16 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology Vol.37No 供,TK1 阳 / 阴性血清取自郑州大学第一附属医院 表 1 引物序列 Table1 Primersequence Primername Primersequence(5 3 ) Restrictionenz
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1 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,2017,37(9):15 22 DOI: /j.cb ThymidineKinase1(TK1) 重组蛋白的 表达 纯化及鉴定 1,2 王云龙 1 赵二霞 2,3 李玉林 (1 郑州大学生命科学学院郑州 河南省生物工程技术研究中心郑州 ) (3 郑州市生物制药重点实验室郑州 ) 摘要为获得具有免疫原性的 TK1 重组蛋白 通过构建能够表达 TK1 蛋白的重组菌 BL21 pet32a TK1, 采用大肠杆菌 pet32a 表达系统, 优化 IPTG 浓度 诱导温度 诱导时间使 BL21 pet32a TK1 重组菌表达目的蛋白的作用条件最佳 表达产物用镍离子亲和层析纯化获得 TK1 蛋白, 并用 SDS PAGE 和 Westernblot 进行检测 用 TK1 重组蛋白免疫 BALB/c 小鼠制备单克隆抗体, 检测蛋白质免疫原性 实验结果表明, 成功构建能够表达 TK1 蛋白的重组菌 BL21 pet32a TK1, 在 37 条件下,IPTG 浓度为 0.2mmol/L 诱导 6h 时重组蛋白 TK1 表达量最高 镍离子亲和层析梯度洗脱在 80mmol/L 咪唑条件下 TK1 蛋白纯度最大, 灰度分析为 87.3%, 浓缩后蛋白质浓度为 5.96mg/ml 用该蛋白质制备杂交瘤共获得 10 株稳定分泌 TK1 抗体的阳性单克隆细胞株, 表明 TK1 重组蛋白具有较好的免疫原性 成功获得可溶性 抗原活性高 免疫原性强的 TK1 重组蛋白, 为肿瘤科学及临床应用研究提供物质支撑 关键词重组菌 TK1 表达条件优化亲和层析单克隆抗体中图分类号 Q816 胸苷激酶 1 [1] (thymidinekinase1,tk1) 在镁离子 (Mg 2+ ) 和 ATP 参与的条件下可磷酸化脱氧胸苷为脱氧胸苷一磷酸, 是 DNA 补救合成途径的关键酶 TK1 存在于细胞质中, 呈细胞周期依赖性 [2 4] 正常成人细胞中 TK1 含量极低 (<2pmol/L), 只有细胞过度增殖的情况下 TK1 浓度才会升高释放至体液, 导致血清胸苷激酶 1(STK1) 水平增加 [5] 因此,TK1 可作为肿瘤细胞标志物用于乳腺癌 肠胃癌 鼻咽癌 原发性肝癌等不同类型恶性肿瘤的早期检测, 评估手术 放化疗等治疗效果及肿瘤复发风险等 [6 15] 目前获得 TK1 抗原一方面通过多肽段的合成, 多肽合成不仅获得的抗原数量有限, 而且为了获得较强的免疫原性需要偶联生物大分子, 而且无关蛋白质的引入也为单抗的筛选带来新问题 另一方面采用 pet28a TK1 重组载体原核表收稿日期 : 修回日期 : 河南省科技攻关资助项目 ( ) 电子信箱 :biowyl@126.com 达 TK1 蛋白,pET28a 不能很好的实现蛋白质的可溶性表达, 在变性复性的过程中容易使蛋白质失活 为了获得更加优质的 TK1 蛋白, 本实验探索构建重组菌, 采用大肠杆菌 pet32a 表达系统, 通过优化 IPTG 浓度 温度 时间使 BL21 pet32a TK1 重组菌表达目的蛋白的作用条件最佳, 产物经镍离子亲和层析纯化后获得高纯度的 TK1 蛋白, 经动物免疫制备单克隆抗体初步验证 TK1 重组蛋白的免疫原性和生物活性达到实验要求, 为肿瘤科学及临床应用研究提供了物质支撑 1 材料与方法 1.1 材料从 GenBank 搜索人 TK1 基因序列, 由生工生物工程 ( 上海 ) 股份有限公司合成, 引物序列如表 1 所示 TK1 抗体 表达载体 pet32a 购自生工生物工程 ( 上海 ) 股份有限公司, 表达菌 BL21 BALB/c 小鼠 HRP 标记兔抗鼠 IgG 抗体由河南省生物工程技术研究中心提
2 16 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology Vol.37No 供,TK1 阳 / 阴性血清取自郑州大学第一附属医院 表 1 引物序列 Table1 Primersequence Primername Primersequence(5 3 ) Restrictionenzyme 5 Primer GGAATTCCATATGAGCTGCATTAACCTGCCCA EcoRI 3 Primer CCGCTCGAGTCAGTTGGCAGGGCTGCA XhoI 1.2 主要试剂甲叉双丙烯酰胺 β 巯基乙醇 TEMED 购自 Sigma,DNAMarker ECL 发光液购自北京康为世纪生物科技有限公司,IPTG TaqDNA 聚合酶 T4DNA 连接酶 限制性内切核酸酶 XhoI EcoRI 购自 TaKaRa 公司, 预染蛋白 Marker 购自国药集团化学试剂有限公司, PVDF 膜购自 Milipore 公司 1.3 方法 BL21 pet32a TK1 重组菌的构建 (1)PCR 扩增目的基因 反应条件 :93 预变性 5min,93 变性 30s,60 复性 30s,72 延伸 40s, 共 30 个循环,72 延伸 5min 扩增产物用 0.7% 琼脂糖凝胶电泳鉴定后用胶回收试剂盒回收 (2) 目的基因片段和 pet32a 表达载体在 37 条件下用 EcoRI XhoI 双酶切 2h, 鉴定后胶回收, 在 16 T4DNA 连接酶条件下过夜反应, 转入感受态细胞 BL21, 挑取阳性单菌落, 双酶切鉴定后送生工生物工程 ( 上海 ) 股份有限公司测序 重组菌初步诱导将鉴定正确的 BL21 pet32a TK1 大肠杆菌和转入空质粒的 BL21 pet32a 大肠杆菌 ( 对照 ) 同时进行诱导, 确定是否有 TK1 蛋白表达及表达形式 (1) 分别挑取 BL21 pet32a TK1 和 BL21 pet32a 单菌落, 扩大培养至 A 600 为 0.6~0.8 (2) 取 1ml 菌液做对照 ( 未诱导 ), 剩余菌液加 IPTG 至终浓度为 1mmol/L,37 180r/min 震荡培养 4h (3)8000r/min 离心 5min 分别收取菌体和上清液, 用 PB 重悬菌体 (4) 超声波破碎菌体,10000r/min 离心 10min, 分别收取沉淀和上清液 初步诱导后 SDS PAGE 检测以未诱导的 BL21 pet32a TK1 大肠杆菌菌液 IPTG 诱导的 BL21 pet32a 大肠杆菌菌液与 IPTG 诱导的 BL21 pet32a TK1 大肠杆菌菌液做对照, 对上述收取的样品处理后 以 5% 浓缩胶,15% 分离胶进行 SDS PAGE 检测 重组菌诱导表达条件优化分别从 IPTG 作用浓度 培养温度 培养时间三个因素对 BL21 pet32a TK1 重组菌进行诱导表达, 对超声破碎后菌液上清液进行 SDS PAGE 检测确定最佳表达条件 (1)37 诱导 6h,IPTG 浓度设定 0.1mmol/L 0.2mmol/L 0.5mmol/L 1.0mmol/L 1.5mmol/L5 个水平 [16], 确定 IPTG 作用浓度 (2) 用上述实验确定的最佳 IPTG 作用浓度诱导 6h, 温度设定 个水平, 确定培养温度 (3) 用上述实验确定的最佳 IPTG 作用浓度 培养温度, 时间设定 2h 4h 6h 8h4 个水平, 确定培养时间 纯化 TK1 蛋白 (1) 根据优化后的条件对重组菌进行诱导表达, 8000r/min 离心 5min, 收集菌体 冰浴条件下超声破碎 (400W, 工作 5s, 间歇 5s, 循环 15min),10000r/min 离心 10min 后取上清 (2) 用 AKTAprimePlus 蛋白纯化仪纯化 TK1 蛋白, 柱压限定小于 0.3MPa 上样前依次用 0.5mol/L NaOH( 含 0.05mol/LEDTA) 超纯水 3% 硫酸镍 超纯 [17 19] 水 PB(0.02mol/L ph7.8) 将镍亲和层析柱进行处理 上样流速为 1ml/min, 上样完成后用 0mmol/L 20mmol/L 50mmol/L 80mmol/L 100mmol/L 200mmol/L 咪唑蛋白洗脱液进行梯度洗脱, 收集洗脱样品进行 SDS PAGE 检测, 并测其蛋白质浓度 Westernblot 检测蛋白抗原性纯化的 TK1 蛋白样品处理后进行 SDS PAGE 电泳, 切下目的条带凝胶, 转膜 将 PVDF 膜置于封闭液中封闭 2h, 加入 稀释的 TK1 抗体 37 孵育 2h 加入 稀释的兔抗鼠 IgG 酶标二抗 37 孵育 1h, 显色 [20] 制备多克隆抗体检测蛋白质免疫原性用获得的 TK1 重组蛋白添加佐剂腹腔免疫 6~8 周龄的 BALB/c 雌性小鼠 3 只, 每次 100μg/ 只, 第三次免疫后用 ELISA 间接法 ( 每孔包被 TK1 重组蛋白 100ng, 兔抗
![2017,37(9) 王云龙等 :ThymidineKinase1(TK1) 重组蛋白的表达 纯化及鉴定 17 鼠 IgG 酶标二抗 1 4000 稀释 ), 通过倍比稀释检测小鼠抗体血清效价 1.3.8 筛选阳性单克隆细胞株选用免疫效果最好的小鼠, 脾内加强免疫 (20μg) 后取其脾细胞和 SP2/0 细胞融合, 通过有限稀释法 克隆化和 ELISA 检测 ( 同 1.3.7 节 ) 筛选出能稳定分泌抗 TK1 抗体的阳性单克隆细胞株 [21] 1.](/docs-images/76/73805540/images/3-0.jpg "3.9 TK1 单抗鉴定 (1) 单抗亚型的鉴定 : 按照鼠单抗亚型鉴定试剂盒操作说明对上述筛选的阳性单克隆细胞株进行鉴定 (2) 特异性检测 : 通过包被 Trx 蛋白 (100ng/ 孔 ) TK1 标准品 (50ng/ 孔 ), 采用 ELISA 间接法 ( 兔抗鼠 IgG 酶标二抗 1 4000 稀释 ) 检测 10 株单抗的特异性 (3) 竞争抑制实验取 10")
3 2017,37(9) 王云龙等 :ThymidineKinase1(TK1) 重组蛋白的表达 纯化及鉴定 17 鼠 IgG 酶标二抗 稀释 ), 通过倍比稀释检测小鼠抗体血清效价 筛选阳性单克隆细胞株选用免疫效果最好的小鼠, 脾内加强免疫 (20μg) 后取其脾细胞和 SP2/0 细胞融合, 通过有限稀释法 克隆化和 ELISA 检测 ( 同 节 ) 筛选出能稳定分泌抗 TK1 抗体的阳性单克隆细胞株 [21] TK1 单抗鉴定 (1) 单抗亚型的鉴定 : 按照鼠单抗亚型鉴定试剂盒操作说明对上述筛选的阳性单克隆细胞株进行鉴定 (2) 特异性检测 : 通过包被 Trx 蛋白 (100ng/ 孔 ) TK1 标准品 (50ng/ 孔 ), 采用 ELISA 间接法 ( 兔抗鼠 IgG 酶标二抗 稀释 ) 检测 10 株单抗的特异性 (3) 竞争抑制实验取 10 株阳性单克隆细胞株培养上清液, 各处理 3 份 : 样品稀释液稀释 上清液与 TK1 阳性血清混合 上清液与 TK1 阴性血清混合 确定该抗体是否仅与血清中 TK1 抗原结合 图 2 pet32a TK1 质粒双酶切鉴定 Fig.2 Doubledigestionrecombinant plasmidpet32a TK1 1:DNAMarker;2:DoubledigestionofpET32a TK1plasmid 2 结果与分析 2.1 BL21 pet32a TK1 重组菌的构建目的基因扩增后经 0.7% 琼脂糖凝胶电泳检测在约 700bp 处有目的条带, 与预期结果相符 ( 图 1) 重组质粒双酶切鉴定在约 700bp 处有目的条带和质粒条带, 与预期结果相符 ( 图 2) 图 3 TK1 蛋白初步诱导 SDS PAGE 检测 Fig.3 SDS PAGEdetectionofTK1 proteinpreliminaryinduced 1:Beforeinduction ofbl21 pet32a TK1;2:Afterinduction of BL21 pet32a TK1;3:AfterinductionofBL21 pet32a;4:protein marker;5:bacterialiquidcentrifugalsupernatantafterinduction; 6:Afterinduction ofbacteria;7:centrifugalsupernatantafter ultrasonication;8:centrifugalsedimentationafterultrasonication 图 1 目的基因扩增 Fig.1 PCRofpurposegene 1:DNAMarker;2:TK1fragment 2.2 重组菌初步诱导 SDS PAGE 检测 SDS PAGE 检测实验结果显示 ( 图 3), 在 mmol/liptg 作用浓度下诱导 4h 目的蛋白为可溶性表达 2.3 重组菌诱导表达条件优化 (1)IPTG 作用浓度确定 :37 诱导 6h, 通过改变 IPTG 浓度所得实验结果如图 4 所示, 灰度分析结果如图 5 所示 结果显示 IPTG 在 0.2mmol/L 之后, 增大浓度对蛋白质表达量影响不大, 确定 IPTG 诱导浓度为 0.2mmol/L (2) 诱导温度确定 :0.2mmol/LIPTG 诱导 6h, 通过改变诱导温度所得实验结果如图 6 所示, 灰度分析结果如图 7 所示 结果显示, 温度在 37 时目的蛋白 TK1 表达量最高 (3) 诱导时间确定 :37 0.2mmol/LIPTG 作用浓度下, 通过改变诱导时间所得实验结果如图 8 所示, 灰度分析
4 18 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology Vol.37No 图 4 IPTG 浓度优化 SDS PAGE 检测 Fig.4 SDS PAGEdetectionofIPTG concentrationoptimization 1:Before induction ofbl21 pet32a TK1;2:Protein marker; 3:IPTG0.1mmol/L;4:IPTG 0.2mmol/L;5:IPTG 0.5mmol/L; 6:IPTG1.0mmol/L;7:IPTG1.5mmol/L 图 7 不同温度灰度分析 Fig.7 Grayanalysisofdiferent inductiontemperature 图 5 不同浓度 IPTG 灰度分析 Fig.5 GrayanalysisofdiferentIPTG concentration 图 8 诱导时间优化 SDS PAGE 检测 Fig.8 SDS PAGEdetectionof inductiontimeoptimization 1:2h;2:4h;3:6h;4:8h;5:BeforeinductionofBL21 pet32a TK1; 6:Proteinmarker 图 6 诱导温度优化 SDS PAGE 检测 Fig.6 SDS PAGEdetectionofinduction temperatureoptimization 1:Before induction ofbl21 pet32a TK1;2:Protein marker; 3:25 ;4:30 ;5:37 ;6:40 结果如图 9 所示 结果显示, 诱导 6h 时目的蛋白 TK1 表达量最高 综上 : 该实验在 37 IPTG 作用浓度为 0.2mmol/L 图 9 不同时间灰度分析 Fig.9 Grayanalysisofdiferentinductiontime 条件下, 诱导 6h 目的蛋白 TK1 表达量最高 2.4 纯化 TK1 蛋白表达产物经镍离子亲和层析纯化 ( 图 10),SDS PAGE 检测 ( 图 11) 在 36kDa 有明显的蛋白质条带, 灰度分析纯度为 87.3%, 经紫外分光光度计检测浓度为 2.48mg/ml 浓缩后蛋白质浓度为 5.96mg/ml
5 2017,37(9) 王云龙等 :ThymidineKinase1(TK1) 重组蛋白的表达 纯化及鉴定 19 图 10 TK1 蛋白亲和纯化 Fig.10 AfinitypurificationofTK1protein 1:Uppersample;2:20mmol/Limidazoleelutionpeak;3:50mmol/Limidazoleelutionpeak;4:80mmol/Limidazoleelutionpeak;5:100mmol/L imidazoleelutionpeak 2.5 Westernblot 检测蛋白抗原性 Wesernblot 检测结果如图 12 所示 图 11 纯化后 SDS PAGE 检测 Fig.11 SDS PAGEdetectionofafterpurification 1:Proteinmarker;2:80mmol/Limidazoleelutionprotein;3:After inductionofbl21 pet32a TK1 图 12 Westernblot 检测 Fig.12 Westernblottest 1:Proteinmarker;2:TK1protein 2.6 制备多克隆抗体检测蛋白质免疫原性结果显示 ( 表 2), 免疫后 3 只小鼠的抗体血清效价均达到 , 且 B 小鼠免疫效果最好 表 2 抗体血清效价检测 Table2 Detectionofantibodytiterserum A B C Note:OD>0.105aspositiveresponse 2.7 筛选阳性单克隆细胞株 单克隆细胞上清液 稀释后通过 ELISA 间接法检测 ( 表 3), 成功筛选出 10 株阳性单克 隆细胞, 分别命名为 1D8 1G3 2C10 3B7 3D5 4F9 4G3 5A6 5E3 6D5 表 3 阳性单克隆细胞株 ELISA 检测 Table3 ELISAdetectionofpositivemonoclonalcellines Cellines 1D8 1G3 2C10 3B7 3D5 4F9 4G3 5A6 5E3 6D5 + OD Note:+,Positivecontrol;,Negativecontrol;OD>0.105aspositiveresponse
6 20 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology Vol.37No TK1 单抗鉴定亚型鉴定结果如表 4 所示, 特异性检测结果如表 5 单抗仅与 TK1 抗原特异性结合, 可用于检测方法的建立 所示, 竞争性抑制检测结果如表 6 所示, 表明所得 10 株 表 4 阳性单克隆细胞株亚型鉴定 Table4 Sub typeidentificationofpositivemonoclonalcellines Cellines 1D8 1G3 2C10 3B7 3D5 4F9 4G3 5A6 5E3 6D5 Sub type IgG1 IgG1 IgG1 IgG1 IgG2a IgG1 IgG1 IgG1 IgG1 IgG1 表 5 阳性单克隆细胞株特异性鉴定 Table5 Specificidentificationofpositivemonoclonalcellines 1D8 1G3 2C10 3B7 3D5 4F9 4G3 5A6 5E3 6D5 Ab TK1 - Trx TK Note:+:positiveresponse;:negativeresponse 表 6 竞争性抑制检测结果 Table6 Competitiveinhibitiontestresults 1D8 1G3 2C10 3B7 3D5 4F9 4G3 5A6 5E3 6D5 + - A B C Note:A,Dilutedmonoclonalantibody;B,MonoclonalantibodyandTK1positiveserummixture;C,MonoclonalantibodyandTK1negativeserum mixture;+,positiveresponse;,negativeresponse 3 讨论 TK1 是 DNA 补救合成途径的关键酶 目前研究认为 TK1 可作为一种灵敏有效的肿瘤细胞增殖标志物 在近十年里, 多个实验室制备了不同的抗 TK1 抗体用于肿瘤疾病的鉴定和监控, 但灵敏度较低 [5] TK1 的来源是业内积极研究和亟待解决的热点和难点 获取 TK1 抗原的方法有培养 Raji 细胞, 从细胞提取物中纯化获得天然 TK1 蛋白 [22] ; 有分析 TK1 抗原表位, 合成 N 端 23 肽 (3~25) C 端 20 肽 (206~225) C 端 28 肽 (198~225) 等多肽段偶联生物大分子 [5] ; 有利用重组载体 pet28a TK1 诱导表达 TK1 重组蛋白 [16] 本实验采用大肠杆菌 pet32a 表达系统, 选用的 pet32a 表达载体可以实现蛋白质的可溶性表达,his 标签有利于目的蛋白从杂蛋白中分离纯化 与纯化天然蛋白质相比得到的蛋白质纯度更高 ; 与合成多肽段偶联生物大分子相比, 全蛋白质作为抗原免疫动物获得的抗体特异性和灵敏度更高 在本实验方法下可以快速 大量获 得优质的 TK1 蛋白 在肿瘤标志物研究和临床检测试剂的研制上有很好的应用前景 4 结论 本实验成功构建能够表达 TK1 蛋白的重组菌 BL21 pet32a TK1, 获得可溶性 抗原活性高 免疫原性强的 TK1 重组蛋白 为肿瘤科学及临床应用研究提供了物质支撑 参考文献 [1] Munch Petersen B, CloosL, Jensen H K, etal. Human thymidinekinase1.regulationinnormalandmalignantcels. AdvEnzymeRegul,1995,35(1): [2]KumarJK,AronsonAC,PilkoG,etal.Aclinicalevaluation ofthetk 210 ELISA in serafrom breastcancerpatients demonstrateshigh sensitivityand specificityin alstagesof disease.tumourbiol,2016,37(9): [3] GaspariF,WangN N,SkogS,etal.Thymidinekinase1 expresiondefinesanactivatedg 1 stateofthecelcycleas
7 2017,37(9) 王云龙等 :ThymidineKinase1(TK1) 重组蛋白的表达 纯化及鉴定 21 revealedwithsite specificantibodiesandarayscan TM asays. EuropeanJournalofCelBiology,2009,88(1): [4]KePY,YangC C,TsaiIC,etal.Degradationofhuman thymidinekinaseisdependentonserine 13 phosphorylation: involvementofthescf mediatedpathway.biochem J,2003, 370(1): [5] 周际, 李劲, 斯文 斯库格, 等. 一种多表位 TK1 抗体的制备及其在评估肿瘤患者治疗效果中的应用 : 中国, CN A ZhouJ,LiJ,SkogS,etal.PreparationofAMultiEpitopeTK1 AntibodyandItsApplicationinEvaluatingTherapeuticEfectof TumorPatients:China,CN A [6]HeE,XuXH,GuanH,etal.Thymidinekinase1isapotential markerforprognosisandmonitoringtheresponsetotreatmentof patientswith breast,lung,and esophagealcancerand non Hodgkin slymphoma.nucleosidesnucleotidesnucleicacids, 2010,29(1):4 6. [7] RauschS,HennenloterJ,TeepeK,etal.Muscle invasive bladdercancerischaracterizedbyoverexpresionofthymidine kinase1.uroloncol,2015,33(10): [8] ChenG,HeC,LiL,etal.NuclearTK1expresionisan independentprognosticfactorforsurvivalinpre malignantand malignantlesionsofthecervix.bmccancer,2013,13(1): [9] Du Y Y, ZhangQ J, Sun G P. Expresion and clinical significance of cytokeratin 19 and thymidine kinase 1 in advanced gastrointestinalcancer. Chinese MedicalJournal, 2016,129(18): [10] 朱艳哲, 马泰, 张从军, 等. 血清胸苷激酶 1 在肿瘤患者中的表达及临床意义. 安徽医科大学学报,2015,50(7): ZhuYZ,MaT,ZhangCJ,etal.Theexpresionandclinical significanceofserumthymidinekinase1incancerpatients.acta UniversitatisMedicinalisAnhui,2015,50(7): [11] 刘秀菊, 周际, 李远, 等. 一种新肿瘤生长相关生物标志物胸苷激酶 1 临床应用进展. 中国药理学与毒理学杂志,2011, 25(1): LiuXJ,ZhouJ,LiY,etal.Progresinclinicalapplicationofa newtumorgrowthrelatedbiomarkerthymidinekinase1.chinj PharmacolToxicol,2011,25(1): [12]O NeilKL,ZhangF,LiH,etal.Thymidinekinase1 a prognosticanddiagnosticindicatorinallandamlpatients. Leukemia,2007,21(3): [13]HalekM,WandersL,StrohmeyerS,etal.Thymidinekinase:a tumormarkerwithprognosticvaluefornon Hodgkin slymphoma and a broad range ofpotentialclinicalapplications. Ann Hematol,1992,65(1):1 5. [14]HeQ,ZouL,LiH,etal.Concentrationofthymidinekinase1in serum (S TK1) isamoresensitiveproliferation markerin humansolidtumorsthanitsactivity.oncologyreports,2005, 14(4): [15]WangY,JiangX,DongS,etal.SerumTK1isamorereliable markerthanceaandafpforcancerscreeninginastudyof56, 286people.CancerBiomark,2016,16(4): [16] 庞丽君, 王珊珊, 吴云, 等. 胸苷激酶 1 原核表达载体的构建表达及鉴定. 医药论坛杂志,2015,36(8):6 8. PangLJ,WangSS,WuY,etal.Construction,expresionand identificationofthymidinekinase1prokaryoticexpresionvector. JMedicalForum,2015,36(8):6 8. [17] 陈爱春, 彭伟, 汪生鹏. 亲和标签在重组蛋白表达与纯化中的应用. 中国生物工程杂志,2012,32(12): ChenAC,PengW,WangSP.Applicationofafinitytagsinthe expresion and purification of recombinant proteins. China Biotechnology,2012,32(12): [18] 任广威. 组氨酸标签蛋白纯化介质的合成及其应用研究. 杭州 : 浙江工商大学, 食品科学与生物技术学院,2011. Ren G W. Sythesis and Application ofhis tagged Protein PurificationMedium.Hangzhou:ZhejiangGongshangUniversity, ColegeofFoodScienceandBiotechnology,2011. [19]BiringerM S,PerozoR,KutE,etal.High levelexpresion and purification ofhuman thymidine kinase 1: quaternary structure,stability,and kinetics. Protein Expresion and Purification,2006,47(1): [20] 王云龙, 张春艳, 邓黎黎, 等.EB 病毒融合蛋白 Zta P54 在大肠杆菌中的表达 纯化及鉴定. 生物技术通报,2014,7(1): WangYL,ZhangCY,DengLL,etal.Expresion,purification andidentificationofzta P54fusionproteininescherichiacoliof epstein barvirus.biotechnologybuletin,2014,7(1): [21] 葛新杰.NT probnp 单克隆抗体的研制及 ELISA 定量检测方法的建立. 郑州 : 郑州大学, 生命科学学院,2015. GeX J.DevelopmentofMonoclonalAntibodyNT probnpand Establishment of ELISA Quantitative Detection Method. Zhengzhou:ZhengzhouUniversity,SchoolofLifeScience,2015. [22] 赵群莉. 血清胸苷激酶单克隆抗体酶促化学发光试剂盒的研制. 天津 : 天津医科大学, 免疫学,2013. Zhao Q L. The Developmentofthe Kitofthe Enzyme ChemiluminescenceDetectionforSerum ThymidineKinasewith MonoclonalAntibody. Tianjin: Tianjin MedicalUniversity, Immunology,2013.
8 22 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology Vol.37No Expresion,PurificationandIdentificationofThymidine Kinase1RecombinantProtein WANGYun long 1,2 ZHAOEr xia 1 LIYu lin 2,3 (1SchoolofLifeScience,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou ,China) (2HenanBiotechnologyResearchCenter,Zhengzhou ,China) (3ZhengzhouBiopharmaceuticalKeyLaboratory,Zhengzhou ,China) Abstract InordertoobtaintheTK1recombinantproteinwithimmunogenicity.Thetargetgenewas amplifiedbypcr,doubledigestedwithxhoi/ecorirestrictionendonuclease,linkedtotheexpresionvector pet32a,andthentransferedintocompetentcelstopreparebl21 pet32a TK1recombinantstrain.TheTK1 proteinwasexpresedbyiptg inducedbl21 pet32a TK1recombinantbacteriaandoptimizedfrom IPTG concentration,culturetemperatureandtime.theexpresionlevelofrecombinantproteintk1wastestedbysds PAGE,anddeterminedtheoptimalinductionconditions.Theexpresedproductwaspurifiedbynickelion afinitychromatography,usedsds PAGEtodetectthepurityofthetargetprotein,andtheantigenicityofthe targetproteinwasdetectedbywesternblot.usedtheobtainedtk1recombinantproteintoimmunizethemice, tookthespleencelsofthebestimmuneefectmicetofusewithsp2/0.screenedmonoclonalcellinesthat secretingspecificantibodiesstably.andthendetectedthesubtypeandspecificityofantibody.theexperimental resultsshowedthattheconditionof37,whentheconcentrationofiptgwas0.2mmol/landinducedfor6h meanwhile,therecombinantproteinexpresionquantityoftk1washighest.undertheconditionofnickelion afinitychromatographygradientelution,in80mmol/limidazole,thecontentofrecombinantproteintk1wasthe highestpurity.itwas87.3%.afterconcentrating,theproteinconcentrationwas5.96mg/ml.withindirect ELISAdetection,10strainsofcelthatcanstablesecretionspecificityTK1antibodybyhybridomatechnology wereobtained.thissuggeststhattk1recombinantproteinhaveimmunogenicity.itcanprovidethematerialbase fortheclinicalresearchofrelatedtumors. Key words Recombinantbacteria Thymidinekinase1 Optimalexpresion condition Afinity chromatograph Monoclonalantibody
材料 方法
生物技术通报 张发洲 杨慧兰 为了构建单纯疱疹病毒 型 感染细胞多肽 真核表达质粒 应用 技术从 株 的基因组中扩增 基因 并连接至真核表达载体 对阳性克隆进行菌落 酶切和测序鉴定后 成功构建了重 组质粒 用 转染试剂盒将重组质粒 转染至 细胞中 并用 及 检测其表达情况 结果显示 基因在 细胞中得到正确表达 真核表达质粒 的构建成功 为进 一步研究 对宿主细胞的影响奠定了基础 单纯疱疹病毒 型 感染细胞多肽
材料! 方法! # 基因的扩增及其序列分析
生物技术通报 黄艳燕 黄靖华 卢福芝 孙靓 彭立新 周兴 黄日波 利用 的方法从鼠李糖乳杆菌基因组 中扩增到 乳酸脱氢酶基因 并连接到载体 上 构建表达质粒 将重组质粒 转化大肠杆菌 重组菌株经 诱导表达 电泳分 析表明 在大肠杆菌中实现了表达 表达产物的分子量约为 同时采用紫外分光光度法测定 乳酸脱氢酶的酶活 测得重组菌株的 乳酸脱氢酶活力为 最适反应温度为 最适 乳酸脱氢酶 克隆 表达 鼠李糖乳杆菌
材料 方法
生物技术通报 姜燕 采用鼠抗人血红蛋白 单克隆抗体 和胶体金标记鼠抗人血红蛋白 单克隆抗体 及对照抗体羊抗鼠 利用双抗体免疫夹心反应原理特异性地结合人血红蛋白抗原 在 内可得到胶体金显色结果的原理研制便潜血单克 隆一步法胶体金检测试卡 用于诊断因各种原因引起的消化道出血疾病 应用杂交瘤技术制备两株鼠抗人血红蛋白 抗 体 方法检测 效价 免疫胶体金技术制备胶体金检测试卡 法检测 效价的结果显示 鼠抗人
第 期 甘金华等 强力霉素人工抗原的合成与抗体制备 材料与方法 试剂及溶液
第 卷第 期 年 月 食品与生物技术学报 强力霉素人工抗原的合成与抗体制备 甘金华 邓薇 李进平 艾晓辉 中国水产科学研究院长江水产研究所 湖北荆州 武汉纺织大学环境与城建学院 湖北武汉 采用改进的碳二亚胺两步法将强力霉素半抗原与载体蛋白 连接制备强力霉素 牛血清白蛋白 人工免疫抗原 并用同样方法将强力霉素与载体蛋白 连接制备人强力霉素 卵清白蛋白 人工包被抗原 经紫外扫描分析和动物免疫试验证实 强力霉素人工抗原合成成功
福建农业学报 材料与方法 试验菌株 引物 主要仪器 主要试剂 细菌培养 模板的制备 反应条件 扩增产物的检测 特异性试验 敏感性试验 分离菌株检测 产物的克隆及序列测定 结果与分析
12 (autophagy),imagej,,, 3 [1-4] (self-eating) Transwelinvasion, 20μmol L -1 LY A549 [5] PI3K/AKT 24h,PBS, [6-8],, ml -1 ( ) 600μL
![12 (autophagy),imagej,,, 3 [1-4] (self-eating) Transwelinvasion, 20μmol L -1 LY A549 [5] PI3K/AKT 24h,PBS, [6-8],, ml -1 ( ) 600μL](/thumbs/91/106935627.jpg "12 (autophagy),imagej,,, 3 [1-4] (self-eating) Transwelinvasion, 20μmol L -1 LY A549 [5] PI3K/AKT 24h,PBS, [6-8],, ml -1 ( ) 600μL")
( )2017 57 5JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)2017,Vol.57No.5 11 LY294002, (, 330006) : LY294002 PI3K/AKT 0 10 15 20 25 30μmol L -1 LY294002(LY294002 ) A549,PBS CCK8 LY294002 A549 ; Westernblot
:TGF-β bfgf 23 KEY WORDS:transforminggrowthfactor-β ;basicfibroblastgrowthfactor; bonemarrow mesenchymalstemcels;eukaryoticexpressionvector; liposomet
2 ( )208 58 JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)208,Vol.58No. TGF-β bfgf,, 2 (., 330006; 2., 5040) : -β (TGF-β ) (bfgf) (BMSCs), SD BMSCs Percol PCR TGF-β bfgf, pcdna3.(+), 3 BMSCs RT-PCR Westernblot
2015,35(4) 龚隆财等 :ctni linker TnC 融合蛋白的原核表达及鉴定 49 免疫反应鉴定, 表明重组表达的 ctni linker TnC 融合蛋白具有较好的免疫原性, 保存了 ctni 和 ctnc 单体的天然结构, 有望成为天然 ctni TnC 复合物的替代物, 为下一步
中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,2015,35(4):48 53 DOI:10.13523/j.cb.20150407 ctni linker TnC 融合蛋白的原核表达及鉴定 龚隆财 罗镇明 杨雁青 王振宇 向军俭 (1 暨南大学广东省分子免疫与抗体工程重点实验室广州 510632) 王 宏 (2 广州市疾病与食品安全免疫学快速检测重点实验室暨南大学分室广州 510632)
pet28a + CD 1 3 ~ 4 NHL 85% ~ % B 2 CD B B B 3-4 CD 5 CD B Rituximab C2B8 CD IgG1 CHO FDA C2B8 Minibody IgG VL VH CH3 Linker VL-VH-CH3 Fc ADCC
35 3 12 9 JOURNAL OF NANJING NORMAL UNIVERSITY Natural Science Edition Vol 35 No 3 Sept 12 pet28a + CD 210046 Rituximab VL VH CH3 CD overlap PCR Rituximab VL VH Linker ScFv ScFv IgG1 CH3 IgG1 cdna pet28a
GB 15973—1995麻风病诊断标准及处理原则
炭 疽 诊 断 标 准 及 处 理 原 则 前 言 GB 17015 1997 炭 疽 (Anthrax) 是 由 炭 疽 芽 孢 杆 菌 (Bacillus anthracis) 引 起 的 一 种 人 与 动 物 共 患 传 染 病, 主 要 存 在 于 食 草 动 物 和 牲 畜 群 落 之 中, 并 能 造 成 环 境 的 广 泛 污 染 由 于 炭 疽 芽 孢 具 有 对 外 界 环 境
124 河南农业科学第 42 卷, (HPS) ;PRRSV PCV2, [4] PRRSV CSFV ;20, PRRSV,CSFV [5-9],, 1.2 主要试剂和仪器 Real-timePCR PRRSV CSFV PCV2, 3 RotorGene, RG-3000; ND-1000 Na
![124 河南农业科学第 42 卷, (HPS) ;PRRSV PCV2, [4] PRRSV CSFV ;20, PRRSV,CSFV [5-9],, 1.2 主要试剂和仪器 Real-timePCR PRRSV CSFV PCV2, 3 RotorGene, RG-3000; ND-1000 Na](/thumbs/91/105785327.jpg "124 河南农业科学第 42 卷, (HPS) ;PRRSV PCV2, [4] PRRSV CSFV ;20, PRRSV,CSFV [5-9],, 1.2 主要试剂和仪器 Real-timePCR PRRSV CSFV PCV2, 3 RotorGene, RG-3000; ND-1000 Na")
河南农业科学,2013,42(2):123-127 JournalofHenanAgriculturalSciences PCR PRRSV CSFV PCV2,, (, 450011) : 根据 TaqMan 复合荧光探针设计原则, 应用 Primer5.0 和 Oligo6.0 软件设计检测猪繁殖 与呼吸综合征病毒 (PRRSV) 猪瘟病毒 (CSFV) 和猪圆环病毒 2 型 (PCV2) 的特异性引物和探针,
材料 方法 载体构建 转基因植株的获得
生物技术通报 唐宏琨 曾洪梅 杨秀芬 邱德文 通过根癌农杆菌 介导转化法 将含有激发子基因 的植物表达载体 转化三生烟 获得了转基因烟草植株 用 检测确认了阳性转化株 用 杂交 和 杂交进一步证实了 基因的整合 转录和表达 对 代转基因阳性株进行 接种试验 结果显示 与非转基 因对照相比 表达 的烟草叶片枯斑数量减少 表明蛋白激发子基因 的表达提高了转基因烟草对 的抗性 激发子 基因 烟草 转化 材料
福建农业学报 材料与方法 毒株 主要仪器 主要试剂 引物设计 的培养 反应条件的建立 荧光定量 检测临床样本 结果与分析
福建农业学报 林 甦 朱春华 陈 珍 刘斌琼 施少华 江 斌 蔡国漳 林 羽 黄 瑜 甦 男 硕士 助理研究员 主要从事病毒学和动物传染病学研究 福建农业学报 材料与方法 毒株 主要仪器 主要试剂 引物设计 的培养 反应条件的建立 荧光定量 检测临床样本 结果与分析 林 甦等 鸡 亚型白血病病毒荧光定量 检测方法的建立 福建农业学报 讨 论 林 甦等 鸡 亚型白血病病毒荧光定量 检测方法的建立 责任编辑
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生物研究试剂服务 CRO 抗体 业 我们承诺 : 对于任何宿主 由金斯瑞设计 合成并偶联多肽抗原的多克隆抗体服务,ELISA 效价达到 1:20,000 以上 对于任何宿主 任何蛋白抗原 (3 mg 以上, 纯度 > 85%,90% 更佳 ) 的多克隆抗体服务, 保证 Western blot 检测结果呈阳性且 ELISA 效价达到 1:20,000 以上 I. 畅销服务 SC1031: 抗原亲和纯化多克隆抗体制备服务
PCR专题改.doc
Primer3 http://frodowimitedu/cgi-bin/primer3/primer3_wwwcgi Primer5 Oligo665 Primer5 http://wwwbioonnet/dispbbsasp?boardid=25&id=38536 Oligo667 http://wwwbioonnet/dispbbsasp?boardid=25&id=40898 1 PCR 1
第 期 黄雪莲等 响应面优化绿色木霉菌培养基 材料与方法 菌种 仪器与试剂 菌种的活化 单因素试验 响应面优化试验 优化工艺的验证 数据处理 结果与分析
第 卷第 期 年 月 食品与生物技术学报 响应面优化绿色木霉菌培养基 黄雪莲 于新 仲恺农业工程学院轻工食品学院 广东广州 利用响应面分析法对绿色木霉菌的培养基进行优化 通过测量不同营养条件下绿色木霉 菌落生长直径研究其生物学特性 在单因素实验的基础上 选定葡萄糖添加量 丙氨酸添加量和磷酸二氢钾添加量 个因素进行中心组合实验 建立二次回归方程 并应用响应面分析法进行优化 结果表明 绿色木霉菌最佳培养基为葡萄糖
张红丽 等 部分功能域基因的原核表达与分析 第６期 发表序列 ＡＹ８１９６５０ 同源性为 １００ 与国外 １０ 株 同源性为 ９８畅 ８ 有 １３ 个碱基发生了突 变 其中 ４ 个是有意义的突变 这 ４ 个有意义的 突变分别为第 ２５７ 位 Ｔ Ｃ 第 ５０５ 位 Ａ Ｃ 第 ９０８ 位 Ａ Ｇ 第 １０１２ 位 Ｇ Ｃ 图 ４ 这些差异可 能是捻转血矛线虫株间存在地域差异所致 ２畅 ５ ＨＰＳ 原核表达与鉴定
Microsoft Word 赵凯-二校 出4154
6 10 Vol. 6 No. 10 2015 10 Journal of Food Safety and Quality Oct., 2015 赵 1, 凯 2, 贾彦博 3*, 王啸 2, 丁枫芸 2, 肖海龙 3, 黄建萍 3 (1., 310058; 2., 310019; 3., 310022) 摘要 : 目的 ELISA 方法, Balb/c 4, ELISA,,, ELISA 结果,
Microsoft Word - 6--李铁松_news_.doc
重组七鳃鳗 PHB2 蛋白的原核表达及纯化 李铁松, 王颖, 高杨, 李庆伟 (, 116081) 摘要 : 为了研究 PHB2 蛋白的生物学活性及后续抗体的制备, 作者以前期构建的 pmd18-t-lm-phb2 质粒为模板, PCR 扩增 Lm-PHB2 基因全长 CDS 区, PCR 产物经 Hind III 和 EcoR I 双酶切后连接至表达载体 pet-32a, 构建重组质粒 pet-32a-lm-phb2
Microsoft Word - 007 ??:??.doc
痤 瘡 的 治 療 概 況 王 雷 山 東 中 醫 大 學 研 究 生 痤 瘡 是 青 春 期 男 女 的 常 見 皮 膚 病 多 因 皮 脂 腺 分 泌 過 旺,; 或 過 食 辛 辣, 煎 炒 燥 熱 及 油 膩 食 品 而 生 輕 者 形 成 粉 刺 紅 色 丘 疹, 重 則 反 復 感 染 造 成 局 部 膿 瘡 炎 症 結 節 或 囊 腫 樣 皮 膚 損 害 [1] 痤 瘡 的 治 療 方
实验一 氨基酸的分离鉴定—纸层析法
生 物 化 学 实 验 讲 义 内 蒙 古 科 技 大 学 生 物 与 化 学 工 程 学 院 基 础 生 物 教 学 部 2010 年 1 月 目 录 实 验 一 氨 基 酸 的 分 离 鉴 定 纸 层 析 法 2 实 验 二 琼 脂 糖 电 泳 法 分 离 DNA...3 实 验 三 乳 中 酪 蛋 白 的 分 离.5 实 验 四 3,5 二 硝 基 水 杨 酸 法 测 定 还 原 糖.6 实
Microsoft Word - 骆健美.doc
第 30 卷 第 2 期 2015 年 4 月 天 津 科 技 大 学 学 报 Journal of Tianjin University of Science & Technology Vol. 30 No. 2 Apr. 2015 DOI:10.13364/j.issn.1672-6510.20140064 IrrE 重 组 大 肠 杆 菌 的 构 建 和 性 能 分 析 骆 健 美, 郑 媛
Invitrogen 1.4 pet-gr, ICE-LGR, PCR TA, pmd18-t/gr pet-21a(+) (Nde I Xho I), E. coli DH-5,,,, pet-gr GR ORF cdna, GR, : PU: 5 -GGAATTCCAT
42 6 Vol.42, No.6 2011 11 OCEANOLOGIA ET LIMNOLOGIA SINICA Nov., 2011 南极衣藻 (Chlamydomonas sp. ICE-L) 谷胱 * 甘肽还原酶基因的原核表达及其条件优化 1 1 燏 1 1 2 (1. 524025; 2. 266061) RT-PCR GR ORF cdna, ; IPTG,, pet-gr BL21,
生命科学研究 房 蓓 武泰存 王景安 以玉米沈单 号为材料 用溶液培养的方法研究了缺锌 低锌和正常供锌对玉米生长发育的影响 进一步明确了一定量低锌比缺锌对玉米的伤害更大 并对其 同工酶谱及蛋白质表达进行了分析 结果表明 一定浓度的低锌培养使玉米生长受抑及受害最重 且地上部分比地下部分更敏感 低锌和缺锌处理时 种同工酶的酶谱和蛋白表达与正常供锌时均有明显的差异 尤其在一定量低锌浓度时 有些同工酶的表达增强或被特异性诱导
基 础 研 究 食 品 科 学 2011, Vol. 32, No. 07 17 白 球 蛋 白 醇 溶 蛋 白 和 碱 溶 蛋 白 等, 发 现 白 果 中 的 蛋 白 质 主 要 以 清 蛋 白 和 球 蛋 白 为 主, 其 中 白 果 清 蛋 白 具 有 抗 氧 化 和 延 缓 衰 老 等 作
16 李 莹 莹 1, 吴 彩 娥 1, *, 杨 剑 婷 2, 范 龚 健 1 (1. 南 京 林 业 大 学 森 林 资 源 与 环 境 学 院, 江 苏 南 京 210037;2. 安 徽 科 技 学 院 食 品 药 品 学 院, 安 徽 凤 阳 233100) 对 白 果 的 主 要 过 敏 蛋 白 进 行 鉴 定, 并 对 其 过 敏 原 性 进 行 分 析 以 SDS-PAGE 和 Western-Blotting
连接
502 南方医科大学学报 J South Med Univ 202;32(4) 基础研究 小鼠前列腺干细胞抗原的原核表达 纯化及抗原活性检测 董金凯 2 罗 津 3 阎瑾琦 2 张 亮 2 高江平 于继云 2 中国人民解放军总医院泌尿外科 北京 00853 2 军事医学科学院基础医学研究所 北京 00850 3 湖南省永州 市人民医院 湖南 永州 425000 摘要 目的 RT-PCR 扩增小鼠前列腺干细胞抗原
D 慢 性 肾 炎 E 子 宫 蓄 脓 7. 支 气 管 肺 炎 的 X 线 影 征 是 A 黑 色 阴 影 B 密 度 均 匀 的 阴 影 C 大 小 不 一 的 云 絮 状 阴 影 D 边 缘 整 齐 的 大 块 状 阴 影 E 整 个 肺 野 出 现 高 密 度 阴 影 8. 以 波 幅 变
2010 年 国 家 执 业 兽 医 资 格 考 试 试 卷 ( 下 午 卷 ) 临 床 科 目 A 1 型 题 答 题 说 明 每 一 道 考 试 题 下 面 有 A B C D E 五 个 备 选 答 案, 请 从 中 选 择 一 个 最 佳 答 案, 并 在 答 题 卡 上 将 相 应 题 号 的 相 应 字 母 所 属 的 方 框 涂 黑 1. 检 查 浅 表 淋 巴 结 活 动 性 的 基
150 微生物学通报 2009, Vol.36, No.1 (systemic lupus erythematosus, SLE), Sm(B B D1), Sm D1, SLE [1], Sm D1 (immunoblot, IBT) (enzyme linked immunosorbent as
![150 微生物学通报 2009, Vol.36, No.1 (systemic lupus erythematosus, SLE), Sm(B B D1), Sm D1, SLE [1], Sm D1 (immunoblot, IBT) (enzyme linked immunosorbent as](/thumbs/88/114888322.jpg "150 微生物学通报 2009, Vol.36, No.1 (systemic lupus erythematosus, SLE), Sm(B B D1), Sm D1, SLE [1], Sm D1 (immunoblot, IBT) (enzyme linked immunosorbent as")
微生物学通报 JAN 20, 2009, 36(1): 149~153 Microbiology tongbao@im.ac.cn 2009 by Institute of Microbiology, CAS 生物实验室 人 SmD1 抗原的酵母真核表达及其初步应用 * 杨湘越吴文冰兰小鹏 ( 350025) 摘要 : 通过 PCR 扩增 Sm D1 基因, 与酵母表达载体 ppic9k 重组, 构建表达质粒
中 国 畜 牧 兽 医 卷 绵羊肺炎支原体 "#)/ 是引起绵羊和山羊呼吸道疾病的一种重要 病原菌 该病原菌感染动物机体后 还可引起其他病原菌的继发感染 给养羊业造成巨大的经济损 失 支原体是介于病毒与细菌之间的一种微生物 对培养条件要求严苛 目前 的培养仍是一大难题 严重影响了人们对其病原特性 致
中国畜牧兽医! " # 绵羊肺炎支原体 1 蛋白 端与 端的表达及其免疫学特性研究 麻昌姣 郑佳琪 黄海碧 王晓晖 白 帆 郝永清 内蒙古农业大学兽医学院微生物与免疫实验室 呼和浩特 摘 要 为分析绵羊肺炎支原体 "#) 膜表面脂蛋白 ( 的免疫学特性 本研究分别扩增 ( 蛋白 / 端与 端的基因 并通过重叠延伸 + 将 端基因序列中的 0 3B ( 定点突变为同义密码子 将扩增的基因片段分别插入到
<B8BDB1EDD2BBA3BACDB3D2BBB6A8BCDBD2A9C6B7D7EEB8DFC1E3CADBBCDBB8F1B1ED2E786C73>
附 表 一 : 统 一 定 价 药 品 表 金 额 : 元 定 价 目 1 293 追 风 透 骨 片 48 片 追 风 透 骨 片 24 片 追 风 透 骨 片 24 片 ( 薄 膜 追 风 透 骨 片 48 片 ( 薄 膜 ( 瓶 ) 30.0 * ( 瓶 ) 15.4 ( 瓶 ) 16.9 ( 瓶 ) 33.0 追 风 透 骨 丸 水 蜜 丸 6g 袋 1.8 * 追 风 透 骨 丸 水 蜜
2 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology Vol.29No C18Sep?Pak 反相柱购自 Waters 公司 ; 带有 C18 反相柱的 HPLC 系统购自 Agilent 公司产品 高效质粒表达载体 pmfh?mcs 为本实验室有专利权的实验材料, 自备 ; 质粒
中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,2009,29(6):1~6 檪檪 研究报告 檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪 基因重组胰高血糖素样肽?1 衍生多肽的 表达和产物纯化与鉴定 马 1 义 2 李弘剑 2 周天鸿 (1 暨南大学生物工程研究所广州 510632 2 暨南大学生命科学技术学院广州 510632) 摘要为研究利用基因重组方法生产人胰高血糖素样肽?1(GLP?1)
中国科学技术大学 材料工程 05 校外调剂 0870 化学工程 吉林大学 应用化学 05 校外调剂 0870 化学工程 四川大学 制药
045700000787 东北大学 07030 分析化学 05 校外调剂 07030 无机化学 68 66 94 04 34 063700000004 沈阳药科大学 07030 分析化学 04 校内跨专业调剂 070303 有机化学 73 56 9 00 30 0007008903 北京大学 0780Z 药学类 05 校外调剂 070303 有机化学 75 67 09 8 4 085750830 苏州大学
2 天津科技大学学报第 32 卷第期 中的重组人胰岛素原氨基酸序列为 EEAEAEAEPK- B 链 -AAK-A 链 [12], 包含信号肽和截断的 C 链共 64 个氨基酸. 本实验以酵母生产重组胰岛素工艺中的重组人胰岛素原为研究对象, 探索研究通过表达融合蛋白增加重组胰岛素原在大肠杆菌中的可溶
![2 天津科技大学学报第 32 卷第期 中的重组人胰岛素原氨基酸序列为 EEAEAEAEPK- B 链 -AAK-A 链 [12], 包含信号肽和截断的 C 链共 64 个氨基酸. 本实验以酵母生产重组胰岛素工艺中的重组人胰岛素原为研究对象, 探索研究通过表达融合蛋白增加重组胰岛素原在大肠杆菌中的可溶](/thumbs/92/108284496.jpg "2 天津科技大学学报第 32 卷第期 中的重组人胰岛素原氨基酸序列为 EEAEAEAEPK- B 链 -AAK-A 链 [12], 包含信号肽和截断的 C 链共 64 个氨基酸. 本实验以酵母生产重组胰岛素工艺中的重组人胰岛素原为研究对象, 探索研究通过表达融合蛋白增加重组胰岛素原在大肠杆菌中的可溶")
2017-07-05 14:53:41 http://kns.cnki.net/kcms/detail/12.1355.n.20170705.1453.004.html 第 32 卷第期 2017 年月 天津科技大学学报 Journal of Tianjin University of Science & Technology Vol. 32 No. 2017 DOI:10.13364/j.issn.1672-6510.20160103
标题
第 36 卷第 10 期西南大学学报 ( 自然科学版 ) 2014 年 10 月 Vol.36 No.10 JournalofSouthwestUniversity (NaturalScienceEdition) Oct. 2014 DOI:10.13718/j.cnki.xdzk.2014.10.013 家蚕核型多角体病毒 IE1 的 1 多克隆抗体制备及鉴定 董战旗 1, 张军 1, 胡楠 1,
2 中国生物工程杂志 5 8 方 法 重组质粒的构建及蛋白的表达 纯化和检测 () 基因序列来源于 81 数据库 在其 8 端添加 个 +, 的标签和 05 蛋白酶切位点 由生工生物工程有限公司 上海 全基因合成 总长度 0 " < 质粒为表达载体 构建 0 " "+," () 表达载体. 合成不含
中国生物工程杂志! 蛋白单克隆抗体的制备及其表征 李 孜 包欣晨 高向东 陆小冬 徐 晨 中国药科大学生命科学与技术学院 南京 北京三元基因工程有限公司 北京 摘要 目的 用 () 蛋白免疫小鼠 获得 () 特异性单克隆抗体 为 () 的含量测定提供基础 方法 通过全基因合成的方法获得目的基因序列 转化大肠杆菌 * 细胞诱导 +," () 及 () 蛋白表达 纯化后用作抗原免疫小鼠 取脾融合 筛选稳定分泌抗体的阳性细胞株
SNAT2 mrna SNAT2 mr- NA 2 SNAT SNAT2 12 SNAT2 SNAT2 SNAT2 SNAT2 SNAT2 SNAT pet28a+ pbk - CMVΔ SNAT2 - HA pbk - CMV -
4 2 5 Vol 42 No 5 2 0 1 3 1 0 Journal of Shanghai Normal UniversityNatural Sciences Oct 2 0 1 3 2SNAT2 1 1 2* 1 200234 2 110016 钠离子依赖的中性氨基酸转运蛋白 2( SNAT2) 属于 SLC38 家族, 参与小的中性氨基酸跨膜转运, 在哺乳动物组织中广泛表达 SNAT2
Microsoft Word - 11吴双林.doc
生物工程学报 Chin J Biotech 2009, November 25; 25(11): 1664-1670 journals.im.ac.cn Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@im.ac.cn 2009 Institute of Microbiology, CAS & CSM, All rights reserved
期 江学斌等 猪源抗菌肽 在毕赤酵母中的表达及鉴定 剂来调节机体免疫系统 在抗感染中发挥重要作 用 抗菌肽成为新一代的抗菌 抗病毒 抗癌药物 但天然抗菌肽的来源少 成本高 无法满足临床试用和基础研究的需要 而人工合成成本高 所以 采用重组表达的方法可大量获得抗菌肽 以满足其抗菌作用机理研究及开发成一
中国畜牧兽医! " 猪源抗菌肽 / 2 在毕赤酵母中的表达及鉴定 江学斌 陈嘉蔚 杨 军 刘顺枝 肖安吉 卢志鹏 楚品品 黄朝远 蔡海明 马苗鹏 张玲华 广州大学生物工程研究所 广州 华南农业大学生命科学学院 广东省农业生物蛋白质功能与调控重点实验室 广州 摘 要 本试验旨在实现猪 防御素 /&!!!1 在毕赤酵母中的表达 获得有抗菌活性的抗菌肽 1 根据 的氨基酸序列和酵母密码子偏好性 设计优化其核苷酸序列
Microsoft Word ?1709gc100186郑惠玲.doc
生物工程学报 Chin J Biotech 2010, December 25; 26(12): 1704 1709 journals.im.ac.cn Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@im.ac.cn 2010 CJB, All rights reserved. 生物技术与方法 抗山羊 ΔfosB 基因表达产物抗体的制备及应用
中 国 畜 牧 兽 医 卷 基因组的 89 区 开放阅读框 ( 约为 % 共编码 个氨基酸 由于 基因组中 含量过高 扩增全长较困难 因此通常截取含 有 & 蛋白抗原表位的一段基因片段进行表达 研究证实 & 蛋白是抗体的主要靶子 虽然在猪体内存在着 &&&1 核衣壳蛋白等抗体 但在行使免疫性和诱导免
中国畜牧兽医! " 猪伪狂犬病病毒 " 蛋白表达及免疫原性分析 贾 刚 樊梅娜 谷 巍 山东宝来利来生物工程股份有限公司研究院 泰安 泰安大凡神农制药有限公司研究院 泰安 摘 要 本试验旨在研究猪伪狂犬病病毒 '"%& 蛋白的表达并分析其免疫原性 以 病毒液为模板 设计特异性引物 扩增大小为 %' 的保守片段并测序 将其克隆到表达载体 '1" 中 转化表达菌 9)1 经诱导表达 纯化得到目的蛋白 进行
Really Good Antibodies Bethyl 二抗产品册 超过 670 种抗小鼠 兔子 山羊和大鼠的二抗 bethyl.com
Really Good Antibodies Bethyl 二抗产品册 超过 670 种抗小鼠 兔子 山羊和大鼠的二抗 bethyl.com Bethyl 公司 Bethyl Laboratories, Inc. ) 成立于1972年 一直秉承改善生活的理念致力于科学研究的理念 提供高质量的抗体产品 和抗体定制服务 Bethyl所销售的每一个抗体都是在德克萨斯州的蒙哥马利的唯一工厂生产 并且都经过Bethyl
Microsoft Word gc170117蔡鑫娜
1276 生物工程学报 Chinese Journal of Biotechnology http://journals.im.ac.cn/cjbcn DOI: 10.13345/j.cjb.170117 蔡鑫娜等 / 猪繁殖与呼吸综合征病毒 nsp4 抗体制备与鉴定 August 25, 2017, 33(8): 1276 1283 2017 Chin J Biotech, All rights
Polyclonal Goat Anti-Rabbit IgG *HRP
亲硫层析介质 (6FF) Thiophilic Adsorbent Beads 6FF 货号 BDTL0025-5 BDTL0025-10 BDTL0025-50 BDTL0025-250 规格 50ml 250ml 1. 产品介绍本品可以快速有效地从血清 腹水或组织培养液中纯化抗体 本品的配体主要通过与抗体形成电子供体 - 受体复合物, 从而达到对抗体的选择性吸附 本品使用耐压的基质, 可以耐受最高
2010年执业药师考试模拟题直接答案版之专业知识一.doc
在 药 品 质 量 标 准 中, 药 品 的 外 观 臭 味 等 内 容 归 属 的 项 目 为 性 状 www.alllw.com 误 差 中 属 于 偶 然 误 差 的 是 温 度 波 动 引 入 的 误 差 中 国 药 品 通 用 名 称 的 英 文 简 称 是 CADN 用 酸 度 计 测 定 溶 液 的 ph 值, 测 定 前 应 用 PH 值 与 供 试 液 较 接 近 的 一 种 标
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213456!"# $ % # %557;&/55/?5,/ @@@!88>>!"#!$% &'()*+ 武汉市疾病预防控制中心 武汉 /&55, % 华中科技大学同济医学院病原生物学系微生物教研室 武汉 /&55&5 & 武汉市第十一医院 武汉 /&5555,- O ' 0 ' =! 6!, 2 M*34!. 5 '2 ' 0 0* 6) 7 88^9:;0, 6! 89-4 O?@ 7%58
28 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology Vol.37No.7207 同时含有 T 细胞和 B 细胞的优势抗原表位的 HCMV 疫苗, 能同时诱导体液免疫和细胞免疫反应, 可以有效防治 HCMV 感染, 为今后相关疫苗研究及 HCMV 相关疾病的防治奠定基础 材料与方法. 材料
中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,207,37(7):27 33 DOI:0.3523/j.cb.2070707 人巨细胞病毒抗原表位的重组表达及免疫原性分析 王 蒙 孙文辉 姬芳玲 蒲中机 2 李寅生 包永明 ( 大连理工大学生命科学与技术学院大连 6024 2 大连市药品检验所大连 6029) 摘要目的 : 用大肠杆菌表达系统表达人巨细胞病毒 (HCMV)pp65 蛋白和
南通大学杂志社 南通大学学报 医学版. */(& 0 1&( () (' / ' '-& -' (- 评价血清 %'8$ 在肝细胞肝癌诊断中的作用 张 玉 邵建国 陈 琳 卞兆连 管海涛 南京中医药大学 南京 江苏省南通市第三人民医院肝病研究所 摘 要 目的 探讨血清 %'8$ 作为一种新的生物标志
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- 国际流行病学传染病学杂志 年 月第 卷第 期!" #$% & 流感病毒为 & 病毒 目前已有 余种亚 ( 型 且持续变异 对流感的防控带来巨大挑战 根据核蛋白 ) 和基质蛋白 * 抗原性的不同 流感病毒可分为甲乙丙三型 其中甲型流感病毒引起的 ( 病症最严重 ) 在不同亚型的甲型流感病毒中高度保
国际流行病学传染病学杂志 年 月第 卷第 期!" #$% & 论著 甲型流感病毒核蛋白单克隆抗体制备及其初步应用 张儒轩沃恩康丁建祖方迪陈帅帅杨新燕郭潮潭 (--( 杭州 浙江省医学科学院生物工程研究所通信作者 郭潮潭 ) 1"9))(" #
2004级研究生现代免疫学实验技术结业报告
PCR PCR PCR RT-PCR PCR (Polymerase Chain Reaction,PCR) 80 DNA, DNA PCR PCR PCR DNA PCR -- -- DNA DNA 93 DNA PCR DNA DNA ( ) DNA 55 DNA DNA -- TaqDNA dntp DNA -- -- PCR PCR DNA DNA Y (1 X) n Y DNA X (Y)
保健食品功能学评价程序和检验方法
保 健 食 品 功 能 学 评 价 程 序 和 检 验 方 法 (1996 年 7 月 18 日 卫 监 发 [1996]38 号 发 布, 自 发 布 之 日 起 实 行 ) 1. 主 题 内 容 和 适 用 范 围 本 程 序 和 检 验 方 法 规 定 了 评 价 食 品 保 健 作 用 的 统 一 程 序 和 检 验 方 法 本 程 序 和 检 验 方 法 适 用 于 评 价 食 品 的 免
国内高等医学院校基础医学二级学科评价结果（1）
国内高等校基础医学二级学科竞争力评价简介 北京大学医学图书馆参考国内外各项评价指标体系, 建立了一套基础医学二级学科竞争力评价指标体系 分别从人才队伍 科学研究和教学成果三方面一共涉及 34 项指标, 对全国 39 家校的 12 个基础医学二级学科进行了评价 我们已经连续做了 4 年的评价,2012 年度的评价结果见下表或 http://library.bjmu.edu.cn/ 名 次 2012 年度国内高等校基础医学二级学科评价结果
标题
Vol. 36 高 等 学 校 化 学 学 报 No. 5 2015 年 5 月 摇 摇 摇 摇 摇 摇 CHEMICAL JOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES 摇 摇 摇 摇 摇 摇 886 ~ 892 摇 摇 doi: 10. 7503 / cjcu20140965 一 种 新 的 混 合 斑 精 子 分 离 方 法 伍 贤 军 1,2, 赵 摇 兵 2, 缪 摇 璇
M2 (M2e)23, M2e CRM197 CRM197-N389 CRM197-N190 N C SDS-PAGE A,M2e, (AUC),, M2e-(CRM197-N190)(CRM197- [8],M2e,, N190)-M2e, M2e,, (HBc) M2e (O19
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33 4 2017 6 CHINESEJOURNALOF VIROLOGY Vol.33 No.4 June 2017 M2e CRM197 1 1 2 1, 2 1,2 1,2 1,2 * 1,2, (1., 361102; 2., 361102) :, M2 (M2e),, (CRM197) CRM197,M2eCRM197(aa1~535) CRM197-N190 (aa1~190) CRM197-N389(aa1~389)C
复旦学报 医学版 年 月 #!"$(" "!!!-!$ $,$"!!!# % %2"!! "- % $%%#% $$"$ ) &$2 #! % "$2"!!"$ "- $ % $!##$& %!"!! $! ""!" (% "! :!" %!$ %" $ % $! -$$!% $!"
复旦学报 医学版 人源吲哚胺 54 双加氧酶 4 的表达与纯化 李娟娟 李 洋 杨 青 复旦大学生命科学学院生物化学系 上海 云南天然产物与生物制药协同创新中心 昆明 摘要 目的 构建人源吲哚胺 双加氧酶 % 2 #! % 原核表达载体 表达 纯化获得 % 蛋白 方法 采用基因工程手段获得 % 原核表达载体并转化表达菌株 筛选合适的重组质粒及异丙基 硫代半乳糖苷!"" $%#$! 浓度进行蛋白表达
食 品 与 生 物 技 术 学 报 第 卷 列入我国 的植物多酚黄酮抗氧剂 防治高血脂和心血管疾病
第 卷第 期 年 月 食品与生物技术学报 植物多酚黄酮抗氧化剂与人体健康 尤新 中国食品添加剂和配料生产应用工业协会 北京 主要综述了对植物多酚黄酮类物质的生物活性和安全性 其内容包括 茶多酚 甘草黄酮 竹叶黄酮 大豆异黄酮以及从各种鲜果提取物的功能成分 如葡萄提取物 杨梅提取物 橄榄提取 物 乌饭树果提取物等 介绍了植物多酚黄酮的国际市场信息及相关的研究机构和生产单位 多酚 黄酮 健康 食 品 与
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畜 牧 兽 医 学 报 卷 2,:+).)+(-5*(.*+))*-*.((0**3-*23-*+ *2* **-(+).).2-*))*3-*))5)(3*.2.-*. 5*.)*30-2*-*.!%3-*+**2-)***. 2**)-*)*-*..0(.(*-(2*-**)** 2*.*)-*
畜牧兽医学报 马泰勒虫新疆株 基因的原核表达及间接 2* 检测方法的建立 宋瑞其 王盼举 王振宝 瓦热斯 吐尔松 闻秀秀 张 杨 巴音查汗 新疆农业大学动物医学学院 乌鲁木齐 伊犁出入境检验检疫局综合技术服务中心 伊宁 摘 要 马泰勒虫裂殖子表面抗原 是用于马梨形虫病诊断的重要靶抗原之一 为建立实用有效的间接酶联免疫吸附试验方法 笔者根据马泰勒虫 基因序列设计并合成引物 将新疆株 全基因序列克隆于原核表达载体
食 品 与 生 物 技 术 学 报 第 卷
第 卷第 期 年 月 食品与生物技术学报 山药多糖研究进展 王洪新 王远辉 江南大学食品学院 江苏无锡 山药是药食兼用植物 山药多糖被认为是山药中重要的活性物质 综述山药多糖的提取分离工艺 纯化方法 化学结构分析和生理活性研究的现状 为未来研究山药多糖的新提取工艺 探讨构效关系 作用机制提供参考 山药多糖 研究进展 提取与分离 食 品 与 生 物 技 术 学 报 第 卷 第 期 王洪新等 山药多糖研究进展
2010 年 第 6 期 总 第 46 期 双 月 刊 2010.12.30 内 部 资 料 免 费 交 流 注 意 保 存 欢 迎 投 稿 主 管 : 江 苏 省 质 量 技 术 监 督 局 主 办 : 江 苏 省 特 种 设 备 管 理 协 会 江 苏 省 特 种 设 备 安 全 监 督 检 验
2010 年 第 6 期 总 第 46 期 双 月 刊 2010.12.30 内 部 资 料 免 费 交 流 注 意 保 存 欢 迎 投 稿 主 管 : 江 苏 省 质 量 技 术 监 督 局 主 办 : 江 苏 省 特 种 设 备 管 理 协 会 江 苏 省 特 种 设 备 安 全 监 督 检 验 研 究 院 编 辑 出 版 : 编 辑 部 主 编 : 董 建 民 副 主 编 : 陆 南 胜 顾
第 48 卷第 2 期洪流, 等 : 葡萄球菌核酸酶的制备及性质研究 215 中性粒细胞是先天免疫系统的重要组成部分, 属于炎症反应的一线细胞, 在抵抗微生物入侵中发挥着重要作用 [6-7] 活化的中性粒细胞会释放自身线粒体和核内染色质 DNA 到胞外, 包裹各种颗粒蛋白酶形成纤维网样结构, 称为中
![第 48 卷第 2 期洪流, 等 : 葡萄球菌核酸酶的制备及性质研究 215 中性粒细胞是先天免疫系统的重要组成部分, 属于炎症反应的一线细胞, 在抵抗微生物入侵中发挥着重要作用 [6-7] 活化的中性粒细胞会释放自身线粒体和核内染色质 DNA 到胞外, 包裹各种颗粒蛋白酶形成纤维网样结构, 称为中](/thumbs/92/109197576.jpg "第 48 卷第 2 期洪流, 等 : 葡萄球菌核酸酶的制备及性质研究 215 中性粒细胞是先天免疫系统的重要组成部分, 属于炎症反应的一线细胞, 在抵抗微生物入侵中发挥着重要作用 [6-7] 活化的中性粒细胞会释放自身线粒体和核内染色质 DNA 到胞外, 包裹各种颗粒蛋白酶形成纤维网样结构, 称为中")
214 学报 JournalofChinaPharmaceuticalUniversity 2017,48(2):214-219 葡萄球菌核酸酶的制备及性质研究 洪流, 郎君超, 贺冬梅, 刘坤锋, 吴洁 ( 中国药科大学微基因药学实验室, 南京 210009) 摘 要 为获得纯度较高的葡萄球菌核酸酶 (SNase) 以研究其与糖尿病的关系, 构建基因工程表达菌 E colibl21/pet28a
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227 ELISA 刘 沙 洲 1,2, 桑 小 雪 1, 欧 阳 华 学 3, 雷 绍 荣 3, 白 林 含 1, * (1. 四 川 大 学 生 命 科 学 学 院, 四 川 成 都 610065;2. 成 都 市 食 品 药 品 检 测 中 心, 四 川 成 都 610045; 3. 四 川 省 农 业 科 学 院 分 析 测 试 中 心, 四 川 成 都 610066) 目 的 : 比 较
,() 刘 鹏 展 等 :NT-proBNP 特 异 性 单 克 隆 抗 体 的 制 备 及 鉴 定 9 是 诊 断 心 力 衰 竭 的 一 个 具 有 划 时 代 意 义 的 客 观 标 志 物 [] 目 前 国 际 上 检 测 人 NT-proBNP 常 用 的 是 免 疫 学 方 法, 主 要
![,() 刘 鹏 展 等 :NT-proBNP 特 异 性 单 克 隆 抗 体 的 制 备 及 鉴 定 9 是 诊 断 心 力 衰 竭 的 一 个 具 有 划 时 代 意 义 的 客 观 标 志 物 [] 目 前 国 际 上 检 测 人 NT-proBNP 常 用 的 是 免 疫 学 方 法, 主 要](/thumbs/41/22594594.jpg ",() 刘 鹏 展 等 :NT-proBNP 特 异 性 单 克 隆 抗 体 的 制 备 及 鉴 定 9 是 诊 断 心 力 衰 竭 的 一 个 具 有 划 时 代 意 义 的 客 观 标 志 物 [] 目 前 国 际 上 检 测 人 NT-proBNP 常 用 的 是 免 疫 学 方 法, 主 要")
生物技术通报 BIOTECHNOLOGY 研究报告 BULLETIN, ():8-5 NT-proBNP 特异性单克隆抗体的制备及鉴定 刘鹏展 黄绮玲 何小维 李文美 张文琪 张赛. 华南理工大学食品科学与工程学院 广州 5. 广州万孚生物技术股份有限公司 广州 5 摘 要 旨在制备并鉴定抗人 NT-proBNP 特异性单克隆抗体 采用重组 NT-proBNP 蛋白免疫 Balb/c 小鼠 取血清效价高的
第十一章 颈部疾病病人的护理
第 十 一 章 颈 部 疾 病 病 人 的 护 理 学 习 目 标 1. 了 解 颈 部 常 见 肿 块 病 人 的 身 体 状 况 及 处 理 原 则 ; 能 提 出 甲 状 腺 肿 瘤 甲 状 腺 功 能 亢 进 病 人 的 护 理 诊 断 并 制 定 出 护 理 措 施 2. 熟 悉 甲 状 腺 肿 瘤 甲 状 腺 功 能 亢 进 病 人 的 身 体 状 况 手 术 适 应 证 3. 掌 握
148 激光生物学报第 25 卷 screening.result:therecombinantproteinwasthehumanprocalcitonin,whichhadgoodimmunoreacitvityandimmu nogenicity,and7monoclonalantibodie
第 25 卷第 2 期 2016 年 4 月 激光生物学报 ACTA LASER BIOLOGY SINICA Vol.25No.2 Apr.2016 doi:10.3969/j.isn.1007 7146.2016.02.009 降钙素原的原核表达及单克隆抗体制备 郑姣 1a,b, 邱义兰 1b, 廖 晶 1a, 李晓丹 1a, 张坚松 1a, 吴意 1c, 何赛 1b, 梁湘辉 2, 郭向荣 1b
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新型荧光蛋白与重组 FLAG 标签的融合表达纯化及与抗 FLAG 单克隆抗体 M2 亲和常数测定 易科, 孙婷婷, 朱聪, 高晓莲浙江理工大学生命科学学院, 杭州 (310018) E-mail:yike311@126.com 摘要 : 通过微流体芯片技术与合成生物学方法合成新型荧光蛋白基因, 从中筛选出 5 个新型荧光蛋白, 集中对其中一个绿色荧光蛋白 (G2) 和一个红色荧光蛋白 (H10) 进行性质鉴定
)+ 国际流行病学传染病学杂志 年 月第 卷第 期!" #$ %&%$ '!"! 换是甲型流感经常暴发的重要原因 病毒包膜上的另外一种膜蛋白 蛋白由于其保守性高 已成为 ()* 疫苗开发和药物研究的热点 而 蛋白胞外域 在人甲型流感中高度保守 与禽流感及猪流感仅有少数氨基酸不同 蛋白前 + 个氨基酸
国际流行病学传染病学杂志 年 月第 卷第 期!" #$ %&%$ '!"! -= 甲型流感病毒 蛋白胞外域单克隆抗体的制备及其生物特性 刘亚辉沃恩康杨新燕徐琦杨灿邓冠聪郭潮潭 -- 杭州 浙江省医学科学院生物工程研究所通信作者 郭潮潭 +",$1+!+-$! %-
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生物工程学报 Chin J Biotech 2009, October 25; 25(10): 1572-1578 journals.im.ac.cn Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@im.ac.cn 2009 Institute of Microbiology, CAS & CSM, All rights reserved 生物技术与方法
中華民國第 54 屆中小學科學展覽會
中 華 民 國 第 54 屆 中 小 學 科 學 展 覽 會 作 品 說 明 書 科 別 : 化 學 科 組 別 : 高 中 組 作 品 名 稱 : 吸 金 大 法 膠 體 溶 液 對 重 金 屬 離 子 的 探 討 關 鍵 詞 : 膠 體 溶 液 重 金 屬 離 子 編 號 : 摘 要 本 實 驗 的 目 標 : 比 較 不 同 種 類 及 不 同 的 膠 體 溶 液 與 重 金 屬 離 子 混
第 卷 -.+$$$-+($-.(+"$(+$%"(+$#'$+(.$+*(.$+(%$%+.$$$+$$+-$( 7-($++$"$($(+'$+'$%*$$&$.$+$%+ $$".(+$+.$+'$+'( ".($#-$4$+" +'$".(+%+$$$++(* %$+$+$"(+'$%+$"
第 卷第 期 年 月 "## $%# - 基础医学 含 '- 野生及突变结合位点的胰岛素受体 '6,78&' 区报告基因载体的构建和鉴定 王美晨 王 璇 蓝 茜 李 癑 刘 莉 伊 静 李 靖 宋刘梅 马莎蕊 宁启兰 李冬民 西安交通大学医学部 遗传学与分子生物学系 环境与疾病相关基因教育部重点实验室 级临床医学七年制 级临床医学五年制 陕西西安 ( 摘要 目的 利用 6< *%&$%', :%''"D$"
细 胞 生 物 学 实 验 指 导 细 胞 生 物 教 研 室 目 录 实 验 一 动 物 细 胞 的 基 本 形 态 观 察 和 显 微 测 量 1 实 验 二 线 粒 体 的 活 体 染 色 及 电 镜 照 片 观 察 4 实 验 三 液 泡 系 的 活 体 染 色 及 电 镜 照 片 观 察 6 实 验 四 细 胞 生 理 活 动 的 观 察 7 实 验 五 细 胞 组 分 的 化 学 反 应
生物技术通报 材料 方法
生物技术通报 高曰文 朱耀明 王艳林 朱晨宇 秦烨 胡汉卿 韩钰 旨在探讨盐酸普鲁卡因 对人结肠癌 细胞 基因甲基化及表达的影响 应用巢式双重 甲基化特异性聚合酶链反应 检测盐酸普鲁卡因处理前后 细胞中 基因启动子的甲基 化水平 逆转录 聚合酶链反应 和蛋白印迹技术观察 细胞内 基因表达情况 检测发现人结肠癌 细胞中 基因存在甲基化 经盐酸普鲁卡因处理能够使 基因甲基化水平下降 和蛋白印迹分析结果显
42 山东科学 2013 年 导向治疗是一种有望代替化疗的新的治疗手段, 应用免疫毒素或导向毒素是实现导向治疗的一个重要的发展方向, 通过特异性抗体或细胞因子 激素等与毒素连接, 前者作为导向部分即配体, 可以引导分子到达肿瘤部位并与肿瘤细胞表面过量表达的该种受体结合 ; 后者作为毒素部分, 即杀灭
山东科学 SHANDONG SCIENCE 第 26 卷 第 2 期 2013 年 4 月出版 Vol.26No.2Apr.2013 DOI:10.3976/j.isn.1002-4026.2013.02.008 重组人促性腺激素 - 铜绿假单胞菌外毒素 A 蛋白的可溶性表达 纯化和对肿瘤细胞的抑制活性 郭凯, 赵晓燕, 周红姿, 陈凯, 李纪顺, 陈泉, 杨合同 ( 山东省科学院中日友好生物技术研究中心,
材料导报 研究篇 年 月 下 第 卷第 期 种球的制备 单步溶胀法制备分子印迹聚合物微球 洗脱处理 种子溶胀聚合机理 种球用量的影响
水相中 组氨酸单分散分子印迹聚合物微球的合成 表征及其识别性能研究 李思平等 李思平 徐伟箭 较佳工艺条件下 在水性体系中选用无皂乳液聚合法制得的单分散微米级聚苯乙烯微球为种球 分别以组氨酸 甲基丙烯酸 或丙烯酸胺 乙二醇二甲基丙烯酸酯 为模板分子 功能单体和交联剂 合成了 组氨酸分子印迹聚合物微球 研究了形貌 粒径及其分布以及模板分子与功能单体之间的相互作用 分别以 激光粒度分析仪紫外分光光度法和红外光谱表征功能单体与交联剂之间的共聚情况
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第 32 卷第 6 期 2017 年 12 月 天津科技大学学报 Journal of Tianjin University of Science & Technology Vol. 32 No.6 Dec. 2017 DOI:10.13364/j.issn.1672-6510.20160103 重组人胰岛素原在大肠杆菌中的可溶性表达 吕丹, 闫亚丽, 景丽芳, 张秋荣, 常莉, 刁爱坡, 李玉银
中国生物工程杂志! 公司 2;3 和 $ 购自 ',5 公司 92$' 底物显色液购自天根公司 92 标记的二抗山羊抗鼠 3 购自中杉生物有限公司 质粒抽提试剂盒 纯化试剂盒购自 '3 公司 引物合成和测序均在军事医学科学院生物工程研究所六室完成 个 1 单抗均为本课题组自制 & 包被液 ",<6.
中国生物工程杂志! "# 幽门螺杆菌 1 串联融合表位的表面呈现表达 封小燕 王艳春 李平超 陶好霞 王 秡 袁盛凌 王令春 王 普 刘纯杰 浙江工业大学药学院 杭州 军事医学科学院生物工程研究所病原微生物与生物安全国家重点实验室 北京 & 摘要 目的 应用表达载体. 表面呈现表达幽门螺杆菌 1 串联融合表位 方法 通过引入多克隆位点的方法改造表达呈现表达载体. 并用改造后的质粒表达幽门螺杆菌 1
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模 块 三 饲 料 及 其 加 工 利 用 模 块 目 标 了 解 饲 料 的 有 关 概 念 及 国 际 饲 料 分 类 中 八 大 类 饲 料 的 分 类 标 准 ; 掌 握 青 饲 料 粗 饲 料 青 贮 饲 料 能 量 饲 料 蛋 白 质 饲 料 矿 物 质 饲 料 饲 料 添 加 剂 的 营 养 特 性 和 利 用 特 点 ; 掌 握 各 类 饲 料 中 常 用 饲 料 原 料 的 种 类
<4D6963726F736F667420506F776572506F696E74202D20332DC1D9B4B2504352BCECD1E9B1EAB1BEB5C4B4A6C0EDA1A2B1A3B4E6BCB0BACBCBE1CCE1C8A1B7BDB7A82DD5D4C9C6C4C8205BBCE6C8DDC4A3CABD5D>
检 验 过 程 临 床 PCR 检 验 标 本 的 处 理 保 存 及 核 酸 提 取 方 法 医 师 申 请 检 验 项 目 申 请 患 者 准 备 患 者 识 别 样 本 采 集 样 本 运 送 Ⅰ Ⅱ Ⅲ 分 析 测 定 样 本 处 理 分 析 前 分 析 中 分 析 后 报 告 临 床 应 用 烟 台 市 烟 台 山 医 院 赵 善 娜 结 合 临 床 资 料 分 析 结 果 并 确 认 出
(45) β-tcp/ β -GP HTCC HTCC/ β -GP/ β -TCP 20mg/mL ( β -TCP/HTCC);(3) β -TCP 40mg/mL ( β -TCP/HTCC) 20μg h rhbmp h HTCC/ β -
: :1001-9731(2014)14-14001-07 14001 * ( 200237) : 2-2 2.1 (HTCC) ; β-tcp 2.1.1 (CSM W =5.05 10 5 )23- (GTMAC ) β - : ; ; ( β -GP )BCA : R318.08 :A ( ) DOI:10.3969/j.issn.1001-9731.2014.14.001 (rhbmp-2
2013,33(5) 孙静等 : 重组人 LIF 融合蛋白表达纯化及其活性鉴定 51 试剂盒购自 Promega;OneStepSYBRPrimeScript TM RT PCR 试剂盒购自 Takara 大连有限公司 ; 预染低分子量蛋白质 Marker 购自北京索宝莱 ; 层析填料购自 GE H
中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,2013,33(5):50 55 重组人 LIF 融合蛋白表达纯化及其活性鉴定 孙静王斌段志青胡凝珠李建芳李彦涵胡云章 ( 中国医学科学院 / 北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明 650118) 摘要目的 : 原核表达重组 hlif 融合蛋白并进行诱导表达 纯化及活性鉴定 方法 : 将 hlif 基因克隆至 pthiohisa
期 齐 心等 噬菌体 ' 穿孔素 ) 的克隆 表达及其活性分析 定时间以寡聚体形式聚集于细胞膜上形成稳定的跨膜通道 造成细胞膜损伤 从而释放细胞内的溶菌酶 水解细胞壁中的肽聚糖层 引起细菌裂解 导致 子代噬菌体从宿主菌内释放 与噬菌体相比 穿孔素 溶菌酶系统不受噬菌体宿主谱的限制 对细菌具有广谱的裂
畜牧兽医学报 噬菌体 1 穿孔素 &% 的克隆 表达及其活性分析 齐 心 陈培培 邹 玲 刘文华 任慧英 张 灿 青岛农业大学动物医学院 青岛 摘 要 为了研究噬菌体 ' 穿孔素 ) 的特征及其对细菌的抑制作用 根据噬菌体 ' 的基因序列 设计引物 &6 扩增穿孔素 基因 并对其序列进行比对和分析 构建 ) 原核重组表达质粒 &) 在大肠杆菌 ' 中诱导表达 摸索最佳表达条件 亲和层析法纯化蛋白质
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药 品 名 氢 化 可 的 松 英 文 名 Hydrocortisone 别 名 氢 考 的 松 ; 氢 可 的 松 ; 可 的 索 ; 皮 质 醇 ; 氢 化 考 的 松 ; 氢 化 皮 质 素 ; 考 地 索 ; 氢 可 ;Cortisol 剂 型 1. 片 剂 :10mg,20mg;2. 注 射 剂 : 稀 乙 醇 溶 液 :10mg(2ml), 25mg(5ml);50mg(10ml);100mg(20ml);3.
42 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology Vol.28No RNA, 以 oligo(dt) 为引物进行反转录, 然后以上述引物进行 PCR 扩增 :0 LATaqbufer5μl dntp5μl 上游引物 μl 下游引物 μl LATaq 酶 (5U/μl)0.5μ
中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,2008,28(5):4~45 前列腺素脱氢酶在大肠杆菌中的表达纯化及鉴定 李美宁 解 军 常冰梅 张悦红 2 殷云勤 ( 山西医科大学生物化学与分子生物学教研室太原 03000) (2 山西医科大学第一医院消化检验中心太原 03000) 程牛亮 摘要 5? 羟基前列腺素脱氢酶 (PGDH) 属于抑癌基因, 在多种肿瘤中表达缺失, 在肿瘤的发生发展中起着重要作用
第一章 图 １ １ 传染病的特征 ９ Ｔ ｈ１ Ｔ ｈ２ 细胞调节机制简图 正调节 负调节 细胞因子与细菌的相互作用机制目前尚未完全明了 有实验表明 细胞因子与细菌之间 存在有互利和互抑双重效应 例如 Ｔ Ｎ Ｆα 和 ＩＦＮγ 可抑制放线菌的生长而 ＩＬ ６ 的作用则 反之 ＩＬ １ ２ 和 ＧＭ ＣＳＦ 可促进某些致病性大肠杆菌生长而 ＩＬ １ｒａ 可抑制之 研究表 明 某些致病性大肠杆菌有与
g ml 10% ph 色谱条件 kinetex C μm 100 A 4. 6 mm 150 mm 25 5 μl A B 10 mmol /L ml /min
25 4 2013 8 监测技术 5 1 2 1 ( 1. 江苏省疾病预防控制中心, 江苏南京 210009; 2. 南京医科大学第二附属医院, 江苏南京 210029) 5 Phenomenex kinetex C 18 2. 6 μm 4. 6 mm 150 mm 10 mmol /L ph 2. 5 + 60 40 DAD 280 nm 5 20. 0 mg /L ~ 100 mg /L 0.
54 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology Vol.28No 均为国产分析纯或生化试剂 1.2 试验方法 Monelin 重组工程菌的构建单链 monelin 基因的设计及人工合成 : 根据组成 Monelin 的氨基酸序列 [5,6], 在 A 链和 B
![54 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology Vol.28No 均为国产分析纯或生化试剂 1.2 试验方法 Monelin 重组工程菌的构建单链 monelin 基因的设计及人工合成 : 根据组成 Monelin 的氨基酸序列 [5,6], 在 A 链和 B](/thumbs/91/105739293.jpg "54 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology Vol.28No 均为国产分析纯或生化试剂 1.2 试验方法 Monelin 重组工程菌的构建单链 monelin 基因的设计及人工合成 : 根据组成 Monelin 的氨基酸序列 [5,6], 在 A 链和 B")
中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,2008,28(3):53~58 乳糖诱导甜蛋白 Monelin 在大肠杆菌中的表达 1 杨书慧 1 赵胜军 刘 2 军 2 闫达中 易 1 丹 (1 武汉工业学院动物营养与饲料科学湖北省重点实验室武汉 430023) (2 武汉工业学院生物与制药工程系武汉 430023) 摘要根据已报道的单链 Monelin 甜蛋白的氨基酸序列, 按大肠杆菌基因偏爱密码子,
2009,29(3) 阳泰等 : 抗禽传染性支气管炎病毒多肽疫苗 EpiA 免疫原性研究 2 察所 ; 辣根过氧化物酶标记的兔抗鸡 IgG 抗体购精博生物技术有限公司.2 方法.2. IBV 抗原表位基因 EpiA 的设计合成应用 DNAStar 分析软件综合评价 IBV 主要结构蛋白抗原表位, 结
中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,2009,29(3):20~24 抗禽传染性支气管炎病毒多肽疫苗 EpiA 免疫原性研究 阳 泰 王红宁 汪,2 雪 高 荣 唐俊妮 李玉玲 郭自城 ( 四川大学生命科学学院四川大学动物疾病防控生物工程研究中心成都 60064 2 四川农业大学动物医学院雅安 62504) 摘要设计基于 B 细胞表位和 T 细胞表位的禽传染性支气管炎病毒 (IBV)
图 对片剂累积释放度的影响
岳红坤 常明 游雅 邱树虹 王婧 乔宇 石家庄学院化工学院 河北石家庄 为筛选盐酸小檗碱胃漂浮片的处方并评价其漂浮和体外释放特性 根据辅料性质及制剂质量要求 通过单因素实验及正交试验确定影响盐酸小檗碱胃漂浮片性能的主要参数 确定了最优 处方 采用干粉直接压片制得盐酸小檗碱胃漂浮片 在人工胃液中考察其漂浮性能及溶出度 并用 紫外可见分光光度法检测其释药量 优选的处方为每片含 碳酸氢钠 羧甲基淀粉钠 聚乙二醇
中 国 畜 牧 兽 医 卷 E"'"%"01 +,"1""01""'''01'' 布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起的一种分布于世界各地的人畜共患的传染病 严重危害人类健康和 畜牧业生产 感染公畜表现为睾丸炎和附睾炎 母畜表现为流产 早产或产死胎 人感染布鲁氏菌后多表现为波状热 关节炎 脑膜炎和睾丸炎 且久
中国畜牧兽医 " 羊种布鲁氏菌 基因的克隆 原核表达及其蛋白的生物信息学分析 聂 鑫 赵天靖 曹瑞勇 彭冬梅 李国华 李亚颖 徐开莲 朱华培 庞 峰 王凤阳 杜 丽 海南大学农学院 海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室 海口市动物基因工程重点实验室 海口 摘 要 试验旨在克隆羊种布鲁氏菌 1 基因并进行原核表达和蛋白的生物信息学分析 以布鲁氏菌 株基因组为模板 参照 +" 中 株基因组 )- 序列
2013,33(3) 王晶等 : 重组蛋白 NtA PACAP 在大肠杆菌中的表达纯化及活性测定 29 连, 并加入 His 标签, 将得到的重组序列片段转入表达载体 pet 3c 中, 转化 E.coliBL21(DE3),IPTG 诱导表达 ; 表达的蛋白经离子交换层析和镍离子亲和层析纯化, 之
中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,2013,33(3):28 33 重组蛋白 NtA PACAP 在大肠杆菌中的 表达纯化及活性测定 王晶吴陆生陈小佳董濠軻沈巍张敏仪洪岸 ( 暨南大学生物医药研究院生物工程药物广东省重点实验室基因工程药物国家工程研究中心广州 510632) 摘要目的 : 通过构建 PACAP38 与 Agrin 的 N 端结构域 (NtA) 相连的重组基因的原核表达载体,
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重组 FLAG 标签的筛选 鉴定及与新型荧光蛋白的融合表达易科, 高晓莲浙江理工大学生命科学学院, 杭州 (310018) E-mail:yike311@126.com 摘要 : 以 FLAG 标签的原始序列 DYKDDDDK(FLAG4) 为模板, 设计 4 种新 FLAG 标签 FLAG1(DYKDYKYK), FLAG2(DYKGGGYK), FLAG3(DYKDYKDYK) 和 FLAG5
2009,29(4) 汪洋等 : 重组人谷氨酸脱羧酶 65 的表达及活性研究 13 5?TTAGGTACCGACGACGACGACAAGGCATCTCCGGG CTCT?3 包括 KpnⅠ 酶切位点和肠激酶酶切位点 (GACGACGACGACAAG), 下游引物 5?GCTGGATCCT GGAAC
中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,2009,29(4):12~16 重组人谷氨酸脱羧酶 65 的表达及活性研究 汪 洋 马明浩 冯震吴叶林张绪瑛金明飞黄静吴自荣 ( 华东师范大学生命科学学院上海 200062) 摘要目的 : 获得有活性的人谷氨酸脱羧酶 65(humanglutamatedecarboxylase65,hGAD65) 用于 Ⅰ 型糖尿病 (type1diabetesmelitus,t1dm)
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摇 南京农业大学学报摇 2011,34(3):117-121 摇 Journal of Nanjing Agricultural University http: / / nauxb. njau. edu. cn 試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試
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中 草 药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 45 卷 第 4 期 2014 年 2 月 509 UPLC-MS/MS 法 快 速 检 测 减 肥 类 保 健 品 中 13 种 非 法 添 加 化 学 成 分 朱 健, 裘 一 婧, 沈 国 芳 杭 州 市 食 品 药 品 检 验 研 究 院, 浙 江 杭 州 310017 摘 要 : 目 的 建 立 保
标题
吉林农业大学学报 ２０１６ ３８ １ ８７ ９１ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｊｉｌｉｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｈｔｔｐ ｘｕｅｂａｏ ｊｌａｕ ｅｄｕ ｃｎ Ｅ ｍａｉｌ ｊｌｎｄｘｂ ｖｉｐ ｓｉｎａ ｃｏｍ 神 经 生 长 因 子 ｍｒｎａ 在 鹅 等 级 前 卵 泡 中 的 表达 刘璐璐 隋玉健 朱海洋 武惠岩 杨 辉 孙永峰 吉林农业大学动物科学技术学院 长春 １３０１１８
中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,2012,32(6):1 6 殏 檪檪 殏 研究报告 殏 檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪 殏 HPV16L2 肽段偶联 AP205VLP 的原核表达 及免疫原性分析 姜博毕研伟张营营蔡路奎姬秋彦李智华 ( 中国医学科学院 / 北京协和医学
中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,2012,32(6):1 6 檪檪 研究报告 檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪 HPV16L2 肽段偶联 AP205VLP 的原核表达 及免疫原性分析 姜博毕研伟张营营蔡路奎姬秋彦李智华 ( 中国医学科学院 / 北京协和医学院医学生物学研究所昆明 650118) 徐维明 摘要目的 : 将编码 HPV16 衣壳蛋白 L2 的 65~71 112~120