1 实验仪器与耗材 1.1 AB QTRAP 5500 LC/MS/MS 1.2 联和层析双 SPE 柱串联多维 Online SPE 系统 HighSPEed 1.3 在线 SPE 柱 :HLB 2.1*20mm,2.5um; 种抗生素标准品 : 阿奇霉素, 红霉素, 罗红霉素, 克

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1 联和层析 应用文章精选 联和层析致力于提供无限可能的色谱 解决方案 十多年来, 我们与全球多 家专业色谱厂商保持良好合作伙伴关 係, 并将他们优势产品引进到国内 本着诚恳 实在 专业 负责的理 念, 联合层析在样品前处理及自动化 的领域已占据领先地位 为服务广大客户对于了解国际间最新 色谱应用方向的需求, 联和层析定期 精选并翻译应用文章, 为国内的科技 服务提升, 略尽绵薄之力! 水体中 11 种抗生素的测定 抗生素 (antibiotics) 是生物包括微生物 植物和动物在内在其生命活动过程中所产生 的 ( 或由其他方法获得的 ), 能在低微浓度下有选择地抑制或影响它种生物功能的有机 物质 抗生素的生态影响主要表现在两方面 : 一方面将导致环境中耐药菌的出现, 并大量繁殖和传播, 最终人类健康造成影响 ; 另一方面通过影响水生生物 动植物 的营养传递方式和种群结构以及微生物的种群数量, 生态环境中固有的食物链将会 遭到破坏, 进而打破生态系统的平衡 本文介绍了采用在线 SPE 的方法测定水体中 11 种抗生素的含量 应用背景介绍 本文采用在线 SPE 富集净化的前处理 联用 LC-MS/MS 检测的方法, 联和层析应用精选联和层析应用精选层 与我们联系 联和层析贸易 ( 上海 ) 有限公司 上海市浦东新区向城路 19 号 10A 电话 : 传真 : 邮箱 :info@unichrom.cn 北京市昌平区回龙观镇 枫丹西路 2 号楼 315B 电话 : 传真 : 邮箱 :james-jiang@unichrom.cn 广州市天河区天坤三路和美街 11 号 1706 室 在优化后的实验条件下, 用基质空白水溶液配制系列浓度的标准溶液, 以每种目标物定量例子的峰面积与浓度来绘制标准曲线 实际应用与亮点 实现在线 SPE 和自动进样功能, 大大节省人力劳动 电话 : 邮箱 :gz@unichrom.cn 实现在线富集, 节省脱机 SPE 耗材, 节省成本 上一个样品在 LC-MS/MS 分析时, 自动完成下一个样品 SPE 柱的 再生 上样 净化 富集, 大大提高了系统的通量 联和层析应用精选联和层析应用精 和层析应用精选联和层析应用精选联和层析

2 1 实验仪器与耗材 1.1 AB QTRAP 5500 LC/MS/MS 1.2 联和层析双 SPE 柱串联多维 Online SPE 系统 HighSPEed 1.3 在线 SPE 柱 :HLB 2.1*20mm,2.5um; 种抗生素标准品 : 阿奇霉素, 红霉素, 罗红霉素, 克拉霉素, 林可霉素, 维吉尼霉素 M1, 维吉尼霉素 S1, 克林霉素, 奥美普林, 竹桃霉素, 替米考星, 纯度 95% 2 联和层析双 SPE 柱串联多维 Online SPE 系统 HighSPEed( 单柱在线 SPE) 2.1 进样量 :1mL 2.2 取样速度 :200uL/s 2.3 SPE 柱活化条件 : 用纯甲醇以 1.0mL/min 的流速活化 2min 2.4 SPE 柱平衡条件 : 用纯水以 1.0mL/min 的流速活化 1min 2.5 SPE 柱上样条件 : 用纯水以 2.0mL/min 的流速上样 3min 2.6 SPE 柱淋洗条件 : 用纯水以 0.5mL/min 的流速淋洗 1min 2.7 SPE 柱再生条件 : 用纯甲醇以 1.0mL/min 的流速再生 1min 2.8 管路清洗条件 : 用纯甲醇以 1.0mL/min 的流速清洗 1min 联和层析应用精选联和层析应用精选层 和层析应用精选联和层析应用精选联和层析联和层析应用精选联和层析应用精

3 3 色谱 - 质谱条件 3.1 色谱柱 :Kineter 50*3.0mm 2.6um; 3.2 流动相 :A 为 0.1% 甲酸,5mmoL/L 甲酸铵水溶液,B 为乙腈 ; 3.3 流动相洗脱程序 : 时间 (min) 流速 (ml/min) 表 1 液相色谱流动性梯度洗脱程序 0.1% 甲酸 /5mmoL 甲酸铵水溶液 (%) 乙腈 (%) 备注 : 在流动相中加入适量甲酸和甲酸铵可以增加抗生素的保留, 并改善峰形, 促进离子化 因此本实验 采用 O.1% 甲酸和 5 mmol/l 甲酸铵混合溶液和乙腈作为流动相, 大部分化合物都得以较好分离, 峰形良好 3.4 质谱条件 : 电喷雾电离源 (ESI), 多反应监测 (MRM) 离子模式,11 种抗生素定量离子对 裂解电压 碰撞能量见表 2 表 2 11 种抗生素的相关质谱参数 化合物名称离子对 (m/z) 裂解电压 (v) 碰撞能量 (v) 联和层析应用精选联和层析应用精选层 替米考星 Tilmicosin 竹桃霉素 Oleandomycin 红霉素 Erythromycin 林可霉素 Lincomycin 869.5/ / / / / / /126.0 克林霉素 Clindamycin 407.2/ / / 罗红霉素 Roxithromycin 阿奇霉素 Azithromycin 维吉尼霉素 M1 VirginiamycinsM1 维吉尼霉素 S1 VirginiamycinsS1 克拉霉素 Clarithromycin 奥美普林 Ometoprim 837.5/ / / / / / / / / / / / 联和层析应用精选联和层析应用精 和层析应用精选联和层析应用精选联和层析

4 4 试验图谱 图 1 11 种抗生素标准曲线以及线性汇总图 联和层析应用精选联和层析应用精选层 图 2 阿奇霉素标准曲线以及 MRM 图 联和层析应用精选联和层析应用精 和层析应用精选联和层析应用精选联和层析

5 图 3 红霉素标准曲线图以及 MRM 图 联和层析应用精选联和层析应用精选层 图 4 罗红霉素标准曲线图以及 MRM 图 和层析应用精选联和层析应用精选联和层析联和层析应用精选联和层析应用精

6 图 5 克拉霉素标准曲线图以及 MRM 图 联和层析应用精选联和层析应用精选层 图 6 林可霉素标准曲线图以及 MRM 图 和层析应用精选联和层析应用精选联和层析联和层析应用精选联和层析应用精

7 图 7 维吉尼霉素 M1 标准曲线图以及 MRM 图 联和层析应用精选联和层析应用精选层 图 8 维吉尼霉素 S1 标准曲线图以及 MRM 图 和层析应用精选联和层析应用精选联和层析联和层析应用精选联和层析应用精

8 图 9 奥美普林标准曲线图以及 MRM 图 联和层析应用精选联和层析应用精选层 图 10 竹桃霉素标准曲线图以及 MRM 图 和层析应用精选联和层析应用精选联和层析联和层析应用精选联和层析应用精

9 图 11 克拉霉素标准曲线图以及 MRM 图 联和层析应用精选联和层析应用精选层 图 12 替米考星标准曲线图以及 MRM 图 和层析应用精选联和层析应用精选联和层析联和层析应用精选联和层析应用精

10 Intensity, cps XIC of +MRM (60 pairs): / Da ID: LKMS1 from Sample 3 (std1-1ppt) of test.wiff (Turbo Spray) 1.4e5 1.3e5 1.2e5 1.1e5 1.0e5 9.0e4 8.0e4 7.0e4 6.0e4 5.0e4 4.0e4 3.0e4 2.0e4 1.0e 图 种抗生素混标 (1.0ng/L)MRM 图 图 种抗生素混标 (5.0ng/L)MRM 图 Max. 2.3e4 cps Time, min 联和层析应用精选联和层析应用精选层 XIC of +MRM (60 pairs): / Da ID: LKMS1 from Sample 4 (std2-5ppt) of test.wiff (Turbo Spray) 6.4e5 6.0e5 5.5e5 5.0e5 Intensity, cps 4.5e5 4.0e5 3.5e5 3.0e5 2.5e5 2.0e5 1.5e5 1.0e5 5.0e Max. 1.2e5 cps Time, min 联和层析应用精选联和层析应用精 和层析应用精选联和层析应用精选联和层析

11 Intensity, cps XIC of +MRM (60 pairs): / Da ID: LKMS1 from Sample 9 (std7-50ppt) of test.wiff (Turbo Spray) 5.9e6 5.5e6 5.0e6 4.5e6 4.0e6 3.5e6 3.0e6 2.5e6 2.0e6 1.5e6 1.0e6 5.0e 图 种抗生素混标 (50.0ng/L)MRM 图 图 16 某空白水样 MRM 图 Max. 1.3e6 cps Time, min 联和层析应用精选联和层析应用精选层 XIC of +MRM (60 pairs): / Da ID: LKMS1 from Sample 19 (kb4) of test.wiff (Turbo Spray) Max cps Intensity, cps Time, min 联和层析应用精选联和层析应用精 和层析应用精选联和层析应用精选联和层析

12 Intensity, cps XIC of +MRM (60 pairs): / Da ID: LKMS1 from Sample 11 (jb1) of test.wiff (Turbo Spray) 3.8e6 3.6e6 3.4e6 3.2e6 3.0e6 2.8e6 2.6e6 2.4e6 2.2e6 2.0e6 1.8e6 1.6e6 1.4e6 1.2e6 1.0e6 8.0e5 6.0e5 4.0e5 2.0e 图 17 某空白水样 11 种抗生素加标 (30.0ng/L)MRM 图 图 18 某基质阳性水样 MRM 图 Max. 1.7e6 cps Time, min 联和层析应用精选联和层析应用精选层 XIC of +MRM (60 pairs): / Da ID: LKMS1 from Sample 20 (zjkb-1) of test.wiff (Turbo Spray) 3.8e4 3.6e4 3.4e4 3.2e4 3.0e4 2.8e4 Intensity, cps 2.6e4 2.4e4 2.2e4 2.0e4 1.8e4 1.6e4 1.4e4 1.2e4 1.0e Max. 2.1e4 cps Time, min ( 其中检出阿奇霉素 :0.4ng/L, 红霉素 0.83ng/L, 克林霉素 0.38ng/L) 联和层析应用精选联和层析应用精 和层析应用精选联和层析应用精选联和层析

13 5 重复性 检出限 回收率 Compounds 表 3 某空白水样加标 11 种抗生素的回收试验 (n=6) Linear Range(ng/L ) Correlation coefficients Added(n g/l) Recoverie s(%) RSD (%) LOD(ng/ Azithromycin Clarithromycin Erythromycin Lincomycin Roxithromycin VirginiamycinsM 1 VirginiamycinsS Ometoprim Clindamycin Oleandomycin Tilmicosin 联和层析应用精选联和层析应用精选层 本文采用在线 SPE 富集净化的前处理 联用 LC-MS/MS 检测的方法, 在优化后的实验条件下, 用基质空白水 溶液配制系列浓度的标准溶液, 以每种目标物定量例子的峰面积与浓度来绘制标准曲线 从表 3 可以看出 11 种抗生 素的在对应的范围内线性关系良好, 相关系数均大于 0.995; 并对某空白水样进行 6 次加标回收实验, 回收率在 85%-110% 之间, 相对标准偏差皆小于 10%, 对应的 11 种抗生素检出限 (LOD, 按 S/N=3 计算 ) 在 ng/L 之 间, 说明方法的灵敏度和精密度较好, 适合水样中多种抗生素残留的同时检测 L) 和层析应用精选联和层析应用精选联和层析联和层析应用精选联和层析应用精

g ml 10% ph 色谱条件 kinetex C μm 100 A 4. 6 mm 150 mm 25 5 μl A B 10 mmol /L ml /min

g ml 10% ph 色谱条件 kinetex C μm 100 A 4. 6 mm 150 mm 25 5 μl A B 10 mmol /L ml /min 25 4 2013 8 监测技术 5 1 2 1 ( 1. 江苏省疾病预防控制中心, 江苏南京 210009; 2. 南京医科大学第二附属医院, 江苏南京 210029) 5 Phenomenex kinetex C 18 2. 6 μm 4. 6 mm 150 mm 10 mmol /L ph 2. 5 + 60 40 DAD 280 nm 5 20. 0 mg /L ~ 100 mg /L 0.

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