(10 2.1mm, 3µm) 2 根规格不同的 C18 色谱柱对 41 种激素成分的分离效果结果表明, 前者对 41 中组分中色谱保留行为非常相似的物质能实现更好的分离, 且由于前者粒径小, 能获得更高的柱效同时, 由于 Accela 600 液相泵系统耐压能力强, 可使用高流速而大大减少色谱

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绪鲍
7 years ago
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1 应用文献 Note:CM0065 TSQ Quantum Access Max 三重四极杆液质联用系统同时定量化妆品中 41 种糖皮质激素江峥邓桂凤 (Thermo Fisher Scientific, Shanghai, China) 关键词 TSQ Quantum Access Max H-SRM 糖皮质激素化妆品非法添加引言糖皮质激素对皮肤具有一定的嫩白作用, 短期内使用含有糖皮质激素的化妆品可使皮肤光滑细腻红润白嫩, 有较好的美容效果 [1] 但长期使用, 通过皮肤的吸收则可能引起全身的副作用, 导致面部皮肤损害骨质疏松肌肉萎缩生长发育迟缓诱发或加重感染和消化性溃疡情绪异常代谢紊乱等各种不良反应我国化妆品卫生标准 [2] 化妆品卫生规范 [3] 和欧盟化妆品规程 (Directive 76/768/EEC) [4] 中均明确规定, 糖皮质激素雌激素雄激素孕激素等激素为化妆品中禁用物质化妆品中激素的检验对于严格控制化妆品的产品质量, 确保化妆品的使用安全, 保障人民身体健康具有重要的意义然而, 近年来化妆品导致的皮肤损害新闻时有报道, 且有增加趋势 2005 年全国化妆品皮肤病临床调查共检测到化妆品皮肤病 1053 例, 其中伪劣化妆品中添加的糖皮质激素导致的激素依赖性皮炎等, 占有一定比重, 是临床中不容忽视的问题 [5] 化妆品的种类繁多且成分复杂, 对其中所含的激素进行检验需要灵敏度高和特异性强的分析方法目前化妆品中激素的检测方法主要有高效液相色谱法 [6-8] 薄层色谱法 [9] 气质联用法 [10] 液质联用法 [11] 等, 其中液质联用检测糖皮质激素准确快速灵敏度高本文采用 Thermo scientific TSQ Quantum Access Max 三重四极杆质谱系统, 建立了同时定量爽肤水和精华油中 41 种糖皮质激素的液质联用法, 最低定量限为 0.5ng/ml, 检测限为 0.1ng/ml 该方法简便快速特异性强且灵敏度高, 可应用于化妆品的实际检测实验方法仪器方法色谱系统 :Accela 600 快速液相色谱系统色谱柱 :Hypersil Gold C18 (50 2.1mm, 1.9µm) 流动相 : 水 ( 含 0.1% 甲酸 )/ 乙腈 ( 含 0.1% 甲酸 ) 流速 :400µL/min; 进样量 :10µL 梯度条件 : 时间 (min) 乙腈 (%) 0.1% 甲酸 (%) 质谱系统 :TSQ Quantum Access Max 三重四极杆质谱条件 : 离子化方式 :HESI-Ⅱ 极性模式 : 正离子雾化温度 :300 鞘气 :40 arb 辅助气 :15 arb 离子传输管温度 :300 质谱扫描参数 : 扫描方式 :t-srm 扫描循环时间 :0.3 s 分辨率 :Q1 分辨率分别设置为 0.4 和 0.7 FWHM 标准曲线样品及基质样品的配制取含 41 种糖皮质激素的混合对照品溶液, 各组分浓度均为 0.5 µg/ml, 稀释至 0.5ng/mL 1.0ng/ml 2.5ng/ml 5.0ng/ml 10ng/ml 25ng/ml 50ng/ml 100ng/ml, 作为标准曲线工作样品分别取空白爽肤水及精华液基质溶液, 过滤膜后, 配制成含 20% 乙腈的基质溶液, 并以此基质溶液稀释样品至 0.1ng/mL 和 0.5ng/mL 结果与讨论色谱条件的优化色谱柱的选择 : 分别考察了 Hypersil Gold C18 (50 2.1mm, 1.9µm) 和 Hypersil ODS C18 1

2 (10 2.1mm, 3µm) 2 根规格不同的 C18 色谱柱对 41 种激素成分的分离效果结果表明, 前者对 41 中组分中色谱保留行为非常相似的物质能实现更好的分离, 且由于前者粒径小, 能获得更高的柱效同时, 由于 Accela 600 液相泵系统耐压能力强, 可使用高流速而大大减少色谱分离所需时间 ( 见图 1) 流动相及洗脱条件的选择 : 分别考察了甲醇 / 水 (0.1% 甲酸 ) 乙腈/ 水 (0.1% 甲酸 ) 等流动相系统对于 41 种激素成分的分离效果结果表明, 采用乙腈 (0.1% 甲酸 )/ 水 (0.1% 甲酸 ) 系统进行梯度洗脱更有利于 41 种激素的色谱分离考虑到化妆品基质的影响, 延后目标组分的保留时间可减小基质的干扰, 因此降低初始流动相中乙腈的比例至 20%, 得到的谱图较为理想 ( 见图 2) 图 1: 不同规格色谱柱的选择 : 上图为柱长 10cm 的色谱柱, 下图为柱长 5cm 的色谱柱图 2: 不同初始流动相比例的选择 : 上图为 30% 乙腈为初始流动相比例的 100ng/ml 对照品的总离子流图 ; 下图为 20% 乙腈为初始流动相比例的 100ng/ml 对照品的总离子流图质谱条件的优化 [12] 根据待测糖皮质激素分子结构及参考国标, 选择 ESI(+) 作为离子化模式, 将 0.5μg/ml 的标准液通过蠕动泵连续进样, 由 TSQ Tune 质谱参数优化软件自动获得最佳的子离子碰撞能量及透镜电压最终所选择的母离子特征离子和碰撞能量详见表 1 图 3 为部分糖皮质激素的提取离子流图 (0.5ng/mL) 2

3 表 1: 离子对信息 : 母离子特征离子碰撞能量和扫描时间 No. 化合物母离子子离子 T-lens 保留时间碰撞能量起始时间终止时间 1 曲安西龙泼尼松龙氢化考的松泼尼松可的松甲基泼尼松龙倍他米松地塞米松氟米松倍氯米松曲安奈德氟氢缩松曲安西龙双醋酸酯泼尼松龙醋酸酯氟米龙氢化可的松醋酸酯地夫可特氟氢可的松醋酸酯泼尼松醋酸酯可的松醋酸酯甲基泼尼松龙醋酸倍他米松醋酸酯地塞米松醋酸酯布地奈德氢化可的松丁酸酯氟米龙醋酸酯氢化可的松戊酸酯曲安奈德醋酸酯氟氢松醋酸酯二氟拉松双醋酸酯

4 倍他米松戊酸酯哈西奈德泼尼卡酯安西奈德阿氯米松双丙酸酯氯倍他索丙酸酯氟替卡松丙酸酯莫米他松康酸酯倍他米松双丙酸酯倍氯米松双丙酸酯氯倍他松丁酸酯方法学考察灵敏度及线性 : 将标准曲线样品 (0.5ng/ml 1.0ng/ml 2.5ng/ml 5.0ng/ml 10ng/ml 25ng/ml 50ng/ml 100ng/ml) 依次进样, 以峰面积对浓度绘制标准曲线, 各激素成分在 ng/ml 范围内的线性相关系数大于 0.99( 见表 2); 基质中各种激素的最低检出限为 0.1ng/ml, 最低定量限为 0.5ng/mL 精密度 : 取 0.5ng/ml 基质加标溶液重复进样 5 次, 各色谱峰保留时间稳定, 精华液基质中各组分峰面积的 RSD 9.74%( 见表 2); 爽肤水基质中各组分峰面积的 RSD 9.77%( 见表 2) 结果表明该方法稳定可靠 4

5 图 3: 部分糖皮质激素的提取离子流图 (0.5ng/mL) 表 2: 各激素成分的线性及重现性 No. 化合物标准曲线权重 1/x R2 重现性 0.5ng/mL 精华液爽肤水 1 曲安西龙 y= x % 0.73% 2 泼尼松龙 y= x % 1.35% 3 氢化考的松 y= x % 2.83% 4 泼尼松 y= x % 2.50% 5 可的松 y= x % 2.81% 6 甲基泼尼松龙 y= x % 1.51% 7 倍他米松 y= x % 3.43% 8 地塞米松 y= x % 3.73% 9 氟米松 y= x % 3.51% 10 倍氯米松 y= x % 3.95% 11 曲安奈德 y= x % 6.95% 12 氟氢缩松 y= x % 9.49% 13 曲安西龙双醋酸酯 y= x % 1.65% 14 泼尼松龙醋酸酯 y= x % 9.63% 15 氟米龙 y= x % 8.39% 16 氢化可的松醋酸酯 y= x % 1.59% 17 地夫可特 y= x % 2.15% 18 氟氢可的松醋酸酯 y= x % 7.30% 19 泼尼松醋酸酯 y= x % 6.28% 20 可的松醋酸酯 y= x % 4.42% 21 甲基泼尼松龙醋酸 y= x % 3.56% 22 倍他米松醋酸酯 y= x % 8.20% 23 布地奈德 y= x % 3.29% 5

6 24 氢化可的松丁酸酯 y= x % 3.87% 25 地塞米松醋酸酯 y= x % 3.05% 26 氟米龙醋酸酯 y= x % 2.59% 27 氢化可的松戊酸酯 y= x % 4.87% 28 曲安奈德醋酸酯 y= x % 6.65% 29 氟氢松醋酸酯 y= x % 1.36% 30 二氟拉松双醋酸酯 y= x % 0.62% 31 倍他米松戊酸酯 y= x % 9.77% 32 泼尼卡酯 y= x % 3.33% 33 哈西奈德 y= x % 8.16% 34 阿氯米松双丙酸酯 y= x % 2.63% 35 安西奈德 y= x % 2.24% 36 氯倍他索丙酸酯 y= x % 6.79% 37 氟替卡松丙酸酯 y= x % 2.44% 38 莫米他松康酸酯 y= x % 5.15% 39 倍他米松双丙酸酯 y= x % 5.50% 40 倍氯米松双丙酸酯 y= x % 1.33% 41 氯倍他松丁酸酯 y= x % 1.79% 不同分辨率设置对方法灵敏度的影响以精华液基质样品为例, 考察仪器分辨率设置对灵敏度的影响 : 下图中同行左侧色谱图为 0.7FWHM 条件下获得, 右侧为 0.4FWHM 条件下获得图 4:0.7 及 0.4FWHM 分辨率下精华液中部分糖皮质激素的提取离子流图 (0.2ng/mL) 6

7 结论本实验应用 Thermo Scientific TSQ Quantum Access Max 三重四极杆液质联用系统, 建立了 41 种糖皮质激素同时测定的方法, 以基质样品为主考察了方法的灵敏度及重现性, 同时考察了仪器不同分辨率设置对化合物检测的影响本方法对化妆品基质中 41 种糖皮质激素的定量下限为 0.5ng/mL, 最低检测限可达 0.1ng/mL 通过提高 Q1 的分辨率能有效降低基质干扰, 提高部分化合物的灵敏度分别以爽肤水空白基质精华液空白基质与对照液进样比较, 由色谱图可看出所建立的方法特异性高, 能用于化妆品中 41 种糖皮质激素的检测分别在爽肤水基质精华液基质中添加 41 种糖皮质激素, 浓度均为 0.5ng/mL, 各连续重复进样 5 针方法重现性良好 TSQ Quantum Access Max 三重四极杆液质联用系统配有可加热的电喷雾电离源聚焦离子束的透镜组件 90 度弯曲碰撞池等, 可有效提高信号响应, 并降低中性噪音, 是化妆品中痕量非法添加成分检测的最佳选择参考文献 [1] 郑星泉, 周淑玉, 周世伟. 化妆品卫生检验手册. 北京 : 化学工业出版社,2003:294 [2] GB [3] 中华人民共和国卫生部. 化妆品卫生规范. 北京 : 中华人民共和国卫生部,2002 [4] 欧盟化妆品规程 (Directive 76/768/EEC),2000 [5] 房军, 赖维, 王学民, 李虹, 李德如, 刘玮年全国化妆品皮肤病 1053 例临床调查及分析. 中国美容医学. 2007, 16(3). [6] 吴大南, 郑和辉, 李洁. 高效液相色谱法检测化妆品中 6 种糖皮质激素. 中国卫生检验杂志. 2006, 16(3): 309. [7] 王超, 马强, 王星. 反相高效液相色谱法同时测定化妆品中的 16 种激素. 色谱,2006,24(6): 654. [8] 赵珊, 吴大南, 王鹏. 高效液相色谱法同时测定化妆品中七种性激素. 色谱,2004,22(3): 267 [9] 王毓荣, 单琴. 薄层层析法检测化妆品中部分雌性激素. 中国公共卫生. 1997,12: 749. [10] 吴维群, 沈朝烨, 杨玉林, 张韵. GC-MS 联用技术检测水性化妆品中性激素成分的方法研究. 环境与职业医学,2004,21(04): 307. [11] 夏瑞, 车宝泉, 张喆. 液相色谱 - 质谱法同时鉴别中药制剂中的 15 种糖皮质激素. 色谱,2007,25(6): 926 [12] GB/T ANCM /3 4 Page 3 of 8 Page 4 of 8

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