16 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology Vol.34No 合 RNA 干扰技术进一步研究其在肺癌发生及发展进程中的作用及机制 1 材料与方法 1.1 细胞系 质粒 菌株及主要试剂 A549 肺腺癌细胞和 HEK293T 人胚肾细胞购自北京协和医学院细胞中心 ; 感
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- 庸束 董
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1 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,2014,34(10):15 21 DOI: /j.cb 人 ANKRD49 基因真核表达载体的构建及其功能的初步研究和 RNA 干扰靶点的鉴定 庞 1 敏 2 王海龙 郭 3 民 郭 2 睿 (1 山西医科大学第一医院太原 山西医科大学基础医学院太原 ) (3 山西医科大学实验动物中心太原 ) 摘要目的 : 克隆人 ANKRD49 基因并构建其真核表达重组体, 利用构建成功的 ANKRD49 真核表达重组体对其进行功能的初步研究, 并筛选和鉴定其 RNA 干扰靶点 方法 : 提取人肺腺癌细胞株 A549 总 RNA, 逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR) 对 ANKRD49 进行扩增, 扩增产物与真核表达载体 p3 Flag CMV 14 同时进行双酶切, 酶切产物连接后转化入感受态细胞 Top10, 阳性重组质粒 p3 Flag CMV 14/ANKRD49 经菌液 PCR 双酶切和测序鉴定正确后, 用脂质体法 (Lipofectamine TM 2000) 转染人胚肾细胞 (HEK293T), 免疫印迹 (Immunobloting) 和免疫荧光技术检测表达产物 免疫荧光法检测 ANKRD49 在宿主细胞内的定位 MTT 法检测 ANKRD49 对宿主细胞的增殖作用 设计并合成针对人 ANKRD49 基因的 RNA 干扰靶点序列, 与 p3 Flag CMV 14/ANKRD49 共转染 HEK293T 细胞后,Immunobloting 鉴定 ANKRD49 的 RNA 干扰靶点 结果 : RT PCR 结果显示, 从 A549 细胞中扩增出约 720bp 的片段 菌液 PCR 双酶切及测序结果显示重组质粒 p3 Flag CMV 14/ANKRD49 构建成功且序列正确 免疫荧光和 Immunobloting 结果显示, 在转染 p3 Flag CMV 14/ANKRD49 的细胞中有 ANKRD49 的表达, 蛋白质相对分子质量 (Mr) 约为 27kDa, 而转染空质粒组未见表达 MTT 结果显示,ANKRD49 对细胞增殖没有影响 共转染实验结果显示,1 号和 4 号 RNA 干扰序列可以有效降低人 ANKRD49 的表达 结论 : 成功构建了真核表达重组体 p3 Flag CMV 14/ANKRD49, 该蛋白质位于细胞核, 不参与细胞增殖 ; 同时鉴定出该基因的 2 个有效干扰靶点, 为进一步研究其功能奠定了基础 关键词 ANKRD49 真核表达 RNA 干扰肺癌中图分类号 Q789 近年来, 恶性肿瘤的发生率和死亡率呈上升趋势, 其中肺癌病死率的上升趋势尤为明显 研究数据显示全球每年有 120 万新增的肺癌病例, 每年约有 110 万人死于肺癌 [1] 肺癌的发生与环境因素密切相关, 吸烟是引起肺癌发生的主要环境因素之一 [2] 肺癌的发生同时亦是一个多基因参与 多阶段的复杂过程, 香烟烟雾中的多种多环芳烃类致癌物质可以引起基因突变, 促进癌基因的表达, 或者抑制抑癌基因的表达, 从而诱发癌症的发生 而在癌症的发展进程中, 有些基因参收稿日期 : 修回日期 : 电子信箱 :pangmin2009@126.com 与了癌细胞的侵袭 迁移, 导致癌症恶性程度的增高, 给治疗及预后带来诸多不利的影响 有研究表明 AnkyrinRepeatDomain49(ANKRD49) 基因在非侵袭性非小细胞肺癌细胞中高表达, 在侵袭性肺癌细胞中低表达, 提示其与肺癌细胞的侵袭 转移有关, 也与肺癌的治疗及预后有关, 但其确切的生物学功能还未见报道 [3] 本文通过构建 ANKRD49 的真核表达载体, 研究了 ANKRD49 的蛋白定位, 初步研究了其对细胞增殖的影响, 同时利用该载体筛选出 ANKRD49 有效 RNA 干扰靶点, 为后期构建过表达 ANKRD49 的稳定肺癌细胞株奠定了基础, 并且可以结
2 16 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology Vol.34No 合 RNA 干扰技术进一步研究其在肺癌发生及发展进程中的作用及机制 1 材料与方法 1.1 细胞系 质粒 菌株及主要试剂 A549 肺腺癌细胞和 HEK293T 人胚肾细胞购自北京协和医学院细胞中心 ; 感受态细胞 Top10 购自北京全式金生物科技有限公司 ; 真核表达载体 p3 Flag CMV 14 购自美国 Sigma 公司 ;DMEM 高糖培养液 胎牛血清 (FBS) 购自武汉博士德生物工程有限公司 ; TrizolRNA 提取试剂 lipofectamine TM 2000 转染试剂购自美国 Invitrogen 公司 ; 限制性内切酶 EcoRⅠ 和 BamH Ⅰ 购自宝生物工程 ( 大连 ) 有限公司 ; 预染蛋白分子量标准 (Marker) 购自美国 ThermoScientific 公司 ; 辣根过氧化物酶标记的山羊抗小鼠 IgG 购自北京中杉金桥生物技术有限公司 ; 购自北京康为世纪有限公司的试剂有 :HiFi MMLVcDNA 第一链合成试剂盒 2 EsTaq MasterMix T 4 DNA 连接酶 琼脂糖凝胶回收试剂盒 DL 2000DNAMarker 质粒小提试剂盒 RIPA 蛋白提取液 BCA 蛋白定量试剂盒 小鼠抗 Flag 单克隆抗体 FITC 标记的山羊抗小鼠 IgG 和增强型 ECL 化学发光液 其他试剂为国产分析纯 1.2 人 ANKRD49 基因的扩增 A549 细胞在 37 5% CO 2 饱和湿度的培养箱中生长, 培养基为 DMEM 高糖 (10% 胎牛血清, 青霉素 100u/ml, 链霉素 100μg/ml),2~3 天换液一次 当细胞长到 时用预冷的 PBS 洗涤后, 加入 1ml Trizol, 按说明书提取总 RNA; 紫外分光光度法定量后取 1μg 进行逆转录 根据人 ANKRD49 基因开放阅读框编码序列 (GenBank 登录号 :NM_017704) 设计引物, 上游引物为 :5 GGAGAATTCGCCACCATGGAAAAAG AAAAAGGAAATGATGA 3, 下游引物为 :5 CGCGGA TCCAGACTGAGGTGAAGAATTTGTAC 3 在上 下游引物的 5 端分别引入限制性内切酶 EcoRⅠ 和 BamH Ⅰ 的识别切割序列 ( 下划线 ), 在起始密码子之前引入 GCCACC(Kazak 序列, 双下划线 ), 并委托大连宝生物工程有限公司合成 参照 HiFi MMLVcDNA 第一链合成试剂盒说明书合成 cdna 第一链 以 cdna 为模板扩增人 ANKRD49 基因, 反应体系为 50μl, 其中模板 2μl, 上 下游引物 (10μmol/L) 各 1μl,2 EsTaqMasterMix25 μl, 灭菌三蒸水补足到 50μl 同时设置阴性对照组 ( 防止假阳性的扩增产物 ), 即反应体系中以灭菌三蒸水代替 cdna, 其余同实验组 PCR 的反应条件为 :94 保持 5min;94 保持 15s,58 保持 15s,72 保持 15s, 共进行 30 个循环 ;72 保持 5min 扩增产物进行 1.2% 琼脂糖凝胶电泳检测 1.3 真核表达重组体 p3 Flag CMV 14/ANKRD49 的构建及鉴定限制性内切酶 EcoRⅠ 和 BamHⅠ 在同一体系下分别双酶切 p3 Flag CMV 14 载体和 ANKRD49 的 PCR 产物, 经 1.2% 琼脂糖凝胶电泳分离酶切后的载体和目标片段并用胶回收试剂盒进行回收, 按照摩尔比为 1 3 将酶切后的载体和目的基因在 T 4 DNA 连接酶的作用下,22 反应 1h,65 灭活连接酶后将连接产物转化 Top10 感受态细胞, 均匀涂布于含 100μg/ml 氨苄霉素的 LB 固体培养板上,37 培养过夜 挑取单克隆菌斑, 转接于含有氨苄霉素的 LB 液体培养液中进行扩增, 菌液 PCR 进行阳性克隆的初步鉴定后 ( 菌液 PCR 时设置阴性对照组, 设置体系同 1.2 节方法 ), 提取质粒 DNA 进行 EcoRⅠ 和 BamHⅠ 双酶切鉴定 进一步阳性克隆的鉴定采用 DNA 序列分析 1.4 人 ANKRD49 基因 RNA 干扰靶点的设计根据人 ANKRD49 的开放阅读框序列, 利用在线 sirna 预测网站 htps:// bin/ app/rnai, 我们预测获得 4 个 RNA 干扰靶点序列, 并委托中美泰和生物技术 ( 北京 ) 有限公司进行合成, 同时合成阴性对照序列 [4] 人 ANKRD49 的 RNA 干扰靶点序列见表 1 表 1 人 ANKRD49 基因 RNA 干扰靶点序列 Table1 ThesequenceofRNAinterference targetsofhumanankrd49 靶点号靶点序列 (5 ~3 ) 1 GGCCACTCACGTGAACACT 2 GTGGAATAATACCAGAGTG 3 TCGGCTTACCACAGTGCGG 4 TTGTGGAAGGCTGTACAAA 阴性对照 GTTCTCCGAACGTGTCACGT 1.5 细胞培养与转染 HEK293T 细胞的培养基为 DMEM 高糖 (10% 胎牛血清, 青霉素 100u/ml, 链霉素 100μg/ml), 其培养条件为在 37 5% CO 2 饱和湿度的培养箱中生长,2 ~3 天换液一次 细胞接种于 6cm 培养皿, 待细胞生长至约 80% 融合时, 按照 Lipofectamine TM 2000 说明书
3 2014,34(10) 庞敏等 : 人 ANKRD49 基因真核表达载体的构建及其功能的初步研究和 17 进行转染 检测 ANKRD49 的表达时, 转染 2μgp3 Flag CMV 14/ANKRD49 质粒, 同时转染等量的空质粒 p3 Flag CMV 14 为对照 ;ANKRD49RNA 干扰靶点筛选时, 将 2μgp3 Flag CMV 14/ANKRD49 与 1μg sirna 共同转染 HEK293T 细胞 48h 后, 收集细胞进行 Immunoblotinging 检测 ANKRD49 的表达及其 RNA 干扰靶点的鉴定 1.6 免疫印迹采用 RIPA 蛋白提取液制备细胞总蛋白,BCA 法蛋白质定量后取 25μg 总蛋白进行 Immunobloting 检测 ANKRD49 的表达 以小鼠抗 Flag 单克隆抗体 (1 1000) 为一抗, 辣根酶标记的山羊抗小鼠 IgG(1 5000) 为二抗, 抗体反应结束后加入增强型 ECL 化学发光液, 采用天能 Tanon 4200 化学发光凝胶成像系统对结果进行分析 1.7 MTT 法检测细胞增殖取转染 p3 Flag CMV 14 和 p3 Flag CMV 14/ ANKRD49 质粒的 HEK293T 细胞, 制备成密度为 /ml 的单细胞悬液, 取 100μl 接种于 96 孔板中, 每个样品设 6 个复孔, 加入 100μl 完全培养基, 于 37 5% CO 2 的培养箱中培养, 分别于接种后 1d 2d 3d 4 d 和 5d 取出培养板, 每孔加入浓度为 5mg/ml 的 MTT 20μl, 孵育 4h 后终止培养, 弃去上清, 加入 150μl DMSO, 振荡混匀, 酶联免疫检测仪在 495nm 处测定吸光度值 取 6 孔均值, 以培养时间为横坐标, 吸光度值为纵坐标, 绘制细胞增殖曲线 1.8 细胞免疫荧光取转染 p3 Flag CMV 14 和 p3 Flag CMV 14/ ANKRD49 质粒的 HEK293T 细胞, 制备成密度为 /ml 的单细胞悬液, 取 100μl 接种于 12 孔板中的灭菌盖玻片上,24h 后弃去培养液, 预温的 1 PBS 轻轻洗涤 3 次 4% 多聚甲醛 (1 PBS 稀释 ) 室温固定 10 min 1 PBS 洗涤 3 次, 每次 3min, 加 0.2% Triton 100(1 PBS 稀释 ) 透化 5min, 再用 1 PBS 洗 3 次 加入 5% 牛血清白蛋白 (BSA) 封闭液 (1 PBS 稀释 ),37,60min, 吸去封闭液后加 Flag 一抗 (1 200),4 过夜 1 PBS 洗涤 3 次, 每次 3min 加入 FITC 标记的山羊抗小鼠 IgG(1 200) 室温 1h,1 PBS 洗涤 3 次, 每次 3min 0.5μg/mlHoechst33342 室温标记 10min 1 PBS 洗涤 3 次, 每次 3min 荧光封片液封片后镜检 1.9 统计学处理实验数据采用 SPSS13.0 统计学软件进行处理, 计 算资料以均数 ± 标准差 ( x±s) 珋表示, 组间比较应用方差分析, 以 P<0.05 表示差异有显著性 2 结果 2.1 ANKRD49 基因的扩增以 A549 肺腺癌细胞 cdna 为模板进行 PCR 扩增, 琼脂糖凝胶电泳结果显示, 产物片段特异, 大小约 720bp, 阴性对照无扩增条带, 说明成功扩增出人的 ANKRD49 基因, 见图 1 图 1 人 ANKRD49 基因 PCR 产物的琼脂糖凝胶电泳 Fig.1 PCRamplificationofANKRD49 genefrom A549cels M:DNAMarker;1:TheproductofhumanANKRD49RT PCR;2: Negativecontrol 2.2 p3 Flag CMV 14/ANKRD49 重组质粒的构建与鉴定取 3 管含有单克隆菌斑的 LB 培养液进行菌液 PCR 阳性克隆鉴定, 结果如图 2 所示,1 2 号克隆的菌液 PCR 产物大小约为 720bp, 提示其为 p3 Flag 图 2 重组表达质粒 p3 Flag CMV 14/ ANKRD49 菌液 PCR 产物的琼脂糖凝胶电泳 Fig.2 Colony PCRanalysisoftherecombinant plasmidp3 Flag CMV 14/ANKRD49 M:DNAMarker;1~3:RCRidentificationofrecombinantplasmid p3 Flag CMV 14/ANKRD49;4:Negatiecontrol
4 18 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology Vol.34No CMV 14/ANKRD49 阳性重组质粒 接着用 EcoRⅠ 和 BamHⅠ 双酶切 1 2 号克隆的质粒 DNA, 获得 6310 和 720bp 的 2 个片段 ( 图 3), 与理论结果一致 随后的 DNA 测序结果表明, 扩增获得的 ANKRD49 基因序列与已发表的基因序列 ( 基因登录号 :NM_017704) 完全一致 的重组质粒 p3 Flag CMV 14/ANKRD49 以及对照组的空质粒分别转染 HEK293T 细胞,48h 后提取总蛋白, 进行 Immunobloting 检测 结果如图 4 显示, 在转染真核表达重组质粒 p3 Flag CMV 14/ANKRD49 的细胞中有 ANKRD49 蛋白的表达, 而转染空质粒的细胞未见表达 图 3 重组表达质粒双酶切产物的琼脂糖凝胶电泳 Fig.3 Restrictionanalysisoftherecombinant plasmidp3 Flag CMV 14/ANKRD49 M:DNAMarker;1,2:p3 Flag CMV 14/ANKRD49digestedby EcoRⅠ andbamhⅠ 2.3 真核表达载体 p3 Flag CMV 14/ANKRD49 在真核细胞中的表达通过 lipofectamine TM 2000 介导的转染方法将构建 图 4 重组蛋白 ANKRD49 的 Immunobloting 检测 Fig.4 ExpresionofANKRD49protein analyzedbyimmunobloting 1:Proteinsfrom p3 Flag CMV 14plasmidDNAtranfected cels; 2: Proteinsfrom p3 Flag CMV 14/ANKRD49 plasmid DNA tranfectedcels 2.4 免疫荧光技术检测 ANKRD49 的细胞定位采用细胞免疫荧光法检测重组的 ANKRD49 蛋白在宿主细胞 HEK293T 中的表达, 我们发现染色主要集中于细胞核, 细胞质和细胞膜上未见有表达 而作为对照的转染空质粒的细胞未见有细胞核绿色荧光染色 ( 图 5) 图 5 免疫荧光检测 ANKRD49 在 HEK293T 细胞中的表达和定位 Fig.5 TheexpresionandlocationofANKRD49inHEK293Tcelsweredetectedby immunofluorescencestainingmethod Scarbar:25μm 2.5 细胞增殖曲线测定 MTT 法检测 ANKRD49 对宿主细胞增殖的结果表明, 该基因编码的蛋白质不影响宿主细胞的生长速度 ( 图 6) 2.6 人 ANKRD49RNA 干扰靶点的鉴定通过脂质体介导的转染方法将合成的 sirna 与 p3 Flag CMV 14/ANKRD49 质粒 DNA 共同转染 HEK 293T 细胞,48h 后提取总蛋白,ANKRD49RNA 的干扰
5 2014,34(10) 庞敏等 : 人 ANKRD49 基因真核表达载体的构建及其功能的初步研究和 19 图 6 MTT 法检测 ANKRD49 对细胞增殖的影响 Fig.6 CelproliferationofANKRD49 detectedbymttasay 效率通过 Immunobloting 进行检测 结果发现,1 号和 4 号靶点可以有效降低 ANKRD49 的表达 ( 图 7a) 光密度扫描计算法计算各条带积分光密度比值,1 号和 4 号靶点转染的细胞中,ANKRD49 的相对表达量分别为 0.13 和 0.21( 图 7b), 抑制率分别为 84% 和 75%, 与阴性对照组相比, 差异具有统计学意义 (P<0.05) 图 7 ANKRD49RNA 干扰靶点的 Immunobloting 检测 Fig.7 ANKRD49interferencetargetswere identifiedbyimmunobloting (a) ResultsofImmunobloting (b) Relativequantitation of ANKRD49protein P<0.05vscontrol 3 讨论 当前, 肺癌患者的治疗主要以手术为主, 同时辅助以放射治疗和化学治疗 进入 21 世纪以来, 新的分子生物学技术的出现和分子靶向药物的诞生使肺癌的治疗取得了一定的进步, 但由于晚期肺癌患者出现癌细 胞转移 侵袭周围临近的组织器官, 使得肺癌的总体治疗效果仍然不能令人满意 随着分子生物学新技术的发展, 人们更加关注肺癌细胞发生发展的分子机理, 同时致力于寻找并研究肺癌治疗新的分子靶点 人的 ANKRD49 基因定位于人类基因组 11 号染色体 21 号短臂上, 含有 3 个外显子, 开放阅读框包含 720 bp 核苷酸, 编码一个由 240 个氨基酸组成的蛋白质, 在其 78~195 位氨基酸之间串联排列有 4 个 Ankyrin 结构域, 而 Ankyrin 结构域是蛋白质与蛋白质相互作用的普遍基序 [5] 利用生物芯片技术, 科学家们发现 ANKRD49 在高侵袭的肺癌细胞中低表达, 在非侵袭的肺癌细胞中高表达, 提示其与肺癌细胞晚期的侵袭 转移有关 [3] 类似的含有 Ankyrin 结构域的蛋白如 Bcl 3, 在慢性 B 淋巴细胞白血病, 乳腺癌, 鼻咽癌, 淋巴瘤, 胰腺癌和肝细胞癌等多种肿瘤中广泛表达 [6 9] 研究发现该蛋白优先与 NF κb 的 P50 p50 或 p52 p52 同源二聚体结合, 从而使 NF κb 可以结合到靶基因并激活其转录, 参与癌症的发生发展 [10 11] 另一个含有 Ankyrin 结构域的蛋白是 Notch, 通过基因过表达技术和 RNA 干扰技术发现该蛋白参与调控肺癌细胞的增殖 凋亡和分化, 进而影响肺癌疾病的进程 [12] 采用分子克隆技术构建基因表达载体是研究基因功能的一种常用策略, 也是目前基因治疗的常用方法 [13] 通过过表达 AnnexinA2 基因, 李秀凌等发现了 AnnexinA2 可以抑制食管癌 Eca109 细胞增殖和迁移, 为食管癌的治疗提供了新的分子靶点 RNA 干扰 (RNAinterference,RNAi) 是由双链 RNA 分子介导的序列特异性转录后基因沉默过程, 是双链 RNA 分子在 mrna 水平上关闭相关基因表达 对基因的某个部分用 sirna 进行特异性敲除是研究基因功能的另一个重要手段, 敲除后, 可通过观察细胞或生物基因性状的改变来研究该段基因在生物体内的真正作用 同时 RNAi 技术也是肿瘤基因治疗的有效手段 神经元泛肽 C 末端水解酶 L1(UCH L1) 在肺癌细胞内表达, 而在正常的肺组织中不表达 通过 RNAi 技术使 UCH L1 [14] 低表达,Liu 等发现肿瘤细胞更加生长旺盛, 表明 UCH L1 可能抑制肿瘤细胞的生长 这一结果提示可以采用 UCH L1 基因过表达技术来抑制肺癌细胞的生长, 达到治疗肿瘤的目的 本研究成功克隆了人的 ANKRD49 基因, 同时用 EcoRⅠ 和 BamH Ⅰ 双酶切真核表达载体 p3 Flag CMV 14 与纯化的 ANKRD49 基因, 酶切产物经 T 4 DNA
6 20 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology Vol.34No 连接酶连接并转化至 Top10 后, 分别经菌液 PCR 双酶切鉴定以及测序验证, 表明构建成功真核表达重组质粒 p3 Flag CMV 14/ANKRD49, 使用脂质体转染法将其转染 HEK 293T 细胞, 免疫荧光染色和 Immunobloting 结果显示, 该蛋白质能在真核细胞中表达, 且定位于细胞核 进一步我们利用构建的真核表达质粒观察 ANKRD49 对细胞增殖的影响, 结果表明该蛋白不参与调控细胞的生长 同时利用真核表达重组体成功筛选出 ANKRD49 基因的 RNA 干扰靶点, 为进一步研究其功能, 尤其是在肺癌细胞转移 侵袭过程中的作用奠定了基础 参考文献 [1]SiegelR,NaishadhamD,JemalA.Cancerstatistics.CACancer JClin,2012,62(1): [2] 梁戈玉, 浦跃朴, 尹立红.5 种基因与某些环境因素在肺癌发生中交互作用的单纯病例研究. 环境与职业医学,2006,23 (6): LiangG Y,PuY P,YinLH.Case onlystudyonthegene environmentalinteractionrelatedwithlungcancerrisk.jenviron OccupMed,2006,23(6): [3]Yi ChiungHsu,ShinshengYuan,Hsuan YuChen,etal.Afour genesignaturefromnci 60cellineforsurvivalpredictioninnon smalcellungcancer.clincancerres,2009,15(23): [4] 杨丽娟, 李晓宾, 杨红, 等. 小鼠睾丸组织高表达基因 minca1 真核表达质粒的构建及其 RNA 干扰靶点的筛选. 中国生物制品学杂志,2014,27(3): YangLJ,LiXB,YangH,etal.Constructionofeukaryotic expresionvectorforhighexpresionofminca1geneinmouse testisandscreeningofrnainterferencetargetofminca1.chin JBiologicals,2014,27(3): [5]MosaviLK,MinorDL,PengZY.Consensus derivedstructural determinantsoftheankyrinrepeatmotif.procnatlacadsci, 2002,99(25): [6]McKeithanTW,RowleyJD,ShowsTB,etal.Cloningofthe chromosometranslocationbreakpointjunctionofthet(14;19)in chroniclymphocyticleukemia.procnatlacadsci,1987,84 (24): [7] CogswelP C,GutridgeD C,FunkhouserW K.Selective activationofnf κbsubunitsinhumanbreastcancer:potential rolesfornf κb/p52andforbcl 3.Oncogene,2000,19(9): [8]ThornburgNJ,PathmanathanR,Raab TraubN.Activationof nuclear factor κb p50 homodimer/bcl 3 complexes in nasopharyngealcarcinoma.cancerres,2003,63(23): [9] Canoz O, Rasidakis G Z, Admirand J H, et al. ImmunohistochemicaldetectionofBCL 3inlymphoidneoplasms: Asurveyof353cases.ModPathol,2004,17(8): [10]FranzosoG,BoursV,ParkS,etal.Thecandidateoncoprotein Bcl 3isanantagonistofp50/NF kappab mediatedinhibition. Nature,1992,359(6393): [11]FranzosoG,BoursV,AzarenkoV,etal.TheoncoproteinBcl 3 canfacilitatenf kappab mediatedtransactivationbyremoving inhibitingp50homodimersfrom selectkappabsites.emboj, 1993,12(10): [12]WaelH,YoshidaR,KudohS,etal.Notch1signalingcontrols celproliferation,apoptosisanddiferentiationinlungcarcinoma. LungCancer.2014,pi:S (14) doi: /j.lungcan [13] 李秀凌, 梁萌, 刘清, 等. 过表达 AnnexinA2 抑制食管癌 Eca109 细胞增殖和迁移. 疾病预防控制通报,2013,28(1): 1 5. LiXL,LiangM,LiuQ,etal.Celproliferationandmigration ineca109linesuppresedbyoverexpresionofannexina2.bul DisControlPrev,2013,28(1):1 5. [14]LiuY,LashuelHA,ChoiS,etal.Discoveryofinhibitorsthat elucidatetheroleofuch L1activityintheH1299lungcancer celline.chembiol,2003,10(9):
7 2014,34(10) 庞敏等 : 人 ANKRD49 基因真核表达载体的构建及其功能的初步研究和 21 ConstructionofanEukaryocyteExpresionVectorofHumanANKRD49 andthestudyoffunctionandrnainterferencetargetofankrd49 PANGMin 1 WANGHai long 2 GUOMin 3 GUORui 2 (1DepartmentofRespiration,TheFirstHospitalofShanxiMedicalUniversity,Taiyuan ,China) (2AcademyofBasicMedicine,ShanxiMedicalUniversity,Taiyuan ,China) (3CenterofLaboratoryAnimal,ShanxiMedicalUniversity,Taiyuan ,China) Abstract Objective:ToconstructtheeukaryoticexpresionrecombinantplasmidofhumanANKRD49, studyitsfunction,andidentifythernainterferencetargetsofankrd49.methods:totalrnawasextracted froma549celsandthecdnawassynthesized.theopenreadingframeofhumanankrd49genewasamplified fromthecdnabyrt PCR,andclonedintop3 Flag CMV 14toconstructrecombinantplasmidp3 Flag CMV 14/ANKRD49.Afterconfirmingbycolony PCR,doublerestrictenzymedigestionandDNAsequencing, theeukaryoticexpresionrecombinantp3 Flag CMV 14/ANKRD49wastransfectedintoHEK293Tcels.The targetedproteinexpresedinhostcelswasdetectedbyimmunoblotingandimmunofluorescencestaining.the distributionofankrd49inhostcelswasdetectedbyimmunofluorescencestaining.thecelproliferationof ANKRD49 expresedhek293tcelsweremeasuredthroughmttasay.thernainterferencetargetsofhuman ANKRD49wereidentified viaimmunoblotingasayfolowed byco transfectingboth p3 Flag CMV 14/ ANKRD49andsiRNA intohek293tcels.results:theproductofrt PCR was720bp.therecombinant plasmidp3 Flag CMV 14/ANKRD49 wasconfirmedsuccesfulybycolony PCR,doublerestrictenzyme digestionanddnasequencing.immunofluorescencestainingandimmunoblotingshowedthathumanankrd49 wasexpresedsuccesfulyinthep3 Flag CMV 14/ANKRD49transfected 293Tcelsthanmocktransfected celswithmolecularweightwasapproximately27kda.immunofluorescencestainingalsorevealedthatankrd49 wasdistributedinnucleus.mttasayshowedthatankrd49hadnoefectoncelproliferation.co transfection andimmunoblotingasaysshowedthattheexpresionofhumanankrd49waseficientlyknockdownbynumber 1and4siRNA.Conclusion:Theeukaryoticexpresionrecombinantplasmidp3 Flag CMV 14/ANKRD49was constructedandexpresedinnucleusofhek293tcels.thisproteinhadnoefectoncelproliferation.two ANKRD49interferencetargetswereidentified. Keywords ANKRD49 Eukaryoticexpresion RNAinterference Lungcarcinoma
材料 方法
生物技术通报 张发洲 杨慧兰 为了构建单纯疱疹病毒 型 感染细胞多肽 真核表达质粒 应用 技术从 株 的基因组中扩增 基因 并连接至真核表达载体 对阳性克隆进行菌落 酶切和测序鉴定后 成功构建了重 组质粒 用 转染试剂盒将重组质粒 转染至 细胞中 并用 及 检测其表达情况 结果显示 基因在 细胞中得到正确表达 真核表达质粒 的构建成功 为进 一步研究 对宿主细胞的影响奠定了基础 单纯疱疹病毒 型 感染细胞多肽
材料! 方法! # 基因的扩增及其序列分析
生物技术通报 黄艳燕 黄靖华 卢福芝 孙靓 彭立新 周兴 黄日波 利用 的方法从鼠李糖乳杆菌基因组 中扩增到 乳酸脱氢酶基因 并连接到载体 上 构建表达质粒 将重组质粒 转化大肠杆菌 重组菌株经 诱导表达 电泳分 析表明 在大肠杆菌中实现了表达 表达产物的分子量约为 同时采用紫外分光光度法测定 乳酸脱氢酶的酶活 测得重组菌株的 乳酸脱氢酶活力为 最适反应温度为 最适 乳酸脱氢酶 克隆 表达 鼠李糖乳杆菌
:TGF-β bfgf 23 KEY WORDS:transforminggrowthfactor-β ;basicfibroblastgrowthfactor; bonemarrow mesenchymalstemcels;eukaryoticexpressionvector; liposomet
2 ( )208 58 JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)208,Vol.58No. TGF-β bfgf,, 2 (., 330006; 2., 5040) : -β (TGF-β ) (bfgf) (BMSCs), SD BMSCs Percol PCR TGF-β bfgf, pcdna3.(+), 3 BMSCs RT-PCR Westernblot
福建农业学报 材料与方法 试验菌株 引物 主要仪器 主要试剂 细菌培养 模板的制备 反应条件 扩增产物的检测 特异性试验 敏感性试验 分离菌株检测 产物的克隆及序列测定 结果与分析
第 期 甘金华等 强力霉素人工抗原的合成与抗体制备 材料与方法 试剂及溶液
第 卷第 期 年 月 食品与生物技术学报 强力霉素人工抗原的合成与抗体制备 甘金华 邓薇 李进平 艾晓辉 中国水产科学研究院长江水产研究所 湖北荆州 武汉纺织大学环境与城建学院 湖北武汉 采用改进的碳二亚胺两步法将强力霉素半抗原与载体蛋白 连接制备强力霉素 牛血清白蛋白 人工免疫抗原 并用同样方法将强力霉素与载体蛋白 连接制备人强力霉素 卵清白蛋白 人工包被抗原 经紫外扫描分析和动物免疫试验证实 强力霉素人工抗原合成成功
12 (autophagy),imagej,,, 3 [1-4] (self-eating) Transwelinvasion, 20μmol L -1 LY A549 [5] PI3K/AKT 24h,PBS, [6-8],, ml -1 ( ) 600μL
![12 (autophagy),imagej,,, 3 [1-4] (self-eating) Transwelinvasion, 20μmol L -1 LY A549 [5] PI3K/AKT 24h,PBS, [6-8],, ml -1 ( ) 600μL](/thumbs/91/106935627.jpg "12 (autophagy),imagej,,, 3 [1-4] (self-eating) Transwelinvasion, 20μmol L -1 LY A549 [5] PI3K/AKT 24h,PBS, [6-8],, ml -1 ( ) 600μL")
( )2017 57 5JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)2017,Vol.57No.5 11 LY294002, (, 330006) : LY294002 PI3K/AKT 0 10 15 20 25 30μmol L -1 LY294002(LY294002 ) A549,PBS CCK8 LY294002 A549 ; Westernblot
材料 方法
生物技术通报 姜燕 采用鼠抗人血红蛋白 单克隆抗体 和胶体金标记鼠抗人血红蛋白 单克隆抗体 及对照抗体羊抗鼠 利用双抗体免疫夹心反应原理特异性地结合人血红蛋白抗原 在 内可得到胶体金显色结果的原理研制便潜血单克 隆一步法胶体金检测试卡 用于诊断因各种原因引起的消化道出血疾病 应用杂交瘤技术制备两株鼠抗人血红蛋白 抗 体 方法检测 效价 免疫胶体金技术制备胶体金检测试卡 法检测 效价的结果显示 鼠抗人
7 北京大学学报 医学版 # +94* 4 ' % 论著!! "# $ #% %"&!%'!! $ "( )& * $ +,-.)/ ) 01 " * ). " 2")3 )01 ( /" 433% /1 " 0 "51 " -.)/$ 6',)") 4.))%) 0
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生物技术通报 材料 方法
生物技术通报 高曰文 朱耀明 王艳林 朱晨宇 秦烨 胡汉卿 韩钰 旨在探讨盐酸普鲁卡因 对人结肠癌 细胞 基因甲基化及表达的影响 应用巢式双重 甲基化特异性聚合酶链反应 检测盐酸普鲁卡因处理前后 细胞中 基因启动子的甲基 化水平 逆转录 聚合酶链反应 和蛋白印迹技术观察 细胞内 基因表达情况 检测发现人结肠癌 细胞中 基因存在甲基化 经盐酸普鲁卡因处理能够使 基因甲基化水平下降 和蛋白印迹分析结果显
第 卷 -.+$$$-+($-.(+"$(+$%"(+$#'$+(.$+*(.$+(%$%+.$$$+$$+-$( 7-($++$"$($(+'$+'$%*$$&$.$+$%+ $$".(+$+.$+'$+'( ".($#-$4$+" +'$".(+%+$$$++(* %$+$+$"(+'$%+$"
第 卷第 期 年 月 "## $%# - 基础医学 含 '- 野生及突变结合位点的胰岛素受体 '6,78&' 区报告基因载体的构建和鉴定 王美晨 王 璇 蓝 茜 李 癑 刘 莉 伊 静 李 靖 宋刘梅 马莎蕊 宁启兰 李冬民 西安交通大学医学部 遗传学与分子生物学系 环境与疾病相关基因教育部重点实验室 级临床医学七年制 级临床医学五年制 陕西西安 ( 摘要 目的 利用 6< *%&$%', :%''"D$"
Really Good Antibodies Bethyl 二抗产品册 超过 670 种抗小鼠 兔子 山羊和大鼠的二抗 bethyl.com
Really Good Antibodies Bethyl 二抗产品册 超过 670 种抗小鼠 兔子 山羊和大鼠的二抗 bethyl.com Bethyl 公司 Bethyl Laboratories, Inc. ) 成立于1972年 一直秉承改善生活的理念致力于科学研究的理念 提供高质量的抗体产品 和抗体定制服务 Bethyl所销售的每一个抗体都是在德克萨斯州的蒙哥马利的唯一工厂生产 并且都经过Bethyl
中国临床医学 年 月 第 卷 第 期 )*8)$ 节 功能的影响 本课题组现有的蛋白激酶 如 酪蛋白激酶 蛋白激酶 等表达质粒都构建在 与 / 相同的载体 ) 质粒上 且携带相 同的 标签 这为利用表达标签的优势研究蛋 白激酶和 / 的相互作用带来了困难 因此 本研究将 / 构建到带 * 标签的 载
)*8)$ 中国临床医学 年 月 第 卷 第 期 2- 论 著 -0. 融合蛋白对 外显子 * 可变剪接的影响 缪世琛 屈舒婷 陆 颖 唐 啸 任梁梁 顾建兰 南通大学医学院 南通 摘要 目的 构建带 * 标签的 / 及其截断体质粒 探讨 */ 融合蛋白对 外显子 可变剪接的影响 方法 采用 /) 法扩增 / 基因及其各截断体 将扩增产物和载体 双酶切后回收 连接载体和目的片段 获得重组质粒 在 +
期 唐 曦 胡 娅 徐炎华 等 $#' 通过下调 ( 抑制肺腺癌细胞系 &)#' 的迁移侵袭 微小 $%&#'$#' 已被证实是一种抑癌 -/$%& 可参与调控直肠癌 乳腺癌 卵巢癌等多种肿瘤细胞生长 转移和侵袭 从而发挥抑制肿瘤进 展的作用 有研究显示 $#' 在肺腺癌组织中 # 表达减少 但尚未
第 卷第 期 年 月 西安交通大学学报 医学版!"#$## %&'&!& 基础研究 通过下调 抑制肺腺癌细胞系 的迁移侵袭 唐 曦 胡 娅 徐炎华 汪春林 邱 萍 王向辉 华中科技大学同济医学院附属荆州医院肿瘤科 湖北荆州 # 长江大学 医学院 湖北荆州 # 华中科技大学同济医学院附属荆州医院胸外科 湖北荆州 # 摘要 目的 探索微小 $%&#'$#' 是否通过下调 ( 抑制肺癌细胞系 &)#' 细胞的迁移和侵袭
124 河南农业科学第 42 卷, (HPS) ;PRRSV PCV2, [4] PRRSV CSFV ;20, PRRSV,CSFV [5-9],, 1.2 主要试剂和仪器 Real-timePCR PRRSV CSFV PCV2, 3 RotorGene, RG-3000; ND-1000 Na
![124 河南农业科学第 42 卷, (HPS) ;PRRSV PCV2, [4] PRRSV CSFV ;20, PRRSV,CSFV [5-9],, 1.2 主要试剂和仪器 Real-timePCR PRRSV CSFV PCV2, 3 RotorGene, RG-3000; ND-1000 Na](/thumbs/91/105785327.jpg "124 河南农业科学第 42 卷, (HPS) ;PRRSV PCV2, [4] PRRSV CSFV ;20, PRRSV,CSFV [5-9],, 1.2 主要试剂和仪器 Real-timePCR PRRSV CSFV PCV2, 3 RotorGene, RG-3000; ND-1000 Na")
河南农业科学,2013,42(2):123-127 JournalofHenanAgriculturalSciences PCR PRRSV CSFV PCV2,, (, 450011) : 根据 TaqMan 复合荧光探针设计原则, 应用 Primer5.0 和 Oligo6.0 软件设计检测猪繁殖 与呼吸综合征病毒 (PRRSV) 猪瘟病毒 (CSFV) 和猪圆环病毒 2 型 (PCV2) 的特异性引物和探针,
材料 方法 载体构建 转基因植株的获得
生物技术通报 唐宏琨 曾洪梅 杨秀芬 邱德文 通过根癌农杆菌 介导转化法 将含有激发子基因 的植物表达载体 转化三生烟 获得了转基因烟草植株 用 检测确认了阳性转化株 用 杂交 和 杂交进一步证实了 基因的整合 转录和表达 对 代转基因阳性株进行 接种试验 结果显示 与非转基 因对照相比 表达 的烟草叶片枯斑数量减少 表明蛋白激发子基因 的表达提高了转基因烟草对 的抗性 激发子 基因 烟草 转化 材料
材料导报 研究篇 年 月 下 第 卷第 期 种球的制备 单步溶胀法制备分子印迹聚合物微球 洗脱处理 种子溶胀聚合机理 种球用量的影响
水相中 组氨酸单分散分子印迹聚合物微球的合成 表征及其识别性能研究 李思平等 李思平 徐伟箭 较佳工艺条件下 在水性体系中选用无皂乳液聚合法制得的单分散微米级聚苯乙烯微球为种球 分别以组氨酸 甲基丙烯酸 或丙烯酸胺 乙二醇二甲基丙烯酸酯 为模板分子 功能单体和交联剂 合成了 组氨酸分子印迹聚合物微球 研究了形貌 粒径及其分布以及模板分子与功能单体之间的相互作用 分别以 激光粒度分析仪紫外分光光度法和红外光谱表征功能单体与交联剂之间的共聚情况
< 1+1 <! " #$% &!"#$ %&' ( )( %&* ) + ), %&- )+. )../'0 ) 1 ) "' )!"#$%&' (1% ( )* " + + %,-.2(13/01 )' 扩增 &' 基因 煮沸获得铜绿假单胞菌 ) 基因组作为模板 ) )( 作为引物
213456!"# $ % # %557;&/55/?5,/ @@@!88>>!"#!$% &'()*+ 武汉市疾病预防控制中心 武汉 /&55, % 华中科技大学同济医学院病原生物学系微生物教研室 武汉 /&55&5 & 武汉市第十一医院 武汉 /&5555,- O ' 0 ' =! 6!, 2 M*34!. 5 '2 ' 0 0* 6) 7 88^9:;0, 6! 89-4 O?@ 7%58
国际肿瘤学杂志 2014 年 8 月第 41 卷第 8 期 JIntOncol,August2014,Vol 41,No edwithpcdna3.1 DCC.Results ThepopulationofcelstransfectedwithpcDNA3.1(+) DCCplasmid
628 ingprotein1asacoreregulatorofmek/erk pathway dependent genesignaturesincolorectalcancercels[j].plosgenet,2010,6 (12):e1001231. [12]TsofackSP,GarandC,SeredukC,etal.NONOandRALYproteins are required for
福建农林大学硕士学位论文番茄抗叶霉菌相关基因的鉴定及 TRV 16K 基因的功能分析姓名 : 郑璐平申请学位级别 : 硕士专业 : 分子病毒学指导教师 : 吴祖建 ; 蔡新忠 20070401 番茄抗叶霉菌相关基因的鉴定及 TRV 16K 基因的功能分析 作者 : 郑璐平
534 激光生物学报第 24 卷 proteinlevelsaftertransfectionwasidentifiedbyreal timepcrandwesternbloting,respectivly.theu251celprolif erationwasmeasuredbymtt.resul
第 24 卷第 6 期 2015 年 12 月 激光生物学报 ACTA LASER BIOLOGY SINICA Vol.24No.6 Dec.2015 doi:10.3969/j.isn.1007 7146.2015.06.008 pcdna3.1 Pax6 载体的构建及其对胶质瘤细胞增殖的影响 黄涛 1, 彭志宏 2 3, 黄柏胜 (1. 湖南师范大学附属中学, 湖南长沙 410006;2. 长沙市雅礼中学,
标题
第 35 卷第 3 期 2014 年 9 月 FOREIGN MEDICALSCIENCESECTION OF MEDGEOGRAPHY Vol.35No.3 Sep.2014 189 基础医学 含 mir-497 野生及突变结合位点的胰岛素受体 mrna3 UTR 区报告基因载体的构建和鉴定 王美晨 3 1,2 1,2 1,2 1,2, 王璇, 蓝茜, 李玥, 刘莉, 1,2 1,2 伊静, 李靖,
程汉良 夏德全 吴婷婷 孟学平 吉红九 董志国 陈淑吟 对文蛤 青蛤 硬壳蛤 江户布目蛤 薄片镜蛤 和菲律宾蛤仔 种帘蛤科贝类和 个地理种 群文蛤 大连 连云港 湛江 防城港 的细胞色素 氧化酶亚基 基因片段的核苷酸序列进行了分析 以探讨这一序列在种质鉴定 种群遗传结构和分子系统发生研究中的应用价值 测序结果 表明 所有物种扩增片段长度均为 序列 含量 明显高于 含量 物种间共有变异位点 个 其中简约信息位点
# 杭州师范大学学报 自然科学版 年 材料和方法 主要仪器, (" 仪 杭州朗基公司 *&6 % 凝胶成像系统 上海天能科技 16 7 型 A 培养箱 9&72! 倒置相差显微镜 A %+9 荧光显微镜 A% &(7 " 数码照相系统 +6&)6 /* 流式细胞仪,&&+7 主要试剂 *7&; 试剂
第 卷第 期 年 月 杭州师范大学学报 自然科学版!"# "$%% &'" # & #! 表达载体构建及其表达对 ' 细胞增殖的影响 虞 游 张艳欧 赵文铖 白 坚 陈建明 杭州师范大学生命与环境科学学院 浙江杭州 # 摘 要 "* (" 扩增的 %!% 基因连接到 +8% * 载体并测序鉴定 经测序正确的 %!% 基因再连接到 +$.( 载体构建 +$.( 1.1# 重组质粒 重组质粒 +$.(
未命名-1
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 ss a c y e vg 13 14 15 16 17 18 19 H 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 发现生命的螺旋 克里克在提出 中心法则 时曾指出 遗传信息是沿 Ｄ Ｎ Ａ - Ｒ Ｎ Ａ - 蛋白质的方向流动的 遗传信息不可能从 Ｒ Ｎ Ａ 回到 Ｄ Ｎ
标题
第 34 卷第 6 期西南大学学报 ( 自然科学版 ) 2012 年 6 月 Vol.34 No.6 JournalofSouthwestUniversity (NaturalScienceEdition) Jun. 2012 文章编号 :1673 9868(2012)06 0041 04 乙型肝炎病毒外膜蛋白真核 1 表达质粒的构建和表达 王丹, 童师雯, 张红敏, 李宏, 胡鹏, 杨轶轩, 张大志,
celsco-culturedwithesfbutnotin MD-M-31celsculturedalone.InadditionFSP-1washighly expressedinthecancertissuewithco-growthofmd-m-31celsandesfinnudemicea
( )016 56 4 JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)016Vol.56No.4 1-1 a b a a a ( a. ; b. 330006) : -l(fibroblast-specificprotein-1fsp-l) Transwel MD-M-31 ESF; RT-qPCR MD-M-31 ESF FSP-1 mrn ; MD-M-31
第 期 焦霞 等 上调! 基因表达对肺腺癌细胞增殖与凋亡的影响 性肿瘤的发生发展 转移及血管形成 有望成为候选抑癌基因 但目前对其抑制肿瘤进展的具体机制尚不完全明了 本实验采用脂质体介导的稳定转染 将! 导入人肺腺癌, 细胞 经 1 筛选后获得稳定高表达! 的, 细胞克隆 观察该转基因细胞克隆 +
第 卷第 期 年 月 江苏大学学报 医学版!"#$%&#'#'$ #($ 上调! 基因表达对肺腺癌细胞增殖与凋亡的影响 焦霞 朱晓蔚 李顺龙 戴桂红 蒋小芹 姚娟 肖蔚 于鸿 泰州市人民医院 病理科 普外科 肿瘤科 江苏泰州 摘要 目的 建立稳定转染 7% 下游调节基因 7%' $#7#$#' ##;01 的, 细胞株 探讨! 对, 细胞增殖与凋亡的影响及其可能的分子机制 方法 经脂质体介导将含有!
贾 园等 甲型 /3 流感病毒 /0 基因在昆虫细胞中的截短表达 # 共编码至少 种蛋白 许多研究已经证实 血凝素 /0 是流感病毒最重要的表面抗原 /0 含有 ( 个结构域 信号肽 胞浆区 跨膜区和胞外区 本实验设计去掉 /0 信号肽 跨膜域和胞内域个结构域的基因序列 通过昆虫杆状病毒表达系统表达
中国生物工程杂志! 甲型 流感病毒 基因在昆虫 细胞中的截短表达 贾 园 沈 阳 邱亚峰 史子学 邵东华 王晓杜 邓绪芳 王皓婷 赵福广 马志永 中国农业科学院上海兽医研究所 上海 ( 吉林农业大学 长春 ) 摘要 目的 利用 "" * * +,-. 表达重组 /0 蛋白 1 及 0 方法鉴定其表达 方法 采用 方法扩增 0 2 ( #/3 /0 基因 将其克隆到 - /40 载体上 重组质粒 -
858 刘晓军, 等. 前列腺特异抗原 3 慢病毒表达载体的构建与包装 的表达后可影响其增殖 [2-3], 但 PCA3 的过表达对前列腺癌细胞是否有作用还尚未研究 本文通过 PCR 扩增 PCA3, 然后克隆到真核表达载体 pcdh-cmv-mcs-ef1-copgfp 中, 目的是构建重组质粒,
![858 刘晓军, 等. 前列腺特异抗原 3 慢病毒表达载体的构建与包装 的表达后可影响其增殖 [2-3], 但 PCA3 的过表达对前列腺癌细胞是否有作用还尚未研究 本文通过 PCR 扩增 PCA3, 然后克隆到真核表达载体 pcdh-cmv-mcs-ef1-copgfp 中, 目的是构建重组质粒,](/thumbs/92/110991495.jpg "858 刘晓军, 等. 前列腺特异抗原 3 慢病毒表达载体的构建与包装 的表达后可影响其增殖 [2-3], 但 PCA3 的过表达对前列腺癌细胞是否有作用还尚未研究 本文通过 PCR 扩增 PCA3, 然后克隆到真核表达载体 pcdh-cmv-mcs-ef1-copgfp 中, 目的是构建重组质粒,")
中国癌症杂志 2013 年第 23 卷第 11 期 CHINA ONCOLOGY 2013 Vol.23 No.11 857 前列腺特异抗原 3 慢病毒表达载体的构建与包装 刘晓军 1 王娜 2 姚旭东 1 曹达龙 1 1. 复旦大学附属肿瘤医院泌尿外科, 复旦大学上海医学院肿瘤学系, 上海 200032 ; 2. 复旦大学附属肿瘤医院肿瘤研究所, 复旦大学上海医学院肿瘤学系, 上海 200032
材料 方法
生物技术通报 陆敏 许黎明 吴宏宇 张继恩 李国栋 黄青山 溶葡萄球菌酶 是一种能高效裂解葡萄球菌细胞壁的肽链内切酶 已有研究表明其能够有效预防和去除奶牛乳腺中葡萄球菌的感染 但该酶在牛奶中的性质研究还缺少详细的研究数据 现对重组溶葡萄球菌酶在牛奶中的一些性质进行研究 检测了加入溶葡萄球菌酶后牛奶性状的变化和重组溶葡萄球菌酶在牛奶中的酶活的稳定性以及溶葡萄球菌酶在牛奶中的抑 杀菌活性 结果显示 重组溶葡萄球菌酶未改变牛奶的外观性状
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pegfp-n/tnfr 载体的构建及鉴定 叶顺传, 曾秋棠, 吴辉文, 吕云波华中科技大学同济医学院协和医院心研所, 湖北武汉 (430022) E-mail:yeshunchuan@gmail.com 摘要 : 目的 : 本研究旨在构建人肿瘤坏死因子受体 (TNFR ) 绿色荧光蛋白表达载体 pegfp-n/tnfr, 为研究 TNFR 细胞内转位奠定实验基础 方法 : 培养 U937 细胞,
目 录 第 一 部 分 序 厦 门 大 学 嘉 庚 学 院 简 介... 3 第 二 部 分 教 学 管 理 厦 门 大 学 嘉 庚 学 院 教 师 工 作 规 范... 5 厦 门 大 学 嘉 庚 学 院 课 程 班 管 理 说 明... 15 厦 门 大 学 嘉 庚 学 院 本 科 生 毕 业
教 师 手 册 厦 门 大 学 嘉 庚 学 院 教 务 部 二 〇 一 一 年 编 目 录 第 一 部 分 序 厦 门 大 学 嘉 庚 学 院 简 介... 3 第 二 部 分 教 学 管 理 厦 门 大 学 嘉 庚 学 院 教 师 工 作 规 范... 5 厦 门 大 学 嘉 庚 学 院 课 程 班 管 理 说 明... 15 厦 门 大 学 嘉 庚 学 院 本 科 生 毕 业 论 文 ( 设 计
兽医临床诊断学实验指导
兽 医 临 床 诊 断 学 实 验 指 导 河 北 科 技 师 范 学 院 动 物 科 学 系 临 床 兽 医 学 实 验 室 2009 年 2 月 目 录 学 生 实 验 守 则... 3 实 习 一 动 物 的 接 近 保 定 和 基 本 检 查 法...4 实 习 二 临 床 基 本 检 查 法 及 一 般 检 查...10 实 习 三 循 环 系 统 的 临 床 检 查...15 实 习 四
g ml 10% ph 色谱条件 kinetex C μm 100 A 4. 6 mm 150 mm 25 5 μl A B 10 mmol /L ml /min
25 4 2013 8 监测技术 5 1 2 1 ( 1. 江苏省疾病预防控制中心, 江苏南京 210009; 2. 南京医科大学第二附属医院, 江苏南京 210029) 5 Phenomenex kinetex C 18 2. 6 μm 4. 6 mm 150 mm 10 mmol /L ph 2. 5 + 60 40 DAD 280 nm 5 20. 0 mg /L ~ 100 mg /L 0.
材料 材料和方法 人骨肉瘤细胞系 MG 63 和人成骨细胞系 hfob1.19 购自中科院上海细胞库 ; 质粒提取试剂盒 RNA 提取试剂盒 逆转录试剂盒 PCR 试剂盒及 Lipofectamine TM 2000 转染试剂盒购自 Invitrogen;MTT 购自 Sigma;Sp
1428 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2013,29(8):1428 1432 [ 文章编号 ] 1000 4718(2013)08 1428 05 mir 335 靶向 Sp1 对人骨肉瘤 MG 63 细胞增殖的调控 王勇, 赵伟 ( 沈阳医学院附属中心医院骨四科, 辽宁沈阳 110024) [ 摘要 ] 目的 : 探讨 mir 335 对人骨肉瘤
福建农业学报 材料与方法 毒株 主要仪器 主要试剂 引物设计 的培养 反应条件的建立 荧光定量 检测临床样本 结果与分析
福建农业学报 林 甦 朱春华 陈 珍 刘斌琼 施少华 江 斌 蔡国漳 林 羽 黄 瑜 甦 男 硕士 助理研究员 主要从事病毒学和动物传染病学研究 福建农业学报 材料与方法 毒株 主要仪器 主要试剂 引物设计 的培养 反应条件的建立 荧光定量 检测临床样本 结果与分析 林 甦等 鸡 亚型白血病病毒荧光定量 检测方法的建立 福建农业学报 讨 论 林 甦等 鸡 亚型白血病病毒荧光定量 检测方法的建立 责任编辑
File
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国内高等医学院校基础医学二级学科评价结果（1）
国内高等校基础医学二级学科竞争力评价简介 北京大学医学图书馆参考国内外各项评价指标体系, 建立了一套基础医学二级学科竞争力评价指标体系 分别从人才队伍 科学研究和教学成果三方面一共涉及 34 项指标, 对全国 39 家校的 12 个基础医学二级学科进行了评价 我们已经连续做了 4 年的评价,2012 年度的评价结果见下表或 http://library.bjmu.edu.cn/ 名 次 2012 年度国内高等校基础医学二级学科评价结果
细 胞 生 物 学 实 验 指 导 细 胞 生 物 教 研 室 目 录 实 验 一 动 物 细 胞 的 基 本 形 态 观 察 和 显 微 测 量 1 实 验 二 线 粒 体 的 活 体 染 色 及 电 镜 照 片 观 察 4 实 验 三 液 泡 系 的 活 体 染 色 及 电 镜 照 片 观 察 6 实 验 四 细 胞 生 理 活 动 的 观 察 7 实 验 五 细 胞 组 分 的 化 学 反 应
217 3 (1) : 2.g 48 [12] U/g 4 ml 4h 3 6 ml (BGC-823) 2min 2 W 4r/min 5 min 446nm 3 (2) : 2.g : 11 ; 6 ml 2 min 2 W :BGC-823 ; 4r/min 5min
![217 3 (1) : 2.g 48 [12] U/g 4 ml 4h 3 6 ml (BGC-823) 2min 2 W 4r/min 5 min 446nm 3 (2) : 2.g : 11 ; 6 ml 2 min 2 W :BGC-823 ; 4r/min 5min](/thumbs/91/105740021.jpg "217 3 (1) : 2.g 48 [12] U/g 4 ml 4h 3 6 ml (BGC-823) 2min 2 W 4r/min 5 min 446nm 3 (2) : 2.g : 11 ; 6 ml 2 min 2 W :BGC-823 ; 4r/min 5min")
33 3 OOD & MACHINERY 217 3 食品与机械 Vol.33No.3 Mar.217 DOI:1.13652/j.issn.13-5788.217.3.29 Extractionprocessoptimizationandanticanceractivityofmaizeyelowpigment YU Hui LIU Mei-jia LIU Jian-li CAO Xiang-yu
中国科学技术大学 材料工程 05 校外调剂 0870 化学工程 吉林大学 应用化学 05 校外调剂 0870 化学工程 四川大学 制药
045700000787 东北大学 07030 分析化学 05 校外调剂 07030 无机化学 68 66 94 04 34 063700000004 沈阳药科大学 07030 分析化学 04 校内跨专业调剂 070303 有机化学 73 56 9 00 30 0007008903 北京大学 0780Z 药学类 05 校外调剂 070303 有机化学 75 67 09 8 4 085750830 苏州大学
赵明娜等 : IQGAP1 通过 ERK 信号通路促进非小细胞肺癌细胞增殖 肺癌是我国癌症相关死亡的首要原因 [1] 肿瘤 异质性 早期难以发现以及高复发率导致肺癌患者 5 年总生存率仅为 1% [2] 非小细胞肺癌 (non-small cell lung cancer, NSCLC) 约占肺癌总
![赵明娜等 : IQGAP1 通过 ERK 信号通路促进非小细胞肺癌细胞增殖 肺癌是我国癌症相关死亡的首要原因 [1] 肿瘤 异质性 早期难以发现以及高复发率导致肺癌患者 5 年总生存率仅为 1% [2] 非小细胞肺癌 (non-small cell lung cancer, NSCLC) 约占肺癌总](/thumbs/90/102081169.jpg "赵明娜等 : IQGAP1 通过 ERK 信号通路促进非小细胞肺癌细胞增殖 肺癌是我国癌症相关死亡的首要原因 [1] 肿瘤 异质性 早期难以发现以及高复发率导致肺癌患者 5 年总生存率仅为 1% [2] 非小细胞肺癌 (non-small cell lung cancer, NSCLC) 约占肺癌总")
中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 21, 8(): 2 8 DOI: 1.11844/cjcb.21..5 研究论文 IQGAP1 通过 ERK 信号通路促进非小细胞肺癌细胞增殖 赵明娜娄加陶 * ( 上海交通大学附属胸科医院检验科, 上海 2) 摘要该研究探讨了 IQGAP1(IQ domain GTPase-activating protein
# $ 234# #& 列腺癌组织和细胞中的表达 观察在前列腺癌细胞株中过表达 %% 对前列腺癌细胞凋亡的影响 并研究此过程细胞中一些凋亡相关蛋白的表达情况 材料与方法 材料 %% 和随机对照序列 广州市锐博生物科技有限公司 人前列腺永生化上皮细胞 6, 以及人前列腺癌细胞系 6<3%/ 和 中国武
现代泌尿外科杂志 #& 年 月第 # 卷第 期 #/ 基础研究 微小核糖核酸 对前列腺癌细胞凋亡的影响李森茂 李 昂 胡 嘏 余 羉 王少刚 叶章群 华中科技大学同济医学院附属同济医院泌尿外科 湖北武汉 %&&& #%#$$$&# #& # ::-323 @-7,=
66 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology Vol.29No.2009 DH0B 293FT 细胞均由湖州师范学院细胞研究所实验室提供..2 试剂限制性内切酶 EcoRⅠ BamHⅠ DNA marker T4DNALigase Taq 酶 质粒小量提取试剂盒 胶回收试剂盒均为 T
中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,2009,29():65~69 檪檪 研究简报 檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪 EGFP LacZ 双报告基因真核表达载体的 构建及体外表达 刘 莉 周 政 采克俊 张易祥 何 2 湃 曹 访 ( 湖州师范学院生命科学学院湖州 33000 2 苏州大学生命科学学院苏州 25006) 摘要构建 (β 半乳糖苷酶与增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)
150 微生物学通报 2009, Vol.36, No.1 (systemic lupus erythematosus, SLE), Sm(B B D1), Sm D1, SLE [1], Sm D1 (immunoblot, IBT) (enzyme linked immunosorbent as
![150 微生物学通报 2009, Vol.36, No.1 (systemic lupus erythematosus, SLE), Sm(B B D1), Sm D1, SLE [1], Sm D1 (immunoblot, IBT) (enzyme linked immunosorbent as](/thumbs/88/114888322.jpg "150 微生物学通报 2009, Vol.36, No.1 (systemic lupus erythematosus, SLE), Sm(B B D1), Sm D1, SLE [1], Sm D1 (immunoblot, IBT) (enzyme linked immunosorbent as")
微生物学通报 JAN 20, 2009, 36(1): 149~153 Microbiology tongbao@im.ac.cn 2009 by Institute of Microbiology, CAS 生物实验室 人 SmD1 抗原的酵母真核表达及其初步应用 * 杨湘越吴文冰兰小鹏 ( 350025) 摘要 : 通过 PCR 扩增 Sm D1 基因, 与酵母表达载体 ppic9k 重组, 构建表达质粒
动物学
2007 5 1 2 2..2 3..3 4..4 5 6 6..12 1...15 1 1 1 2 3 4 2 1 2 3 4 1 2 1 1 2 3 1% 4 70% 5 0.05 0.2% 6 2 2 1 7 10% 3 5% 2 0.3 5% 3 70 80% 4 5 90% 40% 9 1 80% 70% 6 40% 15 5 1 12 24 70% 70% 7 70% 2% 1 2 3
05Cv1.mps
第 三 章 皮 肤 病 的 防 治 和 护 理 学 习 要 点 皮 肤 病 的 预 防 不 同 的 皮 肤 病 要 采 取 相 应 的 预 防 措 施, 多 数 皮 肤 病 要 通 过 去 除 病 因, 避 免 诱 发 因 素, 切 断 传 播 途 径 等 措 施 来 预 防 皮 肤 病 的 治 疗 了 解 内 服 药 物 的 适 应 证 和 不 良 反 应, 掌 握 外 用 药 物 的 性 能 和
浙江理工大学学报 第 卷 第 期 年 月!"#$%# & ' ' 文章编号 $$$ 复制缺陷型腺病毒! - 的构建及其对结肠癌细胞生长的影响 黄 越 陈文铎 周 炜 董 淼 高 永 许韶威 徐 涛 唐 斌 浙江理工大学生命科学学院 杭州, 摘 要 通过同源重组方式 利用 3: 系统成功构建携带 =)
浙江理工大学学报 第 卷 第 期 年 月!"#$%#&' ' 文章编号 $$$ 复制缺陷型腺病毒!- 的构建及其对结肠癌细胞生长的影响 黄 越 陈文铎 周 炜 董 淼 高 永 许韶威 徐 涛 唐 斌 浙江理工大学生命科学学院 杭州 摘 要 通过同源重组方式 利用 3: 系统成功构建携带 =)3/ 基因的复制缺陷型腺病毒 命名为 3:$ ="$?$=)3/3 并研究其对结肠癌细胞株 "4) 及 %$.
討論
MTT cell viability assay 1 [45] succinate dehydrogenase MTT Kreb s cycle 2 MTT 3-[4,5-Dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide DMSO 570 nm 15 3 MTT solution MTT Sigma Cat. M-2128 ( PBS ) 5
人结肠癌 细胞系为研究对象 抑制物 转染 细胞后 观察 细胞增殖能力及!" 基因表达变化情况 预测及验证靶向调控!" 基因的 #$ 为后续科研以及临床治疗提供新的思路 材料与方法 材料人结肠癌 细胞系 正常结肠上皮组织细胞系 #%&' 细胞系来源于中南大学湘雅医学院医学检验系实验中心 &' 培养液
对人结肠癌细胞系 细胞增殖及 基因表达的影响 林琳 周刘祥 王晓春 中南大学湘雅医学院医学检验系 湖南长沙 摘要 目的 探讨 "$ 对人结肠癌 细胞增殖及 ( 基因表达的影响 方法 运用实时荧光定量 )* 检测 细胞和正常结肠上皮组织 +*, 细胞中 "$ 与 ( "+- 的表达水平 "$ 抑制剂 $/$0$1 转染 细胞后 观察细胞增殖能力 及 "$ ( "+-"$ 表达水平 1 0% 检测 (
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骨 有 明 訊 肌 動 蛋 白 絲 與 細 胞 形 態 關 係 之 研 究 科 別 : 生 物 科 第 48 屆 科 學 展 覽 北 二 區 佳 作 作 者 : 呂 苹 瑋 范 競 勻 指 導 老 師 : 陳 季 瑄 老 師 壹 摘 要 本 研 究 以 人 類 的 子 宮 頸 癌 細 胞 (HeLa cell) 為 細 胞 骨 架 的 觀 察 對 象, 經 過 培 養 與 繼 代, 利 用 免 疫
PCR 条形码试剂盒方案器材和耗材 Oxford NANOPORE Technologies Oxford Nanopore Technologies Oxford Science Park, Oxford OX4 4GA, UK
PCR 条形码试剂盒方案器材和耗材 Nanopore Technologies Science Park, OX4 4GA, UK support@nanoporetech.com www.nanoporetech.com PCR 条形码试剂盒的器材和耗材 PCR 条形码基因组 DNA 英文 器材 Hula mixer (gentle rotator mixer) Hula 混匀仪 ( 低速旋转式混匀仪
胥丰恺 等 ( 与食管鳞形细胞癌增殖和迁移关系的体外研究!,, - (1 1/ <! &<! 食管癌是一种常见的消化道恶性肿瘤 在中国 食管癌发病率位列第五 死亡率位列第四 病理 类型以鳞形细胞癌为主 发病率显著高于腺癌 由于食管癌易于迁移和转移的特性 尽管数十年来食管癌的诊治水平在不断提高 但其五
复旦学报 医学版 (,/ 与食管鳞形细胞癌增殖和迁移关系的体外研究 胥丰恺 古 杰 王 琳 卢春来 葛 棣 袁云锋 蒋家好 复旦大学附属中山医院胸外科 上海 摘要 目的 探讨钙蛋白酶小亚基 1( 在食管鳞形细胞癌细胞系中的表达水平 分析其与食管鳞形细胞癌细胞增殖和迁移能力的相关性 方法 挑选人正常食管上皮细胞系 及食管鳞形细胞癌细胞系 与 应用 1 检测细胞系中 ( 蛋白质水平 应用 )( 干扰下调
医学研究杂志 年 月 第 卷 第 期 论 著 0+.%$. 0 1$.# 1,4 : (54!& ,6 8& 295,!&-,:478(4 4&5 &7-9! A, 5 7 *-42&54,,6:478(8(4! & + 7 (& !. (
5 &( $ *( 7 254, 7!8-&5,7968 254, 3&-& 2 4 5 * 4( 87 D7,- 0 ' @&-4&, %4!,5@,(5& 7 254-9(68 254, & 2&: 7;,(&-,5-4&-2 -( %7,!D7,- '' 0 7& C,> C +&-& 2 % 7,,(,&--,2&-4B&54,! (5782587 & >*7 ((4, *&5 7,6 2,*&74(,
PCR专题改.doc
Primer3 http://frodowimitedu/cgi-bin/primer3/primer3_wwwcgi Primer5 Oligo665 Primer5 http://wwwbioonnet/dispbbsasp?boardid=25&id=38536 Oligo667 http://wwwbioonnet/dispbbsasp?boardid=25&id=40898 1 PCR 1
标题
第 33 卷第 8 期西南大学学报 ( 自然科学版 ) 2011 年 8 月 Vol.33 No.8 JournalofSouthwestUniversity (NaturalScienceEdition) Auġ 2011 文章编号 :1673 9868(2011)08 0057 06 小鼠 CHD5 基因 sirna 重组腺 1 病毒载体的构建及鉴定 陈妮 1, 左国伟 2, 潘玥 1, 赖国旗
臧晓南 张学成 王高歌 刘金姐 张晓辉 刘 滨 对两种丝状蓝藻 钝顶节旋藻和盐泽螺旋藻 在基因工程中常用作选择试剂的 种抗生素 氯霉素 氨苄青霉素 红霉素 链霉素 卡那霉素 庆大霉素和新霉素 的敏感性作比较实验 结果表明 两种蓝藻对抗生素的敏感性既有共同的特点 也有 明显的差异 它们对红霉素 氯霉素和链霉素最敏感 致死浓度分别为 和 两种蓝藻对氨苄青霉素比较敏感 的氨苄青霉素即可抑制 和 的生长 但
期 姬媛媛 王志东 杨正安 等 &' 对肝癌细胞 $ 癌基因 和 ()*+ 表达的影响 胞癌变 胰岛素样生长因子!+"0!0#,)1 9*1)&' 作为一种增殖调控因子 在细胞分化 增殖 胚胎的生长发育中发挥着重要的促进作 % 用 前期研究已证实 &' 具有刺激肝癌细胞生长增殖的功能 然而 &' 与
第 卷第 期 年 月 西安交通大学学报 医学版!"#$## %&'& $& 基础研究 对肝癌细胞 癌基因 和 表达的影响 姬媛媛 王志东 杨正安 王宝太 史 敏 惠 博 雷妮娜 岳卫娜 西安交通大学医学部第二附属医院 科研中心实验室 干四病区普通外科 陕西西安 $% 摘要 目的 观察胰岛素样生长因子 &' 对肝癌细胞 $ 中癌基因 和 ()*+ 表达的影响 方法 培养肝癌细胞株 $ 用 &'!,-
4 : pcdna3.1(+) ;PLV-EF1A-EGFP(2A) 30s,41 30s,72 2min,35 ; Puro ; TG1; (Hu min 1% manembryonickidney293cels); (Ma- din-darbycaninekidneyce
33 4 2017 6 CHINESEJOURNALOF VIROLOGY Vol.33 No.4 June 2017 1# 2#,, 2, 2, 1 3* 1*,, (1., 511436; 2., 510230; 3., 510663) : HEK-293-HA RT-PCR HA, pcdna3.1(+ ), pcdna3.1(+ )-HA pcdna3.1(+)-ha PLV-EF1a-EGFP(2A)Puro
期 余钧辉 孙学军 郑见宝 等 %&' 通过 )# ",#-# 信号通路促进结肠癌细胞的增殖 结直肠癌是目前最为常见的恶性肿瘤之一 其全球范围的综合发病率在恶性肿瘤中男性排名第 女性排名第 近年来随着生活水平的提高 饮食习惯的改变 结直肠癌的发病率在我国呈逐年增长的趋势 年 我国结直肠癌新发病例数
第 卷第 期 年 月 西安交通大学学报 医学版!"#$## %&'& & 基础研究 通过 信号通路促进结肠癌细胞的增殖 余钧辉 孙学军 郑见宝 王 炜 杨 魁 魏光兵 西安交通大学第一附属医院普通外科 陕西西安 $ 摘要 目的 探讨 %&' 对结肠癌细胞增殖的影响 并初步探讨其分子机制 方法 用生长曲线实验和 %% 法检测 %&'# 对结肠癌细胞 (% 增殖的影响 流式细胞仪检测 %&' 对结肠癌细胞周期的影响
2 和 p53 再生化合物 (reactivatorofp53andinductionof tumorapoptosis,rita), 三环噻吩衍生物, 是一种潜在的抗癌先导化合物 研究表明,RITA 与 p53 结合, 激活野生型 p53, 促进 p53 的累积 ; 同时在体内外抑制 p53 与
1 检测肿瘤凋亡和 p53 再生化合物对不同 p53 状态人脑胶质瘤细胞的生长抑制作用 论著 冯小丽 1, 何小艳 2#, 曾焕超 1, 宋鑫培 1, 肖维威 1 1, 吴清华 1. 南方医科大学公共卫生学院三级生物安全实验室, 广东广州 51515; 2. 南方医科大学南方医院神经外科, 广东广州 51515 摘要 : 目的探讨 p53 靶向小分子 RITA 对不同 p53 状态人脑胶质瘤细胞的生长抑制作用
标题
吉林农业大学学报 ２０１６ ３８ １ ８７ ９１ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｊｉｌｉｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｈｔｔｐ ｘｕｅｂａｏ ｊｌａｕ ｅｄｕ ｃｎ Ｅ ｍａｉｌ ｊｌｎｄｘｂ ｖｉｐ ｓｉｎａ ｃｏｍ 神 经 生 长 因 子 ｍｒｎａ 在 鹅 等 级 前 卵 泡 中 的 表达 刘璐璐 隋玉健 朱海洋 武惠岩 杨 辉 孙永峰 吉林农业大学动物科学技术学院 长春 １３０１１８
生命科学研究 房 蓓 武泰存 王景安 以玉米沈单 号为材料 用溶液培养的方法研究了缺锌 低锌和正常供锌对玉米生长发育的影响 进一步明确了一定量低锌比缺锌对玉米的伤害更大 并对其 同工酶谱及蛋白质表达进行了分析 结果表明 一定浓度的低锌培养使玉米生长受抑及受害最重 且地上部分比地下部分更敏感 低锌和缺锌处理时 种同工酶的酶谱和蛋白表达与正常供锌时均有明显的差异 尤其在一定量低锌浓度时 有些同工酶的表达增强或被特异性诱导
连接
502 南方医科大学学报 J South Med Univ 202;32(4) 基础研究 小鼠前列腺干细胞抗原的原核表达 纯化及抗原活性检测 董金凯 2 罗 津 3 阎瑾琦 2 张 亮 2 高江平 于继云 2 中国人民解放军总医院泌尿外科 北京 00853 2 军事医学科学院基础医学研究所 北京 00850 3 湖南省永州 市人民医院 湖南 永州 425000 摘要 目的 RT-PCR 扩增小鼠前列腺干细胞抗原
厦门大学学位论文原创性声明 本人呈交的学位论文是本人在导师指导下, 独立完成的研究成果 本人在论文写作中参考其他个人或集体已经发表的研究成果, 均在文中以适当方式明确标明, 并符合法律规范和 厦门大学研究生学术活动规范 ( 试行 ) 另外, 该学位论文为 ( ) 课题 ( 组 ) 的研究成果, 获得
学校编码 :10384 密级 学号 :24520091152989 硕士学位论文 TNFAIP8 在胃癌中表达及临床意义 The Expression and Significance of TNFAIP8 in Gastric Cancer 指导教师姓名 : 闻 * 强 专业名称 : 外科学 论文提交日期 : 论文答辩日期 : 刘忠臣副教授 2012 年 4 月 2012 年 6 月 2012 年
! 黄 芬等 过表达热休克蛋白 % 提高 *+ 细胞表达抗体的能力! 别转染表达抗 #* 的质粒 最后应用 234 ' 检测两组细胞表达抗 #* 的能力 结果显示 实验组细胞 * % 基因的表达量明显高于对照组细胞 过表达 * % 的 *+ 细胞组抗 #* 的表达量高于对照组细胞 5/$ 研究首次揭
中国生物工程杂志!" 过表达热休克蛋白 提高 细胞 表达抗体的能力 黄 芬 安小平 李 存 何彰华 张宝中 米志强 王 娟 童贻刚 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室 北京 % 陕西师范大学生命科学学院 西安 %& 摘要 通过在中国仓鼠卵巢细胞 *+ 中过表达热休克蛋白 % 以提高其表达抗体的能力 首先从中国仓鼠基因组,-' 中扩取 * % 基因 构建真核表达质粒.,-'
中国畜牧兽医 7! " # 猪紧密连接蛋白 基因克隆及其, - 片段的筛选 曹丽华 王 萍 郝文艳 代小丽 陈培芳 石德顺 李湘萍 广西大学 亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室 南宁 0 摘 要 试验旨在筛选有效抑制猪紧密连接蛋白 : 8' 基因表达的 5 # 干扰片段 为后期利
中国畜牧兽医 7 猪紧密连接蛋白 基因克隆及其 - 片段的筛选 曹丽华 王 萍 郝文艳 代小丽 陈培芳 石德顺 李湘萍 广西大学 亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室 南宁 0 摘 要 试验旨在筛选有效抑制猪紧密连接蛋白 6-+-6:' 基因表达的 干扰片段 为后期利用 干扰技术深入了解 ' 基因在猪卵母细胞成熟过程中的功能奠定基础 本研究首先克隆了猪 ' 基因 并构建了其真核表达载体 而后筛选了有效抑制
2004级研究生现代免疫学实验技术结业报告
PCR PCR PCR RT-PCR PCR (Polymerase Chain Reaction,PCR) 80 DNA, DNA PCR PCR PCR DNA PCR -- -- DNA DNA 93 DNA PCR DNA DNA ( ) DNA 55 DNA DNA -- TaqDNA dntp DNA -- -- PCR PCR DNA DNA Y (1 X) n Y DNA X (Y)
1725
药 品 名 氢 化 可 的 松 英 文 名 Hydrocortisone 别 名 氢 考 的 松 ; 氢 可 的 松 ; 可 的 索 ; 皮 质 醇 ; 氢 化 考 的 松 ; 氢 化 皮 质 素 ; 考 地 索 ; 氢 可 ;Cortisol 剂 型 1. 片 剂 :10mg,20mg;2. 注 射 剂 : 稀 乙 醇 溶 液 :10mg(2ml), 25mg(5ml);50mg(10ml);100mg(20ml);3.
吴克复等 粒 单型人白血病细胞系的建立及其细胞生物学性质的研究 Ｗ ｕｋ ｆ ｕ Ｅｓ ｂ ｓ ｈ ｍ ｆ ｍｙ ｄ ｍ ｙ ｕｋ ｍ ｓ ｄ ｓ ｕ ｄ ｓ ｆ ｈ ｒ ｂ ｇ ｐ ｒ ｐ ｒ ｓ 图版 １ 吴克复等 粒 单型人白血病细胞系的建立及其细胞生物学性质的研究 Ｗ ｕｋ ｆ ｕ Ｅｓ ｂ ｓ ｈ ｍ ｆ ｍｙ ｄ ｍ ｙ ｕｋ ｍ ｓ ｄ ｓ ｕ ｄ ｓ ｆ ｈ ｒ ｂ ｇ ｐ ｒ ｐ
2015,35(4) 龚隆财等 :ctni linker TnC 融合蛋白的原核表达及鉴定 49 免疫反应鉴定, 表明重组表达的 ctni linker TnC 融合蛋白具有较好的免疫原性, 保存了 ctni 和 ctnc 单体的天然结构, 有望成为天然 ctni TnC 复合物的替代物, 为下一步
中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,2015,35(4):48 53 DOI:10.13523/j.cb.20150407 ctni linker TnC 融合蛋白的原核表达及鉴定 龚隆财 罗镇明 杨雁青 王振宇 向军俭 (1 暨南大学广东省分子免疫与抗体工程重点实验室广州 510632) 王 宏 (2 广州市疾病与食品安全免疫学快速检测重点实验室暨南大学分室广州 510632)
第 期 黄雪莲等 响应面优化绿色木霉菌培养基 材料与方法 菌种 仪器与试剂 菌种的活化 单因素试验 响应面优化试验 优化工艺的验证 数据处理 结果与分析
第 卷第 期 年 月 食品与生物技术学报 响应面优化绿色木霉菌培养基 黄雪莲 于新 仲恺农业工程学院轻工食品学院 广东广州 利用响应面分析法对绿色木霉菌的培养基进行优化 通过测量不同营养条件下绿色木霉 菌落生长直径研究其生物学特性 在单因素实验的基础上 选定葡萄糖添加量 丙氨酸添加量和磷酸二氢钾添加量 个因素进行中心组合实验 建立二次回归方程 并应用响应面分析法进行优化 结果表明 绿色木霉菌最佳培养基为葡萄糖
招生人数 其中合计推免推免硕士连读 考 试 科 目 01( 全日制 ) 耳鼻咽喉科学 ( 专业学位 ) 肿瘤学 01( 全日制 ) 内科学 ( 专业学位 ) 康复医学与理疗学 01( 全日制 ) 康复医学与理疗学 ( 专业学位 ) 麻醉学
001 北京协和医院 100104 病理学与病理生理学 01( 全日制 ) 病理学与病理生理学 ( 学术型 ) 1 1 只招收推荐免试生, 不接受统考生报名 100201 内科学 01( 全日制 ) 内科学 ( 学术型 ) 12 10 西医 ) 或 654 基础医学综合 4 一无 100208 临床检验诊断学 01( 全日制 ) 临床检验诊断学 ( 学术型 ) 1 1 只招收推荐免试生, 不接受统考生报名
南通大学杂志社 南通大学学报 医学版. */(& 0 1&( () (' / ' '-& -' (- 评价血清 %'8$ 在肝细胞肝癌诊断中的作用 张 玉 邵建国 陈 琳 卞兆连 管海涛 南京中医药大学 南京 江苏省南通市第三人民医院肝病研究所 摘 要 目的 探讨血清 %'8$ 作为一种新的生物标志
.*/& 0 1&) '/' '-& -'- 评价血清 %'8$ 在肝细胞肝癌诊断中的作用 张 玉 邵建国 陈 琳 卞兆连 管海涛 南京中医药大学 南京 江苏省南通市第三人民医院肝病研究所 摘 要 目的 探讨血清 %'8$ 作为一种新的生物标志物在肝细胞肝癌 2&-*&/ -&/-'%&3 44 诊断中 的作用 方法 采用实时定量聚合酶链式反应 /&$'% 9*&'&' 2%/& -&' /&-'3
保健食品功能学评价程序和检验方法
保 健 食 品 功 能 学 评 价 程 序 和 检 验 方 法 (1996 年 7 月 18 日 卫 监 发 [1996]38 号 发 布, 自 发 布 之 日 起 实 行 ) 1. 主 题 内 容 和 适 用 范 围 本 程 序 和 检 验 方 法 规 定 了 评 价 食 品 保 健 作 用 的 统 一 程 序 和 检 验 方 法 本 程 序 和 检 验 方 法 适 用 于 评 价 食 品 的 免
RM5 基因表达载体构建 稳定转染 549 细胞系的建立及功能的初步研究肖锏, 等 995 STRCT Objective: To establish a stable 549 cell line transfected by RN binding motif 5 (RM5) expression
994 中南大学学报 ( 医学版 ) J Cent South Univ (Med Sci) 2014, 39(10) http://www.csumed.org DOI:10.11817/j.issn.1672-7347.2014.10.002 www.csumed.org/xbwk/fileup/pdf/201410994.pdf RM5 基因表达载体构建 稳定转染 549 细胞系的建立及功能的初步研究
第一章 图 １ １ 传染病的特征 ９ Ｔ ｈ１ Ｔ ｈ２ 细胞调节机制简图 正调节 负调节 细胞因子与细菌的相互作用机制目前尚未完全明了 有实验表明 细胞因子与细菌之间 存在有互利和互抑双重效应 例如 Ｔ Ｎ Ｆα 和 ＩＦＮγ 可抑制放线菌的生长而 ＩＬ ６ 的作用则 反之 ＩＬ １ ２ 和 ＧＭ ＣＳＦ 可促进某些致病性大肠杆菌生长而 ＩＬ １ｒａ 可抑制之 研究表 明 某些致病性大肠杆菌有与
! 马 纪等 ($ 过表达转基因小鼠质粒构建及其功能验证! 为 :;, 产品 逆转录试剂为 ), 产品 6 *, 为 * 产品 双荧光报告检测试剂盒为 ), 产品! 细胞株为本所保存 过表达载体的构建从 ( 数据上搜索找到 ($ +,,, 序 列 设计两对引物 表 分别用于 01) 基因上游, 区域
中国生物工程杂志! "# 过表达转基因小鼠质粒构建及其功能验证 马 纪 # 孙奋勇 张 越 # # 洪 岸 暨南大学生物工程研究所 广州 %& 上海市第十人民医院 上海 ' 广东省生物工程药物重点实验室 广州 %& # 基因工程药物国家工程研究中心 广州 %& 摘要 目的 比较两种 ($ 转基因小鼠过表达载体构建方法 为建立 ($ 过表达转基因小鼠奠定基础 方法 )( 扩增长约!*+ 的 +, $
期 许万云等 绵羊 %( 基因外显子 酵母表面展示库的构建及鉴定 - &8!"$#"%(!!$#!!"! &#"! "$## # # -! 8!* "!& # # "! 9!" #!"! "!"$#" )*!! &#&%$#!!9! 9 %!8"&#"! "$! %!# "!9& #!9!&"$!9
中国畜牧兽医 6! " # 绵羊 基因外显子 酵母表面展示库的构建及鉴定 许万云 王会敏 汪文伦 胡梦薇 严 国 李建华 高剑峰 石河子大学生命科学学院 石河子 1 摘 要 根据绵羊 %( 基因序列和酿酒酵母表面展示载体 / 上的多克隆位点设计特异性引物 从绵羊组织中提取总 )* 并逆转录 利用 ) 技术扩增得到 %( 基因 克隆获得 / 目的片段 并提交!# 登录号 ) 将该基因通过双酶切连接到表面展示载体
2:20 和 )!)) 在非小细胞肺癌中的表达及其相关性 李婷 等 +) )*&'2:20 ))!!! +) )*&'!!)!!) )*-7&!!) ( )*))1 *()0 )!)) )0(! ((! 0 肺癌是世界范围内常见的恶性肿瘤 其中 # < 以上的肺癌组织学类型是非小细胞肺癌 )0(!
中南大学学报 医学版! 2:20 和 )!)) 在非小细胞肺癌中的表达及其相关性 李婷 周建华 邓征浩 傅春燕 蒋海鹰 高振芹 王金胜 任宏政 王鹏 中南大学湘雅医学院病理学系 长沙 长治医学院 山西长治 摘要 目的 探讨成纤维细胞生长因子 0 *))1 *()0 2:20 和骨桥蛋白 )!))0-7& 在非小细胞肺癌 )0(! ((!&' 组织中的表达及其相关性 方法 应用免疫组织化学 7 法分析
中 草 药
中 草 药 致 谢 李 沛 赵 继 敏 郑 智 敏 江 亚 楠 等 病 理 生 理 学 教 研 室 老 师 在 实 验 中 给 予 的 指 导 和 帮 助 狄 建 彬 顾 振 纶 赵 笑 东 钱 培 刚 蒋 小 岗 郭 次 仪 中 草 药 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 8 期 10 年 8 月 1324 LDL C 非常明显升高 (
+
~ 1 ~ ~ 2 ~ 1-1 UHPLC-SEC 法对治疗性抗体的分析 TSKgel UP-SW3 UHPLC HPLC A TSKgel UP-SW3 2 μm (4.6 mm ID. 15 cm B UHPLC-SEC 1.7 μm (4.6 mm ID. 15 cm mmol/l (ph 6.7 + 2SO4 mmol/l Na +.5 % NaN3.35 ml/ 25 UV 28 nm 5
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疾 病 名 柯 萨 奇 病 毒 感 染 英 文 名 coxsackie virus infections 缩 写 别 名 ICD 号 A08.3 概 述 柯 萨 奇 病 毒 感 染 是 由 柯 萨 奇 病 毒 引 起 的 病 毒 性 感 染 性 疾 病 临 床 表 现 复 杂 多 样, 有 无 菌 性 脑 膜 炎 脑 炎 心 肌 炎 心 包 炎 流 行 性 胸 肌 痛 疱 疹 性 咽 峡 炎 等,
2183 (colagentypeialpha1,col1a1) 是细胞外基质 (ex tracelularmatrix,ecm) 的重要组成成分, 对细胞的黏附和分化有重要作用, 研究发现,COL1A1 基因在乳腺导管癌和乳腺小叶癌中均有不同程度的高表达, 并且可能与乳腺癌的发生和转移存在一定相关
2182 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2012,28(12):2182-2186 [ 文章编号 ] 1000-4718(2012)12-2182-05 靶向 COL1A1 基因的 shrna 对人乳腺癌 MDA-MB-231 细胞增殖与凋亡的影响 余海浪 1, 刘安玲 1, 周珏宇 1, 孟伟 1, 郑文岭 2 1, 马文丽 ( 1 南方医科大学基因工程研究所,
中国生物工程杂志!" 新型双基因表达盒真核载体的构建及功能验证 杜寿文 李 昌 王宇航 任大勇 刘存霞 孙丹丹 朱 娜 李 沂 秦艳青 金宁一 吉林大学畜牧兽医学院 长春 ' 军事医学科学院军事兽医研究所全军基因工程重点实验室 长春 摘要 目的 构建含双基因表达盒的新型基因疫苗真核表达载体 )*+,
中国生物工程杂志!" 新型双基因表达盒真核载体的构建及功能验证 杜寿文 李 昌 王宇航 任大勇 刘存霞 孙丹丹 朱 娜 李 沂 秦艳青 金宁一 吉林大学畜牧兽医学院 长春 ' 军事医学科学院军事兽医研究所全军基因工程重点实验室 长春 摘要 目的 构建含双基因表达盒的新型基因疫苗真核表达载体 )*+, 并对其功能进行验证 方法 设计一个包含人巨细胞病毒启动子 -*).(. % 启动子 信号肽基因 血凝素
htp://aammt.tmmu.edu.cn 第三军医大学学报,2017,39(17) 1735 目前, 结直肠癌是世界上第三大常见的恶性肿瘤 [1-2] 在美国, 其死亡率在癌症患者中高居第 2 位, 仅次于肺癌 [3] 当结直肠癌被早期诊断发现且未转移时, 通过手术可以治愈 但是, 仅有 39
![htp://aammt.tmmu.edu.cn 第三军医大学学报,2017,39(17) 1735 目前, 结直肠癌是世界上第三大常见的恶性肿瘤 [1-2] 在美国, 其死亡率在癌症患者中高居第 2 位, 仅次于肺癌 [3] 当结直肠癌被早期诊断发现且未转移时, 通过手术可以治愈 但是, 仅有 39](/thumbs/93/112406444.jpg "htp://aammt.tmmu.edu.cn 第三军医大学学报,2017,39(17) 1735 目前, 结直肠癌是世界上第三大常见的恶性肿瘤 [1-2] 在美国, 其死亡率在癌症患者中高居第 2 位, 仅次于肺癌 [3] 当结直肠癌被早期诊断发现且未转移时, 通过手术可以治愈 但是, 仅有 39")
1734 DOI:10.16016/j.10005404.201612168 下调 STYK1 基因表达可抑制结直肠癌细胞生长与侵袭 唐佳佳, 叶林 (400016 重庆, 重庆医科大学附属第一医院重症医学科 ) [ 摘要 ] 目的探讨 STYK1 基因下调对结直肠癌细胞 HCT15 增殖 凋亡和迁移以及 MEK/ERK 和 PI3K/AKT 信号通路的影响 方法采用基因干扰技术抑制结直肠癌细胞 HCT15
SNAT2 mrna SNAT2 mr- NA 2 SNAT SNAT2 12 SNAT2 SNAT2 SNAT2 SNAT2 SNAT2 SNAT pet28a+ pbk - CMVΔ SNAT2 - HA pbk - CMV -
4 2 5 Vol 42 No 5 2 0 1 3 1 0 Journal of Shanghai Normal UniversityNatural Sciences Oct 2 0 1 3 2SNAT2 1 1 2* 1 200234 2 110016 钠离子依赖的中性氨基酸转运蛋白 2( SNAT2) 属于 SLC38 家族, 参与小的中性氨基酸跨膜转运, 在哺乳动物组织中广泛表达 SNAT2
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378 中华消化外科杂志 2012 年 8 月第 11 卷第 4 期 over expresionofpten wasobtainedandtransfectedintomkn28cels.thesurvivalofmkn28celsinthe transfectiongroupwassignifi
377 论著 PTEN PI3K/AKT 信号传导途径对胃癌细胞株 MKN28 凋亡的影响 许小涛陶泽璋宋启斌姚颐阮鹏 摘要 目的探讨 PTEN PI3K/AKT 信号传导途径对胃癌细胞株 MKN28 凋亡的调控作用及其机制 方法构建 PTEN 真核表达载体, 转染至胃癌细胞株 MKN28 中 ( 转染组 ); 同样方法转染空载体和等量的 PBS 分别作为阴性对照组和空白对照组, 检测对胃癌细胞株
"' 中国生物工程杂志 5 ( /(! + ) (+)( ( 2 34 ) 2 以转化有克隆载体 6''' 或表达载体 , 的 9:% 和.9% 两种大肠杆菌中为对象进行比较研究 旨在为鉴定质粒拷贝数和选择合适的宿主细胞提供参考 材料和方法 材 料 大肠杆菌 9:% 和.9% 菌株由本实
中国生物工程杂志!" "# 多重 在质粒拷贝数检测中的应用 李 媛 任长虹 吴永红 叶 巧 石锦平 屈武斌 郑晓飞 刘虎岐 张成岗 军事医学科学院放射与辐射医学研究所蛋白质组学国家重点实验室 北京 #% 西北农林科技大学生命科学学院 杨凌 & 摘要 聚合酶链式反应,- 作为常规分子克隆技术已在分子生物学的各个领域得到广泛应用 然而 多重,- 技术应用于质粒拷贝数检测的研究尚未见报道 为深入探索多重,-
张红丽 等 部分功能域基因的原核表达与分析 第６期 发表序列 ＡＹ８１９６５０ 同源性为 １００ 与国外 １０ 株 同源性为 ９８畅 ８ 有 １３ 个碱基发生了突 变 其中 ４ 个是有意义的突变 这 ４ 个有意义的 突变分别为第 ２５７ 位 Ｔ Ｃ 第 ５０５ 位 Ａ Ｃ 第 ９０８ 位 Ａ Ｇ 第 １０１２ 位 Ｇ Ｃ 图 ４ 这些差异可 能是捻转血矛线虫株间存在地域差异所致 ２畅 ５ ＨＰＳ 原核表达与鉴定
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Vol.9 No.3 2016 年 2 月 February 2016 酿酒酵母 GPD2 基因沉默表达载体的构建 王 斌 1, 苏秋琼 1, 冯佳乐 1, 叶晓丹 1, 薛婷 1, 陈由强 (1. 福建师范大学生命科学学院, 福州 350117; 2. 福建师范大学福建省发育与神经生物学重点实验室, 福州 350117) 1, 2* 摘要 : 根据 5 -UTR 的二级结构能够阻碍基因转录的原理,
22 赵冰冰, 等. TIZ 基因过表达对卵巢上皮癌细胞生物学特性的影响 [KEY WORDS] Ovarian neoplasms; Tumor necrosis factor receptor-associated peptides and proteins; Zinc fingers; Gen
![22 赵冰冰, 等. TIZ 基因过表达对卵巢上皮癌细胞生物学特性的影响 [KEY WORDS] Ovarian neoplasms; Tumor necrosis factor receptor-associated peptides and proteins; Zinc fingers; Gen](/thumbs/92/109277383.jpg "22 赵冰冰, 等. TIZ 基因过表达对卵巢上皮癌细胞生物学特性的影响 [KEY WORDS] Ovarian neoplasms; Tumor necrosis factor receptor-associated peptides and proteins; Zinc fingers; Gen")
肿瘤 212 年 1 月第 32 卷第 1 期 TUMOR Vol. 32, January 212 www.tumorsci.org 21 基础研究 Basic Research DOI: 1.3781/j.issn.1-7431.212.1. 4 Copyright 212 by TUMOR TIZ 基因过表达对卵巢上皮癌细胞生物学特性的影响 赵冰冰, 张玮, 王琪, 阳志军, 李力广西医科大学肿瘤医院妇瘤科,
考生编号政治政治分外语外语分科目 1 科目 1 分科目 2 科目 2 分总分专业代码专业名称考试方式报名号 思想政治理论缺考英语一 45 生物综合 38 生理学缺考 药理学全国统考 思想政治理论
100019008910001 思想政治理论缺考英语一 45 生物综合 38 生理学缺考 83 078006 药理学全国统考 110190172 100019008910002 思想政治理论 61 英语一缺考药学综合 ( 缺考生理学 51 112 078006 药理学全国统考 110199187 100019008910003 思想政治理论缺考英语一缺考生物综合缺考 生物化学与分子生物学 缺考 --
第 期 张玲 等 外源性 ( 基因在胃癌 B=( 细胞株中的表达及鉴定 公司 B=( 胃癌细胞株 中国科学院上海细胞库 胎牛血清 高糖 & & 美国 = 公司 胰蛋白酶 美国 /- 公司 (& # % ( 及 ( & # % 质粒 美国 5 =# # 公司 抗生素 = 美国 +- # 公司 反转录试
第 卷第 期 年 月 江苏大学学报 医学版! "# %&#' # ' 外源性 ( 基因在胃癌 B=( 细胞株中的表达及鉴定 张玲 高硕 张斌 王梅 许潇 钱晖 许文荣 江苏大学基础医学与医学技术学院 江苏镇江 江苏大学附属医院医学检验科 江苏镇江 摘要 目的 建立 ( 稳定转染的 B=( 细胞株 为 ( 基因在胃癌发生发展中的作用研究奠定基础 方法 采用脂质体介导法将 (& # % ( 及 (& #
8 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology Vol.30No 试剂 Lipofectamine2000 购自 Invitrogen 公司 鼠抗 Fhit 单克隆抗体以及 HRP 标记的兔抗鼠二抗购自 Sigma 公司 DNA 测序由南京金思特生物公司完成 1.2 方法 1
中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,2010,30(1):7 11 抑癌基因 Fhit 重组腺病毒的构建表达 及其在结肠癌细胞中的生物学功能 余桂戎 张 赵 瑞 晶 1,3 孟艳玲 王 王 1,3 涛 磊 高,3 杨安钢 (1 第四军医大学国家肿瘤重点实验室 2 第四军医大学生物化学与分子生物学教研室 3 第四军医大学免疫学教研室 4 飞 4 第四军医大学口腔医学系 5 第四军医大学细胞生物工程中心西安