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帚佃森
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1 应用指南概述安捷伦科技已经开发出用于食品中兽药残留检测的许多方法本应用指南涵盖了液质技术用于食品中兽药残留检测的应用, 液质包括单四极杆液质, 串联四极杆液质, 飞行时间质谱液质和四极杆 - 飞行时间串联质谱本指南可以作为兽药残留检测方法建立的起始工具应用举例包括详细的色谱和质谱条件, 质谱的性能数据以及代表性的总离子流色谱图附录包括通用的样品前处理步骤

2 内容列表前言兽药的主要类别 4 兽药残留分析中的挑战 5 液质联用技术概述如何选择合适的液质技术 6 应用 1. 安捷伦 6410 串联四极杆液质用于奶制品中的痕量 ß- 内酰胺的确认和定量分析 7 2. 液相色谱 / 飞行时间质谱用于阿莫西林降解物的结构鉴定分析安捷伦 6410 串联四极杆液质用于蜂蜜, 虾仁和鸡肉中的氯霉素检测高效液相色谱 / 串联四极杆质谱联用法 (HPLC/MS/MS) 用于测定肉中的盘尼西林液相色谱 / 大气压光电离源 / 质谱用于鱼中的氯霉素检测安捷伦 6410A 串联四极杆液质用于鸡肉中的硝基呋喃代谢物的检测安捷伦 6410 串联四极杆液质用于罗非鱼中的硝基呋喃代谢物的检测液相色谱 / 大气压化学电离源 / 质谱用于猪肉中的磺胺类抗生素的检测安捷伦 6410A 串联四极杆液质用于肉类产品中磺胺药物的筛查和定量分析安捷伦 6410 串联四极杆液质用于牛肉中的氟喹诺酮类药物的快速筛查和定量分析安捷伦 6410 串联四极杆液质用于食品中的孔雀石绿和隐性孔雀石绿分析安捷伦 6410A 串联四极杆液质用于动物性食品中的 b 2 - 激动剂类多残留药物快速的检测安捷伦 6410A 串联四极杆液质用于牛奶中四环素类多残留药物的检测 38 附录通用的样品前处理步骤 42 3

3 前言兽药的主要类别兽药广泛地用于畜牧业中, 达到治疗或防止疾病的目的它们还可以促进动物生长, 提高饲料效果, 以及使动物在动物运输过程中保持安静然而, 所有用于食用类动物的兽药都可能导致肉, 奶或蛋中含有药物残留这些药物残留给人的健康带来潜在的危害, 包括过敏反应, 直接中毒效应, 以及对抗生素产生的抗药性在过去的几十年中, 许多兽药在世界范围内被广泛使用, 某些药物仍然在食品链中被发现下面列出的是主要的兽药 1. 抗菌类药物氨基糖苷类和氨基环醇类酰胺醇类 b- 内酰胺 ( 青霉素和头孢菌素类 ) 氟喹诺酮类大环内酯和林可酰胺类药物硝基呋喃及其代谢物磺胺类抗生素四环素类 2. 抗寄生虫药苯并咪唑类咪唑骈噻唑类有机磷类药物四氢嘧啶水杨酰苯胺衍生物取代苯酚类药物大环内酯哌嗪衍生物 3. 抗原虫药 ( 抗球虫药 ) 二苯脲类硝基咪唑类聚醚类离子载体喹诺酮衍生物三嗪类 4. 抗菌生长促进剂有机砷肽类抗生素喹喔啉 -1,4- 二氧化物 5. 激素类生长促进剂内源性性激素合成甾体药物合成非甾体药物多肽激素 6. 其它药物抗真菌药 b- 肾上腺素能激动剂皮质类固醇利尿剂染料非甾体类消炎药镇静药和 b- 受体阻断剂甲状腺抑制药物许多国家, 如美国, 欧盟都已经设定了不同食品中各种兽药残留的最大残留限量值 (MRLs) 日本也对日本肯定列表检测的兽药残留也设定了最大残留限量值最近, 中国也建立了很多新的国家标准以监测食品中的抗生素残留苯酰胺类 4

4 兽药残留分析中的挑战食品中兽药残留分析主要两个方面的挑战 1. 分析组分的多元性因为需要检测的化合物的种类很多, 而且它们的物理化学性质差异很大, 这些都会影响分离和检测的结果物理化学性质 ( 例如, 极性和 pka 值 ) 稳定性 2 基质的复杂性使用单残留方法测定兽药残留要比测定农药残留难得多兽药中的组织是比水果和蔬菜更复杂的基质这些基质可能是肌肉肾肝牛奶鸡蛋尿血液等等基质组成 ( 例如, 类酯, 蛋白质, 碳水化合物, 水和盐 ) 组分 - 基质反应的相互作用基质共提取物食品实验室中兽药残留检测数量的大量增加促进了用户进行高通量分析的需求, 即在最短的时间内分析更多数量的样品本应用指南包括了已经开发的液质联用技术用于不同食品中的各种兽药残留的分析, 如蛋, 虾仁和肉类等因为在兽药分析中, 样品的处理和净化是影响分析速度的关键因素, 固相萃取 - 液质联用是现代食品分析中被广泛使用的手段 5

5 液质联用技术概述如何选择合适的技术样品制备仪器选择筛查确认定量液相色谱 / 三重串联四极杆液质联用系统脏或复杂基体样品中目标化合物的痕量分析一次进样进行多组分的高选择性, 高灵敏度检测复杂样品分析时检测限低 MRM 可以提供阳性确认, 检测限低, 可符合法规要求一次分析进行扫描和确认常规的高精度的 MS/MS 定量分析全景式的快速浏览定量分析结果固相萃取或者 QuEChERs 法先进的安捷伦喷射流离子聚焦技术, 大大提高了灵敏度提取净化液相色谱 / 飞行时间质谱或液相色谱 / 四极杆 - 飞行时间串联质谱仪非目标, 未知化合物分析高分辨率可以减少噪音和基质的干扰精确质量数可以进一步化合物的选择性, 利用精确质量数据库进行无限制的筛选先进的安捷伦喷射流离子聚焦技术提高分析的灵敏度利用公开和内置的精确质量数据库进行自动检索分子式生成器减少数据处理时间离子提取可使用窄质量窗口色谱图提供精确的一级质谱和二级质谱的定性分析宽动态范围使得定量线性范围更宽液相色谱 / 单四极杆液质干净基质样品的扫描和定量分析一次进样进行多组份化合物的选择性检测简单样品分析时可获得更低的检测限宽动态范围使得定量线性范围更宽与二极管阵列和荧光检测联用进行结构的鉴定 6

6 1 安捷伦 6410 串联四极杆液质联用仪用于牛奶中的痕量 ß- 内酰胺的确认和定量分析摘要 ß- 内酰胺抗生素是被广泛使用的兽药, 主要用于疾病的预防和治疗因此这些药物可能会在奶制品和肉类食品中产生药物残留, 这些药物在发酵过程中导致问题以及对那些 ß- 内酰胺过敏的人带来健康问题样品前处理步骤 1. 取 2 ml 牛奶, 加 4 ml 乙腈 2. 涡旋震荡以去除蛋白质 3. 在 500 转的条件下, 离心 10 min, 然后用 0.45 µm 膜过滤 4. 进样量,20 µl 仪器参数液相色谱的条件色谱柱 Agilent ZRBAX SB-C18, mm, 3.5 µm 流动相 A: 水 /0.3% 醋酸 B: 乙腈 /0.3% 醋酸流速 0.3 ml/min 梯度 0 2 min/a 90% min/a 35% /A 5% 柱温 30 C 停止时间 9 min 后运行时间 6 min 进样量 10 µl 质谱参数仪器 Agilent 6410 三重串联四极杆液质联用系统离子源 ESI + 7

7 MRM 设定驻留碎裂碰撞 TS 化合物母离子子离子时间 (ms) 电压 (V) 能量 (V) 0 阿莫西林氨苄青霉素双氯青霉素乙氧萘青霉素恶喹酸素苯氧甲基青霉素青霉素 G 分析结果 x MRM ( > ) 100ppt-r002.d 浓度 :0.1 ng/ml (%) 8

8 LC/MS/MS 分析方法性能化合物 S/N* R 2 阿莫西林氨苄青霉素双氯青霉素乙氧萘青霉素苯唑青霉素苯氧甲基青霉素青霉素 G * 样品是牛奶基质中添加的每个化合物为 0.1 ppb. 订货号描述部件号 Agilent LC/MS/MS G6410A 或者 G6460AA Agilent ZRBAX SB-C18, mm, 3.5 µm mm, 45 µm PTFE 注射器滤头参考文献安捷伦应用文献 EN, 6410 串联四极杆液质联用用于奶制品中痕量的 b- 内酰胺抗生素残留安捷伦应用文献 EN, 液相色谱 / 紫外和液相色谱 / 串联四极杆液质联用仪用于青霉素的检测 9

9 2 液相色谱 / 飞行时间质谱用于阿莫西林降解物的结构分析摘要利用精确质量数和分子式生成确认功能用于阿莫西林降解物的结构鉴定, 除了分子离子峰测定之外, 还利用液相色谱 / 电喷雾电离飞行时间的源内碰撞解离功能产生碎片进一步对结构进行确认 H H H CH H CH NH NH H 2 N CH 3 H 2 NH CH NH 3 H 2 NH NH S CH S CH 3 3 H H H H H H NH H NH S H CH CH 3 CH 3 H H H 2N H H NH NH H H N S H CH CH 3 CH 3 H H N N H H CH HN CH 3 CH S Hydroxyphenylglyl amoxicillin 5 4 样品前处理步骤阿莫西林在酸性条件下进行应激处理 1. 取 1mL 阿莫西林溶液 (25 mg/ml in DMS) 加入 1mL 的 0.1M 盐酸中 2. 室温下搅拌 1 小时 (25 ºC) 3. 用 20mL DMS 稀释 10 倍仪器设定液相条件 Agilent 1100 系列毛细管液相色谱仪溶剂 A 水, 10 mm 乙酸铵, ph 4.1 溶剂 B 乙腈流速 8 µl/min 初始流速 µl/min 梯度 0 min 0% B 1 min 0% B 13 min 25% B 23 min 25% B 停止时间 23 min 后运行时间 15 min 质谱条件离子源 ESI(+) 干燥气 C 雾化气压力 15 psi 碎裂电压 150 V 或 300 V 用于源内碰撞解离 10

10 结果 1.00e6 9.00e5 8.00e5 7.00e5 6.00e5 5.00e5 4.00e5 3.00e5 2.00e5 1.00e A C : C 16 H 20 N 3 5 S : : : mda : 2.18 ppm : 150V m/z, amu H H CH H NH 2 N CH NH H H 1 S CH 3 2.0e4 0.0 D 1.6e5 1.4e5 1.2e5 1.0e e4 6.0e4 4.0e4 B m/z, amu : C 16 H 17 N 2 5 S : : : 0.10 mda : 0.23 ppm : 300 V C 16 H 20 N 3 5 S C 16 H 17 N 2 5 S C 6 H 10 N 2 S C 5 H 8 NS [mda] [ppm] 注释 : 阿莫西林青霉噻唑酸 (2) (C 16 H 21 N 3 6 S), [M+H] + = m/z A) 阿莫西林青霉噻唑酸的分子离子峰的精确质量数 B) 阿莫西林青霉噻唑酸的源内碰撞解离碎片的精确质量数 C) 阿莫西林青霉噻唑酸的碰撞解离裂解图 D) 阿莫西林青霉噻唑酸碰撞解离碎片的质量精度订货信息描述 Agilent LC/MS TF 部件号 G6224AA 或 A6230AA 参考文献安捷伦应用文献 EN, 阿莫西林降解物的结构鉴定, 第二部分 : 电喷雾 - 飞行时间质谱及源内碰撞诱导解离进行阿莫西林降解物的结构鉴定安捷伦应用文献 EN, 利用阿莫西林降解物的分析, 评价质量精度 11

11 3 安捷伦 6410 串联四极杆液质联用仪用于分析蜂蜜, 虾仁和鸡肉中的氯霉素摘要使用 6410 串联四极杆液质联用仪建立了蜂蜜, 虾仁和鸡肉中的氯霉素的分析方法灵敏度远远高于欧盟对食品中氯霉素检出限的规定要求使用同位素内标和简单的固相萃取法基质样品中氯霉素的检测限可达 10ppt N H H H N CI CI - 样品前处理步骤 1. 内标标准品配制 : 1 ppb, 0.2 ppb, 0.1 ppb, 0.02 ppb, 和 0.01 ppb 的标准溶液, 内标浓度为 0.25 ppb 蜂蜜 1. 1 g 样品用 5 ml 水稀释并加入 25 µl 10 ppb 内标液 2. 转移此溶液至 SPE 小柱顶部静置 5 min ml 乙酸乙酯洗脱 4. 收集洗脱液, 40 C 氮吹挥干溶剂 5. 残渣用 1 ml 甲醇超声 1 min 溶解 6. 用针头式过滤器过滤, 进样分析仪器设定液相条件色谱柱 ZRBAX SB-C18, mm, 1.8 µm(p/n ) 流量 0.4 ml/min 流动相 A: 水 B: 甲醇梯度 0 5 min, 30~70% B 5 6 min, 70~100% B 8 min, 100% B 后运行时间 4 min 柱温 45 C 进样量 5 µl 12

12 MS 参数离子源 ESI 极性负极性干燥气温度 350 C 干燥气流速 10 L/min 雾化气压力 45 psi 毛细管电压 3500 V 碎裂电压 100 V 碰撞能 m/z 257( 定性离子 ) 10 V m/z 152 ( 定量离子 ) 15 V 结果 x MRM ( > 152.0) x > 152.0, = A 3 2 C x MRM ( > 157.0) B x > 157.0, = 50.3 D

13 灵敏度标准品溶液 ( 溶剂为水 ), 浓度为 10 ppt, 进样量 /10 µl 订货信息描述部件号 Agilent LC/MS/MS G6410B 或 G6460AA Agilent ZRBAX SB-C18, mm, 1.8 µm Agilent AccuBond SPE ENV PS DVB Cartridges 参考文献安捷伦应用文献 EN, 安捷伦 6410 串联四极杆液质联用仪用于蜂蜜, 虾仁和鸡肉中氯霉素的确认和定量分析 14

14 4 高效液相色谱 / 串联四极杆质谱联用法 (HPLC/MS/MS) 用于测定肉中的盘尼西林摘要本文介绍了一种用固相萃取高效液相色谱 - 二级质谱法同时测定动物组织 ( 猪肉 ) 中六种抗菌素残留 ( 阿络西林盘尼西林 G 苯唑西林氯唑西林萘夫西林双氯西林 ) 的方法此方法将反向柱 Agilent ZRBAX Eclipse Plus C18 (3.5 µm, 100 mm 2. 1 mm) 和安捷伦混合模式固相萃取柱 (Agilent SampliQ PT) 组合全面分析了残留的盘尼西林高效液相色谱 - 串联质谱法 (HPLC/MS/MS) 定量地对固相萃取对痕量抗菌素残留进行了性能评价样品制备仪器设置 1. 提取 2. 用 SPE 固相萃取小柱纯化 LC 参数色谱柱流速流动相运行时间后运行时间温度 30 C 进样量 10 µl 洗脱梯度 Time %B Agilent ZRBAX Eclipse Plus, 2.1 mm 100 mm, 3.5 µm (p/n ) 0.6 ml/min A: 水和 10 mm 的乙酸铵 B: 乙腈 12 min 3 min 15

15 结果注释 :2a: 含 1 ng/g 药物的加标肉经过提取和固相萃取净化,2b: 肉经过提取和净化然后加标 1 ng/g 药物,2c: 未加标的肉经过提取和净化回收率订货信息描述部件号 Agilent LC/MS/MS G6410AA 或 G6410B Agilent ZRBAX Eclipse Plus, 2.1 mm 100 mm, 3.5 µm p/n 注射器滤头 p/n Agilent SampliQ PT 6 ml/150 mg SPE 小柱 p/n PTFE 注射器滤头 p/n ml 自动进样器样品瓶 p/n 参考文献安捷伦应用文献 EN, 高效液相色谱 / 串联四极杆质谱联用法 (HPLC/MS/MS) 用于测定肉中的盘尼西林 16

16 5 液相色谱 / 大气压光电离 / 质谱法用于鱼中的氯霉素的分析摘要利用液相色谱 / 大气压光电离 / 质谱法建立了鱼中的氯霉素的检测方法样品前处理 1. 称 5 g 鱼肉样品加 5 g 无水硫酸钠 2. 加 10 ml 乙酸乙酯 3. 均质匀浆 20 s rmp, 离心 5 min 5. 取上清液, 重复步骤在 40 C 下旋转蒸发至干 7. 用 1 ml 乙腈回溶, 加 1 ml 正己烷振摇, 弃去正己烷层 8. 再加入 1 ml 正己烷, 振摇, 弃去正己烷层 9. 将乙腈层吹干, 残渣用 ACN:10 mm 乙酸铵水溶液 (1:9, V/V) 回溶含 10% 乙腈的 10 mm 醋酸胺的溶液脱水 10. 过滤, 进样仪器参数液相色谱参数色谱柱 Agilent ZRBAX Eclipse XDB C18, mm, 5 µm 溶剂 A: 含 10 mm 乙酸铵的水溶剂 B: 甲醇添加剂 : 丙酮,0.05 ml/min 梯度 : 90/10 A/B 15 min 至 70/30 A/B 柱温 : 40 C 进样量 : 20 µl 流速 : 0.5 ml/min 质谱参数离子源 : APPI ( 负离子 ) 扫描范围 : m/z 选择离子 : 321 m/z; (M-H) 干燥气 : 氮气, C 雾化气压力 : 氮气, 50 psi 碰撞电压 : 120 V 毛细管电压 : 3500 V APCI 源温度 : 350 C 17

17 结果 (A). (120 V) (B). (180 V) H NH C CHCl N CH H 152 CHCH 2 H 鱼肉中氯霉素的回收率添加水平回收率 [±RSD (%)] (ng/g) 小黄狮鱼比目鱼 ± ± ± ± ± ± 4.9 订货信息描述部件号 Agilent LC/MSD G6120AA, G6130AA 或 G6140AA APPI source G1971B Agilent ZRBAX Eclipse Plus C18, mm, 5 µm 参考文献安捷伦应用文献 EN 利用液相色谱 / 大气压光电离源 / 质谱检测鱼中的氯霉素 18

18 6 安捷伦 6100 系列单四极杆液质联用仪用于检测鸡肉中的四种硝基呋喃代谢物摘要本方法介绍了液相色谱 / 单四极杆液质联用仪检测鸡肉中的四种硝基呋喃代谢物下图结构所示为硝基呋喃原药 2 N N N N 2 N N N 2 N N N NH 2 N N N H NH 2 样品前处理步骤 1. 制备四种硝基呋喃代谢物的水溶液 (12.5, 25.0, 37.5, and 50 µl at 100 ng/ml). 2. 将鸡肉样品放入到 40 ml 的带盖的玻璃样品瓶中 3. 加入 10 ml 的 25 mm 盐酸溶液,200 µl 浓度为 50 mm 的 2- 硝基苯乙醛二甲亚砜溶液 C 下水浴中, 反应 16 小时 5. 将溶液冷却至室温 6. 用 0.8 M 的氢氧化钠和 0.1 M 的磷酸二氢钾溶液, 将 ph 值调至乙酸乙酯提取样品, 液氮气吹干乙酸乙酯提取液 8. 用 1.0 ml 的起始流动相回溶残渣 19

19 仪器参数液相色谱条件液相色谱 Agilent 1100 系列液相色谱仪色谱柱 Inertsil DS3, mm, 5 µm (GL Science, Tokyo, Japan) 流动相 A 乙腈流动相 B 0.5% 的甲酸溶液梯度 20/80A/B 至 70/30 A/B,20 min 柱温 20 C 进样量 30 µl 流速 200 µl/min 质谱参数质谱 Agilent 1100 MSD, SL 离子源 ESI ( 正离子模式 ) 扫描范围 m/z 选择离子基峰用于定量干燥气氮气 C 雾化气压力氮气 50 psi 碎裂电压 120 或 140 V 毛细管电压 2000 V 分析结果线性, 检测限 (LD), 和仪器精密度 ( 代谢物水溶液 ) LD RSD 代谢物 R 2 (ng/ml) 1 天 3 天 AMZ SEM AHD AZ

20 结果浓度为 0.25 ng/ml 的四个硝基呋喃代谢物的 2- 硝基苯乙醛的衍生物的选择离子流图 NBA-AMZ NBA-AHD m/z = m/z = NBA-SEM NBA-AZ m/z = m/z = 订货信息描述 Agilent LC/MSD 部件号 G6110AA, G6120AA, G6130AA 或 G6140AA 参考文献安捷伦应用文献 EN 安捷伦电喷雾 - 单四极杆液质联用仪用于检测鸡肉中的四种硝基呋喃代谢物 21

21 7 Agilent 6410 三重串联四极杆质谱分析罗非鱼中的硝基呋喃代谢物摘要仪器参数本文使用 Agilent 6410 型三重串联四极杆质谱对肉类和肉制品中的禁用物质硝基呋喃类抗生素进行分析, 所建立的方法对四个代谢物具有很高的灵敏度, 最低检测限 (LD) 可达 0.01 ppb(10 ppt) 研究按照欧盟的分析方法指标认证标准, 建立了 0.1 ppb~10 ppb 浓度范围的标准定量曲线以罗非鱼提取物为研究对象, 考察 LC/MS/MS 技术用于水产品分析的性能 LC 条件色谱柱 Agilent ZRBAX C18, mm, 3 µm 柱温 40 C 流动相 A = 0.1% 甲酸水溶液 B = 乙腈洗脱梯度起始 22% B, 6 min 99%B, 9 min 99% B 流速 0.3 ml/min 进样量 50 µl MS 条件离子化方式 ESI 正离子模式干燥气流速 10 L/min; 雾化器压力 :35 psig 干燥气温度 35 psig 毛细管电压 5000 V 多反应监测模式参数离子驻留时间碎裂电压碰撞能量化合物二级质谱 (ms) (V) (V) AMZ SC AH AZ

22 结果硝基呋喃类代谢物的定量标准曲线, 线性范围 10 ppt-10 ppb x y = * R 2 = AMZ R 2 > (ng/ml) x y = * R 2 = SEM _ (ng/ml) R 2 > x10 4 y = * R 2 = AHD R 2 > _ (ng/ml) x y = * R 2 = AZ R 2 > (ng/ml) 灵敏度罗非鱼提取物样品中每个代谢物添加 500 ppt x TIC MRM (** **) 0619_500ppt_spike_MRM_50uL_4seg_4.d Smooth (1) AMZ AZ 1.0 SC AH 订货信息描述 Agilent LC/MS/MS 部件号 G6410BA 或 G6460AA 参考文献安捷伦应用文献 EN, 利用 Agilent 6410 三重串联四极杆质谱分析罗非鱼中的硝基呋喃代谢物 23

23 8 大气压化学电离 - 单四极杆液质联用仪分析猪肉中的磺胺类抗生素摘要本应用介绍了利用安捷伦的大气压化学电离 - 单四极杆液质联用仪快速简便分析猪肉中的磺胺类抗生素的方法具有简单灵敏的优点 1. 称取 3 g 猪肉样品, 置于 50 ml 的聚丙烯离心管中 2. 加入 10 ml 甲醇, 均质 3 min 3. 离心 10 min 4. 提取 10 ml 酸化甲醇溶液, 过滤, 进样仪器参数样品前处理液相色谱条件色谱柱流动相 A 流动相 B 梯度流速进样量 50 µl 柱温 30 C Agilent ZRBAX Eclipse XDB-C8, mm, 5 µm (p/n ) 0.1% 甲酸的水溶液 0.1% 甲酸的乙腈溶液 0 min 20% B 1 min 20% B 3 min 90% B 6.5 min 90% B Post time = 1.5 min 1.0 ml/min 质谱参数离子源 APCI ( 正离子模式 ) 离子驻留时间 8 个离子, 每个离子的驻留时间是 63 ms 碎裂电压 70 V 干燥气 C 雾化气压力 60 psi APCI 源温度 400 C 毛细管电压 3000 V 电晕电流 4 µa 24

24 结果 MSD1 256, EIC=255.7:256.7 (SULFAMSD\SSS_CI5.D) APCI, Pos, SIM, Frag: STZ MSD1 251, EIC=250.7:251.7 (SULFAMSD\SSS_CI5.D) APCI, Pos, SIM, Frag: SDZ MSD1 250, EIC=249.7:250.7 (SULFAMSD\SSS_CI5.D) APCI, Pos, SIM, Frag: SPY MSD1 265, EIC=264.7:265.7 (SULFAMSD\SSS_CI5.D) APCI, Pos, SIM, Frag: SMR MSD1 279, EIC=278.7:279.7 (SULFAMSD\SSS_CI5.D) APCI, Pos, SIM, Frag: SMZ MSD1 285, EIC=284.7:285.7 (SULFAMSD\SSS_CI5.D) APCI, Pos, SIM, Frag: SCPD (IS) MSD1 301, EIC=300.7:301.7 (SULFAMSD\SSS_CI5.D) APCI, Pos, SIM, Frag: 70 MSD1 311, EIC=310.7:311.7 (SULFAMSD\SSS_CI5.D) APCI, Pos, SIM, Frag: SQ SDMX min min min min min min min min 回收量 (ng) 描述 STZ SDZ SPY SMR SMZ SCPD(IS) SQ SDMX 猪肉添加样品 , 猪肉添加样品 , 猪肉添加样品 , 猪肉添加样品 , 猪肉添加样品 , 猪肉添加样品 , 猪肉添加样品 , 添加量 (ng) , 平均值 , SD (Precision) MDL (SD t-stat) ng LQ (SD 10) ng RSD (SD 100/Mean) 准确度 (%) 线性 (R 2 ) t-stat (N = 7) 订货信息描述 25 部件号 Agilent LC/MSD G6110AA, G6120AA, G6130AA 或 G6140AA Agilent ZRBAX Eclipse XDB-C8, mm, 5 µm 参考文献安捷伦应用文献 EN, 大气压化学电离 - 液质联用进行猪肉中磺胺类抗生素药物的确认方法

25 9 安捷伦 6410A 串联四极杆液质联用仪用于肉类食品中磺胺类抗生素药物的筛选, 确认和定量分析摘要安捷伦 6410A 串联四极杆液质联用仪用于猪肉中磺胺类抗生素药物残留的检测监测和定量分析, 方法具有快速, 准确及高灵敏度的特点样品前处理 1. 称 3 g 猪肉样品, 置于 50 ml 的聚丙烯离心管中 2. 加入 10 ml 酸化甲醇, 均质 3 min 3. 离心 10 min 4. 提取 10 ml 酸化甲醇溶液, 过滤, 进样仪器参数液相色谱条件液相色谱 Agilent 1200 系列液相色谱色谱柱 Agilent ZRBAX SB-C18, mm, 1.8 µm 梯度 A: 0.1% 三氟乙酸, B: 乙腈 0 min 5% B; 6 min 23% B; 9 min 23% B; 9.01 min 90% B 停止时间 10 min 柱温 30 C 进样量 1 µl 流速 0.3 ml/min 质谱参数离子化模式 ESI (Positive) 干燥气 C 雾化气压力 30 psi 26

26 多反应监测 (MRM) 设定化合物多反应监测 (MRM) 碰撞电压碰撞能量 (V) 磺胺氯哒嗪 (SCP) 磺胺嘧啶 (SD) 磺胺二甲嘧啶 (SDM) 磺胺甲氧嗪 (SMP) 磺胺甲基嘧啶 (SM1) 磺胺二甲嘧啶 SM2) 磺胺异恶唑 (MSZ) 磺胺间甲氧嘧啶 (SMM) 磺胺噻唑 (ST) 磺胺喹噁啉 (SQX) 磺胺多辛 (SDM) 磺胺苯吡唑 (SPP) 磺胺氯哒嗪 ;3- 氯 -6- 磺胺哒嗪磺胺二甲异恶唑 (SIZ)

27 结果色谱图显示优异的分离度和灵敏度 MRM ( & ) _008.d 订货信息描述 Agilent LC/MS/MS 部件号 G6410BA 或 G6460AA 参考文献安捷伦应用文献 EN 安捷伦 6410A 串联四极杆液质联用仪用于肉类食品中磺胺类抗生素药物的检测监测和定量分析 28

28 10 安捷伦 6410A 串联四极杆液质联用仪进行牛肉中的氟喹诺酮类多残留农药的快速筛查摘要本示例着重阐释使用超临界流体萃取联用串联四极杆液质联用仪, 快速筛查肉类中多残留兽药, 侧重于液相色谱 / 串联四极杆质谱联用技术进行肉类食品中兽药多残留筛查检测样品前处理 Meat (10g) (10g) Homogenize Weighting (2g) (2g) Mixing by Mortar Packing to sample tube + ) + SFE Extract Collect Acetonitrile 0mL/4 0mL/4 DispersiveSPE (DS:1g NH 2 2: 2:1g) Filtrate LC/MS/MS 仪器参数液相色谱条件色谱柱柱温 40 C 流动相 Agilent ZRBAX Extend-C18, 2.1 mm 100 mm, 1.8 µm A: 乙腈, B: 0.1% 甲酸 /10 mm 甲酸胺 HCNH 4 10% A (30 min) 100% A 流速 0.2 ml/min 进样量 1 µl 质谱参数离子化模式 ESI (+)( ) 雾化气压力 345 kpa 干燥气 350 C 碰撞电压 100 V 29

29 结果添加 100 ppb 猪肝样品内兽药的多反应监测离子流图 30

30 订货信息描述 Agilent LC/MS/MS Agilent ZRBAX Extend C18, mm, 1.8 µm 部件号 G6410BA 或 G6460AA 参考文献安捷伦应用简报 ASMS07-25 超临界提取 - 液相色谱 / 串联四极杆液质联用仪快速筛查肉类中多残留兽药 31

31 11 Agilent 6410 三重串联四极杆质谱仪检测食品中的孔雀石绿和隐性孔雀石绿摘要本实例使用安捷伦新型 6410 高效液相色谱三重四极杆质谱 (LC/MS/MS) 方法快速准确地测定孔雀石绿 (MG) 和隐性孔雀石绿 (LMG) 的残留量串联质谱在使用正离子电喷雾模式 (ESI+), 多反应监测 (MRM) 模式下, 进行质谱定性和定量分析, 无需采用传统的 Pb 2 氧化柱, 比液相检测方法灵敏快速该方法的定量限 (LQ) 为 0.01 µg/kg, 达到出口欧盟和日本残留限量的要求样品前处理 1. 称取 5 g 罗非鱼, 加入 1 ml(0.25 mg/ml) 的羟胺,2 ml 的萘磺酸,2 ml ph 4.5 的醋酸胺和 40 ml 的乙腈 2. 用乙腈和二氯乙烷提取仪器参数液相色谱条件色谱柱 Agilent ZRBAX C18, mm, 5 µm 柱温 40 C 流动相 A: 10 mmol/l 乙酸铵 ( 用乙酸调至 ph4.5) B: 乙腈流速 0.3 ml/min 梯度 %B 0 min, 30 1 min, 50 2 min 95 8 min min, 30 进样量 10 µl 质谱条件离子化模式 ESI (+) 毛细管电压 4000 V 雾化气压力 35 psi 干燥气 C 32

32 结果线性范围 : 10 ppt 10 ppb x , 7, 14, 14, 0 y = * R 2 = R 2 = (ng/ml) x , 7, 14, 14, 0 y = * R 2 = R 2 = (ng/ml) 33

33 灵敏度 100 ppt 的浓度水平 x MRM MRM ( ) Spike_100 ppt_1. d 订货信息描述 Agilent LC/MS/MS 部件号 G6410BA 或 G6460AA 参考文献安捷伦应用文献 EN, Agilent 6410 三重串联四极杆质谱仪检测食品中的孔雀石绿和隐性孔雀石绿 34

34 12 安捷伦 6410A 串联四极杆液质联用仪用于动物源食品中的 b 2 - 受体激动剂的快速定性和定量分析摘要 b 2 - 受体激动剂是生长因子, 同时也可以影响脂肪分解及脂肪转化至肌肉的过程在本应用中, 对肝脏和尿液样品进行分析使用分子印记膜对 b 2 - 受体激动剂进行提取安捷伦 6410A 串联四极杆液质联用仪对 11 个 b 2 - 受体激动剂进行了确认和定量分析本方法的目的建立一个快速筛选和确认 β2- 受体激动剂分析方法, 其最小检出限 (MRPL) 符合欧盟法规要求样品前处理 1. 取 5 ml 尿样或者 5 g 经过粉碎的动物肝脏样品, 然后放入离心管 2. 加入 10 ml 0.1 M 盐酸溶液 3. 强烈震荡 5 min, 搅拌 3 min, 超声 10 min, 在 rmp 离心 5 min 4. 收集上清液, 上述步骤重复两次, 将所有的上清液合并 5. 用 6 ml 甲醇和 6 ml 去离子水淋洗 C18 固相萃取柱 6. 将提取液加至固相萃取柱顶端, 然后用 5 ml 去离子水淋洗 7. 分别用 0.8 ml 的甲醇和 0.8 ml 的去离子水洗脱并收集洗脱液 8. 氮气下吹干, 最后用初始流动相定容 9. 用 0.45 µm 的膜过滤, 然后转移至自动进样器瓶仪器参数液相色谱条件色谱柱 Agilent ZRBAX SB-C18, mm, 1.8 µm 柱温 40 C 流动相 A: 10 mm 的甲酸铵 /0.1% 甲酸 ; B: 乙腈流速 0.3 ml/min 梯度 0 5 min, B% 1%-90% 5 8 min, B% 90% min B% 1%,0.5 ml/min 进样量 5 µl 质谱条件离子化模式 ESI (+) 毛细管电压 4000 V 雾化气压力 35 psi 干燥气流速和温度 C 35

35 MRM 参数设定结果驻留时间碎裂电压碰撞能量保留时间化合物母离子子离子 (ms) (V) (V) 4.95 特布它林齐帕特罗沙丁胺醇西马特罗莱克多巴胺妥布特罗 ( 舒喘 ) 克伦特罗 ( 瘦肉精 ) 溴布特罗克仑潘特马布特罗马喷特罗 MRM (226.0 & 152.0) _0.5_11.d Conc. = 0.5 ng/ml VS 36

36 化合物信噪比 S/N (p-p) 特布它林齐帕特罗 39.0 沙丁胺醇西马特罗 48.8 莱克多巴胺妥布特罗 ( 舒喘 ) 7.1 克伦特罗 ( 瘦肉精 ) 30.2 溴布特罗 53.8 克仑潘特 43.0 马布特罗 15.8 马喷特罗 58.5 订货信息描述部件号 Agilent LC/MS/MS G6410BA 或 G6460AA C18 DS 6 ml tubes, 500 mg SampliQ 参考文献检验检疫科学, Vol. 18 No. 5, pp

37 13 安捷伦 6410A 串联四极杆液质联用仪用于牛奶中的四环素及其代谢物多残留的检测摘要样品前处理四环素类抗生素常常被用于畜牧行业中本文介绍了液相色谱 / 串联四极杆质谱技术同时检测牛奶和动物组织中的 10 种四环素类抗生素残留, 包括二甲胺四环素, 土霉素及其差向异构体, 四环素及其差向异构体, 金霉素及其差向异构体, 去甲基金霉素, 甲烯土霉素, 多西环素提取步骤 1. 称 5 g 牛奶样品 ( 准确至 0.01 g), 然后放入 50 ml 比色管 2. 加入 0.1 M Na2EDTA-Mcllvaine 缓冲液, 定容至 50 ml 3. 蜗旋震荡 1min 4. 在冰水混合液中超声 10 min, 然后转移至 50 ml 聚丙烯离心管中. 5. 冷却至 0~4 C. 6. 在 15 C 下, 5000 r/min 离心 10 min, 然后滤纸过滤净化 1. 取 10 ml 提取液 ( 相当于 1 g 样品 ), 转移至安捷伦 SampliQ 固相萃取柱顶端, 速度为每秒一滴 2. 然后分别用 5 ml 水和 5 ml 甲醇和水淋洗固相萃取柱 3. 弃去淋洗液 4. 在 2.0 kpa 的负压下干固相萃取柱 5 min 5. 用 10 ml 的 10 mmol 乙二酸甲醇溶液洗脱 6. 收集洗脱液, 在 40 C 下氮气吹干 7. 用 1 ml 的初始流动相回溶,0.45 µm 过滤, 准备进样 38

38 仪器参数液相色谱条件色谱柱 Agilent ZRBAX RX-C8, mm, 5 µm (p/n ) 流速 0.3 ml/min 流动相 A: 水 /0.1% 甲酸 B: 甲醇梯度 0 10 min, B 从 5% 到 30% min, B 从 30% 到 40% min, B 65% min, B 95% 25.5 min, B 5.0% 分析时间 28 min 后运行 5 min 柱温 30 C 进样量 5 µl 质谱参数离子源电喷雾离子化模式正离子模式干燥气流速和温度 C 雾化气压力 45 psi 毛细管电压 4000 V MRM 参数设定化合物碎裂电压母离子子离子 CE 保留时间 (min) 二甲胺四环素差向土霉素差向四环素四环素土霉素去甲基金霉素差向金霉素金霉素甲烯土霉素多西环素

39 结果 TIC MRM (** & **) std5-r002.d VS TIC MRM (** & **) WorklistData6-r004.d 1 1 b. 50 ppb MRM ( & ) WorklistData6-r004.d VS c. 50 ppb VS 40

40 标准溶液 * 牛奶基质中标样 * LQ LD LD (S/N = 20) (S/N = 3) (S/N = 3) 化合物名称 R 2 柱上进样量, pg 柱上进样量, pg R 2 柱上进样量, pg 二甲胺四环素差向土霉素差向四环素四环素土霉素去甲基金霉素差向金霉素金霉素甲烯土霉素多西环素 _ Levels, 7 Levels Used, 21 Points, 21 Points Used, 0 QCs y = * x R^2 = (µg/l) 订货信息描述部件号 Agilent LC/MS/MS G6410BA 或 G6460AA Agilent ZRBAX RX-C8, 2.1 x 150 mm, 5 µm SampliQ PT SPE Cartridge 3mL 60 mg 参考文献安捷伦应用文摘 EN, 安捷伦 6410A 串联四极杆液质联用仪用于牛奶中的四环素及其代谢物多残留的检测 41

41 附录样品前处理方法参考硝基呋喃及其代谢物氯霉素 1. 称 2 g 肉样品, 加入 5 ml 0.2N 的盐酸溶液,500 µl 浓度为 50 mm 的 2- 硝基苯乙醛二甲亚砜溶液 2. 涡旋震荡 1 min C 下水浴中, 反应 16 小时, 注意避光 4. 将溶液冷却至室温, 加入 0.3 M Na 3 P 4 并搅拌 5. 用 1 M 的氢氧化钠将 ph 值调至用 5 ml 乙酸乙酯提取样品 7. 涡旋震荡 10 min,4000 转下离心 3 min 8. 第 6 和 7 步重复两次 9. 并将乙酸乙酯溶液合并, 然后 40 C 氮气吹干,1.0 ml 的起始流动相回溶 10. 过滤, 准备进样 1. 称 10 g 样品加 50 ml 乙酸乙酯萃取两次 2. 收集上清液,40 C 下氮气吹至近干 3. 加 2 ml 甲醇和 50 ml 4% 的氯化钠水溶液 4. 用 20 ml 正己烷萃取两次, 弃去正己烷层 5. 用 20 ml 乙酸乙酯萃取两次 6. 合并乙酸乙酯萃取液, 在 40 C 下旋转蒸发至干 7. 用 5 ml 水溶解 8. 依次用 5 ml 甲醇,5 ml 氯仿,5 ml 甲醇, 以及 10 ml 水对 ZRBAX C18 SPE 固相萃取柱进行活化 9. 取 5 ml 样品转移至固相萃取柱顶端 10. 用 5 ml 乙腈 / 水 (5:95, V/V) 和 3 ml 乙腈依次洗脱固相萃取柱 11. 收集洗脱液,40 C 下氮气吹干 ml 初始流动相回溶, 过滤后进样分析糖皮质激素 1. 称 3 g 样品 2. 加入 15 ml 乙酸乙酯 3. 涡旋震荡 15 min, 16,000 rmp 下离心 5 min 4. 上述步骤重复两次, 合并乙酸乙酯馏提取液 C 下氮气吹至近干 6. 6 ml 正己烷活化硅胶固相萃取柱 7. 上样 8. 6 ml 正己烷淋洗 9. 6 ml 正己烷 / 丙酮 (6:4) 洗脱 C 下氮气吹干,1 ml 初始流动相回溶, 准备进样 42

42 安捷伦对由于设备, 性能或使用这种材料而造成的偶然或必然的损害或者错误不承担任何责任本文中的信息, 描述和性能指标如有更改, 恕不另行通知安捷伦科技公司, 2009 中国印刷 2009 年 4 月 9 日 CHCN

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CHCN_5989_5672.qxd 液相色谱 - 串联质谱联用技术用于牛奶中多残留四环素及其代谢物的检测应用报告食品作者 Yanyan Fang, ao Zhai, and Yun Zou Agilent Technologies (Shanghai), Co. 42 Yin Lun Road 23 China Jerry Zweigenbaum Agilent Technologies, Inc. 285 Centerville