氟氢缩松 倍他米松戊酸酯 丙酸氯倍他索 环索奈德 雌二醇 己烯雌酚标准品各约 10mg ( 精确到 g) 置于 100 ml 容量瓶中, 用乙腈 (3.1) 溶解并定容至刻度, 作为质控标准品储备液 置 -20 保存 对于质谱响应更弱的成分, 实验室可自行增加该成分作为质控标准物质, 以

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1 化妆品中激素类成分检测通用方法 ( 征求意见稿 ) 1 范围本方法规定了采用高效液相色谱 - 串联质谱法测定化妆品中激素类成分的筛查 定性与定量 本方法适用于膏霜乳液类 面膜类 啫喱类 液态水基类和液态油基类等化妆品中激素类成分的筛查 定性与定量 本方法所指的激素类成分包括但不限于附表 1 中的激素成分, 可根据实际情况对检测成分进行增加, 增加的成分需按附录 A 进行验证 2 方法提要本方法使用标准物质优化仪器条件, 建立化妆品中激素类成分检测通用分析系统, 并使之固化 样品以乙腈为溶剂提取, 采用高效液相色谱仪分离, 质谱检测器检测, 对样品进行筛查, 并随行质控标准品溶液以控制筛查过程的准确性 重现性 筛查结果呈可疑阳性的样品, 需使用相应的标准品, 根据保留时间和特征离子对的相对丰度比定性, 定量离子对峰面积定量, 以标准曲线法计算含量 本方法对 63 种激素类成分的检出限 定量限及取样 0.2 g 时的检出浓度 定量浓度见附表 2 3 试剂和材料除另有规定外, 本方法所用试剂均为分析纯或以上规格, 水为 GB/T 6682 规定的一级水 3.1 乙腈, 色谱纯 3.2 正己烷 % 乙腈溶液 : 取乙腈 水等体积混合, 即得 % 乙腈溶液 : 取乙腈 水按体积比 7:3 混合, 即得 3.5 流动相的配制 : 流动相 A: 水流动相 B: 乙腈 (3.1) 3.6 质控标准品储备液 : 称取曲安奈德 卤美他松 哈西奈德 地塞米松 醋酸地塞米松 1

2 氟氢缩松 倍他米松戊酸酯 丙酸氯倍他索 环索奈德 雌二醇 己烯雌酚标准品各约 10mg ( 精确到 g) 置于 100 ml 容量瓶中, 用乙腈 (3.1) 溶解并定容至刻度, 作为质控标准品储备液 置 -20 保存 对于质谱响应更弱的成分, 实验室可自行增加该成分作为质控标准物质, 以提高筛查准确性 4 仪器和设备 4.1 高效液相色谱 - 三重四极杆质谱联用仪 4.2 超声波清洗器 4.3 离心机 4.4 涡旋振荡器 4.5 分析天平 5 分析步骤 5.1 分析系统的建立与固化根据所使用的仪器类型, 对附表 1 中的待测组分采用自动或手动的方式调谐质谱参数, 确定其定性离子 定量离子 碰撞能等测定参数, 并进行色谱洗脱条件的优化, 建立固化的分析系统 注 1: 本方法以随行质控标准品溶液对分析条件 结果的重复性进行控制 固化的分析系统建立后, 可不随行所有待测组分标准品进行测定 如发生更改仪器 色谱条件 质谱条件等情况, 均需重新建立固化分析系统 5.2 质控标准品混合溶液的制备分别取质控标准品储备液 (3.6) 适量, 用 50% 乙腈溶液 (3.3) 进行配制, 配制浓度原则上介于其检出浓度与定量浓度之间 5.3 样品预处理 膏霜类乳液类 面膜类 啫喱类 液态水基类称取样品 0.2 g( 精确到 0.001g), 置于 10 ml 具塞比色管中, 加入少量乙腈 (3.1), 在涡旋振荡器上高速振荡 30s, 使试样与提取溶剂充分混匀, 然后加入乙腈至近刻度, 超声提取 20 min, 静置至室温, 用乙腈 (3.1) 定容至刻度, 摇匀, 以 4000 r/min 离心 10 min 取上清液适量用 50% 乙腈溶液 (3.3) 稀释, 稀释液经 0.22 μm 滤膜过滤, 滤液作为供试品溶液备用 液态油基类 2

3 称取样品 0.2 g( 精确至 0.001g), 置于离心管中, 加入 2 ml 正己烷 (3.2), 在涡旋 混匀器上分散, 然后加入 70% 乙腈 (3.4)3 ml, 涡旋提取 2 min,4000 r/min 离心 10 min, 吸取下层提取液至 10 ml 比色管中, 上层正己烷层用 70% 乙腈 (3.4)3 ml 重复上述提取步 骤一次, 合并两次提取液, 加 50% 乙腈 (3.3) 定容, 经 0.22 μm 滤膜过滤, 滤液作为供试 品溶液备用 5.4 仪器参考条件 色谱条件 色谱柱 : C18 柱 (150 mm μm), 或等效色谱柱 流动相梯度洗脱程序 : 见表 1 表 1 流动相比例 时间 /min V( 流动相 A)/% V( 流动相 B)/% 流速 :0.3 ml/min; 柱温 :40 ; 进样量 :10 μl; 质谱条件 离子源 : 电喷雾离子源 (ESI 源 ); 监测模式 : 正离子 负离子多离子反应监测模式, 监测离子对及相关参数设定见附表 筛查 取质控标准品混合溶液 (5.2), 按固化的分析系统 (5.1) 测定, 各成分均应检出相应 的定量离子对与定性离子对, 响应值大于 3 倍信噪比, 且保留时间偏差小于 ±3%, 方可进 行样品筛查 取供试品溶液 (5.3), 按固化的分析系统 (5.1) 进行筛查, 如样品中检出与待测激素 成分一致的多反应监测离子对, 且保留时间偏差在 ±5% 之内, 则含可疑阳性成分, 应随行 相应标准品进行进一步定性确证 5.6 定性 3

4 取供试品溶液与相应标准品溶液在相同试验条件下测定, 样品中如呈现定量离子对和定性离子对的色谱峰, 被测组分的特征离子峰保留时间与标准溶液对应的保留时间一致, 且选择的定性离子的相对丰度比与相当浓度对照品溶液的定性离子的相对丰度比的最大偏差应不超过表 2 的规定, 则可以判定样品中存在对应的激素类成分 表 2 定性判定时离子相对丰度的最大允许偏差离子相对丰度 (k) k 50% 50 %> k 20 % 20 %> k>10 % k 10 % 允许的最大偏差 ±20% ±25% ±30% ±50% 5.7 定量 标准品储备溶液的制备称取待测激素标准品约 10mg( 精确到 g), 用乙腈 (3.1) 溶解并定容至 100 ml 容量瓶中 标准系列溶液的制备取相同类型基质空白样品 6 份于 10 ml 比色管中 (0.2 g/ 份 ), 分别加入标准品储备溶液适量, 照样品预处理操作步骤处理, 配制成浓度为 ng/ml 的系列基质标曲溶液 ( 标曲范围可根据实际情况进行调整 ) 样品预处理 : 同 测定取系列基质标曲溶液依次进样, 记录定量离子对色谱峰面积并绘制峰面积 (A)- 浓度 (C) 标准曲线, 其线性相关系数应不小于 0.99 取供试品溶液进样, 将对应的定量离子色谱峰面积代入线性回归方程, 按 6 计算 项下公式, 计算样品中各组分的含量 6 分析结果的表述 6.1 计算 式中 : V D m ω 样品中激素类物质的含量,µg/g; ρ 供试品溶液中激素类成分的浓度,µg/mL; V 样品定容体积,mL; m 样品取样量,g; D 稀释倍数 ( 如未稀释则为 1) 相同条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的 15 % 4

5 6.2 回收率和精密度 多家实验室验证在定量下限浓度附近回收率为 72.7~122.1%, 相对标准偏差小于 15% (n=6), 其他浓度回收率为 80.7~119.6%, 相对标准偏差小于 11%(n=6) 5

6 附录 A ( 规范性附录 ) 方法未收载激素类成分的确证 A.1 适用范围适用于本方法未收载的其他激素类成分的确证 A.2 方法提要对于本方法未收载的其他激素类成分, 参照本方法正文方法检测, 满足定性判定条件或定量判定条件, 并按国食药监许 [2010]455 号 化妆品中禁用物质和限用物质检测方法验证技术规范 验证, 实验室间验证结论一致, 可等效使用本方法 A.3 实验室内确证 A.3.1 标准溶液制备同 5.2 A.3.2 样品预处理同 5.3 A.3.3 色谱 质谱条件根据所使用的仪器类型, 对待测组分采用自动或手动的方式调谐质谱参数, 确定其定性离子 定量离子 碰撞能等测定参数 A.3.4 定性同 5.6, 必要时可辅以二级图谱进行判定 A.3.5 定量同 5.7, 并满足国食药监许 [2010]455 号 化妆品中禁用物质和限用物质检测方法验证技术规范 中相关要求 A.4 实验室间确证按照国食药监许 [2010]455 号 化妆品中禁用物质和限用物质检测方法验证技术规范 进行验证 A.5 结果处理如 4 家实验室确证结果一致, 可等效使用本方法, 并及时上报国家食品药品监督管理总局, 将确证组分纳入本方法使用范围 6

7 附表 1 63 种激素类成分监测离子对及相关参数设定表 编号 物质名称 母离子 (m/z) 子离子 (m/z) CE(V) 1 曲安西龙 * 泼尼松龙 * 氢化可的松 * 泼尼松 * 可的松 * 甲基泼尼松龙 * 倍他米松 * 地塞米松 * 氟米松 * 倍氯米松 * 曲安奈德 * 氟氢缩松 * 曲安西龙双醋酸酯 * 泼尼松龙醋酸酯 * 氟米龙 * 氢化可的松醋酸酯 * 地夫可特 * 氟氢可的松醋酸酯 * 泼尼松醋酸酯 * 可的松醋酸酯 * 甲基泼尼松龙醋酸酯 *

8 22 倍他米松醋酸酯 * 布地奈德 * 氢化可的松丁酸酯 * 地塞米松醋酸酯 * 氟米龙醋酸酯 * 氢化可的松戊酸酯 * 曲安奈德醋酸酯 * 氟轻松醋酸酯 * 二氟拉松双醋酸酯 * 倍他米松戊酸酯 * 泼尼卡酯 * 哈西奈德 * 阿氯米松双丙酸酯 * 安西奈德 * 氯倍他索丙酸酯 * 氟替卡松丙酸酯 * 莫米他松糠酸酯 * 倍他米松双丙酸酯 * 倍氯米松双丙酸酯 * 氯倍他松丁酸酯 * 氟轻松 * 地索奈德 *

9 44 环索奈德 * 卤美他松 * 戊酸双氟可龙 * 异氟泼尼松 * 丙酸卤倍他索 * 氯替泼诺 * 氟尼缩松 * 睾酮 * 黄体酮 * 甲睾酮 * 孕三烯酮 * 醋酸甲地孕酮 * 醋酸甲羟孕酮 * 炔诺孕酮 * 醋酸氯地孕酮 * 己酸羟孕酮 * 雌二醇 * 雌三醇 * 雌酮 * 己烯雌酚 * *: 定量离子对 9

10 附表 2 63 种激素类成分的检出浓度与定量浓度 序号 中文名称 英文名称 检出浓度定量浓度检出限定量限 (μg/g) (μg/g) (ng) (ng) 1 曲安西龙 Triamcinolone 泼尼松龙 Prednisolone 氢化可的松 Hydrocortisone 泼尼松 Prednisone 可的松 Cortisone 甲基泼尼松龙 Methylprednisolone 倍他米松 Betamethasone 地塞米松 Dexamethasone 氟米松 Flumethasone 倍氯米松 Beclomethasone Triamcinolone 曲安奈德 acetonide 氟氢缩松 Fludroxycortide Triamcinolone 曲安西龙双醋酸酯 diacetate Prednisolone 泼尼松龙醋酸酯 21-acetate 氟米龙 Fluoromethalone Hydrocortisone 氢化可的松醋酸酯 21-acetate 地夫可特 Deflazacort Fludrocortisone 氟氢可的松醋酸酯 21-acetate 泼尼松醋酸酯 Prednisone 21-acetate 可的松醋酸酯 Cortisone 21-acetate Methylprednisolone 甲基泼尼松龙醋酸酯 21-acetate Betamethasone 倍他米松醋酸酯 21-acetate 布地奈德 Budesonide Hydrocortisone 氢化可的松丁酸酯 17-butyrate Dexamethasone 地塞米松醋酸酯 21-acetate Fluorometholone 氟米龙醋酸酯 17-acetate Hydrocortisone 氢化可的松戊酸酯 17-valerate Triamcinolone 曲安奈德醋酸酯 acetonide acetate

11 29 氟轻松醋酸酯 Fluocinonide 二氟拉松双醋酸酯 Diflorasone diacetate Betamethasone 倍他米松戊酸酯 17-valerate 泼尼卡酯 Prednicarbate 哈西奈德 Halcinonide Alclomethasone 阿氯米松双丙酸酯 dipropionate 安西奈德 Amcinonide Clobetasol 氯倍他索丙酸酯 17-propionate Fluticasone 氟替卡松丙酸酯 propionate 莫米他松糠酸酯 Mometasone furoate Betamethasone 倍他米松双丙酸酯 dipropionate Beclmetasone 倍氯米松双丙酸酯 dipropionate Clobetasone 氯倍他松丁酸酯 17-butyrate Fluocinolone 氟轻松 acetonide 地索奈德 Desonide 环索奈德 Ciclesonide 卤美他松 Halometasone Diflucortolone 双氟可龙戊酸酯 valerate 异氟泼尼松 9-fluoroprednisolone Halobetasol 卤倍他索丙酸酯 Propionate Loteprednol 氯替泼诺 etabonate 睾酮 Testosterone 孕酮 Progesterone 甲基睾丸酮 Methyltestosterone 孕三烯酮 Gestrinone 醋酸甲地孕酮 Megestrol acetate Medroxyprogesterone 醋酸甲羟孕酮 17-acetate 炔诺孕酮 Norgestrel Chlormadinone 醋酸氯地孕酮 acetate Hydroxyprogesterone 己酸羟孕酮 caproate

12 59 氟尼缩松 Flunisolide 雌三醇 Estriol 雌二醇 Estradial 雌酮 Estrone 己烯雌酚 Diethylstilbestrol

13 化妆品中激素类成分检测通用方法起草说明 为进一步完善化妆品中禁限用物质检测方法标准体系, 加强化妆品中禁限用物质的监督管理, 国家食品药品监督管理总局化妆品标准专家委员会秘书处于 2015 年 11 月组织开展化妆品中激素类成分检测通用方法的建立和验证工作, 现就起草工作有关情况说明如下 : 一 起草的必要性类固醇类激素也称甾体激素, 按其药理作用可分为肾上腺皮质激素和性激素 肾上腺皮质激素种类较多, 其中的糖皮质激素是目前临床应用较多的一类药物, 也是化妆品中重点监控的激素种类 糖皮质激素类药物外用可降低毛细血管的通透性 减少渗出和细胞浸润, 具有抗炎 抗过敏 免疫抑制 抗增生等作用, 使用后显效速度非常快, 主要表现是使用后, 面部粉刺 脓包很快消失, 面部血管膨胀, 黑色素消失, 使面部看起来更加白皙 红润, 也更加平滑完美 但长期使用会导致皮肤出现干燥脱皮 红血丝 色素沉着等现象, 更为严重的是出现激素依赖性皮炎, 对含有激素的美容化妆品产生依赖性, 用之症状好转或消失, 停用后症状复发, 很难治愈, 给消费者带来精神和身体的严重伤害 因此, 一些不法化妆品生产厂家利用糖皮质激素的上述特点, 将其掺入嫩肤 美白 祛痘类化妆品中 我国 化妆品安全技术规范 (2015 版 ) 和欧盟化妆品规程 (Directive 76/768/EEC) 均明确规定此类物质为化妆品禁用成分 性激素主要包括雄激素 雌激素和孕激素 雌激素是妇女卵巢产生的内分泌激素, 能促进女性发育成熟, 同时, 雌激素对皮肤状态也产生影响, 可令皮肤滋润也可促使乳房发育增大 一般来说, 女性体内分泌的雌性激素完全能满足女性皮肤的生理需要, 如过量使用会导致女性患乳腺癌和子宫肌瘤的发病率大大提高, 还可引起月经不调 色素沉着 黑斑 皮肤变薄和萎缩等不良反应 然而, 不法化妆品生产者却在化妆品中添加雌性激素, 使自己的产品快速实现促进毛发生长 丰乳 美白 除皱和增加皮肤弹性等功能 目前, 我国涉及化妆品中激素检测的国家标准有 :GB/T 化妆品中四十一种糖皮质激素的测定 化妆品安全技术规范 (2015 年版 ) 2.4 雌三醇等 7 种组分 2.5 米诺地尔等 7 种组分 国家食药总局关于发布面膜类化妆品中氟轻松检测方法的通告 (2016 年第 88 号 ) 等, 标准的分散性给检验工作带来了诸多不便, 同一类型的样品往往需要采用多种标准分别对糖皮质激素和性激素进行检验 此外, 近年来不法分子不断变换添加手段, 转而添加标准外的成分来躲避监管 为此, 化妆品标准专家委员会秘书处组织开展化妆品中激素的通用检测方法研究, 以强化技术支撑能力, 简化检验流程 提高检验效率, 为化妆品 13

14 行业健康发展保驾护航 二 起草原则本方法选择采用目前一般检测实验室普遍具备的分析技术, 并兼具先进性 准确性以及可操作性和便捷性 三 起草过程通过查阅国内外相关文献资料, 并在以往研究制定化妆品中禁 限用物质检测方法研究的基础上, 选择现有标准已收载 近年来新发现和有可能被添加的激素类组分共 63 种进行研究, 建立了化妆品中激素类成分通用检测方法,2017 年 6 月委托三家检测机构进行方法验证, 并对验证结果进行了总结和分析, 进一步完善检测方法 2017 年 9 月 2018 年 1 月国食药总局委托中检院组织召开了结题论证会, 会后根据专家意见对本方法进行了修订 ( 具体如下 ) 四 重点说明的问题 1 本方法的体例主要参照 化妆品安全技术规范 (2015 年版 ) 的卫生化学检验方法的体例, 以规范和统一书写, 以及方便化妆品检验领域相关检验人员的阅读和使用 2 关于检测方法 本方法规定了采用高效液相色谱 - 串联质谱法测定膏霜乳液类 面膜类 啫喱类 液态水基类 液态油基类等化妆品中激素类物质筛查 定性和定量的方法 方法使用标准物质优化仪器条件, 建立化妆品中激素类成分检测通用分析系统, 并使之固化 样品以乙腈为溶剂提取, 采用高效液相色谱仪分离, 质谱检测器检测, 对样品进行筛查, 并随行质控标准品溶液以控制筛查过程的准确性 重现性 筛查结果呈可疑阳性的样品, 需使用相应的标准品, 根据保留时间和特征离子对的相对丰度比定性, 定量离子对峰面积定量, 以标准曲线法计算含量 本方法对 63 种激素类成分的检出限 定量限及取样 0.2 g 时的检出浓度 定量浓度见下表 序号中文名称英文名称 检出浓度 (μg/g) 定量浓度 (μg/g) 检出限 (ng) 定量限 (ng) 1 曲安西龙 Triamcinolone 泼尼松龙 Prednisolone 氢化可的松 Hydrocortisone 泼尼松 Prednisone

15 5 可的松 Cortisone 甲基泼尼松龙 Methylprednisolone 倍他米松 Betamethasone 地塞米松 Dexamethasone 氟米松 Flumethasone 倍氯米松 Beclomethasone 曲安奈德 Triamcinolone acetonide 氟氢缩松 Fludroxycortide 曲安西龙双醋酸酯 Triamcinolone diacetate 泼尼松龙醋酸酯 Prednisolone 21-acetate 氟米龙 Fluoromethalone 氢化可的松醋酸酯 Hydrocortisone 21-acetate 地夫可特 Deflazacort 氟氢可的松醋酸酯 Fludrocortisone 21-acetate 泼尼松醋酸酯 Prednisone 21-acetate 可的松醋酸酯 Cortisone 21-acetate 甲基泼尼松龙醋酸酯 Methylprednisolone 21-acetate 倍他米松醋酸酯 Betamethasone 21-acetate 布地奈德 Budesonide 氢化可的松丁酸酯 Hydrocortisone 17-butyrate 地塞米松醋酸酯 Dexamethasone

16 21-acetate 26 氟米龙醋酸酯 Fluorometholone 17-acetate 氢化可的松戊酸酯 Hydrocortisone 17-valerate 曲安奈德醋酸酯 Triamcinolone acetonide acetate 氟轻松醋酸酯 Fluocinonide 二氟拉松双醋酸酯 Diflorasone diacetate 倍他米松戊酸酯 Betamethasone 17-valerate 泼尼卡酯 Prednicarbate 哈西奈德 Halcinonide 阿氯米松双丙酸酯 Alclomethasone dipropionate 安西奈德 Amcinonide 氯倍他索丙酸酯 Clobetasol 17-propionate 氟替卡松丙酸酯 Fluticasone propionate 莫米他松糠酸酯 Mometasone furoate 倍他米松双丙酸酯 Betamethasone dipropionate 倍氯米松双丙酸酯 Beclmetasone dipropionate 氯倍他松丁酸酯 Clobetasone 17-butyrate 氟轻松 Fluocinolone acetonide

17 43 地索奈德 Desonide 环索奈德 Ciclesonide 卤美他松 Halometasone 双氟可龙戊酸酯 Diflucortolone valerate 异氟泼尼松 9-fluoroprednisolone 卤倍他索丙酸酯 Halobetasol Propionate 氯替泼诺 Loteprednol etabonate 睾酮 Testosterone 孕酮 Progesterone 甲基睾丸酮 Methyltestosterone 孕三烯酮 Gestrinone 醋酸甲地孕酮 Megestrol acetate 醋酸甲羟孕酮 Medroxyprogesterone 17-acetate 炔诺孕酮 Norgestrel 醋酸氯地孕酮 Chlormadinone acetate 己酸羟孕酮 Hydroxyprogesterone caproate 氟尼缩松 Flunisolide 雌三醇 Estriol 雌二醇 Estradial 雌酮 Estrone 己烯雌酚 Diethylstilbestrol

18 3 关于验证意见的说明三家验证单位均未提出实质性的修改意见 4 关于专家评审意见的说明根据 2017 年 9 月第一次专家评审意见, 进行以下修订 :(1) 细化筛查检测程序及步骤, 并移至方法正文部分 ;(2) 在质控标准溶液中增加代表性的成分 ;(3) 完善标准的使用范围, 增加啫喱等剂型 ;(4) 进一步完善标准文本 根据 2018 年 1 月第二次专家评审意见, 进行以下修订 :(1) 将标准未收载激素类成分的确证原则以附录的形式收入标准 ;(2) 对部分文字描述进行规范性修改 五 起草依据及文献 [1] 化妆品安全技术规范 (2015 年版 )[S]. 北京 : 中国标准出版社 [2] 化妆品中 25 种激素的检测方法, 长沙理工大学学报 ( 自然科学版 )[J].2012,9 (3):92-97 [3] 液相色谱 - 串联质谱法同时测定化妆品中的 16 种激素, 分析化学 [J].2007,35 (9): [4] 化妆品中 7 种性激素的超高效液相色谱 - 串联质谱鉴定法, 中国卫生检验杂志 [J].2010,20(1):10-11 [5] 雌激素类内分析干扰物的液相色谱质谱分析样品前处理方法, 分析化学 [J].2010, 38(4): [6] 液相色谱 - 质谱联用测定乳及乳制品中 29 种性激素, 分析化学 [J].2012,40(1): [7] 液相色谱 - 四级杆 - 线性离子阱质谱仪联用法对护肤类化妆品中 7 种性激素的快速筛查, 贵阳医学院学报 [J].2013,38(5):

19 化妆品中激素类成分检测通用方法编制说明 一 基本信息 1 简介类固醇类激素也称甾体激素, 按其药理作用可分为肾上腺皮质激素和性激素 肾上腺皮质激素种类较多, 其中的糖皮质激素是目前临床应用较多的一类药物, 也是化妆品中重点监控的激素种类 糖皮质激素类药物外用可降低毛细血管的通透性 减少渗出和细胞浸润, 具有抗炎 抗过敏 免疫抑制 抗增生等作用, 使用后显效速度非常快, 主要表现是使用后, 面部粉刺 脓包很快消失, 面部血管膨胀, 黑色素消失, 使面部看起来更加白皙 红润, 也更加平滑完美 因此, 一些不法化妆品生产厂家利用糖皮质激素的上述特点, 将其掺入嫩肤 美白 祛痘类化妆品中 我国 化妆品安全技术规范 (2015 版 ) 和欧盟化妆品规程 (Directive 76/768/EEC) 均明确规定此类物质为化妆品禁用成分 性激素主要包括雄激素 雌激素和孕激素 雌激素是妇女卵巢产生的内分泌激素, 能促进女性发育成熟, 同时, 雌激素对皮肤状态也产生影响, 可令皮肤滋润也可促使乳房发育增大 一般来说, 女性体内分泌的雌性激素完全能满足女性皮肤的生理需要 然而, 不法化妆品生产者却在化妆品中添加雌性激素, 使自己的产品快速实现促进毛发生长 丰乳 美白 除皱和增加皮肤弹性等功能 激素可通过皮肤吸收, 长期使用添加激素的化妆品, 将会对消费者健康造成威胁 雌激素的过量使用会导致女性患乳腺癌和子宫肌瘤的发病率大大提高, 还可引起月经不调 色素沉着 黑斑 皮肤变薄和萎缩等不良反应 使用含有糖皮质类激素的化妆品后见效快, 皮肤明显变好, 但长期使用会导致皮肤出现干燥脱皮 红血丝 色素沉着等现象, 更为严重的是出现激素依赖性皮炎, 对含有激素的美容化妆品产生依赖性, 用之症状好转或消失, 停用后症状复发, 很难治愈, 给消费者带来精神和身体的严重伤害 目前, 我国已有针对化妆品中糖皮质激素的国家标准检测方法 GB/T 化妆品中四十一中糖皮质激素的测定液相色谱 / 串联质谱法和薄层层析法 和性激素国家标准检测方法 化妆品安全技术规范 2015 年版 2.4 雌三醇等 7 种组分 近年来, 不法分子不断变换添加手段, 转而添加标准外的成分来躲避监管, 此外, 标准的分散性给检验工作带来了诸多不便, 同一类型的检品往往需要采用两种标准分别对糖皮质激素和性激素进行检验, 为此, 受国家食品药品监督管理局和中国食品药品检定研究院委托, 开展化妆品中激素的通 19

20 用检测方法研究, 以强化技术支撑能力, 简化检验流程 提高检验效率, 为化妆品行业健康发展保驾护航 2 属性信息 1) 曲安西龙中文名称 : 曲安西龙 ; 英文名称 :Triamcinolone; 分子式 :C21H27FO6; 分子量 :394.18; CAS 号 : ; 图 1 曲安西龙结构 2) 中文名称 : 泼尼松龙 ; 英文名称 :Prednisolone; 分子式 :C21H28O5; 分子量 :360.19; CAS 号 : ; 图 2 泼尼松龙结构 3) 中文名称 : 氢化可的松 ; 英文名称 :Hydrocortisone; 分子式 :C21H30O5; 分子量 :362.21; CAS 号 : ; 图 3 氢化可的松结构 4) 中文名称 : 泼尼松 ; 英文名称 :Prednisone; 分子式 :C21H26O5; 分子量 :358.18;CAS 号 : ; 20

21 图 4 泼尼松结构 5) 中文名称 : 可的松 ; 英文名称 :Cortisone; 分子式 :C21H28O5; 分子量 :360.19;CAS 号 : ; 图 5 可的松结构 6) 中文名称 : 甲基泼尼松龙 ; 英文名称 :Methylprednisolone; 分子式 :C22H30O5; 分子量 :374.21;CAS 号 : ; 图 6 甲基泼尼松龙结构 7) 中文名称 : 倍他米松 ; 英文名称 :Betamethasone; 分子式 :C22H29FO5; 分子量 :392.19;CAS 号 : ; 图 7 倍他米松结构 8) 中文名称 : 地塞米松 ; 英文名称 :Dexamethasone; 分子式 :C22H29FO5; 分子量 :392.19;CAS 号 : ; 21

22 图 8 地塞米松结构 9) 中文名称 : 氟米松 ; 英文名称 :Flumethasone; 分子式 :C22H28F2O5; 分子量 :410.19; CAS 号 : ; 图 9 氟米松结构 10) 中文名称 : 倍氯米松 ; 英文名称 :Beclomethasone; 分子式 :C22H29ClO5; 分子量 :408.17;CAS 号 : ; 图 10 倍氯米松结构 11) 中文名称 : 曲安奈德 ; 英文名称 :Triamcinolone acetonide; 分子式 :C24H31FO6; 分子量 :434.21;CAS 号 : ; 图 11 曲安奈德结构 12) 中文名称 : 氟氢缩松 ; 英文名称 :Fludroxycortide; 分子式 :C24H33FO6; 分子量 :436.23;CAS 号 : ; 22

23 图 12 氟氢缩松结构 13) 中文名称 : 曲安西龙双醋酸酯 ; 英文名称 :Triamcinolone diacetate; 分子式 :C25H31FO8; 分子量 :478.20;CAS 号 : ; 图 13 曲安西龙双醋酸酯结构 14) 中文名称 : 泼尼松龙醋酸酯 ; 英文名称 :Prednisolone 21-acetate; 分子式 :C23H30O6; 分子量 :402.20;CAS 号 : ; 图 14 泼尼松龙醋酸酯结构 15) 中文名称 : 氟米龙 ; 英文名称 :Fluoromethalone; 分子式 :C22H29FO4; 分子量 :376.21;CAS 号 : ; 图 15 氟米龙结构 16) 中文名称 : 氢化可的松醋酸酯 ; 英文名称 :Hydrocortisone 21-acetate; 分子式 :C23H32O6; 分子量 :404.22;CAS 号 : ; 23

24 图 16 氢化可的松醋酸酯结构 17) 中文名称 : 地夫可特 ; 英文名称 :Deflazacort; 分子式 :C25H31NO6; 分子量 :441.22; CAS 号 : ; 图 17 地夫可特结构 18) 中文名称 : 氟氢可的松醋酸酯 ; 英文名称 : Fludrocortisone 21-acetate; 分子式 : C23H31FO6; 分子量 :422.21;CAS 号 : ; 图 18 氟氢可的松醋酸酯结构 19) 中文名称 : 泼尼松醋酸酯 ; 英文名称 :Prednisone 21-acetate; 分子式 :C23H28O6; 分 子量 :400.19;CAS 号 : ; 图 19 泼尼松醋酸酯结构 20) 中文名称 : 可的松醋酸酯 ; 英文名称 :Cortisone 21-acetate; 分子式 :C23H30O6; 分子量 :402.20;CAS 号 : ; 24

25 图 20 可的松醋酸酯结构 21) 中文名称 : 甲基泼尼松龙醋酸酯 ; 英文名称 :Methylprednisolone 21-acetate; 分子式 : C24H32O6; 分子量 :416.22;CAS 号 : ; 图 21 甲基泼尼松龙醋酸酯结构 22) 中文名称 : 倍他米松醋酸酯 ; 英文名称 :Betamethasone 21-acetate; 分子式 :C24H31FO6; 分子量 :434.21;CAS 号 : ; 图 22 倍他米松醋酸酯结构 23) 中文名称 : 布地奈德 ; 英文名称 :Budesonide; 分子式 :C25H34O6; 分子量 :430.24; CAS 号 : ; 图 23 布地奈德结构 24) 中文名称 : 氢化可的松丁酸酯 ; 英文名称 :Hydrocortisone 17-butyrate; 分子式 :C25H36O6; 分子量 :432.25;CAS 号 : ; 25

26 图 24 氢化可的松丁酸酯结构 25) 中文名称 : 地塞米松醋酸酯 ; 英文名称 :Dexamethasone 21-acetate; 分子式 :C24H31FO6; 分子量 :434.21;CAS 号 : ; 图 25 地塞米松醋酸酯结构 26) 中文名称 : 氟米龙醋酸酯 ; 英文名称 :Fluorometholone 17-acetate; 分子式 :C24H31FO5; 分子量 :418.22;CAS 号 : ; 图 26 氟米龙醋酸酯结构 27) 中文名称 : 氢化可的松戊酸酯 ; 英文名称 :Hydrocortisone 17-valerate; 分子式 :C26H38O6; 分子量 :446.27;CAS 号 : ; 图 27 氢化可的松戊酸酯结构 28) 中文名称 : 曲安奈德醋酸酯 ; 英文名称 :Triamcinolone acetonide acetate; 分子式 : C26H33FO7; 分子量 :476.22;CAS 号 : ; 26

27 图 28 曲安奈德醋酸酯结构 29) 中文名称 : 氟轻松醋酸酯 ; 英文名称 :Fluocinonide; 分子式 :C26H32F2O7; 分子量 :494.21;CAS 号 : ; 图 29 氟轻松醋酸酯结构 30) 中文名称 : 二氟拉松双醋酸酯 ; 英文名称 :Diflorasone diacetate; 分子式 :C26H32F2O7; 分子量 :494.21;CAS 号 : ; 图 30 二氟拉松双醋酸酯结构 31) 中文名称 : 倍他米松戊酸酯 ; 英文名称 :Betamethasone 17-valerate; 分子式 :C27H37FO6; 分子量 :476.26;CAS 号 : ; 图 31 倍他米松戊酸酯结构 32) 中文名称 : 泼尼卡酯 ; 英文名称 :Prednicarbate; 分子式 :C27H36O8; 分子量 :488.24;CAS 号 : ; 27

28 图 32 泼尼卡酯结构 33) 中文名称 : 哈西奈德 ; 英文名称 :Halcinonide; 分子式 :C24H32ClFO5; 分子量 :454.19;CAS 号 : ; 图 33 哈西奈德结构 34) 中文名称 : 阿氯米松双丙酸酯 ; 英文名称 :Alclomethasone dipropionate; 分子式 : C28H37ClO7; 分子量 :520.22;CAS 号 : ; 图 34 阿氯米松双丙酸酯结构 35) 中文名称 : 安西奈德 ; 英文名称 :Amcinonide; 分子式 :C28H35FO7; 分子量 :502.24; CAS 号 : ; 图 35 安西奈德结构 36) 中文名称 : 氯倍他索丙酸酯 ; 英文名称 :Clobetasol 17-propionate; 分子式 :C25H32ClFO5; 分子量 :466.19;CAS 号 : ; 28

29 图 36 氯倍他索丙酸酯结构 37) 中文名称 : 氟替卡松丙酸酯 ; 英文名称 :Fluticasone propionate; 分子式 :C25H31F3O5S; 分子量 :500.18;CAS 号 : ; 图 37 氟替卡松丙酸酯结构 38) 中文名称 : 莫米他松糠酸酯 ; 英文名称 :Mometasone furoate; 分子式 :C27H30Cl2O6; 分子量 :520.14;CAS 号 : ; 图 38 莫米他松糠酸酯结构 39) 中文名称 : 倍他米松双丙酸酯 ; 英文名称 :Betamethasone dipropionate; 分子式 : C28H37FO7; 分子量 :504.25;CAS 号 : ; 图 39 倍他米松双丙酸酯结构 40) 中文名称 : 倍氯米松双丙酸酯 ; 英文名称 :Beclmetasone dipropionate; 分子式 : C28H37ClO7; 分子量 :520.22;CAS 号 : ; 29

30 图 40 倍氯米松双丙酸酯结构 41) 中文名称 : 氯倍他松丁酸酯 ; 英文名称 :Clobetasone 17-butyrate; 分子式 :C26H32ClFO5; 分子量 :478.19;CAS 号 : ; 图 41 氯倍他松丁酸酯结构 42) 中文名称 : 睾酮 ; 英文名称 :Testosterone; 分子式 :C19H28O2; 分子量 :288.21;CAS 号 : ; 图 42 睾酮结构 43) 中文名称 : 孕酮 ; 英文名称 :Progesterone; 分子式 :C21H30O2; 分子量 :314.22;CAS 号 : ; 图 43 孕酮结构 44) 中文名称 : 甲基睾丸酮 ; 英文名称 :Methyltestosterone; 分子式 :C20H30O2; 分子量 :302.22;CAS 号 : ; 30

31 图 44 甲基睾酮结构 45) 中文名称 : 雌二醇 ; 英文名称 :Estradial; 分子式 :C18H24O2; 分子量 :272.18;CAS 号 : ; 图 45 雌二醇结构 46) 中文名称 : 雌三醇 ; 英文名称 :Estriol; 分子式 :C18H24O3; 分子量 :288.17;CAS 号 : ; 图 46 雌三醇结构 47) 中文名称 : 雌酮 ; 英文名称 :Estrone; 分子式 :C18H22O2; 分子量 :270.17;CAS 号 : ; 图 47 雌酮结构 48) 中文名称 : 己烯雌酚 ; 英文名称 :Diethylstilbestrol; 分子式 :C18H20O2; 分子量 :268.15;CAS 号 : ; 31

32 图 48 己烯雌酚结构 49) 中文名称 : 氟轻松 ; 英文名称 :Fluocinolone acetonide; 分子式 :C24H30F2O6; 分子量 :452.20;CAS 号 : ; 图 49 氟轻松结构 50) 中文名称 : 地索奈德 ; 英文名称 :Desonide 分子式 :C24H32O6; 分子量 :416.22;CAS 号 : ; 图 50 地索奈德结构 51) 中文名称 : 环索奈德 ; 英文名称 :Ciclesonide 分子式 :C32H44O7; 分子量 :554.71; CAS 号 : ; 图 51 环索奈德结构 52) 中文名称 : 卤美他松 ; 英文名称 :Halometasone 分子式 :C22H29ClF2O6; 分子量 :444.89;CAS 号 :

33 图 52 卤美他松结构 53) 中文名称 : 双氟可龙戊酸酯 ; 英文名称 :Diflucortolone valerate 分子式 :C27H36F2O5; 分子量 :478.25;CAS 号 : ; 图 53 双氟可龙戊酸酯结构 54) 中文名称 : 异氟泼尼松 ; 英文名称 :9-fluoroprednisolone 分子式 :C21H27FO5; 分子量 :378.18;CAS 号 : ; 图 54 异氟泼尼松结构 55) 中文名称 : 氯替泼诺 ; 英文名称 :Loteprednol etabonate 分子式 :C24H31ClO7; 分子量 :466.95;CAS 号 : ; 图 55 氯替泼诺结构 56) 中文名称 : 孕三稀酮 ; 英文名称 :Gestrinone 分子式 :C21H24O2; 分子量 :308.42;CAS 号 : ; 33

34 图 56 孕三稀酮结构 57) 中文名称 : 醋酸甲地孕酮 ; 英文名称 :Megestrol acetate 分子式 :C24H32O4; 分子量 :384.23;CAS 号 : ; 图 57 醋酸甲地孕酮结构 58) 中文名称 : 醋酸甲羟孕酮 ; 英文名称 :Medroxyprogesterone 17-acetate 分子式 :C24H34O4; 分子量 :386.53;CAS 号 : ; 图 58 醋酸甲羟孕酮结构 59) 中文名称 : 炔诺孕酮 ; 英文名称 :Norgestrel 分子式 :C21H28O2; 分子量 :312.21;CAS 号 : ; 图 59 炔诺孕酮结构 60) 中文名称 : 醋酸氯地孕酮 ; 英文名称 :Chlormadinone acetate 分子式 :C23H29ClO4; 分 子量 :404.17;CAS 号 : ; 34

35 图 60 醋酸氯地孕酮结构 61) 中文名称 : 己酸羟孕酮 ; 英文名称 :Hydroxyprogesterone caproate 分子式 :C27H40O4; 分子量 :428.29;CAS 号 : ; 图 61 己酸羟孕酮结构 62) 中文名称 : 氟尼缩松 ; 英文名称 :Flunisolide 分子式 :C24H31FO6; 分子量 :434.21; CAS 号 : ; 图 62 氟尼缩松结构 63) 中文名称 : 丙酸卤倍他索 ; 英文名称 :Halobetasol Propionate 分子式 :C25H31ClF2O5; 分子量 :484.96;CAS 号 : ; 图 63 氟尼缩松结构二 检测方法选择与优化 1. 检测方法的选择目前文献中报导的糖皮质激素及性激素类成分的检测方法一般包括高效液相色谱法 (HPLC) 气相色谱 - 质谱法 (GC-MS) 液相色谱 - 质谱法 (HPLC-MS) 高效液相色谱法 35

36 效率高 方便快捷 简便易用, 但是高效液相色谱法对 15 个以上组分的分离情况不理想, 受杂质干扰较大, 灵敏度不够, 并需要采用质谱法对阳性结果进行确证 GC-MS 方法虽然 灵敏度和特异性都很高, 可以满足分析的要求, 但衍生过程繁琐, 不利于样品的批量化处理 考虑到能用同一检测方法尽可能覆盖多的组分, 可以同时检测糖皮质激素及性激素, 所以选 择了方法灵敏 准确可靠 专一性好 检测组分多并可以同时进行阳性确证的高效液相色谱 - 质谱法作为方法研究制定的首选 2. 色谱柱的选择 由于本方法筛查的组成较多, 且有多对同分异构体, 分离难度较大, 为了确保筛查结果 的准确性, 本方法在制定过程中考察了不同高效液相色谱柱对筛查结果的影响 本研究考察 了资生堂 CAPCELL PAK AQ C18 (150mm 2.1mm,3µm) 色谱柱 Agilent ZORBAX SB-C18 (50mm 2.1mm,1.8µm) 色谱柱和 Shimadzu shim-pack XR-ODS Ⅲ( mm, 2.2μm) 三类色谱柱, 经过对比后发现具有细小粒径的填料的十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱 对本方法中 63 种糖皮质激素及性激素类成分均有较好的分离效果 在经过反复比较后, 决 定使用 Shimadzu shim-pack XR-ODS Ⅲ( mm,2.2μm) 色谱柱进行本项目的研究 3. 特征离子和定量离子的选择 本方法研究中使用了 AB Sciex 4500 Qtrap 对本方法涉及的激素类物质的特征离子和定 量离子进行优化选择, 最终选择了下表中的定量离子和特征离子对 编号 物质名称 母离子 (m/z) 子离子 (m/z) CE(V) 1 曲安西龙 * 泼尼松龙 * 氢化可的松 * 泼尼松 * 可的松 * 甲基泼尼松龙 * 倍他米松 * 地塞米松 * 氟米松 *

37 10 倍氯米松 * 曲安奈德 * 氟氢缩松 * 曲安西龙双醋酸酯 * 泼尼松龙醋酸酯 * 氟米龙 * 氢化可的松醋酸酯 * 地夫可特 * 氟氢可的松醋酸酯 * 泼尼松醋酸酯 * 可的松醋酸酯 * 甲基泼尼松龙醋酸酯 * 倍他米松醋酸酯 * 布地奈德 * 氢化可的松丁酸酯 * 地塞米松醋酸酯 * 氟米龙醋酸酯 * 氢化可的松戊酸酯 * 曲安奈德醋酸酯 * 氟轻松醋酸酯 * 二氟拉松双醋酸酯 * 倍他米松戊酸酯 *

38 32 泼尼卡酯 * 哈西奈德 * 阿氯米松双丙酸酯 * 安西奈德 * 氯倍他索丙酸酯 * 氟替卡松丙酸酯 * 莫米他松糠酸酯 * 倍他米松双丙酸酯 * 倍氯米松双丙酸酯 * 氯倍他松丁酸酯 * 氟轻松 * 地索奈德 * 环索奈德 * 卤美他松 * 戊酸双氟可龙 * 异氟泼尼松 * 丙酸卤美他松 * 氯替泼诺 * 氟尼缩松 * 睾酮 * 孕酮 * 甲睾酮 *

39 54 孕三烯酮 * 甲地孕酮 * 醋酸甲羟孕酮 * 炔诺孕酮 * 醋酸氯地孕酮 * 己酸羟孕酮 * 雌二醇 * 雌三醇 * 雌酮 * 己烯雌酚 * * 定量离子 4. 色谱条件的选择 在研究过程中我们对高效液相色谱 - 质谱法的色谱条件进行了研究 在比较了乙腈和甲 醇作为有机相后结果后, 发现乙腈作为有机相对待测化合物的分离效果明显好于甲醇, 所以 最终选择乙腈作为有机相 本研究中雌激素类物质如雌二醇 雌三醇 雌酮和己烯雌酚等 4 类成分正源响应较弱, 故采用负源的方式进行检测, 考虑到方法的便捷性, 能采用正负源同时采集的方式对 63 种 成分进行测定, 因此优先考虑使用纯水作为在水相 我们还比较了甲酸 乙酸作为水相对结 果的影响, 实验结果表明正源检测的化合物在纯水为水相时的离子响应强度大于以甲酸溶 液 乙酸溶液作为水相时的强度 从整体结果考虑, 本方法最终选择了乙腈 - 水体系作为流 动相 5. 提取和净化方法 研究发现超声提取法提取化妆品种的激素类物质可以取得较好的回收率, 为此我们考察 了超声提取 5min 15min 20min 条件下使用乙腈提取 63 种激素类物质的回收率, 结果表 明 20min 超声时间下回收率可以达到要求, 结合稳定性考察的结果, 最后选择常温 超声 20min 的提取条件可以满足本方法对 63 种激素类物质的检测要求 39

40 由于化妆品组成较复杂, 检测结果有可能受到化妆品基质的干扰, 所以方法制定过程中我们考察了不同的净化方法 我们研究了固相萃取法 (SPE) 方法对化妆品中糖皮质激素及性激素提取情况的影响, 使用 Waters Oasis HLB 固相萃取柱对膏霜基质化妆品中 63 种激素类物质在低 高浓度条件下的回收率进行考察, 结果表明使用固相萃取柱进行净化, 部分雌性激素如己烯雌酚 雌酮的回收率低于 50%, 通过进一步研究发现可能与净化所使用的絮凝剂 10% 亚铁氰化钾和 20% 乙酸锌溶液的金属离子与己烯雌酚 雌酮 雌三醇 雌二醇的酚羟基有应有关, 尝试了多种絮凝剂絮凝效果均不理想, 因此无法采用固相萃取的方式对样品进行净化处理 由于乙腈提取的成分较为复杂, 在遇到低比例有机相的流动相时易析出, 易造成色谱柱堵塞, 因此在提取后采用 50% 乙腈水对样品溶液进行适量稀释, 在不影响待测成分回收率的情况下, 可使部分乙腈提取的杂质析出后滤除, 能够同时起到保护色谱 减小溶剂效应 降低杂质对质谱响应影响的作用 三验证根据 关于印发化妆品中禁用物质和限用物质检测方法验证技术规范的通知 ( 国食药监许 [2010]455 号 )( 以下简称 规范 ), 对所建立方法进行了验证 1. 实验室内部方法验证 1.1 方法特异性分别考察膏霜类乳液类 面膜类 液态水基类 液态油基类五种典型剂型的化妆品空白和添加 63 种抗激素类物质后的色谱图和质谱图 如下图所示, 结果表明五种典型剂型的化妆品基质中存在的物质对本方法目标检测物质没有干扰 1~63 号分别为 : 泼尼松 泼尼松龙 异氟泼尼松 曲安西龙 倍他米松 甲基泼尼松龙 可的松 氢化可的松 曲安奈德 倍氯米松 氟米松 地塞米松 曲安西龙双醋酸酯 氟轻松 地索奈德 氟尼缩松 氢化可的松醋酸酯 醋酸氯地孕酮 泼尼松龙醋酸酯 氟氢缩松 卤美他松 泼尼松醋酸酯 氟氢可的松醋酸酯 氟米龙 睾酮 倍他米松醋酸酯 可的松醋酸酯 地夫可特 氢化可的松丁酸酯 布地奈德 地塞米松醋酸酯 甲基泼尼松龙醋酸酯 曲安奈德醋酸酯 甲睾酮 氟米龙醋酸酯 孕三烯酮 氟轻松醋酸酯 二氟拉松双醋酸酯 炔诺孕酮 氢化可的松戊酸酯 氯替泼诺 泼尼卡酯 哈西奈德 倍他米松戊酸酯 安西奈德 阿氯米松双丙酸酯 氯倍他索丙酸酯 丙酸卤倍他索 孕酮 莫米他松糠酸酯 醋酸甲地孕酮 氟替卡松丙酸酯 戊酸双氟可龙 倍氯米松双丙酸之酯 醋酸甲羟孕酮 倍他米松双丙酸酯 环索奈德 己酸羟孕酮 氯倍他松丁酸酯 己烯雌酚 雌酮 雌二醇 雌三醇 40

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48 水剂空白样品质谱图 ( 定量离子 ) 48

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56 水剂加标溶液质谱图 ( 定量离子 ) 56

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64 面膜空白样品质谱图 ( 定量离子 ) 64

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72 面膜加标溶液质谱图 ( 定量离子 ) 72

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80 乳液空白样品质谱图 ( 定量离子 ) 80

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88 乳液加标溶液质谱图 ( 定量离子 ) 88

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96 膏霜空白样品质谱图 ( 定量离子 ) 96

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102 102

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104 膏霜加标溶液质谱图 ( 定量离子 ) 104

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112 精油空白样品质谱图 ( 定量离子 ) 112

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120 精油加标溶液质谱图 ( 定量离子 ) 1.2 线性及线性范围在本方法条件下考察一定浓度范围内高效液相色谱 - 质谱测得的各被测物质定量离子峰面积对应浓度的线性相关性, 结果如下表所示 结果表明在本方法条件下, 检测响应值与样品中被测物质浓度在 2 至 60ng/mL 范围内线性相关性良好 (R ), 符合 化妆品中禁用物质和限用物质检测方法验证技术规范 要求 120

121 化妆水加标标准溶液线性范围和相关性 成分 回归方程 相关系数 线性范围 (ng /ml) 曲安西龙 y = 20622x 泼尼松龙 y = 39805x 氢化可的松 y = 28043x 泼尼松 y = 35973x 可的松 y = 31447x 甲基泼尼松龙 y = 44982x 倍他米松 y = 19687x 地塞米松 y = 25191x 氟米松 y = 24491x 倍氯米松 y = 11294x 曲安奈德 y = 27377x 氟氢缩松 y = x 曲安西龙双醋酸酯 y = 28977x 泼尼松龙醋酸酯 y = 14176x 氟米龙 y = 25189x 氢化可的松醋酸酯 y = 13571x 地夫可特 y = 17385x 氟氢可的松醋酸酯 y = x 泼尼松醋酸酯 y = 19612x 可的松醋酸酯 y = 24698x 甲基泼尼松龙醋酸酯 y = 34716x 倍他米松醋酸酯 y = x 布地奈德 y = 78543x 氢化可的松丁酸酯 y = 29939x 地塞米松醋酸酯 y = 11660x 氟米龙醋酸酯 y = x 氢化可的松戊酸酯 y = 28467x 曲安奈德醋酸酯 y = 30040x 氟轻松醋酸酯 y = 30310x 二氟拉松双醋酸酯 y = 17008x 倍他米松戊酸酯 y = 34468x 泼尼卡酯 y = 30827x 哈西奈德 y = x 阿氯米松双丙酸酯 y = 14140x 安西奈德 y = 30485x 氯倍他索丙酸酯 y = 37978x 氟替卡松丙酸酯 y = 38996x

122 莫米他松糠酸酯 y = 25082x 倍他米松双丙酸酯 y = 17140x 倍氯米松双丙酸酯 y = 36868x 氯倍他松丁酸酯 y = 13624x 氟轻松 y = 35347x 地索奈德 y = 30519x 环索奈德 y = 32012x 卤美他松 y = x 双氟可龙戊酸酯 y = 13848x 异氟泼尼松 y = 29808x 卤倍他索丙酸酯 y = 17693x 氯替泼诺 y = 81042x 睾酮 y = x 孕酮 y = 90106x 甲基睾丸酮 y = 86189x 孕三烯酮 y = x 醋酸甲地孕酮 y = x 醋酸甲羟孕酮 y = 66965x 炔诺孕酮 y = 30990x 醋酸氯地孕酮 y = 12136x 己酸羟孕酮 y = 66649x 氟尼缩松 y = 39341x 雌三醇 y = 13730x 雌二醇 y = x 雌酮 y = 49198x 己烯雌酚 y = 36042x 面膜加标标准溶液线性范围和相关性 成分 回归方程 相关系数 线性范围 (ng /ml) 曲安西龙 y = 24216x 泼尼松龙 y = 45061x 氢化可的松 y = 31087x 泼尼松 y = 40181x 可的松 y = 36050x 甲基泼尼松龙 y = 55239x 倍他米松 y = 21730x 地塞米松 y = 26127x 氟米松 y = 28514x 倍氯米松 y = 12495x 曲安奈德 y = 30920x

123 氟氢缩松 y = x 曲安西龙双醋酸酯 y = 28125x 泼尼松龙醋酸酯 y = 14613x 氟米龙 y = 24490x 氢化可的松醋酸酯 y = 15361x 地夫可特 y = 19404x 氟氢可的松醋酸酯 y = 10238x 泼尼松醋酸酯 y = 21048x 可的松醋酸酯 y = 25557x 甲基泼尼松龙醋酸酯 y = 36661x 倍他米松醋酸酯 y = x 布地奈德 y = 68960x 氢化可的松丁酸酯 y = 31451x 地塞米松醋酸酯 y = 11814x 氟米龙醋酸酯 y = x 氢化可的松戊酸酯 y = 33452x 曲安奈德醋酸酯 y = 30014x 氟轻松醋酸酯 y = 31172x 二氟拉松双醋酸酯 y = 18933x 倍他米松戊酸酯 y = 37646x 泼尼卡酯 y = 32258x 哈西奈德 y = x 阿氯米松双丙酸酯 y = 15932x 安西奈德 y = 29379x 氯倍他索丙酸酯 y = 37846x 氟替卡松丙酸酯 y = 38198x 莫米他松糠酸酯 y = 26441x 倍他米松双丙酸酯 y = 19523x 倍氯米松双丙酸酯 y = 34002x 氯倍他松丁酸酯 y = 16929x 氟轻松 y = 35766x 地索奈德 y = 31843x 环索奈德 y = 30854x 卤美他松 y = x 双氟可龙戊酸酯 y = 14743x 异氟泼尼松 y = 33572x 卤倍他索丙酸酯 y = 19711x 氯替泼诺 y = 76364x 睾酮 y = x 孕酮 y = 88766x

124 甲基睾丸酮 y = 79468x 孕三烯酮 y = x 醋酸甲地孕酮 y = x 醋酸甲羟孕酮 y = 70274x 炔诺孕酮 y = 34326x 醋酸氯地孕酮 y = 12398x 己酸羟孕酮 y = 71035x 氟尼缩松 y = 41838x 雌三醇 y = 18295x 雌二醇 y = 12157x 雌酮 y = 58864x 己烯雌酚 y = 39896x 乳液加标标准溶液线性范围和相关性 成分 回归方程 相关系数 线性范围 (ng /ml) 曲安西龙 y = 30378x 泼尼松龙 y = 54584x 氢化可的松 y = 40558x 泼尼松 y = 51466x 可的松 y = 45344x 甲基泼尼松龙 y = 69706x 倍他米松 y = 23844x 地塞米松 y = 25852x 氟米松 y = 27082x 倍氯米松 y = 12820x 曲安奈德 y = 35807x 氟氢缩松 y = x 曲安西龙双醋酸酯 y = 35640x 泼尼松龙醋酸酯 y = 19882x 氟米龙 y = 33753x 氢化可的松醋酸酯 y = 20923x 地夫可特 y = 27098x 氟氢可的松醋酸酯 y = 14191x 泼尼松醋酸酯 y = 28218x 可的松醋酸酯 y = 32865x 甲基泼尼松龙醋酸酯 y = 45563x 倍他米松醋酸酯 y = x 布地奈德 y = 88396x 氢化可的松丁酸酯 y = 44746x

125 地塞米松醋酸酯 y = 15508x 氟米龙醋酸酯 y = x 氢化可的松戊酸酯 y = 38433x 曲安奈德醋酸酯 y = 36411x 氟轻松醋酸酯 y = 38216x 二氟拉松双醋酸酯 y = 22973x 倍他米松戊酸酯 y = 43586x 泼尼卡酯 y = 39627x 哈西奈德 y = x 阿氯米松双丙酸酯 y = 22598x 安西奈德 y = 40163x 氯倍他索丙酸酯 y = 48683x 氟替卡松丙酸酯 y = 52558x 莫米他松糠酸酯 y = 37129x 倍他米松双丙酸酯 y = 25618x 倍氯米松双丙酸酯 y = 54570x 氯倍他松丁酸酯 y = 26760x 氟轻松 y = 44894x 地索奈德 y = 37644x 环索奈德 y = 51917x 卤美他松 y = x 双氟可龙戊酸酯 y = 25422x 异氟泼尼松 y = 42220x 卤倍他索丙酸酯 y = 24900x 氯替泼诺 y = 92185x 睾酮 y = x 孕酮 y = x 甲基睾丸酮 y = x 孕三烯酮 y = x 醋酸甲地孕酮 y = x 醋酸甲羟孕酮 y = x 炔诺孕酮 y = 39162x 醋酸氯地孕酮 y = 17333x 己酸羟孕酮 y = 91050x 氟尼缩松 y = 52238x 雌三醇 y = 11778x 雌二醇 y = x 雌酮 y = 42663x 己烯雌酚 y = 30530x

126 霜膏加标标准溶液线性范围和相关性 成分 回归方程 相关系数 线性范围 (ng /ml) 曲安西龙 y = 16197x 泼尼松龙 y = 33183x 氢化可的松 y = 23788x 泼尼松 y = 28948x 可的松 y = 24953x 甲基泼尼松龙 y = 43098x 倍他米松 y = 16446x 地塞米松 y = 18370x 氟米松 y = 20947x 倍氯米松 y = x 曲安奈德 y = 15849x 氟氢缩松 y = x 曲安西龙双醋酸酯 y = 20668x 泼尼松龙醋酸酯 y = 11139x 氟米龙 y = 18749x 氢化可的松醋酸酯 y = 11971x 地夫可特 y = 13501x 氟氢可的松醋酸酯 y = x 泼尼松醋酸酯 y = 16571x 可的松醋酸酯 y = 22152x 甲基泼尼松龙醋酸酯 y = 28155x 倍他米松醋酸酯 y = x 布地奈德 y = 66685x 氢化可的松丁酸酯 y = 33406x 地塞米松醋酸酯 y = 10147x 氟米龙醋酸酯 y = x 氢化可的松戊酸酯 y = 28620x 曲安奈德醋酸酯 y = 26255x 氟轻松醋酸酯 y = 26908x 二氟拉松双醋酸酯 y = 15309x 倍他米松戊酸酯 y = 32625x 泼尼卡酯 y = 28593x 哈西奈德 y = x 阿氯米松双丙酸酯 y = 14055x 安西奈德 y = 28656x 氯倍他索丙酸酯 y = 38057x 氟替卡松丙酸酯 y = 36779x

127 莫米他松糠酸酯 y = 25127x 倍他米松双丙酸酯 y = 17892x 倍氯米松双丙酸酯 y = 37680x 氯倍他松丁酸酯 y = 20533x 氟轻松 y = 32165x 地索奈德 y = 20364x 环索奈德 y = 33075x 卤美他松 y = x 双氟可龙戊酸酯 y = 16528x 异氟泼尼松 y = 23864x 卤倍他索丙酸酯 y = 19264x 氯替泼诺 y = 71990x 睾酮 y = x 孕酮 y = x 甲基睾丸酮 y = x 孕三烯酮 y = 92596x 醋酸甲地孕酮 y = x 醋酸甲羟孕酮 y = 80060x 炔诺孕酮 y = 30794x 醋酸氯地孕酮 y = x 己酸羟孕酮 y = 77624x 氟尼缩松 y = 35300x 雌三醇 y = 15761x 雌二醇 y = 44062x 雌酮 y = x 己烯雌酚 y = x 精油加标标准溶液线性范围和相关性 成分 回归方程 相关系数 线性范围 (ng /ml) 曲安西龙 y = 23567x 泼尼松龙 y = 44898x 氢化可的松 y = 31085x 泼尼松 y = 42352x 可的松 y = 35856x 甲基泼尼松龙 y = 54319x 倍他米松 y = 21655x 地塞米松 y = 27254x 氟米松 y = 27014x 倍氯米松 y = 12913x

128 曲安奈德 y = 28142x 氟氢缩松 y = x 曲安西龙双醋酸酯 y = 32495x 泼尼松龙醋酸酯 y = 17112x 氟米龙 y = 31801x 氢化可的松醋酸酯 y = 18496x 地夫可特 y = 19109x 氟氢可的松醋酸酯 y = 11750x 泼尼松醋酸酯 y = 24381x 可的松醋酸酯 y = 27494x 甲基泼尼松龙醋酸酯 y = 42989x 倍他米松醋酸酯 y = x 布地奈德 y = 70389x 氢化可的松丁酸酯 y = 31358x 地塞米松醋酸酯 y = 17247x 氟米龙醋酸酯 y = x 氢化可的松戊酸酯 y = 31772x 曲安奈德醋酸酯 y = 29532x 氟轻松醋酸酯 y = 27595x 二氟拉松双醋酸酯 y = 16600x 倍他米松戊酸酯 y = 37516x 泼尼卡酯 y = 32416x 哈西奈德 y = x 阿氯米松双丙酸酯 y = 13207x 安西奈德 y = 27333x 氯倍他索丙酸酯 y = 34908x 氟替卡松丙酸酯 y = 35455x 莫米他松糠酸酯 y = 24383x 倍他米松双丙酸酯 y = 20618x 倍氯米松双丙酸酯 y = 41438x 氯倍他松丁酸酯 y = 21385x 氟轻松 y = 35892x 地索奈德 y = 32103x 环索奈德 y = 38257x 卤美他松 y = x 双氟可龙戊酸酯 y = 20027x 异氟泼尼松 y = 35656x 卤倍他索丙酸酯 y = 19802x 氯替泼诺 y = 77212x 睾酮 y = x

129 孕酮 y = x 甲基睾丸酮 y = 82853x 孕三烯酮 y = 65314x 醋酸甲地孕酮 y = x 醋酸甲羟孕酮 y = 82894x 炔诺孕酮 y = 31254x 醋酸氯地孕酮 y = 14625x 己酸羟孕酮 y = 79606x 氟尼缩松 y = 42248x 雌三醇 y = 18144x 雌二醇 y = x 雌酮 y = 19462x 己烯雌酚 y = 37675x 精密度 日内精密度 考察水剂 乳剂 膏霜剂 精油 面膜 5 种基质高 低浓度同一天内连续六次测定被 测物质含量, 结果表明本方法的日内精密度良好, 见下表 五种基质加标日内精密度 化合物 浓度化妆水面膜乳液膏霜精油 (ng/ml) RSD(%) RSD(%) RSD(%) RSD(%) RSD(%) 曲安西龙 泼尼松龙 氢化可的松 泼尼松 可的松 甲基泼尼松龙 倍他米松 地塞米松 氟米松

130 倍氯米松 曲安奈德 氟氢缩松 曲安西龙双醋酸 酯 泼尼松龙醋酸酯 氟米龙 氢化可的松醋酸 酯 地夫可特 氟氢可的松醋酸 酯 泼尼松醋酸酯 可的松醋酸酯 甲基泼尼松龙醋 酸酯 倍他米松醋酸酯 布地奈德 氢化可的松丁酸 酯 地塞米松醋酸酯 氟米龙醋酸酯 氢化可的松戊酸 酯 曲安奈德醋酸酯 氟轻松醋酸酯

131 二氟拉松双醋酸 酯 倍他米松戊酸酯 泼尼卡酯 哈西奈德 阿氯米松双丙酸 酯 安西奈德 氯倍他索丙酸酯 氟替卡松丙酸酯 莫米他松糠酸酯 倍他米松双丙酸 酯 倍氯米松双醋酸 酯 氯倍他松丁酸酯 氟轻松 地索奈德 环索奈德 卤美他松 双氟可龙戊酸酯 异氟泼尼松 卤美他松丙酸酯 氯替泼诺

132 睾酮孕酮甲基睾丸酮孕三烯酮醋酸甲地孕酮醋酸甲羟孕酮炔诺孕酮醋酸氯地孕酮己酸羟孕酮氟尼缩松雌三醇雌二醇雌酮己烯雌酚

133 1.4 回收率实验 霜膏 乳液 面膜 化妆水取不同剂型空白样品 0.2g 于 10mL 比色管中, 加入混合对照品储备液, 制成高 低两种浓度, 每个浓度制备 6 份, 进行加标回收率实验 测得峰面积分别代入随行的基质标准曲线, 计算测得量, 然后除以理论加入量, 结果见下表 精油取空白样品 0.2g 于 10mL 比色管中, 加入混合对照品储备液 (70% 乙腈水配制 ), 制成高 低两种浓度, 每个浓度制备 6 份, 进行加标回收率实验 测得峰面积分别代入随行的基质标准曲线, 计算测得量, 然后除以理论加入量, 获得方法回收率, 结果见下表 从结果中可以看出, 个别成分在定量下限的回收率略超出规定范围, 这可能是由于线性回归时在小数值区域较大的相对误差引起的或者基线的波动对于定量下限成分的响应值有一定的影响有关, 其余成分的回收率基本满足 规范 的要求 成分 曲安西龙 泼尼松龙 氢化可的松 加入量 (ng) 化妆水 回收率 (%) RSD (%) 五种基质添加激素类物质回收率 面膜 回收率 (%) RSD (%) 乳液 回收率 (%) RSD (%) 膏霜 回收率 (%) RSD (%) 精油回收率 (%) RSD(%) 泼尼松

134 可的松 甲基泼尼松龙 倍他米松 地塞米松 氟米松 倍氯米松 曲安奈德 氟氢缩松 曲安西龙双醋酸酯 泼尼松龙醋酸酯 氟米龙 氢化可的松醋酸酯

135 地夫可特 氟氢可的松醋酸酯 泼尼松醋酸酯 可的松醋酸酯 甲基泼尼松龙醋酸 酯 倍他米松醋酸酯 布地奈德 氢化可的松丁酸酯 地塞米松醋酸酯 氟米龙醋酸酯 氢化可的松戊酸酯 曲安奈德醋酸酯

136 氟轻松醋酸酯 二氟拉松双醋酸酯 倍他米松戊酸酯 泼尼卡酯 哈西奈德 阿氯米松双丙酸酯 安西奈德 氯倍他索丙酸酯 氟替卡松丙酸酯 莫米他松糠酸酯 倍他米松双丙酸酯 倍氯米松双丙酸酯

137 氯倍他松丁酸酯 氟轻松 地索奈德 环索奈德 卤美他松 双氟可龙戊酸酯 异氟泼尼松 卤美他松丙酸酯 氯替波诺 睾酮 孕酮 甲基睾丸酮