中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2018Jan;34(1) 39 用 [1-3], 并且对结肠癌还具有一定的预防作用 [4] 除此之外,Tet 对乳腺癌细胞也具有抑制增殖和促进凋亡的作用, 机制可能与抑制 PKC α 和逆转耐药等有关 [5-6], 但具体

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暄坦司
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1 38 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2018Jan;34(1):38~43 网络出版时间 : :50 网络出版地址 :htp://kns.cnki.net/kcms/detail/ r html IGFBP 5 及 p53 与汉防己甲素抑制乳腺癌 MCF 7 细胞增殖的关系研究周林云 1,2, 任文艳 1,2, 廖云鹏 1,2, 王涵 1,2, 朱茄慧 1,2, 胡莹 1,2, 李福书 1,2, 周娅 1,2 1,2, 何百成 ( 重庆医科大学 1. 药理教研室 ;2. 重庆市生物化学与分子药理学重点实验室, 重庆 ) doi: /j.isn 文献标志码 :A 文章编号 : (2018) 中国图书分类号 :R284 1;R329 24;R ;R977 6 摘要 : 目的研究汉防己甲素 (tetrandrine,tet) 抑制乳腺癌 MCF 7 细胞增殖的作用及可能的分子机制方法采用 CCK 8 流式及 Westernblot 分析不同浓度 Tet 对 MCF 7 细胞增殖与凋亡的影响 ; 通过 real timepcr Westernblot 检测 Tet 对 MCF 7 细胞 IGFBP 5 表达的影响 ; 应用 CCK 8 分析 Tet 及 IGFBP 5 过表达或沉默表达对 Tet 抑制乳腺癌 MCF 7 细胞增殖作用的影响 ; 利用 Westernblot 检测 Tet 对 MCF 7 细胞 p53 表达的影响, 以及过表达 IGFBP 5 和 ( 或 )Tet 对乳腺癌 MCF 7 细胞 p53 表达的影响结果 Tet 呈浓度和时间依赖收稿日期 : , 修回日期 : 基金项目 : 国家自然科学基金资助项目 (No ) 作者简介 : 周林云 (1989-), 女, 硕士生, 研究方向 : 分子药理学,E mail: @qq.com; 何百成 (1972-), 男, 博士, 教授, 研究方向 : 分子药理学和干细胞生物学, 通讯作者,E mail:hebaicheng99@yahoo. com 性抑制 MCF 7 细胞增殖, 诱导 G 1 期阻滞, 并降低 PCNA 表达水平 ; 同时,Tet 明显增加 MCF 7 细胞凋亡比例, 升高 Bad 的蛋白水平, 降低 Bcl 2 的蛋白水平 Tet 上调 MCF 7 细胞 IG FBP 5 的表达水平, 过表达 IGFBP 5 增加 Tet 对 MCF 7 细胞的增殖抑制作用, 而沉默 IGFBP 5 则减弱 Tet 的这种作用 Tet 升高 MCF 7 细胞的 p53 蛋白水平, 降低 MDM2 的蛋白水平 ; 过表达 IGFBP 5 增强 Tet 对 p53 表达的促进和对 MDM2 表达的抑制作用结论 Tet 对 MCF 7 细胞增殖具有抑制作用, 机制可能与其上调 IGFBP 5 而增强 p53 信号的功能有关关键词 : 汉防己甲素 ; 乳腺癌 ;MCF 7; 增殖 ;IGFBP 5;p53 信号汉防己甲素 (tetrandrine,tet) 是一种双苄基异喹啉类生物碱, 主要从多年生藤本防己科植物汉防己的块根中提取 Tet 作为一种钙通道阻滞剂, 具有多种药理作用, 已在临床应用多年, 主要用于治疗矽肺自身免疫性疾病炎症性肺部疾病心血管疾病等近年来研究表明,Tet 对肝癌结肠癌前列腺癌等多种肿瘤细胞具有增殖抑制和促进凋亡的作

2 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2018Jan;34(1) 39 用 [1-3], 并且对结肠癌还具有一定的预防作用 [4] 除此之外,Tet 对乳腺癌细胞也具有抑制增殖和促进凋亡的作用, 机制可能与抑制 PKC α 和逆转耐药等有关 [5-6], 但具体分子机制仍不十分清楚胰岛素样生长因子 (insulin likegrowthfactors, IGFs) 是一类与胰岛素具有高度同源序列的蛋白, IGFs 与其受体结合后参与调节多种生理过程 IGFs 信号受到胰岛素样生长因子结合蛋白 (IGFbinding proteins,igfbps) 的调节因此, 当 IGF 信号异常时, 可使细胞的多种生物学过程发生异常, 最终导致肿瘤发生其中, 胰岛素生长因子结合蛋白 5(IG FBP 5) 表达异常与多种肿瘤有关文献报道, 乳胰癌的发生也与 IGF 信号异常有关 [7] 课题组前期研究表明,Tet 通过促进 IGFBP 5 表达抑制结肠癌细胞增殖, 但 Tet 对乳腺癌的作用是否与 IGFBP 5 有关, 目前还不清楚因此, 本研究选用人乳腺癌 MCF 7 细胞, 分析 Tet 对乳腺癌的增殖抑制作用, 并探讨 IGFBP 5 与 Tet 抑制乳腺癌细胞增殖作用的可能关系 1 材料 1.1 细胞株及细胞培养人乳腺癌 MCF 7 细胞购自 ATCC(AmericanTypeCultureColection), 用含 10% 胎牛血清,1% 双抗 (100kU L -1 青霉素和 100 mg L -1 链霉素 ) 的 DMEM 培养基 ( 高糖 ) 培养培养条件为 37 5% CO 2, 待细胞生长至对数生长期时用 0 25% 胰酶消化传代 1.2 试剂汉防己甲素购自 Sigma Aldrich 公司 ; 实验所用 IGFBP 5 p53 等一抗均购自 SantaCruzBi otechnology 公司 ;CCK 8 试剂盒购自上海七海复泰生物科技有限公司 ;AnnexinV FITC/PI 试剂盒购自南京凯基生物科技有限公司 1.3 仪器细胞培养箱 (Thermo) 酶标仪 ( 基因公司 ) 倒置显微镜 (Nikon 公司 ) 定量 PCR 仪 (Bio Rad) 流式细胞仪 (BD 公司 ) 电泳仪 ( 北京六一 ) 等 2 方法 2.1 重组腺病毒的构建采用 AdEasy 系统构建 IGFBP 5 过表达和沉默 IGFBP 5 的 sirna 片段重组腺病毒过表达 IGFBP 5(AdIGFBP 5) 及沉默 IG FBP 5(AdsiIGFBP 5) 的重组腺病毒均由美国芝加哥大学何通川教授提供仅表达绿色荧光蛋白 (green fluorescentprotein,gfp) 的重组腺病毒 (AdGFP) 用作载体对照 2.2 实验设计及分组按实验要求, 将细胞分为对照组和实验组采用二甲基亚砜 (dimethylsulphox ide,dmso) 溶解 Tet, 实验组细胞采用不同浓度 Tet 或 Tet 合并相应重组腺病进行处理, 对照组细胞则用相同体积的 DMSO 和 ( 或 )GFP 重组腺病毒进行处理 2.3 CCK 8 法检测细胞增殖将生长良好的 MCF 7 细胞消化后, 接种到 96 孔板中, 每孔 2000 个细胞待细胞贴壁后, 按实验设计加入不同浓度的 Tet( μmol L -1 ) 分别于 h 后进行检测, 每孔加入 10μLCCK 8 试剂, 放入孵箱孵育 2h 后, 用酶标仪在 450nm 处测定吸光值, 并绘制增殖曲线每组实验重复 3 次 2.4 流式细胞术检测细胞周期和凋亡将生长状态良好的 MCF 7 细胞均匀种于 6 孔板, 待细胞贴壁后, 用不同浓度的 Tet(1 2 4μmol L -1 ) 或同体积 DM SO 进行处理 48h 后收集细胞, 按试剂盒说明书进行操作, 然后上机检测进行周期分析对细胞进行凋亡分析时, 利用不含 EDTA 的胰酶消化并收集细胞, 按试剂盒操作说明进行实验, 然后通过流式细胞仪检测, 进行凋亡分析每组实验重复 3 次 2.5 总 RNA 的提取与 real timepcr 检测将生长状态良好的 MCF 7 细胞消化后, 接种到 T25 培养瓶, 等细胞贴壁后加入不同浓度的 Tet(1 2 4μmol L -1 ) 或同体积 DMSO 进行处理利用 TRIzol 法提取总 RNA, 然后通过逆转录反应制备 cdna 最后通过 real timepcr 检测目的基因 mrna 表达水平变化情况所用引物如下 :GAPDH 上游引物 5 CAAC GAATTTGGCTACAGCA 3, 下游引物 5 AGGG GAGATTCAGTGTGGTG 3 ;IGFBP 5 上游引物 5 CGTTTCAGCCCTCATTTAATTC 3, 下游引物 5 CAG TTTTCCCAGAATGAGGAAG 3 每组实验重复 3 次 2.6 Westernblot 实验将生长状态良好的 MCF 7 细胞消化后均匀种于 6 孔板, 用不同浓度 Tet(1 2 4μmol L -1 ) 或同体积 DMSO 对细胞进行处理按实验设计, 在相应时间点提取各组总蛋白, 按常规方法进行 Westernblot 实验操作最后, 采用 ECL 试剂盒对目的条带进行显影并采集图像每组实验重复 3 次 2.7 统计学分析采用 SPSS11 0 软件进行统计学分析, 实验数据以 x±s 珋表示数据用单因素分析, 利用 SNK 检验法进行组间比较 3 结果 3.1 Tet 对 MCF 7 乳腺癌细胞生长的影响 Fig 1A 结果显示, 不同浓度的 Tet( μmol L -1 ) 在体外对乳腺癌 MCF 7 细胞的增殖有明显抑制作用, 并呈现一定的时间和浓度依赖性 2μmol L -1 Tet 在 48h 时, 即可明显诱导生长抑制 Fig

40 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2018Jan;34(1) 1B 周期分析结果显示,Tet 明显增加 G 1 期细胞比例, 降低 S 期细胞比例 Fig1C 的 Westernblot 结果显示,Tet 呈浓度依赖性降低 PCNA 蛋白水平以上结果提示,Tet 对乳腺癌细胞 MCF 7 的增殖有明显抑制作用 Fig1

B:Celcycleanal ysisresultsshowedthecelcyclearestefectoftetinmcf 7cels.C: WesternblotasayresultsshowedtheefectofTetonthelevelofPCNA inmcf 7cels 3.

3 40 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2018Jan;34(1) 1B 周期分析结果显示,Tet 明显增加 G 1 期细胞比例, 降低 S 期细胞比例 Fig1C 的 Westernblot 结果显示,Tet 呈浓度依赖性降低 PCNA 蛋白水平以上结果提示,Tet 对乳腺癌细胞 MCF 7 的增殖有明显抑制作用 Fig1 EfectsofTetonproliferationofMCF 7cels A:CCK 8asayresultsshowedtheanti proliferationefectoftetin MCF 7cels( P<0 05, P<0 01vscontrol).B:Celcycleanal ysisresultsshowedthecelcyclearestefectoftetinmcf 7cels.C: WesternblotasayresultsshowedtheefectofTetonthelevelofPCNA inmcf 7cels 3.2 Tet 对 MCF 7 乳腺癌细胞凋亡的影响 Fig 2A 流式分析结果显示,Tet 呈浓度依赖性增加 MCF 7 细胞的凋亡比例 Fig2BWesternblot 结果显示,Tet 升高 Bad 的蛋白水平, 降低 Bcl 2 的蛋白水平结果表明,Tet 对乳腺癌 MCF 7 细胞的凋亡具有促进作用 3.3 Tet 对乳腺癌 MCF 7 细胞中 IGFBP 5 表达的影响 IGFs 信号异常是肿瘤发生的重要原因之一 IGFBP 5 对 IGFs 信号具有抑制作用, 但 IGFBP 5 与乳腺癌的确切关系目前尚不十分清楚因此, 本研究拟分析 Tet 抑制乳腺癌 MCF 7 细胞增殖的作用是否与 IGFBP 5 有关 Fig3Areal timepcr 分析结果显示,Tet 明显增加 IGFBP 5 的 mrna 表达水平 Fig3BWesternblot 结果也显示,Tet 可增加 IGFBP 5 的蛋白水平结果提示,Tet 抑制 MCF 7 细胞增殖的作用可能与其上调 IGFBP 5 表达有关 3.4 IGFBP 5 对 Tet 抑制 MCF 7 细胞增殖作用的影响由于 Tet 在 MCF 7 细胞中明显促进 IGFBP 5 表达, 提示 Tet 对 MCF 7 细胞的增殖抑制作用可能与 IGFBP 5 有关 Fig4CCK 8 检测结果显示, 高表达 IGFBP 5 能抑制 MCF 7 细胞增殖, 并明显增强 Tet 对该细胞增殖的抑制作用 ; 沉默 IGFBP 5 能促进 MCF 7 细胞增殖, 同时减弱 Tet 对 MCF 7 细胞的增殖抑制作用结果提示,IGFBP 5 与 Tet 抑制 MCF 7 细胞增殖有关, 但具体分子机制尚不清楚 3.5 IGFBP 5 在 MCF 7 细胞中对 p53 信号的影响 p53 作为重要的肿瘤抑制因子, 是抗肿瘤药物的重要靶点之一因此,Tet 对 MCF 7 细胞的增殖抑制作用可能也与 p53 有关 Westernblot 分析结果显示,Tet 明显增加 p53 的蛋白水平, 同时降低 MDM2 的水平 (Fig5A) 提示 Tet 抑制 MCF 7 细胞增殖可能与增加 p53 信号的功能有关, 但 Tet 调节 p53 的机制尚不清楚进一步分析结果表明, 高表达 IGFBP 5 能增强 Tet 对 p53 表达的促进和对 MDM2 表达的抑制作用 (Fig5B) 以上实验结果提示,Tet 对 MCF 7 细胞的增殖抑制作用可能与其上调 IGFBP 5 表达, 进而增强 p53 信号的功能有关 4 讨论乳腺癌是最常见的侵袭性肿瘤之一, 严重威胁女性健康乳腺癌的治疗包括手术放疗化疗靶向治疗等近年来, 乳腺癌的发生呈上升趋势, 但随着早期筛查和诊断技术的发展, 乳腺癌的治愈率有较大的提高尽管如此, 乳腺癌的预后仍不乐观, 如何有效改善乳腺癌的预后仍面临巨大的挑战 [8] 天然药物在肿瘤治疗的过程中发挥着重要作用, 越来越多从天然药物来源的单体化合物被证明具有较

中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2018Jan;34(1) 41 Fig2 EfectsofTetonapoptosisinMCF

B:WesternblotasayresultsshowedtheefectofTetonthe levelofbadandbcl 2inMCF 7cels.

8asayresultsshowedtheefectofover expresionorknock downigfbp 5onTet

presionofigfbp 5inMCF 7cels( P<0 05, P<0 01vscon trol).

4 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2018Jan;34(1) 41 Fig2 EfectsofTetonapoptosisinMCF 7cels A:FlowcytometricanalysisresultsshowedtheefectofTetonapoptosisinMCF 7cels.B:WesternblotasayresultsshowedtheefectofTetonthe levelofbadandbcl 2inMCF 7cels. Fig4 EfectsofIGFBP 5ontheanti proliferation efectoftetinmcf 7cels CCK 8asayresultsshowedtheefectofover expresionorknock downigfbp 5onTet inducedproliferationinhibitionefectinmcf 7 cels( P<0 05, P<0 01vscontrol; # P<0 05, ## P<0.01vs grouptreatedwithtetalone). Fig3 EfectsofTetonIGFBP 5inMCF 7cels A:Real timepcrasayresultsshowedtheefectoftetontheex presionofigfbp 5inMCF 7cels( P<0 05, P<0 01vscon trol).b:westernblotasayresultsshowedtheefectoftetonthelevel ofigfbp 5inMCF 7cels. 好的抗肿瘤作用本研究发现,Tet 能明显抑制乳腺癌 MCF 7 细胞增殖, 这种作用可能与 Tet 通过促进 IGFBP 5 表达而增强 p53 信号的功能有关 Tet 是从防己科植物粉防己干燥根中提取的一种二苄基异喹啉类生物碱 Tet 因具有多种药理作用, 在临床上可用于关节炎神经痛消化系统疾病的治疗 [9] 研究表明,Tet 还具有抗肿瘤作用, 对多

42 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2018Jan;34(1) Fig5 EfectsofTetand/orIGFBP 5onp53 andmdm2inmcf 7cels A:WesternblotasayresultsshowedtheefectofTetonthelevelof p53andmdm2inmcf 7cels.

种肿瘤细胞具有明显增殖抑制和促进凋亡作用, 如结肠癌肝癌等 [1-3] 本研究结果也显示,Tet 对乳腺癌 MCF 7 细胞的增殖具有明显抑制作用, 并能诱导其凋亡因此,Tet 可能对乳腺癌具有潜在的治疗效果研究表明,Tet 抗肿瘤作用的机制可能与抑制 Wnt/β catenin 信号或促进 p53 表达等有关 [2,10] 但到目前为止,Tet 抗肿瘤作用的确切机制仍不十分清楚 IGFs

5 42 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2018Jan;34(1) Fig5 EfectsofTetand/orIGFBP 5onp53 andmdm2inmcf 7cels A:WesternblotasayresultsshowedtheefectofTetonthelevelof p53andmdm2inmcf 7cels.B:Westernblotasayresultsshowedthe efectoftetand/orover expresionofigfbp 5onthelevelofp53and MDM2inMCF 7cels. 种肿瘤细胞具有明显增殖抑制和促进凋亡作用, 如结肠癌肝癌等 [1-3] 本研究结果也显示,Tet 对乳腺癌 MCF 7 细胞的增殖具有明显抑制作用, 并能诱导其凋亡因此,Tet 可能对乳腺癌具有潜在的治疗效果研究表明,Tet 抗肿瘤作用的机制可能与抑制 Wnt/β catenin 信号或促进 p53 表达等有关 [2,10] 但到目前为止,Tet 抗肿瘤作用的确切机制仍不十分清楚 IGFs 信号对细胞增殖分化和凋亡具有重要调节作用因此,IGFs 信号与胚胎及个体发育, 以及肿瘤发生过程密切相关该信号主要包括 2 种多肽生长因子配体 (IGF 1 和 IGF 2), 与 IGFs 结合的 2 种受体 (IGF 1 受体和 IGF 2 受体 ),7 种能与 IGFs 结合的蛋白 (IGFBP1 7), 以及一系列参与降解 IG FBPs 的蛋白酶, 该信号异常与多种肿瘤密切相关 [11] IGFBP 5 作为一种 IGFs 结合蛋白, 对 IGF 信号具有调控作用研究表明,IGFBP 5 表达异常与多种肿瘤的发生有关, 如骨肉瘤肝癌乳腺癌等 [12-13] IGFBP 5 对部分肿瘤细胞生长具有抑制作用, 但对另外的一些肿瘤细胞生长具有促进作用因此,IGFBP 5 对肿瘤细胞生长的影响具有双向作用, 原因可能与肿瘤细胞的微环境细胞种类以及 IGFBP 5 各结构域的功能状态有关 [14] 本研究发现,Tet 能抑制乳腺癌 MCF 7 细胞增殖, 同时上调 IGFBP 5 表达 ; 高表达 IGFBP 5 增强 Tet 对 MCF 7 细胞增殖的抑制作用, 而沉默 IGFBP 5 则减弱 Tet 对 MCF 7 细胞增殖的抑制作用提示 Tet 对 MCF 7 细胞的增殖抑制作用可能与上凋 IGFBP 5 表达有关, 但具体机制尚不清楚作为一种重要的肿瘤抑制因子,p53 突变或表达异常与多种肿瘤的发生有关对于 p53 水平较低的乳腺癌, 可通过促进 p53 表达或抑制其降解, 从而增强 p53 信号的功能而抑制肿瘤生长文献报道, LQFM064 能通过 p53 途径抑制 MCF 7 细胞增殖 [15] 因此,p53 可作为治疗某些类型乳腺癌的靶点 Tet 对 MCF 7 乳腺癌细胞具有明显增殖抑制作用, 而这种作用与上调 IGFBP 5 有关提示, 在 MCF 7 细胞中 IGFBP 5 表达水平增加可能与 p53 有关本研究结果显示,Tet 在 MCF 7 细胞中明显增加 p53 蛋白水平, 降低 MDM2 的蛋白水平 ; 高表达 IGFBP 5 增加 p53 水平, 降低 MDM2 的水平 ; 高表达 IGFBP 5 合并 Tet 则明显增加 Tet 对 p53 表达的促进和对 MDM2 表达的抑制作用以上结果表明,IG FBP 5 对 MCF 7 细胞增殖的抑制作用可能与其上调 p53 表达有关综上所述, 本研究表明 Tet 能抑制乳腺癌 MCF 7 细胞增殖, 这种作用可能与 Tet 通过上调 IGFBP 5 表达, 进而增强 p53 信号的功能有关但 Tet 调节 IGFBP 5 表达及 IGFBP 5 调节 p53 的机制尚需进一步深入研究参考文献 : [1] LanJ,WangN,LouH,etal.Designandsynthesisofnoveltet randrinederivativesaspotentialanti tumoragentsagainsthuman hepatocelularcarcinoma[j].eurjmedchem,2017,127: [2] HeBC,GaoJL,ZhangBQ,etal.TetrandrineinhibitsWnt/β cateninsignalingandsuppresestumorgrowthofhumancolorectal cancer[j].molpharmacol,2011,79(2): [3] 任文艳, 陈前昭, 周林云, 等. 汉防已甲素抑制人结肠癌细胞增

6 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2018Jan;34(1) 43 殖与 TGF 1 的关联机制研究 [J]. 中国药理学通报,2017,33 (9): [3] RenW Y,ChenQZ,ZhouLY,etal.Studyontherelationship betweentheanti proliferationefectoftetrandrineandtgf β1in humancoloncancercels[j].chinpharmacolbul,2017,33 (9): [4] 王东旭, 袁霜雪, 伍秋香, 等. 胰岛素样生长因子结合蛋白 5 与汉防己甲素抑制人结肠癌细胞增殖的关系研究 [J]. 中国药理学通报,2015,31(10): [4] WangDX,YuanSX,WuQX,etal.Studyontherelationship betweeninsulin likegrowthfactorbindingprotein5andtheanti proliferationefectoftetrandrineinhumancoloncancercels[j]. ChinPharmacolBul,2015,31(10): [5] WongVKW,ZengW,ChenJ,etal.Tetrandrine,anactivator ofautophagy,inducesautophagicceldeathviapkc αinhibition andmtor dependentmechanisms[j].frontpharmacol,2017, 8:351. [6] CaoX,LuoJ,GongT,etal.Coencapsulateddoxorubicinand bromotetrandrinelipidnanoemulsionsinreversingmultidrugresist anceinbreastcancerinvitroandinvivo[j].molpharm,2015, 12(1): [7] McKeownBT,HurtaRA.MagnololafectsexpresionofIGF 1 andasociatedbindingproteinsinhumanprostatecancercelsin vitro[j].anticancerres,2014,34(11): [8] RubovszkyG,HorváthZ.Recentadvancesintheneoadjuvant treatmentofbreastcancer[j].jbreastcancer,2017,20(2): [9] BhagyaN,ChandrashekarKR.Tetrandrine amoleculeofwide bioactivity[j].phytochemistry,2016,125:5-13 [10]MengLH,ZhangH,HaywardL,etal.Tetrandrineinducesearly G1arestinhumancoloncarcinomacelsbydown regulatingthe activityandinducingthedegradationofg1 S specificcyclin de pendentkinasesandbyinducingp53andp21cip1[j].cancer Res,2004,64(24): [11] KasprzakA,KwasniewskiW,AdamekA,etal.Insulin like growthfactor(igf)axisincancerogenesis[j].mutatres,2017, 772: [12]SuY,WagnerER,LuoQ,etal.Insulin likegrowthfactorbind ingprotein5suppresestumorgrowthandmetastasisofhumanos teosarcoma[j].oncogene,2011,30(37): [13] GhousainiM,EdwardsSL,MichailidouK,etal.Evidencethat breastcancerriskatthe2q35locusismediatedthroughigfbp5 regulation[j].natcommun,2014,4:4999. [14] LutherGA,LamplotJ,ChenX,etal.IGFBP5domainsexert distinctinhibitoryefectsonthetumorigenicityandmetastasisof humanosteosarcoma[j].cancerlet,2013,336(1): [15]CabralBLS,daSilvaACG,de?vilaRI,etal.Anovelchal conederivative,lqfm064,inducesbreastcancercelsdeathvia p53,p21,kitandpdgfra[j].eurjpharmsci,2017,107:1-15. StudyonrelationshipbetweenIGFBP 5/p53axisandanti proliferation efectoftetrandrineinmcf 7cels ZHOULin yun 1,2,RENWen yan 1,2,LIAOYun peng 1,2,WANGHan 1,2, ZHUJia hui 1,2,HUYing 1,2,LIFu shu 1,2,ZHOUYa 1,2,HEBai cheng 1,2 (1.DeptofPharmacology,SchoolofPharmacy,ChongqingMedicalUniversity,Chongqing ,China; 2.ChongqingKeyLabofBiochemistryandMolecularPharmacology,Chongqing ,China) Abstract:Aim Tostudytheefectoftetrandrine (Tet)onproliferationofMCF 7breastcancercels andtheposiblemechanism underlyingthisbiological proces. Methods CCK 8, flow cytometric and Westernblotwereintroducedtoanalyzetheefectof TetonproliferationandapoptosisinMCF 7cels.Re al timepcrand/orwesternblotasaywereemployed todetecttheefectoftetonexpresionofigfbp 5, p53andmdm2.cck 8andrecombinantadenovirus wereutilizedtodeterminetheefectofigfbp 5onthe proliferationinhibitoryefectoftet.westernblotasay wasintroducedtoevaluatetheefectofigfbp 5on p53whichwasinducedbytet.results Tetinhibited theproliferation,arestedcelcycleatg 1 phaseand decreasedtheexpresionofpcna concentrationde pendentlyinmcf 7cels.Meanwhile,Tetincreased thepercentageofapoptoticcels,thelevelofbadand reducedthelevelofbcl 2.Tetincreasedtheexpres sionofigfbp 5eithermRNAorprotein,over expres sionofigfbp 5enhancedtheanti proliferationactivity oftetinmcf 7cels,butknockdownofIGFBP 5at tenuatedthisefectoftet.tetincreasedthelevelof p53anddecreasedthatofmdm2,andexogenousig FBP 5enhancedtheefectofTetonp53andMDM2, respectively.conclusion Tetcaninhibittheprolifer ationofmcf 7cels,andthisactivityispartlymedia tedbyincreasingthefunctionofp53signal,whichmay betriggeredbythetet inducedigfbp 5. Keywords:tetrandrine;breastcancer;MCF 7;anti proliferation;igfbp 5;p53

2017-9中国药理学通报封面

2017-9中国药理学通报封面中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2017Sep;33(9):1227~34 1227 网络出版时间 :2017-8-2016:47 网络出版地址 :htp://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1086.r.20170820.1647.020.html 汉防已甲素抑制人结肠癌细胞增殖与 TGF β1 的关联机制研究任文艳 1,2,