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1 中华人民共和国国家标准 食品卫生微生物学检验 GB 染色法 培养基和试剂代替 GB Microbiological examination of food hygiene Stainning methods,culture mediums and reagents 1 主题内容与适用范围本标准规定了各种染色法 培养基和试剂 本标准适用于食品和食物中毒样品中各类微生物的检验 2 染色液配制及染色法 2.1 美蓝染色法 吕氏碱性美蓝染色液美蓝 0. 95% 乙醇 30mL 0.01% 氢氧化钾溶液 100mL 将美蓝溶解于乙醇中, 然后与氢氧化钾溶液混合 染色法将涂片在火焰上固定, 待冷 滴加染液, 染 1~3min, 水洗, 待干, 镜检 结果菌体呈蓝色 2.2 革兰氏染色法 结晶紫染色液结晶紫 95% 乙醇 20mL 1% 草酸铵水溶液 80mL 将结晶紫溶解于乙醇中, 然后与草酸铵溶液混合 革兰氏碘液磺 碘化钾 300mL 将碘与碘化钾先进行混合, 加入少许, 充分振摇, 待完全溶解后, 再加至 300mL 沙黄复染液沙黄 % 乙醇 10mL 90mL 将沙黄溶解于乙醇中, 然后用稀释 染色法 将涂片在火焰上固定, 滴加结晶紫染色液, 染 1min, 水洗 滴加革兰氏碘液, 作用 1min, 水洗 滴加 95% 乙醇脱色, 约 30s; 或将乙醇滴满整个涂片, 立即倾去, 再用乙醇滴满整个涂片, 脱色 10s

2 水洗, 滴加复染液, 复染 1min 水洗, 待干, 镜检 结果革兰氏阳性菌呈紫色 革兰氏阴性菌呈红色 注 : 亦可用 1 10 稀释石炭酸复红染色液作复染液, 复染时间仅需 10s 2.3 耐酸性染色法 ( 萋 - 倪二氏法 ) 石炭酸品红染色液碱性品红 0. 95% 乙醇 10mL 5% 酚水溶液 90mL 将品红溶解于乙醇中, 然后与酚溶液混合 % 盐酸 - 乙醇浓盐酸 3mL 95% 乙醇 97mL 复染液吕氏碱性美蓝染色液 染色法 将涂片在火焰上加热固定, 滴加石炭酸品红染色液, 徐徐加热至有蒸气出现, 但切不可使沸腾 染液如因蒸发减少时, 应随时添加 染 5min, 倾去染液, 水洗 滴加盐酸 - 乙醇脱色, 直至无红色脱落为止 ( 所需时间视涂片厚薄而定, 一般为 1~3min), 水洗 滴加吕氏碱性美蓝染色液, 复染 30s~1min, 水洗, 待干, 镜检 结果 : 耐酸性细菌呈红色, 其他细菌 细胞等物质呈蓝色 2.4 柯氏染色法 染色液 % 沙黄液 % 孔雀绿液 染色法 将涂片在火焰上固定, 滴加 0.5% 沙黄液, 并加热至出现气泡, 约 2~3min, 水洗 滴加 0.5% 孔雀绿液, 复染 40~50s 水洗, 待干, 镜检 结果布氏杆菌呈红色, 其他细菌及细胞呈绿色 2.5 奥尔特氏荚膜染色法 染色液沙黄 100mL 用乳钵研磨溶解 染色法将涂片在火焰上固定, 滴加染色液, 并加热至产生蒸气后, 继续染 3min 水洗, 待干, 镜检 结果炭疽芽胞杆菌菌体呈赤褐色, 荚膜呈黄色 2.6 瑞氏染色法 染色液瑞氏色素 0.

3 甲醇 60mL 用乳钵研磨溶解 染色法 涂片待自然干燥后, 滴加染色液, 固定 1min 加入等量 (ph6.5), 染色 3~5min 用冲洗, 待干, 镜检 2.7 鞭毛染色法 染色液的配制 甲液 : 称丹宁酸 氯化高铁(FeCl3)1., 溶于 100mL 中, 待溶解后加入 1% 的氢氧化钠溶液 1mL 和 15% 的甲醛溶液 2mL 乙液 : 称 硝酸银溶于 100mL 中 在 90mL 乙液中滴加浓氢氧化铵溶液, 到出现沉淀后, 再滴加使其变为澄清, 然后用其余 10mL 乙液小心滴加至澄清液中, 至出现轻微雾状为止 ( 此为关键性操作, 应特别小心 ) 滴加氢氧化铵和用剩余乙液回滴时, 要边滴边充分摇荡, 染液当天配, 当天使用,2~3d 基本无效 染色法在风干的载玻片上滴加甲液,4~6min 后, 用轻轻冲净 再加乙液, 缓缓加热至冒汽, 维持约半分钟 ( 加热时注意勿使出现干燥面 ) 在菌体多的部位可呈深褐色到黑色, 停止加热, 用水冲净, 干后镜检, 菌体及鞭毛为深褐色到黑色 2.8 碱性复红染色法将 0. 碱性复红染料溶解于 20mL95% 乙醇中, 然后用稀释至 100mL 如有不溶物时, 可用滤纸过滤, 或静置后取上清液备用 注 : 本染色液系用于苏云金芽胞内蛋白质毒素结晶的染色, 藉以与蜡样芽胞杆菌相区别 3 生化试验培养基和试剂 3.1 Hugh-Leifson 培养基 (O/F 试验用 ) 成分蛋白胨 磷酸氢二钾 0. 4g 葡萄糖 0.2% 溴麝香草酚蓝溶液 12mL ph 制法将蛋白胨和盐类加水溶解后, 校正 ph 至 7.2 加入葡萄糖 煮沸, 溶化, 然后加入指示剂 混匀后, 分装试管,121 高压灭菌 15min, 直立凝固备用 试验方法从斜面上挑取小量培养物作穿刺接种, 同时接种两支培养基, 其中一支于接种后滴加溶化的 1% 液于表面, 高度约 1cm, 于 36±1 培养 结果 反应类型 封口的培养基 开口的培养基

4 发酵型 (F) 产酸 产酸 氧化型 (O) 不变 产酸 产碱型 (A) 不变 不变 3.2 糖发酵管 成分 蛋白胨 磷酸氢二钠 (Na2HPO4 12H2O) 0.2% 溴麝香草酚蓝溶液 12mL ph 制法 葡萄糖发酵管按上述成分配好后, 按 0.5% 加入葡萄糖, 分装于有一个倒置小管 的小试管内,121 高压灭菌 15min 其他各种糖发酵管可按上述成分配好后, 分装每瓶 100mL,121 高压灭菌 15min 另将各种糖类分别配好 10% 溶液, 同时高压灭菌 将 5mL 糖溶液加入于 100mL 培养基内, 以无菌操作分装小试管 注 : 蔗糖不纯, 加热后会自行水解者, 应采用过滤法除菌 试验方法 : 从斜面上挑取小量培养物接种, 于 36±1 培养, 一般观察 2~3d 迟缓反应需观察 14~30d 3.3 ONPG 培养基 成分 邻硝基酚 β-d- 半乳糖苷 (ONPG) 60mg (O-Nitrophenyl-β-D-galactopyranoside) 0.01mol/L 磷酸钠缓冲液 (ph7.5) 10mL 1% 蛋白胨水 (ph7.5) 30mmL 制法 将 ONPG 溶于缓冲液内, 加入蛋白胨水, 以过滤法除菌, 分装于 10mm 75mm 试管, 每管 0.5mL, 用橡皮塞塞紧 试验方法 自斜面上挑取培养物 1 满环接种, 于 36±1 培养 1~3h 和 24h 观察结果 如果 β- 半乳糖苷酶产生, 则于 1~3h 变黄色, 如无此酸则 24h 不变色 3.4 缓冲葡萄糖蛋白胨水 (MR 和 VP 试验用 ) 成分 磷酸氢二钾 多胨 7g 葡萄糖 ph 制法 溶化后校正 ph, 分装试管, 每管 1mL,121 高压灭菌 15min

5 3.4.3 甲基红 (MR) 试验自斜面挑取少量培养物接种本培养基中, 于 36±1 培养 2~5d, 哈夫尼亚菌则应在 22~25 培养 滴加甲基红试剂一滴, 立即观察结果 鲜红色为阳性, 黄色为阴性 甲基红试剂配法 :10mg 甲基红溶于 30mL95% 乙醇中, 然后加入 20mL V-P 试验用培养物接种本培养基中, 于 36±1 培养 2~4d 哈夫尼亚菌则应在 22~25 培养 加入 6%α- 萘酚 - 乙醇溶液 0.5mL 和 40% 氢氧化钾溶液 0.2mL, 充分振摇试管, 观察结果 阳性反应立刻或于数分钟内出现红色, 如为阴性, 应放在 36±1 下培养 4h 再进行观察 3.5 西蒙氏柠檬酸盐培养基 成分 硫酸镁 (MgSO4 7H2O) 0. 磷酸二氢铵 磷酸氢二钾 柠檬酸钠 0.2% 溴麝香草酚蓝溶液 40mL ph 制法先将盐类溶解于水内, 校正 ph, 再加, 加热溶化 然后加入指示剂, 混合均匀后分装试管,121 高压灭菌 15min 放成斜面 试验方法挑取少量培养物接种, 于 36±1 培养 4d, 每天观察结果 阳性者斜面上有菌落生长, 培养基从绿色转为蓝色 3.6 克氏柠檬酸盐培养基 成分柠檬酸钠 葡萄糖 0. 酵母浸膏 0. 单盐酸半胱氨酸 0. 磷酸二氢钾 0.2% 酚红溶液 6mL 制法加热溶解, 分装试管,121 高压灭菌 15min 放成斜面 试验方法用培养物接种整个斜面, 在 36±1 培养 7d, 每天观察结果 阳性者培养基变为红色 3.7 丙二酸钠培养基 成分

6 酵母浸膏 硫酸铵 磷酸氢二钾 0.6g 磷酸二氢钾 0.4g 丙二酸钠 0.2% 溴麝香草酚蓝溶液 12mL ph 制法先将酵母浸膏和盐类溶解于水, 校正 ph 后再加入指示剂, 分装试管,121 高压灭菌 15 min 试验方法用新鲜的培养物接种, 于 36±1 培养 48h, 观察结果 阳性者由绿色变为蓝色 3.8 葡萄糖铵培养基 成分 硫酸镁 (MgSO4 7H2O) 0. 磷酸二氢铵 磷酸氢二钾 葡萄糖 0.2% 溴麝香草酚蓝溶液 40mL ph 制法先将盐类和糖溶解于水内, 校正 ph, 再加, 加热溶化, 然后加入指示剂, 混合均匀后分装试管,121 高压灭菌 15min, 放成斜面 试验方法用接种针轻轻触及培养物的表面, 在盐水管内做成极稀的悬液, 肉眼观察不见混浊, 以每一接种环内含菌数在 20~100 之间为宜 将接种环灭菌后挑取菌液接种, 同时再以同法接种普通斜面一支作为对照 于 36±1 培养 24h 阳性者葡萄糖铵斜面上有正常大小的菌落生长 ; 阴性者不生长, 但在对照培养基上生长良好 如在葡萄糖铵斜面生长极微小的菌落可视为阴性结果 注 : 容器使用前应用清洁液浸泡 再用清水 冲洗干净, 并用新棉花做成棉塞, 干热灭菌后使用 如果操作时不注意, 有杂质污染时, 易造成假阳性的结果 3.9 马尿酸钠培养基 成分马尿酸钠 肉浸液 100mL 制法将马尿酸钠溶解于肉浸液内, 分装于小试管内, 并于管壁画一横线 以标志管内液面高度, 高压灭菌 min 试剂

7 三氯化铁 (FeCl3 6H2O)1, 溶于 2% 盐酸溶液 100mL 中即成 试验方法用纯培养物接种, 于 42 培养 48h, 观察培养液是否到达试管壁上记号处, 如不足时, 用补足至原量 经离心沉淀, 吸取上清液 0.8mL, 加入三氯化铁试剂 0.2mL, 立即混合均匀, 经 10~15min, 观察结果 结果 : 出现恒久之沉淀物为阳性 3.10 营养明胶 成分蛋白胨 明胶 1 ph6.8~ 制法加热溶解 校正至 ph7.4~7.6, 分装小管,121 高压灭菌 10min, 取出后迅速冷却, 使其凝固 复查最终 ph 应为 6.8~ 试验方法用培养物穿刺接种, 放在 22~25 培养, 每天观察结果, 记录液化时间 或放在 36±1 培养, 每天取出, 放冰箱内 30min 后再观察结果 3.11 苯丙氨酸培养基 成分酵母浸膏 DI- 苯丙氨酸 ( 或 L- 苯丙氨酸 ) 磷酸氢二钠 制法加热溶解后分装试管,121 高压灭菌 15min, 使成斜面 试验方法自斜面上挑取大量培养物, 移种于苯丙氨酸, 在 36±1 培养 4h 或 18~24h 滴加 10% 三氯化铁溶液 2~3 滴, 自斜面培养物上流下, 苯丙氨酸脱氨酶阳性者呈深绿色 3.12 氨基酸脱羧酶试验培养基 成分蛋白胨 酵母浸膏 葡萄糖 1.6% 溴甲酚紫 - 乙醇溶液 1mL L- 氨基酸或 DL- 氨基酸 0.5 或 /100mL ph 制法除氨基酸以外的成分加热溶解后, 分装每瓶 100mL, 分别加入各种氨基酸 : 赖氨酸 精氨酸和鸟氨酸 L- 氨基酸按 0.5% 加入,DL- 氨基酸按 1% 加入 再行校正 ph 至 6.8 对

8 照培养基不加氨基酸 分装于灭菌的小试管内, 每管 0.5mL, 上面滴加一层液体石蜡, 115 高压灭菌 10min 试验方法从斜面上挑取培养物接种, 于 36±1 培养 18~24h, 观察结果 氨基酸脱羧酶阳性者由于产碱, 培养基应呈紫色 阴性者无碱性产物, 但因葡萄糖产酸而使培养基变为黄色 对照管应为黄色 3.13 蛋白胨水 ( 靛基质试验用 ) 成分蛋白胨 ( 或胰蛋白胨 ) ph 制法按上述成分配制, 分装小试管,121 高压灭菌 15min 靛基质试剂 柯凡克试剂 : 将 对二甲氨基苯甲醛溶解于 75mL 戊醇中 然后缓慢加入浓盐酸 25mL 欧 - 波试剂 : 将 对二甲氨基苯甲醛溶解于 95mL95% 乙醇内 然后缓慢加入浓盐酸 20mL 试验方法挑取小量培养物接种, 在 36±1 培养 1~2d, 必要时可培养 4~5d 加入柯凡克试剂约 0.5mL, 轻摇试管, 阳性者于试剂层呈深红色 ; 或加入欧 - 波试剂约 0.5mL, 沿管壁流下, 覆盖于培养液表面, 阳性者于液面接触处呈玫瑰红色 注 : 蛋白胨中应含有丰富的色氨酸 每批蛋白胨买来后, 应先用已知菌种鉴定后方可使用 3.14 硫酸亚铁 ( 硫化氢试验用 ) 成分 酵母浸膏 蛋白胨 硫酸亚铁 0. 硫代硫酸钠 0. 1 ph 制法加热溶解, 校正 ph, 分装试管,115 高压灭菌 15min, 取出直立俟其凝固 试验方法挑取培养物, 沿管壁穿刺, 于 36±1 培养 1~2d, 观察结果 产硫化氢者使培养基变为黑色 注 : 肠杆菌科细菌测定硫化氢的产生, 应采用三糖铁或本培养基 3.15 尿素 成分

9 蛋白胨 葡萄糖 磷酸二氢钾 0.4% 酚红溶液 3mL 20% 尿素溶液 100mL ph7.2± 制法将除尿素和以外的成分配好, 并校正 ph, 加入, 加热溶化并分装烧瓶 121 高压灭菌 15min 冷至 50~55, 加入经除菌过滤的尿素溶液 尿素的最终浓度为 2% 最终 ph 应为 7.2±0.1 分装于灭菌试管内, 放成斜面备用 试验方法挑取培养物接种, 在 36±1 培养 24h, 观察结果, 尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色 3.16 氰化钾 (KCN) 培养基 成分蛋白胨 磷酸二氢钾 0.22 磷酸氢二钠 5.64g 0.5% 氰化钾溶液 20mL ph 制法将除氰化钾以外的成分配好后分装烧瓶,121 高压灭菌 15min 放在冰箱内使其充分冷却 每 100mL 培养基加入 0.5% 氰化钾溶液 2.0mL( 最后浓度为 ), 分装于 12mm 100mm 灭菌试管, 每管约 4mL, 立刻用灭菌橡皮塞塞紧, 放在 4 冰箱内, 至少可保存两个月 同时, 将不加氰化钾的培养基作为对照培养基, 分装试管备用 试验方法将培养物接种于蛋白胨水内成为稀释菌液, 挑取 1 环接种于氰化钾 (KCN) 培养基 并另挑取 1 环接种于对照培养基 在 36±1 培养 1~2d, 观察结果 如有细菌生长即为阳性 ( 不抑制 ), 经 2d 细菌不生长为阴性 ( 抑制 ) 注 : 氰化钾是剧毒药物, 使用时应小心, 切勿沾染, 以免中毒 夏天分装培养基应在冰箱内进行 试验失败的主要原因是封口不严, 氰化钾逐渐分解, 产生氢氰酸气体逸出, 以致药物浓度降低, 细菌生长, 因而造成假阳性反应 试验时对每一环节都要特别注意 3.17 硝酸盐培养基 成分硝酸钾 0. 蛋白 ph7.4

10 制法溶解, 校正 ph, 分装试管, 每管约 5mL,121 高压灭菌 15min 硝酸盐还原试剂 甲液 : 将对氨基苯磺酸 0.8g 溶解于 2.5mol/L 乙酸溶液 100mL 中 乙液 : 将甲萘胺 0. 溶解于 2.5mol/L 乙酸溶液 100mL 中 试验方法接种后在 36±1 培养 1~4d, 加入甲液和乙液各一滴, 观察结果 硝酸盐还原为亚硝酸盐时于立刻或数分钟内显红色 注 : 本试验阴性的原因有三 : 细菌不能还原硝酸盐 ; 亚硝酸盐继续分解, 生成氨和氮 ; 培养基不适于细菌的生长 如欲检查培养基中硝酸盐是否未被分解, 可再加入锌粉少许, 可使硝酸盐还原为亚硝酸盐而呈现红色 3.18 氧化酶试验 试剂 % 盐酸二甲基对苯二胺溶液 : 少量新鲜配制, 于冰箱内避光保存 %α- 萘酚 - 乙醇溶液 试验方法 取白色洁净滤纸沾取菌落 加盐酸二甲基对苯二胺溶液一滴, 阳性者呈现粉红色, 并逐渐加深 ; 再加 α- 萘酚溶液一滴, 阳性者于半分钟内呈现鲜蓝色 阴性于两分钟内不变色 以毛细吸管吸取试剂, 直接滴加于菌落上, 其显色反应与以上相同 3.19 细胞色素氧化酶试验 试剂 % 盐酸二甲基对苯二胺溶液 %α- 萘酚 - 乙醇溶液 试验方法取 37 ( 或低于 37 ) 培养 20h 的斜面培养物一支, 将两种试剂各 2~3 滴, 从斜面上端滴下, 并将斜面略加倾斜, 使试剂混合液流经斜面上的培养物 如系平板培养物, 则可用试剂混合液滴在菌落上 结果于 2min 内呈现蓝色者为阳性 阳性培养物大多数于半分钟内出现强阳性反应,2min 以后出现微弱或可疑反应均作为阴性结果 3.20 过氧化氢酶试验 试剂 3% 过氧化氢溶液 : 临用时配制 试验方法挑取固体培养基上菌落一接种环, 置于洁净试管内, 滴加 3% 过氧化氢溶液 2mL, 观察结果 结果于半分钟内发生气泡者为阳性, 不发生气泡者为阴性 3.21 过氧化物酶试验 试剂 % 儿茶酚溶液 % 过氧化氢溶液 试验方法

11 挑取固体培养基上菌落一接种环, 置于洁净试管内, 滴加 2% 儿茶酚溶液 1mL 及 3% 过氧化氢溶液 1mL 静置于室温(20 ) 中 30~60min, 观察结果 结果阳性反应, 细菌变为黑褐色 ; 阴性反应, 细菌不变色 注 : 过氧化物酶的作用可受氰化钾的抑制 3.22 磷酸盐缓冲液 储存液磷酸二氢钾 34g 1mol/L 氢氧化钠溶液 175mL 825mL ph 制法先将磷酸盐溶解于 500mL 中, 用 1mol/L 氢氧化钠溶液校正 ph 后, 再用稀释至 稀释液 : 取储存液 1.25mL, 用稀释至 分装每瓶 100mL 或每管 10mL, 121 高压灭菌 15min 3.23 明胶磷酸盐缓冲液 成分明胶 磷酸氢二钠 4g ph 制法加热溶解, 校正 ph,121 高压灭菌 15min 3.24 乳酸 - 苯酚溶液 成分苯酚 乳酸 ( 比重 1.21) 甘油 10mL 制法将苯酚在水中加热溶解, 然后加入乳酸及甘油 用途检验真菌形态时用 4 一般培养基和专用培养基 4.1 肉浸液肉汤 成分绞碎牛肉 500g 蛋白胨 磷酸氢二钾 制法

12 将绞碎之去筋膜无油脂牛肉 500g 加, 混合后放冰箱过夜, 除去液面之浮油, 隔水煮沸半小时, 使肉渣完全凝结成块, 用绒布过滤, 并挤压收集全部滤液, 加水补足原量 加入蛋白胨 和磷酸盐, 溶解后校正 ph7.4~7.6 煮沸并过滤, 分装烧瓶, 121 高压灭菌 30min 4.2 肉浸液 成分肉浸液肉汤 (ph7.4) 17~ 制法加热溶化, 分装烧瓶或试管,121 高压灭菌 30min 根据需要, 倾注平板或放成斜面 4.3 牛肉 ( 或牛心 ) 消化汤 成分绞碎牛肉 ( 或牛心 ) 1 000g 15% 氢氧化钠溶液 27mL 胰蛋白酶 40mL 三氯甲烷 1mL 2 000mL 制法 称取碎牛肉, 加, 隔水加热到 80, 维持 15min 加氢氧化钠溶液, 对 ph 试纸呈弱碱性, 冷至 加胰蛋白酶 氯仿, 在 36±1 放置 4~5h, 每小时摇动一二次 h 后, 吸取上层液 5mL 于试管中, 加 5% 硫酸铜溶液 0.1mL 4% 氢氧化钠溶液 5mL, 混合之 若呈红色, 则不须再消化, 可由温箱取出 加入 15% 乙酸溶液 45mL, 对 ph 试纸呈酸性 煮沸 15min, 使胰蛋白酶破坏, 冷后, 放冰箱内一夜 次日吸取上层清液, 加, 并加水补足原量, 煮沸 校正 ph7.4~7.6( 加 15% 氢氧化钠溶液约 10mL), 加热, 用滤纸过滤, 分装烧瓶, 121 高压灭菌 20min 注 :1 此培养基可作为培养基的基础, 不需加蛋白胨 2 胰蛋白酶之配制 : 称取去脂绞碎的猪胰 500g, 加入乙醇 500mL 1 500mL, 混合之, 装入玻塞瓶内 每日摇匀三次 3d 后, 用绒布过滤挤出其汁, 加盐酸至 0.05%, 放冰箱内保存备用 4.4 血消化汤 成分绞碎猪胃 100g 绞碎猪血块 100g 浓盐酸 10mL 制法 洗涤猪胃, 除去油脂, 保留胃粘膜, 用绞肉机绞碎 用绞肉机将猪血块绞碎 将加热至 55, 加入猪胃 猪血块和盐酸, 置 55 水浴中 24h, 时常加以

13 摇动 从水浴内取出, 加入 1mol/L 碳酸钠溶液 5mL, 煮沸 10min, 置于冰箱内一夜 吸取上层清液, 加磷酸氢二钾, 加热至 75, 加入 1mol/L 碳酸钠溶液 45mL, 煮沸, 校正 ph7.2~ 用滤纸过滤, 分装烧瓶,121 高压灭菌 20min 注 :1 本培养基不含糖可供作鉴别培养基之基础, 不需加蛋白胨和 21mol/L 碳酸钠溶液之配法 : 无水碳酸钠 10.6g, 溶于 中 4.5 豆粉 成分牛心消化汤 (ph7.4~7.6) 黄豆粉浸液 50mL 制法将加在牛心消化汤内, 加热溶解, 过滤 加入豌豆粉浸液, 分装每瓶 100mL,121 高压灭菌 15min 豌豆粉浸液制法 : 取豌豆粉, 加入 100mL 置 100 水浴内加热 1h, 放于冰箱中过夜 吸取上清液即为豌豆浸液 4.6 血 成分 ph7.4~7.6 豆粉 100mL 脱纤维羊血 ( 或兔血 ) 5~10mL 制法加热溶化, 冷至 50, 以灭菌手续加入脱纤维羊血, 摇匀, 倾注平板 亦可分装灭菌试管, 置成斜面 亦可用其他营养丰富的基础培养基配制血 4.7 营养 成分蛋白胨 15~ 制法将除以外的各成分溶解于内, 加入 15% 氢氧化钠溶液约 2mL, 校正 PH 至 7.2 ~7.4 加入, 加热煮沸, 使溶化 分装烧瓶,121 高压灭菌 15min 注 : 此培养基可供一般细菌培养之用, 可倾注平板或制成斜面 如用于菌落计数, 量为 1.5%; 如作成平板或斜面, 则应为 2% 4.8 营养肉汤 成分蛋白胨 ph 制法

14 按上述成分混合, 溶解后校正 ph, 分装烧瓶, 每瓶 225mL,121 高压灭菌 15min 4.9 乳糖胆盐发酵管 成分蛋白胨 猪胆盐 ( 或牛 羊胆盐 ) 乳糖 0.04% 溴甲酚紫水溶液 25mL ph 制法将蛋白胨 胆盐及乳糖溶于水中, 校正 ph, 加入指示剂, 分装每管 10mL, 并放入一个小倒管,115 高压灭菌 15min 注 : 双料乳糖胆盐发酵管除中, 其他成分加倍 4.10 乳糖发酵管 成分蛋白胨 乳糖 0.04% 溴甲酚紫水溶液 25mL ph 制法将蛋白胨及乳糖溶于水中, 校正 ph, 加入指示剂, 按检验要求分装 30mL 10mL 或 3mL, 并放入一个小倒管,115 高压灭菌 15min 注 :1 双料乳糖发酵管除外, 其他成分加倍 230mL 和 10mL 乳糖发酵管专供酱油及酱类检验用,3mL 乳糖发酵管供大肠菌群证实试验用 4.11 EC 肉汤 成分胰蛋白胨 3 号胆盐 ( 或混合胆盐 ) 1. 乳糖 磷酸氢二钾 4g 磷酸二氢钾 制法将上述成分混合, 溶解后, 分装有发酵倒管的试管中,121 高压灭菌 15min, 最终 ph 为 6.9± 缓冲蛋白胨水 (BP) 成分蛋白胨 磷酸氢二钠 (Na2HPO4 12H2O) 9g

15 磷酸二氢钾 1. ph 制法按上述成分配好后以大烧瓶装,121 高压灭菌 15min 临用时无菌分装每瓶 225mL 注 : 本培养基供沙门氏菌前增菌用 4.13 氯化镁孔雀绿增菌液 (MM) 甲液胰蛋白胨 8g 磷酸二氢钾 1.6g 乙液氯化镁 ( 化学纯 ) 40g 100mL 丙液 0.4% 孔雀绿水溶液 制法分别按上述成分配好后,121 高压灭菌 15min 备用 临用时取甲液 90mL 乙液 9mL 丙液 0.9mL, 以无菌操作混合即可 注 : 本培养基亦称 Rappaport 10(R10) 增菌液 4.14 四硫磺酸钠煌绿增菌液 (TTB) 基础培养基多胨或 ( 月示 ) 胨 胆盐 碳酸钙 硫代硫酸钠 30g 碘溶液磺 6g 碘化钾 20mL 制法将基础培养基的各成分加入中, 加热溶解, 分装每瓶 100mL 分装时应随时振摇, 使其中的碳酸钙混匀 121 高压灭菌 15min 备用 临用时每 100mL 基础培养基中加入碘溶液 2mL 0.1% 煌绿溶液 1mL 4.15 四硫磺酸钠煌绿增菌液 ( 换用方法 ) 基础液蛋白胨 碳酸钙 4 将各成分加入于中, 加热至约 70 溶解, 校正 ph 至 7.0±0.1,121 高压灭菌

16 20min 硫代硫酸钠溶液硫代硫酸钠 (Na2S2O3 5H2O) 50g 加至 100mL 碘溶液碘片 碘化钾 2 加至 100mL 将碘化钾充分溶解于最少量的中, 加入碘片, 振摇玻瓶至碘片全部溶解, 再加入至规定量 贮于棕色玻瓶内, 紧塞瓶盖备用 煌绿水溶液煌绿 mL 存放暗处, 不少于 1d, 使其自然灭菌 牛胆盐溶液干燥的牛胆盐 10mL 煮沸溶解,121 高压灭菌 20min 制备基础液 900mL 硫代硫酸钠溶液 100mL 碘液 20mL 煌绿溶液 2mL 牛胆盐溶液 50mL 临用前, 按上列顺序, 以无菌操作依次加入于基础液中, 每加入一种成分, 均应摇匀后再加入另一种成分 分装于灭菌瓶中, 每瓶 100mL 4.16 亚硒酸盐胱氨酸增菌液 (SC) 成分蛋白胨 乳糖 4g 亚硒酸氢钠 4g 磷酸氢二钠 5. 磷酸二氢钾 4. L- 胱氨酸 %L- 胱氨酸 - 氢氧化钠溶液的配法 : 称取 L- 胱氨酸 0.( 或 DL- 胱氨酸 0.), 加 1mol/L 氢氧化钠 1.5mL, 使溶解, 再加入 8.5mL 即成 制法 : 将除亚硒酸氢钠和 L- 胱氨酸以外的各成分溶解于 900mL 中, 加热煮沸, 俟冷备用 另将亚硒酸氢钠溶解于 100mL 中, 加热煮沸, 俟冷, 以无菌操作与上液混合 再加入 1%L- 胱氨酸 - 氢氧化钠溶液 1mL 分装于灭菌瓶中, 每瓶 100mL,pH 应为 7.0± GN 增菌液 成分胰蛋白胨

17 葡萄糖 甘露醇 柠檬酸钠 去氧胆酸钠 0. 磷酸氢二钾 4g 磷酸二氢钾 1. ph 制法按上述成分配好, 加热使溶解, 校正 ph 分装每瓶 225mL,115 高压灭菌 15min 4.18 肠道菌增菌肉汤 成分蛋白胨 葡萄糖 牛胆盐 磷酸氢二钠 8g 磷酸二氢钾 煌绿 0.01 ph 制法按上述成分配好, 加热使溶解, 校正 ph 分装每瓶 30mL,115 高压灭菌 15min 4.19 亚硫酸铋 (BS) 成分蛋白胨 葡萄糖 硫酸亚铁 0. 磷酸氢二钠 4g 煌绿 0.02 柠檬酸铋铵 亚硫酸钠 6g 18~ ph 制法 将前面 5 种成分溶解于 300mL 中 将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠另用 50mL 溶解 将于 600mL 中煮沸溶解, 冷至 将以上三液合并, 补充至, 校正 ph, 加 0.5% 煌绿水溶液 5mL, 摇匀 冷至 50~55, 倾注平皿 注 : 此培养基不需高压灭菌, 制备过程不宜过分加热, 以免降低其选择性 应在临用前一天制备, 贮存于室温暗处 超过 48h 不宜使用

18 4.20 DHL (Deoxycholate Hydrogen Sulfide Lactose Agar) 成分 蛋白胨 乳糖 蔗糖 去氧胆酸钠 硫代硫酸钠 2. 柠檬酸钠 柠檬酸铁铵 中性红 ~ ph 制法 将除中性红和以外的成分溶解于 400mL 中, 校正 ph 再将于 600mL 蒸 馏水中煮沸溶解, 两液合并, 并加入 0.5% 中性红水溶液 6mL, 待冷至 50~55, 倾注平板 4.21 HE (Hektoen Enteric Agar) 成分 ( 月示 ) 胨 1 乳糖 1 蔗糖 1 水杨素 胆盐 18~ 0.4% 溴麝香草酚蓝溶液 16mL Andrade 指示剂 20mL 甲液 20mL 乙液 20mL ph 制法将前面七种成分溶解于 400mL 内作为基础液 ; 将加入于 600mL 内, 加热溶解 加入甲液和乙液于基础液内, 校正 ph 再加入指示剂, 并与液合并, 待冷至 50~55, 倾注平板 注 :1 此培养基不可高压灭菌 2 甲液的配制硫代硫酸钠 34g 柠檬酸铁铵 4g 100mL 2 乙液的配制

19 去氧胆酸钠 100mL 2Andrade 指示剂 酸性复红 0. 1mol/L 氢氧化钠溶液 16mL 100mL 将复红溶解于中, 加入氢氧化钠溶液 数小时后如复红褪色不全, 再加氢氧化钠 溶液 1~2mL 4.22 SS 基础培养基 ( 月示 ) 胨 三号胆盐 3. 17g 将 ( 月示 ) 胨和胆盐溶解于 400mL 中, 将加入于 600mL 中, 煮 沸使其溶解, 再将两液混合,121 高压灭菌 15min, 保存备用 完全培养基 基础培养基 乳糖 柠檬酸钠 8. 硫代硫酸钠 8. 10% 柠檬酸铁溶液 10mL 1% 中性红溶液 2.5mL 0.1% 煌绿溶液 0.33mL 加热溶化基础培养基, 按比例加入上述染料以外之各成分, 充分混合均匀, 校正至 ph 7.0, 加入中性红和煌绿溶液, 倾注平板 注 :1 制好的培养基宜当日使用, 或保存于冰箱内于 48h 内使用 2 煌绿溶液配好后应在 10d 以内使用 3 可以购用 SS 的干燥培养基 4.23 WS 成分 ( 月示 ) 胨 1 乳糖 1 蔗糖 1 十二烷基硫酸钠 1 Andrade 指示剂 20mL 0.4% 溴麝香草酚蓝溶液 16mL 甲液 20mL ph7.0

20 制法除指示剂和甲液外, 将其他成分加热溶解, 不需消毒, 校正 ph 后加入指示剂和甲液, 倾注平板应呈草绿色 注 :1 供沙门氏菌分离用 2Andrade 指示剂和甲液的配制均见 HE 4.24 麦康凯 成分蛋白胨 17g ( 月示 ) 胨 猪胆盐 ( 或牛 羊胆盐 ) 17g 乳糖 0.01% 结晶紫水溶液 10mL 0.5% 中性红水溶液 5mL 制法 将蛋白胨 胨 胆盐和溶解于 400mL 中, 校正 ph7.2 将加入 600mL 中, 加热溶解 将两液合并, 分装于烧瓶内,121 高压灭菌 15min 备用 临用时加热溶化, 趁热加入乳糖, 冷至 50~55 时, 加入结晶紫和中性红水溶液, 摇匀后倾注平板 注 : 结晶紫及中性红水溶液配好后须经高压灭菌 4.25 伊红美蓝 (ENB) 成分蛋白胨 乳糖 磷酸氢二钾 17g 2% 伊红 Y 溶液 20mL 0.65% 美蓝溶液 10mL ph 制法将蛋白胨 磷酸盐和溶解于中, 校正 ph, 分装于烧瓶内,121 高压灭菌 15 min 备用 临用时加入乳糖并加热溶化, 冷至 50~55, 加入伊红和美蓝溶液, 摇匀, 倾注平板 4.26 三糖铁 (TSI) 成分蛋白胨 乳糖 蔗糖 葡萄糖

21 硫酸亚铁铵 Fe(NH4)2(SO4)2 6H2O 0. 硫代硫酸钠 0. 1 酚红 0.02 ph 制法 将除和酚红以外的各成分溶解于中, 校正 ph 加入, 加热煮沸, 以溶 化 加入 0.2% 酚红水溶液 12.5mL, 摇匀 分装试管, 装量宜多些, 以便得到较高的底 层 121 高压灭菌 15min 放置高层斜面备用 4.27 三糖铁 ( 换用方法 ) 成分 蛋白胨 1 ( 月示 ) 胨 酵母膏 乳糖 蔗糖 葡萄糖 硫酸亚铁 0. 硫代硫酸钠 0. 1 酚红 0.02 ph 制法 将除和酚红以外的各成分溶解于中, 校正 ph 加入, 加热煮沸, 以溶 化 加入 0.2% 酚红水溶液 12.5mL, 摇匀 分装试管, 装量宜多些, 以便得到较高的底 层 121 高压灭菌 15min, 放置高层斜面备用 4.28 克氏双糖铁 (KI) 上层培养基成分 血消化汤 (ph7.6) 500mL 6. 硫代硫酸钠 0. 硫酸亚铁铵 0. 乳糖 0.2% 酚红溶液 5mL 下层培养基成分 血消化汤 (ph7.6) 500mL 葡萄糖 0.2% 酚红溶液 5mL 制法

22 取血消化汤按上层和下层的用量, 分别加入, 加热溶解 分别加入其他各种成分 将上层培养基分装于烧瓶内 ; 将下层培养基分装于灭菌 12mm 100mm 试管内, 每管约 2mL 115 高压灭菌 10min 将上层培养基放在 56 水浴箱内保温 ; 将下层培养基直立放在室温内, 使其凝固 俟下层培养基凝固后, 以无菌手续将上层培养基分装于下层培养基的上面, 每管约 1.5mL, 放成斜面 4.29 克氏双糖铁 ( 换用方法 ) 成分蛋白胨 酵母膏 乳糖 葡萄糖 柠檬酸铁铵 0. 硫代硫酸钠 0. 1 酚红 0.02 ph 制法将除和酚红以外的各成分溶解于中, 校正 ph 加入, 加热煮沸, 以溶化 加入 0.2% 酚红水溶液 12.5mL, 摇匀 分装试管, 装量宜多些, 以便得到比较高的底层 121 高压灭菌 15min 放置高层斜面备用 4.30 半固体 成分蛋白胨 ~0.4g 100mL ph 制法按以上成分配好, 煮沸使溶解, 并校正 ph 分装小试管 121 高压灭菌 15min 直立凝固备用 注 : 供动力观察 菌种保存 H 抗原位相变异试验等用 4.31 葡萄糖半固体发酵管 成分蛋白胨 % 溴甲酚紫酒精溶液 0.1mL 葡萄糖

23 0. 100mL ph 制法将蛋白胨 和加入于水中, 校正 ph 后加入加热溶解, 再加入指示剂和葡萄糖, 分装小试管, 灭菌 min % 乳糖发酵管 成分蛋白胨 乳糖 2% 溴麝香草酚蓝水溶液 1.2mL 100mL ph 制法除乳糖以外的各成分溶解于 50mL 内, 校正 ph 将乳糖溶解于另外 50mL 内, 分别灭菌 min, 将两液混合, 以无菌操作分装于灭菌小试管内 注 : 在此培养基内, 大部分乳糖迟缓发酵的细菌可于 1d 内发酵 4.33 CAYE 培养基此培养基附在肠毒素诊断试剂盒内, 如无此培养基, 亦可用 Honda 氏产毒肉汤 4.34 Honda 氏产毒肉汤 成分水解酪蛋白 酵母浸膏粉 2. 磷酸氢二钠 1 葡萄糖 微量元素 0.5mL ph 制法溶解后校正 ph, 高压灭菌 min, 待冷至 45~50 时, 加入林可霉素溶液, 每毫升培养基内含 90μg 微量元素配方硫酸镁, 氯化铁 0., 氯化钴, 100mL 4.35 Elek 氏培养基 ( 毒素测定用 ) 成分胨 麦芽糖 乳糖 0.7g 1 40% 氢氧化钠溶液 1.5mL

24 ph 制法 用 500mL 溶解以外的成分, 煮沸, 并用滤纸过滤 用 1mol/L 氢氧化钠校正 ph 用另外 500mL 加热溶解 将两液混合, 分装试管 10mL 或 20mL 121 高 压 灭菌 15min 临用时加热溶化倾注平板 4.36 氯化镁孔雀绿羧苄青霉素培养基 甲液 : 胰蛋白胨 乙液 : 磷酸氢二钠 9. 丙液 : 氯化镁 (MgCl3 6H2O) 40g 400mL 以上分别在 121 灭菌 15min 丁液 : 孔雀绿 mL 戊液 : 羧苄青霉素 1mg/mL 制法 取甲液 620mL 乙液 160mL 丙液 212mL 混合, 再加入丁液 6.4mL 和戊液 2.4mL, 即为 mL 培养基 分装灭菌烧瓶, 每瓶 100mL, 或灭菌试管 10mL 4.37 胰蛋白胨水 成分 胰蛋白胨 ph 制法 将上述成分溶解, 校正 ph 分装试管,121 高压灭菌 15min 4.38 Rustigian 氏尿素培养液 成分 尿素 20.0g 酵母浸膏 0. 磷酸二氢钾 (KH2PO4) 0.09 磷酸氢二钠 (Na2HPO4) 0.09 酚红 制法 将上述成分于中溶解, 校正 ph 为 6.8±0.2 不要加热, 过滤除菌, 无菌分装于 灭菌小试管中, 每管为约 3mL 用途 尿素酶试验用 4.39 结晶紫增菌液 成分 蛋白胨

25 40g 0.01% 结晶紫溶液 5mL ph 制法除结晶紫外, 其他按上述成分配好, 加热溶解 约加 30% 氢氧化钾溶液 4.5mL, 校正 ph 加热煮沸, 过滤 再加入结晶紫溶液, 混合后分装试管 121 高压灭菌 15min 4.40 蔗糖 成分蛋白胨 50g 蔗糖 18g 0.2% 溴麝香草酚蓝溶液 20mL ph 制法将 蛋白胨及溶解于中, 校正 ph 加入, 加热溶解, 过滤 加入指示剂, 分装烧瓶 100mL 121 高压灭菌 15min 备用 临用前在 100mL 培养基内加入蔗糖, 加热溶化并冷至 50, 倾注平板 4.41 嗜盐菌选择性 成分蛋白胨 40g 17g 0.01% 结晶紫溶液 5mL ph 制法除结晶紫和外, 其他按上述成分配好, 校正 ph 加入, 加热溶解 再加入结晶紫溶液, 分装烧瓶, 每瓶 100mL % 三糖铁 成分三糖铁 30g 制法按 4.26 或 4.27 配制三糖铁, 再加入 30g, 分装试管,121 高压灭菌 15min 放置高层斜面使用 4.43 血 成分酵母膏 蛋白胨 70g

26 磷酸氢二钠 甘露醇 结晶紫 制法调 ph8.0 加热 30min( 不必高压 ), 待冷至 45 左右时, 加入新鲜人或兔血 (5%~10%) 混合均匀, 倾注平皿 4.44 嗜盐性试验培养基 成分蛋白胨 按不同量加 100mL ph 制法配制 2% 蛋白胨水, 校正 ph, 共配制 5 瓶, 每瓶 100mL 每瓶分别加入不同量的; (1) 不加 ;(2);(3)7g;(4)9g;(5)1 待溶解后分装试管 121 高压灭菌 15min % 生化试验培养基 成分及制法根据所需糖的种类按 3.2 配制 只是将含量改为 3.5%,pH 为 改变磷酸盐缓冲液 ( 小肠结肠炎耶尔森氏菌专用 ) 成分磷酸氢二钠 (Na2HPO4) 8.2 磷酸二氢钠 (NaH2PO4 H2O) 1. (NaCl) 5.0g 三号胆盐 1. 山梨醇 制法将磷酸盐及溶于中, 再加入三号胆盐及山梨醇, 溶解后校正 ph 为 7.6, 分装试管, 于 121 高压灭菌 15min, 备用 4.47 CIN-1 培养基 基础培养基胰胨 20.0g 酵母浸膏 2.0g 甘露醇 20.0g 1.0g 去氧胆酸钠 2.0g 硫酸镁 (MgSO4 7H2O) g 950mL ph7.50±0.1 将基础培养基高压灭菌 Irgasan: 以 95% 的乙醇作溶剂, 溶解二苯醚, 配成 0.4% 的溶液, 待基础液冷至 80 时, 加入 1mL 混匀

27 冷至 50 时, 加入 : 中性红 (3mg/mL) 10.0mL 结晶紫 (0.1mg/mL) 10.0mL 头孢菌素 (1.5mg/mL) 10.0mL 新生霉素 (0.25mg/mL) 10.0mL 最后不断搅拌着加入 10.0mL 的 10% 氯化锶, 倒平皿 4.48 改良 Y 培养基 成分 蛋白胨 15.0g 5.0g 乳糖 10.0g 草酸钠 2.0g 去氧胆酸钠 6.0g 三号胆盐 5.0g 丙酮酸钠 2.0g 孟加拉红 40mg 水解酪蛋白 5.0g 17.0g 制法 将上述成分混合, 于 121 高压灭菌 15min, 待冷至 45 左右时, 倾注平皿 最终 ph7.4 ± 改良克氏双糖 成分 蛋白胨 酵母膏 山梨醇 葡萄糖 柠檬酸铁铵 0. 硫代硫酸钠 0. 1 酚红 0.02 ph 制法 将除和酚红以外的各成分溶解于中, 校正 ph 加入 0.02% 酚红水溶液 12.5mL, 摇匀 分装试管, 装量宜多些, 以便得到比较高的底层 121 高压灭菌 15min, 放置高 层斜面备用 4.50 快速硫化氢 (H2S) 试验 制法 A 液 : 布氏杆菌肉汤 970mL

28 无水磷酸氢二钠 1.18g 无水磷酸二氢钾 0.2 加热溶解, 高压灭菌,121 15min 加入 B 液 10% 硫酸亚铁 ( 含 7H2O),C 液 10% 偏亚硫酸氢钠,D 液 10% 丙酮酸钠 上述 B C D 溶液均新鲜配制, 用除菌滤膜过滤 将此除菌溶液各 1mL 混合后再入 A 液中, 无菌调 ph 到 7.3, 无菌分装, 每管 3mL, 塞紧备用 4.51 DNA 酶甲基绿 (DTA) 成分 DNA 2.0g 植物蛋白胨 5.0g 胰蛋白胨 15.0g 5.0g (1.5%) 15.0g ph 制法称取各成分后, 加水徐徐加热, 避免形成饼溶性丝状物,121 15min 高压 甲基绿配制 (MG) 配制 0.5% 的甲基绿水溶液 用等体积氯仿作 5~7 次抽提, 直到氯仿层无色为止 过滤除菌, 置 4 保存 每 100mL 灭菌溶化的 DTA 培养基加 1mL(MG) 染料液, 甲基绿最终浓度为 0.005% 4.52 Cary-Blair 氏运送培养基 成分硫乙醇酸钠 1. 磷酸氢二钠 1. 1% 氯化钙溶液 19mL ph 制法除氯化钙外, 其他均按上述成分配制, 加热溶解 冷至 50, 加入氯化钙溶液, 校正 ph 到 8.4 分装试管, 每支 5mL, 或注入具有胶塞的瓶内 121 高压灭菌 15min 用途作空肠弯曲杆菌 霍乱弧菌 沙门氏菌 志贺氏菌采样时用 注 : 在该采样管中的标本, 只能保存 72h 4.53 改良 Camp-BAP 培养基 成分胰蛋白胨 10.0g 蛋白胨 10.0g 葡萄糖 1.0g 酵母浸膏 2.0g 5.0g

29 焦亚硫酸钠 g 硫乙醇酸钠 1. 万古霉素 10mg 多粘菌素 B 2500 国际单位两性霉素 B(Amphotericin B) 2mg 头孢霉素 (Cephalosporin, 亦可用 ceporan) 15mg 脱纤维羊血 50mL 制法 除抗生素和羊血外, 将其他成分混合, 加热溶解, 校正 ph 到 7.0±0.2 装瓶, 每瓶 100mL 121 高压灭菌 15min, 备用 此为布氏基础培养基 临用前, 加热溶解基础, 冷至 60 每 100mL 基础中, 加入脱纤维羊血 5mL 抗生素混合液 0.5mL 及两性霉素 B 头孢霉素混合液 0.5mL, 摇匀, 倾注平板 说明 两性霉素 B 头孢霉素混合液配法: 称两性霉素 B2mg 和头孢霉素 15mg 与无菌 5mL 混合即成 称量抗生素必须正确, 操作必须小心慎重 4.54 Skirrow 氏培养基 成分蛋白胨 15.0g 胰蛋白胨 (tryptone) 2. 酵母浸膏 5.0g 5.0g 15.0g mL 甲氧苄氨嘧啶 (trimethoprim,tmp) 5.0mg 万古霉素 (vancomycin) 10.0mg 多粘菌素 B(polymyxin) 国际单位冻溶马血 70.0ml 制法 除甲氧苄氨嘧啶 抗生素和冻溶马血外, 将其他成分混合溶解 校正 ph7.4, 装瓶 100mL 121 高压灭菌 15min, 备用 此即血基础培养基 临用前, 加热溶解基础培养基, 冷至 60 每 100mL 基础培养基中, 加入冻溶两次的马血 7mL 及 TMP 抗生素混合液 0.5mL, 摇匀, 倾注无菌平板 用途分离空肠弯曲菌之用 说明 TMP 抗生素混合液配法: 先配成乳酸 TMP 溶液, 以乳酸 62mg( 约 1~2 滴 ) 混合于 10mL 灭菌中, 然后再加入 TMP 溶液 取乳酸 TMP 溶液 5mL, 再加入万古霉素及多粘菌素 B, 摇匀后, 即成 TMP 抗生素混合液 TMP 抗生素的作用 TMP( 甲氧苄氨嘧啶, 又称磺胺增效剂或抗菌增效剂 ): 为广谱抗菌剂, 其抗菌谱与磺胺嘧啶相似, 但对链球菌及大多数革兰氏阴性菌的抗菌作用较磺胺嘧啶强, 与抗

30 生素合用有协同作用, 能增加杀菌和抑菌作用 万古霉素 : 是窄谱抗菌素, 仅对革兰氏阳性菌有较强的杀菌和抑菌作用, 如溶血性链球菌 草绿色链球菌 肠球菌 金黄色葡萄球菌等 多粘菌素 B: 仅限于对革兰氏阴性菌, 如对产气杆菌 流感杆菌 痢疾杆菌等 TMP 和抗生素称量必须正确, 操作必须慎重小心 4.55 TTC 成分胰蛋白胨 (tryptone) 17.0g 大豆胨 3.0g 葡萄糖 6.0g 2. 硫乙醇酸钠 g L- 胱氨酸 - 盐酸 (L-Cys HCl) 0.2 亚硫酸钠 0. 1% 氯化血红素溶液 0.5mL 1% 维生素 K1 溶液 0.1mL 2,3,5- 氯化三苯四氮唑 (TTC) 0.4g 制法 除 1% 氯化血红素 维生素 K1 和 TTC 外, 将其他成分混合, 加热溶解 L- 胱氨酸先用少量氢氧化钠溶解后加入, 校正 ph7.2, 然后加入预先配成的氯化血红素和维生素 K1, 充分摇匀 装瓶, 每瓶 100mL 121 高压灭菌 15min, 备用 临用前, 溶解基础, 每 100mL 基础培养基中, 加入 TTC40mg, 充分摇匀, 倾注无菌平板 说明 将可疑空肠弯曲菌接种于平板上, 在微氧环境下, 于 43 培养 48h 阳性菌落呈紫红色, 空肠弯曲菌呈阳性反应 ; 胎儿和肠道弯曲菌呈阴性反应 % 氯化血红素溶液和 1% 维生素 K1 溶液配法 : 称取氯化血红素 和 1mol/L 氢氧化钠 5mL 混合 再用稀释到 100mL, 即为 1% 氯化血红素溶液 称取维生素 K1 和纯乙醇 99mL 混合, 或用维生素 K1 针剂 4.56 甘氨酸培养基 成分布氏 (Brucella) 肉汤 1.6g 甘氨酸 (glycine)( 又称氨基乙酸 aminoacetic acid) 10.0g 制法将以上成分混合, 加热溶解, 校正 ph7.0±0.2, 分装 13mm 100mm 试管, 每支约 4mL 左右,121 高压灭菌 15min, 备用 说明空肠弯曲菌对甘氨酸有耐受性, 穿刺接种于甘氨酸培养基中 置于微需氧环境下, 在 4 3 培养 48h 在培养基表面出现云雾状现象为阳性, 胎儿弯曲菌空肠亚种为阳性结果 4.57 改良磷酸盐缓冲液

31 成分磷酸氢二钠 (Na2HPO4) 8.2 磷酸二氢钠 (NaH2PO4 H2O) 1. (NaCl) 5.0g mL 山梨醇 10.0g 胆盐 制法将磷酸盐及溶于中, 再加入山梨醇及胆盐, 溶解后, 校正 ph 为 7.6, 分装试管 于 121 高压灭菌 15min, 备用 4.58 氯化镁孔雀绿肉汤 成分 1% 胰胨水 ( 高压灭菌 ) 156mL 1/15mol/L 磷酸氢二钠 (Na2HPO4) 溶液 ( 高压灭菌 ) 40mL 40%(m/V) 氯化镁 (MgCl2 6H2O) 水溶液 (100 煮沸数分钟 ) 53mL 0.2% 孔雀绿溶液 1.6mL 制法将上述几种溶液按列出的容量混合, 即成氯化镁孔雀绿肉汤 分装试管, 每管 10mL, 于 4 可保存 10 个月 如若配氯化镁孔雀绿羧苄青霉素肉汤, 除上述几种溶液外, 再配制羧苄青霉素 (carpenicillin) 溶液 ( 溶解 1mg 于 1mL 水中 ), 将此溶液与其他溶液混合, 即成 4.59 胰酪胨大豆肉汤 成分胰酪胨 ( 或胰蛋白胨 ) 17g 植物蛋白胨 ( 或大豆蛋白胨 ) 100g 磷酸氢二钾 2. 葡萄糖 制法将上述成分混合, 加热并轻轻搅拌并溶解, 分装后,121 高压灭菌 15min, 最终 ph7.3 ± Baird-Parker 氏培养基 成分胰蛋白胨 酵母膏 丙酮酸钠 甘氨酸 1 氯化锂 (LiCl 6H2O) 950mL PH 增菌剂的配法 30% 卵黄盐水 50mL 与除菌过滤的 1% 亚碲酸钾溶液 10mL 混合, 保存于冰箱内

32 制法将各成分加到中, 加热煮沸至完全溶解 冷至 25, 校正 ph 分装每瓶 95mL, 121 高压灭菌 15min 临用时加热溶化, 冷至 50, 每 95mL 加入预热至 50 的卵黄亚碲酸钾增菌剂 5mL, 摇匀后倾注平板 培养基应是致密不透明的 使用前在冰箱储存不得超过 48h % 肉汤 成分蛋白胨 7 ph 制法将上述成分加热溶解, 校正 ph, 分装试管,121 高压灭菌 15min 匹克氏肉汤 成分含 1% 胰蛋白胨的牛心浸液 200mL 结晶紫盐水溶液 10mL 三氮化钠溶液 10mL 脱纤维兔血 ( 或羊血 ) 10mL 制法将上述已灭菌的各种成分, 用无菌手续依次混合, 分装于无菌试管内, 每管约 2mL, 保存于冰箱内备用 % 柠檬酸钠溶液 成分柠檬酸钠 3.8g 100mL 制法取柠檬酸钠 3.8g, 加到 100mL, 溶解后过滤, 装瓶,121 高压灭菌 15min 注 : 兔 ( 人 ) 血浆制备 : 取 3.8% 柠檬酸钠溶液一份加兔 ( 或人 ) 全血四份, 混好静置之, 则血球下降, 即可得血浆进行试验 4.64 甘露醇卵黄多粘菌素 成分蛋白胨 甘露醇 1 0.2% 酚红溶液 13mL 50% 卵黄液 50mL 多粘菌素 B 100 国际单位 /ml ph 制法

33 将前面五种成分加入于中, 加热溶解, 校正 ph, 加入酚红溶液 分装烧瓶, 每瓶 100mL,121 高压灭菌 15min 临用时加热溶化, 冷至 50, 每瓶加入 50% 卵黄液 5mL 及多粘菌素 B10000 国际单位, 混匀后倾注平板 4.65 酪蛋白 成分酪蛋白 磷酸氢二钠 1 0.4% 溴麝香草酚蓝溶液 12.5mL ph 制法将除指示剂外的各成分混合, 加热溶解 ( 但酪蛋白不溶解 ), 校正 ph 加入指示剂, 分装烧瓶,121 高压灭菌 15min 临用时加热溶化, 冷至 50, 倾注平板 注 : 将菌株划线接种于平板上, 如沿菌落周围有透明圈形成, 即为能水解酪蛋白 4.66 木糖 - 明胶培养基 成分胰胨 酵母膏 木糖 磷酸氢二钠 明胶 1 0.2% 酚红溶液 25mL ph 制法将除酚红以外的各成分混合, 加热溶解, 校正 ph 加入酚红溶液, 分装试管,121 高压灭菌 15min, 迅速冷却 4.67 庖肉培养基 成分牛肉浸液 蛋白胨 30g 酵母膏 磷酸二氢钠 葡萄糖 可溶性淀粉 碎肉渣适量 ph 制法 称取新鲜除脂肪和筋膜的碎牛肉 500g, 加 和 1mol/L 氢氧化钠溶液 25mL, 搅拌煮沸 15min, 充分冷却, 除去表层脂肪, 澄清, 过滤, 加水补足至 加

34 入除碎肉渣外的各种成分, 校正 ph 碎肉渣经水洗后晾至半干, 分装 15mm 150mm 试管约 2~3cm 高, 每管加入还原铁粉 0.1~0. 或铁屑少许 将上述液体培养基分装至每管内超过肉渣表面约 1cm 上面覆盖溶化的凡士林或液体石蜡 0.3~0.4cm 121 高压灭菌 15min 4.68 卵黄培养基 成分 基础培养基肉浸液 蛋白胨 1 25~30g ph % 葡萄糖水溶液 % 卵黄盐水悬液 制法制备基础培养基, 分装每瓶 100mL 121 高压灭菌 15min 临用时加热溶化, 冷至 50, 每瓶内加入 50% 葡萄糖水溶液 2mL 和 50% 卵黄盐水悬液 10~15mL, 摇匀, 倾注平板 4.69 亚硫酸盐 - 多粘菌素 - 磺胺嘧啶 (SPS) 成分胰酶消化酪蛋白胨 1 酵母膏 柠檬酸铁 % 亚硫酸钠水溶液 ( 新配 ) 5mL 0.12% 多粘菌素 B 硫酸盐水溶液 10mL 1.2% 磺胺嘧啶钠水溶液 10mL ph 制法 : 前面五种成分配合后加热溶解, 校正 ph 分装每瓶 100mL,121 高压灭菌 15min 临用时加热溶化, 冷至 50 按比例加入后 3 种溶液, 摇匀, 倾注平板 4.70 液体硫乙醇酸盐培养基 (FT) 成分胰酶消化酪蛋白胨 1 L- 胱氨酸 0. 葡萄糖 酵母膏 2. 硫乙醇酸钠 0. 刃天青 (Resazurin) ph 制法煮沸溶解, 冷却后校正 ph, 分装试管, 每管 10mL,121 高压灭菌 15min 临用前隔水

35 煮沸 10min, 以驱除培养基中溶解的氧气, 迅速冷却 4.71 含铁牛奶培养基 成分新鲜全脂牛奶 硫酸亚铁 50mL 制法将硫酸亚铁溶解于中, 不断搅拌, 缓慢地加入于 牛奶中, 混匀 分装试管, 每管 10mL,121 高压灭菌 15min 本培养基必须新鲜制备 4.72 动力 - 硝酸盐培养基 (A 法 ) 成分蛋白胨 硝酸钾 ph 制法加热溶解, 校正 ph 分装试管, 每管 10mL,121 高压灭菌 15min 4.73 动力 - 硝酸盐培养基 (B 法 ) 成分蛋白胨 硝酸钾 磷酸氢二钠 2. 半乳糖 甘油 ph 制法将以上各成分混合, 加热溶解, 校正 ph 分装试管,121 高压灭菌 15min 4.74 血清肉汤在肉浸液肉汤 (3.1) 中按 10 1 以无菌操作加马 ( 或羊 兔 ) 血清即为血清肉汤 4.75 马丁氏肉汤 成分蛋白胨液 500mL 肉浸液 500mL 冰乙酸 6g 葡萄糖 制法 将蛋白胨液 500mL 与肉浸液 500mL 混合, 加热至 80, 加冰乙酸 1mL, 摇匀, 再煮沸 5min 加 15% 氢氧化钠溶液约 20mL, 校正 ph 至 7.2

36 加乙酸钠 6g, 再校正 ph 至 继续煮沸 10min, 用滤纸过滤 在每 肉汤内, 再加葡萄糖 然后装瓶, 每瓶 500mL 放置高压灭菌器内经 121 灭菌 15min, 备用 注 : 蛋白胨液的制备 : 取新鲜猪胃, 去脂绞碎 称取 350g 加 50 左右, 充分摇匀 再加盐酸 ( 化学纯, 比重 1.19)10mL, 经充分混合后, 置 56 温箱中消化 24h( 每小时搅拌 1~2 次 ), 消化完毕后, 加热, 用滤纸过滤, 备用 4.76 明胶培养基 成分蛋白胨 明胶 制法将上述成分混合, 置流动蒸气灭菌器内, 加热溶解, 校正 ph 至 7.0~7.2, 用绒布过滤 分装试管,121 灭菌 15min, 备用 4.77 察氏培养基 成分硝酸钠 磷酸氢二钾 硫酸镁 (MgSO4 7H2O) 0. 氯化钾 0. 硫酸亚铁 0.0 蔗糖 30g 制法加热溶解, 分装后 121 灭菌 20min 用途青霉 曲霉鉴定及保存菌种用 4.78 高盐察氏培养基 成分硝酸钠 磷酸二氢钾 硫酸镁 (MgSO4 7H2O) 0. 氯化钾 0. 硫酸亚铁 g 蔗糖 30g 制法加热溶解, 分装后,115 高压灭菌 30min 必要时, 可酌量增加 用途分离霉菌用

37 4.79 马铃薯葡萄糖 (PDA) 成分马铃薯 ( 去皮切块 ) 300g 葡萄糖 制法将马铃薯去皮切块, 加, 煮沸 10~20min 用纱布过滤, 补加至 加入葡萄糖和, 加热溶化, 分装,121 高压灭菌 20min 用途分离培养霉菌 4.80 马铃薯 成分马铃薯 ( 去皮切块 ) 200g 制法同马铃薯葡萄糖 用途鉴定霉菌用 4.81 孟加拉红培养基 成分蛋白胨 葡萄糖 磷酸二氢钾 硫酸镁 (MgSO4 7H2O) 0. 1/3 000 孟加拉红溶液 100mL 氯霉素 制法上述各成分加入中溶解后, 再加孟加拉红溶液 另用少量乙醇溶解氯霉素, 加入培养基中, 分装后,121 灭菌 20min 用途分离霉菌及酵母 4.82 玉米粉 成分玉米粉 60g 15~18g 制法将玉米粉加入中, 搅匀, 文火煮沸 1h, 纱布过滤, 加后加热溶化, 补足水量至 分装,121 灭菌 20min 用途

38 鉴定假丝酵母及霉菌 4.83 大米粉培养基 制法将不含荧光物质的籼米挑去杂质和变质米粒, 磨成粗粉, 分装后 121 高压灭菌 20min 用途霉菌产毒用 4.84 亚硒酸盐煌绿增菌液 成分蛋白胨 酵母浸膏 甘露醇 牛磺胆酸钠 20% 亚硒酸氢钠溶液 20mL 0.25mol/L 磷酸盐缓冲液 (ph7.0) 100mL 2% 煌绿溶液 0.25mL 900mL 制法 将前面四种成分溶解于中 校正 ph, 当用于干鸡蛋白样品时,pH8.2±0.1; 用于其他干蛋品时,pH7.2±0. 1; 用于冰蛋品时 ph7.0±0.1;121 高压灭菌 15min, 放冷备用 临用前加入灭菌的 20% 亚硒酸氢钠溶液及磷酸盐缓冲液, 复查混合液的 ph, 必要时进行校正 加入煌绿溶液定量分装于灭菌的烧瓶内, 每瓶 150mL, 于 1~5d 内使用 注 :120% 亚硒酸氢钠溶液 121 高压灭菌 15min 20.25mol/L 磷酸盐缓冲液 (ph7.0) 配法 : 磷酸氢二钾 ( 无水 ) 21.8g 磷酸二氢钾 ( 无水 ) 高压灭菌 15min 后备用 4.85 煌绿肉汤增菌液 成分肉浸液肉汤 ( 或汤 ) 磷酸氢二钾 2% 煌绿溶液 0.5~10mL 制法 将肉浸液肉汤加入磷酸氢二钾 ( 原已有磷酸氢二钾者可不加 ), 校正 ph, 分装烧瓶, 每瓶 100mL,121 高压灭菌 20min % 煌绿水溶液于临用前配制 按比例 [ 见 GB 食品卫生微生物学检验蛋与蛋制品检验 ] 于肉汤内加入煌绿溶液, 摇匀, 备用 注 :1 加入煌绿溶液时, 肉汤温度不宜过高, 一般以放冷为宜 2 煌绿的纯度不应低于 93% % 蛋白胨水稀释剂 成分

39 蛋白胨 制法溶解蛋白胨于中, 校正 ph 至 7.0,121 灭菌 15min 4.87 肠毒素产毒培养基 成分蛋白胨 胰消化酪蛋白 200mg( 氨基酸 ) 磷酸氢二钾 磷酸二氢钾 氯化钙 0. 硫酸镁 0. 菸酸 ~1( 固体透析培养用 ) ph7.2~ 制法除外将所有成分混于水中, 溶解后调 ph7.2~7.4, 如同固体透析培养法再加入,121 高压灭菌 30min 附加说明 : 本标准由卫生部卫生监督司提出 本标准由卫生部食品卫生监督检验所负责起草 本标准主要起草人周桂莲 刘宏道 本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释 中华人民共和国卫生部 批准 实施