2009,29(1) 李卫中等 : 组蛋白乙酰转移酶 PCAF 在原核细胞的表达及其生物学活性检测 13 Pharmacia 公司 ; 兔源性乙酰化组蛋白 H3 抗体 HAT 活性分析试剂盒 ( 含 HAT 分析缓冲液 核心组蛋白 乙酰辅酶 A) 购自 Upstate 公司 ;HRP 标记的羊抗小鼠
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- 熊尧 郁
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1 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,2009,29(1):12~16 组蛋白乙酰转移酶 PCAF 在原核细胞的 表达及其生物学活性检测 李卫中张丹桂曾俊王革非陈小璇陈幼莹李康生 ( 汕头大学医学院微生物学免疫学教研室汕头 ) 摘要 p300/cbp 相关因子 (p300/cbp?asociatedfactor,pcaf) 是真核细胞内一种重要的组蛋白乙酰转移酶, 它主要通过催化核心组蛋白的乙酰化, 促进特定基因的转录, 参与细胞内多种生物学过程 国内目前尚没有制备出具有生物学活性的组蛋白乙酰转移酶 PCAF 的报道 为此, PCAF 全长 cdna 被克隆入原核表达载体 pgex?5x?1, 通过对诱导条件进行优化, 实现了 PCAF 在大肠杆菌 BL21(DE3) 菌株中的高效可溶性表达并进行了亲和纯化 利用体外乙酰转移酶活性分析实验, 检测到所表达的 GST?PCAF 融合蛋白能够使组蛋白 H3 发生乙酰化 这种具有生物学活性的 PCAF 蛋白的成功制备为进一步研究 PCAF 的转录调控功能以及它与其它蛋白间的相互作用奠定了基础 关键词 p300/cbp 相关因子原核表达乙酰转移酶活性分析中图分类号 Q786 PCAF 即 p300/cbp 相关因子 (p300/cbp? asociatedfactor), 是组蛋白乙酰转移酶家族的一名重要成员, 其主要功能是使组蛋白特定位点的赖氨酸残基 (Lys) 发生乙酰化 组蛋白的乙酰化会降低它与 DNA 链的亲和力, 使核小体结构变得松弛, 促进转录调控因子等与 DNA 链的结合, 有利于基因转录的发生 由此可见,PCAF 在基因表达调控过程中起着十分关键的作用 PCAF 既可以乙酰化游离的组蛋白, 又可以乙酰化核小体结构中的组蛋白, 其乙酰化位点主要在组蛋白 H3 的 14 位赖氨酸, 对 H4 的第 8 位赖氨酸的作用非常弱 [1] 除此之外,PCAF 还可以使一些非组蛋白底物发生乙酰化, 如 p53,nf?κb,myod,notch,smad 蛋白,c? myc,e2f1, 通用转录因子 TFIE TFIF 等 [2~4], 从而参与诸如增殖 分化 凋亡以及 DNA 损伤修复等多种细胞生命过程, 已经发现 PCAF 与乳腺癌 鳞状上皮癌 白血病 淋巴癌 肺癌 黑色素瘤 神经母细胞瘤等肿瘤的收稿日期 : 修回日期 : 国家自然科学基金 ( ) 广东省自然科学基金 ( ) 资助项目 通讯作者, 电子信箱 :ksli@stu.edu.cn 发生发展存在一定的联系 PCAF 也经常被某些病毒组分所利用, 包括腺病毒 E1A 蛋白及 E1B55kDa 蛋白 [5] 人巨细胞病毒早期蛋白 IE86 [6] EB 病毒 EBNA2 抗原 [7] 人类免疫缺陷病毒 Tat 蛋白 [8] [9] 人乳头瘤病毒 E2 蛋白等 它们和 PCAF 相互作用的结果往往有利于病毒在宿主细胞内的复制和增殖, 并参与受感染细胞的恶性转化等过程 这些并无多大关联的病毒蛋白均能靶向于 PCAF, 充分表明这一蛋白在病毒与细胞相互作用过程中的重要性 制备出全长的 具有生物学活性的 PCAF 蛋白是研究其功能的前提条件, 然而截至目前, 国内还没有相关报道 本研究在实现 PCAF 在原核细胞高效表达的同时, 保证了它的组蛋白乙酰转移酶活性, 为以后工作的开展奠定了基础 1 材料与方法 1.1 材料 大肠杆菌 DH5α BL21(DE3) 原核表达质粒 pgex?5x?1 由本科室保存 DL2000marker 限制性内切酶 EcoRI BamH I T4DNA 连接酶购自 TaKaRa 公司 ;GlutathioneSepharose4B 鼠源性 GST 抗体购自
2 2009,29(1) 李卫中等 : 组蛋白乙酰转移酶 PCAF 在原核细胞的表达及其生物学活性检测 13 Pharmacia 公司 ; 兔源性乙酰化组蛋白 H3 抗体 HAT 活性分析试剂盒 ( 含 HAT 分析缓冲液 核心组蛋白 乙酰辅酶 A) 购自 Upstate 公司 ;HRP 标记的羊抗小鼠二抗 HRP 标记的羊抗兔二抗 IPTG 和蛋白分子量标准购自碧云天生物技术研究所 ;ECL 化学发光液购自 GE 公司 ; 质粒提取 凝胶回收试剂盒购自北京天根公司, 其他试剂为国产分析纯产品 含全长 PCAFcDNA 的绿色荧光蛋白质粒 pegfp?pcaf 由中国医学科学院医学生物学研究所病毒免疫实验室构建 1.2 方法 重组质粒的构建将 pegfp?pcaf 质粒用 EcoRI 单酶切, 琼脂糖凝胶电泳回收约 2500bp 的产物, 与同样酶切的 pgex?5x?1 载体在 T4 连接酶作用下 16 连接 16h, 转化宿主菌 DH5α 并铺于含 Amp 的 LB 培养基上 挑取菌落进行液体培养后提取质粒, 分别用 EcoRI,BamHI 酶切鉴定, 筛选出的阳性克隆进一步进行 DNA 测序验证, 所构建的原核表达质粒命名为 pgex?pcaf 融合蛋白的诱导表达测序正确的 pgex? PCAF 质粒转化 BL21(DE3) 感受态大肠杆菌, 挑取阳性菌落接种于含氨苄青霉素的 2 YT 液体培养基中, 37 振荡培养过夜 ; 再以 接种量转接到 6 瓶相同抗性的 2 YT 液体培养基中, 振荡培养至 OD 600 达 0.4 左右时, 其中 3 瓶加入诱导剂 IPTG 至终浓度 0.2mmol/L, 另外 3 瓶加入诱导剂 IPTG 至终浓度 1mmol/L; 再分别按如下条件继续振荡培养 :37 4h, 30 4h,25 4h 培养结束后, 取上述培养液 1.5ml, 12500r/min 离心 1min, 去上清 沉淀中加入细菌裂解液 (50mmol/L Tris?HCl,pH8.0,1mmol/L EDTA, 100mmol/LNaCl)400μl, 振荡混匀 再加入终浓度为 1mg/ml 的溶菌酶和终浓度为 10mmol/L 的 PMSF, 置冰上 30min 取 400μl 上述混合液进行超声破碎, 设置功率为 300W, 占空比为 0.5, 时间 2.5min 至菌液清亮后,12500r/min 离心 1min, 分别收集上清和沉淀, 进行 10% 浓度的 SDS?PAGE 电泳 Westernblot 鉴定融合表达的蛋白分别取转化了 pgex?pcaf 质粒并经诱导的 BL21(DE3) 大肠杆菌裂解上清, 以及未转化质粒的正常 BL21(DE3) 大肠杆菌裂解上清, 进行 SDS?PAGE 电泳 蛋白转至硝酸纤维素膜上后, 以脱脂奶粉封闭非特异性结合位点, 加入鼠源性 GST 抗体 ( 稀释 ), 室温反应 3h 后用 TTBS 充分洗膜, 然后与 HRP 标记的羊抗鼠二抗 ( 稀释 ) 反应 1h, 经 ECL 方法显色后观察结果 融合蛋白的纯化将适量诱导后的大肠杆菌悬浮于裂解缓冲液 ( 含 1g/LTritonX?100,1mmol/L PMSF 的 PBS,pH7.4), 冰浴中超声破碎菌体, 直至细菌悬液变得澄清 g 离心 20min, 收集上清液, 与适量 PBS(pH7.4) 平衡后的 Glutathione Sepharose4B 匀浆搅拌混匀后装柱,5 倍体积的 PBS (ph7.4) 洗涤柱子两次后, 用洗脱液 (10mmol/L 还原型谷胱甘肽,50mmol/L 的 Tris?HCl,pH8.0) 洗脱, 收集洗脱液 采用同样方法得到 GST 蛋白 Lowry 法测定纯化后的蛋白质含量 体外乙酰转移酶活性分析在 5μl 的 5 HAT 分析缓冲液 (250mmol/LTris?HCl,pH8.0,0.5mmol/L EDTA,5mmol/LDTT,5mmol/LPMSF) 中分别加入 4μg 核心组蛋白 2μg 乙酰辅酶 A 2μg 纯化的 GST? PCAF 蛋白 ( 对照组中加入 2μg 纯化的 GST) 30 摇床缓慢孵育 1h, 随后进行浓度为 15% 的 SDS?PAGE 胶电泳 蛋白从 PAGE 胶转至硝酸纤维素膜后, 以脱脂奶粉封闭非特异性结合位点, 加入 稀释的抗乙酰化组蛋白 H3 的兔源性一抗, 室温放置 3h TTBS 清洗 3 遍, 用 稀释 HRP 标记的羊抗兔二抗结合 1.5h, 充分洗膜并用 ECL 方法显色 随后用 BandScan 软件对所获条带进行灰度分析 2 结果 2.1 重组质粒的构建及鉴定所构建的质粒被 EcoR I 单酶切为约 2500bp 和 4900bp 两个条带, 被 BamHI 单酶切为 5440bp 和 1960bp 两个条带 ( 图 1), 大小与预期相符 进一步的测序结果表明所获质粒的确为 PCAF 全长 cdna 正向连入 pgex? 5x?1 的原核表达质粒 ( 命名为 pgex?pcaf) 2.2 融合蛋白 GST?PCAF 的表达与纯化 IPTG 诱导后, 经 SDS?PAGE 分析证实, 转化 pgex?5x?1 空质粒的 BL21 工程菌在 26kDa 处表达出了 GST 蛋白 ( 图 2); 而转化了 pgex?pcaf 重组质粒 0.2mmol/LIPTG 浓度和 25 诱导条件下的 BL21 菌在约 120kDa 处出现了一个新的蛋白条带, 同预期分子量一致 (PCAF 本身大小为 94kDa,GST 为 26kDa)( 图 2 第 2 泳道箭头所示 ), 说明已经成功表达出目的蛋白, 目的蛋白既可以以包涵体形式存在于菌体裂解后的沉淀中 ( 图 2 第 6 泳道 ), 也可以以可溶性状态存在于菌体裂解后的上清中 ( 图 2 第 5 泳道箭头所示 ) 进一步经
3 14 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology Vol.29No 图 1 重组质粒的酶切鉴定 Fig.1 Restrictionenzymaticanalysisof recombinantplasmid M:DL2000;1:pGEX?PCAFdigestedbyEcoRI; 2:pGEX?PCAFdigestedbyBamHI 图 3 原核表达蛋白的 Western?blot 检测结果 Fig.3 Westernblotanalysisofprokaryotic expresionprotein 1:UltrasonicsupernatantofBL21(DE3)transformedby pgex?pcaf;2:ultrasonicsupernatantofbl21(de3) 的 H3 组分本身在第 14 位 Lys 存在一定程度的乙酰化, 所以在用抗乙酰化组蛋白 H3 的抗体进行 Westernblot 检测时,GST 蛋白处理的阴性对照组在约 17kDa 处出现了乙酰化组蛋白 H3 条带 ( 图 4a 第 2 泳道 ); 但是与 GST?PCAF 蛋白处理的实验组相比, 后者明显增强了组蛋白 H3 的乙酰化水平 ( 图 4a 第 1 泳道 ) 进一步的灰度扫描显示,GST?PCAF 处理组和 GST 处理组对应条带的灰度比值为 ( 图 4b) 图 2 GST?PCAF 蛋白的表达分析 Fig.2 Analysisofproteinexpresionin E.colibySDS?PAGE M:Mwstandard;1:ThelysateofBL21(DE3)/pGEX?5x?1after induction; 2:The lysate ofbl21(de3)/pgex?pcaf after induction;3:ultrasonicsupernatantofbl21(de3)/pgex?5x?1 afterinduction;4:ultrasonicdepositofbl21(de3)/pgex?5x?1 afterinduction;5:ultrasonicsupernatantofbl21(de3)/pgex? PCAFafterinduction;6:UltrasonicdepositofBL21(DE3)/pGEX? PCAFafterinduction;7:GST?PCAFproteinpurifiedbyGSTafinity chromatography GlutathioneSepharose4B 亲和层析方法纯化后, 可以得到纯度较高的 GST?PCAF 融合蛋白 Lowry 法确定纯化后的 GST?PCAF 蛋白浓度为 320μg/ml 2.3 融合蛋白的 Westernblot 分析 Westernblot 结果显示, 转化了 pgex?pcaf 重组质粒的 BL21(DE3) 大肠杆菌裂解上清能够与 GST 抗体发生特异性反应, 在硝酸纤维素膜上呈现一条约 120kDa 显色带 ( 图 3), 表明该蛋白的确为携带 GST 融合头的 PCAF 蛋白 而正常的 BL21(DE3) 裂解上清不能与 GST 抗体发生反应 2.4 体外检测 GST?PCAF 的组蛋白乙酰转移酶活性 [10] 采用 Kuninger 等的方法并进行了适当改进, 由于选用了从鸡红细胞中提取的天然核心组蛋白, 其中 图 4 融合蛋白的体外乙酰转移酶活性分析 Fig.4 Invitroacetylationasaysoffusionprotein (a)westernblotresult(b)grayscaleanalysis;1:thepurified proteinofgst-pcaf;2:thepurifiedproteinofgst;ac-h3: TheacetylatedhistoneH3 3 讨论 近年来, 组蛋白乙酰化 / 去乙酰化在基因转录调控中的作用越来越受到人们的重视 PCAF 作为一种重要的组蛋白乙酰转移酶, 可以和细胞内的多种组分以及某些病毒蛋白相互作用, 产生复杂的生物学效应 得到有活性的 PCAF 蛋白是研究其功能的前提条件 PCAF 蛋白全长 832 个氨基酸, 分子量较大, 因此在原核细胞内表达其一部分截短片段要比表达完整蛋白容易 目前国外虽然有个别报道表达了全长 PCAF 蛋白 [11], 但多数情况下只是截取其中一段序列 ( 如第 352 ~832 位氨基酸或 352~685 位氨基酸 ) 进行表达 [12~14] 因为上述序列中包含了乙酰转移酶活性结构域, 所以表达出的截短蛋白仍然具有一定生物学活性
4 2009,29(1) 李卫中等 : 组蛋白乙酰转移酶 PCAF 在原核细胞的表达及其生物学活性检测 15 而为了更全面地研究 PCAF 结构与功能的关系以及最大程度地发挥 PCAF 的活性, 需要保留其所有的氨基酸组分 本文构建了含 PCAF 全长 cdna 序列的原核表达质粒 pgex?pcaf, 该质粒中携带的谷胱甘肽巯基转移酶 (GST) 融合头一方面可以增加 PCAF 蛋白的可溶性, 防止包涵体的形成, 另一方面, 有利于通过亲和层析的方法对融合蛋白进行纯化 通过 GST?PCAF 蛋白的诱导条件进行摸索及优化, 发现尽管在不同的 IPTG 浓度 (0.2mmol/L,1mmol/L) 和培养温度 (37,30, 25 ) 下,GST?PCAF 都能够在大肠杆菌 BL21(DE3) 得到表达, 但较高的温度和诱导剂浓度下融合蛋白的可溶性差, 易形成包涵体, 不利于活性的发挥 而 mmol/L 的 IPTG 浓度是经过摸索得到的最佳条件, 尽管此时仍有一些目的蛋白以包涵体形式存在于沉淀中, 但上清中 120kDa 条带的出现表明, 部分目的蛋白已经实现可溶性表达 利用商业化 GST 抗体对菌体裂解物上清进行 Westernblot 检测, 进一步确定 120kDa 处新出现的条带的确是所需要的 GST?PCAF 蛋白 对组蛋白乙酰转移酶活性进行分析的方法目前主要有以下几种 : 最常见的是利用 3 H 或 14 C 标记的乙酰辅酶 A 作为乙酰基的供体, 使组蛋白乙酰化并因此带上放射性标记, 再通过液闪仪计数的方法计算同位素的掺入效率, 以此来计算组蛋白乙酰转移酶的活性 [15] 这种方法尽管敏感性很高, 但是存在放射性危害, 实验费用昂贵并需要特殊的同位素检测设备, 因此一般的实验室难以普及 第二种方法的原理是, 组蛋白乙酰化使乙酰辅酶 A 失去乙酰基形成辅酶 A 后, 在丙酮酸脱羧酶的作用下与丙酮酸反应再次生成乙酰辅酶 A, 同时使 NAD 转变为 NADH,NADH 可以还原四唑氮染料而直接可以在 340nm 处检测 [16] 第三种方法利用了一种特殊染料 CPM[7?diethylamino?3?(4?maleimidylphenyl)?4? methylcoumarin], 它能够和辅酶 A 反应生成一种加合物并在 469nm 处发出荧光, 从而可以用分光光度计检测 [17] 后两种方法的主要缺点是敏感性较低 [10] 研究采用了一种在 Kuninger 等基础上改进的方法, 即利用抗乙酰化组蛋白 H3 的抗体来检测乙酰化程度, 之所以选用这一抗体是因为 PCAF 乙酰化位点主要在组蛋白 H3 的第 14 位 Lys 此外, 该方法的主要优点是没有放射性危害 不需要特殊实验设备和试剂 价格较低 尽管该方法的敏感性也不高, 但对于制备的高纯度 PCAF 而言, 已能够满足实验要求 通过这一方法检测发现, 所表达的 GST?PCAF 融合蛋白能够使组蛋白 H3 乙酰化, 表明该融合蛋白具有生物学活性, 同时 GST 的存在并没有使 PCAF 的组蛋白乙酰转移酶活性丧失, 这也与其它报道相一致 综上所述, 成功实现了 PCAF 在原核细胞的表达, 制备了可溶性的 具有生物学活性的 GST?PCAF 蛋白 在此基础上, 可以利用 GSTpul?down 等技术来研究 PCAF 与其它蛋白 ( 如转录调控因子 病毒组分等 ) 的相互作用, 有助于阐明基因表达调控的机制和了解病毒的致病过程 ; 通过筛选对 PCAF 的乙酰转移酶活性具有抑制性的小分子药物, 还可以用于肿瘤等相关疾病治疗方面的研究 参考文献 [1]SchiltzRL,MizenCA,VasilevA,etal.Overlappingbut distinctpaternsofhistoneacetylationbythehumancoactivators p300andpcafwithinnucleosomalsubstrates.jbiolchem, 1999,274(3):1189~1192 [2]SakaguchiK,HereraJE,SaitoS, etal. DNA damage activatesp53throughaphosphorylation?acetylationcascade. GenesDev,1998,12(18):2831~2841 [3]SheppardKA,RoseDW,HaqueZK,etal.Transcriptional activationbynf?kappab requiresmultiplecoactivators.mol CelBiol,1999,19(9):6367~6378 [4]PatelJH,DuY,ArdPG,etal.Thec?MYConcoproteinisa substrateoftheacetyltransferaseshgcn5/pcafandtip60. MolCelBiol,2004,24(24):10826~10834 [5]HamamoriY,SartoreliV,OgryzkoV,etal.Regulationof histoneacetyltransferasesp300andpcafbythebhlhprotein twistandadenoviraloncoproteine1a.cel,1999,96(3):405 ~413 [6] BryantL A, Mixon P, Davidson M, etal. Thehuman cytomegalovirus86?kilodaltonmajorimmediate?earlyprotein interacts physicaly and functionaly with histone acetyltransferasep/caf.jvirol,2000,74(16):7230~7237 [7]WangL,GrosmanSR,KiefE.Epstein?Barvirusnuclear protein,2 interactswith p300, CBP, and PCAF histone acetyltransferasesinactivationofthelmp1promoter.procnatl AcadSciUSA,2000,97(1):430~435 [8] BenkiraneM, Chun R F, XiaoH, etal. Activation of integratedprovirusrequireshistoneacetyltransferase:p300and P/CAFarecoactivatorsforHIV?1Tat.JBiolChem,1998,273 (38):24898~24905 [9]LeeD,HwangSG,Kim J,etal.Functionalinteraction betweenp/cafandhumanpapilomaviruse2protein.jbiol Chem,2002,277(8):6483~6489
5 16 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology Vol.29No [10]KuningerD,LundbladJ,SemiraleA,etal.Anon?isotopicin vitroasayforhistoneacetylation.jbiotechnol,2007,131(3): 253~260 [11]IzumiH,OhtaR,NagataniG,etal.p300/CBP?asociated factor(p/caf)interactswithnuclearrespiratoryfactor?1to regulatetheudp?n?acetyl?alpha?d?galactosamine:polypeptide N?acetylgalactosaminyltransferase?3gene.BiochemJ,2003,373 (Pt3):713~722 [12]LiuL,ScolnickDM,TrievelRC,etal.p53sitesacetylated invitrobypcafandp300areacetylatedinvivoinresponseto DNAdamage.MolCelBiol,1999,19(2):1202~1209 [13]BrackertzM,GongZ,LeersJ,etal.p66alphaandp66betaof the Mi?2/NuRD complex mediate MBD2 and histone interaction.nucleicacidsres,2006,34(2):397~406 [14]ReidJL,BannisterA J,ZegermanP,etal.E1A directly bindsand regulatesthep/caf acetyltransferase. EmboJ, 1998,17(15):4469~4477 [15]Mizen C A, BrownelJE, Cook R G, etal. Histone acetyltransferases: preparation of substrates and asay procedures.methodsenzymol1999,304:675~696 [16]KimY,TannerKG,DenuJM.Acontinuous,nonradioactive asayforhistoneacetyltransferases.analbiochem,2000,280 (2):308~314 [17]TrievelR C, LiF Y, Marmorstein R. Application ofa fluorescenthistoneacetyltransferaseasaytoprobethesubstrate specificityofthehumanp300/cbp?asociatedfactor.anal Biochem,2000,287(2):319~328 ProkaryoticExpresionandAcetylationAsaysofHistone AcetyltransferasePCAF LIWei?zhong ZHANGDan?gui ZENGJun WANGGe?fei CHENXiao?xuan CHENYou?ying LIKang?sheng (DepartmentofMicrobiologyandImmunology,ShantouUniversityMedicalColege,Shantou515031,China) Abstract P300/CBP?asociatedfactor(PCAF),animportantmemberofhistoneacetyltransferasefamily (HATs)withineukaryoticcels,iscapableofinducingtheacetylationofhistone,promotingthetranscriptionof specificgenesandinvolvinginmanybiologicalefects.inthepresentstudy,ful?lengthcdna ofpcafwas insertedintoplasmidpgex?5x?1,thenthesolubleproteingst?pcafwasexpresedine.colibl21(de3)after theoptimizationofinducingconditions.therecombinantproteinwasfurtherpurifiedwithafinitychromatography andtestedtheactivitybyinvitroacetylationasays.higheficientpcafproteinproducedbythismethodcould serveforthestudyontheroleofpcafingeneregulationandtheinteractionbetweenpcafandotherproteins. Keywords p300/cbp?asociatedfactor Prokaryoticexpresion Acetylationasays
材料 方法
生物技术通报 张发洲 杨慧兰 为了构建单纯疱疹病毒 型 感染细胞多肽 真核表达质粒 应用 技术从 株 的基因组中扩增 基因 并连接至真核表达载体 对阳性克隆进行菌落 酶切和测序鉴定后 成功构建了重 组质粒 用 转染试剂盒将重组质粒 转染至 细胞中 并用 及 检测其表达情况 结果显示 基因在 细胞中得到正确表达 真核表达质粒 的构建成功 为进 一步研究 对宿主细胞的影响奠定了基础 单纯疱疹病毒 型 感染细胞多肽
材料! 方法! # 基因的扩增及其序列分析
生物技术通报 黄艳燕 黄靖华 卢福芝 孙靓 彭立新 周兴 黄日波 利用 的方法从鼠李糖乳杆菌基因组 中扩增到 乳酸脱氢酶基因 并连接到载体 上 构建表达质粒 将重组质粒 转化大肠杆菌 重组菌株经 诱导表达 电泳分 析表明 在大肠杆菌中实现了表达 表达产物的分子量约为 同时采用紫外分光光度法测定 乳酸脱氢酶的酶活 测得重组菌株的 乳酸脱氢酶活力为 最适反应温度为 最适 乳酸脱氢酶 克隆 表达 鼠李糖乳杆菌
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生物技术通报 姜燕 采用鼠抗人血红蛋白 单克隆抗体 和胶体金标记鼠抗人血红蛋白 单克隆抗体 及对照抗体羊抗鼠 利用双抗体免疫夹心反应原理特异性地结合人血红蛋白抗原 在 内可得到胶体金显色结果的原理研制便潜血单克 隆一步法胶体金检测试卡 用于诊断因各种原因引起的消化道出血疾病 应用杂交瘤技术制备两株鼠抗人血红蛋白 抗 体 方法检测 效价 免疫胶体金技术制备胶体金检测试卡 法检测 效价的结果显示 鼠抗人
未命名-1
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 ss a c y e vg 13 14 15 16 17 18 19 H 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 发现生命的螺旋 克里克在提出 中心法则 时曾指出 遗传信息是沿 Ｄ Ｎ Ａ - Ｒ Ｎ Ａ - 蛋白质的方向流动的 遗传信息不可能从 Ｒ Ｎ Ａ 回到 Ｄ Ｎ
福建农业学报 材料与方法 试验菌株 引物 主要仪器 主要试剂 细菌培养 模板的制备 反应条件 扩增产物的检测 特异性试验 敏感性试验 分离菌株检测 产物的克隆及序列测定 结果与分析
臧晓南 张学成 王高歌 刘金姐 张晓辉 刘 滨 对两种丝状蓝藻 钝顶节旋藻和盐泽螺旋藻 在基因工程中常用作选择试剂的 种抗生素 氯霉素 氨苄青霉素 红霉素 链霉素 卡那霉素 庆大霉素和新霉素 的敏感性作比较实验 结果表明 两种蓝藻对抗生素的敏感性既有共同的特点 也有 明显的差异 它们对红霉素 氯霉素和链霉素最敏感 致死浓度分别为 和 两种蓝藻对氨苄青霉素比较敏感 的氨苄青霉素即可抑制 和 的生长 但
第 期 甘金华等 强力霉素人工抗原的合成与抗体制备 材料与方法 试剂及溶液
第 卷第 期 年 月 食品与生物技术学报 强力霉素人工抗原的合成与抗体制备 甘金华 邓薇 李进平 艾晓辉 中国水产科学研究院长江水产研究所 湖北荆州 武汉纺织大学环境与城建学院 湖北武汉 采用改进的碳二亚胺两步法将强力霉素半抗原与载体蛋白 连接制备强力霉素 牛血清白蛋白 人工免疫抗原 并用同样方法将强力霉素与载体蛋白 连接制备人强力霉素 卵清白蛋白 人工包被抗原 经紫外扫描分析和动物免疫试验证实 强力霉素人工抗原合成成功
材料 方法 载体构建 转基因植株的获得
生物技术通报 唐宏琨 曾洪梅 杨秀芬 邱德文 通过根癌农杆菌 介导转化法 将含有激发子基因 的植物表达载体 转化三生烟 获得了转基因烟草植株 用 检测确认了阳性转化株 用 杂交 和 杂交进一步证实了 基因的整合 转录和表达 对 代转基因阳性株进行 接种试验 结果显示 与非转基 因对照相比 表达 的烟草叶片枯斑数量减少 表明蛋白激发子基因 的表达提高了转基因烟草对 的抗性 激发子 基因 烟草 转化 材料
第一章 图 １ １ 传染病的特征 ９ Ｔ ｈ１ Ｔ ｈ２ 细胞调节机制简图 正调节 负调节 细胞因子与细菌的相互作用机制目前尚未完全明了 有实验表明 细胞因子与细菌之间 存在有互利和互抑双重效应 例如 Ｔ Ｎ Ｆα 和 ＩＦＮγ 可抑制放线菌的生长而 ＩＬ ６ 的作用则 反之 ＩＬ １ ２ 和 ＧＭ ＣＳＦ 可促进某些致病性大肠杆菌生长而 ＩＬ １ｒａ 可抑制之 研究表 明 某些致病性大肠杆菌有与
22 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology Vol.30No 淀和荧光共定位等实验方法, 发现 PCAF 能够与 PML 相互作用并分布于细胞核 ND10 结构, 这为进一步研究 PCAF 的生物学功能以及 PCAF 与 PML 的相互影响奠定了基础 1 材料与方法 1
中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,2010,30(6):21?27 组蛋白乙酰转移酶 PCAF 通过与 PML 蛋白的 作用而定位于细胞核 ND10 结构 1 李平法 刘 2 辉 3 詹合琴 (1 新乡医学院新乡 453003 2 洛阳市中心医院洛阳 471009 3 新乡医学院药学院新乡 453003) 摘要 PCAF(P300/CBPasociatedfactor,P300/CBP
2015,35(4) 龚隆财等 :ctni linker TnC 融合蛋白的原核表达及鉴定 49 免疫反应鉴定, 表明重组表达的 ctni linker TnC 融合蛋白具有较好的免疫原性, 保存了 ctni 和 ctnc 单体的天然结构, 有望成为天然 ctni TnC 复合物的替代物, 为下一步
中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,2015,35(4):48 53 DOI:10.13523/j.cb.20150407 ctni linker TnC 融合蛋白的原核表达及鉴定 龚隆财 罗镇明 杨雁青 王振宇 向军俭 (1 暨南大学广东省分子免疫与抗体工程重点实验室广州 510632) 王 宏 (2 广州市疾病与食品安全免疫学快速检测重点实验室暨南大学分室广州 510632)
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Really Good Antibodies Bethyl 二抗产品册 超过 670 种抗小鼠 兔子 山羊和大鼠的二抗 bethyl.com Bethyl 公司 Bethyl Laboratories, Inc. ) 成立于1972年 一直秉承改善生活的理念致力于科学研究的理念 提供高质量的抗体产品 和抗体定制服务 Bethyl所销售的每一个抗体都是在德克萨斯州的蒙哥马利的唯一工厂生产 并且都经过Bethyl
第 期 黄雪莲等 响应面优化绿色木霉菌培养基 材料与方法 菌种 仪器与试剂 菌种的活化 单因素试验 响应面优化试验 优化工艺的验证 数据处理 结果与分析
第 卷第 期 年 月 食品与生物技术学报 响应面优化绿色木霉菌培养基 黄雪莲 于新 仲恺农业工程学院轻工食品学院 广东广州 利用响应面分析法对绿色木霉菌的培养基进行优化 通过测量不同营养条件下绿色木霉 菌落生长直径研究其生物学特性 在单因素实验的基础上 选定葡萄糖添加量 丙氨酸添加量和磷酸二氢钾添加量 个因素进行中心组合实验 建立二次回归方程 并应用响应面分析法进行优化 结果表明 绿色木霉菌最佳培养基为葡萄糖
连接
502 南方医科大学学报 J South Med Univ 202;32(4) 基础研究 小鼠前列腺干细胞抗原的原核表达 纯化及抗原活性检测 董金凯 2 罗 津 3 阎瑾琦 2 张 亮 2 高江平 于继云 2 中国人民解放军总医院泌尿外科 北京 00853 2 军事医学科学院基础医学研究所 北京 00850 3 湖南省永州 市人民医院 湖南 永州 425000 摘要 目的 RT-PCR 扩增小鼠前列腺干细胞抗原
典型自编教材汇总
江 苏 大 学 食 品 与 生 物 工 程 实 验 中 心 典 型 自 编 实 验 教 材 汇 总 目 录 1. 分 子 生 物 学 与 基 因 工 程 实 验 教 程 ( 中 国 轻 工 业 出 版 社 ).1 2. 食 品 工 程 原 理 ( 化 工 原 理 ) 实 验 指 导 书 ( 讲 义 )..20 3. 仪 器 分 析 实 验 指 导 书 ( 讲 义 ).58 4. 植 物 生 理 学
Invitrogen 1.4 pet-gr, ICE-LGR, PCR TA, pmd18-t/gr pet-21a(+) (Nde I Xho I), E. coli DH-5,,,, pet-gr GR ORF cdna, GR, : PU: 5 -GGAATTCCAT
42 6 Vol.42, No.6 2011 11 OCEANOLOGIA ET LIMNOLOGIA SINICA Nov., 2011 南极衣藻 (Chlamydomonas sp. ICE-L) 谷胱 * 甘肽还原酶基因的原核表达及其条件优化 1 1 燏 1 1 2 (1. 524025; 2. 266061) RT-PCR GR ORF cdna, ; IPTG,, pet-gr BL21,
:TGF-β bfgf 23 KEY WORDS:transforminggrowthfactor-β ;basicfibroblastgrowthfactor; bonemarrow mesenchymalstemcels;eukaryoticexpressionvector; liposomet
2 ( )208 58 JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)208,Vol.58No. TGF-β bfgf,, 2 (., 330006; 2., 5040) : -β (TGF-β ) (bfgf) (BMSCs), SD BMSCs Percol PCR TGF-β bfgf, pcdna3.(+), 3 BMSCs RT-PCR Westernblot
张红丽 等 部分功能域基因的原核表达与分析 第６期 发表序列 ＡＹ８１９６５０ 同源性为 １００ 与国外 １０ 株 同源性为 ９８畅 ８ 有 １３ 个碱基发生了突 变 其中 ４ 个是有意义的突变 这 ４ 个有意义的 突变分别为第 ２５７ 位 Ｔ Ｃ 第 ５０５ 位 Ａ Ｃ 第 ９０８ 位 Ａ Ｇ 第 １０１２ 位 Ｇ Ｃ 图 ４ 这些差异可 能是捻转血矛线虫株间存在地域差异所致 ２畅 ５ ＨＰＳ 原核表达与鉴定
pet28a + CD 1 3 ~ 4 NHL 85% ~ % B 2 CD B B B 3-4 CD 5 CD B Rituximab C2B8 CD IgG1 CHO FDA C2B8 Minibody IgG VL VH CH3 Linker VL-VH-CH3 Fc ADCC
35 3 12 9 JOURNAL OF NANJING NORMAL UNIVERSITY Natural Science Edition Vol 35 No 3 Sept 12 pet28a + CD 210046 Rituximab VL VH CH3 CD overlap PCR Rituximab VL VH Linker ScFv ScFv IgG1 CH3 IgG1 cdna pet28a
GB 15973—1995麻风病诊断标准及处理原则
炭 疽 诊 断 标 准 及 处 理 原 则 前 言 GB 17015 1997 炭 疽 (Anthrax) 是 由 炭 疽 芽 孢 杆 菌 (Bacillus anthracis) 引 起 的 一 种 人 与 动 物 共 患 传 染 病, 主 要 存 在 于 食 草 动 物 和 牲 畜 群 落 之 中, 并 能 造 成 环 境 的 广 泛 污 染 由 于 炭 疽 芽 孢 具 有 对 外 界 环 境
12 (autophagy),imagej,,, 3 [1-4] (self-eating) Transwelinvasion, 20μmol L -1 LY A549 [5] PI3K/AKT 24h,PBS, [6-8],, ml -1 ( ) 600μL
![12 (autophagy),imagej,,, 3 [1-4] (self-eating) Transwelinvasion, 20μmol L -1 LY A549 [5] PI3K/AKT 24h,PBS, [6-8],, ml -1 ( ) 600μL](/thumbs/91/106935627.jpg "12 (autophagy),imagej,,, 3 [1-4] (self-eating) Transwelinvasion, 20μmol L -1 LY A549 [5] PI3K/AKT 24h,PBS, [6-8],, ml -1 ( ) 600μL")
( )2017 57 5JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)2017,Vol.57No.5 11 LY294002, (, 330006) : LY294002 PI3K/AKT 0 10 15 20 25 30μmol L -1 LY294002(LY294002 ) A549,PBS CCK8 LY294002 A549 ; Westernblot
第 卷 -.+$$$-+($-.(+"$(+$%"(+$#'$+(.$+*(.$+(%$%+.$$$+$$+-$( 7-($++$"$($(+'$+'$%*$$&$.$+$%+ $$".(+$+.$+'$+'( ".($#-$4$+" +'$".(+%+$$$++(* %$+$+$"(+'$%+$"
第 卷第 期 年 月 "## $%# - 基础医学 含 '- 野生及突变结合位点的胰岛素受体 '6,78&' 区报告基因载体的构建和鉴定 王美晨 王 璇 蓝 茜 李 癑 刘 莉 伊 静 李 靖 宋刘梅 马莎蕊 宁启兰 李冬民 西安交通大学医学部 遗传学与分子生物学系 环境与疾病相关基因教育部重点实验室 级临床医学七年制 级临床医学五年制 陕西西安 ( 摘要 目的 利用 6< *%&$%', :%''"D$"
标题
第 36 卷第 10 期西南大学学报 ( 自然科学版 ) 2014 年 10 月 Vol.36 No.10 JournalofSouthwestUniversity (NaturalScienceEdition) Oct. 2014 DOI:10.13718/j.cnki.xdzk.2014.10.013 家蚕核型多角体病毒 IE1 的 1 多克隆抗体制备及鉴定 董战旗 1, 张军 1, 胡楠 1,
生命科学研究 房 蓓 武泰存 王景安 以玉米沈单 号为材料 用溶液培养的方法研究了缺锌 低锌和正常供锌对玉米生长发育的影响 进一步明确了一定量低锌比缺锌对玉米的伤害更大 并对其 同工酶谱及蛋白质表达进行了分析 结果表明 一定浓度的低锌培养使玉米生长受抑及受害最重 且地上部分比地下部分更敏感 低锌和缺锌处理时 种同工酶的酶谱和蛋白表达与正常供锌时均有明显的差异 尤其在一定量低锌浓度时 有些同工酶的表达增强或被特异性诱导
福建农林大学硕士学位论文番茄抗叶霉菌相关基因的鉴定及 TRV 16K 基因的功能分析姓名 : 郑璐平申请学位级别 : 硕士专业 : 分子病毒学指导教师 : 吴祖建 ; 蔡新忠 20070401 番茄抗叶霉菌相关基因的鉴定及 TRV 16K 基因的功能分析 作者 : 郑璐平
标题
第 35 卷第 3 期 2014 年 9 月 FOREIGN MEDICALSCIENCESECTION OF MEDGEOGRAPHY Vol.35No.3 Sep.2014 189 基础医学 含 mir-497 野生及突变结合位点的胰岛素受体 mrna3 UTR 区报告基因载体的构建和鉴定 王美晨 3 1,2 1,2 1,2 1,2, 王璇, 蓝茜, 李玥, 刘莉, 1,2 1,2 伊静, 李靖,
实验室常用培养基的配制方法
实验室常用培养基的配制方法 Ampicillin( 氨卡青霉素 )(100 mg/ml) 100 mg/ml Ampicillin 50 ml 配制方法 1. 称量 Ampicillin 置于 50 ml 离心管中 ; 2. 加入 40 ml 灭菌水, 充分混合溶解后, 定容至 50 ml; 3. 用 0.22 µm 过滤膜过滤除菌 ; 4. 小份分装 (1 ml/ 份 ) 后,-20 保存 IPTG(
生物技术通报 材料 方法
生物技术通报 高曰文 朱耀明 王艳林 朱晨宇 秦烨 胡汉卿 韩钰 旨在探讨盐酸普鲁卡因 对人结肠癌 细胞 基因甲基化及表达的影响 应用巢式双重 甲基化特异性聚合酶链反应 检测盐酸普鲁卡因处理前后 细胞中 基因启动子的甲基 化水平 逆转录 聚合酶链反应 和蛋白印迹技术观察 细胞内 基因表达情况 检测发现人结肠癌 细胞中 基因存在甲基化 经盐酸普鲁卡因处理能够使 基因甲基化水平下降 和蛋白印迹分析结果显
武洪庆 田 黎 张久明 温占波 用 方法对黄杆菌属产红色素菌株 的培养基进行了优化 首先用部分重复因子实验对培养基组分蛋白胨 酵母粉 葡萄糖及 浓度对菌株产红色素的影 响进行评价 找出主要影响因子为葡萄糖和 浓度 两者均为正影响 其他组分对色素含量的 影响不显著 第二步用最陡爬坡路径逼近最大响应区域 最后用中心组合设计及响应面分析确定主 要影响因子的最佳浓度 菌株在优化培养基中培养较初始培养基色素含量提高
材料 方法
生物技术通报 陆敏 许黎明 吴宏宇 张继恩 李国栋 黄青山 溶葡萄球菌酶 是一种能高效裂解葡萄球菌细胞壁的肽链内切酶 已有研究表明其能够有效预防和去除奶牛乳腺中葡萄球菌的感染 但该酶在牛奶中的性质研究还缺少详细的研究数据 现对重组溶葡萄球菌酶在牛奶中的一些性质进行研究 检测了加入溶葡萄球菌酶后牛奶性状的变化和重组溶葡萄球菌酶在牛奶中的酶活的稳定性以及溶葡萄球菌酶在牛奶中的抑 杀菌活性 结果显示 重组溶葡萄球菌酶未改变牛奶的外观性状
细胞凋亡检测 doc
[ - 1 - ] cell apoptosis detection BMS306FI rh Annexin V FITC KIT 300 test 5000 ANNEXIN V rh Annexin V FITC KIT 200 test 4880 BMS306FI/100T rh Annexin V FITC KIT 100 test 2850 BMS306FI/c rh Annexin V FITC
中国生物工程杂志! 公司 2;3 和 $ 购自 ',5 公司 92$' 底物显色液购自天根公司 92 标记的二抗山羊抗鼠 3 购自中杉生物有限公司 质粒抽提试剂盒 纯化试剂盒购自 '3 公司 引物合成和测序均在军事医学科学院生物工程研究所六室完成 个 1 单抗均为本课题组自制 & 包被液 ",<6.
中国生物工程杂志! "# 幽门螺杆菌 1 串联融合表位的表面呈现表达 封小燕 王艳春 李平超 陶好霞 王 秡 袁盛凌 王令春 王 普 刘纯杰 浙江工业大学药学院 杭州 军事医学科学院生物工程研究所病原微生物与生物安全国家重点实验室 北京 & 摘要 目的 应用表达载体. 表面呈现表达幽门螺杆菌 1 串联融合表位 方法 通过引入多克隆位点的方法改造表达呈现表达载体. 并用改造后的质粒表达幽门螺杆菌 1
程汉良 夏德全 吴婷婷 孟学平 吉红九 董志国 陈淑吟 对文蛤 青蛤 硬壳蛤 江户布目蛤 薄片镜蛤 和菲律宾蛤仔 种帘蛤科贝类和 个地理种 群文蛤 大连 连云港 湛江 防城港 的细胞色素 氧化酶亚基 基因片段的核苷酸序列进行了分析 以探讨这一序列在种质鉴定 种群遗传结构和分子系统发生研究中的应用价值 测序结果 表明 所有物种扩增片段长度均为 序列 含量 明显高于 含量 物种间共有变异位点 个 其中简约信息位点
张 伟 等 + 基于 0. 的神经胶质酸性蛋白质自身抗体的血清含量测定及其在脑胶质母细胞瘤诊断中的应用 ;!1 诊断技术因其高昂费用而无法得到广泛应用 因而发展基于临床血液样本且价格相对低廉的脑胶质瘤检测手段成为必须 早在 1" 年 % 就发现唾 4 液酸乳四糖神经酰胺可用于恶性脑胶质瘤的检测 随后
;!" 复旦学报 医学版!"# 基于.7 & 的神经胶质酸性蛋白自身抗体的血清含量测定及其在脑胶质母细胞瘤诊断中的应用 张 伟 危 平 施 前 复旦大学生物医学研究院蛋白组学与系统生物学研究院 上海! 摘要 目的 发展基于 0. 的血清神经胶质酸性蛋白 ((, (%) '%. 自身抗体含量测定方法 用于脑胶质瘤患者的诊断 方法 克隆 12%' 基因至 ' = #' 载体 使用大肠埃希菌中纯化得到的.
中国生物工程杂志 < 陈浩嘉研究员惠赠 蛋白浓度检测试剂 3 *. 购自美国 "&) 公司 其他试剂均为分析纯 购自 5 / 公司 用于目的片段扩增的 *& 引物为自行设计 由上海生工生物工程有限公司合成 方 法 *& 扩增编码 *+%, 锌指结构域的 3 片段 合成一对与编码 *+%, 锌指结构域
中国生物工程杂志! 研究报告 重组 蛋白锌指结构域的表达 提纯和活性分析 李 伟 上海交通大学系统生物医学研究院教育部系统生物医学重点实验室 上海 ' 摘要 *+%,-./ 0 /1.-. 是一种重要的转录抑制因子 它由位于 端的 结构域和 端的锌指结构域构成 鉴于目前对于锌指结构域的立体结构还不是十分清楚 对其进行了高效表达和提纯 为了表达 *+%, 蛋白的锌指结构域 在其编码序列的! 端加上起始密码
42 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology Vol.28No RNA, 以 oligo(dt) 为引物进行反转录, 然后以上述引物进行 PCR 扩增 :0 LATaqbufer5μl dntp5μl 上游引物 μl 下游引物 μl LATaq 酶 (5U/μl)0.5μ
中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,2008,28(5):4~45 前列腺素脱氢酶在大肠杆菌中的表达纯化及鉴定 李美宁 解 军 常冰梅 张悦红 2 殷云勤 ( 山西医科大学生物化学与分子生物学教研室太原 03000) (2 山西医科大学第一医院消化检验中心太原 03000) 程牛亮 摘要 5? 羟基前列腺素脱氢酶 (PGDH) 属于抑癌基因, 在多种肿瘤中表达缺失, 在肿瘤的发生发展中起着重要作用
* 北京大学学报 医学版 :3 73:09 ;: 9 8 ;:939;0 &35 * 提高乳腺癌细胞对抗微管生成药物的敏感性 & 研究还发现 ;3 的高表达与结直肠癌 乳腺癌等肿瘤的预后密切相关 是预后判断的潜在标志物 &&>&* 但 ;3 的生物学功能及其在肿瘤发生发展中的作用目
北京大学学报 医学版 57 3 8 92:3 73:09 ;: 9 8 ;:939;0 &35 * & 论著 抗! 3 单克隆抗体识别的抗原表位区域的确定 谢 玮 苏亚辉 刘彩云 寿成超 北京大学临床肿瘤学院 北京肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所生物化学与分子生物学研究室 恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室 北京 && * 摘 要 目的 确定已获得的多株抗突触蛋白 ;3 单克隆抗体识别的抗原表位区域
吴克复等 粒 单型人白血病细胞系的建立及其细胞生物学性质的研究 Ｗ ｕｋ ｆ ｕ Ｅｓ ｂ ｓ ｈ ｍ ｆ ｍｙ ｄ ｍ ｙ ｕｋ ｍ ｓ ｄ ｓ ｕ ｄ ｓ ｆ ｈ ｒ ｂ ｇ ｐ ｒ ｐ ｒ ｓ 图版 １ 吴克复等 粒 单型人白血病细胞系的建立及其细胞生物学性质的研究 Ｗ ｕｋ ｆ ｕ Ｅｓ ｂ ｓ ｈ ｍ ｆ ｍｙ ｄ ｍ ｙ ｕｋ ｍ ｓ ｄ ｓ ｕ ｄ ｓ ｆ ｈ ｒ ｂ ｇ ｐ ｒ ｐ
上海交通大学学报 农业科学版 第 卷 大肠杆菌 ) 是肠出血性大肠杆菌 #. -4& -*&44 +, #/ $%. $! ##% 的一个主要血清型 是食源性人兽共患病原菌 它可引起人的食物中毒 严重的可致人死亡 在公共卫生和动物医学等方面都具有重要的研究意义 大肠杆菌 ) 产生的志贺毒素, + &
第 卷第 期 年 月 上海交通大学学报 农业科学版! "#!$ %!%# %# "&'& 文章编号 (() ( ((() 大肠杆菌 ) 噬菌体裂解酶的克隆表达及活性分析 杨 曦 吉文汇 曹冬梅 孙建和 严亚贤 上海交通大学农业与生物学院 上海市兽医生物技术重点实验室 上海 摘 要 为研究大肠杆菌 ) 噬菌体编码的裂解酶 内溶素 对肠出血性大肠杆菌的抗菌作用 克隆表达了大肠杆菌 ) 噬菌体裂解酶 并检测其裂解作用和裂菌谱
658 解放军医学院学报 Acad J Chin PLA Med Sch Jul 207,38(7) 体外研究表明, 通过干扰 RNA 技术敲低 MET, 可抑制 HCC 增殖 集落形成和迁移 [] 多种 HCC 细胞系动物皮下成瘤实验中,
![658 解放军医学院学报 Acad J Chin PLA Med Sch Jul 207,38(7) 体外研究表明, 通过干扰 RNA 技术敲低 MET, 可抑制 HCC 增殖 集落形成和迁移 [] 多种 HCC 细胞系动物皮下成瘤实验中,](/thumbs/93/113848588.jpg "658 解放军医学院学报 Acad J Chin PLA Med Sch Jul 207,38(7) 体外研究表明, 通过干扰 RNA 技术敲低 MET, 可抑制 HCC 增殖 集落形成和迁移 [] 多种 HCC 细胞系动物皮下成瘤实验中,")
解放军医学院学报 Acad J Chin PLA Med Sch Jul 207,38(7) http://jyjxxyxb.paperopen.com 657 人肝细胞生长因子受体原核载体的构建表达及纯化 邱栾, 赵珂 2, 董小明 2, 高瑞 2, 张飞翔 2, 张欣悦, 詹轶群 2, 李长燕 2, 李建雄 解放军总医院海南分院放射治疗科, 海南三亚 57203 ; 2 军事医学科学院放射与辐射研究所,
Microsoft Word - 19朱晶晶.doc
生物工程学报 Chin J Biotech 2009, August 25; 25(8): 1254-1260 journals.im.ac.cn Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@im.ac.cn 2009 Institute of Microbiology, CAS & CSM, All rights reserved 生物技术与方法
贾 园等 甲型 /3 流感病毒 /0 基因在昆虫细胞中的截短表达 # 共编码至少 种蛋白 许多研究已经证实 血凝素 /0 是流感病毒最重要的表面抗原 /0 含有 ( 个结构域 信号肽 胞浆区 跨膜区和胞外区 本实验设计去掉 /0 信号肽 跨膜域和胞内域个结构域的基因序列 通过昆虫杆状病毒表达系统表达
中国生物工程杂志! 甲型 流感病毒 基因在昆虫 细胞中的截短表达 贾 园 沈 阳 邱亚峰 史子学 邵东华 王晓杜 邓绪芳 王皓婷 赵福广 马志永 中国农业科学院上海兽医研究所 上海 ( 吉林农业大学 长春 ) 摘要 目的 利用 "" * * +,-. 表达重组 /0 蛋白 1 及 0 方法鉴定其表达 方法 采用 方法扩增 0 2 ( #/3 /0 基因 将其克隆到 - /40 载体上 重组质粒 -
细 胞 生 物 学 实 验 指 导 细 胞 生 物 教 研 室 目 录 实 验 一 动 物 细 胞 的 基 本 形 态 观 察 和 显 微 测 量 1 实 验 二 线 粒 体 的 活 体 染 色 及 电 镜 照 片 观 察 4 实 验 三 液 泡 系 的 活 体 染 色 及 电 镜 照 片 观 察 6 实 验 四 细 胞 生 理 活 动 的 观 察 7 实 验 五 细 胞 组 分 的 化 学 反 应
Microsoft Word ?1709gc100186郑惠玲.doc
生物工程学报 Chin J Biotech 2010, December 25; 26(12): 1704 1709 journals.im.ac.cn Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@im.ac.cn 2010 CJB, All rights reserved. 生物技术与方法 抗山羊 ΔfosB 基因表达产物抗体的制备及应用
标题
Vol. 36 高 等 学 校 化 学 学 报 No. 5 2015 年 5 月 摇 摇 摇 摇 摇 摇 CHEMICAL JOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES 摇 摇 摇 摇 摇 摇 886 ~ 892 摇 摇 doi: 10. 7503 / cjcu20140965 一 种 新 的 混 合 斑 精 子 分 离 方 法 伍 贤 军 1,2, 赵 摇 兵 2, 缪 摇 璇
24 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology Vol.32No 术路线生产抗体 [8 10] 应用大肠杆菌生产可溶性抗体是国内外小分子抗体的研究重点, 但目前原核表达可溶性抗体的产量还非常低 因而探索高效表达可溶性小分子抗体的相关技术十分迫切 在前期的工作中已成功利用大
![24 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology Vol.32No 术路线生产抗体 [8 10] 应用大肠杆菌生产可溶性抗体是国内外小分子抗体的研究重点, 但目前原核表达可溶性抗体的产量还非常低 因而探索高效表达可溶性小分子抗体的相关技术十分迫切 在前期的工作中已成功利用大](/thumbs/91/104873268.jpg "24 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology Vol.32No 术路线生产抗体 [8 10] 应用大肠杆菌生产可溶性抗体是国内外小分子抗体的研究重点, 但目前原核表达可溶性抗体的产量还非常低 因而探索高效表达可溶性小分子抗体的相关技术十分迫切 在前期的工作中已成功利用大")
中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,2012,32(11):23 28 抗 IgE 单链抗体在大肠杆菌中可溶性高效 表达条件的研究 1,2 刘启刚 2 代云见 2 张勇侠 2 王保成 2 王明蓉 (1 中国医药集团总公司四川抗菌素工业研究所成都 610052 2 成都生物制品研究所有限责任公司成都 610023) 摘要目的 : 以抗 IgE 单链抗体 (anti IgEscFv)
4 : pcdna3.1(+) ;PLV-EF1A-EGFP(2A) 30s,41 30s,72 2min,35 ; Puro ; TG1; (Hu min 1% manembryonickidney293cels); (Ma- din-darbycaninekidneyce
33 4 2017 6 CHINESEJOURNALOF VIROLOGY Vol.33 No.4 June 2017 1# 2#,, 2, 2, 1 3* 1*,, (1., 511436; 2., 510230; 3., 510663) : HEK-293-HA RT-PCR HA, pcdna3.1(+ ), pcdna3.1(+ )-HA pcdna3.1(+)-ha PLV-EF1a-EGFP(2A)Puro
(45) β-tcp/ β -GP HTCC HTCC/ β -GP/ β -TCP 20mg/mL ( β -TCP/HTCC);(3) β -TCP 40mg/mL ( β -TCP/HTCC) 20μg h rhbmp h HTCC/ β -
: :1001-9731(2014)14-14001-07 14001 * ( 200237) : 2-2 2.1 (HTCC) ; β-tcp 2.1.1 (CSM W =5.05 10 5 )23- (GTMAC ) β - : ; ; ( β -GP )BCA : R318.08 :A ( ) DOI:10.3969/j.issn.1001-9731.2014.14.001 (rhbmp-2
2013,33(5) 孙静等 : 重组人 LIF 融合蛋白表达纯化及其活性鉴定 51 试剂盒购自 Promega;OneStepSYBRPrimeScript TM RT PCR 试剂盒购自 Takara 大连有限公司 ; 预染低分子量蛋白质 Marker 购自北京索宝莱 ; 层析填料购自 GE H
中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,2013,33(5):50 55 重组人 LIF 融合蛋白表达纯化及其活性鉴定 孙静王斌段志青胡凝珠李建芳李彦涵胡云章 ( 中国医学科学院 / 北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明 650118) 摘要目的 : 原核表达重组 hlif 融合蛋白并进行诱导表达 纯化及活性鉴定 方法 : 将 hlif 基因克隆至 pthiohisa
茂县土地岭大熊猫走廊带
中国组织工程研究第 16 卷第 40 期 2012 09 30 出版 Chinese Journal of Tissue Engineering Research September 30, 2012 Vol.16, No.40 doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2012.40.016 [http://www.crter.org/crter-2012-qikanquanwen.html]
中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,2012,32(6):35 42 叶绿体分裂蛋白 PDV1 胞质侧结构域可溶性 表达条件的研究及纯化 韩翠晓李锋严孝金冯舵李倩倩高宏波高伟 ( 北京林业大学生物科学与技术学院理学院北京 ) 摘要目的 : 探索叶绿体分裂蛋白 PLAS
中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,2012,32(6):35 42 叶绿体分裂蛋白 PDV1 胞质侧结构域可溶性 表达条件的研究及纯化 韩翠晓李锋严孝金冯舵李倩倩高宏波高伟 ( 北京林业大学生物科学与技术学院理学院北京 100083) 摘要目的 : 探索叶绿体分裂蛋白 PLASTIDDIVISION1(PDV1) 胞质侧结构域的高效可溶性表达条件, 并得到高纯度目的蛋白 方法
结果与讨论
金青哲 谢 峰 丁志华 施峰华 王兴国 利用碳同位素比值法进行花生油和玉米油掺合物的检测研究 用气相色谱仪获得 转化途径 的玉米油和 转化途径的花生油的脂肪酸组成 再用气相色谱 燃烧 同位素比值质谱仪确定三种主要脂肪 酸 的 值 利用所测得的数据 构建了玉米油与花生油混合油中主要脂肪酸的 值 混合比例的标准曲线 结果表明 玉米油与花生油的 值差异很大 应用试验中将花生油与一种未知的其他植物油进行掺和
第 卷 第 期 陕西师范大学学报 自然科学版 年 月!" # $ "%& '" "& & " " % 文章编号 () ()(* *)+,-."-', 金黄色葡萄球菌肠毒素 7 的原核表达 纯化及鉴定 张 琨 张月娟 万 一 陕西省微生物研究所分子生物学研究中心 陕西西安, 摘 要 为高效获取金黄色葡
第 卷 第 期 陕西师范大学学报 自然科学版 年 月! & ' & & 文章编号 -.-' 金黄色葡萄球菌肠毒素 7 的原核表达 纯化及鉴定 张 琨 张月娟 万 一 陕西省微生物研究所分子生物学研究中心 陕西西安 摘 要 为高效获取金黄色葡萄球菌肠毒素 用于 的快速检测 通过原核表达方法表达 对其纯化方法进行研究 并通过 &' & 和制备的 纳米磁性免疫层析快速检测试纸条检测其抗原性 研究表明 成功克隆入原核表达载体
第 5 期梁艳等 :myh6 蛋白的表达 纯化及多克隆抗体制备 645 thefurtherstudiesofmyh6function. Keywords:myh6;fusionprotein;polyclonalantibody 构建形态有别的心房和心室是脊椎动物心脏形态发生时关键的一步, 随着心
第 19 卷第 5 期 2010 年 10 月 激光生物学报 ACTA LASER BIOLOGY SINICA Vol.19No.5 Oct.2010 doi:10.3969/j.isn.1007 7146.2010.05.014 myh6 蛋白的表达 纯化及多克隆抗体制备 梁艳, 宋怀婷, 李竞超, 吴秀山, 袁婺洲 ( 湖南师范大学蛋白质化学及鱼类发育生物学教育部重点实验室, 心脏发育研究中心,
2 天津科技大学学报第 32 卷第期 中的重组人胰岛素原氨基酸序列为 EEAEAEAEPK- B 链 -AAK-A 链 [12], 包含信号肽和截断的 C 链共 64 个氨基酸. 本实验以酵母生产重组胰岛素工艺中的重组人胰岛素原为研究对象, 探索研究通过表达融合蛋白增加重组胰岛素原在大肠杆菌中的可溶
![2 天津科技大学学报第 32 卷第期 中的重组人胰岛素原氨基酸序列为 EEAEAEAEPK- B 链 -AAK-A 链 [12], 包含信号肽和截断的 C 链共 64 个氨基酸. 本实验以酵母生产重组胰岛素工艺中的重组人胰岛素原为研究对象, 探索研究通过表达融合蛋白增加重组胰岛素原在大肠杆菌中的可溶](/thumbs/92/108284496.jpg "2 天津科技大学学报第 32 卷第期 中的重组人胰岛素原氨基酸序列为 EEAEAEAEPK- B 链 -AAK-A 链 [12], 包含信号肽和截断的 C 链共 64 个氨基酸. 本实验以酵母生产重组胰岛素工艺中的重组人胰岛素原为研究对象, 探索研究通过表达融合蛋白增加重组胰岛素原在大肠杆菌中的可溶")
2017-07-05 14:53:41 http://kns.cnki.net/kcms/detail/12.1355.n.20170705.1453.004.html 第 32 卷第期 2017 年月 天津科技大学学报 Journal of Tianjin University of Science & Technology Vol. 32 No. 2017 DOI:10.13364/j.issn.1672-6510.20160103
材料导报 研究篇 年 月 下 第 卷第 期 种球的制备 单步溶胀法制备分子印迹聚合物微球 洗脱处理 种子溶胀聚合机理 种球用量的影响
水相中 组氨酸单分散分子印迹聚合物微球的合成 表征及其识别性能研究 李思平等 李思平 徐伟箭 较佳工艺条件下 在水性体系中选用无皂乳液聚合法制得的单分散微米级聚苯乙烯微球为种球 分别以组氨酸 甲基丙烯酸 或丙烯酸胺 乙二醇二甲基丙烯酸酯 为模板分子 功能单体和交联剂 合成了 组氨酸分子印迹聚合物微球 研究了形貌 粒径及其分布以及模板分子与功能单体之间的相互作用 分别以 激光粒度分析仪紫外分光光度法和红外光谱表征功能单体与交联剂之间的共聚情况
蛋白质研究CAT#:100102A-2 CAT#:100102B-2 常温运输和保存, 溶菌酶 Benzonase 和 PMSF 需要 -20 保存 一站式 His 标记蛋白质微量纯化套装 one-stop His-Tagged Protein Miniprep Pack 使用手册 V1.4 北京天
蛋白质研究CAT#:100102A-2 CAT#:100102B-2 常温运输和保存, 溶菌酶 Benzonase 和 PMSF 需要 -20 保存 一站式 His 标记蛋白质微量纯化套装 one-stop His-Tagged Protein Miniprep Pack 使用手册 V1.4 北京天恩泽基因科技有限公司 北京市海淀区上地信息路 26 号北京市留学人员海淀创业园中关村创业大厦 506
File
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Microsoft Word gc090639尹鑫
生物工程学报 Chin J Biotech 2010, April 25; 26(4): 470 475 journals.im.ac.cn Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@im.ac.cn 2010 CJB, All rights reserved. 动物及兽医生物技术 鸡氨肽酶 N 的高效可溶性表达及生物学功能分析 尹鑫,
Microsoft Word - 6--李铁松_news_.doc
重组七鳃鳗 PHB2 蛋白的原核表达及纯化 李铁松, 王颖, 高杨, 李庆伟 (, 116081) 摘要 : 为了研究 PHB2 蛋白的生物学活性及后续抗体的制备, 作者以前期构建的 pmd18-t-lm-phb2 质粒为模板, PCR 扩增 Lm-PHB2 基因全长 CDS 区, PCR 产物经 Hind III 和 EcoR I 双酶切后连接至表达载体 pet-32a, 构建重组质粒 pet-32a-lm-phb2
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pegfp-n/tnfr 载体的构建及鉴定 叶顺传, 曾秋棠, 吴辉文, 吕云波华中科技大学同济医学院协和医院心研所, 湖北武汉 (430022) E-mail:yeshunchuan@gmail.com 摘要 : 目的 : 本研究旨在构建人肿瘤坏死因子受体 (TNFR ) 绿色荧光蛋白表达载体 pegfp-n/tnfr, 为研究 TNFR 细胞内转位奠定实验基础 方法 : 培养 U937 细胞,
标题
摇 南京农业大学学报摇 2012,35(1):87-91 摇 Journal of Nanjing Agricultural University http: / / nauxb. njau. edu. cn 試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試
( ) 表达载体 于外源 DNA 的表达 1 原核表达载体: 在原核细胞表达外源基因 (1) 启动 : 转录 mrna 必需元件 (2)SD 序列 : 提供核糖体结合位点 (3) 转录终 序列 : 有助于 效表达外源基因 2 真核表达载体: 在真核细胞表达外源基因 (1) 真核表达载体特点 : 1
二 重组 DNA 技术中常用的载体 ( ) 克隆载体 于外源 DNA 的克隆 1 克隆载体应具备的主要特点 2 常 克隆载体 (1) 质粒 (plasmid): 最常 的克隆载体 (2)λ 噬菌体克隆载体 (3) 其他克隆载体 : 增加载体容量 ( ) 表达载体 于外源 DNA 的表达 基本特性 : 克隆必需元件 : 复制 ; 多克隆酶切位点 ; 选择性标志转录必需元件 : 启动 和终 翻译必需元件
Glutathione Beads 4FF 1022.doc
Glutathione Beads 4FF 目录 1. 产品介绍...1 2. 纯化流程...1 3. 填料清洗...3 4. 问题及解决方案.3 5. 订购信息及相关产品 4 1. 产品介绍 Glutathione Beads 4FF 可以纯化各种表达系统融合表达的谷胱甘肽 -S- 转移酶的目的蛋白 谷胱甘肽依赖性蛋白和谷胱甘肽转移酶的重组衍生物 Glutathione Beads 4FF 是以高度交联的
期王亚楠 等 半滑舌鳎生长因子 &!(" 的定点改造及原核表达 ""! 入手 研究其 基因是否存在同样的特殊功能活性 对于进一步研究 基因具有重要意义 本实验室从已经构建的半滑舌鳎 # 文库中筛选获得了 # 全长 发现其仅在成鱼的脑中表达 并参与胚胎的脑部发育过程 为进一步研究半滑舌鳎 基因的功能
第 卷第 期! 年 月 " 水 " 产 " 学 " 报!"! 文章编号! # $!%! # # #! $ %!!! &$& 半滑舌鳎生长因子 的定点改造及原核表达 王亚楠! " 刘旭东! " 穆琳琳! " 刘志鹏! " 李春梅! " 于海洋!! " 张全启! 中国海洋大学海洋生命学院 海洋生物遗传学与育种教育部重点实验室 山东青岛 "$$ 青岛市海洋与渔业局 山东青岛 "$$! 国家海洋局北海环境监测中心
GBZ －2004.doc
C 52 GBZ GBZ/T 160.30 2004 Methods for determination of inorganic phosphorus compounds in the air of workplace 2004 5 21 2004 12 1 GBZ/T 160.30-2004 GBZ 1 GBZ 2 [ Phosphorus pentoxide Phosphorus pentasulfide
连接
doi 0.3969/j.issn.673-454.03.0.03 3 基础研究 小鼠VEGFR 小鼠 VEGFR 胞外 胞外 -4IgG IgG样结构域的原核表达 样结构域的原核表达 纯化及活性鉴定 王 伟 殷小涛 李云奇 田仁礼 阎瑾琦 高江平 于继云 解放军总医院泌尿外科 北京 00853 军事医学科学院基础医学研究所 北京 00850 摘要 目的 获得小鼠血管内皮生长因子Ⅱ型受体 mvegfr
中国临床医学 年 月 第 卷 第 期 )*8)$ 节 功能的影响 本课题组现有的蛋白激酶 如 酪蛋白激酶 蛋白激酶 等表达质粒都构建在 与 / 相同的载体 ) 质粒上 且携带相 同的 标签 这为利用表达标签的优势研究蛋 白激酶和 / 的相互作用带来了困难 因此 本研究将 / 构建到带 * 标签的 载
)*8)$ 中国临床医学 年 月 第 卷 第 期 2- 论 著 -0. 融合蛋白对 外显子 * 可变剪接的影响 缪世琛 屈舒婷 陆 颖 唐 啸 任梁梁 顾建兰 南通大学医学院 南通 摘要 目的 构建带 * 标签的 / 及其截断体质粒 探讨 */ 融合蛋白对 外显子 可变剪接的影响 方法 采用 /) 法扩增 / 基因及其各截断体 将扩增产物和载体 双酶切后回收 连接载体和目的片段 获得重组质粒 在 +
124 河南农业科学第 42 卷, (HPS) ;PRRSV PCV2, [4] PRRSV CSFV ;20, PRRSV,CSFV [5-9],, 1.2 主要试剂和仪器 Real-timePCR PRRSV CSFV PCV2, 3 RotorGene, RG-3000; ND-1000 Na
![124 河南农业科学第 42 卷, (HPS) ;PRRSV PCV2, [4] PRRSV CSFV ;20, PRRSV,CSFV [5-9],, 1.2 主要试剂和仪器 Real-timePCR PRRSV CSFV PCV2, 3 RotorGene, RG-3000; ND-1000 Na](/thumbs/91/105785327.jpg "124 河南农业科学第 42 卷, (HPS) ;PRRSV PCV2, [4] PRRSV CSFV ;20, PRRSV,CSFV [5-9],, 1.2 主要试剂和仪器 Real-timePCR PRRSV CSFV PCV2, 3 RotorGene, RG-3000; ND-1000 Na")
河南农业科学,2013,42(2):123-127 JournalofHenanAgriculturalSciences PCR PRRSV CSFV PCV2,, (, 450011) : 根据 TaqMan 复合荧光探针设计原则, 应用 Primer5.0 和 Oligo6.0 软件设计检测猪繁殖 与呼吸综合征病毒 (PRRSV) 猪瘟病毒 (CSFV) 和猪圆环病毒 2 型 (PCV2) 的特异性引物和探针,
期 齐 心等 噬菌体 ' 穿孔素 ) 的克隆 表达及其活性分析 定时间以寡聚体形式聚集于细胞膜上形成稳定的跨膜通道 造成细胞膜损伤 从而释放细胞内的溶菌酶 水解细胞壁中的肽聚糖层 引起细菌裂解 导致 子代噬菌体从宿主菌内释放 与噬菌体相比 穿孔素 溶菌酶系统不受噬菌体宿主谱的限制 对细菌具有广谱的裂
畜牧兽医学报 噬菌体 1 穿孔素 &% 的克隆 表达及其活性分析 齐 心 陈培培 邹 玲 刘文华 任慧英 张 灿 青岛农业大学动物医学院 青岛 摘 要 为了研究噬菌体 ' 穿孔素 ) 的特征及其对细菌的抑制作用 根据噬菌体 ' 的基因序列 设计引物 &6 扩增穿孔素 基因 并对其序列进行比对和分析 构建 ) 原核重组表达质粒 &) 在大肠杆菌 ' 中诱导表达 摸索最佳表达条件 亲和层析法纯化蛋白质
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 40 94 88 82 77 72 67 62 57 53 48 44 40 37 33 29 26 23 20 17 14 11 8 39 94 88 82 77 71 66 61 57 52 48 44 40 36 32 28 25 22 18 15 12 9 7 38 94 88
2008,28(6) 张希东等 : 精氨酸脱亚氨酶的表达 纯化和活性研究 43 司进行引物合成 编码链和互补链 5 端第一个引物作为全长基因的上 下游引物, 分别包含 EcoRI 和 BamHI 酶切位点, 序列分别为 :5 GACGAATTCATGTCTGTTTT CGACTCTAAATTCAAA
中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,2008,28(6):42~47 精氨酸脱亚氨酶的表达 纯化和活性研究 张希东 李捷雷张洪义张宏义何晓军徐新保肖梅刘承利张辉赵刚 ( 中国人民解放军空军总医院北京 100036) 摘要目的 : 建立精氨酸脱亚氨酶的高效表达菌种和纯化工艺路线 方法 : 人工合成编码支原体精氨酸脱亚氨酶 (argininedeiminase,adi) 的基因, 构建
534 激光生物学报第 24 卷 proteinlevelsaftertransfectionwasidentifiedbyreal timepcrandwesternbloting,respectivly.theu251celprolif erationwasmeasuredbymtt.resul
第 24 卷第 6 期 2015 年 12 月 激光生物学报 ACTA LASER BIOLOGY SINICA Vol.24No.6 Dec.2015 doi:10.3969/j.isn.1007 7146.2015.06.008 pcdna3.1 Pax6 载体的构建及其对胶质瘤细胞增殖的影响 黄涛 1, 彭志宏 2 3, 黄柏胜 (1. 湖南师范大学附属中学, 湖南长沙 410006;2. 长沙市雅礼中学,
附件四：作品送展表（夾於作品說明書第一頁，請勿裝訂）
嘉 義 市 第 31 屆 中 小 學 科 學 展 覽 會 作 品 說 明 書 科 別 : 生 活 與 應 用 科 學 科 組 別 : 國 小 組 作 品 名 稱 : 果 真 有 酵 - 水 果 酵 素 的 應 用 關 鍵 詞 : 水 果 酵 素 環 保 編 號 : 1 摘 要 本 研 究 主 要 的 目 的 是 蒐 集 常 見 的 水 果, 利 用 多 餘 的 果 皮 和 剩 餘 的 果 肉 製 造
16 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology Vol.34No 合 RNA 干扰技术进一步研究其在肺癌发生及发展进程中的作用及机制 1 材料与方法 1.1 细胞系 质粒 菌株及主要试剂 A549 肺腺癌细胞和 HEK293T 人胚肾细胞购自北京协和医学院细胞中心 ; 感
中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,2014,34(10):15 21 DOI:10.13523/j.cb.20141003 人 ANKRD49 基因真核表达载体的构建及其功能的初步研究和 RNA 干扰靶点的鉴定 庞 1 敏 2 王海龙 郭 3 民 郭 2 睿 (1 山西医科大学第一医院太原 030001 2 山西医科大学基础医学院太原 030001) (3 山西医科大学实验动物中心太原
2004级研究生现代免疫学实验技术结业报告
PCR PCR PCR RT-PCR PCR (Polymerase Chain Reaction,PCR) 80 DNA, DNA PCR PCR PCR DNA PCR -- -- DNA DNA 93 DNA PCR DNA DNA ( ) DNA 55 DNA DNA -- TaqDNA dntp DNA -- -- PCR PCR DNA DNA Y (1 X) n Y DNA X (Y)
Microsoft Word - 骆健美.doc
第 30 卷 第 2 期 2015 年 4 月 天 津 科 技 大 学 学 报 Journal of Tianjin University of Science & Technology Vol. 30 No. 2 Apr. 2015 DOI:10.13364/j.issn.1672-6510.20140064 IrrE 重 组 大 肠 杆 菌 的 构 建 和 性 能 分 析 骆 健 美, 郑 媛
第 卷 第 期 年 月 半 导 体 学 报! " # $%&'%' $!&' #% #$1 /#1 $'! / ?/ ?/ / 3 0,?/ ) * +!!! '!,!! -. & ' $! '! 4% %&1)/1(7%&)03 (% )
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Microsoft Word - gc 彭静.doc
生物工程学报 Chinese Journal of Biotechnology DOI: 10.13345/j.cjb.170372 彭静等 / 利用抗原结合多肽嫁接抗体技术制备抗 hcg 单域抗体 Apr. 25, 2018, 34(4): 569 577 2018 Chin J Biotech, All rights reserved 医学与免疫生物技术 569 hcg 彭静, 王琼, 程小玲,
福建农业学报 材料与方法 毒株 主要仪器 主要试剂 引物设计 的培养 反应条件的建立 荧光定量 检测临床样本 结果与分析
福建农业学报 林 甦 朱春华 陈 珍 刘斌琼 施少华 江 斌 蔡国漳 林 羽 黄 瑜 甦 男 硕士 助理研究员 主要从事病毒学和动物传染病学研究 福建农业学报 材料与方法 毒株 主要仪器 主要试剂 引物设计 的培养 反应条件的建立 荧光定量 检测临床样本 结果与分析 林 甦等 鸡 亚型白血病病毒荧光定量 检测方法的建立 福建农业学报 讨 论 林 甦等 鸡 亚型白血病病毒荧光定量 检测方法的建立 责任编辑
<4D F736F F D204B B C8E9CBE1CDD1C7E2C3B8A3A84C4448A3A9B2E2CAD4BAD0A3ACD0DEB6A9C8D5C6DAA3BA
乳酸脱氢酶 (LDH) 测试盒 Cat numberkgt02424/kgt02448 Store at -20 for 3 months For Research Use Only( 科研专用 ) 说明书修订日期 2015.07.13 一. 测定原理乳酸脱氢酶 (Lactate dehydrogenase LDH) 能催化乳酸生成丙酮酸, 丙酮酸与 2,4- 二硝基苯肼反应生成丙酮酸二硝基苯腙,
204,34() 谢小丽等 : 利用原核表达系统一步法制备生物素标记蛋白质 37 多肽底物片段 (biotinacceptorpeptides,bap), 即 4 肽 GLNDTFEAQKIEWH 随后人们利用目的蛋白 BAP BirA 融合表达和双质粒共表达的方法, 以期获得目标蛋白的体内生物素化
中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,204,34():36 4 檪檪 技术与方法 檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪 DOI: 0.3523/j.cb.204006 利用原核表达系统一步法制备生物素标记蛋白质 谢小丽 程剑松 王晓敏 梅香寒 刘 琳 李,2 静 ( 南开大学药学院天津市分子药物研究重点实验室天津 30007 2 天津化学化工协同创新中心天津 30007)
大肠杆菌是广泛用于蛋白生物合成的微生物表达宿主 与其他原核表达系统相比, 大肠杆菌具有遗 [1] 传背景清楚 繁殖快 蛋白表达量高 成本低及适用范围广等优点, 但是大肠杆菌胞内表达重组蛋白会提高细胞破碎分离成本 目前细菌细胞的破碎方法有多种, 包括高压匀浆破碎 玻璃珠研磨 超声破 [2] 碎等机械法
![大肠杆菌是广泛用于蛋白生物合成的微生物表达宿主 与其他原核表达系统相比, 大肠杆菌具有遗 [1] 传背景清楚 繁殖快 蛋白表达量高 成本低及适用范围广等优点, 但是大肠杆菌胞内表达重组蛋白会提高细胞破碎分离成本 目前细菌细胞的破碎方法有多种, 包括高压匀浆破碎 玻璃珠研磨 超声破 [2] 碎等机械法](/thumbs/92/110862795.jpg "大肠杆菌是广泛用于蛋白生物合成的微生物表达宿主 与其他原核表达系统相比, 大肠杆菌具有遗 [1] 传背景清楚 繁殖快 蛋白表达量高 成本低及适用范围广等优点, 但是大肠杆菌胞内表达重组蛋白会提高细胞破碎分离成本 目前细菌细胞的破碎方法有多种, 包括高压匀浆破碎 玻璃珠研磨 超声破 [2] 碎等机械法")
大肠杆菌细胞裂解系统的构建及其在真菌毒素降解酶表达中的应用 * 一赵程程孙长坡常晓娇伍松陵林振泉 ( 国家粮食局科学研究院粮油加工研究所北京 100037) 摘要目的 : 大肠杆菌中分泌表达重组蛋白受限于其分泌效率, 为此设计构建大肠杆菌诱导裂解系统以实 现胞内重组蛋白的快速高效分泌 方法 : 利用大肠菌素 E7 对细胞的裂解能力, 构建共表达目标重组蛋白 和 E7 的大肠杆菌细胞裂解系统, 使目标重组蛋白在
htp://aammt.tmmu.edu.cn 第三军医大学学报,2018,40(18) 1663 DOI: /j 类鼻疽杆菌 Ⅲ 型分泌系统 BPSS1617 蛋白的重组表达及其抗体制备 吴利 1, 黎礼达 1, 胡艺 2, 黎元莉 1, 陈海
1663 DOI:10.16016/j.10005404.201803142 类鼻疽杆菌 Ⅲ 型分泌系统 BPSS1617 蛋白的重组表达及其抗体制备 吴利 1, 黎礼达 1, 胡艺 2, 黎元莉 1, 陈海 1, 朱雄 1, 胡治强 2, 马腾飞 2, 韩丹 2, 李倩 2, 曹刘素 2, 尹小毛 2 2, 毛旭虎 572000 海南三亚, 海南省三亚市人民医院检验科 1 ;400038 重庆,
考生编号政治政治分外语外语分科目 1 科目 1 分科目 2 科目 2 分总分专业代码专业名称考试方式报名号 思想政治理论缺考英语一 45 生物综合 38 生理学缺考 药理学全国统考 思想政治理论
100019008910001 思想政治理论缺考英语一 45 生物综合 38 生理学缺考 83 078006 药理学全国统考 110190172 100019008910002 思想政治理论 61 英语一缺考药学综合 ( 缺考生理学 51 112 078006 药理学全国统考 110199187 100019008910003 思想政治理论缺考英语一缺考生物综合缺考 生物化学与分子生物学 缺考 --
Microsoft Word - 吕?丹.doc
第 32 卷第 6 期 2017 年 12 月 天津科技大学学报 Journal of Tianjin University of Science & Technology Vol. 32 No.6 Dec. 2017 DOI:10.13364/j.issn.1672-6510.20160103 重组人胰岛素原在大肠杆菌中的可溶性表达 吕丹, 闫亚丽, 景丽芳, 张秋荣, 常莉, 刁爱坡, 李玉银
李伟军, 等 PRL 3 基因 C104S 位点突变体和 CAAX 缺失体的构建及表达 517 报道 在我们的前期工作中, 本研究室已构建了 pcdna3 myc PRL 3(p PRL 3) pegfp PRL 3(pE PRL 3) 等质粒, 并对 PRL 3 的有关功能进行了研究, 结果显示,
516 北京大报 ( 医版 ) JOURNALOFPEKINGUNIVERSITY(HEALTHSCIENCES) Vol.41 No.5 Oct.2009 PRL 3 基因 C104S 位点突变体和 CAAX 缺失体的构建及表达 李伟军, 邢晓芳, 曲立科, 孟 麟, 寿成超 论著 ( 北京大临床肿瘤院, 北京肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所生物化与分子生物研究室, 恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室,
Qubit-DNA RNA 总浓度测定 dsdna BR Assay Kits 各试剂加样量 : Buffer 标准 1 标准 2 样品 试剂 ( 荧光染色 ) 总量 ( 溶液体积 ) 50 或 250ml 1 或 5ml 1 或 5ml 待测 250µl 或 1.25ml 原始浓度 未知 0 ng
Qubit-DNA RNA 总浓度测定 dsdna BR Assay Kits 各试剂加样量 : 总量 ( 溶液体积 ) 50 或 250ml 1 或 5ml 1 或 5ml 待测 250µl 或 1.25ml 原始浓度 未知 0 ng/μl 100 ng/μl 待测 200 测定时要求浓度 未知 0 ng/μl 5000ng/ml 0~5000 ng/ml 1 备注 -Buffer:Qubit dsdna
42 山东科学 2013 年 导向治疗是一种有望代替化疗的新的治疗手段, 应用免疫毒素或导向毒素是实现导向治疗的一个重要的发展方向, 通过特异性抗体或细胞因子 激素等与毒素连接, 前者作为导向部分即配体, 可以引导分子到达肿瘤部位并与肿瘤细胞表面过量表达的该种受体结合 ; 后者作为毒素部分, 即杀灭
山东科学 SHANDONG SCIENCE 第 26 卷 第 2 期 2013 年 4 月出版 Vol.26No.2Apr.2013 DOI:10.3976/j.isn.1002-4026.2013.02.008 重组人促性腺激素 - 铜绿假单胞菌外毒素 A 蛋白的可溶性表达 纯化和对肿瘤细胞的抑制活性 郭凯, 赵晓燕, 周红姿, 陈凯, 李纪顺, 陈泉, 杨合同 ( 山东省科学院中日友好生物技术研究中心,
苏州大学硕士学位论文叶酸靶向紫杉醇纳米脂质体的制备及其生物学效应的研究姓名 : 汪梅花申请学位级别 : 硕士专业 : 放射医学指导教师 : 许玉杰 20080501 叶酸靶向紫杉醇纳米脂质体的制备及其生物学效应的研究 作者 : 汪梅花 学位授予单位 : 苏州大学 本文链接 :http://d.g.wanfangdata.com.cn/thesis_y1296729.aspx
國立中山大學學位論文典藏.PDF
國 立 中 山 大 學 中 國 文 學 系 ( 暑 期 專 班 ) 碩 士 在 職 專 班 碩 士 論 文 漢 初 異 姓 諸 侯 王 研 究 研 究 生 : 林 裕 斌 撰 指 導 教 授 : 劉 文 強 教 授 中 華 民 國 97 年 5 月 摘 要 本 篇 論 文 探 究 的 對 象 是 漢 朝 初 年 八 位 異 姓 諸 侯 王, 並 涵 蓋 與 操 縱 他 們 興 盛 殞 落 息 息 相
商 周 三 代 年 代 學 的 研 究 經 過 近 五 年 的 努 力, 完 成 夏 商 周 年 表 本 大 事 概 覽 中 夏 商 周 三 代 的 大 事 紀 年, 即 採 用 夏 商 周 斷 代 工 程 的 考 論 成 果 對 於 無 法 考 證 年 份 的 史 事 或 發 生 在 史 前 時
中 外 歷 史 大 事 概 覽 編 者 說 明 : 1. 傳 說 時 代 與 夏 商 周 年 表 : 人 類 在 未 有 文 字 記 事 之 前, 口 耳 相 傳 的 神 話 傳 說, 是 先 民 對 自 然 變 化 的 體 驗 與 歷 史 經 歷 的 口 述 這 些 傳 說, 或 者 存 有 誇 張 和 穿 鑿, 隨 著 考 古 文 物 的 出 土 與 歷 史 學 家 的 努 力, 汰 偽 存 真,
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2015年全国硕士研究生入学考试
2015 年 全 国 硕 士 研 究 生 入 学 考 试 佛 山 科 学 技 术 学 院 自 命 题 考 试 科 目 考 试 大 纲 ( 科 目 名 称 : 农 业 知 识 综 合 二 科 目 代 码 :340 ) 一 考 查 目 标 农 业 知 识 综 合 二 侧 重 于 动 物 生 产 类 综 合 知 识 的 考 查 考 试 内 容 应 主 要 涵 盖 动 物 遗 传 学 动 物 生 理 学 动