GB 前 言 本标准代替 GB/T 食品卫生微生物学检验染色法 培养基和试剂 本标准与 GB/T 相比, 主要修改如下 : 删除了培养基和试剂的配方和配制方法 增加了培养基和试剂的质量控制方法和指标 1

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1 中华人民共和国国家标准 GB 食品安全国家标准 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求 发布 实施

2 GB 前 言 本标准代替 GB/T 食品卫生微生物学检验染色法 培养基和试剂 本标准与 GB/T 相比, 主要修改如下 : 删除了培养基和试剂的配方和配制方法 增加了培养基和试剂的质量控制方法和指标 1

3 食品安全国家标准 食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求 1 范围 本标准规定了食品微生物学检验用培养基和试剂的质量要求 本标准适用于食品微生物学检验用培养基和试剂的质量控制 2 术语和定义 2.1 质量控制 为满足质量要求所采取的技术操作和活动 2.2 培养基或试剂的批量 培养基或试剂完整的可追溯单位, 是指满足产品要求 ( 内部控制 ) 和性能测试, 产品型号和质量 稳定的一定量的半成品或成品 这些产品在特定的生产周期生产, 而且编号相同 2.3 培养基及试剂的性能 在特定条件下培养基对测试菌株的反应 2.4 培养基 液体 半固体或固体形式的 含天然或合成成分, 用于保证微生物繁殖 ( 含或不含某类微生物的抑 菌剂 ) 鉴定或保持其活力的物质 2.5 纯化学培养基 由已知分子结构和纯度的化学成分配制而成的培养基 2.6 未定义和部分定义的化学培养基 全部或部分由天然物质 加工过的物质或其他不纯的化学物质构成的培养基 2.7 固体培养基 在液体培养基中加入一定量固化物 ( 如 : 琼脂 明胶等 ), 加热至 100 溶解, 冷却后凝固成固体 状态的培养基 倾注到平皿内的固体培养基一般称之为 平板 ; 倒入试管并摆放成斜面的固体培养基, 当培养 基凝固后通常称作 斜面 2.8 半固体培养基 在液体培养基中加入极少量固化物 ( 如 : 琼脂 明胶等 ), 加热至 100 溶解, 冷却后凝固成半固 体状态的培养基 2

4 2.9 运输培养基在取样后和实验室处理前保护和维持微生物活性且不允许明显增殖的培养基 运输培养基中通常不允许包含使微生物增殖的物质, 但是培养基应能保护菌株 ( 如 : 缓冲甘油 - 氯化钠溶液运输培养基 ) 2.10 保藏培养基用于在一定期限内保护和维持微生物活力, 防止长期保存对其的不利影响, 或使其在长期保存后容易复苏的培养基 ( 如 : 营养琼脂斜面 ) 2.11 悬浮培养基将测试样本的微生物分散到液相中, 在整个接触过程中不产生增殖或抑制作用 ( 如 : 磷酸盐缓冲液 ) 2.12 复苏培养基能够使受损或应激的微生物修复, 使微生物恢复正常生长能力, 但不一定促进微生物繁殖的培养基 2.13 增菌培养基通常为液体培养基, 能够给微生物的繁殖提供特定的生长环境 2.14 选择性增菌培养基能够允许特定的微生物在其中繁殖, 而部分或全部抑制其他微生物生长的培养基 ( 如 :TTB 培养基 ) 2.15 非选择性增菌培养基能够保证多种微生物生长的培养基 ( 如 : 营养肉汤 ) 2.16 分离培养基支持微生物生长的固体或半固体培养基 2.17 选择性分离培养基支持特定微生物生长而抑制其他微生物生长的分离培养基 ( 如 :XLD 琼脂 ) 2.18 非选择性分离培养基对微生物没有选择性抑制的分离培养基 ( 如 : 营养琼脂 ) 2.19 鉴别培养基 ( 特异性培养基 ) 能够进行一项或多项微生物生理和 ( 或 ) 生化特性鉴定的培养基 ( 如 : 麦康凯琼脂 ) 注 : 能够用于分离培养的鉴别培养基被称作分离 ( 鉴别 ) 培养基 ( 如 :XLD 琼脂 ) 2.20 鉴定培养基能够产生一个特定的鉴定反应而通常不需要进一步确证实验的培养基 ( 如 : 乳糖发酵管 ) 注 : 用于分离的鉴定培养基被称为分离 ( 鉴定 ) 培养基 3

5 2.21 计数培养基能够对微生物定量的选择性 ( 如 :MYP 琼脂 ) 或非选择性培养基 ( 如 : 平板计数琼脂 ) 注 : 计数培养基可包含复苏和 ( 或 ) 增菌培养基的特性 2.22 确证培养基在初步复苏 分离和 ( 或 ) 增菌阶段后对微生物进行部分或完全鉴定或鉴别的培养基 ( 如 :BGLB 肉汤 ) 2.23 商品化即用型培养基以即用形式或融化后即用形式置于容器 ( 例如平皿 试管或其他容器 ) 内供应的液体 固体或半固体培养基 : 完全可即用的培养基 ; 需重新融化的培养基 ( 如用于平板倾注技术 ); 使用前需重新融化并分装 ( 如倾注到平皿 ) 的培养基 ; 使用前需重新融化, 添加物质并分装的培养基 ( 如 :TSC 培养基和 Baird Parker 琼脂 ) 2.24 商品化脱水合成培养基使用前需加水和进行处理的干燥培养基, 如 : 粉末 小颗粒 冻干等形式 : 完全培养基 ; 不完全培养基, 使用的时候需加入添加剂 2.25 自制培养基依据完整配方的具体成份配制的培养基 2.26 试剂用于食品微生物检验的染色剂和培养基配套试剂 2.27 测试菌株通常用于培养基性能测试的微生物 注 : 测试菌株根据其来源不同 ( 见 ) 可进行进一步定义 2.28 标准菌株直接从官方菌种保藏机构获得并至少定义到属或种的水平的菌株 按菌株特性进行分类和描述, 最好来源于食品或水的菌株 2.29 标准储备菌株将标准菌株在实验室转接一代后得到的一套完全相同的独立菌株 2.30 储备菌株从标准储备菌株转接一代获得的培养物 2.31 工作菌株由标准储备菌株 储备菌株或标准物质 ( 经证明或未经证明 ) 转接一代获得的菌株 4

6 注 : 标准物质是指在均一固定的浓度中含有具活性的定量化菌种, 经证明的标准物是指其浓度已经证明 3 培养基及试剂质量保证 3.1 证明文件 生产企业提供的文件生产企业应提供以下资料 ( 可提供电子文本 ): 培养基或试剂的各种成分 添加成分名称及产品编号 ; 批号 ; 最终 ph ( 适用于培养基 ); 储存信息和有效期 ; 标准要求及质控报告 ; 必要的安全和 ( 或 ) 危害数据 产品的交货验收对每批产品, 应记录接收日期, 并检查 : 产品合格证明 ; 包装的完整性 ; 产品的有效期 ; 文件的提供 3.2 贮存 一般要求应严格按照供应商提供的贮存条件 有效期和使用方法进行培养基和试剂的保存和使用 脱水合成培养基及其添加成分的质量管理和质量控制脱水合成培养基一般为粉状或颗粒状形式包装于密闭的容器中 用于微生物选择或鉴定的添加成分通常为冻干物或液体 培养基的购买应有计划, 以利于存货的周转 ( 即掌握先购先用的原则 ) 实验室应保存有效的培养基目录清单, 清单应包括以下内容 : 容器密闭性检查 ; 记录首次开封日期 ; 内容物的感官检查 开封后的脱水合成培养基, 其质量取决于贮存条件 通过观察粉末的流动性 均匀性 结块情况和色泽变化等判断脱水培养基的质量的变化 若发现培养基受潮或物理性状发生明显改变则不应再使用 商品化即用型培养基和试剂应严格按照供应商提供的贮存条件 有效期和使用方法进行保存和使用 实验室自制的培养基 5

7 在保证其成分不会改变条件下保存, 即避光 干燥保存, 必要时在 5 ±3 冰箱中保存, 通常建议平板不超过 2 周 ~4 周, 瓶装及试管装培养基不超过 3 个月 ~6 个月, 除非某些标准或实验结果表明保质期比上述的更长 建议需在培养基中添加的不稳定的添加剂应即配即用, 除非某些标准或实验结果表明保质期更长 ; 含有活性化学物质或不稳定性成分的固体培养基也应即配即用, 不可二次融化 培养基的贮存应建立经验证的有效期 观察培养基是否有颜色变化 蒸发 ( 脱水 ) 或微生物生长的情况, 当培养基发生这类变化时, 应禁止使用 培养基使用或再次加热前, 应先取出平衡至室温 3.3 培养基的实验室制备 一般要求正确制备培养基是微生物检验的最基础步骤之一, 使用脱水培养基和其他成分, 尤其是含有有毒物质 ( 如胆盐或其他选择剂 ) 的成分时, 应遵守良好实验室规范和生产厂商提供的使用说明 培养基的不正确制备会导致培养基出现质量问题 ( 见附录 A) 使用商品化脱水合成培养基制备培养基时, 应严格按照厂商提供的使用说明配制 如重量 ( 体积 ) ph 制备日期 灭菌条件和操作步骤等 实验室使用各种基础成分制备培养基时, 应按照配方准确配制, 并记录相关信息, 如 : 培养基名称和类型及试剂级别 每个成分物质含量 制造商 批号 ph 培养基体积( 分装体积 ) 无菌措施 ( 包括实施的方式 温度及时间 ) 配置日期 人员等, 以便溯源 水实验用水的电导率在 25 时不应超过 25 μs/cm( 相当于电阻率 0.4 ΜΩcm), 除非另有规定要求 水的微生物污染不应超过 10 3 CFU/mL 应按 GB , 采用平板计数琼脂培养基, 在 36 ±1 培养 48 h±2 h 进行定期检查微生物污染 称重和溶解小心称量所需量的脱水合成培养基 ( 必要时佩戴口罩或在通风柜中操作, 以防吸入含有有毒物质的培养基粉末 ), 先加入适量的水, 充分混合 ( 注意避免培养基结块 ), 然后加水至所需的量后适当加热, 并重复或连续搅拌使其快速分散, 必要时应完全溶解 含琼脂的培养基在加热前应浸泡几分钟 ph 的测定和调整用 ph 计测 ph, 必要时在灭菌前进行调整, 除特殊说明外, 培养基灭菌后冷却至 25 时,pH 应在标准 ph±0.2 范围内 一般使用浓度约为 40 g/l( 约 1 mol/l) 的氢氧化钠溶液或浓度约为 36.5 g/l( 约 1 mol/l) 的盐酸溶液调整培养基的 ph 如需灭菌后进行调整, 则使用灭菌或除菌的溶液 分装将配好的培养基分装到适当的容器中, 容器的体积应比培养基体积最少大 20% 灭菌 一般要求培养基应采用湿热灭菌法 ( ) 或过滤除菌法 ( 见 ) 6

8 某些培养基不能或不需要高压灭菌, 可采用煮沸灭菌, 如 SC 肉汤等特定的培养基中含有对光和热敏感的物质, 煮沸后应迅速冷却, 避光保存 ; 有些试剂则不需灭菌, 可直接使用 ( 参见相关标准或供应商使用说明 ) 湿热灭菌湿热灭菌在高压锅或培养基制备器中进行, 高压灭菌一般采用 121 ±3 灭菌 15 min, 具体培养基按食品微生物学检验标准中的规定进行灭菌 培养基体积不应超过 1000 ml, 否则灭菌时可能会造成过度加热 所有的操作应按照标准或使用说明的规定进行 灭菌效果的控制是关键问题 加热后采用适当的方式冷却, 以防加热过度 这对于大容量和敏感培养基十分重要, 例如含有煌绿的培养基 过滤除菌过滤除菌可在真空或加压的条件下进行 使用孔径为 0.2 μ m 的无菌设备和滤膜 消毒过滤设备的各个部分或使用预先消毒的设备 一些滤膜上附着有蛋白质或其他物质 ( 如抗生素 ), 为了达到有效过滤, 应事先将滤膜用无菌水润湿 检查应对经湿热灭菌或过滤除菌的培养基进行检查, 尤其要对 ph 色泽 灭菌效果和均匀度等指标进行检查 添加成分的制备制备含有有毒物质的添加成分 ( 尤其是抗生素 ) 时应小心操作 ( 必要时在通风柜中操作 ), 避免因粉尘的扩散造成实验人员过敏或发生其他不良反应 ; 制备溶液时应按产品使用说明操作 不要使用过期的添加剂 ; 抗生素工作溶液应现用现配 ; 批量配制的抗生素溶液可分装后冷冻贮存, 但解冻后的贮存溶液不能再次冷冻 ; 厂商应提供冷冻对抗生素活性影响的有关资料, 也可由使用者自行测定 3.4 培养基的使用 琼脂培养基的融化将培养基放到沸水浴中或采用有相同效果的方法 ( 如高压锅中的层流蒸汽 ) 使之融化 经过高压的培养基应尽量减少重新加热时间, 融化后避免过度加热 融化后应短暂置于室温中 ( 如 2 min) 以避免玻璃瓶破碎 融化后的培养基放入 47 ~50 的恒温水浴锅中冷却保温 ( 可根据实际培养基凝固温度适当提高水浴锅温度 ), 直至使用, 培养基达到 47 ~50 的时间与培养基的品种 体积 数量有关 融化后的培养基应尽快使用, 放置时间一般不应超过 4 h 未用完的培养基不能重新凝固留待下次使用 敏感的培养基尤应注意, 融化后保温时间应尽量缩短, 如有特定要求可参考指定的标准 倾注到样品中的培养基温度应控制在约 45 左右 培养基的脱氧必要时, 将培养基在使用前放到沸水浴或蒸汽浴中加热 15 min; 加热时松开容器的盖子 ; 加热后盖紧, 并迅速冷却至使用温度 ( 如 FT 培养基 ) 添加成分的加入 7

9 对热不稳定的添加成分应在培养基冷却至 47 ~50 时再加入 无菌的添加成分在加入前应先放置到室温, 避免冷的液体造成琼脂凝结或形成片状物 将加入添加成分的培养基缓慢充分混匀, 尽快分装到待用的容器中 平板的制备和储存倾注融化的培养基到平皿中, 使之在平皿中形成厚度至少为 3 mm( 直径 90 mm 的平皿, 通常要加入 18 ml~20 ml 琼脂培养基 ) 将平皿盖好皿盖后放到水平平面使琼脂冷却凝固 如果平板需储存, 或者培养时间超过 48 h 或培养温度高于 40, 则需要倾注更多的培养基 凝固后的培养基应立即使用或存放于暗处和 ( 或 )5 ±3 冰箱的密封袋中, 以防止培养基成分的改变 在平板底部或侧边做好标记, 标记的内容包括名称 制备日期和 ( 或 ) 有效期 也可使用适宜的培养基编码系统进行标记 将倒好的平板放在密封的袋子中冷藏保存可延长储存期限 为了避免冷凝水的产生, 平板应冷却后再装入袋中 储存前不要对培养基表面进行干燥处理 对于采用表面接种形式培养的固体培养基, 应先对琼脂表面进行干燥 : 揭开平皿盖, 将平板倒扣于烘箱或培养箱中 ( 温度设为 25 ~50 ); 或放在有对流的无菌净化台中, 直到培养基表面的水滴消失为止 注意不要过度干燥 商品化的平板琼脂培养基应按照厂商提供的说明使用 3.5 培养基的弃置所有污染和未使用的培养基的弃置应采用安全的方式, 并且要符合相关法律法规的规定 4 质控菌株的保藏及使用 4.1 一般要求为成功保藏及使用菌株, 不同菌株应采用不同的保藏方法, 可选择使用冻干保藏 利用多孔磁珠在-70 保藏 使用液氮保藏或其他有效的保藏方法 4.2 商业来源的质控菌株对于从标准菌种保藏中心或其他有效的认证的商业机构获得原包装的质控菌株, 复苏和使用应按照制造商提供的使用说明进行 4.3 实验室制备的标准储存菌株用于性能测试的标准储存菌株 ( 见附录 B 的图 B.1), 在保存和使用时应注意避免交叉污染, 减少菌株突变或发生典型的特性变化 ; 标准储备菌株应制备多份, 并采用超低温 (-70 ) 或冻干的形式保存 在较高温度下贮存时间应缩短 标准储存菌株用作培养基的测试菌株时应在文件中充分描述其生长特性 标准储存菌株不应用来制备标准菌株 4.4 储存菌株储存菌株通常从冻干或超低温保存的标准储存菌株进行制备 ( 见附录 B 的图 B.2) 制备储存菌株应避免导致标准储存菌株的交叉污染和 ( 或 ) 退化 制备储存菌株时, 应将标准储存菌株制成悬浮液转接到非选择培养基中培养, 以获得特性稳定的菌株 对于商业来源的菌株, 应严格按照制造商的说明执行 储存菌株不应用来制备标准储存菌株或标准菌株 8

10 4.5 工作菌株 工作菌株由储存菌株或标准储存菌株制备 工作菌株不应用来制作标准菌株 标准储存菌株或储存菌株 5 培养基和试剂的质量要求 5.1 基本要求 培养基和试剂培养基和试剂的质量由基础成分的质量 制备过程的控制 微生物污染的消除及包装和储存条件等因素所决定 供应商或制备者应确保培养基和试剂的理化特性满足相关标准的要求, 以下特性的质量评估结果应符合相应的规定 : 分装的量和 ( 或 ) 厚度 ; 外观, 色泽和均一性 ; 琼脂凝胶的硬度 ; 水分含量 ; 20 ~25 的 ph; 缓冲能力 ; 微生物污染 培养基和试剂的各种成分 添加剂或选择剂应进行适当的质量评价 基础成分国家标准中提到的培养基通常可以直接使用 但因其中一些培养基成分 ( 见附录 C) 质量不稳定, 可允许对其用量进行适当的调整, 如 : 根据营养需要改变蛋白胨 牛肉浸出物 酵母浸出物的用量 ; 根据所需凝胶作用的效果改变琼脂的用量 ; 根据缓冲要求决定缓冲物质用量 ; 根据选择性要求决定胆盐 胆汁抽提物和脱氧胆酸盐 抗菌染料的用量 ; 根据抗生素的效价决定其用量 5.2 微生物学要求 概论培养基和试剂应达到附录 D 质量控制标准的要求, 其性能测试方法按 6.1 执行 实验室使用商品化培养基和试剂时, 应保留生产商按 提供的资料, 并制定验收程序, 如需进行验证, 可按 6.2 执行, 并应达到附录 E 质量控制标准要求 微生物污染的控制按批量的不同选择适量的培养基在适当条件下培养, 测定其微生物污染 生产商应根据每种平板或液体培养基的数量, 规定或建立其污染限值, 并记录培养基成分 制备要素和包装类型 分别从初始和最终制备的培养基中抽取或制备至少一个 ( 或 1%) 平板或试管, 置于 37 培养 18 h 或按特定标准中规定的温度时间进行培养 本条款只适用于即用型培养基 9

11 5.2.3 生长特性 一般要求选择下列方法对每批成品培养基或试剂进行评价 : 定量方法 ; 半定量方法 ; 定性方法 采用定量方法时, 应使用参考培养基 ( 见附录 D) 进行对照 ; 采用半定量和定性方法时, 使用参考培养基或能得到 阳性 结果的培养基进行对照有助于结果的解释 参考培养基应选择近期批次中质量良好的培养基或是来自其他供应商的具有长期稳定性的批次培养基或即用型培养基 测试菌株测试菌株是具有其代表种的稳定特性并能有效证明实验室特定培养基最佳性能的一套菌株 测试菌株主要购置于标准菌种保藏中心, 也可以是实验室自己分离的具有良好特性的菌株 实验室应检测和记录标准储备菌株的特性 ; 或选择具有典型特性的新菌株, 使用时应引起注意 ; 最好使用从食品或水中分离的菌株 对不含指示剂或选择剂的培养基, 只需采用一株阳性菌株进行测试 ; 对含有指示剂或选择剂的培养基或试剂, 应使用能证明其指示或选择作用的菌株进行试验 ; 复合培养基 ( 如需要加入添加成分的培养基 ) 需要以下列菌株进行验证 : 具典型反应特性的生长良好的阳性菌株 ; 弱阳性菌株 ( 对培养基中选择剂等试剂敏感性强的菌株 ); 不具有该特性的阴性菌株 ; 部分或完全受抑制的菌株 生长率按规定用适当方法将适量测试菌株的工作培养物接种至固体 半固体和液体培养基中 每种培养基上菌株的生长率应达到所规定的最低限值 ( 见附录 D 附录 E) 选择性为定量评估培养基的选择性, 应按照规定以适当方法将适量测试菌株的工作培养物接种至选择性培养基和参考培养基中, 培养基的选择性应达到规定值 ( 见附录 D 附录 E) 生理生化特性 ( 特异性 ) 确定培养基的菌落形态学 鉴别特性和选择性, 或试剂的鉴别特性, 以获得培养基或试剂的基本特性 ( 见附录 D 附录 E) 性能评价和结果解释若按照规定的所有测试菌株的性能测试达到标准, 则该批培养基或试剂的性能测试结果符合规定 若基本要求和微生物学要求均符合规定, 则该批培养基或试剂可被接受 6 培养基和试剂性能测试方法 6.1 生产商及实验室自制培养基和试剂的质量控制的测试方法 10

12 6.1.1 非选择性分离和计数固体培养基的目标菌生长率定量测试方法 平板的制备与保存 倾注融化的培养基到平皿中, 使之在平皿中形成一个至少 3 mm 厚的琼脂层 ( 直径 90 mm 的平皿通常要加入 18 ml~20 ml 琼脂培养基 ), 需添加试剂的培养基, 应使培养基冷却至 47 ~50 后才添加试剂 倾注后将平板放到水平平面, 使琼脂冷却凝固 凝固后的培养基应立即使用或存放于暗处和 ( 或 ) 2 ~8 冰箱的密封袋中, 在有效期内使用 使用前应对琼脂表面进行干燥, 但应注意不要过度干燥 工作菌悬液的制备将标准储备菌株接种到非选择性肉汤培养过夜或采用其他方法, 制备 10 倍系列稀释的菌悬液 生长率测试常用每平板的接种水平为 20 CFU~200 CFU 接种选择合适稀释度的工作菌悬液 0.1 ml, 均匀涂布接种于待测平板和参比平板 每一稀释度接种两个平板 可使用螺旋平板法 ( 见附录 F) 或倾注法进行接种, 并按标准规定的培养条件培养平板 计算选择菌落数适中的平板进行计数, 按下列式 (1) 计算生长率 P R = s No N (1) 式中 : P R 生长率 ; N S 待测培养基平板上得到的菌落总数 ; N 0 参比培养基平板上获得的菌落总数 ( 该菌落总数应 100CFU) 参比培养基的选择 : 一般细菌采用 TSA, 一般霉菌和酵母采用沙氏葡萄糖琼脂, 对营养有特殊要求的微生物采用适合其生长的不含抑菌剂或抗生素的培养基 结果解释目标菌在培养基上应呈现典型的生长 非选择性分离和计数固体培养基上目标菌的生长率应不小于 选择性分离和计数固体培养基的测试方法 目标菌生长率定量测试方法 平板的制备与保存按照 中要求进行 工作菌悬液的制备按照 中要求进行 接种按照 中要求进行 11

13 计算按照 中要求进行 结果解释目标菌在培养基上应呈现典型的生长 选择性分离固体培养基上目标菌的生长率一般不小于 0.5, 最低应为 0.1; 选择性计数固体培养基上目标菌的生长率一般不小于 0.7 参照附录 F 培养基质量控制标准 非目标菌 ( 选择性 ) 半定量测试方法 平板的制备与保存按照 中要求进行 工作菌悬液的制备将标准储备菌株接种到非选择性肉汤培养过夜作为工作菌悬液 接种用 1 μl 接种环取选择性测试工作菌悬液 1 环, 在待测培养基表面划六条平行直线 ( 如图 1), 同时接种两个平板, 划线时可在培养基下面放一个模板图, 按标准规定的培养条件培养平板 操作时用接种环而不用接种针, 接种环应完全浸入培养基中 取一满环接种物, 将接种环接触容器边缘 3 次可去除多余的液体 划线时, 接种环与琼脂平面的角度应为 20 ~30 接种环压在琼脂表面的压力和划线速度前后一致, 整个划线应快速连续, 移取液体培养物时应将接种环伸入培养液下部分以防止环上产生气泡或泡沫 图 1 非目标菌半定量划线法接种模式图 计算培养后按以下方法对培养基计算生长指数 G 每条有比较稠密菌落生长的划线则 G 为 1, 每个培养皿上最多为 6 分 如果仅一半的线有稠密菌落生长, 则 G 为 0.5 如果划线上没有菌落生长 生长量少于划线的一半或菌落生长微弱, 则 G 为 0 记录每个平板的得分总和便得到 G 同时接种两个平板 结果解释 12

14 非目标菌的生长指数 G 一般小于或等于 1, 至少应达到小于 非目标菌 ( 特异性 ) 定性测试方法 平板的制备与保存按照 中要求进行 工作菌悬液的制备按照 中要求进行 接种用 1 μl 接种环取测试菌培养物在测试培养基表面划平行直线 并按标准规定的培养条件培养平板 结果解释非目标菌应有典型的菌落外观 大小和形态 非选择性增菌培养基的半定量测试方法 培养基的制备将培养基分装试管, 每管 10 ml 工作菌悬液的制备将标准储备菌株接种到非选择性肉汤培养过夜或采用其他制备方法, 制备 10 倍系列稀释的菌悬液 接种在装有待测培养基的试管中接种 10 CFU~100 CFU 的目标菌, 每管接种量为 1 ml, 接种两个平行管 同时将 1 ml 菌悬液 ( 与试管接种同一稀释度 ) 倾注平板, 接种两个平板, 作接种量计数用 按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养 ( 如增菌时间为 8 h 以下, 需取 10 μl 培养后的增菌液倾注到适合的培养基中, 再按适合的培养时间和温度进行培养 ) 结果解释用目测的浊度值 ( 如 0~2) 评估培养基 : 0 表示无混浊 ; 1 表示很轻微的混浊 ; 2 表示严重的混浊 目标菌的浊度值应为 2 有时可以观察到微生物生长后聚集成细胞团, 沉积在试管或瓶子底部, 发生这种情况时, 小心振荡试管后再进行观察 如增菌 8 h 以下,10 μl 增菌液培养计数结果参照附录 D 培养基质量控制标准 选择性增菌培养基的半定量测试方法 培养基的制备将培养基分装试管, 每管 10 ml 工作菌悬液的制备 13

15 按照 中要求进行 接种 混合菌的接种在装有待测培养基的试管中接种 10 CFU~100 CFU 的目标菌 ( 特殊接菌量参照附录 D 培养基质量控制标准 ), 并接种 1000 CFU~5000 CFU 的非目标菌, 接种总量为 1 ml, 同时接种两个平行管, 混匀 同时分别将目标菌菌悬液 ( 与试管接种同一稀释度 ) 和非目标菌菌悬液 ( 比试管接种小 10~100 倍稀释度 )1mL 倾注平板, 接种两个平板, 作接种量计数用 按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养 非目标菌的接种在装有待测培养基的试管中接种 1000 CFU~5000 CFU 的非目标菌, 接种量为 1 ml, 同时接种两个平行管, 混匀 按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养 培养液的接种 混合菌培养液的接种用 10 μl 接种环取 1 环经培养后的混合菌培养液, 划线接种到特定的选择性平板上, 同时每管接种一个平板 按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养 非目标菌培养液的接种吸取 10 μl 经培养后的非目标菌培养液, 均匀涂布接种到非选择性平板 ( 如 TSA) 上 同时每管接种一个平板 可使用倾注法进行接种, 并按标准规定的培养条件培养平板 计算和结果解释目标菌在选择性平板上的菌落应 >10 CFU, 则表示待测液体培养基的生长率良好 ; 非目标菌在非选择性平板上的菌落数应 <100 CFU, 则表示待测液体培养基的选择性为良好 选择性液体计数培养基的半定量测试方法 培养基的制备将培养基分装试管, 每管 10 ml 工作菌悬液的制备按照 中要求进行 接种 目标菌的接种在装有待测培养基的试管中接种 10 CFU~100 CFU 的目标菌, 接种总量为 1 ml, 同时接种两个平行管, 混匀 同时将 1 ml 菌悬液 ( 与试管接种同一稀释度 ) 倾注平板, 接种两个平板, 作接种量计数用 按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养 非目标菌的接种在装有待测培养基的试管中接种 1000 CFU~5000 CFU 的非目标菌, 接种总量为 1 ml, 同时接种 14

16 两个平行管, 混匀 同时将 1 ml 菌悬液 ( 比试管接种小 10~100 倍稀释度 ) 倾注平板, 接种两个平板, 作接种量计数用 按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养 结果解释用目测的浊度值 ( 如 0~2) 评估培养基 : 0 表示无混浊 ; 1 表示很轻微的混浊 ; 2 表示严重的混浊 并记录小导管收集气体的体积比 目标菌的浊度值应为 2, 产气应为 1/3 或以上 ; 非目标菌的浊度值应为 0 或 1, 无产气现象 注 : 有时可以观察到微生物生长后聚集成细胞团, 沉积在试管或瓶子底部, 发生这种情况时, 小心振荡试管后再进行观察 悬浮培养基和运输培养基的定量测试方法 培养基的制备将培养基分装试管, 每管 10 ml( 有特殊要求的可选用 5 ml) 目标菌工作菌悬液的制备按照 中要求进行 接种在装有待测培养基的试管中接种 100 CFU~1000 CFU 的目标菌, 同时接种两个平行管, 混匀后, 立即吸取 1 ml 待测培养基混合液, 参照附录 F 培养基质量控制标准选用相应的培养基倾注平板, 每管待测培养基接种一个平板 按标准方法中规定的培养时间和温度培养后, 进行菌落计数 剩余已接种菌液的待测培养基置 20 ~25 放置 45min 后 ; 再吸取 1 ml 倾注平板, 每管培养基接种一个平板, 按标准方法中规定的培养时间和温度培养后, 进行菌落计数 如保存条件有特殊要求的待测培养基, 参照附录 F 培养基质量控制标准要求放置或培养后再进行菌落计数 结果观察与解释待测培养基中的菌落数变化应在 ±50% 内 Mueller-Hinton 血琼脂的纸片扩散测试方法 ( 定性测试方法 ) 平板的制备与保存倾注融化的培养基到平皿中, 使之在平皿中形成一个厚度为 4 mm~5 mm 的琼脂层 倾注后将平板放到水平平面, 使琼脂冷却凝固 凝固后的培养基应立即使用或存放于暗处和 ( 或 )5 ±3 冰箱的密封袋中, 在有效期内使用 使用前应可将平板置 35 温箱中或置室温层流橱中对琼脂表面进行干燥, 培养基表面应湿润, 但不能有水滴, 培养皿也不应有水滴 质控菌株的复苏将质控菌株接种到血平板上, 按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养 检查纯度合格后, 用于质控工作菌悬液的制备 质控菌工作菌悬液的制备 15

17 将纯度满意的质控菌株培养物悬浮于 TSB 肉汤中, 并调整浊度为 0.5 麦氏标准 ( 约 CFU/mL~ CFU/mL) 接种用涂布法将质控工作菌悬液接种于 MH 平板上, 并贴上相应的抗生素纸片 ( 每平板最多贴 6 片 ), 将平板翻转后按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养 调整菌悬液浊度与接种所有平板间的时间间隔不要超过 15 min 结果观察与解释在无反射黑色背景下, 观察有无抑菌环 结果解释参照参照附录 D 表 D 鉴定培养基的测试方法 液体培养基 培养基的制备将培养基分装试管, 再进行灭菌和添加试剂 工作菌悬液的制备将标准储备菌株接种到非选择性肉汤中或采用其他制备方法, 制备成 5 McFarland 浊度 ( 约 10 9 CFU/mL) 的菌悬液 接种吸取 0.05 ml~0.08 ml( 约 1~2 滴 ) 至待测培养基内, 按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养 结果观察与解释需加指示剂的试验在微生物生长良好的情况下, 按顺序加入指示剂, 再观察结果 结果解释参照附录 D 表 D 半固体培养基 培养基的制备将培养基分装试管 灭菌后竖立放置, 冷却后备用 接种取新鲜质控菌株斜面, 用接种针挑取菌苔穿刺接种至待测培养基内 按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养 结果观察与解释需加指示剂的试验在微生物生长良好的情况下, 按顺序加入指示剂, 再观察结果 结果解释参照附录 D 表 D 高层斜面培养基和斜面培养基 培养基的制备 16

18 将培养基分装试管 灭菌后摆放成高层斜面 ( 斜面与底层高度约为 2:3) 和普通斜面 ( 斜面与底层高度约为 3:2), 冷却后备用 接种高层斜面培养基 : 取新鲜质控菌株斜面, 用接种针挑取菌苔穿刺接种至琼脂高层, 穿刺接种完毕后, 再在斜面上划 之 字形接种 ; 斜面培养基 : 取新鲜质控菌株斜面, 用接种环挑取菌苔在斜面上划 之 字形接种 按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养 结果观察与解释需加指示剂的试验在微生物生长良好的情况下, 按顺序加入指示剂, 再观察结果 结果解释参照附录 D 表 D 平板培养基 培养基的制备倾注灭菌融化的培养基到平皿中, 使之在平皿中形成一个至少 3 mm 厚的琼脂层 ( 直径 90 mm 的平皿通常要加入 18 ml~20 ml 琼脂培养基 ) 接种取新鲜质控菌株斜面, 用接种环挑取菌苔在平板上划 之 字形接种, 或用接种针挑取菌苔在平板上点种接种 按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养 结果观察与解释参照附录 D 表 D 实验试剂的测试方法 实验方法按试剂说明书进行 结果观察与解释参照附录 D 表 D 实验室使用商品化培养基和试剂的质量控制的测试方法 非选择性分离和计数固体培养基的半定量测试方法 平板的制备与保存按照 中要求进行 工作菌悬液的制备将标准储备菌株接种到非选择性肉汤培养过夜作为工作菌悬液 接种 17

19 用 1 μl 接种环进行平板划线 ( 如图 2) A 区用接种环按 0.5 cm 的间隔划 4 条平行线, 按同样的方法在 B 区和 C 区划线, 最后在 D 区内划一条连续的曲线 同时接种两个平板, 划线时可在培养基下面放一个模板图, 并按标准规定的培养条件培养平板 图 2 目标菌半定量划线法接种模式图 操作时用接种环而不用接种针, 接种环应完全浸入培养基中 取一满环接种物, 将接种环接触容器边缘 3 次可去除多余的液体 划线时, 接种环与琼脂平面的角度应为 20 ~30 接种环压在琼脂表面的压力和划线速度前后一致, 整个划线应快速连续, 移取液体培养物时应将接种环伸入培养液下部分以防止环上产生气泡或泡沫 通常用同一个接种环对 A~D 区进行划线, 操作过程不需要对接种环灭菌 但为了得到低生长指数 G, 在接种不同部分时应更换接种环或对其灭菌 计算培养后, 评价菌落的形状 大小和生长密度, 并计算生长指数 G 每条有比较稠密菌落生长的划线则 G 为 1, 每个培养皿上 G 最大为 16 如果仅一半的线有稠密菌落生长, 则 G 为 0.5 如果划线上没有菌落生长 生长量少于划线的一半或菌落生长微弱, 则 G 为 0 记录每个平板的得分总和便得到 G 如, 菌落在 A 区和 B 区全部生长, 而在 C 区有一半线生长, 则 G 为 结果解释目标菌在培养基上应呈现典型的生长 目标菌的生长指数 G 大于或等于 6 时, 培养基可以接受 非选择培养基的 G 值通常较高 选择性分离和计数固体培养基的半定量测试方法 目标菌半定量测试方法按照 中要求进行 非目标菌 ( 选择性 ) 半定量测试方法按照 中要求进行 18

20 6.2.3 非选择性增菌培养基 选择性增菌培养基和选择性液体计数培养基的定性测试方法 培养基的制备将培养基分装试管, 每管 10 ml 工作菌悬液的制备将标准储备菌株接种到非选择性肉汤培养过夜, 进行 10 倍系列稀释至 10-3, 或采用其他方法, 制备成 10 5 CFU/mL~10 7 CFU/mL 的菌悬液作为工作菌悬液 接种用 1 μl 接种环取一环工作菌悬液直接接种到用于性能测试的液体培养基中, 按适合的培养时间和温度进行培养 结果解释用目测的浊度值 ( 如 0~2) 评估培养基 : 0 表示无混浊 ; 1 表示很轻微的混浊 ; 2 表示严重的混浊 目标菌的浊度值应为 2, 非目标菌的浊度值应为 0 或 1 有时可以观察到微生物生长后聚集成细胞团, 沉积在试管或瓶子底部, 发生这种情况时, 小心振荡试管后再进行观察 选择性液体计数培养基目标菌应有产气现象, 非目标菌无产气现象 悬浮培养基和运输培养基的定性测试方法 培养基的制备按照 中要求进行 工作菌悬液的制备将标准储备菌株接种到非选择性肉汤培养过夜作为工作菌悬液 接种用 1 μl 接种环取一环工作菌悬液直接接种到装有待测培养基的试管中, 混匀后, 立即用 10 μl 接种环取一环工作菌培养物划平行线接种平板, 按标准方法中规定的培养时间和温度培养 ; 剩余已接种菌液的待测培养基置 20 ~25 放置 45 min 后, 再用 10 μl 接种环取一环工作菌培养物划平行线接种平板, 按标准方法中规定的培养时间和温度培养 如保存条件有特殊要求的待测培养基, 参照附录 G 培养基质量控制标准要求放置或培养后再进行划线接种 结果观察与解释接种前后平板上目标菌的生长情况应均为良好 Mueller-Hinton 血琼脂的测试方法按照 中要求进行 鉴定培养基的测试方法 19

21 按照 中要求进行 实验试剂的测试方法 按照 中要求进行 7 测试结果的记录 7.1 制造商信息培养基制造商或供应商应按客户的要求提供培养基常规信息和相关测试菌株生长特性信息 7.2 溯源性按照质量体系的要求, 对所有培养基性能测试的数据归档, 并在有效期内进行适当的保存 建议使用测试结果记录单 ( 见附录 G) 进行文件记录并评价测试结果 20

22 附录 A 培养基的不正确配制出现的质量问题及原因分析 培养基的不正确配制出现的质量问题及原因分析见表 A.1 异常现象培养基不能凝固 ph 不正确颜色异常产生沉淀培养基出现抑制 / 低的生长率选择性差污染 表 A.1 常见质量问题与解答 可能原因制备过程中过度加热低 ph 造成培养基酸解称量不正确琼脂未完全溶解培养基成分未充分混匀制备过程中过度加热水质不佳外部化学物质污染测定 ph 时温度不正确 ph 计未正确校准脱水培养基质量差制备过程中过度加热水质不佳 ph 不正确外来污染脱水培养基质量差制备过程中过度加热水质不佳脱水培养基质量差 ph 未正确控制原料中的杂质制备过程中过度加热脱水培养基质量差水质不佳使用成分不正确, 如, 成分称量不准, 添加剂浓度不正确制备容器或水中的有毒残留物制备过程中过度加热脱水培养基质量差配方使用不对添加成分的加入不正确, 例如加入添加成分时培养基过热或添加浓度错误添加剂污染不适当的灭菌无菌操作技术存在问题添加剂污染 21

23 附录 B 标准储存菌株和工作菌株的制备 B.1 图 B.1 给出了从标准菌株制备标准储存菌株的流程 获得标准菌株 验证和文件归档 依据生产商指引进行复苏 a 在 5% 的血琼脂 TSA 或其他适 合的固体培养基上进行分离 验证菌株的纯度和特性 b 否 符合 是 用合适的培养基制备菌悬液 c 分装进行冻存 d e 或冻干 标准储存菌株 f a b c d e f 通常悬浮于营养肉汤中适宜时间进行复苏 验证菌落形态和革兰氏染色或用生化试验进行鉴定 例如,TSB 添加 10%~15% 甘油作为冷冻保护培养基 冻存管可含有多孔的小珠子 在不高于 -70 低温冷冻保存可延长保存的时间 禁止采用较高的温度保存 可作为工作菌株来使用 图 B.1 制作标准储存菌株的流程图 22

24 B.2 图 B.2 给出了从标准储存菌株制备工作菌株的流程 a 标准储存菌株 迅速解冻 选择 1 b 在适合的固体培养基上培养, 即为工作菌株 在适合的固体培养基上培养 选择 2 c 验证菌株的纯度和形态 验证菌株的纯度和形态 否 符合 符合 否 是 制备用于测试的工作菌株 是 接种到合适的培养基 d e 或冻存菌悬液 在合适的培养基上分离 = 工作菌株 验证纯度 符合 否 是 制备用于测试的工作菌株 a b c d e 如果标准储存菌株来源于别处, 应加以验证及归档 此流程更合适 此流程对某些菌株是必须的, 如定量试验 对所有阶段进行归档 例如, 可接种到 TSA 斜面 TSA 血琼脂斜面或其他合适的培养基, 培养, 然后在合适的温度 ( 依据不同微生物 在 18 ~25 或 2 ~8 ) 可存放 4 周 例如,TSB 添加 10%~15% 甘油作为冷冻保护培养基 在不高于 -70 低温冷冻保存可延长保存的时间 禁止采用 较高的温度保存 图 B.2 制作工作菌株的流程图 23

25 附录 C 食品安全微生物检验标准中指定的培养基成分 C.1 蛋白胨 酶解酪蛋白 : 包括胃蛋白酶消化的酪蛋白和胰蛋白酶消化的酪蛋白与胰蛋白胨 酶解大豆粉 酶解动物组织 : 包括肉胨 胃蛋白酶消化的肉组织和胰酶消化的肉组织 心酶解物 酶解明胶 酶解动物组织 植物组织 : 包括包括蛋白示 胨 C.2 浸膏 肉浸膏 脑心浸膏 酵母浸膏 细菌学牛胆汁 胆盐 3 号胆盐 C.3 琼脂 细菌学琼脂 C.4 其他 卵黄乳液 脱脂奶粉 酸水解酪蛋白 24

26 附录 D 生产商及实验室自制培养基和试剂的质量控制标准 生产商及实验室自制培养基和试剂的质量控制标准见表 D.1~ 表 D.9 表 D.1 非选择性分离和计数固体培养基质量控制标准 培养基 状态 功能分类 质控指标 培养条件 质控菌株 参比培养基 方法质控评定标准 特征性反应 胰蛋白胨大豆琼脂 固体 非选择性分离 生长率 TSA 定量 PR 0.7 ±2h 粪肠球菌 ATCC MC 培养基 固体 非选择性计数 生长率 中等偏小, 边缘光滑的红色菌落, 嗜热链球菌 IFFI 6038 MC 培养基定量 PR h±2h 可有淡淡的晕 德氏乳杆菌保加利亚亚种 CICC6032 圆形凸起, 中等大小, 边缘整齐, 无色不透明 MRS 培养基 固体 非选择性计数 生长率 圆形凸起, 菌落偏小, 边缘整齐, 无嗜热链球菌 IFFI 6038 MRS 培养基定量 PR h±2h 色不透明 婴儿双歧杆菌 CICC 6069( 厌氧培养 ) 圆形, 中等大小, 边缘整齐, 瓷白色 3% 氯化钠胰蛋白胨大豆 副溶血性弧菌 ATCC % 氯化钠固体非选择性分离生长率琼脂 (TSA) 18h~ 创伤弧菌落 ATCC TSA 定量 PR 0.7 无色半透明菌落 营养琼脂固体非选择性分离生长率金黄色葡萄球菌 ATCC 6538 TSA 定量 PR 0.7 枯草芽胞杆菌 ATCC6633 含 0.6% 酵母浸膏的胰酪 30 ±1 固体非选择性分离生长率胨大豆琼脂 (TSA-YE) ~48h 单核细胞增生李斯特氏菌 ATCC TSA 定量 PR 0.7 平板计数琼脂 (PCA) 固体非选择性计数生长率金黄色葡萄球菌 ATCC 6538 TSA 定量 PR h±2h 枯草芽胞杆菌 ATCC

27 表 D.2 选择性分离和计数固体培养基质量控制标准 GB XXXX 培养基状态功能分类质控指标培养条件质控菌株参比培养基方法质控评定标准特征性反应伤寒沙门氏菌黑色菌落, 有金属光泽生长率 CMCC(B)50071 TSA 定量 PR 0.5 选择性分 亚硫酸铋琼脂 (BS) 固体鼠伤寒沙门氏菌 ATCC14028 黑色或灰绿色菌落, 有金属光泽离 40h~48h 选择性 半定量 G 1 粪肠球菌 ATCC 鼠伤寒沙门氏菌 ATCC14028 绿 - 蓝色菌落, 有黑心生长率福氏志贺氏菌 TSA 定量 PR 0.5 选择性分 绿 - 蓝色菌落 HE 琼脂固体 CMCC(B)51572 离 18h~ G<5 橙红色菌落, 可有胆酸沉淀选择性 半定量粪肠球菌 ATCC G 1 鼠伤寒沙门氏菌 ATCC14028 黑色菌落生长率福氏志贺氏菌 TSA 定量 PR 0.5 木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂选择性分 无色菌落, 无黑心固体 CMCC(B)51572 (XLD) 离 18h~ G<5 黄色菌落选择性半定量金黄色葡萄球菌 ATCC6538 G 1 生长率鼠伤寒沙门氏菌 ATCC14028 TSA 定量 PR 0.5 按说明书判定 按说明书判定选择性分 沙门氏菌显色培养基固体特异性奇异变形杆菌定性离 18h~ 按说明书判定 CMCC(B)49005 选择性粪肠球菌 ATCC 半定量 G 1 单核细胞增生李斯特氏菌灰绿色菌落, 中心凹陷黑色, 周围有生长率 TSA 定量 PR 0.5 选择性分 ATCC19115 黑色 PALCAM 琼脂固体离 ~48h 选择性 半定量 G 1 粪肠球菌 ATCC 大肠埃希氏菌 ATCC25922 TSA 鲜桃红色或粉红色, 可有胆酸沉淀选择性分生长率 福氏志贺氏菌定量 PR 0.5 无色至浅粉红色, 半透明棕色或绿色麦康凯琼脂 (MAC) 固体离 20h~ CMCC(B)51572 菌落选择性金黄色葡萄球菌 ATCC6538 半定量 G 1 生长率阪崎肠杆菌 ATCC29544 TSA 定量 PR 0.5 按说明书判定普通变形杆菌选择性分 - 按说明书判定阪崎肠杆菌显色培养基固体特异性 CMCC(B)49027 定性离 ±2h - 按说明书判定选择性粪肠球菌 ATCC 半定量 G 1 26

28 表 D.2 ( 续 ) GB XXXX 培养基 状态 功能分类 质控指标 培养条件 质控菌株 参比培养基 方法 质控评定标准 特征性反应 CIN-1 培养基 固体 小肠结肠炎耶尔森氏菌生长率 TSA 定量 PR 0.5 红色牛眼状菌落选择性分 26 ±1 CMCC(B)52204 离特异性 48h±2h 定性 - 圆形 粉红色菌, 边缘有胆汁沉淀环 选择性金黄色葡萄球菌 ATCC6538 半定量 G 1 改良 Y 培养基 固体 小肠结肠炎耶尔森氏菌生长率 TSA 定量 PR 0.5 无色透明不黏稠菌落选择性分 26 ±1 CMCC(B)52204 离特异性 48h±2h 定性 - 粉红色菌落 选择性金黄色葡萄球菌 ATCC6538 半定量 G 1 生长率 大肠埃希氏菌 ATCC25922 TSA 定量 PR 0.5 黑色菌落, 具金属光泽 伊红美蓝琼脂 (EMB) 固体 选择性分 鼠伤寒沙门氏菌特异性离 18h~ ATCC14028 定性 - 菌落呈无色 半透明 选择性 金黄色葡萄球菌 ATCC6538 半定量 G<5 大肠埃希氏菌 O157:H7 生长率 TSA 定量 PR 0.5 无色菌落改良山梨醇麦康凯琼脂选择性分 NCTC12900 固体 (CT-SMAC) 离特异性 18h~ 大肠埃希氏菌 ATCC25922 定性 粉红色菌落, 周围有胆盐沉淀 选择性金黄色葡萄球菌 ATCC6538 半定量 G 1 生长率 大肠埃希氏菌 O157: H7NCTC12900 TSA 定量 PR 0.5 按说明书判定 O157 显色培养基 固体 选择性分特异性 大肠埃希氏菌 ATCC25922 定性 按说明书判定 离 18h~ 粪肠球菌 ATCC 半定量 G 1 选择性奇异变型杆菌 CMCC(B)49005 半定量 G 1 生长率 单核细胞增生李斯特氏菌 ATCC19115 TSA 定量 PR 0.5 蓝绿色菌落, 带白色晕环 选择性分 英诺克李斯特氏菌李斯特氏菌显色培养基固体特异性定性 蓝绿色菌落, 无白色晕环离 ~48h ATCC33090 选择性半定量 G 1 粪肠球菌 ATCC 福氏志贺氏菌白色, 突起, 无色素沉淀圈 CMCC(B)51572 生长率 TSA 定量 PR 0.5 痢疾志贺氏菌白色, 突起, 有清晰环, 无色素沉淀选择性分 志贺氏菌显色培养基固体 CMCC(B)51105 圈离 20h~ 黄色, 有清晰环, 无色素沉淀圈特异性定性 产气肠杆菌 ATCC13048 绿色菌落, 无环和沉淀圈 选择性 金黄色葡萄球菌 ATCC 6538 半定量 G 1 27

29 改良 CCD(mCCD) 琼脂 Skirrow 琼脂 选择性分离 表 D.2 ( 续 ) 培养基状态功能分类质控指标培养条件质控菌株参比培养基方法质控评定标准特征性反应 42 ±1 无抗生素的生长率 ~48h 空肠弯曲菌 ATCC33291 定量 PR 0.5 CCD 固体微需氧 改良纤维二糖 - 多黏菌素 B- 多黏菌素 E(mCPC) 琼脂 纤维二糖 - 多黏菌素 E(CC) 琼脂 硫代硫酸钠 - 柠檬酸盐 - 胆盐 - 蔗糖琼脂 (TCBS) 弧菌显色培养基 Baird-Parker 琼脂 固体 固体 固体 固体 固体 固体 选择性分离 选择性分离 选择性分离 选择性分离 选择性分离 选择性计数 GB XXXX 菌落有光泽 潮湿 扁平, 呈扩散生长倾向 选择性 42 ±1 ~48h 金黄色葡萄球菌 ATCC 6538 半定量 G 1 生长率 42 ±1 无抗生素的菌落灰色 扁平 湿润有光泽, 呈沿 ~48h, 微空肠弯曲菌 ATCC33291 定量 PR 0.5 CCD 接种线向外扩散倾向需氧 选择性 42 ±1 大肠埃希氏菌 ATCC25922 ~48h 金黄色葡萄球菌 ATCC 6538 半定量 G 1 3% 氯化钠圆型扁平, 中心不透明, 边缘透明的黄生长率 39.5 ±0.5 创伤弧菌 ATCC27562 定量 PR 0.1 TSA 色菌落或 36 ±1 特异性霍乱弧菌 VBO 定性 紫色菌落 18h~ 选择性副溶血性弧菌 ATCC17802 半定量 G 1 3% 氯化钠圆型扁平, 中心不透明, 边缘透明的黄生长率 39 ~40 创伤弧菌 ATCC27562 定量 PR 0.5 TSA 色菌落或 36 ±1 特异性霍乱弧菌 VbO 定性 紫色菌落 18h~ 选择性副溶血性弧菌 ATCC17802 半定量 G 1 3% 氯化钠生长率 副溶血性弧菌 ATCC17802 定量 PR 0.2 绿色菌落 TSA 18h~ 选择性 半定量 G 1 3% 氯化钠生长率副溶血性弧菌 ATCC17802 定量 PR 0.5 按说明书判定 TSA 霍乱弧菌 VbO 按说明书判定特异性 18h~ 定性 溶藻弧菌 ATCC33787 按说明书判定 选择性 大肠埃希氏菌 ATCC25922 半定量 G 1 生长率 金黄色葡萄球菌 ATCC 菌落黑色凸起, 周围有一混浊带, 在 TSA 定量 PR 其外层有一透明圈 特异性 18h~ 或表皮葡萄球菌 45h~48h CMCC(B)26069 定性 黑色菌落, 无混浊带和透明圈 选择性 半定量 G 1 28

30 莫匹罗星锂盐 (Li-Mupirocin) 改良 MRS 培养基 固体 选择性计数 48h±2h 厌氧培养 表 D.2 ( 续 ) GB XXXX 培养基 状态 功能分类 质控指标 培养条件 质控菌株 参比培养基 方法 质控评定标准 特征性反应 大肠埃希氏菌 ATCC25922 结晶紫中性红胆盐琼脂选择性计生长率 TSA 定量 PR 0.7 有或无沉淀环的紫红色或红色菌落固体弗氏柠檬酸杆菌 ATCC43864 (VRBA) 数 18h~ 选择性粪肠球菌 ATCC 半定量 G<5 VRB-MUG 琼脂 固体 带有沉淀环的紫红色或红色菌落, 有生长率大肠埃希氏菌 ATCC25922 TSA 定量 PR 0.7 选择性计 荧光数特异性 18h~ 弗氏柠檬酸杆菌 ATCC43864 定性 可带有沉淀环的红色菌落, 无荧光 选择性粪肠球菌 ATCC 半定量 G<5 马铃薯葡萄糖琼脂 (PDA) 固体 酿酒酵母 ATCC 9763 沙氏葡萄糖奶油色菌落生长率定量 PR 0.7 选择性计 28 ±1 黑曲霉 ATCC 琼脂白色菌丝, 黑色孢子数 5d 选择性 半定量 G 1 金黄色葡萄球菌 ATCC 6538 孟加红培养基 固体 酿酒酵母 ATCC 9763 沙氏葡萄糖奶油色菌落生长率定量 PR 0.7 选择性计 28 ±1 黑曲霉 ATCC 琼脂白色菌丝, 黑色孢子数 5d 选择性 半定量 G 1 金黄色葡萄球菌 ATCC 6538 生长率 婴儿双岐杆菌 CICC 6069 MRS 培养基 定量 PR 0.7 圆形凸起, 边缘整齐, 无色不透明 甘露醇卵黄多粘菌素琼脂 (MYP) 胰胨 - 亚硫酸盐 - 环丝氨酸琼脂 (TSC) 固体 固体 选择性计数 选择性计数 选择性 德氏乳杆菌保加利亚亚种 CICC6032 半定量 G 1 嗜热链球菌 IFFI 6038 蜡样芽胞杆菌菌落为微粉红色, 周围有淡粉红色沉 TSA 定量 PR 0.7 CMCC(B)63303 淀环 枯草芽胞杆菌 ATCC6633 定性 - 黄色菌落, 无沉淀环 生长率特异性 30 ±2 ~48h 选择性 大肠埃希氏菌 ATCC25922 半定量 G 1 生长率 产气荚膜梭菌 ATCC13124 TSC 定量 PR 0.7 黑色菌落 选择性 20h~ 厌氧培养 艰难梭菌 ATCC43593 半定量 G 1 29

31 表 D.3 非选择性增菌培养基质量控制标准 培养基状态功能分类质控指标培养条件质控菌株接种计数培养基方法质控评定标准 GB XXXX 含 0.6% 酵母浸膏的胰酪胨 大豆肉汤 (TSB-YE) 液体非选择性增菌生长率 30 ±1 ~48h 单核细胞增生李斯特氏菌 ATCC TSA 半定量混浊度 2 液体硫乙醇酸盐培养基 (FTG) 液体非选择性增菌生长率 18h~ 产气荚膜梭菌 ATCC13124 哥伦比亚琼脂半定量混浊度 2 缓冲蛋白胨水 (BP) 液体非选择性增菌生长率 8h 鼠伤寒沙门氏菌 ATCC14028 TSA 半定量 取 10μL 增菌液倾注 TSA 平板 培养 18h~, 在 TSA 上 >100CFU 脑心浸出液肉汤 (BHI) 液体非选择性增菌生长率 18h~ 金黄色葡萄球菌 ATCC6538 TSA 半定量混浊度 2 布氏肉汤液体非选择性增菌生长率 42 ±1 48h±2 h, 微需氧 空肠弯曲菌 ATCC33291 无抗生素的 CCD 半定量混浊度 1~2 表 D.4 选择性增菌培养基质量控制标准培养基状态功能分类质控指标培养条件质控菌株接种计数培养基方法质控评定标准特征性反应 生长率 李氏增菌肉汤 30 ±1 液体选择性增菌 (LB1,LB2) 选择性 生长率 42 ±1 Bolton 肉汤 液体 选择性增菌 ~48h 微需氧培养 选择性 单核细胞增生李斯特氏菌 ATCC 在 PALCAM 上 > 灰色至黑色菌落, + 半定量 (LB2 目标 10CFU, 培养基变黑带有黑色晕环 + 粪肠球菌 ATCC TSA 菌接种量为 300 CFU~500CFU) 粪肠球菌 ATCC29212 在 TSA 上 <100CFU 空肠弯曲菌 ATCC33291 空肠弯曲菌在改良 + 金黄色葡萄球菌 ATCC6538 无抗生素的 CCD CCD 平板上 > 菌落呈灰白色 + 大肠埃希氏菌 ATCC25922 半定量 10CFU 金黄色葡萄球菌 ATCC6538 大肠埃希氏菌 ATCC25922 TSA 在 TSA 上 <100CFU 30

32 表 D.4 ( 续 ) 培养基 状态 功能分类 质控指标 培养条件 质控菌株 接种计数培养基 方法 质控评定标准 特征性反应 鼠伤寒沙门氏菌 ATCC14028 生长率 + 大肠埃希氏菌 ATCC25922 在 XLD 上 >10CFU 菌落无色半透明, 有黑心四硫磺酸钠煌绿增 42 ±1 液体选择性增菌 + 铜绿假单胞菌 ATCC TSA 半定量菌液 (TTB) 18h~ 选择性在 TSA 上 <100CFU 粪肠球菌 ATCC29212 鼠伤寒沙门氏菌 ATCC14028 生长率 + 大肠埃希氏菌 ATCC25922 在 XLD 上 >10CFU 菌落无色半透明, 有黑心亚硒酸盐胱氨酸增 液体选择性增菌 + 铜绿假单胞菌 ATCC TSA 半定量菌液 (SC) 18h~ 选择性在 TSA 上 <100CFU 粪肠球菌 ATCC 金黄色葡萄球菌 ATCC 6538 在 Baird-Parker 上 > 菌落黑色凸起, 周围有一混浊 10% 氯化钠胰酪胨生长率 液体选择性增菌 + TSA 半定量 10CFU 带, 在其外层有一透明圈大豆肉汤 18h~24 选择性 在 TSA 上 <100CFU 金黄色葡萄球菌 ATCC 6538 在 Baird-Parker 上 > 菌落黑色凸起, 周围有一混浊 7.5% 氯化钠胰酪生长率 液体选择性增菌 + TSA 半定量 10CFU 带, 在其外层有一透明圈胨大豆肉汤 18h~ 选择性 在 TSA 上 <100CFU 改良磷酸盐缓冲液 液体 选择性增菌 小肠结肠炎耶尔森氏菌 CMCC(B) 在改良 Y 平板上 > 生长率 + 粪肠球菌 ATCC29212 菌落圆形 无色透明, 不黏稠 26 ±1 10CFU + 铜绿假单胞菌 ATCC27853 TSA 半定量 48h~72h 金黄色葡萄球菌 ATCC 6538 选择性在 TSA 上 <100CFU 粪肠球菌 ATCC

33 表 D.4 ( 续 ) 培养基 状态功能分类 质控指标 培养条件 质控菌株 接种计数培养基 方法 质控评定标准 特征性反应 改良月桂基硫酸盐胰蛋液体选择性增菌 生长率 44 ±0.5 阪崎肠杆菌 ATCC29544 TSA 半定量在阪崎肠杆菌显色培养基 绿 - 蓝色菌落或按说明书判 白胨肉汤 - 万古霉素 ±2h + 大肠埃希氏菌 ATCC25922 上 >10CFU 定 + 粪肠球菌 ATCC 选择性 粪肠球菌 ATCC 在 TSA 上 <100CFU 蜡样芽胞杆菌 CMCC(B)63303 菌落为微粉红色, 周围有胰酪胨大豆多粘菌素肉生长率 30 ±1 在 MYP 上 >10CFU 液体选择性增菌 + TSA 半定量淡粉红色沉淀环汤 ~48h 选择性 在 TSA 上 <100CFU 41.5 ±0.5 福氏志贺氏菌 CMCC(B)51572 无色至粉红色, 半透明菌志贺氏菌增菌肉汤生长率在 XLD 上 >10CFU 液体选择性增菌 18h±2h + 金黄色葡萄球菌 ATCC6538 TSA 半定量落 (shigella broth) 选择性厌氧培养金黄色葡萄球菌 ATCC6538 在 TSA 上 <100CFU GN 增菌液 液体选择性增菌 福氏志贺氏菌 CMCC(B)51572 生长率 在 HE 琼脂上 >10CFU 菌落呈绿 - 蓝色 + 粪肠球菌 ATCC29212 TSA 半定量 8h 选择性粪肠球菌 ATCC29212 在 TSA 上 <100CFU 副溶血性弧菌 ATCC17802 在弧菌显色培养基平板上品红色菌落或按说明书判 3% 氯化钠碱性蛋白胨生长率 3%TSA 液体选择性增菌 + 大肠埃希氏菌 ATCC25922 半定量 >10CFU 定水 8h 选择性大肠埃希氏菌 ATCC25922 TSA 在 TSA 上 <100CFU 改良 EC 肉汤 (mec+n) 液体选择性增菌 大肠杆菌 O157:H7 NCTC12900 生长率 在 CT-SMAC 上 >10 CFU 菌落无色, 中心灰褐色 + 粪肠球菌 ATCC29212 TSA 半定量 18h~ 选择性粪肠球菌 ATCC29212 在 TSA 上 <100 CFU 大肠杆菌 O157:H7 NCTC12900 生长率 + 大肠埃希氏菌 ATCC25922 在 CT-SMAC 上 >10 CFU 菌落无色, 中心灰褐色改良麦康凯 (CT-MAC) 液体选择性增菌 + 金黄色葡萄球菌 ATCC 6538 TSA 半定量肉汤 17h~19h 大肠埃希氏菌 ATCC25922 选择性在 TSA 上 <100 CFU 金黄色葡萄球菌 ATCC

34 表 D.5 选择性液体计数培养基质量控制标准 培养基 状态 功能分类 质控指标 培养条件 质控菌株 接种计数培养基 方法 质控评定标准 月桂基磺酸盐胰蛋白胨肉选择性液体生长率 混浊度 2, 且气体充满管内 1/3 液体弗氏柠檬酸杆菌 ATCC43864 TSA 半定量汤 (LST) 计数 ~48h 选择性粪肠球菌 ATCC 混浊度 0( 不生长 ) 煌绿乳糖胆盐肉汤 (BGLB) 液体 生长率混浊度 2, 且气体充满管内 1/3 选择性液体 弗氏柠檬酸杆菌 ATCC43864 TSA 半定量计数 ~48h 浑浊度 0( 不生长 ) 或浑浊度 1( 微选择性粪肠球菌 ATCC 弱生长 ), 不产气 EC 肉汤 液体 选择性液体生长率 44.5 ±0.2 大肠埃希氏菌 ATCC25922 混浊度 2, 且气体充满管内 1/3 TSA 半定量计数选择性 ~48h 粪肠球菌 ATCC 浑浊度 0( 不生长 ) 表 D.6 悬浮培养基和运输培养基培养基质量控制标准 培养基 状态 功能分类 质控指标 培养条件 质控菌株 接种计数培养基 方法 质控评定标准 磷酸盐缓冲液 (PBS) 液体 悬浮培养基 生长率 20 ~25 45min 金黄色葡萄球菌 ATCC 6538 TSA 定量 接种前后菌落数变化在 ±50% 3% 氯化钠溶液 液体 悬浮培养基 生长率 20 ~25 45min 副溶血性弧菌 ATCC %TSA 定量 接种前后菌落数变化在 ±50% 0.1% 蛋白胨水 液体 悬浮培养基 生长率 20 ~25 45min 产气荚膜梭菌 ATCC 哥伦比亚琼脂 定量 接种前后菌落数变化在 ±50% 缓冲甘油 - 氯化钠溶液 液体 运输培养基 生长率 -60 产气荚膜梭菌 ATCC 哥伦比亚琼脂 定量 接种前后菌落数变化在 ±50% 表 D.7 Mueller Hinton 血琼脂质量控制标准 培养基 状态 功能分类 质控指标 培养条件 质控菌株 方法 质控评定标准 Mueller Hinton 血琼脂 固体 药敏试验 生化特性培养基 22h±2h, 微需氧培养 空肠弯曲菌 ATCC33291 定性 头孢唑林钠纸片无抑菌圈, 萘啶酮酸纸片有抑菌圈 33

35 表 D.8 鉴定培养基和实验试剂质量控制标准 培养基状态功能分类质控指标培养条件质控菌株方法质控评定标准 三糖铁琼脂 (TSI) 西蒙氏柠檬酸盐培 养基 高层 斜面 鉴定 生化特性 斜面鉴定生化特性 尿素琼脂 (ph7.2) 斜面鉴定生化特性 醋酸盐利用试验斜面鉴定生化特性 3% 氯化钠三糖铁琼 脂 (TSI) 改良克氏双糖 邻硝基酚 β-d 半乳糖 苷培养基 (ONPG) 蛋白胨水 ( 靛基质试 验 ) 高层 斜面 高层 斜面 鉴定 鉴定 生化特性 生化特性 液体鉴定生化特性 液体 鉴定 实验试剂 生化特性 氰化钾培养基 (KCN) 液体鉴定生化特性 氰化钾对照培养基 (KCN) 液体鉴定生化特性 ±2h ~48h 18h~ 26 ±1 18h~ 肠炎沙门氏菌 CMCC(B)50335 福氏志贺氏菌 CMCC(B)51572 铜绿假单胞菌 ATCC 肺炎克雷伯氏菌 CMCC(B)46117 宋内志贺氏菌 CMCC(B)51592 普通变形杆菌 CMCC(B)49027 定性 定性 定性 a 生长良好,A/A; 产气 ; 不产硫化氢 a,b 生长良好,K/A; 产气 ; 产硫化氢 生长良好,K/A; 不产气 ; 不产硫化氢 生长良好,K/K; 不产气 ; 不产硫化氢 生长良好, 培养基变蓝 生长不良或不长, 培养基不变色 生长良好, 培养基变桃红色 生长良好, 培养基变黄色 大肠埃希氏菌 ATCC25922 阳性, 培养基变蓝色定性宋内志贺氏菌 CMCC(B)51592 阴性, 培养基不变色 ( 绿色 ) 副溶血性弧菌 ATCC17802 溶藻弧菌 ATCC33787 小肠结肠炎耶尔森氏菌 CMCC(B)52204 鼠伤寒沙门氏菌 ATCC14028 福氏志贺氏菌 CMCC(B)51572 粪产碱杆菌 CMCC(B)40001 肺炎克雷伯氏菌 CMCC 伤寒沙门氏菌 CMCC(B)50071 产气肠杆菌 ATCC13048 普通变形杆菌 CMCC(B)49027 伤寒沙门氏菌 CMCC(B)50071 普通变形杆菌 CMCC(B)49027 伤寒沙门氏菌 CMCC(B)50071 定性 定性 定性 定性 定性 定性 生长良好, 斜面变红, 底部变黄 生长良好, 斜面和底部均变黄 a 生长良好,A/A; 不产气 ; 不产硫化氢 生长良好,A/A; 产气, 产硫化氢 a,b 生长良好,K/A; 不产气, 不产硫化氢 生长良好,K/K; 不产气, 不产硫化氢 阳性, 培养基变深黄色 阴性, 培养基无色或浅黄色 阳性, 滴加靛基质试剂, 显红色 阴性, 滴加靛基质试剂, 黄色 生长良好, 培养基混浊 不生长, 澄清 生长良好, 培养基混浊 生长良好, 培养基混浊 GB XXXX 34

36 表 D.8 ( 续 ) 培养基 状态功能分类 质控指标 培养条件 质控菌株 方法 质控评定标准 葡萄糖铵培养基 斜面 鉴定 生化特性 鼠伤寒沙门氏菌 ATCC14028 生长良好, 培养基变黄定性 20h~ 福氏志贺氏菌 CMCC(B)51572 不生长, 培养基不变色 缓冲葡萄糖蛋白胨鉴定水 [ 甲基红 (MR) 和液体实验试剂 V-P 试验 ] 生化特性 鼠李糖发酵管 液体 鉴定 生化特性 0.5% 蔗糖发酵管 0.5% 纤维二糖发酵 管 0.5% 麦芽糖发酵管 0.5% 甘露醇发酵管 液体 鉴定 生化特性 0.5% 水杨苷发酵管 0.5% 山梨醇发酵管 0.5% 棉子糖发酵管 七叶苷发酵管 L- 赖氨酸脱羧酶培养基 液体 鉴定 生化特性 L- 鸟氨酸脱羧酶试验培养基 液体 鉴定 生化特性 氨基酸脱羧酶对照 液体 鉴定 生化特性 48h ±2h,±2h 以灭菌液体石蜡覆盖培养基表面,±2h 以灭菌液体石蜡覆盖培养基表面,±2h 以灭菌液体石蜡覆盖培养基表面 生长良好, 滴加 MR 试剂 1 滴, 培养基变红 滴加 VP 甲液 0.5mL 和乙液 0.2mL,20min 内液面不显红色定性生长良好, 滴加 MR 试剂 1 滴, 培养基不变色 滴加 P 产气肠杆菌 ATCC13048 甲液 0.5mL 和乙液 0.2mL,20min 内液面显红色单核细胞增生李斯特氏菌 ATCC 阳性, 培养基变黄定性伤寒沙门氏菌 CMCC(B)50071 阴性, 培养基颜色不变植物乳杆菌 GIM1.140 阳性, 培养基变黄定性德氏乳杆菌保加利亚亚种 CICC6032 阴性, 培养基紫色不变鼠伤寒沙门氏菌 ATCC14028 阳性, 培养基呈紫色 定性 普通变形杆菌 CMCC(B)49027 阴性, 培养基呈黄色 鼠伤寒沙门氏菌 ATCC14028 阳性, 培养基呈紫色 定性 普通变形杆菌 CMCC(B)49027 阴性, 培养基呈黄色 与各种氨基酸脱羧酶的阳性和阴性质控菌株对应 定性 生长良好, 培养基呈黄色 35

37 表 D.8 ( 续 ) 培养基状态功能分类质控指标培养条件质控菌株方法质控评定标准 L- 精氨酸双水解酶培养基 液体 鉴定 生化特性 精氨酸双水解酶对照 液体 鉴定 生化特性 硝酸盐肉汤 液体 鉴定 生化特性 葡萄糖发酵管 液体 鉴定 生化特性 甘露醇发酵管 液体 鉴定 生化特性 木糖发酵管 液体 鉴定 生化特性 蔗糖发酵管 液体 鉴定 生化特性 纤维二糖发酵管 液体 鉴定 生化特性 麦芽糖发酵管 液体 鉴定 生化特性 水杨苷发酵管 液体 鉴定 生化特性 山梨醇发酵管 液体 鉴定 生化特性,±2h 以灭菌液体石蜡覆盖培养基表面,±2h 以灭菌液体石蜡覆盖培养基表面 30 ±1 ~48h 鼠伤寒沙门氏菌 ATCC14028 定性 阳性, 培养基呈紫色 普通变形杆菌 CMCC(B)49027 阴性, 培养基呈黄色 鼠伤寒沙门氏菌 ATCC14028 定性 生长良好, 培养基呈黄色 阳性, 滴加硝酸盐还原试剂甲 乙蜡样芽胞杆菌 CMCC(B)63303 液各 2~3 滴, 培养基变红棕色定性阴性, 滴加硝酸盐还原试剂甲 乙硝酸盐阴性不动杆菌 CMCC(B)25001 液各 2~3 滴, 培养基不变色 大肠埃希氏菌 ATCC25922 阳性, 培养基变黄定性粪产碱杆菌 CMCC(B) 阴性, 培养基不变色 大肠埃希氏菌 ATCC25922 阳性, 培养基变黄色定性普通变形杆菌 CMCC(B)49027 阴性, 培养基颜色不变肺炎克雷伯氏菌 CMCC(B)46117 阳性, 培养基变黄色定性单核细胞增生李斯特氏菌 ATCC 阴性, 养基颜色不变 普通变形杆菌 CMCC(B)49027 阳性, 培养基呈黄色定性鼠伤寒沙门氏菌 ATCC14028 阴性, 培养基颜色不变肺炎克雷伯氏菌 CMCC(B) 阳性, 培养基呈黄色定性大肠埃希氏菌 ATCC25922 阴性, 培养基颜色不变伤寒沙门氏菌 CMCC(B)50071 阳性, 培养基呈黄色定性铜绿假单胞菌 ATCC9027 阴性, 培养基颜色不变 肺炎克雷伯氏菌 CMCC(B) 阳性, 培养基变黄定性伤寒沙门氏菌 CMCC(B)50071 阴性, 培养基不变色肺炎克雷伯氏菌 CMCC(B) 阳性, 培养基变黄色定性宋内志贺氏菌 CMCC(B)51592 阴性, 培养基颜色不变 36

38 表 D.8 ( 续 ) 培养基状态功能分类质控指标培养条件质控菌株方法质控评定标准 棉籽糖 液体 鉴定 生化特性 黏液酸利用试验 液体 鉴定 生化特性 含铁牛乳培养基 液体 鉴定 生化特性 无盐胨水 液体 鉴定 生化特性 3% 氯化钠胨水 液体 鉴定 生化特性 6% 氯化钠胨水 液体 鉴定 生化特性 8% 氯化钠胨水 液体 鉴定 生化特性 10% 氯化钠胨水 液体 鉴定 生化特性 3.0% 氯化钠甘露醇 液体 鉴定 生化特性 3.0% 氯化钠赖氨酸脱羧酶液体 鉴定 生化特性 3.0% 氯化钠氨基酸脱羧酶液体鉴定生化特性对照 ~48h 46 ±0.5 2h 与 5h 均观察 ~48h,~48h 以灭菌液体石蜡覆盖培养基表面 ~48h 肺炎克雷伯氏菌 CMCC (B)46117 阳性, 培养基呈黄色定性普通变形杆菌 CMCC(B)49027 阴性, 培养基颜色不变大肠埃希氏菌 ATCC25922 阳性, 培养基呈黄色定性福氏志贺氏菌 CMCC(B)51572 阴性, 养基颜色不变产气荚膜梭菌 ATCC 定性 ( 接种生长旺盛暴烈发酵 的 FT 培养液 1mL) 不发酵霍乱弧菌 VbO 生长良好, 混浊定性副溶血性弧菌 ATCC17802 不生长, 澄清副溶血性弧菌 ATCC17802 生长良好, 混浊定性创伤弧菌 ATCC27562 生长良好, 混浊 副溶血性弧菌 ATCC17802 生长良好, 混浊定性嗜水气单胞菌 As1.172 不生长, 澄清副溶血性弧菌 ATCC17802 生长良好, 混浊定性创伤弧菌 ATCC27562 不生长, 澄清溶藻弧菌 ATCC33787 生长良好, 混浊定性副溶血性弧菌 ATCC17802 不生长, 澄清副溶血性弧菌 ATCC17802 阳性, 培养基变黄色定性普通变形杆菌 CMCC(B)49027 阴性, 培养基颜色不变副溶血性弧菌 ATCC17802 阳性, 培养基变紫色定性普通变形杆菌 CMCC(B)49027 阴性, 培养基变黄色副溶血性弧菌 ATCC17802 生长良好, 培养基变黄色定性普通变形杆菌 CMCC(B)49027 生长良好, 培养基变黄色 37

39 表 D.8 ( 续 ) 培养基 状态功能分类质控指标 培养条件 质控菌株 方法 质控评定标准 七叶苷发酵管 液体 鉴定 生化特性 肺炎克雷伯氏菌 CMCC(B) 阳性, 培养基变棕黑色定性 奇异变形杆菌 CMCC(B)49005 阴性, 培养基颜色不变 产气肠杆菌 ATCC13048 MR 试验阴性, 滴加 MR 试剂 1 滴培养基呈黄色 MR 试验阳性, 滴加 MR 试剂 1 滴培养基呈红色 ; 3.0% 氯化钠 MR-VP 培养基液体 鉴定 生化特性 副溶血性弧菌 ATCC17802 V-P 试验阴性, 滴加 0.6mL 甲液及 0.2mL 定性 48h 乙液, 培养基不变色 溶藻弧菌 ATCC33787 V-P 试验阳性, 滴加 0.6mL 甲液及 0.2mL 乙液, 培养基呈红色 乳糖发酵管 液体 鉴定 生化特性 大肠埃希氏菌 ATCC25922 阳性, 培养基变黄色定性 伤寒沙门氏菌 CMCC(B)50071 阴性, 培养基颜色不变 Koser 氏柠檬酸盐肉汤 液体 鉴定 生化特性 弗氏柠檬酸杆菌 ATCC43864 生长良好, 培养基混浊定性 18h~96h 大肠埃希氏菌 ATCC25922 不生长, 培养基澄清 SIM 动力培养基 半固 大肠埃希氏菌 ATCC25922 硫化氢 - 动力 +/- 靛基质 + 鉴定生化特性定性体 ~48h 伤寒沙门氏菌 CMCC(B)50071 硫化氢 +/- 动力 + 靛基质 - 动力培养基 半固 30 ±1 蜡样芽胞杆菌 CMCC(B)63303 阳性, 扩散生长鉴定生化特性定性体 ~48h 蕈状芽胞杆菌 ATCC10206 阴性, 沿穿刺线生长 明胶培养基 固体 鉴定 生化特性 铜绿假单胞菌 ATCC ~8 呈液态定性 72h 大肠埃希氏菌 ATCC ~8 呈固态 兔血浆 固体 鉴定 生化特性 金黄色葡萄球菌 ATCC 6538 定性 ( 接种培养 18h~ 的血浆凝固 4h~6h 表皮葡萄球菌 CMCC(B) 新鲜质控菌株肉汤 1mL) 血浆不凝固 酪蛋白琼脂 固体 鉴定 生化特性 30 ±1 蜡样芽胞杆菌 CMCC(B)63303 菌落周围有透明圈, 培养基颜色由绿变蓝定性 菌落周围没有透明圈, 培养基由绿变蓝 38

40 表 D.8 ( 续 ) 培养基 状态功能分类质控指标 培养条件 质控菌株 方法 质控评定标准 产气荚膜梭菌 ATCC13124 沿穿刺线生长, 加硝酸盐还原试剂甲乙液各 2 滴变红色 缓冲动力 - 硝酸盐培养基 固体 鉴定 生化特性 沿穿刺线生长, 加硝酸盐还原试剂甲乙液各硝酸盐阴性不动杆菌 CMCC(B)25001 定性 2 滴不变色 扩散生长, 加硝酸盐还原试剂甲乙液各 2 滴变红色 我妻氏血琼脂 固体 鉴定 生化特性 副溶血性弧菌 ATCC33847 定性菌落周围有半透明 β 溶血环 副溶血性弧菌 ATCC17802 ( 点种接种 ) 无溶血 血琼脂平板 金黄色葡萄球菌 ATCC 6538 定性菌落周围有 β 溶血环固体鉴定特异性哥伦比亚血琼脂 ±2h 蜡样芽胞杆菌 CMCC(B)63303 ( 划线接种 ) 菌落周围有 α 溶血环 蜜二糖 液体 鉴定 生化特性 阪崎肠杆菌 ATCC29544 阳性, 培养基变黄定性 小肠结肠炎耶尔森氏菌 CMCC(B)52204 阴性, 培养基不变色 MUG-LST 液体 鉴定 生化特性 大肠埃希氏菌 O157:H7NCTC12900 阴性, 无荧光定性 18h~ 大肠埃希氏菌 ATCC25922 阳性, 有荧光 革兰氏染色液 液体实验试剂生化特性 金黄色葡萄球菌 ATCC6538 革兰氏阳性, 紫色球状菌体定性大肠埃希氏菌 ATCC25922 革兰氏阴性, 红色杆状菌体 过氧化氢试剂 液体实验试剂生化特性 单核细胞增生李斯特氏菌 ATCC19115 阳性, 产生气泡定性粪肠球菌 ATCC29212 阴性, 无气泡产生 氧化酶试剂 纸片实验试剂生化特性 铜绿假单胞菌 ATCC9027 阳性, 出现紫红色至紫黑色定性大肠埃希氏菌 ATCC25922 阴性, 不变色 卫矛醇发酵管 液体 鉴定 生化特性 鼠伤寒沙门氏菌 CMCC(B)50115 阳性, 培养基变黄定性 伤寒沙门氏菌 CMCC(B)50071 阴性, 培养基不变色 丙二酸钠培养基 液体 鉴定 生化特性 产气肠杆菌 ATCC13048 阳性, 培养基变蓝定性 48h 普通变形杆菌 CMCC(B)49027 阴性, 培养基不变色 39

41 表 D.8 ( 续 ) 培养基 状态功能分类 质控指标 培养条件 质控菌株 方法 质控评定标准 伦比亚琼脂 平板 鉴定 生化特性,44h±4h, 微需氧培养生长良好定性 25 ±1,44h±4h, 微需氧培养空肠弯曲菌 ATCC33291 不生长 ( 划线接种 ) 42 ±1,44h±4h, 需氧培养不生长 阳性, 滴加印三酮试剂 0.2mL 在 36±1 / 水浴锅或空肠弯曲菌 ATCC33291 马尿酸钠溶液 ( 茚鉴定培养箱 10min, 出现深紫色液体生化特性, 水浴 2h 或 培养箱 4h 定性三酮试剂 ) 实验试剂阴性, 滴加印三酮试剂 0.2mL 在 36±1 / 水浴锅或结肠弯曲菌 ATCC43478 培养箱 10min, 黄色 吲哚乙酸酯纸片 纸片实验试剂 生化特性 空肠弯曲菌 ATCC33291 定性 阳性,5min~10min 内出现深蓝色 a A 表示产酸, 培养基变黄 b K 表示产碱, 培养基变红 40

42 表 D.9 质控菌株中文名和学名一览表 质控菌株中文名 质控菌株学名 质控菌株中文名 质控菌株学名 大肠埃希氏菌 Escherichia coli 单核细胞增生李斯特氏菌 Listeria monocytogenes 福氏志贺氏菌 Shigella flexneri 英诺克李斯特氏菌 Listeria innocua 痢疾志贺氏菌 Shigella dysenteriae 小肠结肠炎耶尔森氏菌 Yersinia enterocolitica 宋内志贺氏菌 Shigella sonnei 弗氏柠檬酸杆菌 Citrobacter freundii 阪崎肠杆菌 Enterobacter sakazakii 婴儿双岐杆菌 Bifidobacterium infantis 产气肠杆菌 Enterobacter aerogenes 德氏乳杆菌保加利亚亚种 Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus 肺炎克雷伯氏菌 Klebsiella pneumoniae 粪产碱杆菌 Alcaligenes faecalis 伤寒沙门氏菌 Salmonella typhi 植物乳杆菌 Lactobacillus plantarum 鼠伤寒沙门氏菌 Salmonella typhimurium 硝酸盐阴性不动杆菌 Acinetobacter anitratum 肠炎沙门氏菌 Salmonella enteritidis 创伤弧菌 vibrio vulnificus 奇异变形杆菌 Proteus mirabilis 霍乱弧菌 Vibrio cholerae 普通变形杆菌 Proteus vulgaris 副溶血性弧菌 Vibrio parahaemolyticus 空肠弯曲菌 Campylobacter jejuni 溶藻弧菌 Vibrio alginolyticus 结肠弯曲菌 Campylobacter coli 铜绿假单胞菌 Pseudomonas aeruginosa 嗜水气单胞菌 Aeromonas hydrophila 枯草芽胞杆菌 Bacillus subtilis 粪肠球菌 Enterococcus faecalis 蕈状芽胞杆菌 Bacillus mycoides 金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus 产气荚膜梭菌 Clostridium perfringens 表皮葡萄球菌 Staphylococcus epidermidis 艰难梭菌 Clostridium difficile 嗜热链球菌 Streptococcus thermophilus 酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae 蜡样芽胞杆菌 Bacillus cereus 黑曲霉 Aspergillus niger 41

43 附录 E 实验室使用商品化培养基和试剂的质量控制标准 实验室使用商品化培养基和试剂的质量控制标准见表 E.1~ 表 E.6 表 E.1 非选择性分离和计数固体培养基质量控制标准 培养基 状态 功能分类 质控指标 培养条件 质控菌株 半定量质控评定标准 特征性反应 胰蛋白胨大豆琼脂 固体 非选择性分离 生长率 G 6 ±2h 粪肠球菌 ATCC MC 培养基 固体 非选择性计数 生长率 48h±2h 嗜热链球菌 IFFI 6038 G 6 中等偏小, 边缘光滑的红色菌落, 可有淡淡的晕 MRS 培养基 固体 非选择性计数 生长率 德氏乳杆菌保加利亚亚种 CICC6032 圆形凸起, 中等大小, 边缘整齐, 无色不透明 嗜热链球菌 IFFI 6038 G 6 圆形凸起, 菌落偏小, 边缘整齐, 无色不透明 48h±2h 婴儿双歧杆菌 CICC 6069( 厌氧培养 ) 圆形, 中等大小, 边缘整齐, 瓷白色 3% 氯化钠胰蛋白胨大豆 副溶血性弧菌 ATCC17802 固体非选择性分离生长率琼脂 (TSA) 18h~ 创伤弧菌落 ATCC G 6 无色半透明菌落 营养琼脂固体非选择性分离生长率金黄色葡萄球菌 ATCC 6538 G 6 枯草芽胞杆菌 ATCC6633 含 0.6% 酵母浸膏的胰酪 30 ±1 固体非选择性分离生长率胨大豆琼脂 (TSA-YE) ~48h 单核细胞增生李斯特氏菌 ATCC G 6 平板计数琼脂 (PCA) 固体非选择性计数生长率金黄色葡萄球菌 ATCC 6538 G 6 48h±2h 枯草芽胞杆菌 ATCC

44 表 E.2 选择性分离和计数固体培养基质量控制标准培养基状态功能分类质控指标培养条件质控菌株半定量质控评定标准特征性反应 生长率 亚硫酸铋琼脂 (BS) 固体选择性分离 选择性 生长率 HE 琼脂 固体选择性分离 选择性 生长率 木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂 (XLD) 固体选择性分离 选择性 生长率 沙门氏菌显色培养基 固体选择性分离 特异性 伤寒沙门氏菌 CMCC(B)50071 G 6 黑色菌落, 有金属光泽 鼠伤寒沙门氏菌 ATCC14028 G 6 黑色或灰绿色菌落, 有金属光泽 40h~48h 粪肠球菌 ATCC G 1 鼠伤寒沙门氏菌 ATCC14028 绿 - 蓝色菌落, 有黑心 G 6 福氏志贺氏菌 CMCC(B)51572 绿 - 蓝色菌落 18h~ G<5 橙红色菌落, 可有胆酸沉淀 粪肠球菌 ATCC G 1 鼠伤寒沙门氏菌 ATCC14028 黑色菌落 G 6 福氏志贺氏菌 CMCC(B)51572 无色菌落, 无黑心 18h~ G<5 黄色菌落 金黄色葡萄球菌 ATCC6538 G 1 鼠伤寒沙门氏菌 ATCC14028 G 6 按说明书判定 按说明书判定 18h~ 奇异变形杆菌 CMCC(B)49005 按说明书判定 选择性 粪肠球菌 ATCC G 1 PALCAM 琼脂 固体选择性分离 生长率单核细胞增生李斯特氏菌 ATCC19115 G 6 灰绿色菌落, 中心凹陷黑色, 周围有黑色 选择性 ~48h G 1 粪肠球菌 ATCC 麦康凯琼脂 (MAC) 固体选择性分离 大肠埃希氏菌 ATCC25922 鲜桃红色或粉红色, 可有胆酸沉淀生长率 G 6 福氏志贺氏菌 CMCC(B)51572 无色至浅粉红色, 半透明棕色或绿色菌落 20h~ 选择性金黄色葡萄球菌 ATCC6538 G 1 43

45 表 E.2 ( 续 ) 培养基 状态 功能分类 质控指标培养条件 质控菌株 半定量质控评定标准 特征性反应 生长率 阪崎肠杆菌 ATCC29544 G 6 按说明书判定 阪崎肠杆菌显色培养基 固体选择性分离 特异性 普通变形杆菌 CMCC(B)49027 按说明书判定 ±2h 按说明书判定 选择性 粪肠球菌 ATCC G 1 CIN-1 培养基 固体 生长率小肠结肠炎耶尔森氏菌 CMCC(B)52204 G 6 红色牛眼状菌落选择性 26 ±1 特异性 圆形 粉红色菌, 边缘有胆汁沉淀环分离 48h±2h 选择性金黄色葡萄球菌 ATCC6538 G 1 改良 Y 培养基 固体 生长率小肠结肠炎耶尔森氏菌 CMCC(B)52204 G 6 无色透明不黏稠菌落选择性 26 ±1 特异性 粉红色菌落分离 48h±2h 选择性金黄色葡萄球菌 ATCC6538 G 1 伊红美蓝琼脂 (EMB) 固体 生长率大肠埃希氏菌 ATCC25922 G 6 黑色菌落, 具金属光泽选择性 特异性鼠伤寒沙门氏菌 ATCC14028 菌落呈无色 半透明分离 18h~ 选择性金黄色葡萄球菌 ATCC6538 G<5 生长率大肠埃希氏菌 O157:H7 NCTC12900 G 6 无色菌落改良山梨醇麦康凯琼脂选择性 固体特异性大肠埃希氏菌 ATCC25922 粉红色菌落, 周围有胆盐沉淀 (CT-SMAC) 分离 18h~ 选择性金黄色葡萄球菌 ATCC6538 G 1 生长率 大肠埃希氏菌 O157:H7NCTC12900 G 6 按说明书判定 选择性特异性 大肠埃希氏菌 ATCC25922 按说明书判定 O157 显色培养基固体分离 18h~ 粪肠球菌 ATCC 选择性 G 1 奇异变型杆菌 CMCC(B)49005 生长率 单核细胞增生李斯特氏菌 ATCC19115 G 6 蓝绿色菌落, 带白色晕环 选择性特异性 英诺克李斯特氏菌 ATCC33090 蓝绿色菌落, 无白色晕环李斯特氏菌显色培养基固体分离 ~48h 选择性 G 1 粪肠球菌 ATCC

46 表 E.2 ( 续 ) 培养基 状态功能分类 质控指标 培养条件 质控菌株 半定量质控评定标准 特征性反应 福氏志贺氏菌 CMCC(B)51572 G 6 白色, 突起, 无色素沉淀圈生长率痢疾志贺氏菌 CMCC(B)51105 白色, 突起, 有清晰环, 无色素沉淀圈 志贺氏菌显色培养基固体选择性分离 黄色, 有清晰环, 无色素沉淀圈特异性 20h~ 产气肠杆菌 ATCC13048 绿色菌落, 无环和沉淀圈 选择性 金黄色葡萄球菌 ATCC 6538 G 1 42 ±1 G 6 菌落有光泽 潮湿 扁平, 呈扩散生长倾向生长率空肠弯曲菌 ATCC33291 改良 CCD(mCCD) 琼 ~48h, 微需氧固体选择性分离脂 42 ±1 / G 1 选择性 ~48h 金黄色葡萄球菌 ATCC 6538 按说明书判定 Skirrow 琼脂 固体选择性分离 生长率 42 ±1 /~ G 6 菌落灰色 扁平 湿润有光泽, 呈沿接种线向外扩散倾空肠弯曲菌 ATCC h, 微需氧向选择性 42 ±1 大肠埃希氏菌 ATCC25922 G 1 ~48h 金黄色葡萄球菌 ATCC 6538 按说明书判定 改良纤维二糖 - 多黏菌 生长率 39.5 ±0.5 创伤弧菌 ATCC27562 G 1 圆型扁平, 中心不透明, 边缘透明的黄色菌落 素 B- 多黏菌素 E 固体选择性分离 特异性 或 36 ±1 霍乱弧菌 VBO 紫色菌落 (mcpc) 琼脂 选择性 18h~ 副溶血性弧菌 ATCC17802 G 1 生长率 39 ~40 创伤弧菌 ATCC27562 G 6 圆型扁平, 中心不透明, 边缘透明的黄色菌落纤维二糖 - 多黏菌素 E 固体选择性分离特异性或 36 ±1 霍乱弧菌 VbO 紫色菌落 (CC) 琼脂选择性 18h~ 副溶血性弧菌 ATCC17802 G 1 硫代硫酸钠 - 柠檬酸盐 - 生长率 副溶血性弧菌 ATCC17802 G 1 绿色菌落固体选择性分离胆盐 - 蔗糖琼脂 (TCBS) 选择性 18h~ G 1 生长率 副溶血性弧菌 ATCC17802 G 6 按说明书判定 弧菌显色培养基 固体选择性分离 特异性 霍乱弧菌 VbO 按说明书判定 18h~ 溶藻弧菌 ATCC33787 按说明书判定 选择性 大肠埃希氏菌 ATCC25922 G 1 45

47 表 E.2 ( 续 ) 培养基 状态功能分类 质控指标 培养条件 质控菌株 半定量质控评定标准 特征性反应 生长率 金黄色葡萄球菌 ATCC G 6 菌落黑色凸起, 周围有一混浊带, 在其外层有一透明圈 Baird-Parker 琼脂 固体选择性计数 特异性 18h~ 或 表皮葡萄球菌 CMCC(B)26069 黑色菌落, 无混浊带和透明圈 选择性 45h~48h G 1 生长率大肠埃希氏菌 ATCC25922 有或无沉淀环的紫红色或红色菌落结晶紫中性红胆盐琼脂 G 6 固体选择性计数弗氏柠檬酸杆菌 ATCC43864 (VRBA) 选择性 18h~ 粪肠球菌 ATCC G<5 VRB-MUG 琼脂 固体选择性计数 生长率大肠埃希氏菌 ATCC25922 G 6 带有沉淀环的紫红色或红色菌落, 有荧光 特异性弗氏柠檬酸杆菌 ATCC43864 可带有沉淀环的红色菌落, 无荧光 18h~ 选择性粪肠球菌 ATCC G<5 酿酒酵母 ATCC 9763 奶油色菌落生长率 G 6 马铃薯葡萄糖琼脂 28 ±1 黑曲霉 ATCC 白色菌丝, 黑色孢子固体选择性计数 (PDA) 5d 选择性 G 1 金黄色葡萄球菌 ATCC 6538 孟加红培养基 固体选择性计数 酿酒酵母 ATCC 9763 奶油色菌落生长率 G 6 28 ±1 黑曲霉 ATCC 白色菌丝, 黑色孢子 5d 选择性 G 1 金黄色葡萄球菌 ATCC 6538 莫匹罗星锂盐 生长率 婴儿双岐杆菌 CICC 6069 G 6 圆形凸起, 边缘整齐, 无色不透明 (Li-Mupirocin) 改良固体选择性计数 48h±2h 德氏乳杆菌保加利亚亚种 CICC6032 选择性 G 1 MRS 培养基厌氧培养嗜热链球菌 IFFI 6038 生长率蜡样芽胞杆菌 CMCC(B)63303 G 6 菌落为微粉红色, 周围有淡粉红色沉淀环甘露醇卵黄多黏菌素琼 30 ±2 固体选择性计数特异性枯草芽胞杆菌 ATCC 黄色菌落, 无沉淀环脂 (MYP) ~48h 选择性大肠埃希氏菌 ATCC25922 G 1 生长率 产气荚膜梭菌 ATCC13124 G 6 黑色菌落胰胨 - 亚硫酸盐 - 环丝氨固体选择性计数 20h~ 酸琼脂 (TSC) 选择性艰难梭菌 ATCC43593 G 1 厌氧培养 46

48 表 E.3 非选择性增菌培养基质量控制标准 培养基 状态 功能分类 质控指标 培养条件 质控菌株 定性质控评定标准 含 0.6% 酵母浸膏的胰酪胨大豆肉汤 (TSB-YE) 液体 非选择性增菌 生长率 30 ±1,~48h 单核细胞增生李斯特氏菌 ATCC 混浊度 2 液体硫乙醇酸盐培养基 (FTG) 液体 非选择性增菌 生长率,18h~ 产气荚膜梭菌 ATCC13124 混浊度 2 缓冲蛋白胨水 (BP) 液体 非选择性增菌 生长率,18h~ 鼠伤寒沙门氏菌 ATCC14028 混浊度 2 脑心浸出液肉汤 (BHI) 液体 非选择性增菌 生长率,18h~ 金黄色葡萄球菌 ATCC6538 混浊度 2 布氏肉汤 液体 非选择性增菌 生长率 42 ±1,48h±2 h, 微需氧 空肠弯曲菌 ATCC33291 混浊度 1~2 表 E.4 选择性增菌培养基质量控制标准 培养基 状态 功能分类 质控指标 培养条件 质控菌株 定性质控评定标准 四硫磺酸钠煌绿增菌液 (TTB) 液体 选择性增菌 生长率鼠伤寒沙门氏菌 ATCC14028 浊度 2 42 ±1 选择性 18h~ 浊度 0( 不生长 ) 粪肠球菌 ATCC29212 亚硒酸盐胱氨酸增菌液 (SC) 液体 选择性增菌 生长率鼠伤寒沙门氏菌 ATCC14028 浊度 2 浊度 0( 不生长 ) 或浊度 1( 微选择性 18h~ 粪肠球菌 ATCC 弱生长 ) 10% 氯化钠胰酪胨大豆肉汤 液体 选择性增菌 生长率 金黄色葡萄球菌 ATCC 6538 浊度 2 选择性 18h~24 浊度 0( 不生长 ) 7.5% 氯化钠胰酪胨大豆肉汤 液体 选择性增菌 生长率 金黄色葡萄球菌 ATCC 6538 浊度 2 选择性 18h~ 浊度 0( 不生长 ) 改良磷酸盐缓冲液 液体 选择性增菌 生长率小肠结肠炎耶尔森氏菌 CMCC(B) 浊度 2 26 ±1 金黄色葡萄球菌 ATCC 6538 选择性 48h~72h 浊度 0( 不生长 ) 粪肠球菌 ATCC29212 生长率阪崎肠杆菌 ATCC29544 浊度 2 改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨 44 ±0.5 液体选择性增菌 肉汤 - 万古霉素选择性 ±2h 浊度 0( 不生长 ) 粪肠球菌 ATCC 胰酪胨大豆多黏菌素肉汤 液体 选择性增菌 生长率 30 ±1 蜡样芽胞杆菌 CMCC(B)63303 浊度 2 选择性 ~48h 浊度 0( 不生长 ) 47

49 表 E.4 ( 续 ) 培养基 状态 功能分类 质控指标 培养条件 质控菌株 定性质控评定标准 志贺氏菌增菌肉汤 (shigella broth) 液体 选择性增菌 GN 增菌液 液体 选择性增菌 3% 氯化钠碱性蛋白胨水 液体 选择性增菌 改良 EC 肉汤 (mec+n) 液体 选择性增菌 改良麦康凯 (CT-MAC) 肉汤 液体 选择性增菌 李氏增菌肉汤 (LB1,LB2) 液体 选择性增菌 Bolton 肉汤 液体 选择性增菌 生长率 41.5 ±0.5,18h±2h, 福氏志贺氏菌 CMCC(B)51572 浊度 2 选择性 厌氧培养 金黄色葡萄球菌 ATCC6538 浊度 0( 不生长 ) 生长率福氏志贺氏菌 CMCC(B)51572 浊度 2 浊度 0( 不生长 ) 或浊度 1( 微选择性 18h~ 粪肠球菌 ATCC29212 弱生长 ) 生长率副溶血性弧菌 ATCC17802 浊度 2 浊度 0( 不生长 ) 或浊度 1( 微选择性 18h~ 大肠埃希氏菌 ATCC25922 弱生长 ) 生长率 大肠杆菌 O157:H7 NCTC12900 浊度 2 选择性 18h~ 粪肠球菌 ATCC29212 浊度 0( 不生长 ) 生长率大肠杆菌 O157:H7 NCTC12900 浊度 2 大肠埃希氏菌 ATCC25922 浊度 0( 不生长 ) 或浊度 1( 微选择性 17h~19h 金黄色葡萄球菌 ATCC 6538 弱生长 ) 生长率单核细胞增生李斯特氏菌 ATCC 浊度 2 30 ±1 选择性 浊度 0( 不生长 ) 粪肠球菌 ATCC29212 生长率 42 ±1 空肠弯曲菌 ATCC33291 浊度 2 选择性 ~48h 金黄色葡萄球菌 ATCC6538 微需氧培养大肠埃希氏菌 ATCC25922 浊度 0( 不生长 ) 48

50 表 E.5 选择性液体计数培养基质量控制标准 培养基 状态 功能分类 质控指标 培养条件 质控菌株 定性质控评定标准 月桂基磺酸盐胰蛋白胨肉汤 (LST) 液体 选择性液体计数 生长率 混浊度 2, 且管内有气体弗氏柠檬酸杆菌 ATCC43864 ~48h 选择性粪肠球菌 ATCC 浊度 0( 不生长 ) 煌绿乳糖胆盐肉汤 (BGLB) 液体 选择性液体计数 生长率 弗氏柠檬酸杆菌 ATCC43864 混浊度 2, 且管内有气体选择性 ~48h 浊度 0( 不生长 ) 或浊度 1( 微弱生粪肠球菌 ATCC 长 ), 不产气 EC 肉汤 液体 选择性液体计数 生长率 44.5 ±0.2 大肠埃希氏菌 ATCC25922 混浊度 2, 且管内有气体选择性 ~48h 粪肠球菌 ATCC 浊度 0( 不生长 ) 表 E.6 悬浮培养基和运输培养基质量控制标准 培养基 状态 功能分类 质控指标 培养条件 质控菌株 定性质控评定标准 磷酸盐缓冲液 (PBS) 液体 悬浮培养基 生长率 20 ~25,45min 金黄色葡萄球菌 ATCC 6538 混浊度 2, 接种后平板上目标菌生长良好 3% 氯化钠溶液 液体 悬浮培养基 生长率 20 ~25,45min 副溶血性弧菌 ATCC17802 混浊度 2, 接种后平板上目标菌生长良好 0.1% 蛋白胨水 液体 悬浮培养基 生长率 20 ~25,45min 产气荚膜梭菌 ATCC 混浊度 2, 接种后平板上目标菌生长良好 缓冲甘油 - 氯化钠溶液 液体 运输培养基 生长率 -60, 产气荚膜梭菌 ATCC 混浊度 2, 接种后平板上目标菌生长良好 49

51 GB xxxx 附录 F 螺旋平板法 F.1 一般要求 使用螺旋接种仪将样品接种在平板上 样品接种后, 菌落即分布在螺旋轨迹上, 随半径的增加分 布得越来越稀 采用特殊的计数栅格, 自平板外周向中央对平皿上的菌落进行计数, 即可得到样品中 微生物的数量 F.2 实验步骤 取制备好的适宜稀释度的样品稀释液, 以选定的模式接种于实验所用平板, 每个稀释度接种两块平板, 接种每一个样品前后均按仪器设定程序对螺旋接种仪进行清洗消毒 按相同接种模式接种悬浮液作为空白对照 将平板按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养后, 计数每个平板菌落数, 并记录下来 F.3 菌落总数的计算和记录 平板上菌落数符合菌落计数仪规定计数范围的为合适范围 如果两个稀释度的四个平板菌落数均在合适范围内, 则将四个平板菌落数的平均值作为每克 ( 毫升 ) 样品中的菌落数 ; 如果只有一个稀释度的两个平板菌落数在合适范围内, 则将这两个平板菌落数的平均值作为每克 ( 毫升 ) 样品中的菌落数 当低稀释度的两个平板菌落数都少于合适范围的下限时, 计算这一稀释度两个平板菌落数的平均值作为每克 ( 毫升 ) 样品中的菌落数 给这个数注上星号 (*), 表明该数是从菌落数在计数范围之外的平板估计所得 当所有平板上的菌落数都超过合适范围的上限时, 计算高稀释度两个平板菌落数的平均值作为每克 ( 毫升 ) 样品中的菌落数, 给这个数注上星号 (*) 如果所有稀释度的平板都没有菌落, 则以小于 1 乘以稀释倍数和接种体积作为每克 ( 毫升 ) 样品中的菌落数, 给这个数注上星号 (*) 记录时, 只有在换算到每克 ( 毫升 ) 样品中的菌落数时, 才能定下两位有效数字, 第三位数字采用四舍五入的方法记录 也可将样品的菌落数记录为 10 的指数形式 F.4 结果的表述 根据 F.3 归档计算出每克 ( 毫升 ) 样品的菌落数, 固体样品以 CFU/g 为单位, 液体样品以 CFU/mL 为单位 50

52 GB xxxx 附录 G 用于实验室自制或使用商品化培养基的测试结果记录 表 G.1 给出用于实验室自制或使用商品化培养基的测试结果记录单样本 培养基内部质量测试控制卡 表 G.1 培养基测试结果记录单样本 培养基 : 制备体积 : 倾倒日期 : 内部批号 : 脱水培养基 ( 批号 ): 供应商 : 批 : 总量 : 日期 / 签名 : 添加剂 : 供应商 : 批 : 总量 : 日期 / 签名 : 制备详情 : 物理质量控制 : 预期 ph: 测定 ph: 质量确认 : 是 预期质量 : 观察 : 质量确认 : 是 预期颜色 : 观察 : 质量确认 : 是 预期透明度 / 可见杂质 : 观察 : 质量确认 : 预期凝胶稳定性 / 粘稠度 / 湿度 : 微生物污染 测试平板或试管编号 : 培养 : 是 观察 : 质量确认 : 是 结果 : 质量确认 : 微生物生长 生长率控制方法 : 定量 定性 菌株 : 培养 : 参考培养基 : 是 否 否 否 否 否 否 判定标准 : 结果 : 质量确认 : 微生物生长 选择性控制方法 : 定量 定性 菌株 : 培养 : 参考培养基 : 缺陷 : 日期 / 签名 : 缺陷 : 日期 / 签名 : 缺陷 : 日期 / 签名 : 缺陷 : 日期 / 签名 : 缺陷 : 日期 / 签名 : 污染平板或试管编号 : 日期 / 签名 : 是 判定标准 : 结果 : 质量确认 : 微生物生长 特异性控制方法 : 定量 定性 菌株 : 培养 : 参考培养基 : 本批发放 : 是 判定标准 : 结果 : 质量确认 : 是 否 否 否 日期 / 签名 : 日期 / 签名 : 日期 / 签名 : 储存详情 : 本批发放 : 是 否 日期 / 签名 : 51