线扎紧, 并用 37 的生理盐水将小肠内容物冲洗干净, 然后将大鼠串联到循环装置中 (4) 开动蠕动泵, 以 5 ml/min 的流速循环 10 分钟后流速调至 2.5 ml/min (5) 自烧瓶中取样 1.5 ml(1ml 0.5ml 各一份 ) 为药物和酚红零时间样品, 并补加 2ml 酚红溶液 ( 每毫升 Krobs-Ringer 试液含酚红 20 μg), 其后每 15 分钟取样 (1ml 0.5m1 各一份 ), 同时补加酚红溶液 由于酚红不被小肠吸收, 用以测定水被小肠吸收的量 4. 定量方法 (1) 磺胺嘧啶的定量取样品 1 ml, 加入 l mol/l HCl 5 m1, 加入 0.1%NaNO 2 l ml, 摇匀, 放置 3 分钟, 加入 0.5% 氨基磺酸铵 1 ml, 摇匀, 放置 3min 加入 0.1% 萘乙胺 2 ml, 摇匀, 放置 20 分钟 在 550 nm 处测定 1. 温度计 2. 水浴锅 3. 烧瓶 4. 小肠 63

67 吸收度 参比溶液的配制 : 取 l ml 供试液按磺胺嘧啶的定量方法但不加萘乙胺显色剂 (2) 酚红定量 样品 0.5 ml, 加入 0.2 mol/l NaOH 5ml, 摇匀, 在 550 nm 测定吸光度 参比溶液 : 酚红的比色空白液为 0.2 mol/l NaOH 5. 标准曲线的制备 (1) 酚红的标准曲线 精密称取酚红 l00 mg, 置 1000 ml 容量瓶内, 加 1%Na 2 CO 3 溶液溶解并稀释至刻度, 制成 100 μg/ml 的标准溶液 取 l,2,3,4,5,6ml 的标准溶液于 l0 ml 容量瓶中, 加蒸馏 水至刻度 自上述各溶液中吸取 0.5 ml, 按酚红的定量方法测定吸光度, 并绘制标准曲线 (2)SD 的标准曲线 贮备液的配制 : 精密称取磺胺嘧啶标准品 10 mg, 置 l00 ml 容量瓶中, 以蒸馏水溶解 并稀释至刻度, 使成 100 μg/ml 的标准溶液 标准曲线制备 : 取上述贮备液适量, 稀释至 20 μg/ml 的工作液, 分别吸取 2,4,6,8, l0 ml 于 l0 ml 容量瓶中, 加蒸馏水至刻度 从上述溶液中各吸取 l ml 按 SD 定量方法测定 吸光度, 并绘制标准曲线 将实验数据按表 1 中公式进行计算, 以剩余药量的对数对时间作图, 求出吸收速度常 数 k a 和每小时吸收率 (%) 每小时吸收率 (%)=[( 零时间剩余药量 -60 分钟剩余药量 )/ 零时间剩余药量 ] 100% 表 1 大鼠在体小肠吸收量的计算式 取样时间 S D (h) 吸光度 浓度 循环前 A 0 C 0 0 A 1 C A 2 C A 3 C 3... 吸光度 A A A A 酚红 浓度 供试液体积 (ml) 剩余药量 (μg) C V 0 =100 P 0 =100C 0 C V 1 = C0 V 0 / C 1 P 1 =C 1 V 1 C V 2 =[( V 1-1.5) C +40]/ C P 2 =C 2 V C 1 C V 3 =[( V 2-1.5) C +40]/ C P 3 =C 3 V (C 1 +C 2 ) t n A n C n. A n. C n V 3 =[( V n-1-1.5) C 1. n +40]/ C n p n C n V n. 1.5 n 1 i 1 C i 64

68 四 实验指导 ( 一 ) 预习要求 1. 复习药物的膜转运与胃肠道吸收 2. 复习药物在体内吸收速率常数 k a 的计算方法 五 思考题 1. 做好本实验的关键是什么? 在操作中应该注意哪些问题? 2. 本实验装置能否进一步改进? 65

69 中国医科大学药学院药剂学教研室 二〇一三年五月 66