(GB ) 呋喃苯烯酸钠的测定 (GB/T ) 鱼肉中氯霉素 氟苯尼考 甲砜霉素的测定 (GB/T ) 鱼肉中孔雀石绿和结晶紫的测定 (GB/T ) 水产品中孔雀石绿和结晶紫残留

Transcription

1 目录 动物源性食品中碘醚柳胺残留量的分析方法... 3 (DB21/ ) 动物源性食品中金刚烷胺的检测 SPE-LC-MS/MS 法... 8 ( 农业部 1025 号公告 ) 畜禽肉中甲硝唑 地美硝唑残留量检测 LC-MS/MS 法 (GB ) 动物源食品中氯霉素类药物的 LC-MS/MS 定性定量测定方法 (GB/T ) 畜禽肉中卡巴氧残留量检测 LC-MS/MS 法 畜禽肉中替米考星残留量检测 (LC-MS/MS 法 ) (GB/T ) 畜禽肉中头孢噻呋残留量检测 LC-MS/MS 法 (GB ) 猪肉中阿维菌素残留量检测 LC-MS/MS 法 (GB/T ) 猪肉中地塞米松残留量检测 LC-MS/MS 法 (GB/T ) 猪肉中磺胺类药物残留量检测 LC-MS/MS 法 (DB 51T ) 猪肉中己烯雌酚残留量检测 LC-MS/MS 法 (GB/T ) 猪肉中林可霉素残留量检测 LC-MS/MS 法 (GB/T ) 猪肉中氟喹诺酮类药物残留量检测 LC-MS/MS 法 (GB ) 猪肉中氯羟吡啶残留量检测 LC-MS/MS 法 (GB/T ) 猪肉 鸡肉中四环素类药物残留量检测 LC-MS/MS 法 ( 农业部 1025 号公告 ) 动物源食品中 9 种 β- 受体激动剂残留量的测定 LC-MS/MS 法 (SN/T ) 猪肉中泰乐菌素残留量检测 LC-MS/MS 法 (GB/T ) 猪肉中四种硝基呋喃类代谢物残留量的测定 LC-MS/MS 法 (GB/T ) 猪肉中四种硝基呋喃类代谢物残留量的测定 LC-MS/MS 法 水产品 进口肉中土霉素 四环素 金霉素含量检测方法 动物源食品中玉米赤霉醇类药物残留检测 (LC-MS/MS 法 ) 动物尿液中 3 种 β- 受体激动剂残留量的测定 (LC-MS/MS 法 ) 水产品中氯霉素残留量的测定 (GC 法 ) 猪肉中喹乙醇残留量检测 (LC-MS/MS 法 ) ( 农业部 1031 号公告 ) 动物源性食品中糖皮质激素类药物的液质实验方法 (GB/T ) 蜂蜜中 19 种喹诺酮类药物残留量的测定方法 (LC-MS/MS 法 ) 氘代同位素内标测定鱼贝类肌肉中 β- 雌二醇残留 (GC-MS) 法 奶粉中雌酮 雌二醇 醋酸甲地孕酮 醋酸氯地孕酮的检测 鸡蛋中氟虫腈的分析方法 鸡肉中全氟辛烷磺酸和全氟辛酸的分析方法 (GBT ) 蜂王浆中土霉素, 金霉素, 四环素, 强力霉素残留量测定 (GB/T ) 蜂蜜中大环内酯类药物残留量测定 ( 农业部 1025 号公告 和农业部 1063 号公告 ) 猪尿中 14 种 β- 受体激动剂残留的测定

2 (GB ) 呋喃苯烯酸钠的测定 (GB/T ) 鱼肉中氯霉素 氟苯尼考 甲砜霉素的测定 (GB/T ) 鱼肉中孔雀石绿和结晶紫的测定 (GB/T ) 水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定 标准 鱼肉中 5 种硝基咪唑类药物的分析方法 牛奶中甲砜霉素的分析方法 (SN/T ) 猪肉中齐帕特罗残留量的测定 动物性食品中噻苯达唑 氟苯达唑及其标示残留物残留量的测定 PCX/Silica 用于羊肾中三氯苯唑及代谢物残留量的检测

3 动物源性食品中碘醚柳胺残留量的分析方法 案例来源 : 博纳艾杰尔 ; 应用编号 :AF10102 应用简介 本实验采用固相萃取结合高效液相色谱建立了一种动物源性食品中碘醚柳胺残留量的检测方法 牛 羊组织样品经乙腈提取,Cleanert PAX 固相萃取柱净化后采用 Venusil Durashell C18 色谱柱 ( mm,5 µm,100 Å) 分离, 乙腈..水 ( 用磷酸调 ph 至 2.5) = 为流动相洗脱,282 nm 波长下检测, 外标法定量, 取得了较好的实验结果 结果表明 : 该方法简单快速, 准确度高, 当碘醚柳胺的加标量在 15 μg/kg ~ 500 μg/kg 范围内时, 回收率在 64% ~ 101% 之间, 满足检测要求 前言 碘醚柳胺 (rafoxanide,cas 号 : ) 又名重碘柳胺, 为灰白色至棕色粉末 在丙酮中溶解, 在氯仿或乙酸乙酯中略溶, 在甲醇中微溶, 在水中不溶 相对分子质量为 , 结构式如图 1 所示 碘醚柳胺属卤化水杨酰苯胺类吸虫药, 它主要是通过阻断肝片吸虫的氧化磷酸化过程, 而使虫体麻痹 死亡, 达到杀虫的目的, 在世界范围内被广泛用于牛羊的肝片吸虫病的治疗, 疗效显著 有研究表明该物质可致小鼠畸变, 欧盟也对动物源性食品中碘醚柳胺的临时性最大残留量做了规定 因此通过有效的实验技术手段, 对动物源性食品中碘醚柳胺进行监控, 具有重要意义 本实验采用固相萃取结合高效液相色谱法建立了一种快速 有效的牛 羊组织中碘醚柳胺的检测方法 仪器 试剂与材料 主要仪器设备 Agilent 1260 高效液相色谱仪 ; 博纳艾杰尔 12 位负压 SPE 装置 试剂材料

4 碘醚柳胺标准品 ( 纯度 99%), 乙腈溶解 ; 乙腈 甲酸为色谱纯 ; 实验用水为超纯水 ; 1% 甲酸酸化乙腈 : 量取甲酸 1 ml, 加乙腈溶解并稀释至 100 ml, 摇匀 ; 一次性无菌注射器 ;Nylon 针式过滤器 (0.45 μm, 直径 13 mm); Cleanert PAX 固相萃取柱 :150 mg/6 ml 样品制备样品提取 准确称取绞碎的样品 10 g 于 50 ml 离心管中, 加乙腈 20 ml,10000 r/min 涡旋均质 1 min,4000 r/min 离心 5 min, 移取上清液 残渣再用 10 ml 乙腈重复提取一次, 合并上清 液 样品净化 Cleanert PAX 固相萃取小柱先用 5 ml 乙腈活化, 之后将上述提取液以 1 ml/min 的流 速全部上样过柱 用 5 ml 乙腈淋洗小柱, 真空抽干, 用 10 ml 1% 甲酸酸化乙腈洗脱并收 集 洗脱液于 40 下氮气吹干, 残留物用乙腈溶解并定容至 0.5 ml, 过 0.45 μm 滤膜, 待 测 注 : 上述操作步骤可在 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪上完成 色谱条件 色谱柱 :Durashell C18,5 μm,100 Å, mm; 流动相 : 磷酸水溶液 (PH 2.5)..乙腈 = ; 柱温 :30 ; 波长 :282 nm; 进样量 :20 μl; 结果与讨论 线性关系 分别配制浓度为 0.05 μg/ml 0.1 μg/ml 0.5 μg/ml 1 μg/ml 10 μg/ml 的碘醚柳胺标 准工作液, 按上述液相色谱条件检测, 测定结果经线性回归, 线性范围是 μg/ml, 回归方程 相关系数详见表 1 检测方法稳定性 使用 15 μg/ml 的标准溶液, 连续进样 6 针, 记录每针碘醚柳胺的保留时间和峰面积, 计算其相对标准偏差, 结果见表 2 实验结果 从表 3 可知, 采用 Cleanert PAX 固相萃取小柱结合高效液相色谱法检测牛肉 牛肾 羊肉 羊肾和羊油基质中的碘醚柳胺, 当牛肉基质中加标浓度在 15 μg/kg ~ 60 μg/kg 时, 回 收率在 91% ~ 101% 之间 ; 牛肾基质中加标浓度在 20 μg/kg ~ 80 μg/kg 时, 回收率在 76% ~ 81% 之间 ; 羊肉基质中加标浓度在 100 μg/kg ~ 400 μg/kg 时, 回收率在 74% ~ 95% 之间 ; 羊 肾基质中加标浓度在 75 μg/kg ~ 300 μg/kg 时, 回收率在 78% ~ 92% 之间 ; 羊油基质中加标 浓度在 100 μg/kg ~ 500 μg/kg 时, 回收率在 64% ~ 77% 之间 ; 且各基质的最低定量限均小于 欧盟规定的最大残留限量 (MRL), 满足检测要求

5

6

7 结论 本实验采用 Cleanert PAX 固相萃取小柱结合高效液相色谱建立了动物源性食品中碘醚柳胺的检测方法, 并采用外标法定量, 当碘醚柳胺的加标量在 15 μg/kg ~ 500 μg/kg 时, 回收率在 64% ~ 101% 之间, 且该方法对样品基质中的碘醚柳胺的定量限小于欧盟的 MRL 要求, 满足检测要求 相关标准品 订货号中文名称英文名称 CAS# 1ST5566 碘醚柳胺 ( 雷复尼特 ) Rafoxanide

8 (DB21/ ) 动物源性食品中金刚烷胺的检测 SPE-LC- MS/MS 法 案例来源 : 博纳艾杰尔 ; 应用编号 :AF10025 金刚烷胺是由金刚烷与溴进行卤化, 再与乙腈在硫酸中反应, 生成酰胺, 再用碱水解而得 它可用于亚洲甲 - Ⅱ 型流感的预防和早期治疗, 与抗菌素合用可治败血症和病毒性肺炎, 并有退烧作用 也有抗震颤麻痹的作用, 可适用于帕金森病的治疗 根据其药理作用, 国内现在主要将金刚烷胺用于鸡 猪流感的预防和早期治疗, 及猪传染性胃肠炎的防治 鉴于金刚烷胺会在动物组织中有残留, 所以政府有关部门开始禁止使用金刚烷胺等防治高致病性禽流感等一类病原微生物引起的病毒性疫病 我国对于动物源性食品中金刚烷胺残留含量的相关研究报道属于空白, 也未曾制定或立项过国家标准 行业标准, 国际上也无特定限量要求及相应检测方法 本文采用甲醇 -1% 三氯乙酸萃取 Cleanert PCX 固相萃取净化 液相色谱 - 质谱 / 质谱 (LC-MS/MS) 技术建立动物源性食品中的金刚烷胺残留量的分析方法 1. 样品提取 准确称取 2 g( 精确至 0.01 g) 试样至 50 ml 离心管中, 加入 10 ml 甲醇 -1% 三氯乙酸 (50+50,v/v) 溶液, 旋涡 30 s, 超声 30 min,8000 r/min 离心 10 min, 上清液用一次性专用过 滤器注射器转移至 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪上样管中,Cleanert PCX 固相萃取柱也置 入萃取仪中待净化 2. 净化方法 设置 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪程序如下 :3 ml 甲醇,3 ml 水活化 ; 加样 5 ml; 淋洗 :3 ml 2% 盐酸,3 ml 甲醇淋洗 ; 空气吹干小柱, 洗脱 :5 ml 氨水 - 甲醇 - 异丙醇溶液 ( ,v/v/v) 洗脱并收集 以上步骤控制流速均为 1 ml/min 取出收集管, 在 50 水浴 中氮气吹干, 加 1.0 ml 甲醇 - 水 - 甲酸溶液 ( ,v/v /v) 溶解, 用 0.22 μm 滤器过滤后 供 LC-MS/MS 测定

9 3. 检测方法 3.1 色谱条件色谱柱 :Venusil ASB C mm,3 μm,150 Å; 流速 :200 μl/min; 柱温 :30 ; 进样量 :5 μl; 3.2 质谱条件电离模式 : 电喷雾电离正模式 ; 检测方式 : 多反应监测 (MRM); 离子源温度 (TEM):550,Curtian Gas: 10, 化合物名称 Ion Source Gas 1: 70,Ion Source Gas 2:75 4. 实验结果 表 2 线性和检出限 : 物质名称 保留时间 (min) 平均回收率 RSD(%) 金刚烷胺 % 8.37

10 5. 关标准品 订货号中文名称英文名称 CAS# 1ST10021 金刚烷胺 Amantadine 货信息 订货号产品名称规格包装 SPE-40 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪 4 通道 24 位 CX0603 Cleanert PCX 60 mg/3 ml, 50 支 /pk VS Venusil ASB C mm, 3 μm, 150 Å

11 AS G 针式过滤器 (PTFE,Prefilter 双膜 ) 1 μm, 直径 25 mm, 100/pk AS 针式过滤器 (Nylon) 0.22 μm, 直径 13 mm, 200/pk ZSQ-5ML 一次性无针头注射器 5 ml,100/pk ml 样品瓶 ml 样品瓶盖 短螺纹透明带书写 mm, 100/pk 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫,45 ShoreA 1.0 mm, 100/pk AH232-4 异丙醇 4 4 L/ 瓶 S230-4 甲醇 4 4 L/ 瓶

12 ( 农业部 1025 号公告 ) 畜禽肉中甲硝唑 地美硝唑残 留量检测 LC-MS/MS 法 案例来源 : 博纳艾杰尔 ; 应用编号 :AF10027 硝基咪唑类 (Nitroimidazoles) 药物是带有硝基的咪唑化合物, 其性状为白色或淡黄色 结晶, 弱碱性, 能和酸结合成盐, 遇光易分解, 易溶于甲醇, 微溶于水, 主要用于预防和治 疗家禽的滴虫病 猪的出血性下痢及厌氧菌感染, 并具有促生长作用, 但是该类药物对哺乳 动物具有致 癌 致畸 致突变作用和遗传毒性 因此欧盟 北美和我国等都禁止了硝基咪唑在食品 动物中的使用 农业部 1025 号公告 规定了在畜禽肉中硝基咪唑类药物残留方法检出 限为 1 μg/kg 1. 样品提取 称取 2.00 g( 精确到 0.01 g) 均质好的样品, 置于 50.0 ml 离心管中, 加入 15.0 ml 乙酸 乙酯, 涡旋振荡 2 min,4000 rpm 离心 5 min, 上清液转移至 80 ml 顶空瓶中, 残渣用 15.0 ml 乙酸乙酯重复提取一次, 合并两次提取液, 加入 4 g 氯化钠和 20.0 ml 正己烷, 振荡器 上振荡 10 min,4200 rpm 离心 10 min, 小心吸取下层乙酸乙酯层于另一离心管中, 氮气吹 至近干, 用 6 ml 0.1 mol/l 盐酸溶液溶解残渣备用 2. 净化方法 先将 Cleanert PCX (60 mg/3 ml) 小柱分别用 2.0 ml 甲醇 2.0 ml 0.1 mol/l 盐酸水溶液 活化平衡, 然后样品残液过柱 ( 流速控制在 2~3 ml/min), 弃去滤液 ; 再用 1.0 ml 0.1 mol/l 盐酸水溶液 1.0 ml 甲醇和 1.0 ml 甲醇 - 水 (1:9,v/v) 淋洗 SPE 柱, 弃去淋洗液, 最后用 3.0mL 甲醇 -5% 氨水 (3:2,v/v) 洗脱于锥形试管中,40 氮气吹干 用 1 ml 甲醇 - 水溶液 (1:9,v/v) 溶解残留物, 过 0.22 μm 尼龙针式过滤器后待测 3. 检测条件 色谱条件色谱柱 :Venusil ASB C18, mm,5 μm,150 Å; 流动相 :A 相 - 水,B 相 - 乙腈 柱温 :35 ; 进样量 :5 μl;

13 表 1 液相色谱梯度洗脱条件 : 时间 (min) 流速 (ml/min) A/% B/% 质谱条件离子源 : 电喷雾离子源电喷雾电压 :5500 V 气帘气压力 :13 psi 离子源温度 :600 Q1 Q3 均为单位分辨率质谱参数 ( 见表 2) 扫描方式 : 正离子扫描雾化气压力 :55 psi 辅助气压力 :60 psi 采集方式 : 多反应监测 (MRM) 4. 实验结果 由表 3 可知, 采用固相萃取结合液相色谱 - 串联质谱法检测甲硝唑和地美硝唑, 加标量 为 1.0 μg/kg 加标回收率为 90%~100%, 能够满足检测要求 由图 1 可看出经 Cleanert PCX

14 固相萃取柱净化, 采用 Venusil ASB C18 色谱柱检测能够使甲硝唑和地美硝唑得到良好的分 离, 且两种物质峰形良好, 保留时间稳定 表 3 硝基咪唑类药物加标回收实验结果 (n=3): 图 1 硝基咪唑类样品加标 1.0μg/kg 液相色谱 / 串联质谱质量色谱图 结论 : 本实验建立了硝基咪唑类残留量检测的 LC-MS/MS 检测方法, 并结合固相萃取技术对禽畜类肉中硝基咪唑类药物的残留量进行了测定 对于加标量为 1 μg/kg 的样品进行了检测, 回收率在 90%~100%, 符合国标要求, 固相萃取方法稳定并且色谱柱重现性良好, 说明本方法能够用于检测动物源性食品中的硝基咪唑残留量 5. 标准品 订货号 中文名称 英文名称 CAS# 1ST5525 二甲硝咪唑 ; 地美硝唑 Dimetridazole ST5554 甲硝唑 Metronidazole

15 6. 订货信息 订货号 产品名称 规格包装 VS Venusil ASB C18 5 μm,150 Å, mm CX0603 Cleanert PCX 60 mg/3 ml,50/pk SH-100 保护柱套 适用于 mm 和 mm VS S 直联式保护柱芯 5 μm,150 Å, mm ml 样品瓶 短螺纹透明带书写 mm,100/pk ml 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫,45.Shore A 1.0 mm,100/pk AS 针式过滤器 (Nylon) 13 mm,0.22 μm,200/pk LZSQ-2ML 一次性注射器 2 ml 两件式无针头,100/pk 乙腈 UV 级 4 L/ 瓶, 色谱纯 S230-4 甲醇 4 L/ 瓶, 色谱纯

16 (GB ) 动物源食品中氯霉素类药物的 LC-MS/MS 定性定量测定方法 案例来源 : 博纳艾杰尔 ; 应用编号 :AF10026 氯霉素 (chloramphenicol,chloromycetin) 是由委内瑞拉链霉菌产生的抗生素 属广谱抑菌抗生素, 是治疗伤寒, 副伤寒的首选药, 治疗厌氧菌感染的特效药物之一, 其次用于敏感微生物所致的各种感染性疾病的治疗 用于治疗由伤寒杆菌 痢疾杆菌 大肠杆菌 流感杆菌 布氏杆菌 肺炎球菌等引起的感染 由于氯霉素可引起严重的毒副作用, 故临床仅用于敏感伤寒菌株引起的伤寒感染 流感杆菌感染 重症脆弱拟杆菌感染 脑脓肿 肺炎链球菌或脑膜炎球菌性脑膜炎, 同时对青霉素过敏的患者, 由于不良反应严重现用得越来越少 中国行业标准 SN/T 中规定其检测底限为 0.1 μg/kg (1) 样品提取 称取 5.0 g( 精确到 0.1 g) 粉碎好的样品, 置于 50 ml 离心管中, 加入 20 ml 乙酸乙酯, 在均质器中以 rpm 均质 30 s, 以 3000 rpm 离心 5 min, 定量滤纸漏斗加约 25 g 无水硫酸钠于浓缩瓶口, 将离心过的上层乙酸乙酯提取液由滤纸漏斗过滤至浓缩瓶中, 重复两次 合并滤液于 50 以下减压浓缩至近干, 用 4 ml 正己烷和 4 ml 水依次将残渣转移至 10 ml 玻璃离心管中,2000 rpm 涡旋混合 1 min,2000 rpm 离心 3 min, 弃去上层正己烷溶液, 再加入 4 ml 正己烷, 重复上述操作, 下层水层做待净化液 (2) 净化方法 先将 Cleanert C18 (500 mg/3 ml) 小柱分别用 5 ml 甲醇和 5 ml 水平衡, 然后将待净化液过柱 ( 流速控制在 2~ 3 ml/min),10 ml 水两次洗涤离心瓶, 弃去滤液 ; 再用 5 ml 甲醇 : 水 (2:8, v/v) 溶液淋洗, 弃去淋洗液, 将小柱负压抽干 ; 最后用 6 ml 甲醇洗脱 收集洗脱液于 40 氮气吹近干,5 ml 水复溶, 过 0.22 μm 滤膜后待测 (3) 检测方法 3.1 色谱条件色谱柱 :Venusil MP C18, mm,2.5 μm,100 Å; 流动相 :A 相 - 水,B 相 - 乙腈柱温 :35 ; 进样量 :5 μl;

17 表 1 液相色谱梯度洗脱条件 : 时间 (min) 流速 (ml/min) A/% B/% 质谱条件离子源 : 电喷雾离子源电喷雾电压 :-5500 V 气帘气压力 :12 psi 离子源温度 :600 质谱参数 ( 见表 2) 扫描方式 : 负离子扫描雾化气压力 :60 psi 辅助气压力 :50 psi 采集方式 : 多反应监测 (MRM)Q1 Q3 均为单位分辨率 (4) 实验结果 由表 3 可知, 采用固相萃取结合液相色谱 - 串联质谱法检测氯霉素, 加标量为 1.0 μg/kg 10 μg/kg 加标回收率在 70%~120% 之间,RSD 值小于 10%, 能够满足检测要求 由图 1 和图 2 可看出经 Cleanert C18 固相萃取柱净化, 采用 Venusil MP C18 色谱柱检测得到的氯霉素峰形良好, 且保留时间稳定

18 结论 : 本实验建立了动物源性食品中氯霉素残留的 LC-MS/MS 检测方法, 并结合固相萃取技 术对氯霉素的残留量进行了测定 对于加标量为 1 μg/kg 10 μg/kg 的样品进行了检测, 回收 率在 70%~120%, 符合国标要求, 固相萃取方法稳定并且色谱柱重现性良好, 说明本方法能 够用于检测动物源性食品中的氯霉素残留

19 (5) 相关标准品 订货号中文名称英文名称 CAS# 1ST7001 氯霉素 ( 左霉素 (CAP)) Chloramphenicol (6) 订货信息 : 订货号 产品名称 规格包装 VA Venusil MP C μm,100 Å, mm S Cleanert S C mg/3 ml,50/pk SH-100 保护柱套 适用于 mm 和 mm VA S 直联式保护柱芯 2.5 μm,100 Å, mm ml 样品瓶 短螺纹透明带书写 mm,100/pk ml 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔 垫,45.Shore A 1.0 mm,100/pk AS 针式过滤器 (Nylon) 单膜,13 mm,0.22 μm,200/pk LZSQ-2ML 一次性注射器 2 ml 两件式无针头,100/pk 乙腈 UV 级 4 L/ 瓶, 色谱纯 AH216-4 正己烷 HPLC 4 L/ 瓶, 色谱纯 S230-4 甲醇 4 L/ 瓶, 色谱纯

20 (GB/T ) 畜禽肉中卡巴氧残留量检测 LC-MS/MS 法 案例来源 : 博纳艾杰尔 ; 用编号 :AF10028 前言 卡巴氧又名卡巴多 卡巴得 痢立清 喹肼脂, 是喹恶啉类生长促进剂中代性品种 卡巴氧具有广谱抗菌能力, 对革兰氏阴性菌 ( 例如大肠杆菌 沙门氏杆菌 志贺氏菌及变形杆菌 ) 特别敏感 ; 对革兰氏阳性菌 ( 例如葡萄球菌 链球菌 ) 的最小抑菌浓度也优于金霉素, 因而卡巴得能有效控制猪赤痢脏乱细菌性下痢 卡巴得具有蛋白同化作用, 对促进猪的生长及改善饲料转化率具有显著的效果 GB/T 规定了在畜禽肉中卡巴氧方法检出限为 1 μg/kg (1) 样品制备 称取 5.00 g( 精确到 0.01 g) 均质好的样品, 置于 50.0 ml 离心管中, 加入 5 g 中性氧化铝加入 25.0 ml 乙腈 - 乙酸乙酯 (1:1,v/v), 用均质器均质 5 min,5000 rpm 离心 5 min 取上清液移至另一干净的 50 ml 离心管中, 加入 5 g 无水硫酸钠和 10.0 ml 正己烷, 振荡器上振荡 2 min,5000 rpm 离心 5 min, 将下层清液转移至鸡心瓶中, 重复上述步骤合并两次清液 40 减压旋转蒸发至近干, 准确加入 1.0 ml 0.1% 甲酸水溶液定容, 过 0.22 μm 滤膜, 滤液供高效液相色谱 - 串联质谱仪测定 (2) 检测方法 2.1 色谱条件色谱柱 :Venusil MP C18, mm,2.5 μm,100 Å; 流动相 :A 相 -0.1% 甲酸水,B 相 - 乙腈柱温 :35 ; 进样量 :5 μl; 梯度洗脱 : 见表 1 时间 (min) 流速 (ml/min) A/% B/%

21 质谱条件离子源 : 电喷雾离子源电喷雾电压 :5500 V 气帘气压力 :13 psi 离子源温度 :400 Q1 Q3 均为单位分辨率质谱参数 ( 见表 2) 扫描方式 : 正离子扫描雾化气压力 :55 psi 辅助气压力 :40 psi 采集方式 : 多反应监测 (MRM) (3) 实验结果 由表 3 可知, 采用液相色谱 - 串联质谱法检测卡巴氧, 加标量为 1.0 μg/kg, 回收率大于 85%,RSD 值为 6.84%, 能够满足检测要求 由图 1 可看出 Venusil MP C18 色谱柱对卡巴氧有良好的保留作用, 且卡巴氧峰形良好, 保留时间稳定

22 (4) 结论 本实验建立了卡巴氧残留量检测的 LC-MS/MS 检测方法, 并结合固相萃取技术对禽畜类肉中卡巴氧的残留量进行了测定 对于加标量为 1 μg/kg 的样品进行了检测, 回收率大于 85%, 符合国标要求, 固相萃取方法稳定并且色谱柱重现性良好, 说明本方法能够用于检测动物源性食品中的卡巴氧残留量 (5) 相关标准品 订货号中文名称英文名称 CAS# 1ST7127 卡巴氧 ( 卡巴多 ) Carbadox; CBX (6) 订货信息 订货号 产品名称 规格包装 VA Venusil MP C μm,100 Å, mm AL0500-N 中性氧化铝 100~200 目 SH-100 保护柱套 适用于 mm 和 mm VA S 直联式保护柱芯 2.5 μm,100 Å, mm ml 样品瓶 短螺纹透明带书写 mm,100/pk ml 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫,45.Shore A 1.0 mm,100/pk

23 AS 针式过滤器 (Nylon) 13 mm,0.22 μm,200/pk LZSQ-2ML 一次性注射器 2 ml 两件式无针头,100/pk 乙腈 UV 级 4 L/ 瓶, 色谱纯 AH216-4 正己烷 HPLC 4 L/ 瓶, 色谱纯

24 畜禽肉中替米考星残留量检测 (LC-MS/MS 法 ) 案例来源 : 博纳艾杰尔 ; 应用编号 :AF10029 替米考星 (Tilmicosin) 是一种较新的以泰乐菌素为前体半合成的畜禽专用大环内酯类抗生素,20 世纪 80 年代由英国 Elanco 动物保健品公司首先开发成功, 主要用于牛 奶牛 山羊 绵羊 猪 鸡等动物由敏感菌引起的感染性疾病, 特别是畜禽呼吸道疾病如猪放线杆菌性胸膜肺炎 牛溶血性及多杀性巴氏杆菌病和鸡支原体病, 同时对奶牛乳房炎主要菌系具有良好的抗菌作用 GB/T 规定了在畜禽肉中替米考星方法检出限为 1 μg/kg (1) 样品提取 称取 5.00 g( 精确到 0.01 g) 均质好的样品, 置于 50.0 ml 离心管中, 加入 15.0 ml 乙腈, 用均质器均质 1 min, 在振荡器上振荡 10 min,4200 rpm 离心 5 min, 取上清液加入 2 g 氯化钠和 10.0 ml 正己烷, 振荡器上振荡 10 min,4200 rpm 离心 10 min, 小心吸取中间乙腈层 12.0 ml 于另一离心管中, 氮气吹至近干 (2) 净化方法 先将 Cleanert PEP-2 (500 mg/6 ml) 小柱分别用 10.0 ml 甲醇 10.0 ml 水 5.0 ml 2% 氯化钠溶液和 5.0 ml 磷酸二氢铵缓冲溶液活化平衡, 然后用 7.0 ml 磷酸二氢铵缓冲溶液分两次溶解残液过柱 ( 流速控制在 2~3 ml/min), 弃去滤液 ; 再用 10.0 ml 水和 5.0 ml 甲醇 - 水 (2:3. v/v) 淋洗 SPE 柱, 弃去淋洗液, 将小柱负压抽干 ; 最后用 10.0 ml 甲醇洗脱于锥形试管中, 45 氮气吹干 用 1mL 0.1% 乙酸铵水溶液溶解残留物, 过 0.22 μm 滤膜后待测 (3) 检测方法 3.1 色谱条件色谱柱 :Venusil ASB C18, mm,5 μm,150 Å; 流动相 :A 相 -10 mm 乙酸铵溶液,B 相 - 乙腈柱温 :35 ; 进样量 :5 μl; 梯度洗脱 : 见下表 时间 (min) 流速 (ml/min) A/% B/%

25 质谱条件离子源 : 电喷雾离子源电喷雾电压 :5500 V 气帘气压力 :13 psi 离子源温度 :600 Q1 Q3 均为单位分辨率质谱参数 ( 见表 2) 扫描方式 : 正离子扫描雾化气压力 :60 psi 辅助气压力 :65 psi 采集方式 : 多反应监测 (MRM) (4) 实验结果 由表 3 可知, 采用固相萃取结合液相色谱 - 串联质谱法检测替米考星, 加标量为 1.0 μg/kg 20.0 μg/kg 加标回收率在 90%~100% 之间,RSD 值小于 10%, 能够满足检测要求 由图 1 和图 2 可看出经 Cleanert PEP-2 固相萃取柱净化, 采用 Venusil ASB C18 色谱柱检测得到的替米考星峰形良好, 且保留时间稳定 表 3 替米考星加标回收实验结果 (n=3):

26 图 1 替米考星样品加标 1.0 μg/kg 液相色谱 / 串联质谱质量色谱图 : 图 2 替米考星样品加标 20.0 μg/kg 液相色谱 / 串联质谱质量色谱图 : 结论 : 本实验建立了替米考星残留量检测的 LC-MS/MS 检测方法, 并结合固相萃取技术对禽畜类肉中替米考星的残留量进行了测定 对于加标量为 1.0 μg/kg 20.0 μg/kg 的样品进行了检测, 回收率在 90%~100%, 符合国标要求, 固相萃取方法稳定并且色谱柱重现性良好, 说明本方法能够用于检测动物源性食品中的替米考星残留量 (5) 相关标准品 订货号 中文名称 英文名称 CAS# 1ST7805 替米考星 Tilmicosin

27 (6) 订货信息 订货号 产品名称 规格包装 VS Venusil ASB C18 5 μm,150 Å, mm PE Cleanert PEP mg/6ml,30/pk SH-100 保护柱套 适用于 mm 和 mm VS S 直联式保护柱芯 5 μm,150 Å, mm ml 样品瓶 短螺纹透明带书写 mm,100/pk ml 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫,45.Shore A 1.0 mm,100/pk A S 针式过滤器 (Nylon) 13 mm,0.22 μm,200/pk LZSQ-2ML 一次性注射器 2 ml 两件式无针头,100/pk 乙腈 UV 级 4 L/ 瓶, 色谱纯 AH216-4 正己烷 HPLC 4 L/ 瓶, 色谱纯 S230-4 甲醇 4 L/ 瓶, 色谱纯

28 (GB/T ) 畜禽肉中头孢噻呋残留量检测 LC- MS/MS 法 案例来源 : 博纳艾杰尔 ; 应用编号 :AF10030 头孢噻呋 (ceftiofur) 又名赛得福, 是第一个畜禽专用的第三代头孢类广谱抗生素, 具有优良的抗菌活性和药动学特点, 用于治疗牛 马和猪的呼吸系统疾病 随着头孢噻呋在畜牧业中的广泛使用, 不可避免地引起其在动物组织或其产品中的残留 GB/T 规定了在畜禽肉中头孢噻呋方法检出限为 50 μg/kg (1) 样品提取 称取 5.00 g( 精确到 0.01 g) 均质好的样品, 置于 50.0 ml 离心管中, 加入 15.0 ml 乙腈 - 水 (15:2,v/v), 用均质器均质 30 s, 洗涤均质器刀头, 洗涤液倒回离心管中, 在振荡器上振荡 1 min,4000 rpm 离心 5 min, 合并上清液于 50mL 离心管中, 再重复用 10 ml 乙腈 - 水 (15:2,v/v) 洗涤刀头提取一次合并上清液, 用乙腈 - 水 (15:2,v/v) 定容至 40 ml, 准确移取 20mL 于 100 ml 鸡心瓶中,35 旋蒸去除乙腈 (2) 净化方法 先将 Cleanert C18 (500 mg/3 ml) 小柱分别用 3.0 ml 甲醇 3.0 ml 水活化平衡 ; 向除去乙腈层的瓶中加入 25 ml,0.05 mol/l 磷酸盐缓冲溶液, 涡旋混匀 1 min, 用 0.1 mol/l NaOH 溶液调节 ph 值为 8.5, 再以 1 ml/min 流速过柱 ; 然后用 2 ml 磷酸盐缓冲液淋洗 2 次, 再用 2 ml 超纯水淋洗, 最后 3 ml 乙腈洗脱 ( 流速 1 ml/min), 洗脱液于 45 氮气吹干 用 1 ml 0.01 mol/l 乙酸铵溶液 (ph 为 4.5) 溶解残留物, 过 0.22 μm 滤膜后待测 (3) 检测方法 3.1 色谱条件色谱柱 :Venusil ASB C18, mm,5 μm,150 Å; 流动相 :A 相 -10 mm 乙酸铵溶液 (Ph 为 4.5),B 相 - 乙腈柱温 :35 ; 进样量 :5 μl; 梯度洗脱 : 见表 1 时间 (min) 流速 (ml/min) A/% B/%

29 质谱条件离子源 : 电喷雾离子源电喷雾电压 :5500 V 气帘气压力 :13 psi 离子源温度 :550 Q1 Q3 均为单位分辨率质谱参数 ( 见表 2) 扫描方式 : 正离子扫描雾化气压力 :50 psi 辅助气压力 :55 psi 采集方式 : 多反应监测 (MRM) (4) 实验结果 由表 3 可知, 采用固相萃取结合液相色谱 - 串联质谱法检测头孢噻呋, 加标量为 50.0 μg/kg 加标回收率大于 75%, 能够满足检测要求 由图 1 可看出经 Cleanert C18 固相萃取柱净化, 采用 Venusil ASB C18 色谱柱检测得到的头孢噻呋峰形良好, 且保留时间稳定

30 图 1 头孢噻呋样品加标 50.0 μg/kg 液相色谱 / 串联质谱质量色谱图 (5) 结论 : 本实验建立了头孢噻呋残留量检测的 LC-MS/MS 检测方法, 并结合固相萃取技术对禽畜类肉中头孢噻呋的残留量进行了测定 对于加标量为 50.0 μg/kg 的样品进行了检测, 回收率大于 75%, 符合国标要求, 固相萃取方法稳定并且色谱柱重现性良好, 说明本方法能够用于检测动物源性食品中的头孢噻呋残留量 (6) 相关标准品 订货号中文名称英文名称 CAS# 1ST7003 头孢噻呋 Ceftiofur (7) 相关产品 订货号 产品名称 规格包装 VS Venusil ASB C18 5 μm,150 Å, mm S Cleanert S C mg/3 ml,50/pk SH-100 保护柱套 适用于 mm 和 mm VS S 直联式保护柱芯 5 μm,150 Å, mm ml 样品瓶 短螺纹透明带书写 mm,100/pk

31 ml 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔 垫,45 Shore A 1.0 mm,100/pk AS 针式过滤器 (Nylon) 13 mm,0.22 μm,200/pk LZSQ-2ML 一次性注射器 2 ml 两件式无针头,100/pk 乙腈 UV 级 4 L/ 瓶, 色谱纯 S230-4 甲醇 4 L/ 瓶, 色谱纯

32 (GB ) 猪肉中阿维菌素残留量检测 LC-MS/MS 法 案例来源 : 博纳艾杰尔 ; 应用编号 :AF10031 前言 阿维菌素 (Abamectin) 是由日本北里大学大村智等和美国 Merck 公司首先开发的一类 具有杀虫 杀螨 杀线虫活性的十六元大环内酯化合物, 由链霉菌中灰色链霉菌 Streptomyces avermitilis 发酵产生, 具有强烈杀虫 杀螨 杀线虫活性的十六元大环内酯, 农畜两用抗生 素 广谱 高效 安全 具有胃毒和触杀作用, 不能杀卵 其作用机制是干扰神经生理活性, 影响细胞膜氯化物传导 SN/T 规定了在进出口食品中阿维菌素方法检出限为 5 μg/kg 实验部分 仪器 试剂与材料主要仪器设备 AB SCIEX API 液相质谱联用仪 试剂材料 乙腈 乙酸均为色谱纯 ; 实验用水为超纯水 ; 无水硫酸钠为分析纯 ; 阿维菌素标准品 ( 纯 度 99%); 一次性无菌注射器 ; 针式过滤器 (0.22 μm, 直径 13 mm);cleanert Alumina N 固相 萃取柱 :1 g/3 ml 样品制备样品提取 称取 5.00 g( 精确到 0.01 g) 均质好的样品, 置于 50.0 ml 离心管中, 加入 5 g 无水硫酸钠 和 15.0 ml 乙腈, 用均质器 rpm 均质 2 min, 3000 rpm 离心 5 min, 取上清液经无水硫 酸钠过滤并转入浓缩瓶中, 用 10 ml 乙腈再提取一次, 合并提取液 40 水浴中旋蒸浓缩至 2~3 ml 样品净化 先将 Cleanert Alumina N(1 g/3 ml) 小柱用 3 ml 乙腈预淋洗, 将样品转入 SPE 柱 ( 流速控 制在 2~3 ml/min), 用 5 ml 乙腈分两次洗涤浓缩并将洗涤液转入 SPE 柱, 再用 2 ml 乙腈 淋洗小柱, 收集全部流出液 50 氮气吹干, 用 1 ml 乙腈复溶, 过 0.22 µm 滤膜后待测 实验条件液相条件 色谱柱 :Venusil MP C18,2.5 μm,100 Å, mm 流动相 :A 相 -0.1% 乙酸水溶液,B 相 - 乙腈 等度洗脱 :0-6.0 min,a:b=25:75 (v/v)

33 流速 :350 μl/min 柱温 :35 进样量 :5 µl 质谱条件离子源 : 电喷雾离子源扫描方式 : 负离子扫描电喷雾电压 :-5500 V 雾化气压力 :55 psi 气帘气压力 :12 psi 辅助气压力 :55 psi 离子源温度 :550 采集方式 : 多反应监测 (MRM) Q1 Q3 均为单位分辨率质谱参数 ( 见表 1) 表 1. 阿维菌素质谱参数化合物 Q1 Q3 CE/V 阿维菌素 (Abamectin) 结果与讨论 实验结果由表 2 可知, 采用固相萃取结合液相色谱 - 串联质谱法检测阿维菌素加标回收率在 75%~90% 之间,RSD 值在 5.46%~8.50% 之间, 能够满足检测要求 由图 1 和图 2 可看出经 Cleanert Alumina N 固相萃取柱净化, 采用 Venusil MP C18 色谱柱检测得到的阿维菌素峰形良好, 且保留时间稳定 表 2. 阿维菌素加标回收实验结果 (n=3) 物质名称加标量 /(μg/kg) 处理加标回收率 /% RSD/% RT/min 阿维菌素 (Abamectin)

34 图 1. 阿维菌素样品加标 5 μg/kg 液相色谱 / 串联质谱质量色谱图 图 2. 阿维菌素样品加标 50 μg/kg 液相色谱 / 串联质谱质量色谱图 结论 本实验建立了阿维菌素残留量检测的 LC-MS/MS 检测方法, 并结合固相萃取技术对猪肉中阿维菌素的残留量进行了测定 对于加标量为 5 μg/kg 50 μg/kg 的样品进行了检测, 回收率在 75%~90%, 符合国标要求, 固相萃取方法稳定并且色谱柱重现性良好, 说明本方法能够用于检测动物源性食品中的阿维菌素残留量

35 相关标准品 订货号中文名称英文名称 CAS# 1ST25000 阿维菌素 Abamectin 订货信息 订货号 产品名称 规格描述 包装数量 VA Venusil MP C um,100 Å,2.1 50mm 1 支 AL0003-N Cleanert Alumina N 1 g/3 ml 30 支 /pk SH-100 保护柱套 适用于 mm 和 mm 1 支 VA S 直联式保护柱芯 2.5 μm,100 Å;2.1 10mm 4/pk ml 样品瓶 短螺纹透明带书写处 mm 100/pk ml 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫 45 Shore A; 1.0 mm 100/pk AS 针式过滤器 单膜,13 mm,0.22 μm 200 个 / 包 LZSQ-2ML 一次性注射器 2 ml 无针头 100 支 / 包 AH015-4 乙腈 4 L/ 瓶, 色谱纯 4 4 L/ 箱 SPE-40 Qdaura 卓睿全自动固相 萃取仪 4 通道 24 位 1 台 NV15-M 15 位氮吹仪 15 位 1 台

36 (GB/T ) 猪肉中地塞米松残留量检测 LC-MS/MS 法 案例来源 : 博纳艾杰尔 ; 应用编号 :AF10032 前言 地塞米松 (Dexamethasone) 又名氟美松 氟甲强地松龙 德沙美松, 是糖皮质类激素, 其 衍生物有氢化可地松 泼尼松等, 地塞米松是较为常见的易残留兽药 兽药在动物性食品中 的残留, 不仅对人体健康造成直接危害, 而且对畜牧业发展和生态环境也造成极大危害 长 期食用兽药残留的食品, 会造成兽药在体内蓄积, 当其浓度达到一定量时, 就会使人体产生 多种急性或慢性中毒 地塞米松是激素类药物, 能扰乱体内激素分泌, 降低机体免疫力, 造 成肌肉萎缩无力, 骨质疏松和生长迟缓等直接危害, 而且还会出现发热, 软弱无力, 精神沉 郁, 食欲不振, 血糖和血压下降等症状 中国和欧盟规定了在动物组织中喹诺酮类兽药的最 高残留量为 0.1 μg/kg (1) 样品提取 称取 5.0 g( 精确到 0.1 g) 均质好的样品, 置于 50 ml 离心管中, 加入 20 ml 乙酸乙酯, 用均质器均质 1 min, 在振荡器上振荡 20 min,3000 rpm 离心 5 min; 取上清液过盛有 25 g 无水硫酸钠的滤纸漏斗至鸡心瓶中 ; 重复一次, 合并提取液并旋蒸至近干,1 ml 乙酸乙酯 和 5 ml 正己烷复溶 (2) 净化方法 先将 Cleanert Silica (500 mg/3 ml) 小柱分别用 2 ml 丙酮 : 正己烷 (2:8,v/v) 活化平衡, 然后将待净化液过柱 ( 流速控制在 2~3 ml/min), 弃去滤液 ; 再用 2 ml 丙酮 : 正己烷 (4:6,v/v) 淋洗洗瓶和 SPE 柱, 弃去淋洗液, 将小柱负压抽干 ; 最后用 6 ml 丙酮 : 正己烷 (4:6,v/v) 洗 脱 收集洗脱液于 40 氮气吹干, 用 1mL 0.1% 甲酸水溶液 : 乙腈 (1:1,v/v) 溶解残留物, 过 0.22 μm 尼龙针式过滤器后待测 (3) 检测方法 3.1 色谱条件 色谱柱 :Venusil MP C18, mm,2.5 μm,100 Å; 流动相 :A 相 -0.1% 甲酸水溶液,B 相 -0.1% 甲酸乙腈 柱温 :35 ; 进样量 :5 μl; 梯度洗脱 : 见表 1 时间 (min) 流速 (ml/min) A/% B/%

37 质谱条件离子源 : 电喷雾离子源电喷雾电压 :5500 V 气帘气压力 :13 psi 离子源温度 :500 Q1 Q3 均为单位分辨率质谱参数 ( 见表 2) 扫描方式 : 正离子扫描雾化气压力 :45 psi 辅助气压力 :50 psi 采集方式 : 多反应监测 (MRM) (4) 实验结果 由表 3 可知, 采用固相萃取结合液相色谱 - 串联质谱法检测地塞米松加标回收率在 95%~105% 之间,RSD 值在 3.50%~8.00% 之间, 能够满足检测要求 由图 1 和图 2 可看出经 Cleanert Silica 固相萃取柱净化, 采用 Venusil MP C18 色谱柱检测得到的地塞米松峰形良好, 且保留时间稳定

38 图 1 地塞米松样品加标 0.2μg/kg 液相色谱 / 串联质谱质量色谱图 : 图 2 地塞米松样品加标 2.0μg/kg 液相色谱 / 串联质谱质量色谱图 : 结论 : 本实验建立了地塞米松残留量的 LC-MS/MS 检测方法, 并结合固相萃取技术对猪肉中 地塞米松的残留量进行了测定 对于加标量为 0.2 μg/kg 2.0 μg/kg 的样品进行了检测, 回收 率在 95%~105%, 符合国标要求, 固相萃取方法稳定并且色谱柱重现性良好, 说明本方法能

39 够用于检测动物源性食品中的地塞米松残留量 (5) 相关标准品 订货号 中文名称 英文名称 CAS# 1ST2218 地塞米松 Dexamethasone (6) 订货信息 订货号 产品名称 规格包装 VA Venusil MP C μm,100 Å, mm SI5003 Cleanert Silica 500 mg/3 ml,50/pk SH-100 保护柱套 适用于 mm 和 mm VA S 直联式保护柱芯 2.5 μm,100 Å, mm ml 样品瓶 短螺纹透明带书写 mm,100/pk ml 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔 垫,45.Shore A 1.0 mm,100/pk AS 针式过滤器 (Nylon) 13 mm,0.22 μm,200/pk LZSQ-2ML 一次性注射器 2 ml 两件式无针头,100/pk 乙腈 UV 级 4 L/ 瓶, 色谱纯 AH216-4 正己烷 HPLC 4 L/ 瓶, 色谱纯

40 (GB/T ) 猪肉中磺胺类药物残留量检测 LC- MS/MS 法 案例来源 : 博纳艾杰尔 ; 应用编号 :AF10033 磺胺类药物 (SAs) 是对具有氨基苯磺酰胺结构的一类药物的总称, 它具有芳氨基和磺酰胺基, 是常用的广谱抗菌素, 在水产养殖中应用十分广泛 然而过量使用这些抗菌剂会导致水产品中有药物残留, 影响人类的健康 SAs 能够产生排尿和造血紊乱等副作用, 其残留能破坏人的造血系统, 造成溶血性贫血症, 磺胺二甲嘧啶等甚至有引起潜在致癌性的可能 (1) 样品提取 称取 (5±0.05) g 试样, 置于 50 ml 离心管中, 加入 15 ml 乙酸乙酯涡旋振荡 2 min,5000 rpm 离心 10 min, 分离上清液于 100 ml 鸡心瓶中, 残渣用同样的方法重复提取 1 次, 合并乙酸乙酯层 在上述提取液中加入 0.1 mol/l 的盐酸 5mL,45 旋蒸出乙酸乙酯, 将残留的盐酸层转移至 10 ml 离心管中, 分两次用 2 ml 0.1 mol/l 盐酸洗涤鸡心瓶, 洗涤液转移至同一离心管中, 再用 5 ml 正己烷洗涤鸡心瓶, 然后将正己烷转入含有盐酸的离心管中, 用手振摇使其混合均匀,3500 rpm 离心 5 min, 弃去正己烷, 再用 3 ml 正己烷重复洗涤 1 次, 取下层液作为待净化液 (2) 净化方法 先将 Cleanert PCX (150 mg/6 ml) 小柱分别用 3 ml 甲醇和 3 ml 0.1 mol/l 盐酸预洗, 将待净化液转移至柱中 ; 然后分别用 2 ml 0.1 mol/l 盐酸和 2 ml V( 水 ):V( 甲醇 ):V( 乙腈 )=55:25:20 洗涤小柱 ; 最后用 2 ml V( 水 ):V( 甲醇 ):V( 乙腈 ):V( 氨水 )=75:10:10:5 洗脱, 收集洗脱液于 45 氮气吹干, 用水定容至 1 ml, 过 0.22 μm 有机滤膜, 待测 (3) 检测方法 3.1 色谱条件色谱柱 :Venusil ASB C18, mm,3 μm,150 Å; 流动相 :A 相 - 水,B 相 - 乙腈柱温 :35 ; 进样量 :5 μl; 梯度洗脱 : 见表 1 时间 (min) 流速 (ml/min) A/% B/%

41 质谱条件 离子源 : 电喷雾离子源电喷雾电压 :5500 V 气帘气压力 :12 psi 离子源温度 :550 Q1 Q3 均为单位分辨率质谱参数 ( 见表 2) 扫描方式 : 正离子扫描雾化气压力 :65 psi 辅助气压力 :60 psi 采集方式 : 多反应监测 (MRM) 化合物 Q1 Q3 CE/V 磺胺乙酰 Sulfanilacetamide 磺胺氯哒嗪 Sulfachlorpyridazine 磺胺二甲异恶唑 Sulfisoxazole 磺胺甲基恶唑 Sulfamethoxazole 磺胺甲噻二唑 Sulfamethizole 磺胺苯吡唑 Benzenesulfonamide

42 磺胺吡啶 Sulfapyridine 磺胺噻唑 Sulfathiazole 磺胺 -6- 甲氧嘧啶 Sulfamonomethoxine 磺胺嘧啶 Sulfadiazine 磺胺甲基嘧啶 Sulfamerazine 磺胺二甲基嘧啶 Sulfamethazine 磺胺邻二甲氧嘧啶 Sulfadoxine 磺胺甲氧哒嗪 Sulfamethoxypyridazine 磺胺 -5- 甲氧嘧啶 Sulfameter 磺胺间甲氧嘧啶 Sulfamonomethoxine (4) 实验结果 由表 3 可知, 采用固相萃取结合液相色谱 - 串联质谱法检测 16 种磺胺类药物, 加标量为 10.0 μg/kg 加标回收率为 70%~110%, 能够满足检测要求 由图 1 可看出经 Cleanert PCX 固相萃取柱净化, 采用 Venusil ASB C18 色谱柱检测能够使将 16 种磺胺类药物较好的分离开, 且各物质峰形良好, 保留时间稳定 表 3 磺胺类药物加标回收实验结果 (n=3):

43 物质名称 加标量 /(μg/kg) 处理加标回收率 /% RSD/% RT/min 磺胺乙酰 Sulfanilacetamide % 3.87% 磺胺氯哒嗪 Sulfachlorpyridazine 磺胺二甲异恶唑 Sulfisoxazole 磺胺甲基恶唑 Sulfamethoxazole 磺胺甲噻二唑 Sulfamethizole 磺胺苯吡唑 Benzenesulfonamide % 5.55% % 10.20% % 14.18% % 3.86% % 11.72% 磺胺吡啶 Sulfapyridine % 6.49% 磺胺噻唑 Sulfathiazole % 4.04% 磺胺 -6- 甲氧嘧啶 Sulfamonomethoxine % 1.53% 磺胺嘧啶 Sulfadiazine % 1.93% 磺胺甲基嘧啶 Sulfamerazine % 2.39% 磺胺二甲基嘧啶 Sulfamethazine 磺胺邻二甲氧嘧啶 Sulfadoxine 磺胺甲氧哒嗪 Sulfamethoxypyridazine 磺胺 -5- 甲氧嘧啶 Sulfameter 磺胺间甲氧嘧啶 Sulfamonomethoxine % 3.35% % 7.31% % 0.93% % 0.03% % 6.14% 图 1 磺胺类样品加标 10.0 μg/kg 液相色谱 / 串联质谱质量色谱图

44 结论 : 本实验建立了磺胺类药物残留量检测的 LC-MS/MS 检测方法, 并结合固相萃取技术对猪肉中磺胺类药物的残留量进行了测定 对于加标量为 10.0 μg/kg 的样品进行了检测, 回收率在 70%~110%, 符合国标要求, 固相萃取方法稳定并且色谱柱重现性良好, 说明本方法能够用于检测动物源性食品中的磺胺类药物残留量 (5) 相关标准品 订货号 中文名称 英文名称 CAS# 1ST4001 磺胺乙酰 Sulfanilacetamide ST4034 磺胺氯哒嗪 Sulfachlorpyridazine ST4010 磺胺二甲异恶唑 Sulfisoxazole ST4005 磺胺甲基恶唑 Sulfamethoxazole ST4008 磺胺甲噻二唑 Sulfamethizole ST4013 磺胺苯吡唑 Sulfaphenazole ST4003 磺胺吡啶 Sulfapyridine ST4007 磺胺噻唑 Sulfathiazole ST4040 磺胺 -6- 甲氧嘧啶 Sulfamonomethoxine ST4017 磺胺嘧啶 Sulfadiazine ST4002 磺胺甲基嘧啶 Sulfamerazine ST4014 磺胺二甲基嘧啶 Sulfamethazine ST4006 磺胺邻二甲氧嘧啶 Sulfadoxine ST4004 磺胺甲氧哒嗪 Sulfamethoxypyridazine ST4036 磺胺 -5- 甲氧嘧啶 Sulfameter ST4040 磺胺间甲氧嘧啶 Sulfamonomethoxine

45 (6) 订货信息 : 订货号 产品名称 规格包装 VS Venusil ASB C18 3 μm,150 Å, mm CX1506 Cleanert PCX 150 mg/6 ml,30/pk SH-100 保护柱套 适用于 mm 和 mm VS S 直联式保护柱芯 3 μm,150å, mm ml 样品瓶 短螺纹透明带书写 mm,100/pk ml 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔 垫,45.Shore A 1.0 mm,100/pk AS 针式过滤器 (Nylon) 13 mm,0.22 μm,200/pk LZSQ-2ML 一次性注射器 2 ml 两件式无针头,100/pk 乙腈 UV 级 4 L/ 瓶, 色谱纯 S230-4 甲醇 4 L/ 瓶, 色谱纯

46 (DB 51T ) 猪肉中己烯雌酚残留量检测 LC-MS/MS 法 案例来源 : 博纳艾杰尔 ; 应用编号 :AF10034 己烯雌酚 (Stilbestrol) 是人工合成的非甾体雌激素物质, 能产生与天然雌二醇相同的所有药理与治疗作用 主要用于雌激素低下症及激素平衡失调引起的功能性出血 闭经, 还可用于死胎引产前, 以提高子宫肌层对催产素的敏感性 孕妇服用此药, 其女性后代在青春期后宫颈和阴道的腺病及腺癌发生率升高, 男性后代生殖道异常和精子异常发生率也增加 己烯雌酚可导致恶心, 呕吐, 食欲不振, 头痛等症状, 长期使用可使子宫内膜增生过度而致子宫出血和肥大 国标中规定了在牛猪肝肾和肌肉组织中己烯雌酚方法检出限为 1.0 μg/kg (1) 样品提取 称取 5.00 g( 精确到 0.01 g) 均质好的样品, 置于 50.0mL 离心管中, 加入 ml 叔丁基甲基醚, 涡旋 1 min, 振荡 10 min, 在 -4 下以 6000 rpm 离心 5 min, 取上清液转入浓缩瓶中 ; 用 ml 叔丁基甲基醚再提取一次, 合并提取液,45 水浴中减压旋蒸浓缩至干 加 80% 乙腈溶液 2 ml 于浓缩瓶中, 涡旋溶解残留物, 然后将其转移至 10 ml 离心管中 ; 再加入正己烷 5 ml 于浓缩瓶中洗涤, 一并转移至离心管中, 震荡混合 1 min, 在 15 以 6000 rpm 离心 10 min, 弃去上清液 再加正己烷 5 ml 于离心管中同法操作, 留下层备用 (2) 净化方法 先将 Cleanert PEP-2 (500 mg/6 ml) 小柱用 3 ml 叔丁基甲基醚 3 ml 甲醇和 3 ml 水活化平衡, 取上述下层溶液, 以每 3~4 秒 1 滴的流速通过预处理后的固相萃取柱 ; 先用甲醇 : 水 (3:7,v/v) 溶液 3 ml 冲洗, 然后加水 3 ml 平衡, 再用甲醇 :2% 氨水 (1:9, v/v) 溶液 3 ml 冲洗, 弃去洗液, 抽干 用 0.1% 甲酸 / 甲醇 : 叔丁基甲基醚 (1:9,v/v) 溶液 7 ml 洗脱, 收集洗脱液, 氮气吹干, 用 80% 乙腈水 1 ml 溶解残余物, 充分涡旋, 过 0.22 μm 滤膜, 滤液供高效液相色谱 - 串联质谱仪测定 (3) 检测方法 3.1 色谱条件色谱柱 :Venusil MP C18, mm,2.5 μm,100 Å; 流动相 :A 相 - 水,B 相 - 乙腈柱温 :35 ; 进样量 :5 μl; 梯度洗脱 : 见表 1

47 时间 (min) 流速 (ml/min) A/% B/% 质谱条件离子源 : 电喷雾离子源电喷雾电压 :-5500 V 气帘气压力 :12 psi 离子源温度 :550 Q1 Q3 均为单位分辨率质谱参数 ( 见表 2) 扫描方式 : 负离子扫描雾化气压力 :55 psi 辅助气压力 :50 psi 采集方式 : 多反应监测 (MRM) (4) 实验结果 由表 3 可知, 采用固相萃取结合液相色谱 - 串联质谱法检测己烯雌酚, 加标量为 2.5 μg/kg 25.0 μg/kg, 回收率在 80%~96% 之间,RSD 值在 2.26%~8.95% 之间, 能够满足检测要求 由图 1 和图 2 可看出经 Cleanert PEP-2 固相萃取柱净化, 采用 Venusil MP C18 色谱柱检测得到的己烯雌酚峰形良好, 且保留时间稳定

48 图 1 己烯雌酚样品加标 2.5 μg/kg 液相色谱 / 串联质谱质量色谱图 图 2 己烯雌酚样品加标 25 μg/kg 液相色谱 / 串联质谱质量色谱图 : 结论 : 本实验建立了己烯雌酚残留量的 LC-MS/MS 检测方法, 并结合固相萃取技术对猪肉中 己烯雌酚的残留量进行了测定 对于加标量为 2.5 μg/kg 25.0 μg/kg 的样品进行了检测, 回

49 收率在 80%~96%, 符合国标要求, 固相萃取方法稳定并且色谱柱重现性良好, 说明本方法能够用于检测动物源性食品中的己烯雌酚残留量 (5) 相关标准品 订货号 中文名称 英文名称 CAS# 1ST2215 己烯雌酚 Stilbestrol; Diethylstilbestrol (6) 订货信息 : 订货号 产品名称 规格包装 VA Venusil MP C μm,100 Å, mm PE Cleanert PEP mg/6 ml,30/pk SH-100 保护柱套 适用于 mm 和 mm VA S 直联式保护柱芯 2.5 μm,100 Å, mm ml 样品瓶 短螺纹透明带书写 mm,100/ pk ml 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔 垫,45.Shore A 1.0 mm,100/pk AS 针式过滤器 (Nylon) 13 mm,0.22 μm,200/pk LZSQ-2ML 一次性注射器 2 ml 两件式无针头,100/pk 乙腈 UV 级 4 L/ 瓶, 色谱纯 AH216-4 正己烷 HPLC 4 L/ 瓶, 色谱纯 S230-4 甲醇 4 L/ 瓶, 色谱纯 GBW(E) 己烯雌酚 标准品,100 mg

50 (GB/T ) 猪肉中林可霉素残留量检测 LC-MS/MS 法 案例来源 : 博纳艾杰尔 ; 应用编号 :AF10037 前言 林可霉素 (Lincomycin, 又称洁霉素 ) 主要用链霉菌发酵得到 常作用于细菌核糖体的 50 s 亚单位, 通过抑制肽链的延长而抑制细菌蛋白质的合成, 从而清除细菌表面 A 蛋白质和绒 毛状外衣, 使其易被吞噬和杀灭 林可霉素对机体免疫系统有增强免疫调节, 使得多核型白 细胞的吞噬和杀菌功能增强, 改变细菌表面活性, 抑制细菌毒素的产生 可用于治疗革兰氏 阳性菌和支原体感染, 对葡萄球菌 链球菌作用较强, 对厌氧菌有抑制作用, 在许多感染症 的治疗中疗效显著 用作饲料添加剂时, 可促进肉鸡和育肥猪的生长 林可霉素造成的动物 源性食品安全问题备受人们关注, 因此, 欧盟和我国对动物源性食品中林可霉素限量做了严 格规定, 其最大残留量为 1 μg/kg (1) 样品提取 称取 5.0 g( 精确到 0.01 g) 均质好的样品, 置于 50 ml 离心管中, 加入 15 ml 乙腈, 用均 质器均质 1 min, 在振荡器上振荡 10 min,4200 rpm 离心 5 min, 取上清液于另一 50 ml 离 心管中 ; 再加入 10 ml 乙腈于样品残渣, 重复提取一次, 合并上清液于 50 ml 离心管中, 加入 2.0 g 氯化钠和 10 ml 正己烷, 于振荡器剧烈振荡 10 min, 以 4200 rpm 离心 10 min, 小心吸取中间乙腈层 10 ml 于另一离心管中,55 水浴氮气浓缩至近干 用 7 ml 磷酸盐 缓冲液分两次溶解残留物, 作为待净化液 (2) 净化方法 先将 Cleanert PEP-2 (500 mg/6 ml) 小柱分别用 10 ml 甲醇,10 ml 水,5 ml 0.2% 氯化 钠,5 ml 磷酸盐缓冲液活化平衡 ; 然后将待净化液过柱 ( 流速控制在 1 ml/min); 用 10 ml 水和 5 ml 甲醇 - 水 (2:3,v/v) 洗柱, 弃去全部流出液, 小柱用真空泵抽干 15 min; 最后用 10 ml 甲醇洗脱 收集洗脱液于 45 氮气吹干, 用 1 ml 10 mmol 乙酸铵溶液 ( 含 0.15% 甲酸 ) 溶解残留物, 过 0.2 2μm 滤膜后待测 (3) 检测方法 3.1 色谱条件 色谱柱 :Venusil ASB C18, mm,5 μm,150 Å; 流动相 :A 相 -0.3% 甲酸水溶液,B 相 -0.3% 甲酸乙腈 柱温 :35 ; 进样量 :10 μl;

51 梯度洗脱 : 见表 1 时间 (min) 流速 (ml/min) A/% B/% 质谱条件离子源 : 电喷雾离子源电喷雾电压 :5500 V 气帘气压力 :15 psi 离子源温度 :550 Q1 Q3 均为单位分辨率质谱参数 ( 见表 2) 扫描方式 : 正离子扫描雾化气压力 :45 psi 辅助气压力 :50 psi 采集方式 : 多反应监测 (MRM) (4) 实验结果 由表 3 可知, 采用固相萃取结合液相色谱 - 串联质谱法检测林可霉素加标回收率在 84%~105% 之间,RSD 值小于 10%, 能够满足检测要求 由图 1 可看出经 Cleanert PEP-2 固相萃取柱净化, 采用 Venusil ASB C18 色谱柱检测得到的林可霉素峰形良好, 且保留时间稳定

52 图 1 林可霉素样品加标 1.0μg/kg 液相色谱 / 串联质谱质量色谱图 : 结论 : 本实验建立了林可霉素残留量的 LC-MS/MS 检测方法, 并结合固相萃取技术对猪肉中林可霉素的含量进行了测定 对于加标量为 1.0 μg/kg 的样品进行了检测, 回收率在 84%~105%, 符合国标要求, 固相萃取方法稳定并且色谱柱重现性良好, 说明本方法能够用于检测动物源性食品中林可霉素的残留量 (5) 相关标准品 订货号 中文名称 英文名称 CAS# 1ST7802 林可霉素 Lincomycin (6) 订货信息 订货号 产品名称 规格包装 VS Venusil ASB C18 5 μm,150 Å, mm PE Cleanert PEP mg/6 ml,30/pk

53 SH-100 保护柱套适用于 mm 和 mm VS S 直联式保护柱芯 5 μm,150 Å, mm ml 样品瓶短螺纹透明带书写 mm,100/pk ml 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔 垫,45.Shore A 1.0 mm,100/pk AS 针式过滤器 13 mm,0.22 μm,200/pk LZSQ-2ML 一次性注射器 2 ml 两件式无针头,100/pk 乙腈 UV 级 4 L/ 瓶, 色谱纯 AH216-4 正己烷 HPLC 4 L/ 瓶, 色谱纯 S230-4 甲醇 4 L/ 瓶, 色谱纯

54 (GB/T ) 猪肉中氟喹诺酮类药物残留量检测 LC- MS/MS 法 案例来源 : 博纳艾杰尔 ; 应用编号 :AF10036 前言 氟喹诺酮类 (fluoroquinolones, FQs), 又称吡啶酮酸类, 是近年来人工合成的一系列新型杀菌性抗菌药物, 因其抗菌谱广, 抗菌活性强, 与其他抗菌药物无交叉, 耐药性和毒副作用小等特点而广泛应用于动物和人类的多种感染性疾病的防治当中 氟喹诺酮类药物的残留除其本身的毒副作用对人体造成直接危害外, 更为严重的是长期食用含较低浓度 FQs 药物的动物源性食品, 容易诱导人类致病菌产生耐药性, 具有潜在致畸致癌的威胁 中国和欧盟规定了在动物组织中其系列喹诺酮类兽药的最高残留量为 10~90 μg/kg (1) 样品提取 称取 5.0 g( 精确到 0.1 g) 均质好的样品, 置于 50mL 离心管中, 加入 20 ml 配置好的 0.1 mol/l 的缓冲溶液,1000 rpm 涡旋混合 1 min, 再超声提取 10 min, 于 8000 rpm 离心 10 min, 重复提取三次, 合并上清液做待净化液 (2) 净化方法 先将 Cleanert PEP-2 小柱分别用 6 ml 甲醇和 6 ml 水活化, 然后将待净化液过柱 ( 流速控制在 2~3 ml/min), 弃去滤液 ; 再用 3 ml 5% 甲醇水淋洗, 弃去淋洗液, 将小柱抽干 ; 最后用 6 ml 甲醇洗脱 收集洗脱液于 40 氮气吹干, 用 1 ml 0.2% 甲酸水溶液溶解残留物, 过 0.22 μm 滤膜后待测 (3) 检测方法 3.1 色谱条件色谱柱 :Venusil MP C18, mm,5 μm,100 Å; 流动相 :A 相 -0.1% 甲酸水溶液,B 相 - 乙腈柱温 :30 ; 进样量 :10 μl; 梯度洗脱 : 见表 1 时间 (min) 流速 (ml/min) A/% B/%

55 质谱条件离子源 : 电喷雾离子源扫描方式 : 正离子扫描电喷雾电压 :5500 V 雾化气压力 :45 psi 气帘气压力 :15 psi 辅助气压力 :40 psi 离子源温度 :500 采集方式 : 多反应监测 (MRM) Q1 Q3 均为单位分辨率定性离子对 定量离子对 去簇电压和碰撞电压 ( 见表 2) 化合物 Q1 Q3 CE/V 诺氟沙星 (Norfloxacin) 环丙沙星 (Ciprofloxacin) 培氟沙星 (Pefloxacin) 洛美沙星 (Lomefloxacin) 恩诺沙星 (Enrofloxacin) 氧氟沙星 (Ofloxacin) (4) 实验结果

56 由表 3 可知, 采用固相萃取结合液相色谱 - 串联质谱法检测六种氟喹诺酮类药物, 加标量为 2.0 μg/kg 20 μg/kg 100 μg/kg, 回收率为 70%~120%, 能够满足检测要求 由图 1-3 可看出经 Cleanert PEP-2 固相萃取柱净化, 采用 VenusilMP C18 色谱柱检测能够使六种喹诺酮类药物得到良好的分离, 且各种物质峰形良好, 保留时间稳定 物质名称 加标量 /(μg/kg) 处理加标回收率 /% RSD/% RT/min 诺氟沙星 (Norfloxacin) 环丙沙星 (Ciprofloxacin) 培氟沙星 (Pefloxacin) 洛美沙星 (Lomefloxacin) 恩诺沙星 (Enrofloxacin) 氧氟沙星 (Ofloxacin) 图 1 氟喹诺酮类样品加标 2.0 μg/kg 液相色谱 / 串联质谱质量色谱图

57 图 2 氟喹诺酮类样品加标 20 μg/kg 液相色谱 / 串联质谱质量色谱图 图 3 氟喹诺酮类样品加标 100 μg/kg 液相色谱 / 串联质谱质量色谱图

58 结论 : 本实验建立了六种氟喹诺酮类药物的 LC-MS/MS 检测方法, 并结合固相萃取技术对猪肉中氟喹诺酮类药物的残留量进行了测定 对于加标量为 2 μg/kg 20 μg/kg 100 μg/kg 的样品进行了检测, 回收率在 70%~120%, 符合国标要求, 固相萃取方法稳定并且色谱柱重现性良好, 说明本方法能够用于检测动物源性食品中的氟喹诺酮类药物残留 相关标准品 订货号 中文名称 英文名称 CAS# 1ST5738 诺氟沙星 Norfloxacin ST5703 环丙沙星 Ciprofloxacin ST5756 培氟沙星 Pefloxacin ST5759 洛美沙星 Lomefloxacin ST4107 恩诺沙星 Enrofloxacin ST5740 氧氟沙星 Ofloxacin 相关产品 订货号 产品名称 规格包装 VA Venusil MP C18 5 μm,100 Å, mm PE Cleanert PEP mg/6 ml,30 支 / 包 SPE-40 Qdaura 卓睿自动固相萃取仪 24 通道 SH-100 保护柱套 适用于 mm 和 mm VA S 直联式保护柱芯 5 μm,100 Å, mm ml 样品瓶 短螺纹透明带书写 mm,100/pk ml 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫,45.Shore A 1.0 mm,100/pk AS 针式过滤器 (Nylon) 13 mm,0.22 μm,200/pk LZSQ-2ML 一次性注射器 2 ml 两件式无针头,100/pk 乙腈 UV 级 4 L/ 瓶, 色谱纯 S230-4 甲醇 4 L/ 瓶, 色谱纯

59 (GB ) 猪肉中氯羟吡啶残留量检测 LC-MS/MS 法 案例来源 : 博纳艾杰尔 ; 应用编号 :AF10038 前言 球虫病是畜牧业生产中最重要, 也是最常见的一种原虫病, 以对鸡 兔 牛 猪的危害性最大 氯羟吡啶 (Clopidol) 属吡啶类化合物, 其商品名为克球粉, 具有广泛的抗球虫作用 但是, 长期或过量的用药会造成氯羟吡啶在动物体内和组织中的残留和在食物链中的蓄积, 对环境及公众健康构成严重的潜在危害 欧盟 美国 加拿大 日本等国都规定了各种动物组织中氯羟吡啶残留最高限量标准 我国规定各种动物组织中氯羟吡啶残留最高限量标准, 其中氯羟吡啶在鸡肉中的残留限量 5.0 μg/kg 有关动物组织中氯羟吡啶残留检测方法的文献不多, 其中以 GC/MS 法为主 (1) 样品提取 准确称取试样 (5±0.05 g) 于 50 ml 聚丙烯离心管中, 加入 15 ml 乙腈, 均质 1 min, 再振荡提取 10 min, 于 6000 r/min 离心 10 min, 取上清液于另一 50 ml 离心管中 ; 用 10 ml 乙腈洗涤刀头, 洗涤液倒入残渣中重复提取一次 合并两次上清液, 加正己烷 15 ml, 无水硫酸钠 2 g, 振荡提取 5 min,6000 r/min 离心 5min, 取乙腈层于 50 旋转蒸发至近干 ; 用 5 ml 乙腈溶解残留物, 作为待净化液, 备用 (2) 净化方法 先将 Cleanert Alumina-N (500 mg/6 ml) 小柱用 10 ml 乙腈活化, 取备用液过柱, 控制流速为 1 ml/min, 收集上样流出液 ; 用 10mL 乙腈分两次冲洗放置备用液的离心管, 再以相同流速洗脱小柱, 并收集洗脱液 ; 将所有流出液与洗脱液于 50 氮气吹至近干 ; 最后用 1 ml 10% 甲醇水溶液溶解残留物, 然后涡旋振荡 2 min, 再超声 2 min, 过 0.22 μm 滤膜, 待测 (3) 检测方法 3.1 色谱条件色谱柱 :Venusil MP C18, mm,2.5 μm,100 Å; 流动相 :A 相 -0.1% 甲酸水,B 相 -0.1% 甲酸乙腈柱温 :30 ; 进样量 :10 μl; 梯度洗脱 : 见下表

60 时间 (min) 流速 (ml/min) A/% B/% 质谱条件离子源 : 电喷雾离子源电喷雾电压 :5500 V 气帘气压力 :15 psi 离子源温度 :450 Q1 Q3 均为单位分辨率质谱参数 ( 见表 2) 扫描方式 : 正离子扫描雾化气压力 :50 psi 辅助气压力 :50 psi 采集方式 : 多反应监测 (MRM) (4) 实验结果 由表 3 可知, 采用固相萃取结合液相色谱 - 串联质谱法检测氯羟吡啶, 加标量为 1.0 μg/kg 5.0 μg/kg 加标回收率在 78%~90% 之间,RSD 值小于 10%, 能够满足检测要求 由图 1 和图 2 可看出经 Cleanert Alumina-N 固相萃取柱净化, 采用 Venusil MP C18 色谱柱检测得到的氯羟吡啶峰形良好, 且保留时间稳定

61 图 1 氯羟吡啶样品加标 1.0 μg/kg 液相色谱 / 串联质谱质量色谱图 图 2 氯羟吡啶样品加标 5.0 μg/kg 液相色谱 / 串联质谱质量色谱图 结论 : 本实验建立了氯羟吡啶残留量的 LC-MS/MS 检测方法, 并结合固相萃取技术对猪肉中 氯羟吡啶的含量进行了测定 对于加标量为 1.0 μg/kg 5.0 μg/kg 的样品进行了检测, 回收率

62 为 78%~90%, 符合检测要求 固相萃取方法稳定并且色谱柱重现性良好, 说明本方法能够用于检测动物源性食品中氯羟吡啶的残留量 (5) 相关标准品 订货号 中文名称 英文名称 CAS# 1ST7104 氯羟吡啶 ; 二氯二甲吡啶酚 Clopidol (6) 订货信息 : 订货号 产品名称 规格包装 VA Venusil MP C μm,100 Å, mm AL5006-N Cleanert Alumina-N 500 mg/6 ml,30/pk SH-100 保护柱套 适用于 mm 和 mm VA S 直联式保护柱芯 2.5 μm,100 Å, mm ml 样品瓶 短螺纹透明带书写 mm,100/pk ml 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫,45.Shore A 1.0 mm,100/pk AS 针式过滤器 (Nylon) 13 mm,0.22 μm,200/pk LZSQ-2ML 一次性注射器 2 ml 两件式无针头,100/pk 乙腈 UV 级 4 L/ 瓶, 色谱纯 AH216-4 正己烷 HPLC 4 L/ 瓶, 色谱纯 S230-4 甲醇 4 L/ 瓶, 色谱纯

63 (GB/T ) 猪肉 鸡肉中四环素类药物残留量检测 LC-MS/MS 法 案例来源 : 博纳艾杰尔 ; 应用编号 :AF10039 前言 四环素类 (Tetracyclines,TCs) 是由链霉菌产生的一类广谱抗生素, 主要包括四环素 (Tetracycline,TC) 土霉素 (Oxytetracycline,OTC) 金霉素 (Chlortetracyline,CTC) 等, 其结构均 含并四苯基本骨架, 已被广泛应用于可食性动物疾病的治疗和药物添加剂中, 常用于预防和 治疗动物疾病 四环素类抗生素在酸性和碱性条件下均不稳定, 其含有许多羟基 烯醇羟基 及羰基, 在中性条件下能与多种金属离子形成不溶性螯合物, 与钙或镁离子形成不溶性的钙 盐或镁盐, 与铁离子形成红色络合物, 与铝离子形成黄色络合物 为了有效地预防四环素类 药物的滥用, 欧盟 日本和美国等都制定了动物组织及牛奶中的最大残留限量, 其中规定在 动物组织中的最大残留限量为 0.1 mg/l GB/T 中规定最低检出限为 50.0 μg/kg 1. 样品提取 称取 5.0 g( 精确到 0.01 g) 均质好的试样, 置于 50 ml 离心管中, 分别加入 20 ml 20 ml 10 ml 配置好的 0.1 mol/l 的 EDTA-Mcllivaine 缓冲溶液,1000 rpm 涡旋混合 1 min, 再超声提取 10 min, 于 3000 rpm 离心 5 min, 合并上清液 ( 控制上清液体积不超过 50 ml) 并 定容至 50 ml, 混匀,5000 rpm 离心 10 min, 用快速滤纸过滤, 待净化 2. 净化方法 先将 Cleanert PEP-2 小柱分别用 5 ml 甲醇和 5 ml 水活化, 再准确吸取 10 ml 提取液 以 1 滴 /s 的速度过 SPE 小柱, 待样液完全流出后, 依次用 5 ml 水和 5 ml 5% 甲醇水溶液淋 洗, 弃去全部流出液 减压抽干小柱 5 min, 最后用 10 ml 甲醇 + 乙酸乙酯 (1:9,v/v) 洗脱 将洗脱液低于 40 氮气吹干, 用 1 ml 甲醇水 (3:7,v/v) 溶液溶解残渣, 过 0.45 μm 滤膜, 待测 3. 检测方法 3.1 色谱条件 色谱柱 :Durashell C18, mm,3 μm,100 Å; 流动相 :A 相 -0.3% 甲酸水溶液,B 相 -0.3% 甲酸乙腈 柱温 :30 ; 进样量 :5 μl; 梯度洗脱 : 见下表 时间 (min) 流速 (ml/min) A/% B/%

64 质谱条件离子源 : 电喷雾离子源电喷雾电压 :5500 V 气帘气压力 :15 psi 离子源温度 :550 Q1 Q3 均为单位分辨率 扫描方式 : 正离子扫描雾化气压力 :70 psi 辅助气压力 :65 psi 采集方式 : 多反应监测 (MRM) 定性离子对 定量离子对 去簇电压和碰撞电压 ( 见表 2) 化合物 Q1 Q3 CE/V 盐酸四环素 (Tetracycline hydrochloride) 盐酸土霉素 (Oxytetracycline) 盐酸金霉素 (Chlorotetracycline hydrochloride (4) 实验结果 由表 3 可知, 采用固相萃取结合液相色谱 - 串联质谱法检测三种四环素类药物, 加标量为 10.0 μg/kg 50.0 μg/kg 200 μg/kg, 回收率为 90%~105%, 能够满足检测要求 由图 1-3 可看出经 Cleanert PEP-2 固相萃取柱净化, 采用 Durashell C18 色谱柱检测能够使三种四环素药物得到良好的分离, 且各种物质峰形良好, 保留时间稳定

65 物质名称 加标量 /(μg/kg) 处理加标回 收率 /% RSD/% RT/min 盐酸四环素 (Tetracycline hydrochloride) 盐酸土霉素 (Oxytetracycline) 盐酸金霉素 (Chlorotetracycline hydrochloride) 图 1 四环素类样品加标 10.0 μg/kg 液相色谱 / 串联质谱质量色谱图

66 图 2 四环素类样品加标 50 μg/kg 液相色谱 / 串联质谱质量色谱图 图 3 四环素类样品加标 200 μg/kg 液相色谱 / 串联质谱质量色谱图 结论 : 本实验建立了三种四环素类药物的 LC-MS/MS 检测方法 实验对加标量为 10 μg/kg 50 μg/kg 200 μg/kg 的样品进行了检测, 结果表明前处理方法回收率在 90%-105% 之间, 均 在国标要求范围内, 固相萃取方法稳定而且色谱柱重现性较好 说明本方法能够用于检测动 物源性食品中的四环素类药物残留 5. 相关标准品 订货号中文名称英文名称 CAS# 1ST4102A 盐酸四环素 Tetracycline hydrochloride ST4111A 盐酸土霉素 Oxytetracycline ST4110A 盐酸金霉素 Chlorotetracycline hydrochloride

67 6. 订货信息 : 订货号 产品名称 规格包装 DC Durashell C18 3 μm,100 Å, mm PE Cleanert PEP-2 60 mg/ 3mL,50 支 / 包 SPE-40 Qdaura 卓睿自动固相 萃取仪 24 通道 SH-100 保护柱套适用于 mm 和 mm DC S 直联式保护柱芯 3 μm,100 Å, mm ml 样品瓶短螺纹透明带书写 mm,100/pk ml 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔 垫,45.Shore A 1.0 mm,100/pk AS 微孔滤膜 (Nylon) 13 mm,0.45 μm,200/pk LZSQ-2ML 一次性注射器 2 ml 两件式无针头,100/pk 乙腈 UV 级 4 L/ 瓶, 色谱纯 S230-4 甲醇 4 L/ 瓶, 色谱纯

68 ( 农业部 1025 号公告 ) 动物源食品中 9 种 β- 受体激 动剂残留量的测定 LC-MS/MS 法 案例来源 : 博纳艾杰尔 ; 应用编号 :AF10042 本文使用天津博纳艾杰尔科技有限公司的 Cleanert PCX 固相萃取柱, 按照中华人民共和国国家标准农业部 1025 号公告 公告 动物源食品中 9 种 β- 受体激动剂残留检测方法 - 超高效液相色谱 - 串联质谱法 提供的方法, 检测猪肉 猪肝 牛肉 羊肉等四种组织中的 9 种 β- 受体激动剂残留 1. 样品信息 特布他林 西马特罗 沙丁胺醇 非诺特罗 氯丙那林 莱克多巴胺 克仑特罗 妥布特罗和喷布特罗等 9 种 β- 受体激动剂信息如表所示

69

70 2. 样品提取及衍生 2.1 样品酶解 分别称取猪肉 猪肝 牛肉和羊肉样品各 2 g( 精确到 0.01 g), 置于 50 ml 棕色离心管 中, 加入 0.2 mol/l 乙酸铵缓冲液 (ph 为 5.2)8.0 ml; 再加入 β- 盐酸葡萄糖醛苷酶 / 芳基硫酸 酯酶 40 μl, 涡旋混匀, 于 37 下避光水浴振荡约 16 h 2.2 提取 酶解后放置至室温, 涡旋混匀,10000 rpm 离心 10 min; 转移上清液于另一 50 ml 离心 管内, 加入 0.1 mol/l 高氯酸溶液 5 ml, 涡旋混匀, 用高氯酸调 ph 至 1.0±0.2,10000 rpm 离心 10 min; 将上清液转移至另一 50 ml 离心管内 ; 用 10 mol/l NaOH 溶液调 ph 至 9.5±0.2; 加入乙酸乙酯 15 ml, 涡旋混匀, 并振荡 10 min,5000 rpm 离心 5 min, 取出上层有机相至 另一 50 ml 离心管内 ; 再在下层水相中加入叔丁基甲醚 10 ml, 涡旋混匀, 并振荡 10 min, 5000 rpm 离心 5 min; 合并有机相, 50 下氮气吹干, 用 2% 甲酸水溶液 5 ml 溶解, 备用 2.3 净化处理 PCX 小柱依次用甲醇 水 2% 甲酸溶液各 3 ml 活化 ; 取全部备用液过柱再依次用 2% 甲酸水溶液 甲醇各 3 ml 淋洗, 减压抽干 ; 用 3% 氨水甲醇溶液 2.5 ml 洗脱 ; 洗脱液在 50 下用氮气吹干, 残余物用甲醇 -0.1% 甲酸溶液 (10+90,V/V)0.2 ml 溶解, 涡旋混匀,15000 rpm 离心 10 min, 取上清液适量, 供超高效液相色谱 - 串联质谱仪测定 3. 检测方法 按照中华人民共和国国家标准农业部 1025 号公告 公告 动物源食品中 9 种 β- 受体激动剂残留检测方法 - 超高效液相色谱 - 串联质谱法 提供的方法进行检测 4. 实验结果 结果如下列附图所示 结论 本实验选用 Cleanert PCX 固相萃取柱 (60 mg/3 ml), 按照农业部 1025 号公告 公告 动物源食品中 9 种 β- 受体激动剂残留检测方法 - 超高效液相色谱 - 串联质谱法 提供 的方法, 验证测定猪肉 猪肝 牛肉 羊肉等四种组织中的 9 种 β- 受体激动剂残留回收率 通过不同基质的样品添加回收率实验, 结果显示天津博纳艾杰尔科技有限公司的 Cleanert PCX 固相萃取柱性能良好, 完全能够符合兽药残留检测的要求并应用在动物产品的 残留监控工作中 5. 相关标准品 订货号中文名称英文名称 CAS# 1ST1304 特布他林 Terbutaline ST1309 西马特罗 Cimaterol ST1302 沙丁胺醇 Salbutamol; Albuterol ST1327 非诺特罗 Fenoterol

71 1ST1313 氯丙那林 Clorprenaline ST1307 莱克多巴胺 Ractopamine ST1301 克仑特罗 Clenbuterol ST1372 妥布特罗 Tulobuterol ST1324 喷布特罗 Penbutolol 订货信息 : 订货号 产品名称 规格包装 Cleanert PCX 固相萃取柱 60 mg/3 ml,50 支 / 包 AS 针式过滤器 (Nylon) 0.22 μm, 直径 13 mm,200 个 /pk ZSQ-5ML 一次性无针头注射器 5 ml,100/pk ml 样品瓶 棕色,100/pk ml 样品瓶盖 100/pk AH230-4 甲醇 4 4 L/ 箱 附图 :

72 图 5 空白猪肉添加试液中 9 种 β- 受体激动剂 (0.5 ng/g) 特征离子质量色谱图

73 图 6 空白猪肝添加试液中 9 种 β- 受体激动剂 (0.5 ng/g) 特征离子质量色谱图

74 图 7 空白牛肉添加试液中 9 种 β- 受体激动剂 (0.5 ng/g) 特征离子质量色谱图

75 图 8 空白羊肉添加试液中 9 种 β- 受体激动剂 (0.5 ng/g) 特征离子质量色谱图

76 (SN/T ) 猪肉中泰乐菌素残留量检测 LC-MS/MS 法 案例来源 : 博纳艾杰尔 ; 应用编号 :AF10040 泰乐菌素 (Tylosin), 亦称泰农 泰乐霉素, 是美国于 1959 年从弗氏链霉菌 (Streptomyces fradiae) 的培养液中获得的一种大环内酯类抗生素, 对支原体有特效, 对多种 G+ 菌具有很强的抗菌作用, 还对部分 G- 菌 弯杆菌 螺旋体及球虫具有抑制作用 其产品形式有酒石酸盐 磷酸盐 盐酸盐 硫酸盐及乳酸盐, 易溶于水, 被广泛的应用于畜牧业的畜禽疾病防治及促生长的饲料添加剂 2006 年欧盟成员国全面禁止使用抗生素作为促生长剂 欧盟对肉制品中泰乐菌素的最高残留量规定为 100 μg/kg 我国农业部在 2002 年公告的 关于动物性食品中兽药最高残留的通知 中, 规定泰乐菌素在鸡 猪 牛的肌肉 脂肪 肝 肾组织中的最高残留量为 200 μg/kg 1. 样品提取 称取 5.0 g( 精确到 0.01 g) 均质好的样品, 置于 50 ml 离心管中, 加入 20 ml 乙腈, 用均质器均质 1 min, 在振荡器上振荡 10 min,4200 rpm 离心 5 min, 取上清液于另一 50 ml 离心管中 ; 再加入 20 ml 乙腈于样品残渣, 重复提取一次, 合并上清液于 50 ml 离心管中, 用乙腈定容至 50 ml 移取 10 ml 提取液, 加入 30 ml 正己烷, 涡旋振荡 2 min, 以 4200 rpm 离心 5 min, 弃去正己烷, 下层提取液于 50 水浴氮气浓缩至近干 用 10 ml 磷酸盐缓冲液分两次溶解残留物, 作为待净化液 2. 净化方法 先将 Cleanert PEP-2 (500 mg/6 ml) 小柱分别用 5 ml 甲醇,5 ml 水,5 ml 磷酸盐缓冲液活化平衡 ; 然后将待净化液过柱 ( 流速控制在 1mL/min); 用 5 ml 水和 5 ml 甲醇 - 水 (2+8) 洗柱, 弃去全部流出液, 小柱用真空泵抽干 30 min; 最后用 10 ml 甲醇洗脱 收集洗脱液于 45 氮气吹干, 用 1 ml 10% 甲醇 - 水溶液溶解残留物, 过 0.22 μm 滤膜后待测 3. 检测方法 3.1 色谱条件色谱柱 :Venusil MP C18, mm,5 μm,100 Å; 流动相 :A 相 -0.1% 甲酸水,B 相 -0.1% 甲酸乙腈柱温 :30 ; 进样量 :10 μl; 梯度洗脱 : 见表 1 时间 (min) 流速 (ml/min) A/% B/%

77 质谱条件离子源 : 电喷雾离子源电喷雾电压 :5500 V 气帘气压力 :15 psi 离子源温度 :550 Q1 Q3 均为单位分辨率质谱参数 ( 见表 2) 扫描方式 : 正离子扫描雾化气压力 :50 psi 辅助气压力 :45 psi 采集方式 : 多反应监测 (MRM) 4. 实验结果 由表 3 可知, 采用固相萃取结合液相色谱 - 串联质谱法检测泰乐菌素, 加标量为 4.0 μg/kg 20.0 μg/kg 加标回收率在 80%~100% 之间,RSD 值小于 10%, 能够满足检测要求 由图 1 和图 2 可看出经 Cleanert PEP-2 固相萃取柱净化, 采用 Venusil MP C18 色谱柱检测得到的泰乐菌素峰形良好, 且保留时间稳定 图 1 泰乐菌素样品加标 4.0 μg/kg 液相色谱 / 串联质谱质量色谱图

78 图 2 泰乐菌素样品加标 20.0 μg/kg 液相色谱 / 串联质谱质量色谱图 结论 : 本实验建立了泰乐菌素残留量的 LC-MS/MS 检测方法, 并结合固相萃取技术对猪肉中泰乐菌素的含量进行了测定 对于加标量为 4.0μg/kg 20.0μg/kg 的样品进行了检测, 回收率在 80%~100%, 符合国标要求 固相萃取方法稳定并且色谱柱重现性良好, 说明本方法能够用于检测动物源性食品中泰乐菌素的残留量 相关标准品 订货号 中文名称 英文名称 CAS# 1ST7806 泰乐菌素 Tylosin

79 订货信息 订货号 产品名称 规格包装 VA Venusil MP C18 5 μm,100å, mm PE Cleanert PEP mg/6 ml,30/pk SH-100 保护柱套 适用于 mm 和 mm VA S 直联式保护柱芯 5 μm,100 Å, mm ml 样品瓶 短螺纹透明带书写 mm,100/pk ml 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔 垫,45.Shore A 1.0 mm,100/pk AS 针式过滤器 (Nylon) 13 mm,0.22 μm,200/pk LZSQ-2ML 一次性注射器 2 ml 两件式无针头,100/pk 乙腈 UV 级 4 L/ 瓶, 色谱纯 AH216-4 正己烷 HPLC 4 L/ 瓶, 色谱纯 S230-4 甲醇 4 L/ 瓶, 色谱纯

80 (GB/T ) 猪肉中四种硝基呋喃类代谢物残留量的 测定 LC-MS/MS 法 案例来源 : 博纳艾杰尔 ; 应用编号 :AF10041 本文使用 Cleanert PEP-2 固相萃取柱 Venusil MP C18 色谱柱和 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪, 遵照中华人民共和国国家标准 猪肉 牛肉 鸡肉 猪肝和水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定 (GB/T ) 提供的方法, 检测猪肉中的 4 种硝基呋喃类代谢物残留 1. 样品信息 : 2. 样品提取及衍生 2.1 提取 称取猪肉样品 2 g( 精确到 0.01 g), 置于 50 ml 棕色离心管中, 加入 15 ml 甲醇 - 水混合 溶液 (v:v=2:1), 均质 1 min, 再用 5 ml 甲醇 - 水混合溶液洗涤刀头, 二者合并 8000 r/min 离心 5 min, 吸取上清液倒掉 注 : 为更好的消除基质效应对检测结果造成的影响, 可加入同位素内标, 采用内标法定量检 测

81 2.2 水解和衍生 ( 注意避光 ) 向棕色离心管中加入 20 ml 0.2 mol/l 的盐酸溶液, 涡旋 1min 使之混合均匀, 之后加入 0.3 ml 浓度为 0.05 mol/l 的 2- 硝基苯甲醛, 混匀, 于 37 温水中避光衍生 16 小时 2.3 净化处理将衍生后的样品冷却至室温, 加入 5 ml 0.1 mol/l 的磷酸氢二钾, 并用 1 mol/l 的氢氧化钠溶液调 ph 约为 7.4, 混合均匀 之后用 8000 r/min 离心 10 min, 以小于 2 ml/min 的流速过 Cleanert PEP-2 小柱 ( 规格为 60 mg/3ml, 用 5 ml 甲醇 5 ml 水活化 ), 并用 10 ml 的水洗涤固相萃取小柱, 然后负压抽干柱子 15 min 用 5 ml 乙酸乙酯洗脱于 20 ml 棕色瓶中 ( 此过程可在 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪上完成, 仪器方法见图 1) 洗脱液于 40 下氮气吹干 用样品定容溶液 (10 ml 乙腈,0.3 ml 的乙酸用水稀释至 100 ml) 定容至 1 ml, 充分溶解, 并用 0.22 μm 滤器过滤 图 1 卓睿全自动固相萃取仪自动净化方法 3. 检测方法 色谱柱 :Venusil MP C mm,5 μm,100 Å 质谱仪 :API 流动相 :A:0.1% 甲酸的水溶液 B:0.1% 甲酸的乙腈溶液流速 :0.2 ml/min 进样量 :5 μl 离子源 : 电喷雾 (ESI), 正离子模式扫描方式 : 多反应监测 (MRM) 表 1 梯度洗脱条件

82 时间 (min) A(%) B(%) 表 2 质谱仪离子源参数 Source/Gas Collision Gas(CAD) 6 Curtain Gas(CUR) 15 Ion Source Gas 1(GS 1) 50 Ion Source Gas 2(GS 2) 50 Ion Spray Voltage(IS) 5500 Temperature(TEM) 600 Interface Heater(ihe) On 表 3 4 种硝基呋喃待测物母离子和子离子参数表 物质名称保留时间 (min) 监测离子对 DP EP CE CXP SEM / / AHD / / AOZ /

83 236.2/ AMOZ / / 实验结果 : 图 2 4 种硝基呋喃代谢物总离子图 图 3 SEM(209/166) 质谱图 图 4 AOZ(236/134) 质谱图

84 图 5 AHD(249/134) 质谱图 : 图 6 AMOZ(335/291) 质谱图

85 表 4 猪肉中 0.5ppb 加标回收实验结果 名称 1(%) 2(%) 3(%) 平均回收率 (%) RSD(%) AMOZ SEM AHD AOZ 实验结论 :Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪整机采用密封避光设计, 用其进行硝基呋喃 代谢物的前处理操作, 全净化过程可在避光条件下进行, 保证检测结果的准确性和重现性 Cleanert PEP-2 固相萃取柱和 Venusil MP C18 色谱柱完全可以满足国标对于硝基呋喃代谢物 的检测要求, 结果准确可靠, 重现性好 相关标准品 订货号中文名称英文名称 CAS# 1ST4205 氨基脲 ; 呋喃西林代谢物 SEM; semicarbazide ST4204A 呋喃妥因代谢物 1-Aminohydantoin hydrochloride ST4201 1ST4203 订货信息 3- 氨基 -2- 噁唑烷酮 ; 呋喃唑酮代谢物 呋喃它酮代谢物 AOZ; 3-Amino-2-oxazolidinone AMOZ;3-Amino-5- morpholinomethyl-2-oxazolidinone 产品名称规格包装订货号 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪 4 通道 24 位 SPE-40 Cleanert PEP-2 固相萃取柱 60 mg/3 ml,50 支 / 包 PE Venusil MP C18 液相色谱柱 mm, 5 μm, 100 Å VA 针式过滤器 (Nylon) 0.22 μm, 直径 13 mm,200 个 /pk AS 一次性无针头注射器 5 ml,100/pk ZSQ-5ML 1.5 ml 样品瓶棕色,100/pk ml 样品瓶盖 100/pk 甲醇 4 4 L/ 箱 AH230-4

86 (GB/T ) 猪肉中四种硝基呋喃类代谢物残留量的 测定 LC-MS/MS 法 案例来源 : 博纳艾杰尔 ; 应用编号 :AF10041 本文使用 Cleanert PEP-2 固相萃取柱 Venusil MP C18 色谱柱和 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪, 遵照中华人民共和国国家标准 猪肉 牛肉 鸡肉 猪肝和水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定 (GB/T ) 提供的方法, 检测猪肉中的 4 种硝基呋喃类代谢物残留 1. 样品信息 : 2. 样品提取及衍生 2.1 提取 称取猪肉样品 2 g( 精确到 0.01 g), 置于 50 ml 棕色离心管中, 加入 15 ml 甲醇 - 水混合 溶液 (v:v=2:1), 均质 1 min, 再用 5 ml 甲醇 - 水混合溶液洗涤刀头, 二者合并 8000 r/min 离心 5 min, 吸取上清液倒掉 注 : 为更好的消除基质效应对检测结果造成的影响, 可加入同位素内标, 采用内标法定量检 测

87 2.2 水解和衍生 ( 注意避光 ) 向棕色离心管中加入 20 ml 0.2 mol/l 的盐酸溶液, 涡旋 1min 使之混合均匀, 之后加入 0.3 ml 浓度为 0.05 mol/l 的 2- 硝基苯甲醛, 混匀, 于 37 温水中避光衍生 16 小时 2.3 净化处理将衍生后的样品冷却至室温, 加入 5 ml 0.1 mol/l 的磷酸氢二钾, 并用 1 mol/l 的氢氧化钠溶液调 ph 约为 7.4, 混合均匀 之后用 8000 r/min 离心 10 min, 以小于 2 ml/min 的流速过 Cleanert PEP-2 小柱 ( 规格为 60 mg/3ml, 用 5 ml 甲醇 5 ml 水活化 ), 并用 10 ml 的水洗涤固相萃取小柱, 然后负压抽干柱子 15 min 用 5 ml 乙酸乙酯洗脱于 20 ml 棕色瓶中 ( 此过程可在 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪上完成, 仪器方法见图 1) 洗脱液于 40 下氮气吹干 用样品定容溶液 (10 ml 乙腈,0.3 ml 的乙酸用水稀释至 100 ml) 定容至 1 ml, 充分溶解, 并用 0.22 μm 滤器过滤 图 1 卓睿全自动固相萃取仪自动净化方法 3. 检测方法 色谱柱 :Venusil MP C mm,5 μm,100 Å 质谱仪 :API 流动相 :A:0.1% 甲酸的水溶液 B:0.1% 甲酸的乙腈溶液 流速 :0.2 ml/min 进样量 :5 μl 离子源 : 电喷雾 (ESI), 正离子模式 扫描方式 : 多反应监测 (MRM) 表 1 梯度洗脱条件

88 时间 (min) A(%) B(%) 表 2 质谱仪离子源参数 Source/Gas Collision Gas(CAD) 6 Curtain Gas(CUR) 15 Ion Source Gas 1(GS 1) 50 Ion Source Gas 2(GS 2) 50 Ion Spray Voltage(IS) 5500 Temperature(TEM) 600 Interface Heater(ihe) On 表 3 4 种硝基呋喃待测物母离子和子离子参数表 物质名称保留时间 (min) 监测离子对 DP EP CE CXP SEM / / AHD / / AOZ /

89 236.2/ AMOZ / / 实验结果 : 图 2 4 种硝基呋喃代谢物总离子图 图 3 SEM(209/166) 质谱图 图 4 AOZ(236/134) 质谱图

90 图 5 AHD(249/134) 质谱图 图 6 AMOZ(335/291) 质谱图 表 4 猪肉中 0.5 ppb 加标回收实验结果

91 名称 1(%) 2(%) 3(%) 平均回收率 (%) RSD(%) AMOZ SEM AHD AOZ 实验结论 :Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪整机采用密封避光设计, 用其进行硝基呋喃 代谢物的前处理操作, 全净化过程可在避光条件下进行, 保证检测结果的准确性和重现性 Cleanert PEP-2 固相萃取柱和 Venusil MP C18 色谱柱完全可以满足国标对于硝基呋喃代谢物 的检测要求, 结果准确可靠, 重现性好 相关标准品 订货号中文名称英文名称 CAS# 1ST4205 氨基脲 ; 呋喃西林代谢物 SEM; semicarbazide ST4204A 呋喃妥因代谢物 1-Aminohydantoin hydrochloride ST4201 1ST4203 订货信息 3- 氨基 -2- 噁唑烷酮 ; 呋喃唑酮代谢物 呋喃它酮代谢物 AOZ; 3-Amino-2-oxazolidinone AMOZ;3-Amino-5- morpholinomethyl-2-oxazolidinone 产品名称规格包装订货号 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪 4 通道 24 位 SPE-40 Cleanert PEP-2 固相萃取柱 60 mg/3 ml,50 支 / 包 PE Venusil MP C18 液相色谱柱 mm, 5 μm, 100 Å VA 针式过滤器 (Nylon) 0.22 μm, 直径 13 mm,200 个 /pk AS 一次性无针头注射器 5 ml,100/pk ZSQ-5ML 1.5 ml 样品瓶棕色,100/pk ml 样品瓶盖 100/pk 甲醇 4 4 L/ 箱 AH230-4

92 水产品 进口肉中土霉素 四环素 金霉素含量检测方法 案例来源 : 博纳艾杰尔 ; 应用编号 :MF10007 (1) 样品提取 称取 5 g 经匀浆处理的样品于 100 ml 离心管内, 分别加入含有 EDTA2Na 的柠檬酸缓 冲液 30 ml 20 ml, 混合震荡提取, 合并上清液 加入 20 ml 正己烷和上清液于分液漏斗 中, 充分混合震荡 5 min, 合并下层待净化 含有 EDTA2Na 柠檬酸缓冲液的配制 : 取 0.1 mol/l 柠檬酸缓冲溶液 307 ml 和 0.5 mol/l 磷酸氢二钠缓冲溶液 193 ml 混合均匀, 向其中 加入 1.86 g EDTA2Na, 溶解后作为样品提取液 (2) 净化方法 管 把 Cleanert PS 固相萃取柱置于 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪, 上述提取液转移至上样 设置萃取程序如下 :10 ml 甲醇,10 ml 水,5 ml EDTA2Na 活化 PS 柱, 上样管中溶 液全部上样,10 ml 水淋洗小柱, 空气抽干, 最后 10 ml 甲醇洗脱目标物, 收集 以上操作 步骤流速均为 1 ml/min 浓缩 : 在旋转蒸发仪上减压浓缩, 温度小于 40 定容 : 加入 1.0 ml 的 1.36% 的磷酸二氢钾溶液, 将定容液进行 HPLC 分析 (3) 色谱条件 色谱柱 :Venusil MP C18,5 μm, mm 流动相 :A:B=77:23 A: 咪唑缓冲液 称取 咪,10.72 乙酸 镁,0.37 EDTA2Na 溶于 800 ml 水中, 用冰 乙酸调 ph 到 7.2, 加水定容到 1000 ml. B: 乙腈 (4) 实验结果 : 名称回收率 -1 回收率 -2 土霉素 128% 137% 四环素 91.80% 97.40% 金霉素 88.50% 87.10% 强力霉素 97.30% 95.30% (5) 相关标准品

93 订货号 中文名称 英文名称 CAS# 1ST4111 土霉素 Oxytetracycline ST4102 四环素 Tetracycline ST4110 金霉素 Chlortetracycline ST4122 强力霉素 Doxycycline (6) 订货信息 产品名称 规格包装 订货号 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪 4 通道 24 位 SPE-40 LC-10F 高效液相色谱仪 CC-100 分析型色谱柱温箱 10 ml/min, 梯度系统, nm 双波长检测器温控范围 :5-70 ; 可安装 1-2 支 300 mm 色谱柱 FL-LC010GS CC-100 Cleanert PS 固相萃取柱 200 mg/6 ml, 30 支 /pk PS2006 Venusil MP C18 液相色谱柱 mm, 5 μm, 100 Å VA 针式过滤器 (PTFE 亲水 ) 0.22 μm, 直径 13 mm,200 个 /pk AS 一次性无针头注射器 5 ml,100/pk ZSQ-5ML 1.5mL 样品瓶 短螺纹透明带书写 100/pk mm, ml 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫,45.Shore A 1.0 mm,100/pk 甲醇 4 4 L/ 箱 AH230-4 乙腈 4 4 L/ 箱 AH015-4

94 动物源食品中玉米赤霉醇类药物残留检测 (LC-MS/MS 法 ) 案例来源 : 博纳艾杰尔 ; 应用编号 :MF 样品提取 1.1 肌肉组织样品 提取 : 称取 5 g(±0.05 g) 于 50 ml 离心管中, 加甲醇 15 ml, 涡旋 1 min,4000 r/min 离 心 10 min, 取上清液于另一离心管中 重复提取一次, 合并两次提取液 加正已烷 20 ml, 手摇 20 次,3000 r/min 离心 5 min, 弃上层正已烷 再加正已烷 20 ml 重复脱脂一次 下层 转至 100 ml 鸡心瓶中,50 旋蒸至近干, 加乙酸乙酯 5 ml, 涡动 1 min, 静置 10 s, 上清 液转移至同一个离心管 再用正已烷 10 ml 洗涤鸡心瓶一次, 合并三次残余物溶解液, 备 用 净化 : 氨基柱上加无水硫酸钠 2 g, 用玻璃棒敲匀 依次用乙酸乙酯和正已烷各 5 ml 活 化, 取备用液全部过柱, 再依次用正已烷 正已烷 - 乙酸乙酯 (60+40,v/v) 各 5 ml 淋洗 依 次用正已烷 - 乙酸乙酯 (20+80,V/V) 和乙酸乙酯各 4 ml 洗脱, 合并两次洗脱液,50 氮气 吹干 浓缩 : 残余物中加乙腈 0.5 ml, 涡动 1 min, 加水 0.5 ml, 混匀, 过 0.2 μm 有机滤膜, 供液相色谱 - 串联质谱仪测定 1.2 肝脏组织样品 称取 5 g(±0.05 g) 于 50 ml 离心管中, 加甲醇 10 ml, 涡旋 1 min,4000 r/min 离心 5 min, 取上清液于另一离心管中 重复提取一次, 合并两次提取液 加正已烷 10 ml, 手摇 20 次, 3000 r/min 离心 5min, 弃上层正已烷 下层于 50 氮气吹干, 加乙酸乙酯 5 ml, 涡动 1 min, 再加正已烷 20 ml 涡动 30s,4000 r/min 离心 5 min, 取上清液备用 净化 : 氨基柱上加无水硫酸钠 2 g, 用玻璃棒敲匀 依次用乙酸乙酯和正已烷各 5 ml 活 化, 取备用液全部过柱, 再依次用正已烷 正已烷 - 乙酸乙酯 (45+55,v/v) 各 5 ml 淋洗 依 次用正已烷 - 乙酸乙酯 (20+80,V/V) 和 2% 甲醇乙酸乙酯各 5 ml 洗脱, 合并两次洗脱液, 50 氮气吹干 浓缩 : 残余物中加乙腈 0.5 ml, 涡动 1 min, 加水 0.5 ml, 混匀, 加正已烷 2 ml, 涡 动 30 s,9000 r/min 离心 5 min, 取下层清液, 过 0.22 μm 滤器, 供液相色谱 - 串联质谱仪测 定 1.3 牛奶样品 提取 : 量取 5.0 ml 试料于 50 ml 离心管中, 加 18% 的硫酸溶液 0.1 ml, 涡匀, 静置 10 min, 加正已烷 10 ml 和乙腈 20 ml,300 r/min 振荡 10 min,4000 r/min 离心 10 min, 弃正 已烷层 取提取液 12.5 ml 于离心管中,50 氮吹至小于 0.1 ml 加水 10 ml, 用 5 mol/lnaoh 调节 Ph 值至 11,9000 r/min 离心 5 min, 备用 净化 :Cleanert PAX 固相萃取柱依次用甲醇 水各 2 ml 活化和平衡, 将备用液过柱, 依次用甲醇 - 氨水 - 水 (5+5+90,V/V/V)1 ml 和甲醇 0.5 ml 洗涤, 用 2% 乙酸乙腈 4 ml 洗脱,