2 甲基氯硅烷 TMCS=99:1) 以及 8 种 β- 受体激动剂 ( 氯丙那林马布特罗齐帕特罗班布特罗盐酸克伦特罗沙丁胺醇莱克多巴胺特布他林 ) 购于上海安普科学仪器有限公司, 色谱纯甲苯甲醇由 ThermoFisher 提供反应试剂及 β- 受体激动剂标样的配制乙酸钠缓冲溶液

Size: px

Start display at page:

Download "2 甲基氯硅烷 TMCS=99:1) 以及 8 种 β- 受体激动剂 ( 氯丙那林马布特罗齐帕特罗班布特罗盐酸克伦特罗沙丁胺醇莱克多巴胺特布他林 ) 购于上海安普科学仪器有限公司, 色谱纯甲苯甲醇由 ThermoFisher 提供反应试剂及 β- 受体激动剂标样的配制乙酸钠缓冲溶液"

馗尤
5 years ago
Views:

GC-MS 衍生化法测定饲料中 8 种 β- 受体激动剂张学彬胡学桥余翀天梁立娜赛默飞世尔科技 ( 中国 ) 有限公司 Application Notes_C_GCMS-34 关键词饲料 ;β- 受体激动剂 ;GC-MS 摘要本文采用乙酸钠缓冲溶液提取硅烷化试剂衍生 GCMS 检测, 建立了饲料中 8 种 β- 受体激动剂的分析方法考察了在该方法下, 仪器对 8 种 β-

1 GC-MS 衍生化法测定饲料中 8 种 β- 受体激动剂张学彬胡学桥余翀天梁立娜赛默飞世尔科技 ( 中国 ) 有限公司 Application Notes_C_GCMS-34 关键词饲料 ;β- 受体激动剂 ;GC-MS 摘要本文采用乙酸钠缓冲溶液提取硅烷化试剂衍生 GCMS 检测, 建立了饲料中 8 种 β- 受体激动剂的分析方法考察了在该方法下, 仪器对 8 种 β- 受体激动剂检测的线性重复性以及方法的加标回收性能结果表明 :Thermo GC- ISQ 对 8 种 β- 受体激动剂在浓度为 0.01 ppm-1ppm 范围内检测的线性均大于 0.997; 以 0.1 ppm 的混合标样, 平行测定 6 次的 RSD 小于 6.88%, 对各激动剂的检测限均低于农业部 1063 号公告规定值 ; 且采用同一台仪器, 对系列浓度标样样品以及加标样品在 2 天内反复测定 5 次, 测定值的 RSD 除氯丙那林和齐帕特罗分别在 9.65% 和 13.62% 外, 其余均小于 6.68%, 表明了 Thermo GC-ISQ 对饲料中 β- 受体激动剂测定方面展示了较强的可靠性以及高的稳定性简介用作动物性食品中的 β- 受体激动剂药物主要有 : 莱克多巴胺克伦特罗沙丁胺醇特布他林西马特罗班布特罗非诺特罗妥布特罗及氯丙那林等, 这是一类结构和生理功能上类似肾上腺素和去甲肾上腺素的化学合成苯乙醇胺类物质, 他们都有类似的作用, 即促进动物生长, 提高胴体的瘦肉率, 但作用强弱及残留量不同 [1] 其中克伦特罗研究较深入, 最早用做动物饲料添加剂, 其效果最明显, 毒副作用也最强, 近几年来世界各地发生多起食用残留克伦特罗的动物性食品中毒事件, 使得各国均加强了对克伦特罗的监督监测, 克伦特罗的非法使用受到了极大的限制, 不法分子不得不寻找新的替代品, 如沙丁胺醇班布特罗等目前关于克伦特罗的检测方法报道很多, 而关于其它 β- 受体激动剂的检测方法相对滞后, 因此建立对于多种 β- 受体激动剂的同时检测方法对于饲料安全具有非常重要的意义我国曾于 2008 年颁布了农业部 1063 号公告饲料中 8 种 β- 受体激动剂的检测气相色谱质谱法 [2] 本文参考此标准, 采用赛默飞 Trace 1310-ISQ 对饲料中的 8 种 β- 受体激动剂进行了定量测定实验材料仪器与试剂仪器 Trace 1310 GC-ISQ 气质联用仪 (Thermo Fisher Scientific); Triplus RSH 三合一自动进样器 (Thermo Scientific);TG- 5SilMS 色谱柱 (30 m 0.25 mm 0.25 μm)(thermo Fisher scientific,p/n: ); 混合型阳离子交换固相萃取小柱 (60 mg,3 ml)(thermo Fisher scientific,p/n: ) 试剂分析纯氨水冰乙酸三水合乙酸钠购于上海国药化学试剂公司, 衍生化试剂 ( 双三甲基三氟乙烯胺 BSTFA+ 三

2 2 甲基氯硅烷 TMCS=99:1) 以及 8 种 β- 受体激动剂 ( 氯丙那林马布特罗齐帕特罗班布特罗盐酸克伦特罗沙丁胺醇莱克多巴胺特布他林 ) 购于上海安普科学仪器有限公司, 色谱纯甲苯甲醇由 ThermoFisher 提供反应试剂及 β- 受体激动剂标样的配制乙酸钠缓冲溶液 : 称取 g 三水合乙酸钠溶于水中, 加入 11.6 ml 冰乙酸,pH 约为 4.8, 用水稀释至 1 L;1 mol/l 乙酸溶液 : 移取 5.7 ml 冰乙酸于 100 ml 容量瓶中, 用水定容至刻度 ; 洗脱液 : 取 3.5 ml 氨水于 100 ml 容量瓶中, 用乙酸乙酯定容至刻度 β- 受体激动剂系列标液 :0.01 ppm 0.02 ppm 0.05 ppm 0.1 ppm 0.5 ppm 1.0 ppm 溶剂为甲醇, 其中系列标样中盐酸克伦特罗的浓度为 ppm 0.01 ppm ppm 0.05 ppm 0.25 ppm 0.5 ppm 样品前处理试样提取 : 精确称取 5.0 g 鸡饲料于 100 ml 玻璃瓶中, 加入 50.0 ml 乙酸钠缓冲溶液 200 rpm 下震荡 30 min, 转入到 50 ml 离心管中 4000 rpm 离心 5 min, 取上清液 30 ml 备用加标样品的提取 : 步骤同上, 只是在加入提取试剂乙酸钠缓冲液时, 加入了 5 ml 1.0 ppm 的混合标样, 且乙酸钠缓冲液的体积为 45.0 ml 净化 : 将固相萃取小柱用 3.0 ml 甲醇和 3.0 ml 水活化平衡然后精确吸取 2.0 ml 试样溶液全部加到小柱上, 自然过柱, 然后分别用 2.0 ml 乙酸溶液和 3.0 ml 甲醇淋洗一次, 最后用 3mL 洗脱液洗脱于 4.0 ml 溶剂瓶中将洗脱液在 40 氮气吹干对于标样溶液, 取 2.0 ml 加入到 4.0 ml 溶剂瓶中, 加入 1.0 ml 洗脱液,40 氮气吹干衍生 : 在衍生瓶中加入 100 ul 甲苯,100 ul 衍生化试剂, 涡旋混合后, 于烘箱中 70 反应 1 h, 冷却后转入色谱瓶中进行 GC/MS 分析色谱条件色谱柱 :TG-5SilMS(30 m 0.25 mm 0.25 μm); 柱温 : 100 (1 min),10 /min 到 280 (4 min); 不分流进样, 不分流时间 1min; 进样口温度 :260 ; 载气 : 高纯氦 (99.999%), 恒流模式,1.0 ml/min 液体进样模式, 进样量 :1.0 μl 传输线温度:280, 离子源温度 : 280 ; 灯丝电流 :25 μa; 选择离子模式扫描, 具体扫描方法见表 1) 表 1. 8 种 β- 受体激动剂的定性定量离子化合物名称保留时间 /min 定量离子定性离子氯丙那林 ,104,180 马布特罗 ,296,311 特布他林 ,336,426 盐酸克伦特罗 ,243,369 沙丁胺醇 ,203,277 齐帕特罗 ,291,405 班布特罗 ,309,439 莱克多巴胺 ,250,502 结果与讨论标准品色谱图图 1 是浓度为 0.01 ppm 的 8 种 β- 受体激动剂混合标样的选择离子色谱图, 可以看出各物质均达到基线分离峰形对称性良好无明显拖尾现象, 可满足后续的分离分析需求线性以及方法的检出限采用上述方法分别进样分析, 考察 β- 受体激动剂标样在浓度为 0.01 ppm-1.0 ppm 范围内的线性实验结果表明, 在设定的浓度范围内 8 种 β- 受体激动剂在该浓度范围内的响应与其浓度呈良好的线性关系, 相关系数均大于 0.997, 且其检出限均低于农业部 1063 号公告中的规定 ( 见表 2) 同时对浓度为 0.1 ppm 的 8 种 β- 受体激动剂标样, 平行测定 6 次, 其结果的 RSD 除齐帕特罗在 10.01% 外, 其余均小于 6.88%, 这一结果进一步表明了该仪器在对 8 种 β- 受体激动剂检测时的高灵敏度和高精密度特性

3 3 图 1. 8 种 β- 受体激动剂标准溶液选择离子流图 (0.01 ppm) 线性以及方法的检出限采用上述方法分别进样分析, 考察 β- 受体激动剂标样在浓度为 0.01 ppm-1.0 ppm 范围内的线性实验结果表明, 在设定的浓度范围内 8 种 β- 受体激动剂在该浓度范围内的响应与其浓度呈良好的线性关系, 相关系数均大于 0.997, 且其检出限均低于农业部 1063 号公告中的规定 ( 见表 2) 同时对浓度为 0.1 ppm 的 8 种 β- 受体激动剂标样, 平行测定 6 次, 其结果的 RSD 除齐帕特罗在 10.01% 外, 其余均小于 6.88%, 这一结果进一步表明了该仪器在对 8 种 β- 受体激动剂检测时的高灵敏度和高精密度特性表 2. 8 种 β- 受体激动剂的标准曲线检出限定量限及农业部 1063 号公告规定的检出限和定量限化合物名称保留时间 /min 浓度范围 /ppm 线性方程相关系数 LOQ LOQ b LOD LOD b 氯丙那林 y=43.68x 马布特罗 y=104.47x 特布他林 y= x 盐酸克伦特罗 y=142.22x 沙丁胺醇 y= x 齐帕特罗 y=847.91x 班布特罗 y=122.28x 莱克多巴胺 y=398.80x 注 :LOQ b 和 LOD b 为农业部 1063 号公告规定的检出限和定量限实际样品测试及加标回收按照上述方法对鸡预混饲料中的 β- 受体激动剂进行了分析测定, 并对其做了加标回收试验 ( 见图 2) 可以看出, 在鸡预混饲料中上述 8 种 β- 受体激动剂均有不同程度的检出, 但是均低于农业部 1063 号公告规定的定量限度值 ; 采用该方法在加标量为 0.1 的水平下,8 种 β- 受体激动剂的回收率在 70.57% 107.7% 之间, 满足日常分析检测的要求为了进一步验证 Thermo GC-ISQ 对 β- 受体激动剂测定的稳定性, 在两天内对 8 种 β- 受体激动剂的系列标样样品以及加标样品进行了 5 次重复分析测定 ( 见图 3), 以 0.1ppm 的 8 种 β- 受体激动剂在这 5 次测定后计算的 RSD 除氯丙那林和齐帕特罗分别在 9.65% 和 13.62% 外, 其余均小于 6.68%, 这表明 Thermo GC-ISQ 对 β- 受体激动剂的测定具有较好的稳定性

4 4 图 2. 鸡饲料样品及其加标样选择离子流图 ( 上方为鸡饲料样品下方为鸡饲料样品加标,8 种 β- 受体激动剂的加标浓度为 0.1 ppm, 其中盐酸克伦特罗为 0.05 ppm) 表 3. 8 种 β- 受体激动剂测定的回收率及精密度化合物名称样品加标量样品加标回收率 /% 精密度 /% 两天测试 5 次的精密度 /% 氯丙那林马布特罗特布他林盐酸克伦特罗沙丁胺醇齐帕特罗班布特罗莱克多巴胺图 3. 8 种 β- 受体激动剂混合标样在两天内重复测定 5 次的选择离子流图 (0.1 ppm)

5 总结本文采用 Thermo Scientific ISQ-LT 单四极杆 GC-MS 系统, 以乙酸钠缓冲溶液提取硅烷化试剂衍生, 建立了饲料中 8 种 β- 受体激动剂的分析方法该方法的操作简单稳定, 对 8 种 β- 受体激动剂在浓度为 0.01 ppm-1 ppm 范围内检测的线性均大于 0.997; 检出限比农业部 1063 号公告规定值低 10 倍 ; 在 0.1 的浓度水平下, 加标回收率在 70.57% 107.7% 之间 ; 且采用同一台仪器, 对系列浓度标样样品以及加标样品在 2 天内反复测定 5 次, 测定值的 RSD 除氯丙那林和齐帕特罗分别在 9.65% 和 13.62% 外, 其余均小于 6.68%, 表明了 Thermo GC-ISQ 对饲料中 β- 受体激动剂测定方面展示了较强的可靠性以及高的稳定性, 能够很好地满足对饲料中 β- 受体激动剂的日常分析检测要求参考文献 [1] 贾涛, 王有月, 赵营, 王兰英, 左文霞, 李志宏, 詹国静, 韩丽霞, 刘佳, 高振明, 饲料中 β- 受体激动剂的检测研究进展, 饲料研究,2012,2,67-71 [2] 农业部 1063 号公告饲料中 8 种 β- 受体激动剂的检测气相色谱质谱法 Application Notes_C_GCMS-34 赛默飞世尔科技 ( 中国 ) 有限公司免费服务热线 : ( 支持手机用户 ) AN_C_GCMS-34

2 表 1. 仪器参数设置色谱柱及柱温检测器类型工作参数 TG-171 MS, 3 m,.25 mm,.25 μm(p/n: ;s/n:97982) 柱温 :35 (4 min),15 /min 到 11 (min),3 /min 到 24 (3min) 载气类型及流速质谱 EI

2 表 1. 仪器参数设置色谱柱及柱温检测器类型工作参数 TG-171 MS, 3 m,.25 mm,.25 μm(p/n: ;s/n:97982) 柱温 :35 (4 min),15 /min 到 11 (min),3 /min 到 24 (3min) 载气类型及流速质谱 EI 赛默飞气质联用质谱仪 ISQ 测定饮用水中的 N- 亚硝基二甲胺邓桂凤余翀天梁立娜赛默飞世尔科技 ( 中国 ) 有限公司 Application Notes_C_GCMS-29 关键词 GC-MS,N- 亚硝基二甲胺, 亚硝胺引言 213 年的 4 月, 中国高校再现投毒案, 遭投毒的上海复旦大学医学院 21 级硕士研究生黄洋经抢救无效在上海中山医院去世, 投毒物为 N- 亚硝基二甲胺 N- 亚硝基二甲胺又称二甲基亚硝胺