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1 EB 病 毒 Rta/IgG 抗 体 与 鼻 咽 癌 分 期 的 关 系 蔡 永 林, 郑 裕 明, 成 积 儒, 李 军, 莫 永 坤, 钟 青 燕 ( 广 西 梧 州 市 红 十 字 会 医 院, 梧 州 市 肿 瘤 防 治 研 究 所, 广 西 梧 州 ) 摘 要 : 目 的 探 讨 EB 病 毒 Rta/IgG 抗 体 与 鼻 咽 癌 临 床 分 期 的 关 系 方 法 用 酶 联 免 疫 吸 附 法 (ELISA) 检 测 211 例 未 经 治 疗 的 鼻 咽 癌 患 者 Rta/IgG 抗 体, 按 92 分 期 法 进 行 分 期, 分 别 计 算 各 T N M 分 期 及 临 床 分 期 的 Rta/IgG 抗 体 阳 性 率 及 抗 体 水 平 并 进 行 统 计 学 分 析 结 果 性 别 年 龄 分 组 与 Rta/IgG 抗 体 表 达 没 有 相 关 性 鼻 咽 癌 各 T N M 分 期 及 临 床 分 期 组 Rta/IgG 抗 体 阳 性 率 及 抗 体 水 平 均 无 统 计 学 差 异 结 论 早 期 鼻 咽 癌 患 者 血 清 Rta/IgG 抗 体 表 达 与 晚 期 血 清 无 明 显 差 异,Rta/IgG 抗 体 可 作 为 鼻 咽 癌 早 期 诊 断 的 血 清 学 标 志 物 之 一 关 键 词 : 鼻 咽 癌 ;EB 病 毒 ;Rta/IgG; 临 床 分 期 Relationship between Epstein-Barr virus Rta/IgG antibody and clinical stages of nasopharyngeal carcinoma CAI Yong-lin, ZHENG Yu-ming, CHENG Ji-yu, LI Jun, MO Yong-kun, ZHONG Qing-yan Wuzhou Red Cross Hospital, Wuzhou Cancer Research Institute,Wuzhou Guangxi , China Abstract: Objective This study was aimed to evaluate the Relationship between Epstein-Barr virus (EBV) Rta/IgG antibody and clinical stages of nasopharyngeal carcinoma (NPC). Methods Serum samples derived from 211 untreated patients with NPC, who were categorized by the project of 92 stage, were examined for the presence of antibodies directed against Rta/IgG by using enzyme-linked immnunosorbent assay (ELISA). The positive rate and antibody level of Rta/IgG of different TNM stages and clinical stages were analyzed statistically. Results The expression of Rta/IgG antibody was not significantly associated with gender and age. No significant difference of positive rate and antibody level of Rta/IgG were found in various TNM stages and clinical stages. Conclusion The expression of EBV Rta/IgG antibody in early stage NPC was as high as that in late stage NPC. Rta/IgG antibody can be one of serological marker for NPC early diagnosis. Key words: Nasopharyngeal carcinoma; Epstein-Barr virus; Rta/IgG; Clinical stage 基 金 项 目 : 广 西 壮 族 自 治 区 卫 生 厅 计 划 课 题 (Z ); 梧 州 市 科 技 计 划 项 目 ( ) 作 者 简 介 : 蔡 永 林, 电 话 通 讯 作 者 : 郑 裕 明, 电 话 1

2 许 多 研 究 表 明 EB 病 毒 对 鼻 咽 癌 的 发 生 和 发 展 起 着 重 要 作 用 检 测 EB 病 毒 的 相 关 抗 体 是 诊 断 及 检 测 患 者 病 情 变 化 的 常 用 方 法 BRLF1 基 因 表 达 的 Rta 蛋 白 是 EB 病 毒 进 入 裂 解 复 制 状 态 必 需 的 激 活 元 件 [1] [2-4] 有 学 者 等 对 Rta 蛋 白 的 研 究 表 明, 在 鼻 咽 癌 患 者 体 内 可 检 测 出 高 水 平 的 Rta/IgG 抗 体, 提 示 其 可 作 为 用 于 鼻 咽 癌 筛 检 和 诊 断 的 新 指 标 我 们 应 用 GST-R185I 和 GST-R150I 两 种 重 组 融 合 蛋 白 质 混 合 作 为 抗 原, 采 用 ELISA 方 法 检 测 血 清 中 的 Rta/IgG 抗 体, 取 得 较 好 的 效 果 本 文 就 EB 病 毒 Rta/IgG 抗 体 与 鼻 咽 癌 患 者 的 性 别 年 龄 TNM 分 期 和 临 床 分 期 的 关 系 进 行 探 索 研 究 1 材 料 与 方 法 1.1 一 般 资 料 收 集 2006 年 11 月 ~2008 年 11 月 在 梧 州 市 红 十 字 会 医 院 肿 瘤 科 住 院 的 未 经 治 疗 鼻 咽 癌 患 者 211 例, 所 有 患 者 均 经 鼻 咽 活 检 病 理 检 查 确 诊, 病 理 类 型 以 非 角 化 性 癌 为 主 (200/211, 占 94.8%) 其 中 男 156 例, 女 55 例 ; 年 龄 22~83 岁, 平 均 48.4 岁 所 有 患 者 均 按 1992 年 福 州 全 国 鼻 咽 癌 会 议 推 荐 的 鼻 咽 癌 临 床 TNM 分 期 法 (92 分 期 法 ) [5] 进 行 分 期 1.2 抗 体 检 测 方 法 Rta/IgG 抗 体 检 测 试 剂 盒 由 同 昕 生 物 技 术 ( 北 京 ) 有 限 公 司 提 供 使 用 Rta 蛋 白 抗 原 性 最 强 的 两 个 片 段 GST-R185I 和 GST-R150I 的 等 比 混 合 物 作 为 诊 断 抗 原, 采 用 间 接 ELISA 方 法 检 测 人 血 清 中 Rta/IgG 每 份 标 本 做 2 孔 血 清 按 1 9 稀 释 后 每 孔 加 100 μl, 37 温 育 30min; 充 分 清 洗 后 每 孔 加 100μl 辣 根 过 氧 化 物 酶 标 记 的 羊 抗 人 IgG 抗 体,37 温 育 30min; 充 分 清 洗 后 加 入 TMB 底 物 100μl,37 显 色 10min; 加 入 2mol/L H 2 SO 4 100μl 终 止 反 应 酶 标 仪 450nm 波 长 读 出 每 孔 吸 光 度 (A) 值 取 每 个 标 本 双 孔 的 平 均 值 为 该 标 本 的 A 值, 标 本 的 A 值 除 以 该 反 应 板 阳 性 对 照 的 A 值 即 为 该 样 品 的 相 对 A 值 ( ra 值 ) 1.3 临 界 值 的 设 定 以 非 鼻 咽 癌 的 其 他 相 似 症 状 病 例 及 健 康 体 检 者 为 对 照 组, 应 用 受 试 者 工 作 特 征 (ROC) 曲 线 确 定 Rta/IgG 抗 体 检 测 的 临 界 ra 值 为 0.49, 即 Rta/IgG ra 0.49 为 阳 性 ( 另 文 发 表 ) 1.4 统 计 学 处 理 应 用 SPSS 13.0 软 件 对 变 量 进 行 正 态 性 检 验,Rta/IgG 抗 体 与 鼻 咽 癌 患 者 性 别 年 龄 2

3 和 TNM 分 期 的 关 系 分 析 采 用 χ 2 检 验 及 秩 和 检 验 P<0.05 为 差 异 有 统 计 学 意 义 2 结 果 鼻 咽 癌 患 者 不 同 分 组 Rta/IgG 抗 体 ra 值 分 布 经 正 态 性 检 验, 资 料 属 非 正 态 分 布 (P<0.05) 鼻 咽 癌 患 者 不 同 性 别 年 龄 组 Rta/IgG 抗 体 水 平 见 表 1 及 图 1 鼻 咽 癌 患 者 TNM 分 期 及 临 床 分 期 Rta/IgG 抗 体 水 平 见 表 2 表 1 鼻 咽 癌 患 者 Rta/IgG 抗 体 表 达 与 性 别 年 龄 的 关 系 Tab.1 Relationship of Rta/IgG expression with the gender and age of NPC n Positive (rate %) Median of ra value (Q L ~Q U ) Gender Male (91.0) (0.615~2.072) Female (89.1) (0.648~2.065) Age (87.2) (0.596~1.580) 40~ (91.0) (0.635~2.146) 50~ (92.5) (0.678~2.110) (90.0) (0.671~2.152) Median of Rta ra Age 图 1 鼻 咽 癌 患 者 各 年 龄 组 Rta/IgG 抗 体 ra 值 中 位 数 分 布 情 况 Fig.1 The distribution of ra value median of Rta/IgG in the age groups of NPC 鼻 咽 癌 患 者 男 女 间 Rta/IgG 抗 体 阳 性 率 比 较 经 χ 2 检 验, 差 异 无 统 计 学 意 义 (χ 2 =0.177, P=0.674); 两 者 Rta/IgG 抗 体 ra 值 比 较 经 Mann-Whitney 检 验, 差 异 亦 无 统 计 学 意 义 (z=0.209, P=0.834) 各 年 龄 组 间 Rta/IgG 抗 体 阳 性 率 比 较 经 校 正 χ 2 检 验, 差 异 无 统 计 学 意 义 (χ 2 =0.911, P=0.823) 各 年 龄 组 Rta/IgG 抗 体 ra 值 比 较 经 Kruskal-Wallis 检 验, 差 异 3

4 无 统 计 学 意 义 (χ 2 =7.000, P=0.072) 年 龄 与 Rta/IgG 抗 体 ra 值 经 Spearman 相 关 分 析, 呈 较 弱 的 正 相 关 关 系 (r=0.166, P=0.016) 表 2 鼻 咽 癌 患 者 Rta/IgG 抗 体 表 达 与 TNM 分 期 及 临 床 分 期 的 关 系 Tab.2 Relationship of Rta/IgG expression with TNM stages and clinical stages of NPC Stage n Positive (rate %) Median of ra value (Q L ~Q U ) T stage T (85.7) (0.594~1.926) T (84.7) (0.538~2.065) T (94.3) (0.642~2.065) T (92.9) (0.790~2.088) N stage N (89.7) (0.614~2.077) N (95.7) (0.684~1.942) N (88.8) (0.705~2.141) N (84.4) (0.522~2.089) M stage M (91.0) (0.632~2.068) M (83.3) (0.519~1.810) Clinical stage I 4 3 (75.0) (0.308~1.418) II (92.0) (0.606~2.025) III (90.5) (0.645~2.135) IV (90.7) (0.642~2.057) 鼻 咽 癌 患 者 各 T 分 期 N 分 期 M 分 期 及 临 床 分 期 Rta/IgG 抗 体 阳 性 率 比 较 经 校 正 χ 2 检 验, 差 异 均 无 统 计 学 意 义 (χ 2 =3.972, 4.216, 0.135, 0.884; P=0.264, 0.239, 0.713, 0.829) 各 T 分 期 N 分 期 及 临 床 分 期 Rta/IgG 抗 体 ra 值 比 较 经 Kruskal-Wallis 检 验, 差 异 均 无 统 计 学 意 义 (χ 2 =2.945, 2.236, 3.706; P=0.400, 0.525, 0.295) M 分 期 Rta/IgG 抗 体 ra 值 比 较 经 Mann-Whitney 检 验, 差 异 亦 无 统 计 学 意 义 (z=0.913, P=0.361) 3 讨 论 EB 病 毒 与 鼻 咽 癌 的 发 生 有 密 切 联 系 早 期 诊 断 和 对 高 危 人 群 的 筛 查 是 提 高 鼻 咽 癌 治 愈 率 获 得 良 好 预 后 的 关 键 血 清 流 行 病 学 调 查 表 明, 鼻 咽 癌 确 诊 前 患 者 血 清 中 已 有 高 滴 度 的 EB 病 毒 抗 体, 所 以 检 测 血 清 中 的 EB 病 毒 抗 体 在 鼻 咽 癌 的 早 期 诊 断 和 防 治 上 意 义 重 大 [6,7] BRLF1 基 因 是 EB 病 毒 的 立 即 早 期 基 因 之 一, 在 EB 病 毒 由 潜 伏 周 期 向 裂 解 周 期 转 换 的 过 程 中 发 挥 重 要 作 用 BRLF1 基 因 表 达 的 Rta 蛋 白 是 是 EB 病 毒 进 入 裂 解 期 的 关 键 4

5 蛋 白 [1] 我 们 先 前 的 研 究 显 示,Rta/IgG 抗 体 检 测 诊 断 鼻 咽 癌 敏 感 度 为 90.5%, 特 异 度 为 90.1%, 表 明 其 可 以 作 为 检 测 EB 病 毒 的 一 个 新 指 标, 并 可 作 为 鼻 咽 癌 诊 断 的 重 要 标 志 物 之 一 ( 另 文 发 表 ) 本 文 结 果 表 明, 男 性 和 女 性 鼻 咽 癌 患 者 的 Rta/IgG 抗 体 水 平 无 差 异, 可 认 为 不 同 性 别 间 患 者 的 此 种 EB 病 毒 标 志 物 含 量 基 本 相 同 不 同 年 龄 分 组 的 Rta/IgG 抗 体 水 平 在 统 计 学 上 无 差 别, 但 是 否 存 在 由 于 感 染 时 间 长 短 的 原 因 或 者 其 他 因 素 而 使 Rta/IgG 抗 体 有 随 年 龄 增 长 而 表 达 增 多 的 趋 势, 有 待 进 一 步 的 研 究 本 研 究 中, 没 有 发 现 鼻 咽 癌 患 者 血 清 中 Rta/IgG 抗 体 阳 性 率 和 抗 体 水 平 在 不 同 的 T N M 分 期 以 及 临 床 分 期 组 有 明 显 区 别, 在 早 期 (I II 期 ) 鼻 咽 癌 血 清 中 抗 体 阳 性 率 为 89.6%, 与 晚 期 (III IV 期 ) 鼻 咽 癌 的 抗 体 阳 性 率 (90.6%) 相 似 (P>0.05) 该 结 果 表 明 在 早 期 鼻 咽 癌 患 者 血 清 中 已 存 在 可 检 测 的 Rta/IgG 抗 体, 且 阳 性 率 不 随 病 期 而 改 变, 可 作 为 鼻 咽 癌 早 期 诊 断 的 标 志 物 之 一 而 EB 病 毒 Rta/IgG 抗 体 表 达 与 鼻 咽 癌 原 发 灶 大 小 颈 淋 巴 结 转 移 及 远 处 转 移 均 无 明 显 相 关 性, 其 原 因 可 能 与 鼻 咽 肿 瘤 局 部 产 生 EB 病 毒 Rta 抗 原 的 能 力 有 限 以 及 机 体 反 应 有 关 参 考 文 献 : [1] 任 军, 周 玲, 曾 毅. EBV 立 即 早 期 基 因 BRLF1 和 BZLF1 的 研 究 进 展 [J]. 国 外 医 学 病 毒 学 分 册, 2005, 12(4): [2] Feng P, Ren EC, Liu D, et al. Expression of Epstein-Barr virus lytic gene BRLF1 in nasopharyngeal carcinoma: potential use in diagnosis [J]. J Gen Virol, 2000, 81(10): [3] Feng P, Chan SH, Rachel Soo MY, et a1. Antibody response to Epstein-Barr virus Rta protein in patients with nasopharngeal carcinoma [J]. Cancer, 2001, 92(7): l872-l880. [4] 任 军, 张 晓 梅, 张 晓 光, 等. 以 Rtac2/3 为 抗 原 用 于 鼻 咽 癌 病 人 检 测 的 初 步 研 究 [J]. 中 华 微 生 物 学 和 免 疫 学 杂 志, 2006, 26(11): [5] 刘 泰 福, 徐 国 镇. 全 国 鼻 咽 癌 会 议 纪 要 [J]. 中 华 放 射 肿 瘤 学 杂 志, 1992, 1(4): [6] 邓 洪, 曾 毅, 郑 裕 明, 等. 自 然 人 群 人 鼻 咽 癌 血 清 学 普 查 [J]. 中 国 癌 症 杂 志, 2003, 13(2): [7] 张 晓 梅, 钟 建 明, 汤 敏 中, 等. EBV 4 型 IgA/VCA IgA/EA IgG/EA IgG/ZEBRA 抗 体 在 鼻 咽 癌 普 查 和 早 期 诊 断 中 的 应 用 [J]. 中 华 实 验 和 临 床 病 毒 学 杂 志, 2006, 20(3):

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