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鸭殷顾
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1 2019 年 1 月 Vol.37 No.1 January 2019 Chinese Journal of Chromatography 46 ~ 53 南京海关动植物与食品检测中心专栏技术与应用 DOI: / SP.J 液相色谱串联质谱法检测雄蜂蛹粉中 50 种抗生素残留杨雯筌 1, 张晓燕 1, 姚倩 1, 周杨娟 2, 胡亚文 2, 王茂华 3 3, 唐茂芝 (1. 南京海关动植物与食品检测中心, 江苏南京 ; 2. 东南大学成贤学院, 江苏南京 ; 3. 国家认证认可监督管理委员会认证认可技术研究所, 北京 ) 摘要 : 建立了液相色谱串联质谱检测雄蜂蛹粉中 50 种抗生素残留 ( 大环内酯类喹诺酮类磺胺类四环素类硝基咪唑类林可霉素和氯霉素 ) 的方法样品经高氯酸溶液和醋酸铅溶液提取沉淀蛋白质, 清液用磷酸氢二钾溶液调节 ph 值至 8, 经固相萃取净化后进行仪器分析采用多反应监测正离子或负离子模式检测, 可以一次完成对雄蜂蛹粉中 50 种目标化合物的定性和定量测定 50 种抗生素的加标回收率为 70 2% ~ 118 3%, 相对标准偏差 (RSD) 为 1 8% ~ 13 6% 该方法操作简便, 灵敏度高, 适用于雄蜂蛹粉中多种兽药残留的分析确证关键词 : 液相色谱串联质谱 ; 固相萃取 ; 抗生素残留 ; 雄蜂蛹粉中图分类号 :O658 文献标识码 :A 文章编号 : (2019) Determination of 50 antibiotic residues in drone pupa powder by liquid chromatography tandem mass spectrometry YANG Wenquan 1, ZHANG Xiaoyan 1, YAO Qian 1, ZHOU Yangjuan 2, HU Yawen 2, WANG Maohua 3, TANG Maozhi 3 (1. Animal, Plant and Food Inspection Center, Nanjing Customs, Nanjing , China; 2. Southeast University Chengxian College, Nanjing , China; 3. China Certification &Accreditation Institute, Beijing , China) Abstract: A method was established for the determination of 50 kinds of antibiotic residues ( macrolides, quinolones, sulfonamides, tetracyclines, nitroimidazoles, lincomycin and chlor amphenicol) in drone pupa powder by liquid chromatography tandem mass spectrometry ( LC MS / MS). The samples were extracted with perchloric acid and lead acetate solution, and the protein was precipitated. The extraction solution was adjusted to ph 8 using dipotassium hydro gen phosphate, then the solution was purified by solid phase extraction ( SPE) and analyzed by LC MS / MS. The target compounds in the drone pupa powder were determined quantitatively and quantitatively by using multiple reaction monitoring and positive ion or negative ion modes. The recoveries of the 50 antibiotics were in the range of 70 2% %, and the relative stand ard deviations (RSDs) were 1 8% -13 6%. The method is simple, selective, and can be suitable for the analysis and confirmation of veterinary drug residues in drone pupa powder. Key words: liquid chromatography tandem mass spectrometry ( LC MS / MS ); solid phase extraction ( SPE); antibiotic residues; drone pupa powder 蜜蜂在生长过程中可能会被各种幼虫病困扰, 因此养蜂者常使用一些抗生素来控制幼虫病 [1], 国外允许使用的抗生素有红霉素 [2] 磺胺类药物 [3] 林可霉素 [4] [4] [5] 泰乐菌素和四环素类药物等, 我国除了上述药物, 还会使用喹诺酮类药物 [6] 由于近几年极端气候的影响以及养蜂者缺乏科学的用药收稿日期 : 通讯联系人.Tel:(025) ,E mail:zhangxiaoyan8196@ 126.com. 基金项目 : 国家重点研发计划课题 (2018YFF ). Foundation item: National Key Research and Development Program ( No. 2018YFF ).

2 第 1 期杨雯筌, 等 : 液相色谱串联质谱法检测雄蜂蛹粉中 50 种抗生素残留 47 知识, 再加上对蜂药监管的相对薄弱, 蜂产品中抗生素超标现象时有发生 [7] 蜂产品中抗生素的残留引发人类急性中毒的可能性很小, 但长期低剂量摄入, 可能会产生慢性和积蓄性的毒性, 如三致毒性 ( 致癌致畸致突变 ) 和免疫毒性等, 其对健康和环境的危害具有隐蔽性, 易造成实质性和难以逆转的危害 [8] 雄蜂蛹粉作为蜂蜜蜂王浆之后的第三代蜂产品, 具有高蛋白低脂肪的特点我国蜂蛹资源丰富, 在湖北四川安徽等多地已开发出雄蜂蛹粉产品 [9-11], 国内外市场对其需求量也逐渐增加但我国蜂产品仍然存在抗生素残留的问题, 欧盟日本美国等都提高了从我国进口蜂产品时药物残留的质检标准目前我国还没有适用于雄蜂蛹粉中抗生素检测的方法, 限制了雄蜂蛹粉出口市场的发展因此建立简便有效的检测方法迫在眉睫检测抗生素的方法有微生物法 [12] 酶联免疫法 [13] 气相色谱质谱法 [14] 液相色谱串联质谱 [15-19] 法等微生物法简单快速, 成本低, 但特异性差, 易受其他抗生素影响, 且灵敏度不高酶联免疫法虽具有灵敏度高前处理简单测定速度快等特点, 但检测结果存在假阳性现象, 且不适用于多类药物残留的同时检测多种抗生素的高通量检测也是目前检测方法的发展方向之一 [20,21], 目前常用的测定方法为液相色谱质谱法和气相色谱质谱法, 由于气相色谱质谱法存在前处理步骤繁琐, 有机试剂消耗量大, 测定周期长等缺点 [22], 因此本文采用液相色谱串联质谱法, 选择蜂产品中常见的抗生素种类, 并针对雄蜂蛹粉蛋白质含量高的特点, 采用混合蛋白沉淀剂净化提取液, 最终建立了雄蜂蛹粉中大环内酯类喹诺酮类磺胺类四环素类硝基咪唑类林可霉素和氯霉素等 50 种抗生素残留的检测方法, 具有操作简便灵敏度高回收率稳定测定周期短等优点 1 实验部分 1.1 仪器试剂与材料 TSQ Vantage 三重四极杆质谱联用仪, 配 Sur veyor 液相色谱系统 ( 美国 Thermo 公司 ); XW 80A 涡旋混匀器 ( 上海医科大学仪器厂 ); 2 16K 离心机 ( 美国 Sigma 公司 ); AutoVAP S60 氮吹仪 ( 美国 ATR 公司 ); Smart N15VF 超纯水器 ( 上海力康公司 ); SPE 432 全自动固相萃取仪 ( 北京普立泰科公司 ); OASIS HLB 固相萃取柱 (60 mg / 3 ml, 美国 Waters 公司 ) 甲醇甲酸 ( 以上为色谱纯 ) 醋酸三水合磷酸氢二钾三水合乙酸铅 ( 以上为分析纯 ) 高氯酸 ( 优级纯 ) 和 50 种抗生素标准品 ( 纯度 98% ~ 99%) 均购自德国 Dr. Ehrenstorfer 公司 1.2 标准溶液配制混合标准储备液 : 准确称取适量的标准品, 分别用甲醇配制成 1 0 g / L 的 50 种抗生素混合标准储备液 ( 喹诺酮类抗生素, 加入 100 μl 0 5 mol / L NaOH 溶液助溶 ) 混合标准工作液 : 准确吸取一定量的 1 0 g / L 混合标准储备液, 分别用甲醇水 (3 7, v / v) 溶液稀释成适当浓度的 50 种抗生素混合标准工作液, 现用现配 1.3 样品前处理准确称取雄蜂蛹粉样品 (1 00±0 05) g, 置于 50 ml 塑料离心管中, 加入 2 ml 水, 涡旋, 加入 10 ml 1% ( 体积分数 ) 高氯酸溶液和 5 ml 4% ( 质量分数 ) 醋酸铅溶液, 涡旋混匀 ; 以 r / min 离心 3 min, 上层清液转移至 50 ml 塑料离心管中, 再加入 1 mol / L 磷酸氢二钾溶液调节溶液 ph 值至 8, 以 r / min 离心 3 min, 过滤, 滤液转移至 50 ml 试管中, 在全自动固相萃取仪上净化 ( 方法见表 1), 收集洗脱液, 置于 10 ml 试管中, 于 45 用氮气吹干仪吹干, 加入 1 0 ml 甲醇水 (3 7, v / v) 溶液溶解残渣, 过 0 45 μm 有机相和水相串联滤膜, 待液相色谱串联质谱仪测定 Table 1 Step 表 1 全自动固相萃取方法 Method of automatic solid phase extraction Solvent Volume / ml Speed / (ml / min) Drying volume / ml Activation methanol water Sample upper sample Washing water Elution methanol 分析条件氯霉素色谱柱 :Agilent Polaris C 18 柱 (100 mm 2 0 mm, 5 μm); 流速 :0 25 ml / min; 流动相 :A 为水, B 为甲醇梯度洗脱程序 :0 ~ 4 0 min, 30% B ~ 90% B; 4 0 ~ 5 0 min, 90% B; 5 0 ~ 5 1 min, 90% B ~ 30% B; 5 1 ~ 6 5 min, 30% B 进样量 :25 μl

3 48 色谱第 37 卷离子源 : 电喷雾电离 ( ESI) 源 ; 扫描方式 : 负离子模式 ; 毛细管温度 :350 ; 喷射电压 :2 0 kv; 鞘气压力 :0 38 MPa; 辅助气流速 :2 L / min 其他抗生素色谱柱 :Agilent Polaris C 18 柱 (100 mm 2 0 mm, 5 μm); 流速 : 0 25 ml / min; 流动相 : A 为 0 1% (v / v) 甲酸水溶液,B 为甲醇梯度洗脱程序 : 0 ~ 1 0 min, 10% B; 1 0 ~ 3 0 min, 10% B ~ 30% B; 3 0~4 0 min, 30% B; 4 0 ~ 6 0 min, 30% B ~ 95% B; 6 0 ~ 9 4 min, 95% B; 9 4 ~ 9 5 min, 95% B ~ 10% B; 9 5 ~ 11 0 min, 10% B 进样量 :25 μl 离子源 :ESI 源 ; 扫描方式 : 正离子模式 ; 毛细管温度 :350 ; 喷射电压 : 2 5 kv; 鞘气压力 : 0 38 MPa; 辅助气流速 :3 3 L / min 50 种抗生素的保留时间母离子子离子和碰撞能量见表 2 Type Compound 表 2 50 种抗生素的质谱参数 Table 2 MS parameters of the 50 antibiotics Retention time / min Parent ion (m / z) Product ions (m / z) Collision energies / ev Quinolones ciprofloxacin ( 环丙沙星 ) , , 16 danofloxacin ( 丹诺沙星 ) , , 22 difloxacin ( 双氟沙星 ) , , 20 enoxacin ( 依诺沙星 ) , , 18 enrofloxacin ( 恩诺沙星 ) , , 20 fleroxacin ( 氟罗沙星 ) , , 21 flumequine ( 氟甲喹 ) , , 18 marbofloxacin ( 马波沙星 ) , , 25 nalidixic acid ( 萘啶酸 ) , , 15 norfloxacin ( 诺氟沙星 ) , , 28 ofloxacin ( 氧氟沙星 ) , , 30 orbifloxacin ( 奥比沙星 ) , , 19 oxolinic acid ( 恶喹酸 ) , , 33 pefloxacin ( 培氟沙星 ) , , 20 sarafloxacin ( 沙拉沙星 ) , , 23 sparfloxacin ( 司帕沙星 ) , , 22 Macrolides clindamycin ( 氯林可霉素 ) , , 15 erythromycin ( 红霉素 ) , , 17 josamycin ( 交沙霉素 ) , , 22 kitasamycin ( 北里霉素 ) , , 21 oleandomycin ( 竹桃霉素 ) , , 15 roxithromycin ( 罗红霉素 ) , , 19 spiramycin ( 螺旋霉素 ) , , 12 tilmicosin ( 替米考星 ) , , 25 tylosin ( 泰乐菌素 ) , , 29 Sulfonamides sulfadiazine ( 磺胺嘧啶 ) , , 14 sulfadimethoxine ( 磺胺间二甲氧嘧啶 ) , , 15 sulfamerazine ( 磺胺甲基嘧啶 ) , , 16 sulfameter ( 磺胺对甲氧嘧啶 ) , , 14 sulfamethazine ( 磺胺二甲基嘧啶 ) , , 23 sulfamethizole ( 磺胺甲噻二唑 ) , , 18 sulfamethoxazole ( 磺胺甲恶唑 ) , , 16 sulfamethoxine ( 磺胺邻二甲氧嘧啶 ) , , 15 sulfamethoxypyridazine ( 磺胺甲氧哒嗪 ) , , 14 sulfamonomethoxine ( 磺胺间甲氧嘧啶 ) , , 14 sulfapyridine ( 磺胺吡啶 ) , , 16 sulfaquinoxaline ( 磺胺喹恶啉 ) , , 18 sulfathiazole ( 磺胺噻唑 ) , , 16 sulfisoxazole ( 磺胺二甲异恶唑 ) , , 18 trimethoprim ( 三甲氧苄氨嘧啶 ) , , 29 sulfachlorpyridazine ( 磺胺氯哒嗪 ) , , 18

4 第 1 期杨雯筌, 等 : 液相色谱串联质谱法检测雄蜂蛹粉中 50 种抗生素残留 49 Type Compound 表 2 ( 续 ) Table 2 ( Continued) Retention time / min Parent ion (m / z) Product ions (m / z) Collision energies / ev Tetracyclines tetracycline ( 四环素 ) , , 16 oxytetracycline ( 土霉素 ) , , 18 chlortetracycline ( 金霉素 ) , , 20 doxycycline ( 强力霉素 ) , , 15 Nitroimidazoles metronidazole ( 甲硝唑 ) , , 15 dimetridazole ( 二甲硝咪唑 ) , , 10 ronidazole ( 洛硝哒唑 ) , , 12 Other lincomycin ( 林可霉素 ) , , 14 Quantitative ion. 2 结果与讨论 2.1 质谱条件的优化 chloramphenicol ( 氯霉素 ) , , 18 根据欧盟 2002 / 657 / EC 指令, 质谱确证方法必须达到 4 个确证点的要求, 采用低分辨液相色谱串联质谱法检测时, 应在确定母离子的基础上选择两个以上的子离子以分子离子为母离子进行二级质谱扫描, 最后采集全扫描的二级质谱图, 得到碎片离子信息, 然后再对得到的二级质谱参数, 如碰撞能量进行优化, 使定性离子与定量离子产生的离子对强度达到最大根据此方法, 得到 50 种抗生素的最佳质谱参数, 结果见表提取试剂的选择由于雄蜂蛹粉中蛋白质含量较高, 前处理过程中需尽可能地将蛋白质去除, 以便后续净化本实验首先选择同时具有沉淀蛋白质效果的高氯酸和三氯乙酸溶液作为提取试剂, 比较了两种溶液的提取效果, 结果发现三氯乙酸溶液沉淀蛋白质的效果较好, 但检测后发现雄蜂蛹粉中四环素类抗生素中的四环素金霉素土霉素和大环内酯类抗生素中的红霉素北里霉素泰乐菌素无回收 ; 采用高氯酸溶液提取, 在前处理过程中发现, 提取离心后的滤液略有浑浊, 净化时易出现固相萃取小柱堵塞的情况 ; 而提高酸的浓度会导致后期调节 ph 值时要加入更多的溶液为使蛋白质尽可能沉淀完全且不影响后续调节 ph 值的操作, 选择醋酸铅以达到进一步去除蛋白质的目的, 结果表明, 采用高氯酸和醋酸铅结合的方法, 可以获得较清澈的液体, 而且不影响固相萃取的净化效率比较了不同体积 ( 和 20 ml) 的 1% (v / v) 高氯酸溶液对雄蜂蛹粉沉淀蛋白质的效果, 结果发现, 采用 10 ml 的 1% (v / v) 高氯酸溶液时可以获得相对清澈的溶液实验还比较了不同质量分数 ( 2% 4% 6% 和 8%) 的醋酸铅溶液沉淀雄蜂蛹粉中蛋白质的效果, 发现采用质量分数为 4% 的醋酸铅溶液就已经可以达到沉淀蛋白质的效果同时比较了不同体积 ( 和 20 ml) 的 4% ( 质量分数 ) 醋酸铅溶液沉淀蛋白质的效果, 结果发现, 采用 5 ml 4% ( 质量分数 ) 醋酸铅溶液时沉淀效果最佳 2.3 提取液 ph 值的优化大环内酯类喹诺酮类磺胺类四环素类硝基咪唑类林可霉素和氯霉素等 50 种抗生素的化学性质相差较大, 各化合物酸碱度不一因此实验比较了不同 ph 值 (ph 3 ~ 9) 的提取液对各化合物提取效率的影响 ( 见图 1) 由图 1 可知, 不同 ph 值提取液对氯霉素四环素类抗生素和红霉素影响最大, 这可能与氯霉素和四环素类抗生素在强酸和强碱溶液中易分解红霉素在酸性条件下不稳定的因素有关综合考虑, 将提取液的 ph 值设为 8 图 1 不同 ph 值提取液对目标化合物提取效率的影响 Fig. 1 Effect of different ph values of extraction solution on the extraction efficiencies of the target compounds

5 50 色谱第 37 卷 2.4 线性范围与检出限对系列混合标准工作液进行测定, 对目标化合物的峰面积 (Y) 和对应的质量浓度 (X, μg / L) 进行线性回归, 得到 50 种抗生素标准曲线的线性方程相关系数 (r) 检出限(LOD) 和定量限 (LOQ), 结果见表 3 50 种抗生素在各自范围内线性关系良好, 相关系数均 >0 99 喹诺酮类抗生素的 LOD 为 0 1 μg / kg, LOQ 为 5 0 μg / kg; 林可霉素和大环内酯类磺胺类硝基咪唑类抗生素的 LOD 为 0 2 μg / kg, LOQ 为 10 0 μg / kg; 四环素类抗生素的 LOD 为 0 4 μg / kg, LOQ 为 20 0 μg / kg; 氯霉素的 LOD 为 μg / kg, LOQ 为 0 3 μg / kg 表 3 50 种抗生素的线性方程线性范围相关系数检出限和定量限 Table 3 Linear equations, linear ranges, correlation coefficients ( r), limits of detection ( LODs) and limits of quantification ( LOQs) of the 50 antibiotics Type Compound Linear equation Linear range / (μg / L) r LOD (S / N 3) / (μg / kg) LOQ (S / N 10) / (μg / kg) Quinolones ciprofloxacin Y = X danofloxacin Y = X difloxacin Y = X enoxacin Y = X enrofloxacin Y = X fleroxacin Y = X flumequine Y = X marbofloxacin Y = X nalidixic acid Y = X norfloxacin Y = X ofloxacin Y = X orbifloxacin Y = X oxolinic acid Y = X pefloxacin Y = X sarafloxacin Y = X sparfloxacin Y = X Macrolides clindamycin Y = X erythromycin Y = X josamycin Y = X kitasamycin Y = X oleandomycin Y = X roxithromycin Y = X spiramycin Y = X tilmicosin Y = X tylosin Y = X Sulfonamides sulfadiazine Y = X sulfadimethoxine Y = X sulfamerazine Y = X sulfameter Y = X sulfamethazine Y = X sulfamethizole Y = X sulfamethoxazole Y = X sulfamethoxine Y = X sulfamethoxypyridazine Y = X sulfamonomethoxine Y = X sulfapyridine Y = X sulfaquinoxaline Y = X sulfathiazole Y = X sulfisoxazole Y = X trimethoprim Y = X sulfachlorpyridazine Y = X

6 第 1 期杨雯筌, 等 : 液相色谱串联质谱法检测雄蜂蛹粉中 50 种抗生素残留 51 Type Compound Linear equation 表 3 ( 续 ) Table 3 ( Continued) Linear range / (μg / L) r LOD (S / N 3) / (μg / kg) LOQ (S / N 10) / (μg / kg) Tetracyclines tetracycline Y = X oxytetracycline Y = X chlortetracycline Y = X doxycycline Y = X Nitroimidazoles metronidazole Y = X dimetridazole Y = X ronidazole Y = X Other lincomycin Y = X chloramphenicol Y = X Y: peak areas; X: mass concentration, μg / L. 2.5 回收率和精密度本实验对 50 种目标化合物进行了 3 个添加水平的加标回收试验, 每个水平做 6 个平行样品, 计算 50 种目标化合物的加标回收率及相对标准偏差, 结果见表 4 由表 4 可以看出,50 种抗生素的平均加标回收率为 70 2% ~ 118 3%, 相对标准偏差为 1 8% ~ 13 6%, 满足日常检测的需求 Compound 表 4 50 种抗生素的平均回收率和相对标准偏差 (n = 6) Table 4 Average recoveries and relative standard deviations ( RSDs) of the 50 antibiotics ( n = 6) Low spiked level Medium spiked level High spiked level Ciprofloxacin Danofloxacin Difloxacin Enoxacin Enrofloxacin Fleroxacin Flumequine Marbofloxacin Nalidixic acid Norfloxacin Ofloxacin Orbifloxacin Oxolinic acid Pefloxacin Sarafloxacin Sparfloxacin Clindamycin Erythromycin Josamycin Kitasamycin Oleandomycin Roxithromycin Spiramycin Tilmicosin Tylosin Sulfadiazine Sulfadimethoxine Sulfamerazine Sulfameter Sulfamethazine Sulfamethizole

7 52 色谱第 37 卷 Compound Low spiked level 表 4 ( 续 ) Table 4 ( Continued) Medium spiked level High spiked level Sulfamethoxazole Sulfamethoxine Sulfamethoxypyridazine Sulfamonomethoxine Sulfapyridine Sulfaquinoxaline Sulfathiazole Sulfisoxazole Trimethoprim Sulfachlorpyridazine Tetracycline Oxytetracycline Chlortetracycline Doxycycline Metronidazole Dimetridazole Ronidazole Lincomycin Chloramphenicol Low, medium and high spiked levels: 5 0, 10 0 and 25 0 μg / kg for quinolones; 10 0, 20 0 and 50 0 μg / kg for lincomycin, macrol ides, sulfonamides and nitroimidazoles; 20 0, 40 0 and μg / kg for tetracyclines; 0 3, 0 6 and 1 5 μg / kg for chloramphenicol. 2.6 实际样品检测在 2017 年度共检测雄蜂蛹粉样品 50 批次, 其中 5 批次检出土霉素, 含量为 21 0 ~ 40 0 μg / kg, 阳性率为 10%, 说明雄蜂蛹粉中存在抗生素污染风险, 建立雄蜂蛹粉中多种抗生素残留检测的方法迫在眉睫 3 结论建立了液相色谱串联质谱检测雄蜂蛹粉中 50 种抗生素残留的分析方法该法简便快捷, 可以实现雄蜂蛹粉中多种抗生素的快速测定, 能够满足日常分析检测的需要参考文献 : [1] Cao H F, Qin T, Zou J P. Shanxi Agricultural Economy, 2018(11): 102 曹洪芙, 秦涛, 邹锦鹏. 山西农经, 2018(11): 102 [2] Thompson T S, van den Heever J P. Food Chem, 2012, 133 (4): 1510 [3] Enrique V, Alejandro M, Isabel P, et al. Biosens Bioelec tron, 2013, 43: 211 [4] Thompson T S, Noot D K, Calvert J, et al. Rapid Commun Mass Spectrom, 2005, 19: 309 [5] Naumann G, Mahrt E, Himmelreich A, et al. J Verbr Leb ensm, 2012, 7: 35 [6] Sun Q Y, Zhang L, Deng R, et al. The Chinese Lives Tock and Poultry Breeding, 2013(7): 35 孙启跃, 张麟, 邓蓉, 等. 中国畜禽种业, 2013(7): 35 [7] Liu Q, Luo H X, Ju R H, et al. Apiculture of China, 2015 (2): 51 柳青, 罗红霞, 句荣辉, 等. 中国蜂业, 2015(2): 51 [8] Zhou F. Journal of Xinyang Agricultural College, 2010, 20 (2): 32 周枫. 信阳农业高等专科学校学报, 2010, 20(2): 132 [9] Lan F M, Yao Z L. Apiculture of China, 2018(3): 28 兰凤明, 姚真良. 中国蜂业, 2018(3): 28 [10] Yan Z L. Journal of Bee, 2018(7): 23 颜志立. 蜜蜂杂志, 2018(7): 23 [11] Yang A J, Geng Y X. Apiculture of China, 2017(11): 28 杨岸军, 耿玉兴. 中国蜂业, 2017(11): 28 [12] Takaqi R, Fukuda J, Nagata K, et al. Analyst, 2013, 138 (4): 1000 [13] Huet A C, Charlier C, Tittlemier S A, et al. J Agric Food Chem, 2006, 54(8): 2822 [14] Luzardo O P, Ruiz Suárez N, Almeida González M, et al. Anal Bionanal Chem, 2013, 405(29): 9523 [15] Wang H, Zhao L, Yang H, et al. Anal Methods, 2014, 6 (5): 1545 [16] Wang H, Zhou X J, Liu Y Q. J Agric Food Chem, 2011, 59 (8): 3532 [17] Du J, Zhao H X, Chen J W. Chinese Journal of Chromatog raphy, 2015, 33(4): 348 杜鹃, 赵红霞, 陈景文. 色谱, 2015, 33(4): 348 [18] Zhang X Y, Cai X X. Chinese Journal of Chromatography, 2014, 32(7): 693

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g ml 10% ph 色谱条件 kinetex C μm 100 A 4. 6 mm 150 mm 25 5 μl A B 10 mmol /L ml /min

g ml 10% ph 色谱条件 kinetex C μm 100 A 4. 6 mm 150 mm 25 5 μl A B 10 mmol /L ml /min 25 4 2013 8 监测技术 5 1 2 1 ( 1. 江苏省疾病预防控制中心, 江苏南京 210009; 2. 南京医科大学第二附属医院, 江苏南京 210029) 5 Phenomenex kinetex C 18 2. 6 μm 4. 6 mm 150 mm 10 mmol /L ph 2. 5 + 60 40 DAD 280 nm 5 20. 0 mg /L ~ 100 mg /L 0.