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- 挥珀 水
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1 Vol. 36 高 等 学 校 化 学 学 报 No 年 5 月 摇 摇 摇 摇 摇 摇 CHEMICAL JOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES 摇 摇 摇 摇 摇 摇 886 ~ 892 摇 摇 doi: / cjcu 一 种 新 的 混 合 斑 精 子 分 离 方 法 伍 贤 军 1,2, 赵 摇 兵 2, 缪 摇 璇 2, 钱 摇 程 1, 王 冰 瑜 2, 李 晓 萌 2 1, 杨 百 全 (1. 吉 林 省 公 安 厅 物 证 鉴 定 中 心, 长 春 ; 2. 东 北 师 范 大 学 生 命 科 学 学 院 分 子 表 观 遗 传 学 教 育 部 重 点 实 验 室, 长 春 ) 摘 要 摇 制 备 了 精 子 表 面 膜 抗 原 受 精 素 茁 蛋 白 (Fertilin 茁 ) 的 特 异 性 抗 体, 通 过 抗 原 鄄 抗 体 反 应 和 抗 体 固 相 偶 联 技 术, 将 抗 体 连 接 到 琼 脂 糖 球 珠 上, 建 立 了 混 合 斑 精 子 分 离 纯 化 的 新 方 法. 首 先, 通 过 聚 合 酶 链 式 反 应 (PCR) 扩 增 编 码 人 受 精 素 茁 蛋 白 第 341 ~ 373 位 氨 基 酸 的 基 因 序 列, 构 建 PGEX 鄄 4T 鄄 1 / Fertilin 茁 原 核 表 达 质 粒 ; 其 次, 诱 导 表 达 GST 鄄 Fertilin 茁 融 合 蛋 白, 制 备 受 精 素 茁 蛋 白 多 克 隆 抗 体, 免 疫 荧 光 检 测 结 果 表 明, 受 精 素 茁 蛋 白 定 位 于 精 子 的 头 后 部, 并 且 阴 道 上 皮 细 胞 没 有 受 精 素 茁 蛋 白 的 表 达 ; 最 后, 将 受 精 素 茁 抗 体 与 ProteinA 琼 脂 糖 球 珠 连 接 构 建 固 相 抗 体 系 统, 将 精 子 吸 附 于 表 面, 可 从 混 合 斑 ( 精 子 与 阴 道 上 皮 细 胞 混 合 液 ) 中 分 离 纯 化 精 子. 本 文 为 性 犯 罪 案 件 侦 破 提 供 了 新 的 方 法. 关 键 词 摇 混 合 斑 ; 受 精 素 茁 蛋 白 ; 多 克 隆 抗 体 中 图 分 类 号 摇 O657 摇 摇 摇 摇 文 献 标 志 码 摇 A 摇 摇 摇 摇 在 性 犯 罪 案 件 中, 混 合 斑 主 要 是 指 男 性 的 精 液 与 女 性 的 阴 道 分 泌 液 组 成 的 斑 痕, 是 法 医 物 证 检 验 中 常 见 的 检 材 类 型 [1]. 由 于 精 子 细 胞 膜 和 核 膜 蛋 白 质 中 富 含 二 硫 键 [2], 导 致 其 检 测 存 在 纯 化 效 果 差 耗 时 长 及 消 耗 人 力 的 弊 端, 且 精 子 损 失 达 70%, 影 响 了 检 测 成 功 率 [3]. 因 此, 建 立 一 种 新 型 的 混 合 斑 精 子 分 离 方 法 对 于 法 医 物 证 检 验 具 有 重 要 的 意 义. 受 精 素 茁 蛋 白 (Fertilin 茁, 定 位 于 人 类 8 号 染 色 体 上 ) 有 选 择 性 地 表 达 在 人 类 睾 丸 组 织 ( 精 子 ) 中 [4], 在 精 子 发 生 成 熟 获 能 及 精 卵 结 合 和 融 合 过 程 中 发 挥 重 要 作 用. 受 精 素 茁 蛋 白 具 有 前 导 肽 区 金 属 蛋 白 酶 结 构 域 去 整 合 素 结 构 域 富 含 半 胱 氨 酸 结 构 域 表 皮 生 长 因 子 ( EGF) 样 重 复 序 列 跨 膜 结 构 域 和 短 的 胞 质 尾 部 7 个 基 本 结 构 区 [5]. 通 过 对 受 精 素 茁 蛋 白 的 疏 水 性 和 抗 原 决 定 簇 进 行 分 析 [6,7], 选 择 金 属 蛋 白 酶 结 构 域 的 第 341 ~ 373 位 氨 基 酸 残 基 作 为 靶 抗 原 制 备 其 特 异 性 抗 体. 琼 脂 糖 球 珠 ProteinA 能 特 异 性 地 与 抗 体 的 FC 区 结 合, 被 广 泛 应 用 于 生 物 学 研 究 [8,9]. [10] 基 于 抗 原 鄄 抗 体 反 应 和 固 相 分 离 原 理 [11], 本 文 针 对 精 子 表 面 抗 原 受 精 素 茁 蛋 白 胞 外 域 制 备 特 异 性 抗 体, 并 结 合 抗 体 固 相 偶 联 技 术, 建 立 了 新 型 的 混 合 斑 中 精 子 的 分 离 纯 化 方 法. 1 摇 实 验 部 分 1. 1 摇 试 剂 与 仪 器 人 精 子 由 吉 林 省 人 类 精 子 库 提 供 ; 人 阴 道 上 皮 细 胞 由 吉 林 省 公 安 厅 物 证 鉴 定 中 心 提 供 ; 大 肠 杆 菌 DH5 琢 ( 克 隆 宿 主 ) BL21( 表 达 宿 主 ) 及 pgex 鄄 4T 鄄 1 为 本 实 验 室 保 存 的 菌 株 和 质 粒 ; Trizol 试 剂 盒 ( 美 国 Invitrogen 公 司 ); TaKaRa RNA PCR Kit(AMV) Ver 试 剂 盒, T4 DNA 连 接 酶 及 各 种 限 制 性 内 切 酶 ( 日 本 TaKaRa 公 司 ); 琼 脂 糖 凝 胶 回 收 DNA 试 剂 盒 ( 德 国 Qiagen 公 司 ); 低 分 子 量 蛋 白 Marker( 上 海 生 物 工 程 有 限 公 司 ); 异 丙 基 硫 代 半 乳 糖 苷 ( IPTG, 华 美 生 物 工 程 公 司 ); HRP 标 记 的 羊 抗 兔 IgG( 美 国 Proteintech 公 司 ); 谷 胱 甘 肽 Sepharose 4B( 英 国 GE Healthcare 公 司 ); Tris 鄄 HCl 缓 冲 液 和 弗 氏 佐 剂 ( 北 收 稿 日 期 : 2014 鄄 10 鄄 30. 网 络 出 版 日 期 : 2015 鄄 04 鄄 14. 基 金 项 目 : 国 家 公 安 部 重 点 研 究 计 划 项 目 ( 批 准 号 : 2011ZDYJJNWZ007) 资 助. 联 系 人 简 介 : 杨 百 全, 男, 博 士, 主 任 法 医 师, 主 要 从 事 精 子 分 离 纯 化 及 DNA 检 验 和 纳 米 复 合 磁 性 材 料 的 应 用 研 究. E 鄄 mail: bqyang1971@ 163. com 李 晓 萌, 女, 博 士, 教 授, 主 要 从 事 肿 瘤 信 号 转 导 研 究. E 鄄 mail: lixm441@ nenu. edu. cn
2 摇 No. 5 摇 伍 贤 军 等 : 一 种 新 的 混 合 斑 精 子 分 离 方 法 887 京 鼎 国 生 物 工 程 有 限 公 司 ); ECL 光 化 学 试 剂 盒 ( 上 海 碧 云 天 生 物 技 术 有 限 公 司 ); 新 西 兰 大 白 兔 ( 吉 林 大 学 预 防 医 学 院 医 动 物 实 验 中 心 ); 其 它 化 学 试 剂 均 为 分 析 纯. TC 鄄 25 / H 型 基 因 扩 增 仪 ( 杭 州 博 日 科 技 有 限 公 司 ); FLUOstar Optima 型 多 功 能 酶 标 仪 ( 德 国 BMG Technology 公 司 ); CEQ8000 型 序 列 测 定 仪 ( 美 国 贝 克 曼 库 尔 特 有 限 公 司 ); CF 鄄 10 型 高 速 离 心 机 ( 韩 国 Daihan 公 司 ); JY92 鄄 IIDN 型 超 声 波 细 胞 粉 碎 仪 ( 宁 波 新 芝 生 物 科 技 股 份 有 限 公 司 ); HZQ 鄄 F 型 细 菌 摇 床 ( 哈 尔 滨 市 东 联 电 子 技 术 开 发 有 限 公 司 ); SZ 鄄 60 型 显 微 镜 ( 日 本 奥 林 巴 斯 公 司 ) 摇 人 精 子 总 RNA 的 制 备 及 双 链 cdna 的 合 成 取 500 mg 人 睾 丸 组 织, 加 入 6 ml Trizol, 匀 浆 后 参 照 文 献 [12] 方 法 制 备 总 RNA. 按 TaKaRa RNA PCR Kit(AMV) Ver 试 剂 盒 操 作 步 骤 合 成 双 链 cdna 摇 PCR 鄄 PMD18 鄄 T / Fertilin 茁 重 组 质 粒 的 构 建 受 精 素 茁 蛋 白 的 基 因 全 长 从 GeneBank 得 到, 基 因 序 列 号 为 AAC 以 cdna 为 模 板, 上 游 引 物 为 5 忆 鄄 GAATTCGAAGCAATTCATTTCAGT ( 含 EcoRI 酶 切 位 点 ); 下 游 引 物 为 5 忆 鄄 CTCGAGATTGT 鄄 GAAGACACTGGGA( 含 XhoI 酶 切 位 点 ), 进 行 聚 合 酶 链 式 反 应 (PCR) 扩 增. 扩 增 得 到 的 片 段 与 pmd18 鄄 T 载 体 连 接, 将 连 接 产 物 转 入 感 受 态 大 肠 杆 菌 DH5 琢 中, 在 含 氨 苄 西 林 ( Amp) 琼 脂 平 板 上 挑 选 克 隆, 以 碱 裂 解 法 小 量 提 取 重 组 质 粒 后, 以 EcoRI 和 XhoI 双 酶 切 鉴 定 摇 原 核 表 达 质 粒 pgex 鄄 4T 鄄 1 / Fertilin 茁 的 构 建 含 有 受 精 素 茁 蛋 白 第 341 ~ 373 位 氨 基 酸 片 段 的 pmd18 鄄 T 质 粒 经 EcoRI 和 XhoI 双 酶 切 后, 利 用 回 收 试 剂 盒 获 得 受 精 素 茁 基 因 该 区 片 段, 同 时 用 相 同 的 酶 处 理 质 粒 pgex 鄄 4T 鄄 1. 将 回 收 的 受 精 素 茁 基 因 第 341 ~ 373 位 氨 基 酸 片 段 和 经 酶 切 的 载 体 pgex 鄄 4T 鄄 1 在 T4 DNA 连 接 酶 作 用 下 于 16 益 连 接 过 夜. 酶 切 鉴 定 重 组 体, 并 通 过 测 序 进 一 步 确 定 重 组 体 的 正 确 性 摇 GST 鄄 Fertilin 茁 融 合 蛋 白 的 诱 导 表 达 和 纯 化 重 组 质 粒 PGEX 鄄 4T 鄄 1 / Fertilin 茁 转 化 大 肠 杆 菌 BL21, 获 得 细 菌 菌 落. 挑 取 单 菌 落 接 入 含 Amp + 的 细 菌 基 本 培 养 基 (LB) 中, 于 37 益 振 摇 培 养 12 h. 将 培 养 物 按 体 积 比 1 颐 50 转 接 于 含 Amp + 的 LB 培 养 基 中, 继 续 在 37 益 摇 床 中 培 养 至 对 数 生 长 中 期. 在 培 养 液 OD 600 = 0 郾 5 ~ 0 郾 6 时, 加 入 终 浓 度 为 0 郾 1 mmol / L 的 异 丙 基 硫 代 半 乳 糖 苷 (IPTG), 以 不 加 入 IPTG 的 作 为 阴 性 对 照, 于 25 益 继 续 培 养 4 ~ 5 h. 离 心 收 集 菌 体, 以 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 (SDS 鄄 PAGE) 鉴 定 GST 鄄 Fertilin 茁 融 合 蛋 白 的 表 达, 并 优 化 表 达 条 件, 进 行 大 量 扩 增 诱 导. 以 5000 r / min 转 速 于 4 益 离 心 5 min, 收 集 菌 体, 用 60 ml 冰 预 冷 的 细 菌 裂 解 液 悬 浮 1 L 菌 液 的 沉 淀 [13]. 用 超 声 波 裂 解 细 菌, 再 以 9600 r / min 的 转 速 于 4 益 离 心 15 min, 取 上 层 清 液, 过 Glutathione 鄄 Sepharose 4B 柱, 先 以 等 体 积 的 洗 脱 缓 冲 液 洗 1( 含 20 mmol / L 谷 胱 甘 肽 和 50 mmol / L Tris 鄄 HCl 缓 冲 液, ph = 8 郾 0) 洗 脱, 收 集 洗 脱 液, 再 以 等 体 积 的 洗 脱 缓 冲 液 2(100 mmol / L 谷 胱 甘 肽 ) 洗 涤 2 次, 收 集 洗 脱 液, 用 SDS 鄄 PAGE 鉴 定 纯 化 产 物 [14] 摇 兔 抗 受 精 素 茁 蛋 白 抗 血 清 的 制 备 以 纯 化 的 GST 鄄 Fertilin 茁 融 合 蛋 白 免 疫 雄 性 新 西 兰 大 白 兔, 初 次 免 疫 使 用 500 滋 g 融 合 蛋 白, 与 等 体 积 的 完 全 弗 氏 佐 剂 充 分 混 匀 乳 化 后, 背 部 皮 下 多 点 注 射. 免 疫 前 取 耳 静 脉 血 分 离 血 清, 作 为 免 疫 前 的 血 清 对 照. 于 14 d 后 进 行 第 1 次 加 强 免 疫, 将 500 滋 g 纯 化 的 GST 鄄 Fertilin 茁 融 合 蛋 白 与 不 完 全 弗 氏 佐 剂 等 体 积 混 匀, 前 后 四 脚 掌 肌 肉 注 射. 之 后 每 隔 14 d 加 强 免 疫 1 次, 共 加 强 免 疫 4 次. 采 取 颈 动 脉 放 血, 收 集 血 清 [15] 摇 间 接 ELISA 法 测 定 受 精 素 茁 蛋 白 抗 血 清 效 价 末 次 免 疫 后 7 d 取 耳 血, 采 用 间 接 ELISA 法 测 定 未 处 理 血 清 及 用 谷 胱 甘 肽 巯 基 转 移 酶 (GST) 蛋 白 预 清 除 其 中 GST 抗 体 的 血 清 的 效 价. 将 经 亲 和 层 析 柱 纯 化 的 GST 和 GST 鄄 Fertilin 茁 分 别 包 板 ( 每 孔 0 郾 5 滋 g, 溶 于 100 滋 L 0 郾 015 mol / L 碳 酸 盐 缓 冲 液, ph = 9 郾 6), 于 4 益 静 置 12 h. 将 100 g / L 的 脱 脂 奶 粉 孵 育 1 h, 加 入 不 同 稀 释 度 的 待 测 血 清, 于 37 益 反 应 1 h, 洗 涤 后 加 入 HRP 标 记 的 羊 抗 兔 域 级 抗 体 (Jackson Immunoresearch Laboratories, 体 积 比 为 1 颐 15000). 于 37 益 反 应 1 h, 洗 涤 后 显 色 10 min, 用 2 mol / L H 2 SO 4 终 止 反 应 后 测 定 490 nm 处 的 光 吸 收 值 [16].
3 888 高 等 学 校 化 学 学 报 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 Vol. 36 摇 1. 8 摇 ProteinA 纯 化 受 精 素 茁 蛋 白 抗 血 清 将 ProteinA sepharose CL 鄄 4B 填 料 缓 慢 装 柱, 平 衡 柱 子 后 加 入 经 过 稀 释 的 抗 血 清, 控 制 流 速 保 证 抗 血 清 与 填 料 的 结 合, 即 亲 和 层 析 使 抗 体 结 合 在 柱 子 上, 洗 涤 2 次 后 用 ph = 2 郾 7 的 缓 冲 溶 液 洗 脱 抗 体, 用 1 郾 5 ml EP 管 收 集 洗 脱 液 并 测 定 280 nm 处 的 光 密 度, 直 到 洗 脱 液 中 不 含 有 抗 体 为 止. 将 含 抗 体 的 收 集 管 混 合 [17], 洗 脱 后 的 抗 体 与 抗 血 清 用 SDS 鄄 PAGE 和 考 马 斯 亮 蓝 染 色 鉴 定 摇 免 疫 印 迹 法 检 测 受 精 素 茁 蛋 白 抗 体 的 特 异 性 将 小 鼠 睾 丸 组 织 剪 碎, 加 适 量 组 织 细 胞 裂 解 液 ( RIPA) [0 郾 1% ( 质 量 分 数 ) 十 二 烷 基 磺 酸 钠 +150 mmol / L 氯 化 钠 +100 mmol / L Tris 鄄 HCl( ph = 7 郾 4) +1% ( 质 量 分 数 ) 聚 乙 二 醇 辛 基 苯 基 醚 +1% ( 质 量 分 数 ) 脱 氧 胆 酸 钠 +1 mmol / L 苯 甲 基 磺 酰 氟 ], 充 分 研 磨 后 离 心 收 集 上 层 清 液. 取 等 量 的 上 层 清 液 进 行 SDS 鄄 PAGE 电 泳 分 离, 电 转 移 至 聚 偏 二 氟 乙 烯 膜 (PVDF) 上. 将 PVDF 膜 用 5% ( 质 量 分 数 ) 脱 脂 奶 粉 孵 育 1 h; 与 自 制 的 玉 级 抗 体 于 室 温 下 反 应 1 h, 用 磷 酸 缓 冲 盐 溶 液 (PBS) 洗 涤 3 次 ; 再 与 HRP 标 记 的 羊 抗 兔 域 级 抗 体 于 室 温 下 反 应 1 h, 以 PBS 洗 涤 3 次, 用 ECL 光 化 学 试 剂 盒 (Amersham Phamacia) 检 测 信 号, X 光 片 曝 光 显 影 [18] 摇 免 疫 荧 光 法 检 测 受 精 素 茁 蛋 白 在 精 子 中 的 定 位 将 人 精 子 均 匀 涂 于 十 二 孔 板 ( 约 10 5 Cells / 孔 ) 并 置 于 孵 箱 中 干 燥, 用 4% ( 质 量 分 数 ) 多 聚 甲 醛 于 室 温 固 定 2 h, 用 PBS 洗 涤 3 次 [19], 滴 加 PBS( 对 照 组 ) 或 兔 抗 受 精 素 茁 蛋 白 抗 体, 室 温 下 孵 育 2 h, 用 PBS 洗 涤 3 次, 滴 加 异 硫 氰 酸 荧 光 素 标 记 的 羊 抗 兔 IgG, 室 温 下 避 光 孵 育 1 h, 用 PBS 洗 涤 3 次 ; 用 4 忆,6 鄄 二 脒 基 鄄 2 鄄 苯 基 吲 哚 (DAPI) 于 室 温 下 孵 育 1 min, 用 PBS 洗 涤 3 次 ; 用 荧 光 显 微 镜 观 察 并 拍 照 摇 免 疫 荧 光 法 检 测 受 精 素 茁 蛋 白 抗 体 对 精 子 及 阴 道 上 皮 细 胞 的 特 异 性 识 别 将 人 精 子 ( 约 10 5 Cells) 与 人 阴 道 上 皮 细 胞 (10 2 Cells) 混 合, 均 匀 涂 于 十 二 孔 板 并 置 于 孵 箱 中 干 燥, 经 固 定 及 抗 体 孵 育, 用 荧 光 显 微 镜 观 察 并 拍 照 摇 受 精 素 茁 蛋 白 抗 体 鄄 ProteinA 琼 脂 糖 球 珠 系 统 对 精 子 纯 化 能 力 检 测 Fertilin 茁 抗 体 与 琼 脂 糖 球 珠 ProteinA 于 室 温 下 结 合 2 h, 用 PBS 洗 涤 3 次, 制 得 受 精 素 茁 固 相 抗 体 系 统. 将 等 量 的 4% ( 质 量 分 数 ) 多 聚 甲 醛 固 定 过 的 精 子 ( 约 10 4 Cells) 分 别 与 ProteinA 和 受 精 素 茁 蛋 白 抗 体 鄄 ProteinA 于 室 温 下 结 合 3 h, 用 显 微 镜 观 察 并 拍 照. 2 摇 结 果 与 讨 论 2. 1 摇 精 子 表 面 特 异 性 抗 原 受 精 素 茁 原 核 表 达 质 粒 的 构 建 从 人 睾 丸 组 织 提 取 总 RNA 后, 逆 转 录 合 成 双 链 cdna, 以 合 成 的 双 链 cdna 为 模 板, 通 过 引 物 设 计 在 序 列 的 两 端 引 入 EcoRI (5 忆 端 ) 和 XhoI (3 忆 端 ) 酶 切 位 点, 应 用 PCR 反 应 扩 增 出 受 精 素 茁 蛋 白 第 341 ~ 373 位 氨 基 酸 的 DNA 序 列, 长 度 为 99bp, 结 果 见 图 1. 将 该 片 段 克 隆 至 pgex 鄄 4T 鄄 1 原 核 表 达 载 体, 进 行 DNA 序 列 测 定, 结 果 如 图 2 所 示, 测 序 峰 形 清 晰, 与 数 据 库 来 源 序 列 相 同, 且 受 精 素 茁 片 段 大 小 正 确. Fig. 1 摇 PCR amplifying of aa from Fertilin 茁 Lane 1: DNA marker; lane 2: DNA band of aa from Fertilin 茁. Fig. 2 摇 Fertilin 茁 recombinant plasmid sequencing result DNA nucleotide sequence: GAATTCGAAGCAATTCATTTCAGTGGTGTGAAGATCTTTAGTAACTGCAGCTTCGAAGACTTTGCACATTT 鄄 TATTTCAAAGCAGAAGTCCCAGTGTCTTCACAATCTCGAG.
4 摇 No. 5 摇 伍 贤 军 等 : 一 种 新 的 混 合 斑 精 子 分 离 方 法 摇 融 合 蛋 白 GST 鄄 Fertilin 茁 的 诱 导 表 达 和 纯 化 为 了 验 证 重 组 质 粒 pgex 鄄 4T 鄄 1 / Fertilin 茁 能 否 成 功 表 达 融 合 蛋 白 及 确 定 诱 导 剂 异 丙 基 鄄 茁 鄄 D 鄄 硫 代 半 乳 糖 苷 (IPTG) 的 适 宜 浓 度, 用 重 组 质 粒 转 化 大 肠 杆 菌 BL21, 经 LB 培 养 后 使 用 不 同 浓 度 的 IPTG 诱 导, 收 集 菌 体, 用 SDS 鄄 PAGE 分 析 GST 鄄 Fertilin 茁 融 合 蛋 白 的 表 达. 由 图 3 可 见, 经 IPTG 诱 导 后 可 高 效 表 达 表 观 分 子 量 为 的 融 合 蛋 白, 与 预 期 分 子 量 相 符. 其 中, 0 郾 1 mmol / L IPTG 诱 导 融 合 蛋 白 表 达 量 最 高, 0 郾 5 mmol / L IPTG 诱 导 融 合 蛋 白 表 达 量 较 少, 而 未 经 IPTG 诱 导 的 无 明 显 融 合 蛋 白 表 达, 表 明 诱 导 剂 IPTG 的 适 宜 浓 度 为 0 郾 1 mmol / L. Fig. 3 摇 SDS 鄄 PAGE analysis of GST 鄄 Fertilin 茁 fusion gene expression product in E. coli Lane 1: Protein marker; lane 2: lysate of bacteria GST / BL21 before IPTG induction; lane 3: lysate of bacteria GST / BL21 after 0 郾 1 mmol / L IPTG in 鄄 duction; lane 4: lysate of bacteria GST / BL21 after 0 郾 5 mmol / L IPTG induc 鄄 tion; lane 5: lysate of bacteria Fertilin 茁 / BL21 before IPTG induction; lane 6: lysate of bacteria Fertilin 茁 / BL21 after 0 郾 1 mmol / L IPTG induction; lane 7: lysate of bacteria Fertilin 茁 / BL21 after 0 郾 5 mmol / L IPTG induction. Fig. 4 摇 SDS 鄄 PAGE analysis of purified GST and GST 鄄 Fertilin 茁 fusion protein Lane 1: Protein marker; lane 2: purified GST; lane 3: purified GST 鄄 Fertilin 茁. GST / BL21 和 GST 鄄 Fertilin 茁 / BL21 细 菌 沉 淀 经 超 声 裂 解 获 得 可 溶 性 蛋 白, 经 Glutathione 鄄 Sepharose 鄄 4B 层 析 法 纯 化 后 进 行 SDS 鄄 PAGE 分 析, 结 果 如 图 4 所 示, 纯 化 得 到 高 纯 度 分 子 量 为 的 GST 蛋 白 和 分 子 量 为 的 GST 鄄 Fertilin 茁 融 合 蛋 白, 其 中 GST 鄄 Fertilin 茁 融 合 蛋 白 有 轻 微 降 解 摇 间 接 ELISA 法 测 定 受 精 素 茁 蛋 白 抗 血 清 效 价 以 GST 鄄 Fertilin 茁 融 合 蛋 白 免 疫 前 的 新 西 兰 大 白 兔 血 清 作 为 对 照, 取 末 次 加 强 免 疫 后 第 7 d 的 血 清, 将 其 分 为 未 处 理 血 清 及 用 GST 蛋 白 预 清 除 其 中 的 GST 抗 体 的 血 清 两 部 分. 将 血 清 分 别 稀 释 至 1 伊 10 3, 1 伊 10 4, 1 伊 10 5 及 1 伊 10 6 倍, 采 用 间 接 ELISA 法 测 定 抗 体 的 效 价. 由 图 5 可 见, 2 种 血 清 中 抗 体 的 滴 度 无 明 显 差 异, 免 疫 前 的 兔 血 清 中 未 测 出 抗 融 合 蛋 白 GST 鄄 Fertilin 茁 的 抗 体, 末 次 免 疫 后 血 清 中 受 精 素 茁 蛋 白 抗 体 的 滴 度 高 达 1 伊 10 6 以 上. Fig. 5 摇 Titer of Fertilin 茁 immune serum detected by ELISA assay Fig. 6 摇 SDS 鄄 PAGE analysis of ProteinA purified Fertilin 茁 antibody Lane 1: Protein molecular weight marker; lane 2: unpurified Fertilin 茁 antiserum; lane 3: proteina purified Fertilin 茁 antibody.
5 890 高 等 学 校 化 学 学 报 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 Vol. 36 摇 2. 4 摇 ProteinA 纯 化 受 精 素 茁 蛋 白 抗 血 清 为 了 提 高 所 制 备 抗 体 的 纯 度, 利 用 ProteinA 纯 化 抗 血 清. 结 果 见 图 6. 与 抗 血 清 相 比, ProteinA 纯 化 后 的 抗 体 具 有 清 晰 的 轻 重 链, 且 无 其 它 明 显 条 带, 表 明 抗 体 纯 化 效 果 明 显 摇 兔 抗 GST 鄄 Fertilin 茁 血 清 特 异 性 的 Western blot 鉴 定 图 7 为 利 用 多 克 隆 抗 体 受 精 素 茁 蛋 白 对 小 鼠 睾 丸 组 织 样 进 行 Western blot 检 验 的 结 果. 可 见, 在 小 鼠 睾 丸 组 织 样 中 检 测 到 1 条 特 异 的 蛋 白 条 带 (85000), 而 作 为 阴 性 对 照 的 蛋 白 样 并 未 检 测 到 相 关 条 带, 说 明 受 精 素 茁 蛋 白 抗 体 具 有 良 好 的 特 异 性. Fig. 7 摇 Western blot analysis of Fertilin 茁 in mouse testis 2. 6 摇 免 疫 荧 光 法 检 测 精 子 表 面 膜 抗 原 受 精 素 茁 蛋 Lane 1: Negative control protein sample; 白 在 精 子 中 的 定 位 lane 2. lysate of mouse testis. 图 8 为 多 克 隆 抗 体 (PBS 为 对 照 ) 标 示 的 受 精 素 茁 蛋 白 在 人 精 子 中 定 位 的 情 况. 在 荧 光 显 微 镜 下 观 察 到 受 精 素 茁 蛋 白 定 位 于 精 子 的 头 后 部 [20]. Fig. 8 摇 Immunofluorescence analysis of expression of Fertilin 茁 in sperm Fertilin 茁 was stained with Fertilin 茁 antibody(red); nuclei were stained with DAPI(blue). (A), (E) DIPA; (B) PBS; (C), (G) DIPA with Fertilin 茁 merge; (D), (H) PBS / Fertilin 茁 with sperm merge; (F) Fertilin 茁 摇 免 疫 荧 光 法 检 测 受 精 素 茁 蛋 白 抗 体 对 精 子 及 阴 道 上 皮 细 胞 的 特 异 性 识 别 在 性 犯 罪 案 件 中 精 子 主 要 存 在 于 混 合 斑 中, 所 以 精 子 与 阴 道 上 皮 细 胞 的 分 离 至 关 重 要. 为 了 进 一 步 证 明 受 精 素 茁 蛋 白 抗 体 对 阴 道 上 皮 细 胞 无 交 叉 免 疫 反 应, 取 人 精 子 与 人 阴 道 上 皮 细 胞 混 合, 用 受 精 素 茁 蛋 白 抗 体 做 免 疫 荧 光 分 析. 由 图 9 可 见, 受 精 素 茁 蛋 白 抗 体 特 异 性 染 色 于 精 子 的 头 后 部, 而 阴 道 上 皮 细 胞 不 能 被 识 别, 表 明 受 精 素 茁 蛋 白 抗 体 可 以 用 于 混 合 斑 中 精 子 的 纯 化, 无 交 叉 免 疫 反 应. Fig. 9 摇 Immunofluorescence analysis of expression of Fertilin 茁 in sperm and vaginal epithelial cells Fertilin 茁 was stained with Fertilin 茁 antibody( red); nuclei were stained with DAPI( blue). ( A) DIPA; ( B) Fertilin 茁 ; ( C) DIPA with Fertilin 茁 merge; (D) fertilin 茁 with sperm and vaginal epithelial cells merge(sperm, yellow arrow; vaginal epithelial cells, green arrow) 摇 受 精 素 茁 蛋 白 抗 体 鄄 ProteinA 琼 脂 糖 球 珠 系 统 对 精 子 纯 化 能 力 的 检 测 在 案 件 侦 破 过 程 中, 收 集 到 的 样 本 是 包 含 了 精 子 阴 道 上 皮 细 胞 及 细 胞 碎 片 等 的 混 合 物, 并 且 精 子 含 量 很 低. 为 了 模 拟 实 际 案 例, 用 受 精 素 茁 蛋 白 抗 体 鄄 ProteinA 琼 脂 糖 球 珠 系 统 检 测 受 精 素 茁 蛋 白 抗 体 鄄 ProteinA 及 ProteinA 分 别 与 稀 释 至 低 浓 度 的 精 子 的 结 合 能 力, 检 测 结 果 见 图 10. 可 见 受 精 素 茁 蛋 白
6 摇 No. 5 摇 伍 贤 军 等 : 一 种 新 的 混 合 斑 精 子 分 离 方 法 891 抗 体 鄄 ProteinA 能 够 捕 获 到 精 子, 而 对 照 的 ProteinA 不 具 备 捕 获 精 子 的 能 力, 表 明 受 精 素 茁 蛋 白 抗 体 鄄 ProteinA 琼 脂 糖 球 珠 系 统 具 备 纯 化 精 子 的 能 力. Fig. 10 摇 Images of ProteinA 鄄 Fertilin 茁 antibody to capture sperm (A) ProteinA unable to capture sperm; (B) (D) proteina 鄄 Fertilin 茁 antibody to capture sperm(sperm, solid arrow; ProteinA, hollow arrow). 目 前, 国 际 上 混 合 斑 中 精 子 的 分 离 方 法 主 要 是 两 步 消 化 法, 其 原 理 是 利 用 精 子 表 面 蛋 白 和 上 皮 细 胞 抗 蛋 白 酶 K 消 化 的 能 力 差 异 来 消 化 除 去 上 皮 细 胞, 留 下 精 子, 由 于 采 用 间 接 的 方 式 获 得 精 子, 纯 化 效 果 较 差 ; 本 文 方 法 利 用 固 相 抗 体 特 异 性 结 合 精 子, 可 以 从 混 合 物 中 准 确 地 捕 捉 到 精 子, 去 除 其 它 细 胞 的 干 扰, 具 有 直 接 高 效 及 特 异 等 特 点. 3 摇 结 摇 摇 论 采 用 PCR 扩 增 法 构 建 了 PGEX 鄄 4T 鄄 1 / Fertilin 茁 原 核 表 达 质 粒, 诱 导 表 达 并 纯 化 GST 鄄 Fertilin 茁 融 合 蛋 白, 利 用 该 融 合 蛋 白 制 备 的 多 克 隆 抗 体 效 价 经 ELISA 法 检 测 为 1 颐 1 伊 10 6 以 上, 经 Western blot 检 测 具 有 良 好 的 特 异 性. 通 过 免 疫 荧 光 实 验 分 析, 受 精 素 茁 蛋 白 抗 体 特 异 性 结 合 于 精 子 头 后 部, 且 不 与 阴 道 上 皮 细 胞 存 在 交 叉 免 疫 反 应. 将 受 精 素 茁 蛋 白 抗 体 与 ProteinA / G 连 接, 并 将 其 用 于 精 子 纯 化, 通 过 抗 原 抗 体 特 异 性 结 合, 在 显 微 镜 下 可 以 观 察 到 受 精 素 茁 蛋 白 抗 体 鄄 ProteinA / G 具 有 捕 获 精 子 的 能 力, 可 用 于 精 子 纯 化. 综 上 所 述, 制 备 了 受 精 素 茁 蛋 白 抗 体, 并 运 用 抗 原 抗 体 反 应 和 抗 体 固 相 偶 联 技 术 实 现 了 精 子 的 分 离 纯 化, 建 立 了 混 合 斑 精 子 分 离 纯 化 的 新 型 方 法. 参 摇 考 摇 文 摇 献 [ 1 ] 摇 Yuan Z. C., Jing H. N., Lai Y., Wang H. J., Chen H. Y., Chin. J. Forensic Med., 2010, 25(1), 10 12( 袁 自 闯, 金 洪 年, 赖 跃, 王 慧 君, 陈 红 英. 中 国 法 医 学 杂 志, 2010, 25(1), 10 12) [ 2 ] 摇 Ren W. Y., Zhang H., Xue D. Z., Journal of Liaoning Police Academy, 2010, 12(1), 86 89( 任 文 彦, 张 慧, 薛 大 忠. 辽 宁 警 专 学 报, 2010, 12(1), 86 89) [ 3 ] 摇 Zhang J., Li Y. F., National Journal of Andrology, 2004, 10(1), 52 54( 张 军, 李 彦 锋. 中 华 男 科 学, 2004, 10(1), 52 54) [ 4 ] 摇 Li L. L., Ma H. D., Livestock and Poultry Industry, 2006, 4(2), 35 37( 李 林 林, 马 恒 东. 育 种 繁 殖, 2006, 4(2), 35 37) [ 5 ] 摇 Alberto C., Mol. Biol. Evol., 2003, 20(1), [ 6 ] 摇 Wang G. T., Tian G. S., Zhang G. Q., Fu X. X., Wang Y. Q., National Medical Journal of China, 1994, 74(6), ( 王 国 棠, 田 庚 善, 张 国 庆, 傅 希 贤, 王 玉 勤. 中 华 医 学 杂 志, 1994, 74(6), ) [ 7 ] 摇 Li J. T., Yin X. P., Liu J. S., Hu Y. H., Progress in Veterinary Medicine, 2008, 29(3), 10 13( 李 江 涛, 殷 相 平, 柳 纪 省, 胡 永 浩. 动 物 医 学 进 展, 2008, 29(3), 10 13) [ 8 ] 摇 Wu J., Liu S., Shen X. Y., Yang N. Y., Liu Y., Tsuji I., Yamamura T., Li J., Li X. M., Chem. Res. Chinese Universities, 2013, 29(5), [ 9 ] 摇 Wu J., Wei W., Yang N. Y., Shen X. Y., Tsuji I., Yamamura T., Li J., Li X. M., Chem. Res. Chinese Universities, 2013, 29 (3), [10] 摇 Tao Y. X., Shanghai Journal of Immunology, 1999, 19(2), 65 68( 陶 义 训. 上 海 免 疫 学 杂 志, 1999, 19(2), 65 68) [11] 摇 Xu H., Zhang G. L., Zhang F. B., Chemical Industry and Engineering, 2003, 20(1), 28 32( 徐 辉, 张 国 亮, 张 凤 宝. 化 学 工 业 与 工 程, 2003, 20(1), 28 32) [12] 摇 Dong L. Y., Li Q. F., Qu X. G., Li Y. X., Li X. F., Xu H. T., Xie Z., Hereditas, 2009, 31(5), ( 董 丽 艳, 李 齐 发, 屈 旭 光, 李 隐 侠, 李 新 福, 徐 洪 涛, 谢 庄. 遗 传, 2009, 31(5), ) [13] 摇 Wu C. Y., Lou J. T., Jiang T. W., Qian Z., Zhou Y., Chen Y., Gu M. L., Deng A. M., Zhong R. Q., Acad. J. Sec. Mil. Med. Univ., 2006, 27(12), ( 吴 传 勇, 娄 加 陶, 蒋 廷 旺, 钱 琤, 周 晔, 陈 燕, 谷 明 莉, 邓 安 梅, 仲 人 前. 第 二 军 医 大 学 学 报,
7 892 高 等 学 校 化 学 学 报 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 Vol. 36 摇 2006, 27(12), ) [14] 摇 Chen X. W., Liu X. G., Liang J. Y., Liang N. C., Chin. J. Biochem. Mol. Biol., 2004, 20(2), ( 陈 小 文, 刘 新 光, 梁 景 耀, 梁 念 慈. 中 国 生 物 化 学 与 分 子 生 物 学 报, 2004, 20(2), ) [15] 摇 Xin X. H., Wu Y. M., Huang G., Chin. J. Cell Mol. Immunol., 2004, 20(6), 764( 刑 小 红, 吴 元 明, 黄 高. 细 胞 与 分 子 免 疫 学 杂 志, 2004, 20(6), 764) [16] 摇 Yang R., Xie Z. P., Long R. X., Bai H. Z., Tan Z. G., Wang Y., Wu Z. X., Zhang Y., J. Med. Res., 2010, 39(1), ( 杨 蓉, 谢 忠 平, 龙 润 乡, 白 惠 珠, 谭 振 国, 王 燕, 吴 忠 香, 张 勇. 医 学 研 究 杂 志, 2010, 39(1), 24 26) [17] 摇 Wu D. Y., Fu H. S., Song Z. M., Guide of China Medicine, 2012, 10(2), 77 80( 武 德, 付 海 申, 宋 振 民. 中 国 医 药 指 南, 2012, 10(2), 77 80) [18] 摇 Yang X. H., Xu H. S., China Prac. Med. May, 2010, 5(13), 25 26( 杨 晓 红, 许 海 生. 中 国 实 用 医 药, 2010, 5(13), 25 26) [19] 摇 Song L., Feng Y. C., Zhu H. B., Zhang M. L., Journal of Xinxiang Medical College, 1991, 8(3), ( 宋 力, 冯 元 春, 朱 洪 波, 张 敏 六. 新 乡 医 学 院 学 报, 1991, 8(3), ) [20] 摇 Chatot C. L., Ziomek C. K., Bavister B. D., J. Reprod. Fertil., 1989, 86(2), 覮 New Method for Sperm Separation from Mixed Stain Samples WU Xianjun 1,2, ZHAO Bing 2, MIAO Xuan 2, QIAN Cheng 1, WANG Bingyu 2, LI Xiaomeng 2*, YANG Baiquan 1* (1. Forensic Science Institute of Jilin Province, Changchun , China; 2. Key Laboratory of Molecular Epigenetics, Ministry of Education, School of Life Science, Northeast Normal University, Changchun , China) Abstract 摇 In sex crimes cases, mixed stain samples(a mixture of sperm and vaginal epithelial cells) are com 鄄 mon and important biological evidence. Identification of sperm sources is the key of cases detected. The lack of effective technique of sperm separation from mixed stain samples is the bottleneck of sperm test. In the pre 鄄 sent study, the group chose sperm surface antigen, Fertilin 茁, as antigen to prepare specific antibodies, and further coupled the antibody to a solid phase of agarose beads, in order to establish a new sperm separation system. First, antigen Fertilin 茁 recombinant plasmid was constructed. A cdna for Fertilin 茁 aa was amplified by polymerase chain reaction(pcr), and was cloned into a prokaryotic expression plasmid, pgex 鄄 4T 鄄 1 vector. Second, GST 鄄 Fertilin 茁 ( aa) fusion protein was induced and purified. Against this an 鄄 tigen, the Fertilin 茁 antibodies were obtained from serum of rabbit immunized. ELISA and Western blot analy 鄄 sis demonstrated the specificity of the antibody against Fertilin 茁 antigen. Then, the specific recognition of the antibody to sperm was identified by the immunofluorescence assay, in which Fertilin 茁 protein in the sperm head can detected by the antibody, whereas in the vaginal epithelial cells showed negative detection. Finally, the sperm detection system using the solid phase of Fertilin 茁 antibody was established, in which the Fertilin 茁 antibody was coupled to ProteinA / G agarose beads and was able to separate sperm from the mixture. In con 鄄 clusion, the Fertilin 茁 antibody was successfully prepared, which was able to bind to the rear of the sperm head. Furthermore, the Fertilin 茁 solid phase antibody system was generated, which could bind to the sperm surface, so as to isolate the sperms from the mixed stain samples. This sperm separation method from mixed stain samples provided a new detection for sexual offenses. Keywords 摇 Mixed stain sample; Fertilin 茁 ; Polyclonal antibody (Ed. : P, H, W, K) 覮 Supported by the Project of Ministry of Public Security, China(No. 2011ZDYJJNWZ007).
![, 2004, 20(6), 764( 刑 小 红, 吴 元 明, 黄 高. 细 胞 与 分 子 免 疫 学 杂 志, 2004, 20(6), 764) [16] 摇 Yang R., Xie Z. P., Long R. X., Bai H. Z., Tan Z. G., Wang Y., Wu Z. X., Zhang Y., J. Med. Res.](/docs-images/41/22677437/images/page_7.jpg ", 2010, 39(1), 24 26 ( 杨 蓉, 谢 忠 平, 龙 润 乡, 白 惠 珠, 谭 振 国, 王 燕, 吴 忠 香, 张 勇. 医 学 研 究 杂 志, 2010, 39(1), 24 26) [17] 摇 Wu D. Y., Fu H. S., Song Z. M.")
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an tai yin 安 胎 饮 775 ba wei dai xia fang 八 味 带 下 方 756 ba zhen tang 八 珍 汤 600 ba zheng san 八 正 散 601 bai he gu jin tang 百 合 固 金 汤 680 bai hu jia ren shen tang 白 虎 加 人 参 汤 755 bai hu tang 白 虎 汤 660 bai
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227 ELISA 刘 沙 洲 1,2, 桑 小 雪 1, 欧 阳 华 学 3, 雷 绍 荣 3, 白 林 含 1, * (1. 四 川 大 学 生 命 科 学 学 院, 四 川 成 都 610065;2. 成 都 市 食 品 药 品 检 测 中 心, 四 川 成 都 610045; 3. 四 川 省 农 业 科 学 院 分 析 测 试 中 心, 四 川 成 都 610066) 目 的 : 比 较
Syngene GBOXHR Retsch MM400 KQ DE Eppendorf Table 1 The sources of Astragali Radix and Hedysarum Radix No. 1 AMM2011_NMGTY Astr
PCR 龙平, 崔占虎, 李虔全, 徐建平, 张春红, 周立社 * *, 李旻辉 ( 包头医学院, 内蒙古包头 014060) DNA 30 28 DNA trnl-trnf PCR PCR 136 bp 323 bp 10% PCR PCR Astragalus membranaceus Fisch. Bge. var. mongho- licus Bge. Hsiao A. membranaceus
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参 会 人 员 名 单 Last Name 姓 名 公 司 Tel Fax Bai 柏 煜 康 复 之 家 8610 8761 4189 8610 8761 4189 Bai 白 威 久 禧 道 和 股 权 投 资 管 理 ( 天 津 ) 有 限 公 司 8610 6506 7108 8610 6506 7108 Bao 包 景 明 通 用 技 术 集 团 投 资 管 理 有 限 公 司 8610
标题
第 39 卷第 6 期 Vol. 39 No. 6 摇 摇 摇 摇 中南医学科学杂志 Journal of Medical Science in Central South China 2011 年 11 月 Nov. 2011 沙眼衣原体 T 细胞抗原 CT143 原核表达 纯化及免疫活性鉴定 陆春雪1,吴移谋1,彭摇 波2,刘良专1,蔡恒玲1,李忠玉1 (1. 南华大学 微生物与免疫学教研室,湖南
32期
中 国 农 学 通 报 2014,30(32):38-42 Chinese Agricultural Science Bulletin 中 草 药 饲 料 添 加 剂 对 黄 鳝 性 激 素 含 量 的 影 响 1,2 1,2 1,2 2 赵 庆 凯, 丁 炜 东, 邴 旭 文, 王 建 新 ( 1 南 京 农 业 大 学 无 锡 渔 业 学 院, 江 苏 无 锡 214081; 2 中 国 水 产
2004级研究生现代免疫学实验技术结业报告
PCR PCR PCR RT-PCR PCR (Polymerase Chain Reaction,PCR) 80 DNA, DNA PCR PCR PCR DNA PCR -- -- DNA DNA 93 DNA PCR DNA DNA ( ) DNA 55 DNA DNA -- TaqDNA dntp DNA -- -- PCR PCR DNA DNA Y (1 X) n Y DNA X (Y)
标题
环 球 中 医 药 2016 年 5 月 第 9 卷 第 5 期 摇 Global Traditional Chinese Medicine, May 2016,Vol 郾 9, No 郾 5 摇 557 两 种 电 针 对 脊 髓 损 伤 14 天 后 大 鼠 运 动 功 能 神 经 元 及 MEK2 p 鄄 ERK1 表 达 的 影 响 论 著 宋 良 玉 摇 吕 威 摇 景 泉 凯 摇 莫 雨
Invitrogen 1.4 pet-gr, ICE-LGR, PCR TA, pmd18-t/gr pet-21a(+) (Nde I Xho I), E. coli DH-5,,,, pet-gr GR ORF cdna, GR, : PU: 5 -GGAATTCCAT
42 6 Vol.42, No.6 2011 11 OCEANOLOGIA ET LIMNOLOGIA SINICA Nov., 2011 南极衣藻 (Chlamydomonas sp. ICE-L) 谷胱 * 甘肽还原酶基因的原核表达及其条件优化 1 1 燏 1 1 2 (1. 524025; 2. 266061) RT-PCR GR ORF cdna, ; IPTG,, pet-gr BL21,
10 Animal Husbandry & Veterinary Medicine 2012 Vol. 44 No. 4 cantly in the presence of indicating that the resistant protein was not expressed in the
2012 44 4 9 2 2 3 1. 225009 2. 200240 3. 200072 R PCR p215c3lyz R pqe-31 R IPTG Western blotting pqe- p215c3lyz COS- DH5α OD 600 Western blotting p215c3lyz Western blotting R R S852. 4 A 0529-5130 2012
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56 Chinese Journal of Library and Information Science for Traditional Chinese Medicine Dec. 2015 Vol. 39 No. 6 综 述 中 医 药 学 语 言 系 统 研 究 综 述 于 彤, 贾 李 蓉, 刘 静, 杨 硕 *, 董 燕, 朱 玲 中 国 中 医 科 学 院 中 医 药 信 息 研 究 所,
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2005 年 第 25 卷 有 机 化 学 Vol. 25, 2005 第 7 期, 771~779 Chinese Journal of Organic Chemistry No. 7, 771~779 综 述 与 进 展 紫 草 素 的 全 合 成 研 究 进 展 徐 德 锋 管 鹏 健 毛 志 强 李 绍 顺 * ( 上 海 交 通 大 学 药 学 院 上 海 200030) 摘 要 综 述
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20 1 2010 10 Vol.20 Special 1 The Chinese Journal of Nonferrous Metals Oct. 2010 1004-0609(2010)S1-s0127-05 Ti-6Al-4V 1 2 2 (1. 710016 2., 710049) 500~1 000 20 Ti-6Al-4V(TC4) TC4 800 TC4 800 TC4 TC4 800
(CIP) : /. :, (/ ) ISBN T S H CI P (2006) XIANGPIAOWANLI JIUW ENH UA YU CH ENGYU
(CIP) : /. :, 2006. 12 (/ ) ISBN 7-81064-916-7... - - - - -. T S971-49 H136. 3 CI P (2006) 116729 XIANGPIAOWANLI JIUW ENH UA YU CH ENGYU 105 100037 68418523 ( ) 68982468 ( ) www.cnup.cnu.cn E- mail cnup@
(CIP) : /. :, (/ ) ISBN T S H CI P (2006) CH IJIASH EN GXIAN G YINSHI WEN H U A Y U CHENGY U 1
(CIP) : /. :, 2006. 12 (/ ) ISBN 7-81064-917-5... - - - - -. T S971-49 H136. 3 CI P (2006) 116732 CH IJIASH EN GXIAN G YINSHI WEN H U A Y U CHENGY U 105 100037 68418523 ( ) 68982468 ( ) www. cnup. cnu.
中 草 药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 5 卷 第 1 期 201 年 1 月 51 其 他 试 剂 均 为 分 析 纯 对 照 品 栀 子 苷 ( 批 号 1109-201115) 甘 草 苷 ( 批 号 1110-201106) 连 翘 酯 苷
50 中 草 药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 5 卷 第 1 期 201 年 1 月 凉 膈 散 汤 剂 HPLC-DAD 指 纹 图 谱 研 究 * 胡 建 兰, 邵 萌, 余 林 中 南 方 医 科 大 学 中 医 药 学 院, 广 东 广 州 510515 摘 要 : 目 的 研 究 凉 膈 散 汤 剂 HPLC-DAD 指 纹 图 谱, 建
1 SARS SARS SARS SARS SARS SARS S SARS SARS SARS 2 3 DNA SARS NatureScienceEmerging Infectious DiseasesJournal of Virology NatureScienceLa
SARS SARS SARS SARS NatureScience 1 SARS SARS SARS SARS SARS SARS S SARS SARS SARS 2 3 DNA SARS NatureScienceEmerging Infectious DiseasesJournal of Virology 32 8 13.066 NatureScienceLancetPNAS SCI 905
PCA+LDA 14 1 PEN mL mL mL 16 DJX-AB DJ X AB DJ2 -YS % PEN
21 11 2011 11 COMPUTER TECHNOLOGY AND DEVELOPMENT Vol. 21 No. 11 Nov. 2011 510006 PEN3 5 PCA + PCA+LDA 5 5 100% TP301 A 1673-629X 2011 11-0177-05 Application of Electronic Nose in Discrimination of Different
<4D6963726F736F667420576F7264202D20B2CCA3BA4542B2A1B6BE52746120496747BFB9CCE5D3EBB1C7D1CAB0A9B7D6C6DAB5C4B9D8CFB52E646F63>
EB 病 毒 Rta/IgG 抗 体 与 鼻 咽 癌 分 期 的 关 系 蔡 永 林, 郑 裕 明, 成 积 儒, 李 军, 莫 永 坤, 钟 青 燕 ( 广 西 梧 州 市 红 十 字 会 医 院, 梧 州 市 肿 瘤 防 治 研 究 所, 广 西 梧 州 543002) 摘 要 : 目 的 探 讨 EB 病 毒 Rta/IgG 抗 体 与 鼻 咽 癌 临 床 分 期 的 关 系 方 法 用 酶
* CUSUM EWMA PCA TS79 A DOI /j. issn X Incipient Fault Detection in Papermaking Wa
2 *. 20037 2. 50640 CUSUM EWMA PCA TS79 A DOI 0. 980 /j. issn. 0254-508X. 207. 08. 004 Incipient Fault Detection in Papermaking Wastewater Treatment Processes WANG Ling-song MA Pu-fan YE Feng-ying XIONG
TGF-β AngⅡ B SD ~ 220g SPF. SCXK No SYXK ~ 25 40% ~ 70% OR37G-C
2017 7 43 4 Journal of Southwest Minzu University Natural Science Edition Jul. 2017 Vol. 43 No. 4 doi10. 11920 /xnmdzk. 2017. 04. 008 1 1 1 2 1 1 3 1. 610212 2. 6100413. 610031 AngⅡ TGF-β. SD 60 180 ~
Technical Acoustics Vol.27, No.4 Aug., 2008,,, (, ) :,,,,,, : ; ; : TB535;U : A : (2008) Noise and vibr
8 8 Technical Acoustics Vol., No. Aug., 8,,, (, 8) :,,,,,, : ; ; : TB;U.+ 9 : A : -(8)--- Noise and vibration tests for fuel cell vehicel and noise sources identification SHEN Xiu-min, ZUO Shu-guang, CAI
22 Animal Husbandry & Veterinary Medicine 2011 Vol. 43 No % 3% 3% /% % 6. 67% 1. 71% 1. 11% 0. 14% 0.
2011 43 5 21 3 1 1* 1 2 3 1 1. 2. 3. 78. 68±2. 95 g 28 300 3 5 3% 3 1 ALT TP ALB AST 0. 05 P>0. 05 ALT TP ALB P>0. 05 AST 0. 05 GLOB P>0. 05 2 INS 0. 05 TSH T 3 0. 05 P>0. 05 GLU GH T4 IGF-I P>0. 05 S816.
DOI /j.issn Food Research And Development UPLC-MS/MS 5 0.
118 217 5 38 1 DOI 1.3969/j.issn.5-6521.217.1.28 Food Research And Development 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1. 731 2. 731 - UPLC-MS/MS 5. 1 mol/l ProElut PXC 5 % - Thermo Hypersil Gold mm 2.1 mm 1.9 μm ESI
Supplemental information Exome sequencing identifies truncating mutations in the PRRT2 gene that cause paroxysmal kinesigenic dyskinesia Wan-Jin Chen
Supplemental information Exome sequencing identifies truncating mutations in the PRR gene that cause paroxysmal kinesigenic dyskinesia Wan-Jin hen,, Yu Lin, Zhi-Qi Xiong 3, Wei Wei, Wang Ni,, uo-he an
基 础 研 究 食 品 科 学 2011, Vol. 32, No. 07 17 白 球 蛋 白 醇 溶 蛋 白 和 碱 溶 蛋 白 等, 发 现 白 果 中 的 蛋 白 质 主 要 以 清 蛋 白 和 球 蛋 白 为 主, 其 中 白 果 清 蛋 白 具 有 抗 氧 化 和 延 缓 衰 老 等 作
16 李 莹 莹 1, 吴 彩 娥 1, *, 杨 剑 婷 2, 范 龚 健 1 (1. 南 京 林 业 大 学 森 林 资 源 与 环 境 学 院, 江 苏 南 京 210037;2. 安 徽 科 技 学 院 食 品 药 品 学 院, 安 徽 凤 阳 233100) 对 白 果 的 主 要 过 敏 蛋 白 进 行 鉴 定, 并 对 其 过 敏 原 性 进 行 分 析 以 SDS-PAGE 和 Western-Blotting
临床路径管理模式下医疗服务流程的关键环节分析
临 床 路 径 管 理 模 式 下 医 疗 服 务 流 程 的 关 键 环 节 分 析 郭 淑 岩 陶 红 兵 曲 豪 柯 晓 华 刘 鹏 珍 梁 婧 摘 要 采 取 文 献 综 述 相 关 资 料 分 析 和 医 生 意 愿 调 查 等 方 法 找 出 影 响 医 院 临 床 路 径 管 理 服 务 流 程 的 主 要 环 节, 邀 请 已 经 开 展 临 床 路 径 的 医 院 相 关 人 员
ph ph ph Langmuir mg /g Al 2 O 3 ph 7. 0 ~ 9. 0 ph HCO - 3 CO 2-3 PO mg /L 5 p
1 2 1 2 3 1 2 1. 100054 2. 100054 3. 100036 ph ph ph Langmuir 166. 67 mg /g Al 2 O 3 ph 7. 0 ~ 9. 0 ph HCO - 4 5. 00 mg /L 5 ph doi 10. 13928 /j. cnki. wrahe. 2017. 03. 017 TV213. 4 + TU991. 26 + 6 A 1000-0860
現代學術之建立 陳平 998 7-3-3592-6 美學十五講 淩繼堯 美學 23 7-3-643-4 論集 徐複觀 書店出版社 的方位 陳寶生 宣傳 敦煌文藝出版社 論集續篇 徐複觀 書店出版社 莊子哲學 王博 道家 7-3-666-3 的天方學 沙宗平 伊斯蘭教 7-3-6844- 周易 經傳十
東西方比較研究 範明生, 陳超南 物流發展報告 物流與採購聯合會 物流發展報告 物流與採購聯合會 物流發展報告 丁俊發 唯物史觀與歷史科學 地理學 社會科學院出版 23 23 物流 研究報告 2 物資出版社 22 7-547-88-5 物流 物資出版社 7-547-22-3 龐卓恒 歷史唯物主義 高等教育出版社 7-4-4333-X 周尚意, 孔翔, 朱竑 地理學 高等教育出版社 7-4-446-
1 SARS SARS SARS SARS SARS SARS S SARS SARS SARS 2 3 DNA SARS 8 NatureScienceEmerging Infectious DiseasesJournal of Virology NatureScienceLance
SARS SARS SARS SARS NatureScience 2018 1 SARS SARS SARS SARS SARS SARS S SARS SARS SARS 2 3 DNA SARS 8 NatureScienceEmerging Infectious DiseasesJournal of Virology 13.066 NatureScienceLancetPNAS SCI 940
标题
第 33 卷 第 2 期 Vol. 33 No. 2 水 摇 利 摇 经 摇 济 Journal of Economics of Water Resources 2015 年 3 月 Mar. 2015 DOI:10. 3880 / j. issn. 1003 9511. 2015. 02. 014 全 生 命 周 期 视 角 下 烟 草 水 源 工 程 造 价 监 控 管 理 刘 摇 波, 付 生
200 31 5 SWAN 0. 01 0. 01 6 min TITAN Thunder Identification Tracking Analysis SWAN TITAN and Nowcasting 19 TREC Tracking Radar Echo by Correlaction T
31 1 2013 3 Journal of Arid Meteorology Vol. 31 No. 1 March 2013. SWAN J. 2013 31 1 199-205. doi 10. 11755 /j. issn. 1006-7639 2013-01 - 0199 SWAN 730020 2011 7 7 SWAN SWAN 2012 2 SWAN 1006-7639 2013-01
12-1b T Q235B ML15 Ca OH Table 1 Chemical composition of specimens % C Si Mn S P Cr Ni Fe
* - - 100084 Q235B ML15 Ca OH 2 DOI 10. 13204 /j. gyjz201508023 STUDY OF GALVANIC CORROSION SENSITIVITY BETWEEN ANY COUPLE OF STUD WELDMENT OR BEAM Lu Xinying Li Yang Li Yuanjin Department of Civil Engineering
标题
医 药 导 报 2016 年 8 月 第 35 卷 第 8 期 803 特 约 稿 鱼 腥 草 制 剂 上 市 后 安 全 性 再 评 价 吴 健 鸿 1 ꎬ 杨 晓 燕 2 ꎬ 柳 强 妮 2 ꎬ 尹 平 2 2 ꎬ 曾 繁 典 (1. 武 汉 药 品 医 疗 器 械 检 验 所 ꎬ 武 汉 430075ꎻ2. 华 中 科 技 大 学 同 济 医 学 院 ꎬ 武 汉 430030) 摘 要 目 的
2016 YOUNG MATHEMATICIAN FORUM Introduction To promote academic communication and cooperation between young staffs from the SMS and the BICMR of Pekin
2016 YOUNG MATHEMATICIAN FORUM Introduction To promote academic communication and cooperation between young staffs from the SMS and the BICMR of Peking University and overseas outstanding young scholars,
Fig. 1 Frame calculation model 1 mm Table 1 Joints displacement mm
33 2 2011 4 ol. 33 No. 2 Apr. 2011 1002-8412 2011 02-0104-08 1 1 1 2 361003 3. 361009 3 1. 361005 2. GB50023-2009 TU746. 3 A Study on Single-span RC Frame Reinforced with Steel Truss System Yuan Xing-ren
Protein Labeling and Detection
ECL plex Product Specialist 1/ Western Blot 2/ Western Blotting- PI 3/ Western Blotting 1. 2 1 2. 3. 4. Y 3 4 5. 4/ 1. SDS- (SDS-PAGE) SDS ( β- ) --SDS 5/ SDS-PAGE - - - (Tris-HCL ph 6.8) glycine/chloride
5期xin
中 国 农 学 通 报 2014,30(5):23-27 Chinese Agricultural Science Bulletin 大 肠 杆 菌 生 物 膜 的 筛 选 及 生 长 曲 线 测 定 喻 华 英, 李 启 峰 ( 塔 里 木 大 学 动 物 科 学 学 院, 新 疆 阿 拉 尔 843300) 摘 要 : 为 探 究 犊 牛 腹 泻 病 中 大 肠 杆 菌 生 物 膜 的 形 成
< F63756D656E D2D796E2D31C6DABFAF2D31D6D0D2BDD2A9CFD6B4FABBAF2D C4EA2DB5DA36C6DA2DB7E2C3E6CDC6BDE9A3A D36A3A92E6D6469>
1. 530023 2. 530001 3. 530001 DCP 100 DCP 47 53 3 HOMA -IR HOMA - IR P
[1-3] (Smile) [4] 808 nm (CW) W 1 50% 1 W 1 W Fig.1 Thermal design of semiconductor laser vertical stack ; Ansys 20 bar ; bar 2 25 Fig
![[1-3] (Smile) [4] 808 nm (CW) W 1 50% 1 W 1 W Fig.1 Thermal design of semiconductor laser vertical stack ; Ansys 20 bar ; bar 2 25 Fig](/thumbs/91/106435555.jpg "[1-3] (Smile) [4] 808 nm (CW) W 1 50% 1 W 1 W Fig.1 Thermal design of semiconductor laser vertical stack ; Ansys 20 bar ; bar 2 25 Fig")
40 6 2011 6 Vol.40 No.6 Infrared and Laser Engineering Jun. 2011 808 nm 2000 W 1 1 1 1 2 2 2 2 2 12 (1. 710119 2. 710119) : bar 808 nm bar 100 W 808 nm 20 bar 2 000 W bar LIV bar 808 nm : : TN248.4 TN365
Vol. 22 No. 4 JOURNAL OF HARBIN UNIVERSITY OF SCIENCE AND TECHNOLOGY Aug GPS,,, : km, 2. 51, , ; ; ; ; DOI: 10.
22 4 2017 8 Vol. 22 No. 4 JOURNAL OF HARBIN UNIVERSITY OF SCIENCE AND TECHNOLOGY Aug. 2017 150080 GPS,,, : 27. 36 km, 2. 51, 110. 43, ; ; ; ; DOI: 10. 15938 /j. jhust. 2017. 04. 015 U469. 13 A 1007-2683
II ABSTRACT Severe acute respiratory syndrome (SARS) was the first severe infectious disease in the 21 century,which was caused by a new coronavirus,n
I SARS 21 SARS-CoV GeneBank SARS-CoV Tor2 PCR N PN422 N 40% SARS N 95% N C N 38 15%~30% SARS N N 39 Western N 30 60aa 160~170aa N Bal b/c 8 39 Western Blot 8 6 2 N N 30 184 301 360 2 2 IgG1 10 6 10 9 M
Microsoft Word - 793-797 tb20150504赵宏宇s-高校教改纵横.doc
微 生 物 学 通 报 Microbiology China tongbao@im.ac.cn Apr. 20, 2016, 43(4): 793 797 http://journals.im.ac.cn/wswxtbcn DOI: 10.13344/j.microbiol.china.150504 高 校 教 改 纵 横 生 物 工 程 专 业 发 酵 课 程 群 建 设 探 索 * 赵 宏 宇
mm ~
16 3 2011 6 Vol 16 No 3 JOURNAL OF HARBIN UNIVERSITY OF SCIENCE AND TECHNOLOGY Jun 2011 1 2 3 1 150040 2 150040 3 450052 1 3 4 > 1 ~ 3 > > U414 A 1007-2683 2011 03-0121- 06 Shrinkage Characteristics of
1449 1 相 对 校 正 因 子 的 相 关 方 法 1.1 内 标 多 控 法 研 究 发 现, 在 中 药 各 成 分 间 存 在 着 一 定 的 比 例 关 系, 只 要 各 成 分 的 量 符 合 该 比 例 关 系, 中 药 的 多 [6] 指 标 质 量 控 制 可 以 依 此 法
![1449 1 相 对 校 正 因 子 的 相 关 方 法 1.1 内 标 多 控 法 研 究 发 现, 在 中 药 各 成 分 间 存 在 着 一 定 的 比 例 关 系, 只 要 各 成 分 的 量 符 合 该 比 例 关 系, 中 药 的 多 [6] 指 标 质 量 控 制 可 以 依 此 法](/thumbs/40/22057924.jpg "1449 1 相 对 校 正 因 子 的 相 关 方 法 1.1 内 标 多 控 法 研 究 发 现, 在 中 药 各 成 分 间 存 在 着 一 定 的 比 例 关 系, 只 要 各 成 分 的 量 符 合 该 比 例 关 系, 中 药 的 多 [6] 指 标 质 量 控 制 可 以 依 此 法")
1448 相 对 校 正 因 子 在 中 药 多 指 标 测 定 中 的 应 用 研 究 进 展 1, 罗 祖 良 2, 仇 峰 1 1,, 韦 日 伟 2 1,, 覃 禹 2, 张 坤 1, 覃 洁 萍 2, 杨 美 华 1. 北 京 协 和 医 学 院 药 用 植 物 研 究 所, 中 草 药 物 质 基 础 与 资 源 利 用 教 育 部 重 点 实 验 室, 北 京 100193 2. 广
Microsoft Word - 695-699 tb20120355谢涛.doc
微 生 物 学 通 报 Microbiology China tongbao@im.ac.cn Apr. 20, 2013, 40(4): 695 699 2013 by Institute of Microbiology, CAS 高 校 教 改 纵 横 湖 南 工 程 学 院 生 物 工 程 专 业 实 践 教 学 模 式 创 新 与 实 践 * 谢 涛 张 儒 ( 湖 南 工 程 学 院 化
August 大 学 化 学 (Daxue Huaxue) Univ. Chem. 2016, 31 (8), 71-75 71 化 学 实 验 doi: 10.3866/PKU.DXHX201510028 www.dxhx.pku.edu.cn 高 校 化 学 实 验 教 学 中 产 生 的 化 学 废 物 的 回 收 及 处 理 * 兰 景 凤 俞 娥 ( 兰 州 大 学 化 学 化 工 学 院,
材料與方法
10-12 250-350 Sprague-Dawley rat ( SD ) 12 ( AM 8 00-PM 8 00 ) (Control group) (HS) (Heat shock group) 15 0 4 6 16 24 (PAE) ( Pulmonary air embolism group) 20 40 (25 l/min) 40 17 20 (HS&PAE) 15 4 16 20
~ ~ ~
36 4 2015 385 ~ 397 The Chinese Journal for the History of Science and Technology Vol. 36 No. 4 2015 1951 ~ 1956 100049 100190 1951 ~ 1966 1951 ~ 1956 N092 P62-092 A 1673-1441 2015 04-0385-13 1951 ~ 1966
2011 2011 A B A 18 A 2006 2007 2008 2007 2007a 2007b 2007 2010 2010 2011 2009 2007 2011 23
A 18 * A 18 A D035. 1 A 1674-2486 2015 02-0022 - 25 Bennett 1976 Cell 1977 Whyte 1974 * chennabo@ mail. sysu. edu / 12YJC840048 13YJA810002 985 22 2011 2011 A B A 18 A 2006 2007 2008 2007 2007a 2007b 2007
在 培 养 职 前 卓 越 化 学 教 师 的 院 校, 会 编 一 本 过 去 称 作 化 学 教 学 论 实 验, 现 在 拟 为 卓 越 化 学 教 师 教 育 实 验 教 学 研 究 的 教 材 各 院 校 对 这 门 课 程 所 给 的 学 时 不 太 一 样, 但 都 是 围 绕 实 验
doi: 10.3866/pku.DXHX201607011 卓 越 化 学 教 师 教 育 实 验 教 学 研 究 课 程 探 微 * 杨 承 印 汪 蒙 蒙 赵 洋 ( 陕 西 师 范 大 学 化 学 化 工 学 院, 西 安 710119) 摘 要 : 在 对 实 验 操 作 进 行 编 码 的 基 础 上 对 高 中 化 学 课 程 标 准 中 有 关 实 验 进 行 统 计 分 析, 以
NCCC Swim Team James Logan High school - 8/5/2018 Results - Adult Event 102 Mixed Yard Medley Relay Team Relay Finals Time 1 Beida-Zhonglian
NCCC Swim Team James Logan High school - 8/5/2018 Results - Adult Event 102 Mixed 60-69 200 Yard Medley Relay 1 Beida-Zhonglian B 3:11.63 2 Beida-Zhonglian A 3:18.29 HY-TEK's MEET MANAGER Event 103 Mixed
H 2 SO ml ml 1. 0 ml C 4. 0 ml - 30 min 490 nm 0 ~ 100 μg /ml Zhao = VρN 100% 1 m V ml ρ g
16 6 2018 11 Chinese Journal of Bioprocess Engineering Vol. 16 No. 6 Nov. 2018 doi 10. 3969 /j. issn. 1672-3678. 2018. 06. 004 1 2 1 1 1. 330200 2. 330006 4 Box-Behnken 1 25 g /ml 121 92 min 2 6. 284%
~ 4 mm h 8 60 min 1 10 min N min 8. 7% min 2 9 Tab. 1 1 Test result of modified
30 1 2013 1 Journal of Highway and Transportation Research and Development Vol. 30 No. 1 Jan. 2013 doi 10. 3969 /j. issn. 1002-0268. 2013. 01. 004 1 2 2 2 2 1. 400074 2. 400067 240 U416. 217 A 1002-0268
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骨 有 明 訊 肌 動 蛋 白 絲 與 細 胞 形 態 關 係 之 研 究 科 別 : 生 物 科 第 48 屆 科 學 展 覽 北 二 區 佳 作 作 者 : 呂 苹 瑋 范 競 勻 指 導 老 師 : 陳 季 瑄 老 師 壹 摘 要 本 研 究 以 人 類 的 子 宮 頸 癌 細 胞 (HeLa cell) 為 細 胞 骨 架 的 觀 察 對 象, 經 過 培 養 與 繼 代, 利 用 免 疫
ti2 guan4 bo1 bo5 huai4 zheng4 hong1 xi2 luo2 ren4
hui1 ba2 shang1 tu4 gen1 nao3 he2 qing2 jin1 ti2 guan4 bo1 bo5 huai4 zheng4 hong1 xi2 luo2 ren4 chu2 fu4 ling2 jun4 yu4 zhao1 jiang3 che3 shi4 tu2 shi2 wa2 wa1 duan4 zhe2 bu4 lian4 bing1 mu4 ban3 xiong2
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0 岚 卷 第 二 编 第 二 编 岚 卷 121 日 照 122 第 二 编 安东卫城池图 丁士价 1676 1727 字介臣 号龙溪 丁景次子 日照丁氏 十支 六世 日照市岚区后村镇丁家皋陆人 康熙五十六年 1717 丁酉科举人 与同邑秦 yi 尹纯儒为同科举人 拣选 知县 后参加会试屡试不第 遂弃举子业 居家课子训侄 以故四弟士 可考中甲辰科举人 诸子孙皆累试前茅 丁士价教育子弟兢兢业业 读
% 8. 48% 3 80 Alcalase Novozymes Alcalase 2. 4 L Bacillus licheniformis 2. 4 AU /g 1. 2 Hitachi S-4700 JEOL JEM-1200EX Olympus Bu
2011 33 6 1117-1121 http / /xuebao. jxau. edu. cn Acta Agriculturae Universitatis Jiangxiensis E - mail ndxb7775@ sina. com * 311400 Alcalase 2. 4 L TS225. 1 + 6 A 1000-2286 2011 06-1117 - 05 A Study on
1.0 % 0.25 % 85μm % U416 Sulfate expansion deformation law and mechanism of cement stabilized macadam base of saline areas in Xinjiang Song
1.0 % 0.25 % 85μm 0.97 0.136 % U416 Sulfate expansion deformation law and mechanism of cement stabilized macadam base of saline areas in Xinjiang Song Liang 1,2 Wang Xuan-cang 1 1 School of Highway, Chang
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中 草 药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 44 卷 第 8 期 2013 年 4 月 989 养 阴 清 肺 糖 浆 指 纹 图 谱 研 究 1, 姜 姗 2, 冯 丽 君 2, 孔 慧 2, 曲 昌 海 2, 尹 兴 斌 2, 倪 健 1. 北 京 中 医 药 大 学 教 务 处, 北 京 100029 2. 北 京 中 医 药 大 学 中 药 学
2 3. 1,,,.,., CAD,,,. : 1) :, 1,,. ; 2) :,, ; 3) :,; 4) : Fig. 1 Flowchart of generation and application of 3D2digital2building 2 :.. 3 : 1) :,
3 1 Vol. 3. 1 2008 2 CAA I Transactions on Intelligent Systems Feb. 2008, (,210093) :.,; 3., 3. :; ; ; ; : TP391 :A :167324785 (2008) 0120001208 A system f or automatic generation of 3D building models
CIP /. 2005. 12 ISBN 7-5062 - 7683-6 Ⅰ.... Ⅱ.... Ⅲ. Ⅳ. G624.203 CIP 2005 082803 櫶櫶櫶櫶櫶櫶櫶櫶櫶櫶櫶櫶櫶櫶櫶櫶櫶櫶櫶櫶櫶櫶 17 710001 029-87232980 87214941 029-87279675 87279676 880 1230 1/64 4.0 110 2006 2 1 2006 2 1 ISBN
<B3ACBDDD>
卷 第 三 编 日 照 196 古代书院学子制艺文评语 于宾 明代州人 明初举人 洪武十二年 1379 己未科进 士 历官兵科给事中 沂州府志 卷二十二 进士 部载 于宾 州人 己未科 官给事中 州志载 于宾 杨睿登 洪武己未 科进士 宾任给事中 睿任中都国学分教 则庚戌以后 乙丑以前 皆 举春试矣 见 沂州府志 州志 于攀龙 明代州人 万历年武举人 见 州志 于学训 1757 1828 字希古 号敬亭
填 表 说 明 1. 本 表 所 填 数 据 截 至 时 间 为 2011 年 9 月 底 2. 本 表 请 用 A4 纸 双 面 打 印, 加 盖 学 校 公 章 后 上 报 3. 表 内 所 填 数 据 请 学 校 认 真 核 实, 确 保 准 确 无 误 4. 建 设 完 成 情 况 对 照
填 表 说 明 1. 本 表 所 填 数 据 截 至 时 间 为 2011 年 9 月 底 2. 本 表 请 用 A4 纸 双 面 打 印, 加 盖 学 校 公 章 后 上 报 3. 表 内 所 填 数 据 请 学 校 认 真 核 实, 确 保 准 确 无 误 4. 建 设 完 成 情 况 对 照 表 等 相 关 表 格 栏 高 不 够 请 自 行 增 加 5. 表 格 中 填 写 的 相 关 量
1 引言
P P 第 40 卷 Vol.40 第 7 期 No.7 计 算 机 工 程 Computer Engineering 014 年 7 月 July 014 开 发 研 究 与 工 程 应 用 文 章 编 号 :1000-348(014)07-081-05 文 献 标 识 码 :A 中 图 分 类 号 :TP391.41 摘 基 于 图 像 识 别 的 震 象 云 地 震 预 测 方 法 谢 庭,
全球健康研究中心-中文
2 3 4 5 6 Dr. Qianli Wang Institute of Microbiology, Chinese Academy of Science, A one health perspective on avian influenza and the live poultry trade in China Ron Halbrooks Medical Doctor, Sutton Station
932 SUZHOU UVIVERSITY JOURNAL OF MEDICAL SCIENCE E1A inhibite H22 ascitic hepatoma obviously and almost has no side effect on immune functio
2010 30 5 931 Ad-E1A 215123 Ad-E1A BALB /c Ad-E1A RT-PCR E1A H22 BALB /c H22 PBS Ad-E1A 5-Fu 7 10 9 pfu /ml Ad-E1A Ad-E1A 5-Fu 66. 7% 68. 8% P > 0. 05 Ad-E1A PBS 5-Fu P < 0. 01 P < 0. 05 Ad-E1A PBS 5-Fu
2014 Vol.16 No.2 2003 2.1.2 粉 碎 技 术 及 设 备 研 究 62 2 300 2.1 工 艺 研 究 和 关 键 参 数 界 定 2.1.1 中 药 破 壁 饮 片 中 间 体 破 壁 粉 体 粒 径 界 定 2.1.3 产 品 成 型 技 术 研 究 10~100
成 金 乐 **, 赖 智 填, 彭 丽 华 528437 本 文 总 结 了 中 药 破 壁 饮 片 研 究 现 状, 并 简 述 了 中 药 破 壁 饮 片 工 艺 质 量 标 准 有 效 性 安 全 性 示 范 研 究 的 结 果, 对 中 药 破 壁 饮 片 的 属 性 内 涵 定 位 进 行 了 剖 析 探 讨, 为 中 药 破 壁 饮 片 进 一 步 的 研 究 及 发 展 提 供 参
AFLP % 1. 1 DNA 5 RAPD DNA 0. 1g % ~ ph 6 10 DNA 9 40μl TE SSR STS 20ng /L
2012 13 2 201-206 Journal of Plant Genetic Resources / 071001 41 SSR 21 SSR 41 52 2 ~ 4 2. 5 Shannon 0. 21 ~ 1. 40 0. 73 5. 54 3 7 9 13. 16% ~ 186. 49% 5. 48 6 11 SSR Genetic Diversity of Peanut Arachis
DELE julio 2018
01665571 180703156001020001 SONG HAOWEN 01320735 180703156001020002 LI HUILING 01820246 180703156001020003 WANG MENGXIAO 01820248 180703156001020004 ZHANG YI 01820249 180703156001020005 LI HENGYANG 01821138
34 22 f t = f 0 w t + f r t f w θ t = F cos p - ω 0 t - φ 1 2 f r θ t = F cos p - ω 0 t - φ 2 3 p ω 0 F F φ 1 φ 2 t A B s Fig. 1
22 2 2018 2 Electri c Machines and Control Vol. 22 No. 2 Feb. 2018 1 2 3 3 1. 214082 2. 214082 3. 150001 DOI 10. 15938 /j. emc. 2018. 02. 005 TM 301. 4 A 1007-449X 2018 02-0033- 08 Research of permanent
中 草 药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷 第 9 期 2015 年 5 月 1339 非 酒 精 性 脂 肪 性 肝 病 (nonalcoholic fatty liver disease,nafld) 是 一 种 与 胰 岛 素 抵 抗 遗
1338 中 草 药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷 第 9 期 2015 年 5 月 九 味 肝 泰 胶 囊 对 高 脂 饮 食 诱 导 大 鼠 非 酒 精 性 脂 肪 肝 的 治 疗 作 用 陈 菲 1 2,, 艾 国 3, 盛 柳 青 1, 麻 佳 蕾 1, 黄 正 明 1. 金 华 职 业 技 术 学 院 医 学 院, 浙 江 金 华
助 剂 改 善 其 止 血 效 果 1 实 验 1.1 原 料 和 试 剂 家 蚕 蛹 经 过 提 取 蛹 油 蛋 白 质 后 剩 余 的 残 渣 ( 主 要 成 分 为 蛹 皮 ), 烘 干 除 杂 粉 碎 后 待 用 ; 壳 聚 糖 ( 成 都 市 科 龙 化 工 试 剂 厂 ), 脱 乙 酰
研 究 与 技 术 蚕 蛹 壳 聚 糖 复 合 止 血 材 料 的 制 备 及 凝 血 性 能 初 探 陈 超, 单 其 艳, 杨 铭, 蓝 广 芊, 吴 大 洋 ( 西 南 大 学 纺 织 服 装 学 院, 重 庆 400716) 摘 要 : 探 讨 以 蚕 蛹 壳 聚 糖 (CS) 和 明 胶 (GEL) 为 主 要 原 料 制 备 复 合 止 血 材 料 的 工 艺 及 凝 血 效 果 首 先
220 20, Vol. 32, No. 6 食 品 科 学 分 析 检 测 荡 体 系 被 用 来 检 测 和 鉴 别 组 成 极 其 复 杂 的 中 药 2007 年 [7-20] 张 泰 铭 等 提 出 了 中 药 非 线 性 化 学 指 纹 图 谱 的 概 念, 并 对 其 形 成 的 原
![220 20, Vol. 32, No. 6 食 品 科 学 分 析 检 测 荡 体 系 被 用 来 检 测 和 鉴 别 组 成 极 其 复 杂 的 中 药 2007 年 [7-20] 张 泰 铭 等 提 出 了 中 药 非 线 性 化 学 指 纹 图 谱 的 概 念, 并 对 其 形 成 的 原](/thumbs/42/22870184.jpg "220 20, Vol. 32, No. 6 食 品 科 学 分 析 检 测 荡 体 系 被 用 来 检 测 和 鉴 别 组 成 极 其 复 杂 的 中 药 2007 年 [7-20] 张 泰 铭 等 提 出 了 中 药 非 线 性 化 学 指 纹 图 谱 的 概 念, 并 对 其 形 成 的 原")
29 赵 哲, 张 泰 铭, *, 方 宣 启 2, 向 凤 琴, 乔 君 喜, 朱 蓉 (. 中 南 大 学 化 学 化 工 学 院, 湖 南 长 沙 40083;2. 湖 南 省 食 品 质 量 监 督 检 验 所, 湖 南 长 沙 40002) 通 过 向 稳 态 体 系 溴 酸 钠 - 硫 酸 锰 - 硫 酸 - 丙 酮 中 加 入 不 同 的 茶 饮 料, 获 得 来 自 不 同 产 家
Microsoft Word - 2015年第三期09
第 32 卷 第 3 期 河 北 工 程 大 学 学 报 ( 社 会 科 学 版 ) Vol.32 No.3 2015 年 9 月 Journal of Hebei University of Engineering (Social Science Edition) Sept.2015 潍 坊 地 区 非 物 质 文 化 遗 产 要 素 研 究 刘 阳 ( 中 央 戏 剧 学 院 戏 剧 管 理 系,
BISQ理论模型与声波测井响应研究
* BISQ, 133 BISQ BISQ BISQ BISQ BISQ : PACC: 43, 665, 913 1. [1], * (:4743). 119 133 431-8449917 431-898966 431-8941554 Email cuizwjlu@sina.com; kexiew@public.cc.jl.cn [] [3 4] Dvorkin Nur [5 6] - BISQ
4期
中 国 农 学 通 报 2013,29(04):39-43 Chinese Agricultural Science Bulletin 中 药 荆 芥 最 新 研 究 进 展 1,2 1,2 赵 立 子, 魏 建 和 ( 1 北 京 协 和 医 学 院 药 用 植 物 研 究 所, 北 京 100193; 2 中 草 药 物 质 基 础 与 资 源 利 用 教 育 部 重 点 实 验 室, 北 京
: 307, [], [2],,,, [3] (Response Surface Methodology, RSA),,, [4,5] Design-Expert 6.0,,,, [6] VPJ33 ph 3,, ph, OD, Design-Expert 6.0 Box-Behnken, VPJ3
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微 生 物 学 通 报 FEB 20, 2008, 35(2) 306~30 Microbiology 2008 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@im.ac.cn 生 物 实 验 室 响 应 面 分 析 法 优 化 副 溶 血 性 弧 菌 生 长 条 件 刘 代 新 宁 喜 斌 * 张 继 伦 2 (. 200090) (2. 20202) 摘 要
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PARTE ESCRITA PARTE ORAL NIVEL CÓDIGO APELLIDO NOMBRE FECHA HORA AULA FECHA Hora Prep Hora Ex AULA 13050315601020001 NI HUANMENG 25-may 13050315601020002 GUO YUANCHUN 25-may 13050315601020004 XU AI 25-may
细 胞 生 物 学 实 验 指 导 细 胞 生 物 教 研 室 目 录 实 验 一 动 物 细 胞 的 基 本 形 态 观 察 和 显 微 测 量 1 实 验 二 线 粒 体 的 活 体 染 色 及 电 镜 照 片 观 察 4 实 验 三 液 泡 系 的 活 体 染 色 及 电 镜 照 片 观 察 6 实 验 四 细 胞 生 理 活 动 的 观 察 7 实 验 五 细 胞 组 分 的 化 学 反 应
1 VLBI VLBI 2 32 MHz 2 Gbps X J VLBI [3] CDAS IVS [4,5] CDAS MHz, 16 MHz, 8 MHz, 4 MHz, 2 MHz [6] CDAS VLBI CDAS 2 CDAS CDAS 5 2
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32 1 Vol. 32, No. 1 2014 2 PROGRESS IN ASTRONOMY Feb., 2014 doi: 10.3969/j.issn.1000-8349.2014.01.07 VLBI 1,2 1,2 (1. 200030 2. 200030) VLBI (Digital Baseband Convertor DBBC) CDAS (Chinese VLBI Data Acquisition
114 () ml,60 2 g 20 ml, 120 r/ min,12. 3,, 3, ( Fluroscein diacetate, FDA). 2 mg FDA 1 ml, 50,0. 04 g/ L. FDA 1 1, 10 min,,., = / 100
48 1 () Vol. 48 No. 1 2009 1 Journal of Xiamen University (Nat ural Science) Jan. 2009 1, 1 3, 2 (1.,, 361005 ; 2., 730000) :, (DMSO). :DMSO,. 75 mmol/ L DMSO 48 h,, 1. 6 1. 8 ;10mol/ L 48 h,,;,. : ; ;
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中 国 农 学 通 报 212,28():2-27 Chinese Agricultural cience Bulletin 血 清 11 型 鸭 疫 里 默 氏 菌 的 分 离 鉴 定 1,2 2, 2, 2, 2, 2, 2, 杨 晓 辉, 程 龙 飞, 陈 红 梅, 施 少 华, 傅 光 华, 万 春 和, 黄 瑜 ( 1 福 建 省 农 业 科 学 院 畜 牧 兽 医 研 究 所, 福 州
DELE noviembre 2017
PARTE ESCRITA PARTE ORAL NIVEL CÓDIGO APELLIDO NOMBRE FECHA HORA AULA FECHA Preparación Examen AULA 171102156001020001 LI LINGWEN 171102156001020002 CHENG LIXIA 171102156001020003 YAN QI 171102156001020004
2. 对 DNA 载 体 的 控 制 元 件 和 选 择 标 记 的 序 列 与 来 源, 如 : 真 核 启 动 子 增 强 子 终 止 序 列 抗 生 素 抗 性 标 记 等 进 行 分 析 建 议 避 免 使 用 抗 青 霉 素 或 其 它 饽 邗 0 房 咕 氐 目 剐 员 昙 牵 好 使
预 防 用 DNA 疫 苗 临 床 前 研 究 技 术 指 导 原 则 一 前 言 DNA 疫 苗 是 将 外 源 目 的 基 因 片 段 构 建 在 DNA 质 粒 中, 重 组 后 的 DNA 导 入 机 体 后 可 表 达 目 的 蛋 白, 目 的 蛋 白 刺 激 机 体 产 生 特 异 性 免 疫 学 反 应 而 达 到 预 防 某 种 疾 病 的 生 物 制 剂 该 指 导 原 适 用 于
43 14. 45 3 7 220 1 2 cm /s 2 1. 5 3 1 4 c d 1 /40 1 /4 1 /9 600 0. 129 6 7 1 /6 400 1 /256 000 1. 5 2 2 2. 1 /m /Hz /kn / kn m 6 6 0. 1 ~ 50 600 1 80
43 14 2013 7 Building Structure Vol. 43 No. 14 Jul. 2013 * 1 1 1 2 3 3 3 2 2 1 100013 2 430022 3 200002 1 40 ETABS ABAQUS TU355 TU317 +. 1 A 1002-848X 2013 14-0044-04 Compairion study between the shaking
Slide 1
E VIDENCE IDENTIFICATION THEORY&PRACTICE 山 东 省 高 校 重 点 验 室 山 东 政 法 学 院 司 法 定 中 心 20 年 2 月 Vol., No. 本 目 录 什 么 是 声 纹 分 析 ------------------------------------------------------------------------------------
48 東華漢學 第20期 2014年12月 後 卿 由三軍將佐取代 此後 中大夫 極可能回歸原本職司 由 於重要性已然不再 故而此後便不見 中大夫 記載於 左傳 及 國 語 關鍵詞 左傳 中大夫 里克 丕鄭 卿
東華漢學 第 20 期 47-98 頁 東華大學中國語文學系 華文文學系 2014 年 12 月 春秋晉國 中大夫 考 黃聖松** 摘要 本文討論 左傳 國語 所載 中大夫 之含義及職司內容 認為 中大夫 不可與 上大夫 下大夫 排比 視為 大夫 等 第 左傳 所載 大夫 一詞前常冠以其他名詞 如 中軍大夫 上軍大夫 下軍大夫 七輿大夫 公族大夫 及 僕大 夫 筆者認為 冠諸 大夫 前名詞即是該大夫職司範圍
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International Federation of Bodybuilding and Fitness 019 ``The Belt and Road`` Worldwide Bodybuilding and Fitness Championships 10-14.10.019, Xi`an, O F F I C I A L C O N T E S T R E S U L T S Men's Classic
第 33 卷 第 2 期 2010 年 4 月 - 149 - 脱 蛋 白 较 好 的 方 法 是 Sevag 法, 它 是 根 据 蛋 白 质 在 氯 仿 等 有 机 溶 剂 中 变 性 的 特 点, 使 蛋 白 质 变 性 成 胶 状, 此 法 条 件 温 和, 可 避 免 多 糖 的 降 解
- 148 - Drug Evaluation Research Vol.33 No.2 April 2010 植 物 多 糖 的 研 究 进 展 陶 遵 威 1, 郑 夺 1, 邸 明 磊 2, 单 晓 菊 1 天 津 市 医 药 科 学 研 究 所, 天 津 300020; 2 天 津 中 医 药 大 学, 天 津 300073 2 摘 要 多 糖 是 由 单 糖 连 接 而 成 的 多 聚 物,
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中 国 科 技 资 源 导 刊 ISSN 1674-1544 2016 年 5 月 第 48 卷 第 3 期 40-44, 50 CHINA SCIENCE & TECHNOLOGY RESOURCES REVIEW ISSN 1674-1544 Vol.48 No.3 40-44, 50 May. 2016 安 徽 省 新 型 产 学 研 合 作 组 织 的 发 展 1 任 媛 媛 等 沙 其 富
蒋 哲等 基于 CVM 的有机农业认知程度和消费意愿研究 201 (P 0.000). On the basis of these results, enhancing publicity, pricing reasonably, focusing on high- income groups ar
中国农学通报 2016,32(5):200-204 Chinese Agricultural Science Bulletin 基于 CVM 的有机农业认知程度和消费意愿研究 以江西省居民为例 蒋 哲 1 朱 波 1 田 媛 1 梁 超 1 刘章勇 1 陈 阜 1,2 2 1 长江大学农学院 湖北荆州 434025 中国农业大学农学与生物技术学院 北京 100193 摘 要 为探讨参与者对有机农业的认知程度
~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ % % ~ 20% 50% ~ 60%
33 202 67 ~ 79 The Chinese Journal for the History of Science and Technology Vol. 33 No. 202 896 ~ 949 404 00083 896 ~ 907-908 ~ 98-99 ~ 949 - - N092 TF-092 A 673-44 202 0-0067-3 R. F. Tylecote R. I. McCallum
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Supporting Information The Synthesis and Bioactivity Investigation of the Individual Components of Cyclic Lipopeptide Antibiotics A-Long Cui, Xin-Xin Hu, Yan Gao, Jie Jin, Hong Yi, Xiu-Kun Wang, Tong-Ying
a b
38 3 2014 5 Vol. 38 No. 3 May 2014 55 Population Research + + 3 100038 A Study on Implementation of Residence Permit System Based on Three Local Cases of Shanghai Chengdu and Zhengzhou Wang Yang Abstract
11 25 stable state. These conclusions were basically consistent with the analysis results of the multi - stage landslide in loess area with the Monte
211 11 11 158 JOURNAL OF RAILWAY ENGINEERING SOCIETY Nov 211 NO. 11 Ser. 158 16-216 211 11-24 - 6 1 2 3 3 3 1. 126 2. 92181 74 3. 181 1 2 3 4 1. 27 1. 3 1. 56 1. 73 4 1 2 3 4. 96 1. 15 1. 48 1. 6 f s =
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2014 第十六卷 第十二期 绎Vol.16 No.12 清热利湿化瘀汤联合针灸治疗慢性盆腔炎 湿热瘀结证临床研究 周 萍 1 曾志华 1元元 向阳红 2 1. 重庆医科大学中医药学院 摘 重庆 401331 2. 重庆市中医研究院 重庆 400020 要 目的 观察清热利湿化瘀汤联合针灸治疗慢性盆腔炎湿热瘀结证的临床疗效 方法 将 120 例病例随机分为 每组各 40 例 给予口服清热利湿化瘀汤
1 GIS 95 Y = F y + (1 F) (1) 0 0 Y0 kg/hm 2 /day F y 0 y c kg/hm 2 /day [12] y m 20 kg/hm 2 /hour Y = cl cn ch G [ F( y ) T m yo + (2) (1 F)(
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24 1 Vol.24 No.1 94 2008 1 Transactions of the CSAE Jan. 2008 2008 1 100094 2 100035 3 100081 4 100081 5 100101 GIS ( ) 65.12 16.82 13.74 15.27 11.07 t/(hm 2 a) 10.93% 41.43% 46.93% 65.4%. Bi Jiye, Zhu
LaDefense Arch Petronas Towers 2009 CCTV MOMA Newmark Hahn Liu 8 Heredia - Zavoni Barranco 9 Heredia - Zavoni Leyva
39 6 2011 12 Journal of Fuzhou University Natural Science Edition Vol 39 No 6 Dec 2011 DOI CNKI 35-1117 /N 20111220 0901 002 1000-2243 2011 06-0923 - 07 350108 105 m 14 69% TU311 3 A Seismic analysis of
/MPa / kg m - 3 /MPa /MPa 2. 1E ~ 56 ANSYS 6 Hz (a) 一阶垂向弯曲 (b) 一阶侧向弯曲 (c) 一阶扭转 (d) 二阶侧向弯曲 (e) 二阶垂向弯曲 (f) 弯扭组合 2 6 Hz
31 3 Vol. 31 No. 3 218 9 Journal of Shijiazhuang Tiedao University Natural Science Edition Sep. 218 1 1 2 1 2 1 1. 543 2. 543 U462. 3 217-2 - 16 A 295-373 218 3-63 - 6 1-4 5-7 8-11 1 11 11 398 mm 86 mm