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1 中国肿瘤临床 216 年第 43 卷第 16 期 Chin J Clin Oncol 216. Vol. 43. No 基础研究 mir-497 靶向 Bcl-2 调控肝癌细胞增殖及凋亡的研究 张猛张全谭雨莎 摘要目的 : 探讨 mir-497 靶向 Bcl-2 对肝癌细胞增殖 凋亡的调控作用 方法 : 选取肝癌组织及相应远癌正常组织, 分别采用逆转录 PCR(reverse transcriptton PCR,RT-PCR) Western blot 检测组织中 mir-497 及 Bcl-2 蛋白表达 ; 选取肝癌细胞系 HepG2, 分别转染 mir-497 mimics 及对照寡核苷酸, 采用 RT-PCR Western blot 检测组织中 mir-497 及 Bcl-2 蛋白表达, 采用 MTT 法检测各组细胞增殖活性, 采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡, 采用双荧光素酶报告基因检测细胞荧光酶活性 结果 :1) 与远癌正常组织相比, 肝癌组织中 mir-497 表达明显降低 (P<.5),Bcl-2 蛋白表达明显增高 (P<.5);2) 与转染对照寡核苷酸相比, 转染 mir-497 可使 HepG2 中 mir-497 表达增高 (P<.5),Bcl-2 蛋白表达降低 (P<.5);3) 与转染对照寡核苷酸相比, 共转染 mir-497 与 Bcl- 2-WT 可使 HepG2 荧光素酶活性降低 (P<.5);4) 转染 mir-497 后,HepG2 增殖活性较转染对照寡核苷酸明显降低 (P<.5), 而转染 mir-497+bcl-2 后,HepG2 增殖活性较单纯转染 mir-497 明显提高 (P<.5);5) 转染 mir-497 后,HepG2 总凋亡比例较转染对照寡核苷酸明显增高 (P<.5); 而转染 mir-497+bcl-2 后,HepG2 总凋亡比例较单纯转染 mir-497 明显降低 (P<.5) 结论: mir-497 可通过靶向 Bcl-2 抑制肝癌细胞增殖同时促进细胞凋亡 关键词 mir-497 Bcl-2 肝癌细胞增殖细胞凋亡 doi:1.3969/j.issn mir-497 regulates cell proliferation and apoptosis by targeting Bcl-2 in liver cancer cells Meng ZHANG, Quan ZHANG, Yusha TAN Correspondence to: Quan ZHANG; soulsinger@126.com Department of Hepatobiliary Surgery of Affiliated Hospital of Hebei University, Baoding 71, China Abstract Objective: To evaluate the effect of mir-497 on regulating cell proliferation and apoptosis by targeting Bcl-2 in liver cancer cells. Methods: We tested liver cancer tissue and para-carcinoma tissue and used RT-PCR or Western blot to detect the expression of mir-497and Bcl-2 protein. We also tested the liver cancer cell HepG2 transfected with mir-497 mimics and mimic control. The expressions of mir-497and Bcl-2 protein were detected by RT-PCR or Western blot. Cell proliferation activity was detected by the MTT method, cell apoptosis was detected by flow cytometry, and cell luciferase activity was detected by the dual-luciferase reporter gene experiment. Results: 1) Compared with para-carcinoma tissue, the mir-497 expression of liver cancer tissue significantly decreased (P<.5), whereas the Bcl-2 protein expression of liver cancer tissue significantly increased (P<.5). 2) Compared with transfection mimic control, transfection mir-497 mimics could increase the mir-497 expression of liver cancer cell HepG2 (P<.5) and decrease the Bcl-2 protein expression of liver cancer cell HepG2 (P<.5). 3) Compared with transfection mimic control, co-transfection with mir-497 mimics and Bcl-2-WT could significantly decrease the luciferase activity of liver cancer cell HepG2 (P<.5). 4) Compared with transfection mimic control, the proliferative activity of liver cancer cell HepG2 significantly decreased after transfection with mir-497 mimics (P<.5). Compared with transfection mir-497 mimics, the proliferative activity of liver cancer cell HepG2 significantly increased after transfection with mir-497 mimics+bcl-2 (P<.5). 5) Compared with transfection mimic control, the total apoptosis rate of liver cancer cell HepG2 significantly increased after transfection with mir-497 mimics (P<.5). Compared with transfection mir-497 mimics, the total apoptosis rate of liver cancer cell HepG2 significantly decreased after transfection with mir-497 mimics+bcl-2 (P<.5). Conclusion: In liver cancer cells, mir-497 could target Bcl-2 to inhibit cell proliferation and enhance cell apoptosis. Keywords: mir-497, Bcl-2, liver cancer, cell proliferation, cell apoptosis [1] 肝癌是临床常见恶性肿瘤, 致死率较高 由于 [2-3] 难以早期发现, 故仅有少部分患者可行手术治疗 放化疗是晚期肝癌常用的辅助治疗手段, 但不良反应较大, 且无法获得长期生存 因此, 寻求更安全 高效的治疗方案是临床亟待解决的问题 微小 RNA (mirna) 属于内源性非编码小分子 RNA, 其可通过 5'- 种子区与调控一个或多个靶基因 mrna 的 3'- 非翻译区 (3'-untranslated region,3'-utr) 碱基互补配对, 从而调控靶基因表达, 进而起到类似抑癌或促癌 [4] 基因的作用 mir-497 定位于人类 17p13.1, 是近年 作者单位 : 河北大学附属医院肝胆外科 ( 河北省保定市 71) 通信作者 : 张全 soulsinger@126.com

2 698 中国肿瘤临床 216 年第 43 卷第 16 期 Chin J Clin Oncol 216. Vol. 43. No.16 来研究较广泛的 mirna [5] 有研究证实,miR-497 可能在肝癌进程中起到类似抑癌基因的作用, 而靶向 Bcl-w 可能是其调控肝癌细胞增殖活性的主要机 [6] 制 但 mir-497 是否还可通过靶向其他下游靶基因参与肝癌的发生发展仍不明确 本研究通过检测 mir-497 及其下游潜在靶点 Bcl-2 在肝癌组织及肝癌细胞系 HepG2 中的表达, 分析 mir-497 靶向 Bcl-2 对肝癌细胞增殖及凋亡的调控作用及分子机制, 旨在为肝癌的临床治疗提供新思路 1 材料与方法 1.1 材料 试剂 RNA 提取试剂盒 PCR 试剂盒 质粒提取试剂盒 Lipofectamine TM 2 转染试剂盒 反转录试剂盒 ( 均购于美国 ABI 公司 );mir-497 mimics 对照寡核苷酸 Bcl-2 3'-UTR 质粒 ( 均购于美国 Invitro gen 公司 );MTT 链霉素 青霉素 ( 均购于美国 Sigma 公司 ); 相关抗体 ( 购于大连 Santa Cruz 公司 );ECL 化学发光试剂盒 BCA 蛋白浓度测定试剂盒 ( 购于上海碧云天生物技术有限公司 );mir-497 U6 引物 ( 由上海生工生物工程有限公司合成 ); 无水乙醇等试剂均为国产分析纯 细胞及标本肝癌细胞系 HepG2( 购于美国 ATCC 细胞库 ); 选取河北大学附属医院 5 例肝癌组织及远癌正常组织, 均为手术切除的新鲜样本, 并经病理学检测证实为原发性肝细胞癌, 所有患者术前均未接受过化疗 本研究获得患者知情同意且得到医院伦理委员会批准 1.2 方法 细胞培养常规复苏 HepG2, 用 DMEM 培养液 (1% 胎牛血清 +1% 双抗 ) 重悬浮细胞, 并置于恒温培养箱 (37 5% CO 2) 中培养, 每天换液 1 次, 收集对数生长期细胞, 提取细胞总 RNA 及总蛋白待后续实验 细胞转染用 DMEM 培养液 (1% 胎牛血清 +1% 双抗 ) 将上述对数生长期的 HepG2 细胞密度调节至 cells/well, 并接种于 6 孔板中,1 ml/ 孔, 将细胞置于恒温培养箱 (37 5% CO 2) 中培养 24 h; 将细胞随机分为对照寡核苷酸组 mir-497 mimics 组及 mir-497 mimics+bcl-2 组, 利用 Lipofectamine TM 2 分别转染 mir-497 mimics(5 nmol/l) 对照寡核苷酸 (5 nmol/l) 及 Bcl-2 表达质粒 (5 nmol/l); 转染后将细胞置于恒温培养箱 (37 5% CO 2) 中继续培养 48 h; 常规收集细胞总 RNA 及总蛋白待后续实验 双荧光素酶报告基因检测分别构建含有野生型 Bcl-2 3'-UTR 序列的荧光素酶报告基因质粒 (Bcl-2-WT) 和含有突变型 Bcl-2 3'-UTR 序列的荧光 素酶报告基因质粒 (Bcl-2-Mut) 收集对数生长期的 HepG2, 调节细胞密度至 cells/well, 并接种于 24 孔板中, 将 Bcl- 2-WT 质粒 Bcl- 2-Mut 质粒与 mir-497 mimics 或对照寡核苷酸共转染至 HepG2, 每组设 3 个复孔, 将细胞置于置于恒温培养箱 (37 5% CO 2) 中继续培养 48 h; 以海肾质粒荧光值作为内参, 检测各组细胞荧光素酶活性 MTT 法检测细胞增殖转染结束后将细胞置于恒温培养箱 (37 5% CO 2) 中继续培养 4 h, 培养结束后,8 r/min 离心 1 min, 弃上清每孔加入 MTT 溶液 (5 mg/ml)2 μl, 继续置于恒温培养箱 (37 5%CO 2) 培养 4 h, 后吸弃孔内培养上清液, 加入 DMSO (1 μl/ 孔 ), 振荡 1 min, 使结晶物充分溶解, 采用全自动酶标仪测测 OD 49nm 吸光值 流式细胞仪检测细胞凋亡转染结束后将细胞置于恒温培养箱 (37 5% CO 2) 中继续培养 48 h, 采用凋亡试剂盒 (Annexin-V/PI) 进行避光染色,1 h 后上流式细胞仪检测细胞凋亡情况 细胞总凋亡 = 早期凋亡细胞 (Annexin-V+/PI-)+ 晚期凋亡细胞 (An nexin-v+/pi+) 实时定量荧光 (Real-time PCR) 检测 mir-497 表达收集 HepG2 肝癌组织标本及远癌正常组织样本, 参照 Trizol 试剂盒说明书提取细胞或组织中的总 RNA, 利用反转录试剂盒逆转录总 RNA 至 cdna, 取逆转录产物加入 SYBR Green 法行 RT-PCR, 以 U6 为内参, 引物序列见表 1 表 1 引物序列 Table 1 Primer sequence Primers Sequence (5'-3') mir-497 Reverse primer: ACACTCCAGCTGGGCAGCACACTGTG Forward primer: CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCG U6 Reverse prime: CTCGCTTCGGCAGCACA Forward primer: AACGCTTCACGAATTTGCGT Western blot 法检测 Bcl-2 蛋白表达 常规提 取细胞 / 组织蛋白,BCA 蛋白定量试剂盒检测样品蛋 白浓度, 取适量样品行 SDS-PAGE 凝胶电泳, 转至硝 酸纤维膜,5% 封闭液 4 封闭 4 h, 后依次加入一抗 (1: 2 ) 二抗 (1: 5) 孵育, 按 ECL 试剂盒说明书 行电化学发光检测 1.3 统计学分析 采用 SPSS 2. 软件进行统计学分析, 计量资料 用 x±s 表示, 多组间比较用单因素方差检验, 两组间 比较采用 t 检验 以 P<.5 为差异具有统计学意义 2 结果 2.1 肝癌组织及远癌正常组织中 mir-497 Bcl-2 表

3 中国肿瘤临床 216 年第 43 卷第 16 期 Chin J Clin Oncol 216. Vol. 43. No 达及相关性分析 RT-PCR 检测结果显示, 肝癌组织中 mir-497 表达显著低于远癌正常组织 (P<.5, 图 1) Western blot 检测结果显示, 肝癌组织中 Bcl-2 蛋白表达显著高于远癌正常组织 (P<.5, 图 2) Pearson 相关性分析结果显示, 肝癌组织中 mir-497 与 Bcl-2 蛋白表达呈负相关 (r=-.315,p=.18) mir-497 relative expression x±s, n=5, P<.1 vs. para-carcinoma tissue 图 1 肝癌组织及远癌正常组织中 mir-497 表达 Figure 1 Expression of mir-497 in liver carcinoma tissue and para-carcinoma tissue Bcl-2 β-actin 1 Bcl-2 relative expression x±s, n=5, P<.1 vs. para-carcinoma tissue 图 2 肝癌组织及远癌正常组织中 Bcl-2 蛋白表达 Figure 2 Protein expression of Bcl-2 in liver carcinoma tissue and paracarcinoma tissue 2.2 转染 mir- 497 mimics 对 HepG2 中 mir- 497 Bcl-2 表达的影响逆转录 PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR) 检测结果显示, 与转染对照寡核苷酸相比较, 转染 mir- 497 mimics 可使 HepG2 中 mir- 497 表达增高 (P<.5, 图 3) Western blot 检测结果显示, 与转染对照寡核苷酸相比较, 转染 mir-497 mimics 可使 HepG2 中 Bcl-2 表达降低 (P<.5, 图 4) mir-497 relative expression x±s, n=3, P<.1 vs. control mimics 图 3 转染 mir-497mimics 对 HepG2 中 mir-497 表达的影响 Figure 3 Expression of mir-497 in HepG2 after transfection with mir- 497 mimics 5 Bcl-2 relative expression Bcl-2 β-actin x±s, n=3, P<.1 vs. control mimics 图 4 转染 mir-497mimics 对 HepG2 中 Bcl-2 蛋白表达的影响 Figure 4 Protein expression of Bcl- 2 in HepG2 after transfection with mir-497 mimics 2.3 mir-497 对 Bcl-2 3'-UTR 的靶向作用双荧光素酶活性实验结果显示, 共转染 mir- 497 mimics 与 Bcl-2 3'-UTR 野生质粒后,HepG2 荧光素酶活性较转染 control mirna 组显著降低 (P<.5); 共转染 mir-497mimics 与 Bcl-2 3'-UTR 突变质粒后,HepG2 荧光素酶活性无显著性差异 (P>.5) ( 图 5)

4 7 中国肿瘤临床 216 年第 43 卷第 16 期 Chin J Clin Oncol 216. Vol. 43. No.16 ADm fluorescence activity x±s, n=3, P<.1 vs. mimic control 图 5 HepG2 中 mir-497 与 Bcl-2 3'-UTR 结合情况 Figure 5 Combination condition of mir-497 and Bcl-2 3 -UTR in HepG2 2.4 转染 mir-497 mimics Bcl-2 对 HepG2 增殖活性的影响 MTT 法检测结果显示, 转染 mir-497 mimics 后 h 后 HepG2 增殖活性较转染对照寡核苷酸显著降低 (P<.5); 而共转染 mir-497 mimics Bcl-2 后,HepG2 增殖活性较单纯转染 mir-497 mimics 显著提高 (P<.5), 但仍显著低于转染对照寡核苷酸组 (P<.5)( 图 6) 2.5 转染 mir-497 mimics Bcl-2 对 HepG2 凋亡的影响转染 mir-497 mimics 后 HepG2 早期凋亡细胞比例 晚期凋亡细胞比较及总凋亡细胞比例均显著高于转染对照寡核苷酸 (P<.5) 而共转染 mir- 497 mimics+bcl-2 后,HepG2 早期凋亡细胞比例 晚期凋亡细胞比较及总凋亡细胞比例较单纯转染 mir- 497 mimics 均显著降低 (P<.5), 但仍显著高于转染对照寡核苷酸组 (P<.5)( 表 2) OD 49nm Bcl-2-WT BCL-2-WUT 2. Control mimics mir-497 mimics mir-497 mimics+bcl *# *# *#.5 * * * 24 h 48 h 72 h x±s, n=3, *P<.1 vs. control mimics group, # P<.5 vs. mir-497 mimics group 图 6 转染 mir-497 Bcl-2 对 HepG2 增殖活性的影响 Figure 6 Effect of transfection mir-497 and Bcl-2 on the proliferation of HepG2 表 2 转染 mir-497 Bcl-2 对细胞凋亡的影响 (%) Table 2 Effect of transfection mir-497 and Bcl-2 on cell apoptosis (%) Group Early apoptosis Late apoptosis Total apoptosis Control mimics 3.21± ± ±1.45 mir-497 mimics 9.85±2.1* 13.57±1.28* 22.42±1.63* mir-497 mimics+bcl ±1.87* # 1.12±1.4* # 16.46±1.52* # *P<.1 vs. mimic control, # P<.5 vs. mir-497 mimics 3 讨论 mirna 属于高度保守的非编码小分子单链 RNA, 并广泛存在于真核生物中 正常生理状态下, 机体内 mirna 表达遵守严格的组织 时序特异性 ; 但 在肿瘤环境下, 不同 mirna 则表现出不同的生物学 活性, 并起到类似癌基因或抑癌基因的作用 [7] mir-497 在多种恶性肿瘤中均表达缺失或下调, 如 [8] [9] [1] [11] [12] 结肠癌 胃癌 宫颈癌 骨肉瘤及脑胶质瘤 等, 而过表达 mir-497 则可使上述恶性肿瘤细胞增殖 能力得到抑制, 提示 mir-497 在恶性肿瘤发生与发展 过程中发挥着抑癌基因的功能 本研究结果显示, 肝癌组织中 mir-497 表达显著低于远癌正常组织 [13] (P<.5), 与丁文周等研究结果一致 ; 而转染 mir- 497 mimics 可使肝癌细胞 HepG2 中 mir-497 表达上 调, 同时明显抑制肝癌细胞 HepG2 增殖活性, 提示 mir-497 在肝癌中同样起着类似抑癌基因的作用 原癌基因 Bcl-2 定位于 18q21, 长约 23 kb, 含 2 个内含子和 3 个外显子, 主要存在于细胞核膜 线粒 体及内质网膜中 Bcl-2 可通过调节胞内 Ca2 + 浓度 与 bax 结合形成异构二聚体 活化 R-ras 信号通路等 多种途径发挥抑凋亡作用, 从而参与恶性肿瘤细胞 的生长与演变 研究证实,Bcl-2 在宫颈癌 [14] 乳腺 [15] 癌等恶性肿瘤组织中高表达, 且其高表达水平与 肿瘤分化程度 淋巴转移及临床预后密切相关 本 研究结果显示, 肝癌组织中 Bcl-2 蛋白表达显著高于 远癌正常组织 (P<.5); 转染 mir-497 mimics 可使 HepG2 中 Bcl-2 蛋白表达降低,Pearson 相关性分析结 果进一步提示 HepG2 中 mir-497 表达与 Bcl-2 表达 呈负相关 (P<.5), 而这种相关性很可能是由 mir- 497 负向调控 Bcl-2 表达所致 双荧光素酶活性检测 显示,miR-497 可与 Bcl-2 3'-UTR 特异性结合, 从而 降低细胞荧光酶活性, 进一步印证上述研究提出的 mir-497 靶向 Bcl-2 的观点 细胞增殖活性检测及凋亡测定结果显示, 转染 mir-497 可使 HepG2 增殖活性降低 细胞凋亡比例增 加, 而共转染 mir-497 及 Bcl-2 则可实现 mir-497 对 HepG2 增殖抑制作用及凋亡促进作用的部分逆转, 提 示 mir-497 可通过靶向 Bcl-2 调控 HepG2 增殖及凋 亡 但值得注意的是, 转染 Bcl-2 无法完全逆转 mir- 497 对 HepG2 增殖及凋亡的调控作用 其原因可能 与 mir-497 靶向基因众多有关, 目前已知的 mir-497 下游靶基因包括 CCNEl Bcl-w 等, 由于 mir-497 可能 通过同时靶向多个下游靶基因发挥作用, 故仅研究 其 Bcl-2 靶向作用并无法完全阐述其对肝癌细胞增 殖 凋亡的调控机制 综上所述,miR- 497 与 Bcl- 2 存在靶向关系,

5 中国肿瘤临床 216 年第 43 卷第 16 期 Chin J Clin Oncol 216. Vol. 43. No mir-497 可通过靶向调控 Bcl-2 表达抑制肝癌细胞增殖, 同时促进其凋亡 此外,miR-497 还可能通过靶向其他下游基因参与肝癌的发生与演变过程 参考文献 [1] European association for the study of the liver. EASL-EORTC clinical practice guidelines: management of hepatocellular carcinoma[j]. J Hepatol, 212, 56(4): [2] Raza A, Sood GK. Hepatocellular carcinoma review: current treatment, and evidence- based medicine[j]. World J Gastroenterol, 214, 2(15): [3] Klein J, Dawson LA. Hepatocellular carcinoma radiation therapy: review of evidence and future opportunities[j]. Int J Radiat Oncol Biol Phys, 213, 87(1): [4] Lorio MV, Croce CM. microrna dysregulation in cancer: diagnostics, monitoring and therapeutics. A comprehensive review[j]. EM- BO J, 212, 4(3): [5] Furuta M, Kozaki K, Tanimoto K, et al. The tumor-suppressive mir cluster targets multiple cell-cycle regulators in hepatocellular carcinoma[j]. PloS one, 213, 8(3):e6155. [6] Xie HB, Sun JJ, Xia YZ. microrna-497 expression in hepatocellular carcinoma and its significance[j]. Chin J Gen Surg, 213, 22(7): [ 解寒冰, 孙建军, 夏云展.microRNA-497 在肝细胞癌中的表达及意义 [J]. 中国普通外科杂志,213,22(7): ] [7] Xu X, Yang X, Xing C, et al. mirna: The nemesis of gastric cancer (Review)[J]. Oncol Lett, 213, 6(3): [8] Wang XQ, Shi QL, Wang JD, et al. Study on expression and clinicopathologic characteristics of mir- 195 and mir- 497 in colorectal cancers[j]. J Med Postgra, 212, 25(11): [ 王雪晴, 石群立, 王建东, 等. 结直肠癌组织中 mir-195 和 mir-497 的表达差异及临床病理学意义 [J]. 医学研究生学报,212,25(11): ] [9] Sun YF, Zhou JP. Expression of MicroRNA-497 in Gastric Cancer and Its Biological Signifi cance[j]. Chin J Bass Clin General Surg, 214, 5 (1):22-23.[ 孙叶飞, 周建平. 胃癌组织中 mir-497 表达及其生物学 意义 [J]. 中国普外基础与临床杂志,214,5(1):22-23.] [1] Luo M, Shen D, Zhou X, et al. microrna-497 is a potential prognostic marker in human cervical cancer and functions as a tumor suppressor by targeting the insulin- like growth factor 1 receptor[j]. Surgery, 213, 153(6): [11] Shao X, Miao M, Xue J, et al. The down-regulation of microrna-497 contributes to cell growth and cisplatin resistance through PI3K/ Akt pathway in osteosarcoma[j]. Cell Physiol Biochem 215, 36(5): [12] Lan J, Xue Y, Chen H, et al. Hypoxia-induced mir-497 decreases glioma cell sensitivity to TMZ by inhibiting apoptosis[j]. FEBS Lett, 214, 588(18): [13] Ding WZ, Lu YT, Tan LW, et al. mir-497 Reduces invasion and migration of hepatocellular carcinoma[j]. Acta Univ Med NJ, 215, 7(2): [ 丁文周, 卢叶挺, 谭龙威, 等.miR-497 抑制肝癌细胞的侵袭与转移 [J]. 南京医科大学学报,215,7(2):14-15.] [14] Zhu Y, Yang QC, Liu HB, et al. Expression and Significance of Osteopontin,survivin and bcl-2 in Cervical Neoplasms[J]. Cancer Res Prev Treat, 213, 4(1):83-86.[ 朱燕, 杨其昌, 刘宏斌, 等. 骨桥蛋白,survivin 及 bcl-2 在宫颈病变中的表达及临床意义 [J]. 肿瘤防治研究, 213,4(1):83-86.] [15] Nadler Y, Camp RL, Giltnane JM, et al. Expression patterns and prognostic value of Bag-1 and Bcl-2 in breast cancer[j]. Breast Cancer Res, 28, 1(2):1-12. ( 收稿 ) ( 修回 ) ( 编辑 : 武斌校对 : 杨红欣 ) 作者简介张猛专业方向为肝胆胰脾疾病的治疗 soulsinger@126.com 读者 作者 编者 529 例食管原发小细胞癌临床流行病学特征及治疗和预后分析 原发性食管小细胞癌 (PESC) 是一种较为罕见的食管恶性肿瘤, 发病率占同期食管恶性肿瘤的.5%~ 2.4% 至今已有许多 PESC 的研究报道, 但相关临床治疗方式选择和疗效评价的结论各异 中国肿瘤临床 216 年第 13 期 癌情报告 栏目刊文回顾性分析 1992 年至 215 年 529 例来自郑州大学第一附属医院河南省食管癌重点开放实验室 5 例食管癌及贲门癌临床信息数据库 PESC 患者临床流行病学资料, 以加深对 PESC 防治的认识 阅读本文请登录网站 或关注本刊微信公告号 ( 扫描文章下方二维码 ) 查看 本刊编辑部

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