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认嬉荣
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1 第 35 卷第 3 期河北工业科技 Vol.35,No 年 5 月 HebeiJournalofIndustrialScienceandTechnology May2018 文章编号 : (2018) 葛根水煎剂和配方颗粒 HPLC 指纹图谱相关性研究张肖建 1, 霍保军 1, 李军山 1,2, 姜国志 1, 刘铁军 1, 李振江 1 (1. 神威药业集团有限公司, 河北石家庄 ;2. 河北省中药配方颗粒工程技术研究中心, 河北石家庄 ) 摘要 : 为了能全面准确地反映葛根配方颗粒和水煎剂成分的一致性和葛根配方颗粒替代传统饮片的可行性, 对葛根配方颗粒和水煎剂的特征图谱进行了相关性研究采用华谱 XAquaC18 (250mm 4.6mm,5μm) 色谱柱, 以甲醇 -0.1% 冰醋酸水溶液为流动相进行梯度洗脱, 检测波长为 250nm, 流速为 1.0mL/min, 柱温为 25, 采集时间为 41min, 分别建立 10 批葛根水煎剂和 10 批葛根配方颗粒的特征图谱结果表明,10 批葛根配方颗粒 HPLC 特征图谱的 8 个特征峰均可在水煎剂中得到追踪, 相似度均大于 0.99, 并从 8 个共有峰中指认出葛根素葛根水煎剂和配方颗粒的主要化学成分基本相同, 且共有成分含量比例相近, 为中药配方颗粒替代传统饮片的可行性以及临床研究提供了重要依据关键词 : 医药工程 ; 葛根 ; 水煎剂 ; 配方颗粒 ;HPLC; 指纹图谱中图分类号 :R917 文献标志码 :A doi: /hbgykj.2018yx03013 Correlationoffingerprintofpuerariaewaterdecoctionand formulagranulesbyhplc ZHANG Xiaojian 1,HUOBaojun 1,LIJunshan 1,2,JIANG Guozhi 1,LIU Tiejun 1,LIZhenjiang 1 (1.Shineway Pharmaceutical Group Limited,Shijiazhuang, Hebei051430,China;2.TCM Formula Granule Engineering TechnologyResearchCenterofHebei,Shijiazhuang,Hebei050200,China) Abstract: Inordertoexplaintheconsistencybetweenpuerariaeformulagranulesand waterdecoctionandthefeasibilityof puerariaeformulagranulereplacingtraditionaldecoction,thecorrelationoffingerprintofpuerariaewaterdecoctionandformula granulesisstudiedbyhplc.thegradientelutioniscarriedoutonaxaquac mm 4.6 mm ~5μmcolumn with methanol-0.1% glacialaceticacidsolutionasthemobilephase.thedetectionwavelengthis250nm,theflowrateis1.0 ml/ min,thecolumntemperatureis25,andthecolectiontimeis41 min.thefingerprintof10batchesofpuerariaewater decoctionand10batchesofformulagranulesareestablished.the8characteristicpeaksofthehplccharacteristicmapof10 batchespuerariaeformulagranulescanbetracedinthedecoction,andthesimilarityisgreaterthan0.99.inthe8common peaks,puerarinisverified.themainchemicalcomponentsofradixpuerariaewaterdecoctionandformulagranulesarealmost thesame.besides,thecommoncomponentcontentshavenearproportion,providinganimportantbasisforthefeasibilityand 收稿日期 : ; 修回日期 : ; 责任编辑 : 张士莹基金项目 : 国家中医药管理局中医药科学技术研究专项课题 ( 国中医药科 2013X07); 河北省科技计划项目 ( ) 第一作者简介 : 张肖建 (1986 ), 女, 河北石家庄人, 工程师, 主要从事药品质量标准方面的研究 youxiang_zxj@163.com 张肖建, 霍保军, 李军山, 等. 葛根水煎剂和配方颗粒 HPLC 指纹图谱相关性研究 [J]. 河北工业科技,2018,35(3): ZHANG Xiaojian,HUOBaojun,LIJunshan,etal.CorrelationoffingerprintofpuerariaewaterdecoctionandformulagranulesbyHPLC [J].HebeiJournalofIndustrialScienceandTechnology,2018,35(3):

2 第 3 期张肖建, 等 : 葛根水煎剂和配方颗粒 HPLC 指纹图谱相关性研究 227 clinicalstudyoftraditionalchinesemedicineformulagranulesinsteadofconventionalpieces. Keywords: pharmaceuticalengineering ;radixpuerariae;waterdecoction;formulagranules;hplc;fingerprint 葛根为豆科植物野葛 Puerarialobata(Wild.) Ohwi 的干燥根, 习称野根, 具有解肌退热生津止渴透疹升阳止泻通经活络解酒毒之功效, 临床 [1-4] 用于治疗泄泻等病症现代研究表明, 葛根的主要活性成分为葛根素大豆苷大豆苷元等异黄酮类化合物, 其中葛根素含量最高, 大豆苷及大豆苷元含 [5] 量很低, 因此葛根素是评价葛根药材及其制剂质 [6-9] 量的重要指标配方颗粒具有携带服用方便疗效确切起效迅速等优点, 受到诸多医院及药店的青睐葛根配方颗粒是以水为提取溶媒, 用其饮片作为原料, 经过 2 次提取 ( 与传统汤剂的煎煮相似, 煎煮 2 次 ) 药液浓缩使用喷雾干燥技术 ( 喷雾干燥是药液通过雾化器雾化后与热空气接触, 瞬间将水分汽化蒸发除去而形成干粉 ) 干法制粒 ( 通过挤压将粉末压成所需硬度的薄片, 破碎后过筛得到合格颗粒的方法 ) 等工序加工而成这些工序中提取浓缩过程与传统汤剂煎煮相似, 喷雾干燥过程中因只是瞬间的高温, 因而对产品的影响较小, 干法制粒对产品成分更无影响, 且葛根素热稳定性较好, 因此葛根配方颗粒与传统汤剂理论上具有一致性葛根饮片经加工制成配方颗粒后, 仅依据中华人民共和国药典对其指标成分进行含量测定是难以全面客观地进行评价的以往的研究只是单独针对葛根药材或饮片或者其制剂, 未能研究所制备的产品在其各成分上与传统汤剂的关联性为了能更全面准确地反映传统汤剂与配方颗粒之间的关联性, 本研究采用高效液相色谱法, 分别建立葛根配方颗粒和葛根水煎剂的特征图谱, 比较二者之间的差异, 为临床应用提供有力的数据支撑表 1 10 批葛根饮片来源表 Tab.1 Summaryof10batchsofradixpuerariae decoctionpieces 编号产地基源 A1 陕西丹凤 Puerarialobata (Wild.)Ohwi A2 陕西丹凤 Puerarialobata (Wild.)Ohwi A3 陕西商镇 Puerarialobata (Wild.)Ohwi A4 陕西商镇 Puerarialobata (Wild.)Ohwi A5 陕西商州 Puerarialobata (Wild.)Ohwi A6 陕西商州 Puerarialobata (Wild.)Ohwi A7 陕西商州 Puerarialobata (Wild.)Ohwi A8 陕西柞水 Puerarialobata (Wild.)Ohwi A9 陕西柞水 Puerarialobata (Wild.)Ohwi A10 陕西柞水 Puerarialobata (Wild.)Ohwi 表 2 10 批葛根配方颗粒汇总表 Tab.2 Summaryof10batchsofradixpuerariae formulagranules 编号批号 B B B B B B B B B B 主要仪器与材料 Agilent 高效液相色谱仪,AE240 电子分析天平 ( 瑞士 Metler-Toledo 有限公司提供 ) 葛根素对照品, 批号为 , 购自中国食品药品检定研究院 ;10 批葛根饮片来源见表 1( 编号为 A1 A10), 均经河北省食品药品检验所孙宝惠老师鉴定为豆科植物野葛 Pueraria lobata(wild.)ohwi 的干燥根 ; 由编号为 A1 A10 葛根饮片制备的 10 批葛根配方颗粒 ( 编号为 B1 B10) 批号见表 2; 甲醇为色谱纯, 其他试剂均为分析纯 2 实验方法 2.1 溶液制备对照品溶液的配制取葛根素对照品适量, 精确称定, 加甲醇制成 1mL 含葛根素 0.25mg 的溶液, 即得对照品溶液葛根配方颗粒供试品的制备取葛根配方颗粒 10 批, 研细, 精确称取 0.1g, 置于带塞的锥形瓶中, 精确加入甲醇 50 ml, 称重, 超声 ( 频率 40kHz, 功率 300 W) 处理 30 min, 放冷, 再称重, 用甲醇补足减失的质量, 摇匀, 过滤, 即得

3 228 河北工业科技第 35 卷葛根水煎剂供试品溶液制备取 10 批葛根饮片 100g, 一煎加入 9 倍水浸泡 30min 煎煮 20 min, 二煎加入 7 倍水煎煮 15 min 将提取液过滤浓缩干燥为膏粉, 精密称取 0.1g, 置于带塞的锥形瓶中, 精确加入甲醇 50 ml, 称重, 超声 30min, 放冷, 再称重, 用甲醇补足减失的质量, 摇匀, 滤过, 即得阴性对照溶液的制备精确称取糊精 0.1g, 置于带塞的锥形瓶中, 精确加入甲醇 50 ml, 称重, 超声 ( 频率 40kHz, 功率 300 W) 处理 30min, 放冷, 再称重, 用甲醇补足减失的质量, 摇匀, 过滤, 即得 [8-9] 2.2 色谱条件色谱柱 : 华谱 XAquaC18(250 mm 4.6 mm, 5μm) 色谱柱 ; 流动相 : 以甲醇 (A) 和 0.1%( 体积分数, 下同 ) 的冰醋酸水溶液 (B) 为流动相, 梯度洗脱条件见表 3, 流速为 1.0 ml/min, 检测波长为 250nm, 柱温为 25 表 3 梯度洗脱条件 Tab.3 Elutionconditions 流动相 A 流动相 B φ ( 甲醇 )/% φ ( 0.1% 冰醋酸水溶液 )/% [10-15] 2.3 方法学考察系统适用性及专属性试验分别取配制的对照品配方颗粒供试品水煎剂供试品和阴性样品进行检测, 考察此方法的适用性及专属性结果如图 1 所示由图 1 可以看出, 样品中各个峰分离情况及峰型都较好, 并且阴性无干扰, 表明该方法的专属性良好阴性样品 ; 对照品 ; 水煎剂 ; 配方颗粒图 1 颗粒色谱图 Fig.1 Characteristicofformulagranules 精密度试验液, 重复进样 6 次结果发现, 各主要特征峰的相对保留时间及相对峰面积的 RSD 值 (n =6) 为 0.13%~0.96%, 表明仪器的精密度良好稳定性试验液, 分别于 0,2,4,6,8,10h 时进样检测结果发现, 各主要指纹峰相对保留时间及相对峰面积的 RSD 值 (n=6) 为 0.41%~1.23%, 表明供试品溶液在 10h 以内稳定重复性试验液 6 份, 依法测定结果发现, 各主要指纹峰相对保留时间及相对峰面积的 RSD 值 (n=6) 为 0.41%~ 1.15%, 表明该方法的重复性良好 3 结果与讨论 3.1 葛根水煎剂与配方颗粒指纹图谱测定按照 2.1 所述方法制备对照品溶液葛根配方颗粒水煎剂及阴性供试品溶液, 进样 10μL, 以 2.2 所述的色谱条件进行测定, 记录 41 min 以内的色谱图参照中药注射剂指纹图谱研究的技术要求 ( 暂行 ) 建立 HPLC 指纹图谱, 结果如图 2 图 3 所示可以看出, 葛根水煎剂与配方颗粒的成分基本一致 R 0 S9 S8 S7 S6 S 图 2 10 批葛根水煎剂的 HPLC 指纹图谱 Fig.2 Fingerprintof10batchesofradixpuerariae waterdecoction 3.2 参照峰的选择与共有指纹峰的标定设定积分参数如下 : 斜率灵敏度为 5, 峰宽为 0.02, 积分起止时间 8~41 min, 最小峰的峰面积占总峰面积的比例大于 1% 通过对比葛根配方颗粒和水煎剂的指纹图谱, 选定共有的 8 个指纹峰作为

4 第 3 期张肖建, 等 : 葛根水煎剂和配方颗粒 HPLC 指纹图谱相关性研究 R 0 S9 S8 S7 S6 S 图 3 10 批葛根配方颗粒的 HPLC 指纹图谱 Fig.3 Fingerprintof10batchesofradixpuerariae formulagranules 共有峰采用 2008 版指纹图谱相似度评价系统软件进行自动匹配, 共有峰面积均大于色谱峰总面积的 90% 通过与对照品图谱比较可知, 在指纹图谱的 8 个共有峰中, 峰 3 为葛根素结果如表 4 所示表 4 Tab.4 峰号葛根水煎剂 - 配方颗粒 HPLC 指纹图谱分析结果 AnalysisresultsofHPLCfingerprintofwater decoction-formulagranules 煎剂平均相对保留时间煎剂相对峰面积 ( 均值 ±SD) 颗粒平均相对保留时间颗粒相对峰面积 ( 均值 ±SD) ± ± ± ± (S) ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± 葛根指纹图谱相似度计算采用 2008 版指纹图谱相似度评价系统软件计算相似度, 计算时以对照图谱为参照, 计算各批产品的指纹图谱与对照图谱的相似度结果见表 5 10 批配方颗粒和葛根水煎剂的相似度分别为 0.994~ 和 0.984~0.998, 表明葛根水煎剂及配方颗粒的质量控制较为稳定所标定的葛根配方颗粒 8 个共有指纹峰均可在水煎剂指纹图谱中得到追踪, 表明葛根配方颗粒与水煎剂在化学成分上具有一致性, 为中药配方颗粒替代传统饮片的可行性以及临床研究提供了重要依据本研究所建立的指纹图谱方法重复性稳定性好, 可用于生产过程的质量控制表 5 葛根水煎剂及配方颗粒的相似度数据 Tab.5 Similaritydataofradixpuerariaewater decoctionandformulagranules 水煎剂编号相似度配方颗粒编号相似度 A B A B A B A B A B A B A B A B A B A B 结语本研究比较了甲醇 -0.03% 冰醋酸水溶液甲醇 -0.1% 冰醋酸水溶液甲醇 -0.2% 冰醋酸水溶液 3 种流动相的梯度洗脱效果结果表明, 以甲醇 - 0.1% 冰醋酸水溶液进行梯度洗脱, 峰形及分离度都较好全波长扫描显示, 在 250nm 处有吸收峰, 色谱图色谱峰数量较多, 且峰形及分离度均较好柱温分别选用 25,30,35 进行进样分析, 结果显示,25 的峰形及分离度较好分别选用甲醇 30% 甲醇 95% 乙醇水对葛根配方颗粒进行超声提取, 结果显示, 甲醇提取效率最高, 色谱峰数量较多且面积较大中药材体系复杂, 通过 HPLC 法检测葛根不同极性成分, 能更全面地反映葛根中的主要成分, 准确反映传统汤剂与配方颗粒之间的关联性本文共标示了葛根水煎剂配方颗粒的 8 个主要特征峰, 相似度均在 0.98 以上, 说明葛根水煎剂配方颗粒较稳定, 且葛根水煎剂葛根配方颗粒在化学成分上具有一致性, 为配方颗粒临床替代传统饮片提供了数据支撑本次研究建立的葛根配方颗粒高效液相指纹图谱分析方法的重复性好, 分析全面, 方法简便, 能比较全面地反映葛根配方颗粒的质量, 可作为内控质量标准本次研究从葛根配方颗粒与传统汤剂各成分的关联性为出发点, 说明了葛根配方颗粒与传统汤剂在成分上具有一致性, 但单独的方剂与经典的方剂合煎其疗效是否有等效性, 需要做进一步的研究

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