科技广场技公司 ;MULTIFUGE X1 高速离心机, 美国 Thermo Fisher 科技有限公司 ;KQ-300DB 超声波清洗器, 昆山市超声仪器有限公司,MV5 自动浓缩仪, 北京莱伯泰科仪器股份有限公司 1.2 标准溶液配制标准储备液 : 分别称取普鲁卡因氯普鲁卡因普鲁卡因胺辛

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克倩蒲
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1 固相萃取与液相色谱质谱联用技术测定化妆品中 7 种局部麻醉药 ( 浙江省食品药品检验研究院, 浙江杭州 ) 摘要 : 建立了固相萃取与液相色谱质谱联用技术同时测定化妆品中 7 种局部麻醉药普鲁卡因氯普鲁卡因普鲁卡因胺辛可卡因利多卡因丁卡因苯佐卡因的方法样品经体积分数为 1% 三氯乙酸 - 乙腈提取, 固相萃取净化, 液相色谱分离, 选择特征离子多反应监测 (MRM) 扫描模式测定, 采用标准曲线法定量结果表明,7 种局部麻醉药在 0.43~137 μg/ L 范围内均呈良好的线性关系, 相关系数均大于 0.99, 检出限为 0.86~1.38 μg/kg, 加标回收率为 80.1%~103.1%, 相对标准偏差 RSD 小于 5%(n=5) 关键词 : 化妆品 ; 局麻药 ; 固相萃取 ; 液质联用中图分类号 :TQ658 文献标识码 :A 文章编号 : (2017) DOI: /j.cnki.dc 局部麻醉药是一类能在用药局部可逆性的阻断感觉神经冲动发生与传递的药品, 简称局麻药 [1] 目前常用局麻药可分为酯类和酰胺类, 芳酸酯类如普鲁卡因苯佐卡因丁卡因 ; 酰胺类如利多卡因 [2] 将大量麻醉药品涂抹到皮肤上, 可能产生较高的血药浓度, 导致心跳不规则癫痫发作及昏迷 [3] 在我国, 麻醉药是禁止在化妆品中使用的成分, 化妆品安全技术规范 (2015 年版 ) 也将普鲁卡因类局麻药列为禁用物质 [4] 化妆品中非法添加麻醉药对消费者健康造成危害, 健全化妆品中局部麻醉药的检测方法刻不容缓目前对于局部麻醉药的检测方法主要有液相色谱法 [5,6] 气相色谱法 [7] [8] 气质联用法等, 但化妆品不同于血液样品和水产品, 基质较为复杂, 组分干扰多, 常规检测方法灵敏度较低基于此, 笔者建立了化妆品中局部麻醉药的固相萃取 - 液相色谱质谱联用的检测方法, 以期为化妆品中局部麻醉药的监督监测提供一定的技术支持 1 实验部分 1.1 试剂与仪器甲酸甲醇乙腈正己烷, 色谱纯, 德国默克公司 ; 三氯乙酸氨水, 分析纯, 国药集团化学试剂有限公司 ; 盐酸普鲁卡因胺 ( 批号 :WXBC2443V, 质量分数 100%), 美国西格玛奥德里奇公司 ; 盐酸普鲁卡因 ( 批号 :P755150, 质量分数 98.2%) 和辛可卡因 ( 批号 :J01022, 质量分数 98.2%), 加拿大 TRC 公司 ; 盐酸丁卡因 ( 批号 :C , 质量分数 100%), 德国 Dr. Ehrenstorfer 公司 ; 盐酸氯普鲁卡因 ( 批号 : , 质量分数 99.8%) 利多卡因( 批号 : , 质量分数 99.8%) 苯佐卡因( 批号 : , 质量分数 98.2%), 中国食品药品检定研究院 1260-G6490QQQ 液相色谱 - 质谱联用仪, 美国安捷伦科收稿日期 : 作者简介 : 王欢 (1989-), 女, 安徽人, 助理工程师, 硕士 30 Vol.40 No.9 Sep. 2017

2 科技广场技公司 ;MULTIFUGE X1 高速离心机, 美国 Thermo Fisher 科技有限公司 ;KQ-300DB 超声波清洗器, 昆山市超声仪器有限公司,MV5 自动浓缩仪, 北京莱伯泰科仪器股份有限公司 1.2 标准溶液配制标准储备液 : 分别称取普鲁卡因氯普鲁卡因普鲁卡因胺辛可卡因利多卡因丁卡因苯佐卡因对照品约 50 mg( 精确到 g) 于 50 ml 容量瓶中, 甲醇溶解并定容至刻度, 得到 1 g/l 局麻药标准储备液取该标准储备液一定量用甲醇稀释成约 100 μg/l 的混合标准中间工作液标准工作液 : 称取基质空白 0.5 g 5 份, 分别准确移取 0.05,0.1,1,5,10 ml 100 μg/l 的 7 种局麻药混合标准中间工作液, 同样品测定步骤同法处理, 甲醇定容至 10 ml 得质量浓度为 0.5,1,10,50,100 μg/l 的系列混合标准工作液 [5] 1.3 液相色谱 - 质谱条件色谱条件 ZORBAX SB-C18 色谱柱 (2.1 mm 10 mm,1.8 μm), 柱温 :30, 流速 :0.1 ml/min, 进样量 :1 μl, 流动相 : 甲醇 -0.1% 甲酸梯度洗脱程序见表 1 所示表 1 流动相梯度洗脱程序 Tab.1 Gradient program of the mobile phase φ/% t / min 甲醇 0.1% 甲酸质谱条件离子化方式 : 电喷雾离子源 (ESI); 扫描方式 : 正离子扫描 ; 检测方式 : 多反应监测模式 (MRM); 毛细管温度 :350 ; 鞘气流速 :10 L/min; 离子源电压 :4 kv 主要质谱参数见表 2 表 2 主要质谱参数 Tab.2 Main parameters of the mass-spectrometry 名称母离子 /(m z -1 ) 保留时间 /min 子离子 /(m z -1 ) 普鲁卡因胺 /120 普鲁卡因 /120 氯普鲁卡因 /100 名称母离子 /(m z -1 ) 保留时间 /min 子离子 /(m z -1 ) 利多卡因 /58 苯佐卡因 /120 辛可卡因 /215 丁卡因 / 样品处理样品制备称取化妆品 0.5 g 于 15 ml 具塞刻度离心管中, 加入 8 ml 体积分数为 1% 三氯乙酸和 2 ml 乙腈, 涡旋 1 min 超声 10 min 后加入乙腈饱和正己烷 2 ml, 涡旋混匀, 超声 10 min r/min 离心 5 min 后取下层液体净化净化 3 ml 甲醇 5 ml 体积分数为 1% 三氯乙酸活化 PCX 固相萃取柱, 上样完成后, 依次用 3 ml 体积分数为 1% 三氯乙酸 3 ml 体积分数为 1% 甲酸甲醇淋洗, 弃洗脱液后再用 10 ml 体积分数为 5% 氨水甲醇洗脱收集洗脱液,40 氮吹浓缩至干, 甲醇溶解定容至 10 ml, 经 0.22 μm 滤膜过滤供液相色谱 - 质谱测定 2 结果与讨论续表 2.1 流动相的选择 7 种局部麻醉药结构中含有酰胺基团, 均有一定极性, 在 C18 色谱柱上可以有效分离笔者考察了甲醇 - 水甲醇 mol/l 乙酸铵甲醇 -0.1% 甲酸为流动相根据峰型和响应等, 最终选用甲醇 -0.1% 甲酸为流动相进行梯度分析, 得到了较好的峰型, 特征离子峰强度较佳 7 种局部麻醉药的二级质谱图见图样品前处理条件优化提取溶剂的选择化妆品主要成分为水和脂类等, 加入缓冲溶液 (ph=9.2 的 Tris-HCl 缓冲溶液 ph=7.0 的磷酸氢二钠和磷酸二氢钠缓冲溶液 ph=4.8 的乙酸 - 乙酸钠缓冲溶液 ) 可以改变基质的酸碱性, 提高目标物在固相萃取中的萃取效率, 有利于质谱分离笔者考察了不同 ph( ) 缓冲溶 [4,9] 液体系及体积分数为 1% 三氯乙酸溶液对固相萃取的影响结果表明,pH=9.2 的缓冲溶液在饱和正己烷脱脂过程中会产生乳化, 影响萃取效率 ; 苯佐卡因在 ph=7.0 的缓冲溶液条件下回收率偏低, 故实验选择加入 8 ml 体积分数为 1% 三氯乙酸溶液稀释后提取净化第 40 卷 2017 年第 9 期 31

3 普鲁卡因胺普鲁卡因氯普鲁卡因利多卡因苯佐卡因辛可卡因丁卡因图 1 7 种局部麻醉药的二级质谱图 Fig.1 Product ion spectra in MRM mode of 7 kinds of local anesthetics 32 Vol.40 No.9 Sep. 2017

4 科技广场固相萃取柱的选择局麻剂在化妆品中属禁用组分, 且化妆品样品基质复杂干扰物质多笔者考察了 HLB 和 PCX 柱不同固相萃取条件的萃取效果, 结果表明采用 HLB 固相萃取柱, 可能由于脂溶性杂质的吸附, 导致萃取效率偏低, 而 PCX 柱中, 体积分数为 1% 三氯乙酸溶液有良好的破乳效果, 回收率均可达到要求 2.3 标准曲线和检出限采用 MRM 模式对标准工作液进行定量分析, 以质量浓度为横坐标, 峰面积为纵坐标, 建立回归方程结果表明, 在 0.43~137.0 μg/l 质量浓度范围内线性良好, 线性范围及检出限见表 3 表 3 7 种组分的回归方程相关系数线性范围和检出限 Tab.3 Regression equation, correlation coefficient, linearity range and limit of detection for the seven components 物质回归方程相关系数线性范围 /(μg L -1 ) 检出限 /(μg kg -1 ) 普鲁卡因胺 Y= X ~ 普鲁卡因 Y= X ~ 氯普鲁卡因 Y= X ~ 利多卡因 Y= X ~ 苯佐卡因 Y=7161.3X ~ 辛可卡因 Y= X ~ 丁卡因 Y= X ~ 精密度和回收率选取空白样品分别做低 ( 约 1 μg/l) 中( 约 10 μg/l) 高 ( 约 100 μg/l)3 个质量浓度的基质加标样品, 平行制备 5 份, 按 1.4 样品前处理方法制备待测样品, 标准曲线法定量, 计算回收率, 结果如表 4 所示由表 4 可以看出,7 种组分的平均回收率为 80.1%~103.1%,RSD<5%, 表明方法具有较好的准确度和精密度表 4 7 种组分的回收率和 RSD (n=5) Tab.4 Results of spiked recoveries and RSD for seven components (n=5) 组分添加量 /ng 回收率 /% RSD/% 普鲁卡因胺普鲁卡因氯普鲁卡因利多卡因续表组分添加量 /ng 回收率 /% RSD/% 苯佐卡因辛可卡因丁卡因样品测定经体积分数为 1% 三氯乙酸乙腈提取, 正己烷除脂, 经 PCX 柱固相萃取净化, 液相色谱分离, 选择特征离子多反应监测 (MRM) 扫描模式测定, 对市售抽检的膏霜精油类产品进行分析测定, 均未检出麻醉药 3 结论建立了同时测定化妆品中 7 种局麻剂的固相萃取与液相色谱质谱联用技术在 0.43~137 μg/l 质量浓度范围内,7 种局麻药的峰面积与质量浓度呈良好的线性关系, 平均回收率 80.1%~103.1%, 方法检出限为 0.86~1.38 μg/kg 该方法灵第 40 卷 2017 年第 9 期 33

5 敏度高准确分离效果佳, 线性关系好, 测试结果稳定, 可为测定化妆品中禁用局部麻醉剂的日常检验提供参考参考文献 : [1] 李士通, 庄心良. 局部麻醉药 [M]. 上海 : 世界图书出版公司,2009. [2] 刘晓锋, 黄克建, 林翠梧, 等. 局部麻醉药检测方法研究进展 [G]// 公共安全中的化学问题研究进展 ( 第二卷 ). 北京 : 中国人民公安大学出版社,2011: [3] 金焱.FDA 警告局部用麻醉剂的不良事件 [J]. 国外药讯,2007(7): 41. [4] 国家食品药品监督管理总局. 化妆品安全技术规范 [S]. 北京 : 国家食品药品监督管理总局,2015:78, [5] 李向阳, 寇毅英, 冯伟力. 人血浆中利多卡因和丁卡因的检测 [J]. 西北药学杂志,2004,19(5): [6] CHEN L, LIAO L, ZUO Z, et al. Simultaneous determination of nikethamide and lidocaine in human blood and cerebrospinal fluid by high performance liquid chromatography [J]. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis,2007, 43(5): [7] 刘德义, 候加法, 周刚, 等. 气相色谱法测定犬血浆中的利多卡因和布吡卡因 [G] // 全国兽医外科学第 13 次学术研讨会论文集,2006: [8] 杨莹莹, 张文胜, 叶利明. 气相色谱 - 质谱法同时测定透皮接收液中的丙胺卡因和利多卡因 [J]. 色谱,2009,27(1): [9] 刘晓锋, 黄克建, 林翠梧, 等. 在线固相萃取 - 液相色谱 - 质谱法测定血液中 9 种局部麻醉药 [J]. 理化检验 : 化学分册, 2015(2): Determination of seven local anesthetics in cosmetics by solid-phase extraction and liquid chromatography-mass spectrometry WANG Huan, HU Lei, ZHOU Ming-hao (Zhejiang Institute for Food and Drug Control, Hangzhou, Zhejiang , China) Abstract: A method was established for simultaneous determination of seven kinds of local anesthetics, i.e. procaine, chloroprocaine, procainamide, cinchocaine, lidocaine, tetracaine and benzocaine, in cosmetics by using solid-phase extraction and liquid chromatography-mass spectrometry. The samples were extracted by 1% trichloroacetic acid-acetonitrile, purified by SPE and then isolated by liquid chromatography. Multi reaction monitoring (MRM) was used for quantitative analysis by standard curve method. It was found that the linearity for the seven drugs was good in the range from 0.43 to 137 μg/l, and the correlation coefficients were more than The limit of detection was from 0.86 to 1.38 μg/kg. The recovery rate was in the range of 80.1%~103.1%, and the relative standard deviation (RSD) (n=5) was less than 5%. Key words: cosmetics; local anesthetics; SPE; LC-MS ( 本文责编杨玉喜 ) 金王 2017 上半年营收 20 亿青岛金王公布了 2017 年半年度报告, 由于化妆品业务运营情况良好, 以及杭州悠可业绩纳入合并报表范围,2017 年上半年金王营收 20 亿元, 同比增长 88%, 化妆品业务营收 9.20 亿元, 同比大增 395.7% 2017 年上半年, 金王实现营收 20 亿元, 同比大增 88%; 营业利润为 3.41 亿元, 同比增加 %; 归属上市公司股东净利润达 3.07 亿元, 同比增加 % 除此之外, 金王在报告中披露了主要子公司 2017 年上半年的业绩情况其中, 上海月沣营收 1.67 亿元, 净利润万元 ; 杭州悠可营收 4.47 亿元, 净利润万元 ; 广州韩亚万元, 净利润万元 ; 金王产业链管理有限公司营收 5.32 亿元, 净利润万元 34 Vol.40 No.9 Sep. 2017

g ml 10% ph 色谱条件 kinetex C μm 100 A 4. 6 mm 150 mm 25 5 μl A B 10 mmol /L ml /min

g ml 10% ph 色谱条件 kinetex C μm 100 A 4. 6 mm 150 mm 25 5 μl A B 10 mmol /L ml /min 25 4 2013 8 监测技术 5 1 2 1 ( 1. 江苏省疾病预防控制中心, 江苏南京 210009; 2. 南京医科大学第二附属医院, 江苏南京 210029) 5 Phenomenex kinetex C 18 2. 6 μm 4. 6 mm 150 mm 10 mmol /L ph 2. 5 + 60 40 DAD 280 nm 5 20. 0 mg /L ~ 100 mg /L 0.