28 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology Vol.37No.7207 同时含有 T 细胞和 B 细胞的优势抗原表位的 HCMV 疫苗, 能同时诱导体液免疫和细胞免疫反应, 可以有效防治 HCMV 感染, 为今后相关疫苗研究及 HCMV 相关疾病的防治奠定基础 材料与方法. 材料
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- 雁间 邬
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1 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,207,37(7):27 33 DOI:0.3523/j.cb 人巨细胞病毒抗原表位的重组表达及免疫原性分析 王 蒙 孙文辉 姬芳玲 蒲中机 2 李寅生 包永明 ( 大连理工大学生命科学与技术学院大连 大连市药品检验所大连 6029) 摘要目的 : 用大肠杆菌表达系统表达人巨细胞病毒 (HCMV)pp65 蛋白和 gb 蛋白的优势抗原表位基因, 制成 HCMV 亚单位疫苗, 探究其在 Balb/c 小鼠体内的体液免疫和细胞免疫活性 方法 : 选取 pp65 蛋白的 490~508aa 和 gb 蛋白的 607~62aa 的基因片段, 经 PCR 扩增目的片段, 连接表达载体 pet 32a(+), 转化 BL2(DE3)plys 菌株, 十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶 (SDS PAGE) 分析蛋白质表达, 金属螯合亲和镍柱法纯化目的蛋白 重组蛋白免疫 Balb/c 小鼠, Westernbloting 法和间接 ELISA 法检测重组蛋白的体液免疫活性 ; 通过流式细胞仪和双抗夹心 ELISA 法检测重组蛋白的细胞免疫活性 结果 : 获得分子质量约为 22kDa 的融合蛋白,Western bloting 检测显示抗体有特异性, 间接 ELISA 法检测其效价为 与对照组相比, 实验组小鼠外周血中 CD4 + T 细胞和 CD8 + T 细胞的数量, 以及 IFN γ IL 2 IL 2 的含量有显著提高 (P<0.0) 结论: 制备的具有免疫优势抗原表位的重组蛋白能诱导小鼠产生较强的体液免疫和细胞免疫反应 关键词人巨细胞病毒 pp65 蛋白 gb 蛋白体液免疫细胞免疫中图分类号 Q86 人巨细胞病毒 (humancytomegalovirus,hcmv) 属于疱疹病毒科的双链 DNA 病毒, 病毒颗粒由外到内主要由包膜 被膜 核衣壳组成 [] HCMV 在人体内的感染以潜伏感染为主 当人体免疫功能不成熟或缺陷时, 潜伏病毒重新激活 原发性 HCMV 感染或新 HCMV 毒株的感染都可引起病毒大量增殖, 导致损伤和疾病 [2 4] 研究发现并证实,HCMV 参与多种疾病的发生, 如单核细胞增多症 CMV 综合征 胃肠疾病 肺炎 肝炎 动脉粥样硬化病等 ;HCMV 还会引起先天性的感染, 导致胎儿宫内发育迟缓, 脾脏肿大, 血小板减少, 脉 [5 8] 络膜视网膜炎, 肝炎等先天性疾病 因此,HCMV 也是影响优生优育的重要致病因子之一 机体受 HCMV 原发感染后, 会建立起长期的免疫机制 由于 HCMV 属于胞内感染, 只有体液免疫和细胞免疫的共同作用才能彻底有效的清除病毒 机体对 HCMV 的体液免疫反应是由位于病毒颗粒外层的糖蛋 收稿日期 : 修回日期 : 通讯作者, 电子信箱 :biosci@ dlut.edu.cn;huhuhu @ 26.com 白主导激发的 包膜糖蛋白 B(glycoproteinB,gB) 是研究较多的糖蛋白, 它能激发主要的中和反应, 是中和抗体和保护性抗体的重要靶标 [9 ] 而外被磷蛋白 65 (phosphoprotein65,pp65) 是可诱导 CD8 + CTL 反应的最具有免疫原性的病毒抗原, 在细胞免疫中发挥重要的作用 [2] 到目前为止, 仍没有 HCMV 疫苗可以获准上市 近年来, 国内外学者对于 HCMV 疫苗的研制已取得一定进展, 如 HCMVpp65 蛋白疫苗 gb 蛋白疫苗 DNA 疫苗等 [3 7], 通过实验证明可以诱导机体的体液免疫或细胞免疫反应 能同时引起机体体液免疫和细胞免疫的亚单位疫苗却鲜有报道 一方面, 重组表达一种蛋白质同时实现体液免疫和细胞免疫尚需技术突破 ; 另一方面, 分别重组表达 pp65 和 gb 部分蛋白质, 进行复合制备抗原也需要大量的优化工作 根据文献及生物信息学方法分析,pp65 蛋白的 490~508 位氨基酸序列和 gb 蛋白的 607~62 位氨基酸序列具有较强的免疫原性, 可认定为免疫优势表位 因此, 本研究选取 pp65 490~508 和 gb 607~62 基因, 表达成融合蛋白, 制备一种
2 28 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology Vol.37No.7207 同时含有 T 细胞和 B 细胞的优势抗原表位的 HCMV 疫苗, 能同时诱导体液免疫和细胞免疫反应, 可以有效防治 HCMV 感染, 为今后相关疫苗研究及 HCMV 相关疾病的防治奠定基础 材料与方法. 材料 E.coliDH5α 和 E.coliBL2(DE3)plys 菌株均为本实验室保存 pet 32a 载体用于蛋白质表达, 为本实验室保存 质粒提取 DNA 回收试剂盒购自 Omega 公司,BamHΙ 和 HindⅢ 限制性内切核酸酶 Taq 酶 DNA 连接酶 DNAMarker 购自宝生物工程 ( 大连 ) 有限公司, 引物由华大基因有限公司合成 IFN γ 定量检测试剂盒购自美国 R&D 公司 ( 进口分装 ),IL 2 IL 2 定量检测试剂盒购自上海朗顿生物科技有限公司 人 HCMV 阳性血清由辽阳市第三人民医院检验科收集, 二抗为辣根过氧化为酶 (HRP) 标记的羊抗鼠 IgG 抗体和羊抗人 IgG 抗体, 购自武汉三鹰生物科技有限公司 Balb/c 小鼠由大连医科大学动物研究中心提供.2 方法.2. pp65 490~508 GGGGS gb 607~62 基因的克隆及重组质粒的构建基于 Genbank 中 HCMVAD69 株 pp65 基因序列和 gb 基因序列, 设计选取 pp65 蛋白 490~ 508aa 和 gb 蛋白的 607~62aa 的基因片段, 两者之间加入 GGGGS 柔链区, 人工合成编码基因 ; 以合成编码基因序列作为模板, 设计引物 P (5 GACACGGATCCGGCATCCTGGCCCGCAAC) P2(5 GTGTCAAGCTTTCACCCGGCGATGAAGAT), 酶切位点为 BamHΙ 和 HindⅢ PCR 反应条件为 :94 预变性 5min;94 变性 30s,55 退火 30s,72 延伸 min,30 个循环 ;72 延伸 0min 经扩增后的目的基因和 pet 32a 载体用 BamHΙ 和 HindⅢ 双酶切,% 琼脂糖凝胶电泳及 DNA 回收纯化后, 用 T4DNA 连接酶 6 过夜连接, 将连接产物转化 E.coliDH5α 感受态细胞 提取质粒进行双酶切验证, 并送至华大基因有限公司测序, 获得阳性克隆 再将重组质粒转化 BL2(DE3)plys 感受态细胞, 提取质粒并测序, 用 BLAST 进行序列比较及分析.2.2 目的蛋白的表达及纯化挑取阳性菌落接种于 5mlLB 培养液中,37 培养 2h 后, 以 00 转接于新鲜的 LB 培养液中,37 培养至 OD 600 约为 0.6 时, 加入终浓度为 mmol/l 的异丙基 β D 硫代吡喃半乳糖 苷 (IPTG),25 培养 8h, 诱导蛋白质的表达 离心收集菌体, 加入含有 20mmol/L 磷酸钠 0.5mol/LNaCl 20mmol/L 咪唑 ph7.4 的磷酸钠缓冲液重悬, 冰上超声破碎 5min 将匀浆物在 4 下, 2000r/min, 离心 5min 取上清进行镍离子亲和层析柱 (mlhistrapexcel,gehealthcare, 美国 ), 用 AKTA explorer 蛋白质纯化系统 (GEHealthcare, 美国 ) 纯化蛋白质, 用含有 20mmol/L 磷酸钠 0.5mol/L NaCl 500mmol/L 咪唑 ph7.4 的洗脱缓冲液洗脱 SDS PAGE 法检测蛋白质纯度,BCA 法测定蛋白质浓度.2.3 动物免疫取 6~8 周龄的 Balb/c 雌性小鼠 6 只, 随机分成两组, 分别为实验组和生理盐水对照组, 每组 8 只 将纯化后的重组蛋白与弗式完全佐剂乳化, 腹腔注射,00μg/ 只, 免疫实验组小鼠,2 周后将重组蛋白与弗式不完全佐剂乳化, 以同样的方式和剂量再次免疫, 周后进行加强免疫, 共免疫 3 次 同时, 以同样的方式和剂量用生理盐水与佐剂混合注射对照组小鼠 于末次免疫一周后分离血清,-20 分装保存.2.4 Westernbloting 法检测抗血清的特异性将重组蛋白进行 SDS PAGE, 电转至 PVDF 膜, 用含 5% 脱脂奶粉的 TBST 室温下封闭 2h; 分别加入 000 稀释的小鼠阳性血清 阴性血清,4 过夜孵育,TBST 洗膜 ; 加入 5000 稀释的 HRP 标记的羊抗鼠的 IgG, 室温下孵育 h,tbst 洗膜 ; 加入 ECL 试剂后, 显色曝光 同时设置一抗为人 HCMV 阳性血清, 二抗为 HRP 标记的羊抗人 IgG 作为阳性对照.2.5 间接 ELISA 法检测免疫后小鼠抗血清效价纯化后蛋白质包被酶标板,00μl/ 孔,4 过夜孵育, 洗净 ; 用含 5% 脱脂奶粉的 PBS 缓冲液封闭 2h, 洗剂 ; 加入进行一系列梯度稀释 ( 400~ ) 的阴性血清 阳性血清,37 孵育 h, 洗净 ; 加入 5000 稀释的 HRP 标记的羊抗鼠的 IgG,37 孵育 h; 洗净甩干后加入 TMB 显色液, 避光反应 5min, 加入 2mol/L 的 H 2 SO 4 终止液 测定阴性血清 阳性血清的 OD 450nm 值, 以 P/N 2. 判定为阳性,P/N 2. 的最大稀释度作为被检血清的抗体效价.2.6 双抗夹心 ELISA 法检测抗原取一系列梯度稀释 ( 00~ 2800) 的小鼠阳性血清 阴性血清包被酶标板,00μl/ 孔,4 过夜孵育, 洗净 ; 用含 5% 脱脂奶粉的 PBS 缓冲液封闭 2h, 洗净 ; 加入重组蛋白,37 孵育 h, 洗净 ; 加入 00 稀释的人 HCMV 阳性血清, 37 孵育 h, 洗净 ; 加入 5000 稀释的 HRP 标记的羊
3 207,37(7) 王蒙等 : 人巨细胞病毒抗原表位的重组表达及免疫原性分析 29 抗人的 IgG,37 孵育 h; 洗净甩干后加入 TMB 显色液, 避光反应 5min, 加入 2mol/L 的 H 2 SO 4 终止液 测定阴性血清 阳性血清的 OD 450nm 值, 以 P/N 2. 判定为阳性.2.7 流式细胞仪检测用流式细胞仪检测小鼠外周血中 CD4 + T 细胞和 CD8 + T 细胞的百分比 取小鼠抗凝血 ( 阴性 阳性血 )50μl 于流式细胞仪专用上样管中, 分别加入 PE CD8 和 APC CD4 单抗, 避光放置 20min, 加 500μl 的 NH4Cl 震荡数秒裂解红细胞, 5min 后流式细胞仪检测.2.8 IFN γ IL 2 IL 2 浓度的测定采用双抗夹心 ELISA 法检测小鼠血清中 IFN γ IL 2 IL 2 的浓度 分别取小鼠的阴性血清 阳性血清, 按试剂盒说明书检测 IFN γ IL 2 IL 2 的浓度.3 统计学分析应用 SPSS3.0 软件, 对实验数据进行分析, 采用 t 检验法分析,P 0.05 代表差异有统计学意义 图 目的基因 PCR 产物琼脂糖凝胶电泳图 Fig. Agarosegelelectrophoresisanalysis ofpcramplificationproductsoffragment M:DL2000DNA Marker;,2:PCR amplificationproductsof pp65 gb 2 结果 2. pp65 490~508 GGGGS gb 607~62 基因的克隆及重组 质粒的双酶切验证 PCR 扩增目的片段经.5% 琼脂糖凝胶电泳后, 在 42bp 处有一条特异性条带, 与预期目的条带的大小一致 ( 图 ) 重组质粒经 BamHΙ 和 HindⅢ 双酶切, 琼脂糖凝胶电泳分析, 在 42bp 5900bp 处有特异性条带, 说明目的片段和载体片段大小与预期值是一致的 ( 图 2) 测序结果经 BLAST 比对与理论基因序列一致 2.2 目的蛋白的表达及纯化纯化后蛋白进行 2%SDS PAGE 电泳实验, 结果如图 3 所示, 纯化后蛋白在 22kDa 附件处有一条明显的条带 ( 目的蛋白理论分子质量为 2.6kDa), 经 ImageJ 软件分析电泳条带灰度, 测得蛋白质的纯度为 80.% 采用 BCA 法测定蛋白质浓度为 0.62mg/ml, 纯化样品蛋白质含量为 30.5mg, 纯化后所得样品蛋白含量为 9. 3mg, 得率为 30.5% 2.3 Westernblot 检测利用 Westernblot 检测抗血清与重组蛋白结合的特异性, 结果显示在 22kDa 附近处有特异性条带, 在人 HCMV 阳性血清实验中也有特异性条带, 而小鼠的阴性血清检测没有条带, 说明免疫后的小鼠阳性血清中抗体可以与重组蛋白特异性结合, 进一步证明所制备 图 2 重组质粒的双酶切验证 Fig.2 Thedoublerestrictiveenzymedigestion analysisresultofrecombinationvector M:kb LadderDNA Marker; M2: DL2 000 DNA Marker; :RecombinationvectorofpET-pp65 gb;2:recombination vectordigestedbybamhιandhindⅢ 的 HCMV 疫苗可以使小鼠产生体液免疫反应 ( 图 4) 2.4 抗血清效价的测定间接 ELISA 法测定抗血清的效价, 以 P/N 2. 的最大稀释度作为被检血清的抗体效价, 因此测定抗血清的效价为 02400( 表 )
4 30 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology Vol.37No.7207 图 3 重组蛋白的 SDS PAGE 分析 Fig.3 SDS PAGEanalysisofrecombinantprotein M:Marker;:Uninducedbacteria;2:Inducedbacteria;3:Lysed supernatant;4:lysedprecipitation;5:purifiedprotein 图 4 血清的 Westernblot 检测结果 Fig.4 Theresultofserum westernblotdetection (a)positiveserumofmice (b)hcmvpositiveserumofhuman 表 小鼠抗体的 ELISA 检测结果 Table ELISAasayresultofmiceantibody 血清稀释度 P N P/N 值 双抗夹心 ELISA 法检测抗原特异性双抗夹心 ELISA 法结果显示, 抗原能与小鼠阳性 血清和人 HCMV 阳性血清特异性结合, 说明重组蛋白含有 HCMV 抗原表位, 具有较好的特异性 ( 表 2) 表 2 双抗夹心 ELISA 法检测结果 Table2 SandwichELISAasayresult 血清稀释度 P N P/N 值 流式细胞仪检测用流式细胞仪检测小鼠外周血中 CD4 + T 细胞和 CD8 + T 细胞的百分比 结果显示, 与对照组相比, 实验组小鼠外周血中 CD4 + T 细胞和 CD8 + T 细胞的数量有显著增加, 差异有统计学意义 (P<0.0), 如图 5 所示 2.7 IFN γ IL 2 IL 2 浓度的测定采用双抗夹心 ELISA 法分别对小鼠血清中 IFN γ IL 2 IL 2 浓度进行测定 结果显示, 与对照组相比, 实验组小鼠血清中 IFN γ IL 2 IL 2 的浓度有了显著的提高, 差异有统计学意义 (P<0.0), 如图 6 所示 3 讨论 近 20 年来, 随着免疫低下状态人群 ( 爱滋病 放射损伤 器官移植和恶性肿瘤等患者 ) 的增多,HCMV 感染及其引发的严重疾病日益增加, 而 HCMV 的药物治疗方法会产生较强的副作用, 因此制备 HCMV 疫苗是防治 HCMV 最有效的方法 对于 HCMV 优势抗原表位, 即能够产生较强的免疫反应的抗原表位, 目前已经研究报道的有 pp65 gb pp50 IE gh 蛋白等多个抗原表位 [8] 而 gb 蛋白和 pp65 蛋白是目前研究最多, 也是被证明能分别产生较强的体液免疫和细胞免疫反应的两种蛋白质
5 207,37(7) 王蒙等 : 人巨细胞病毒抗原表位的重组表达及免疫原性分析 3 图 5 流式细胞仪检测 CD4 + T 细胞和 CD8 + T 细胞的百分比 Fig.5 ThepercentageofCD4 + TcelsandCD8 + Tcelsdetectedbyflowcytometer (a),(b)controlgroupofmice (c),(d)experimentgroupofmice Q:RepresentsCD8 + Tcels Q4:RepresentsCD4 + Tcels 图 6 ELISA 法测定 IFN γ IL 2 IL 2 浓度 Fig.6 TheconcentrationofIFN γ IL 2 IL 2detectedbyELISA (a)theconcentrationofifn γ (b)theconcentrationofil 2 (c)theconcentrationofil 2
6 32 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology Vol.37No.7207 通过生物信息学技术, 本研究选取 pp65 蛋白的 490~508aa 和 gb 蛋白的 607~62aa 作为优势抗原表位, 制备 HCMV 疫苗, 通过免疫小鼠, 检测免疫后血清的指标来探究它的体液免疫和细胞免疫活性,Western blot 和间接 ELISA 方法可以检测小鼠产生的特异性抗体和对应抗原的特异性及抗体的效价 CD4 + T 细胞和 CD8 + T 细胞作为两种重要的免疫细胞, 在机体体液和细胞免疫中发挥重要作用 CD8 + T 细胞能诱导产生 IFN γ, 主要在细胞免疫中发挥重要作用 CD4 + T 细胞可分为 Th 和 Th2 两大类细胞 [9] Th 细胞分泌 IFN γ IL 2 IL 2 等细胞因子, 主要介导细胞免疫应答, 并可通过细胞表面的 CD40L 与巨噬细胞表面的 CD40 特异性结合, 使巨噬细胞接收信号, 进一步清除宿主细胞内的病原体 ; 而 Th2 细胞主要介导体液免疫应答, 产生抗体 虽然 CD8 + T 细胞被认为是对抗病毒的主要效应细胞, 然而 HCMV 的彻底清除可能高度依赖于数量和功能正常的 CD4 + T 细胞的协助 因此, 本研究通过检测小鼠外周血中 CD4 + T 细胞和 CD8 + T 细胞的数量, 以及 Th 型细胞因子的浓度来探究疫苗在小鼠体内的细胞免疫活性 进一步研究可通过细胞毒性试验 ELISPOT 实验等来探究抗原多肽特异性的 CD8 + CTL 细胞的产生 综上, 本研究通过生物信息学技术选取能产生较强体液免疫和细胞免疫反应的优势序列表位肽段, 通过短肽柔链串联, 构建人工抗原表位 ; 采用蛋白质工程技术合成 HCMV 人工抗原表位编码基因并与表达载体 pet 32a 连接, 通过表达制备重组抗原, 利用重组的 His 标签实现金属螯合层析有效分离纯化, 作为 HCMV 亚单位疫苗, 能诱导小鼠产生较强的 HCMV 体液免疫和细胞免疫反应, 对 HCMV 的防治及研制 HCMV 临床应用疫苗具有重要意义 参考文献 []JosefV,VanM H,SiannyC,etal.Useofflowcytometryfor characterization ofhuman cytomegalovirus vaccine particles. Vaccine,206,34(20): [2] SaracinoA,ColucciR,LatoracaA,etal.Theefectsof preemptivetherapyusingaverylowthresholdofpp65antigenemia topreventcytomegalovirusdiseaseinkidneytransplantrecipients: asingle centerexperience.transplantproc,203,45(): [3]ElisaG,FrancescaB,ChiaraF,etal.Polyfunctionalanalysisof human cytomegalovirus(hcmv) specific CD4 + and CD8 + memoryt celsinhcmv seropositivehealthysubjectsfolowing diferentstimuli.jclinimmunol,204,34(8): [4]MarkRS.Cytomegalovirusvaccinesunderclinicaldevelopment. JournalofVirusEradication,206,2(4): [5]WangD,FuTM.Progresonhumancytomegalovirusvaccines forpreventionofcongenitalinfectionanddisease.curentopinion invirology,204,6(22):3 23. [6] Mori T, Kato J. Cytomegalovirus infection/disease after hematopoieticstem celtransplantation.internationaljournalof Hematology,200,9(4): [7]KochS,SolanaR,DelaRosaO,etal.Humancytomegalovirus infectionandtcelimmunosenescence:aminireview.mech AgeingDev,2006,27(6): [8] StanleyP.Thehistoryofvaccinationagainstcytomegalovirus. MedMicrobiolImmunol,205,204(3): [9]AndersEL,PeterW M.Thenextgenerationrecombinanthuman cytomegalovirusvaccinecandidates beyondgb.vaccine,202, 30(49): [0]CuiXL,CaoZH,ChenQY,etal.Rabbitsimmunizedwith Epstein BarvirusgH/gLorgBrecombinantproteinselicithigher serumvirusneutralizingactivitythangp350.vaccine,206,34 (34): []FeireA L,RoyR M,ManleyK,etal.TheglycoproteinB disintegrin like domain binds beta integrin to mediate cytomegalovirusentry.virology,200,84(9): [2] Moses S, Malathi J, et al. Determination of human cytomegalovirus pp65 antigenemia among renal transplant patients.indianjnephrol,202,22(5): [3] 唐光美, 刘菊. 重组人巨细胞病毒疫苗研究进展. 国际生物制品学杂志,203,36(4): TangG M,LiuJ.Progresinresearchofrecombinanthuman cytomegalovirusvaccines. InternationalJournalofBiologicals, 203,36(4): [4] 李小姣, 秦婷婷, 杨春, 等. 含人巨细胞病毒糖蛋白 B 中 AD2 位点 Ⅰ 的鞭毛融合蛋白在小鼠中的免疫应答. 中国生物制品学杂志,205,28(5): LiXJ,QinTT,YangC,etal.Immuneresponsesofflagelin fusionproteincontainingad2siteⅠ ofhumancytomegalovirus glycoproteinbinmice.chinjbiologicals,205,28(5): [5] 邱果, 许凤, 邱义兰, 等. 抗 HCMVpp65 蛋白单克隆抗体的制备及性质研究. 激光生物学报,204,23(4): QiuG,XuF,QiuYL,etal.Preparationandcharacterizationof monoclonalantibodiesagainsthcmv pp65protein.actalaser BiologySinica,204,23(4): [6] 岳盈盈, 宋楠楠, 李志会, 等. 人巨细胞病毒截短被膜磷蛋白 pp65 的原核表达及抗原性分析. 山东医药,202,52(43):
7 207,37(7) 王蒙等 : 人巨细胞病毒抗原表位的重组表达及免疫原性分析 QiuYY,SongNN,LiZH,etal.Prokaryoticexpresionand antigenicanalysisoffragmentoftegumentproteinpp65ofhuman cytomegalovirus.shandongmedicaljournal,202,52(43): [7] 胡海峰, 吴燕. 巨细胞病毒感染的治疗研究进展. 微生物学免疫学进展,205,4(): HuH F, Wu Y. Progreson treatmentofcytomegalovirus infection.proginmicrobiolimmunol,205,4(): [8]ZhaoP,MaD X,YuS,etal.ThedevelopmentofChineses specifichumancytomegaloviruspolyepitoperecombinantvaccine. AntiviralResearch,202,93(2): [9]ThiHON,NicoleAM,LisbethAS,etal.Refinementinthe production and purification ofrecombinanthcmv IE pp65 proteinforthegenerationofepitope specifictcelimmunity. ProteinExpresionandPurification,2008,6(): RecombinantExpresionofAntigenEpitopeGenesofHuman CytomegalovirusandImmunogenicityDetectionoftheFusionProtein WANGMeng SUNWen hui JIFang ling PUZhong ji LIYin sheng 2 BAOYong ming (SchoolofLifeScienceandBiotechnology,DalianUniversityofTechnology,Dalian 6024,China) (2DalianInstituteforDrugControl,Dalian 6029,China) Abstract Objective:ToobtaintherecomninantproteinasHCMVsubunitvaccine,thedominantantigen epitopegeneofproteinpp65andgbofhumancytomegalovirus(hcmv)wereexpresedine.coli,andthe humoralandcelularimmuneresponsesoftherecombinantproteininbalb/cmiceweredetected.methods:the codengenesof aainpp65proteinand607 62aaingBproteinwereselectedasgenesegmentsand clonedintoexpresionvectorpet32a(+)afteramplifiedbypcr.theproteinexpresedwasanalyzedbysds PAGE,aftertherecombinantplasmidtransformedintoE.coliBL2(DE3)plys.Balb/cmicewereimmunized withtherecombinantproteinpurifiedbynickelmetalchelateafinitycolumn.thehumoralimmuneactivityof recombinantproteinswasdetectedbywesternblotingandindirectelisa.thecelularimmuneactivitywas detectedbyflowcytometryandsandwichelisa.results:thefusionproteinabout22kdawasobtained.western blotingtestshowedthatthemulticlonalantibodyforhcmv hasspecificityandthetitersreachto detectedbyindirectedelisa.thenumberofcd4 + TcelsandCD8 + Tcelsinperipheralbloodandthe quantitiesofifn γ,il 2,IL 2weresignificantlyhigherthancontrolgroup(P<0.0).Conclusions:The recombinantprotein with dominantantigen epitopescan inducesignificanthumoralimmunityand celular immunityinmice,andisapotentialvaccineforhcmv. Keywords Humancytomegalovirus pp65protein gbprotein Humoralimmunity Celularimmunity
材料 方法
生物技术通报 张发洲 杨慧兰 为了构建单纯疱疹病毒 型 感染细胞多肽 真核表达质粒 应用 技术从 株 的基因组中扩增 基因 并连接至真核表达载体 对阳性克隆进行菌落 酶切和测序鉴定后 成功构建了重 组质粒 用 转染试剂盒将重组质粒 转染至 细胞中 并用 及 检测其表达情况 结果显示 基因在 细胞中得到正确表达 真核表达质粒 的构建成功 为进 一步研究 对宿主细胞的影响奠定了基础 单纯疱疹病毒 型 感染细胞多肽
材料! 方法! # 基因的扩增及其序列分析
生物技术通报 黄艳燕 黄靖华 卢福芝 孙靓 彭立新 周兴 黄日波 利用 的方法从鼠李糖乳杆菌基因组 中扩增到 乳酸脱氢酶基因 并连接到载体 上 构建表达质粒 将重组质粒 转化大肠杆菌 重组菌株经 诱导表达 电泳分 析表明 在大肠杆菌中实现了表达 表达产物的分子量约为 同时采用紫外分光光度法测定 乳酸脱氢酶的酶活 测得重组菌株的 乳酸脱氢酶活力为 最适反应温度为 最适 乳酸脱氢酶 克隆 表达 鼠李糖乳杆菌
材料 方法
生物技术通报 姜燕 采用鼠抗人血红蛋白 单克隆抗体 和胶体金标记鼠抗人血红蛋白 单克隆抗体 及对照抗体羊抗鼠 利用双抗体免疫夹心反应原理特异性地结合人血红蛋白抗原 在 内可得到胶体金显色结果的原理研制便潜血单克 隆一步法胶体金检测试卡 用于诊断因各种原因引起的消化道出血疾病 应用杂交瘤技术制备两株鼠抗人血红蛋白 抗 体 方法检测 效价 免疫胶体金技术制备胶体金检测试卡 法检测 效价的结果显示 鼠抗人
福建农业学报 材料与方法 试验菌株 引物 主要仪器 主要试剂 细菌培养 模板的制备 反应条件 扩增产物的检测 特异性试验 敏感性试验 分离菌株检测 产物的克隆及序列测定 结果与分析
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张红丽 等 部分功能域基因的原核表达与分析 第６期 发表序列 ＡＹ８１９６５０ 同源性为 １００ 与国外 １０ 株 同源性为 ９８畅 ８ 有 １３ 个碱基发生了突 变 其中 ４ 个是有意义的突变 这 ４ 个有意义的 突变分别为第 ２５７ 位 Ｔ Ｃ 第 ５０５ 位 Ａ Ｃ 第 ９０８ 位 Ａ Ｇ 第 １０１２ 位 Ｇ Ｃ 图 ４ 这些差异可 能是捻转血矛线虫株间存在地域差异所致 ２畅 ５ ＨＰＳ 原核表达与鉴定
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( )2017 57 5JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)2017,Vol.57No.5 11 LY294002, (, 330006) : LY294002 PI3K/AKT 0 10 15 20 25 30μmol L -1 LY294002(LY294002 ) A549,PBS CCK8 LY294002 A549 ; Westernblot
2. 对 DNA 载 体 的 控 制 元 件 和 选 择 标 记 的 序 列 与 来 源, 如 : 真 核 启 动 子 增 强 子 终 止 序 列 抗 生 素 抗 性 标 记 等 进 行 分 析 建 议 避 免 使 用 抗 青 霉 素 或 其 它 饽 邗 0 房 咕 氐 目 剐 员 昙 牵 好 使
预 防 用 DNA 疫 苗 临 床 前 研 究 技 术 指 导 原 则 一 前 言 DNA 疫 苗 是 将 外 源 目 的 基 因 片 段 构 建 在 DNA 质 粒 中, 重 组 后 的 DNA 导 入 机 体 后 可 表 达 目 的 蛋 白, 目 的 蛋 白 刺 激 机 体 产 生 特 异 性 免 疫 学 反 应 而 达 到 预 防 某 种 疾 病 的 生 物 制 剂 该 指 导 原 适 用 于
2015,35(4) 龚隆财等 :ctni linker TnC 融合蛋白的原核表达及鉴定 49 免疫反应鉴定, 表明重组表达的 ctni linker TnC 融合蛋白具有较好的免疫原性, 保存了 ctni 和 ctnc 单体的天然结构, 有望成为天然 ctni TnC 复合物的替代物, 为下一步
中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,2015,35(4):48 53 DOI:10.13523/j.cb.20150407 ctni linker TnC 融合蛋白的原核表达及鉴定 龚隆财 罗镇明 杨雁青 王振宇 向军俭 (1 暨南大学广东省分子免疫与抗体工程重点实验室广州 510632) 王 宏 (2 广州市疾病与食品安全免疫学快速检测重点实验室暨南大学分室广州 510632)
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213456!"# $ % # %557;&/55/?5,/ @@@!88>>!"#!$% &'()*+ 武汉市疾病预防控制中心 武汉 /&55, % 华中科技大学同济医学院病原生物学系微生物教研室 武汉 /&55&5 & 武汉市第十一医院 武汉 /&5555,- O ' 0 ' =! 6!, 2 M*34!. 5 '2 ' 0 0* 6) 7 88^9:;0, 6! 89-4 O?@ 7%58
GB 15973—1995麻风病诊断标准及处理原则
炭 疽 诊 断 标 准 及 处 理 原 则 前 言 GB 17015 1997 炭 疽 (Anthrax) 是 由 炭 疽 芽 孢 杆 菌 (Bacillus anthracis) 引 起 的 一 种 人 与 动 物 共 患 传 染 病, 主 要 存 在 于 食 草 动 物 和 牲 畜 群 落 之 中, 并 能 造 成 环 境 的 广 泛 污 染 由 于 炭 疽 芽 孢 具 有 对 外 界 环 境
材料 方法 载体构建 转基因植株的获得
生物技术通报 唐宏琨 曾洪梅 杨秀芬 邱德文 通过根癌农杆菌 介导转化法 将含有激发子基因 的植物表达载体 转化三生烟 获得了转基因烟草植株 用 检测确认了阳性转化株 用 杂交 和 杂交进一步证实了 基因的整合 转录和表达 对 代转基因阳性株进行 接种试验 结果显示 与非转基 因对照相比 表达 的烟草叶片枯斑数量减少 表明蛋白激发子基因 的表达提高了转基因烟草对 的抗性 激发子 基因 烟草 转化 材料
生物技术通报 材料 方法
生物技术通报 高曰文 朱耀明 王艳林 朱晨宇 秦烨 胡汉卿 韩钰 旨在探讨盐酸普鲁卡因 对人结肠癌 细胞 基因甲基化及表达的影响 应用巢式双重 甲基化特异性聚合酶链反应 检测盐酸普鲁卡因处理前后 细胞中 基因启动子的甲基 化水平 逆转录 聚合酶链反应 和蛋白印迹技术观察 细胞内 基因表达情况 检测发现人结肠癌 细胞中 基因存在甲基化 经盐酸普鲁卡因处理能够使 基因甲基化水平下降 和蛋白印迹分析结果显
第一章 图 １ １ 传染病的特征 ９ Ｔ ｈ１ Ｔ ｈ２ 细胞调节机制简图 正调节 负调节 细胞因子与细菌的相互作用机制目前尚未完全明了 有实验表明 细胞因子与细菌之间 存在有互利和互抑双重效应 例如 Ｔ Ｎ Ｆα 和 ＩＦＮγ 可抑制放线菌的生长而 ＩＬ ６ 的作用则 反之 ＩＬ １ ２ 和 ＧＭ ＣＳＦ 可促进某些致病性大肠杆菌生长而 ＩＬ １ｒａ 可抑制之 研究表 明 某些致病性大肠杆菌有与
124 河南农业科学第 42 卷, (HPS) ;PRRSV PCV2, [4] PRRSV CSFV ;20, PRRSV,CSFV [5-9],, 1.2 主要试剂和仪器 Real-timePCR PRRSV CSFV PCV2, 3 RotorGene, RG-3000; ND-1000 Na
![124 河南农业科学第 42 卷, (HPS) ;PRRSV PCV2, [4] PRRSV CSFV ;20, PRRSV,CSFV [5-9],, 1.2 主要试剂和仪器 Real-timePCR PRRSV CSFV PCV2, 3 RotorGene, RG-3000; ND-1000 Na](/thumbs/91/105785327.jpg "124 河南农业科学第 42 卷, (HPS) ;PRRSV PCV2, [4] PRRSV CSFV ;20, PRRSV,CSFV [5-9],, 1.2 主要试剂和仪器 Real-timePCR PRRSV CSFV PCV2, 3 RotorGene, RG-3000; ND-1000 Na")
河南农业科学,2013,42(2):123-127 JournalofHenanAgriculturalSciences PCR PRRSV CSFV PCV2,, (, 450011) : 根据 TaqMan 复合荧光探针设计原则, 应用 Primer5.0 和 Oligo6.0 软件设计检测猪繁殖 与呼吸综合征病毒 (PRRSV) 猪瘟病毒 (CSFV) 和猪圆环病毒 2 型 (PCV2) 的特异性引物和探针,
高 云 钟良军 张源明 周晓欢 梁 平 徐 隽 探讨兔牙周炎对动脉粥样硬化炎性因子的影响及抗生素对其的作用 将 只雄性新西兰大白兔随机分为 组 组为对照组 组为牙周炎组 组为动脉粥样硬化组 组为牙周炎 动脉粥样硬化组 组为干预组 牙周炎 动脉粥样硬化 替硝唑组 各组分别按照实验设计进行相应干预处理 周末处死动物 检测牙周指标 血清中总胆固醇 三酰甘油 高密度脂蛋白胆固醇 低密度脂蛋白胆固醇 反应蛋白
大 学 化 学 第 卷 第 期 年 月 微 囊化技 术 在 生 物 医 学 中的 应 用 俞 耀 庭 陈 长 治 南 开 大学分 子 生物研 究 所 本 文 概 述 了微囊 固 定化技术基 本 应 用 原 理 摘要 的生 物 血液 相溶性 及 通透 性能 胞 在治 疗 肾 衰 肝 衰 及 清除 人体 内 中毒药物 般 性介 绍 微 囊 人 工 细 胞 的 一 般制 备方 法 各种 膜 材 料 对 人
说 明
畜 禽 产 品 员 国 家 职 业 标 准 1. 职 业 概 况 1.1 职 业 名 称 畜 禽 产 品 员 1.2 职 业 定 义 从 事 畜 禽 及 畜 禽 产 品 测 试 的 人 员 1.3 职 业 等 级 本 职 业 共 设 五 个 等 级, 分 别 为 : 初 级 ( 国 家 职 业 资 格 五 级 ) 中 级 ( 国 家 职 业 资 格 四 级 ) 高 级 ( 国 家 职 业 资 格 三
程汉良 夏德全 吴婷婷 孟学平 吉红九 董志国 陈淑吟 对文蛤 青蛤 硬壳蛤 江户布目蛤 薄片镜蛤 和菲律宾蛤仔 种帘蛤科贝类和 个地理种 群文蛤 大连 连云港 湛江 防城港 的细胞色素 氧化酶亚基 基因片段的核苷酸序列进行了分析 以探讨这一序列在种质鉴定 种群遗传结构和分子系统发生研究中的应用价值 测序结果 表明 所有物种扩增片段长度均为 序列 含量 明显高于 含量 物种间共有变异位点 个 其中简约信息位点
pet28a + CD 1 3 ~ 4 NHL 85% ~ % B 2 CD B B B 3-4 CD 5 CD B Rituximab C2B8 CD IgG1 CHO FDA C2B8 Minibody IgG VL VH CH3 Linker VL-VH-CH3 Fc ADCC
35 3 12 9 JOURNAL OF NANJING NORMAL UNIVERSITY Natural Science Edition Vol 35 No 3 Sept 12 pet28a + CD 210046 Rituximab VL VH CH3 CD overlap PCR Rituximab VL VH Linker ScFv ScFv IgG1 CH3 IgG1 cdna pet28a
流式细胞术临床应用的建议 作者 : 中华医学会检验医学分会, 卫生部临床检验中心, 中华检验医学杂志编辑委员会 作者单位 : 刊名 : 中华检验医学杂志 英文刊名 : Chinese Journal of Laboratory Medicine 年, 卷 ( 期 ): 2013,36(12) 本文链接 :http://d.g.wanfangdata.com.cn/periodical_zhyxjy201312003.aspx
16 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology Vol.37No 供,TK1 阳 / 阴性血清取自郑州大学第一附属医院 表 1 引物序列 Table1 Primersequence Primername Primersequence(5 3 ) Restrictionenz
中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,2017,37(9):15 22 DOI:10.13523/j.cb.20170903 ThymidineKinase1(TK1) 重组蛋白的 表达 纯化及鉴定 1,2 王云龙 1 赵二霞 2,3 李玉林 (1 郑州大学生命科学学院郑州 450001 2 河南省生物工程技术研究中心郑州 450001) (3 郑州市生物制药重点实验室郑州 450001)
目 录 第 一 部 分 序 厦 门 大 学 嘉 庚 学 院 简 介... 3 第 二 部 分 教 学 管 理 厦 门 大 学 嘉 庚 学 院 教 师 工 作 规 范... 5 厦 门 大 学 嘉 庚 学 院 课 程 班 管 理 说 明... 15 厦 门 大 学 嘉 庚 学 院 本 科 生 毕 业
教 师 手 册 厦 门 大 学 嘉 庚 学 院 教 务 部 二 〇 一 一 年 编 目 录 第 一 部 分 序 厦 门 大 学 嘉 庚 学 院 简 介... 3 第 二 部 分 教 学 管 理 厦 门 大 学 嘉 庚 学 院 教 师 工 作 规 范... 5 厦 门 大 学 嘉 庚 学 院 课 程 班 管 理 说 明... 15 厦 门 大 学 嘉 庚 学 院 本 科 生 毕 业 论 文 ( 设 计
第 4 期邱果等 : 抗 HCMVPp65 蛋白单克隆抗体的制备及性质研究 339 werescreenedandtheantibodytitersweredeterminedbyindirectelisa.andthenthemonoclonalantibodyspecificity forhcm
第 23 卷第 4 期 2014 年 8 月 激光生物学报 ACTA LASER BIOLOGY SINICA Vol.23No.4 Aug.2014 doi:10.3969/j.isn.1007 7146.2014.04.009 抗 HCMVPp65 蛋白单克隆抗体的制备及性质研究 邱果 ab, 许凤 a, 邱义兰 a, 廖 晶 b, 李烨 a, 刘胜姿 b, 李桑 a b, 刘如石 ( 湖南师范大学
生命科学研究 房 蓓 武泰存 王景安 以玉米沈单 号为材料 用溶液培养的方法研究了缺锌 低锌和正常供锌对玉米生长发育的影响 进一步明确了一定量低锌比缺锌对玉米的伤害更大 并对其 同工酶谱及蛋白质表达进行了分析 结果表明 一定浓度的低锌培养使玉米生长受抑及受害最重 且地上部分比地下部分更敏感 低锌和缺锌处理时 种同工酶的酶谱和蛋白表达与正常供锌时均有明显的差异 尤其在一定量低锌浓度时 有些同工酶的表达增强或被特异性诱导
Really Good Antibodies Bethyl 二抗产品册 超过 670 种抗小鼠 兔子 山羊和大鼠的二抗 bethyl.com
Really Good Antibodies Bethyl 二抗产品册 超过 670 种抗小鼠 兔子 山羊和大鼠的二抗 bethyl.com Bethyl 公司 Bethyl Laboratories, Inc. ) 成立于1972年 一直秉承改善生活的理念致力于科学研究的理念 提供高质量的抗体产品 和抗体定制服务 Bethyl所销售的每一个抗体都是在德克萨斯州的蒙哥马利的唯一工厂生产 并且都经过Bethyl
细 胞 生 物 学 实 验 指 导 细 胞 生 物 教 研 室 目 录 实 验 一 动 物 细 胞 的 基 本 形 态 观 察 和 显 微 测 量 1 实 验 二 线 粒 体 的 活 体 染 色 及 电 镜 照 片 观 察 4 实 验 三 液 泡 系 的 活 体 染 色 及 电 镜 照 片 观 察 6 实 验 四 细 胞 生 理 活 动 的 观 察 7 实 验 五 细 胞 组 分 的 化 学 反 应
D 慢 性 肾 炎 E 子 宫 蓄 脓 7. 支 气 管 肺 炎 的 X 线 影 征 是 A 黑 色 阴 影 B 密 度 均 匀 的 阴 影 C 大 小 不 一 的 云 絮 状 阴 影 D 边 缘 整 齐 的 大 块 状 阴 影 E 整 个 肺 野 出 现 高 密 度 阴 影 8. 以 波 幅 变
2010 年 国 家 执 业 兽 医 资 格 考 试 试 卷 ( 下 午 卷 ) 临 床 科 目 A 1 型 题 答 题 说 明 每 一 道 考 试 题 下 面 有 A B C D E 五 个 备 选 答 案, 请 从 中 选 择 一 个 最 佳 答 案, 并 在 答 题 卡 上 将 相 应 题 号 的 相 应 字 母 所 属 的 方 框 涂 黑 1. 检 查 浅 表 淋 巴 结 活 动 性 的 基
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90002 食 品 類 共 同 科 目 丙 級 工 作 項 目 01: 食 品 概 論 1.(2) 澱 粉 回 凝 ( 老 化 ) 變 硬 的 最 適 溫 度 是 25 5-18 -30 2.(2) 植 物 中 含 蛋 白 質 最 豐 富 的 是 穀 類 豆 類 蔬 菜 類 薯 類 3.(3) 牛 奶 製 成 奶 粉 最 常 用 熱 風 乾 燥 冷 凍 乾 燥 噴 霧 乾 燥 滾 筒 乾 燥 4.(3)
中 国 畜 牧 兽 医 卷 绵羊肺炎支原体 "#)/ 是引起绵羊和山羊呼吸道疾病的一种重要 病原菌 该病原菌感染动物机体后 还可引起其他病原菌的继发感染 给养羊业造成巨大的经济损 失 支原体是介于病毒与细菌之间的一种微生物 对培养条件要求严苛 目前 的培养仍是一大难题 严重影响了人们对其病原特性 致
中国畜牧兽医! " # 绵羊肺炎支原体 1 蛋白 端与 端的表达及其免疫学特性研究 麻昌姣 郑佳琪 黄海碧 王晓晖 白 帆 郝永清 内蒙古农业大学兽医学院微生物与免疫实验室 呼和浩特 摘 要 为分析绵羊肺炎支原体 "#) 膜表面脂蛋白 ( 的免疫学特性 本研究分别扩增 ( 蛋白 / 端与 端的基因 并通过重叠延伸 + 将 端基因序列中的 0 3B ( 定点突变为同义密码子 将扩增的基因片段分别插入到
Microsoft Word 赵凯-二校 出4154
6 10 Vol. 6 No. 10 2015 10 Journal of Food Safety and Quality Oct., 2015 赵 1, 凯 2, 贾彦博 3*, 王啸 2, 丁枫芸 2, 肖海龙 3, 黄建萍 3 (1., 310058; 2., 310019; 3., 310022) 摘要 : 目的 ELISA 方法, Balb/c 4, ELISA,,, ELISA 结果,
(45) β-tcp/ β -GP HTCC HTCC/ β -GP/ β -TCP 20mg/mL ( β -TCP/HTCC);(3) β -TCP 40mg/mL ( β -TCP/HTCC) 20μg h rhbmp h HTCC/ β -
: :1001-9731(2014)14-14001-07 14001 * ( 200237) : 2-2 2.1 (HTCC) ; β-tcp 2.1.1 (CSM W =5.05 10 5 )23- (GTMAC ) β - : ; ; ( β -GP )BCA : R318.08 :A ( ) DOI:10.3969/j.issn.1001-9731.2014.14.001 (rhbmp-2
X MGC X 22 X 23 X MGC X BALB/c 26 X MGC X MGC X MGC X..
1 0 3 8 4 9726023 UDC X MGC80-3 2000 7 2000 7 2000 7 2000 6 22.3.4...11..11 12 13 15 15 20 20 X MGC80-3. 22 X 22 X 23 X MGC80-3.23 X BALB/c 26 X MGC80-3.27 X MGC80-3 28 29 29 30 31 32 33 X MGC80-3 34 X..34.35.36
连接
502 南方医科大学学报 J South Med Univ 202;32(4) 基础研究 小鼠前列腺干细胞抗原的原核表达 纯化及抗原活性检测 董金凯 2 罗 津 3 阎瑾琦 2 张 亮 2 高江平 于继云 2 中国人民解放军总医院泌尿外科 北京 00853 2 军事医学科学院基础医学研究所 北京 00850 3 湖南省永州 市人民医院 湖南 永州 425000 摘要 目的 RT-PCR 扩增小鼠前列腺干细胞抗原
150 微生物学通报 2009, Vol.36, No.1 (systemic lupus erythematosus, SLE), Sm(B B D1), Sm D1, SLE [1], Sm D1 (immunoblot, IBT) (enzyme linked immunosorbent as
![150 微生物学通报 2009, Vol.36, No.1 (systemic lupus erythematosus, SLE), Sm(B B D1), Sm D1, SLE [1], Sm D1 (immunoblot, IBT) (enzyme linked immunosorbent as](/thumbs/88/114888322.jpg "150 微生物学通报 2009, Vol.36, No.1 (systemic lupus erythematosus, SLE), Sm(B B D1), Sm D1, SLE [1], Sm D1 (immunoblot, IBT) (enzyme linked immunosorbent as")
微生物学通报 JAN 20, 2009, 36(1): 149~153 Microbiology tongbao@im.ac.cn 2009 by Institute of Microbiology, CAS 生物实验室 人 SmD1 抗原的酵母真核表达及其初步应用 * 杨湘越吴文冰兰小鹏 ( 350025) 摘要 : 通过 PCR 扩增 Sm D1 基因, 与酵母表达载体 ppic9k 重组, 构建表达质粒
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第 三 章 各 种 食 物 的 营 养 价 值 及 加 工 因 素 的 影 响 知 识 目 标 瞯 通 过 本 章 的 学 习, 掌 握 谷 类 豆 类 油 料 水 果 蔬 菜 鱼 肉 蛋 类 奶 类 以 及 坚 果 等 我 国 人 民 喜 爱 的 常 用 的 天 然 食 品 以 及 它 们 的 加 工 制 品 的 营 养 价 值 瞯 熟 悉 谷 粒 的 结 构, 加 工 烹 调 和 贮 藏 方 法
食 品 与 生 物 技 术 学 报 第 卷
第 卷第 期 年 月 食品与生物技术学报 山药多糖研究进展 王洪新 王远辉 江南大学食品学院 江苏无锡 山药是药食兼用植物 山药多糖被认为是山药中重要的活性物质 综述山药多糖的提取分离工艺 纯化方法 化学结构分析和生理活性研究的现状 为未来研究山药多糖的新提取工艺 探讨构效关系 作用机制提供参考 山药多糖 研究进展 提取与分离 食 品 与 生 物 技 术 学 报 第 卷 第 期 王洪新等 山药多糖研究进展
全国主要流域重点断面水质自动监测周报
全 国 主 要 流 域 重 点 断 面 水 质 自 动 监 测 周 报 2016 年 第 16 期 中 国 环 境 监 测 总 站 2016 年 04 月 20 日 2016 年 第 16 周 (04 月 11 日 ~04 月 17 日 ), 全 国 主 要 水 系 148 个 水 质 自 动 监 测 断 面 中, 共 监 测 了 143 个, 其 中 Ⅰ 类 水 质 断 面 为 17 个, 占 12%;Ⅱ
SYC97.S72
第 七 章 方 便 与 休 闲 食 品 生 产 工 艺 关 于 方 便 食 品 的 概 念, 广 义 而 言, 凡 是 取 之 可 食 或 稍 作 处 理 即 可 食 用 的 食 品, 均 在 此 列 但 从 现 代 方 便 食 品 的 角 度 来 看, 方 便 食 品 主 要 是 指 以 粮 食 为 原 料 以 营 养 生 理 学 为 依 据 以 现 代 科 技 和 包 装 技 术 为 基 础 制
第 卷 -.+$$$-+($-.(+"$(+$%"(+$#'$+(.$+*(.$+(%$%+.$$$+$$+-$( 7-($++$"$($(+'$+'$%*$$&$.$+$%+ $$".(+$+.$+'$+'( ".($#-$4$+" +'$".(+%+$$$++(* %$+$+$"(+'$%+$"
第 卷第 期 年 月 "## $%# - 基础医学 含 '- 野生及突变结合位点的胰岛素受体 '6,78&' 区报告基因载体的构建和鉴定 王美晨 王 璇 蓝 茜 李 癑 刘 莉 伊 静 李 靖 宋刘梅 马莎蕊 宁启兰 李冬民 西安交通大学医学部 遗传学与分子生物学系 环境与疾病相关基因教育部重点实验室 级临床医学七年制 级临床医学五年制 陕西西安 ( 摘要 目的 利用 6< *%&$%', :%''"D$"
中国生物工程杂志! 公司 2;3 和 $ 购自 ',5 公司 92$' 底物显色液购自天根公司 92 标记的二抗山羊抗鼠 3 购自中杉生物有限公司 质粒抽提试剂盒 纯化试剂盒购自 '3 公司 引物合成和测序均在军事医学科学院生物工程研究所六室完成 个 1 单抗均为本课题组自制 & 包被液 ",<6.
中国生物工程杂志! "# 幽门螺杆菌 1 串联融合表位的表面呈现表达 封小燕 王艳春 李平超 陶好霞 王 秡 袁盛凌 王令春 王 普 刘纯杰 浙江工业大学药学院 杭州 军事医学科学院生物工程研究所病原微生物与生物安全国家重点实验室 北京 & 摘要 目的 应用表达载体. 表面呈现表达幽门螺杆菌 1 串联融合表位 方法 通过引入多克隆位点的方法改造表达呈现表达载体. 并用改造后的质粒表达幽门螺杆菌 1
26 头 孢 他 啶 注 射 剂 27 头 孢 他 美 酯 口 服 常 释 剂 型 28 头 孢 吡 肟 注 射 剂 29 头 孢 硫 脒 注 射 剂 30 头 孢 唑 肟 注 射 剂 31 头 孢 替 安 注 射 剂 32 头 孢 哌 酮 注 射 剂 33 头 孢 哌 酮 舒 巴 坦 注 射 剂
江 西 省 新 农 合 基 本 用 药 目 录 第 一 部 分 西 药 部 分 序 号 药 品 名 称 剂 型 备 注 一 抗 微 生 物 1. 抗 生 素 类 1 青 霉 素 注 射 剂 2 普 鲁 卡 因 青 毒 素 注 射 剂 3 苯 唑 西 林 注 射 剂 4 氨 苄 西 林 口 服 常 释 剂 型 注 射 剂 5 氨 苄 西 林 丙 磺 舒 口 服 常 释 剂 型 6 青 霉 素 V 口
未命名-1
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 ss a c y e vg 13 14 15 16 17 18 19 H 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 发现生命的螺旋 克里克在提出 中心法则 时曾指出 遗传信息是沿 Ｄ Ｎ Ａ - Ｒ Ｎ Ａ - 蛋白质的方向流动的 遗传信息不可能从 Ｒ Ｎ Ａ 回到 Ｄ Ｎ
使用前需考慮病患是否有能力回蓋針頭\(包括視力、操作能力及手部無顫抖的情形\)，且須教導病患單手以拇指及食指回套針蓋，以防針扎
4-1-P.- 1 - β 4-1-P.- 2 - 4-1-P.- 3 - 酶 4-1-P.- 4 - 4-1-P.- 5 - 4-1-P.- 6 - β β % % %% %% 酶 4-2-P- 7 - 4-2-P- 8 - 4-2-P- 9 - 4-2-P- 10 - 4-2-P- 11 - 4-2-P- 12 - 4-2-P13 4-2-P14 4-2-P15 4-2-P16 4-2-P17
Microsoft Word - 鄂卫规[2012]3号.doc
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湖 北 省 卫 生 厅 文 件 鄂 卫 规 2012 3 号 各 市 州 直 管 市 神 农 架 林 区 卫 生 局, 部 省 属 医 疗 机 构 : 为 促 进 我 省 抗 菌 药 物 合 理 使 用, 保 证 临 床 用 药 安 全 有 效 经 济, 降 低 药 物 不 良 反 应 发 生 率, 减 缓 细 菌 耐 药 性 的 发 生, 根 据 卫 生 部 抗 菌 药 物 临 床 应 用 管 理
儿科学 儿科学 儿科学 儿科学 儿科学 儿科学 ( 专业学位 ) 儿科学 ( 专业学位 ) 儿科学 ( 专业学位 ) 儿科学 ( 专业学位 ) 儿科学 ( 专业学位 ) 耳鼻咽喉科学 ( 专业学位 ) 非定向 全国统考
2017 年医学院 ( 含转化院 遗传所 ) 硕士研究生上线考生名单 准考证号 报考专业 外语政治 业务 1 业务 2 总分 报考类别 考试方式 备注 103357000912484 72 72 242 0 386 非定向 全国统考 103357000912003 71 72 242 0 385 非定向 全国统考 103357000911503 77 73 234 0 384 非定向 全国统考 103357000911098
)+ 国际流行病学传染病学杂志 年 月第 卷第 期!" #$ %&%$ '!"! 换是甲型流感经常暴发的重要原因 病毒包膜上的另外一种膜蛋白 蛋白由于其保守性高 已成为 ()* 疫苗开发和药物研究的热点 而 蛋白胞外域 在人甲型流感中高度保守 与禽流感及猪流感仅有少数氨基酸不同 蛋白前 + 个氨基酸
国际流行病学传染病学杂志 年 月第 卷第 期!" #$ %&%$ '!"! -= 甲型流感病毒 蛋白胞外域单克隆抗体的制备及其生物特性 刘亚辉沃恩康杨新燕徐琦杨灿邓冠聪郭潮潭 -- 杭州 浙江省医学科学院生物工程研究所通信作者 郭潮潭 +",$1+!+-$! %-
2009,29(3) 阳泰等 : 抗禽传染性支气管炎病毒多肽疫苗 EpiA 免疫原性研究 2 察所 ; 辣根过氧化物酶标记的兔抗鸡 IgG 抗体购精博生物技术有限公司.2 方法.2. IBV 抗原表位基因 EpiA 的设计合成应用 DNAStar 分析软件综合评价 IBV 主要结构蛋白抗原表位, 结
中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,2009,29(3):20~24 抗禽传染性支气管炎病毒多肽疫苗 EpiA 免疫原性研究 阳 泰 王红宁 汪,2 雪 高 荣 唐俊妮 李玉玲 郭自城 ( 四川大学生命科学学院四川大学动物疾病防控生物工程研究中心成都 60064 2 四川农业大学动物医学院雅安 62504) 摘要设计基于 B 细胞表位和 T 细胞表位的禽传染性支气管炎病毒 (IBV)
期 李 静等 马疱疹病毒 型 & 糖蛋白线性 细胞表位的预测与鉴定 马疱疹病毒 属于疱疹病毒科 疱疹病毒亚科 病毒具有 线性双链基因组 分别编码 感染可导致马的多种临床症状 如呼吸道疾 病 流产 新生胎儿死亡及神经系统疾病 自然感染的获得性免疫或疫苗接
中国畜牧兽医! " 马疱疹病毒 型 糖蛋白线性 细胞表位的预测与鉴定 李 静 刘建华 付 强 宋焕堂 范 斌 胡 月 冉多良 新疆农业大学动物医学学院 乌鲁木齐 摘 要 试验旨在应用生物信息学技术综合分析马疱疹病毒 型!!%!!,,@& 糖蛋白 预测 细胞表位 筛选出具有潜在诊断价值的线性 细胞表位 将 @& 糖蛋白的基因序列输入 =+' 软件中的 '! 工作区中 经参数综合比较分析筛选潜在的 细胞表位
标题
第 36 卷第 10 期西南大学学报 ( 自然科学版 ) 2014 年 10 月 Vol.36 No.10 JournalofSouthwestUniversity (NaturalScienceEdition) Oct. 2014 DOI:10.13718/j.cnki.xdzk.2014.10.013 家蚕核型多角体病毒 IE1 的 1 多克隆抗体制备及鉴定 董战旗 1, 张军 1, 胡楠 1,
中 国 畜 牧 兽 医 卷 基因组的 89 区 开放阅读框 ( 约为 % 共编码 个氨基酸 由于 基因组中 含量过高 扩增全长较困难 因此通常截取含 有 & 蛋白抗原表位的一段基因片段进行表达 研究证实 & 蛋白是抗体的主要靶子 虽然在猪体内存在着 &&&1 核衣壳蛋白等抗体 但在行使免疫性和诱导免
中国畜牧兽医! " 猪伪狂犬病病毒 " 蛋白表达及免疫原性分析 贾 刚 樊梅娜 谷 巍 山东宝来利来生物工程股份有限公司研究院 泰安 泰安大凡神农制药有限公司研究院 泰安 摘 要 本试验旨在研究猪伪狂犬病病毒 '"%& 蛋白的表达并分析其免疫原性 以 病毒液为模板 设计特异性引物 扩增大小为 %' 的保守片段并测序 将其克隆到表达载体 '1" 中 转化表达菌 9)1 经诱导表达 纯化得到目的蛋白 进行
中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,2012,32(6):1 6 殏 檪檪 殏 研究报告 殏 檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪 殏 HPV16L2 肽段偶联 AP205VLP 的原核表达 及免疫原性分析 姜博毕研伟张营营蔡路奎姬秋彦李智华 ( 中国医学科学院 / 北京协和医学
中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,2012,32(6):1 6 檪檪 研究报告 檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪 HPV16L2 肽段偶联 AP205VLP 的原核表达 及免疫原性分析 姜博毕研伟张营营蔡路奎姬秋彦李智华 ( 中国医学科学院 / 北京协和医学院医学生物学研究所昆明 650118) 徐维明 摘要目的 : 将编码 HPV16 衣壳蛋白 L2 的 65~71 112~120
中 草 药
中 草 药 致 谢 李 沛 赵 继 敏 郑 智 敏 江 亚 楠 等 病 理 生 理 学 教 研 室 老 师 在 实 验 中 给 予 的 指 导 和 帮 助 狄 建 彬 顾 振 纶 赵 笑 东 钱 培 刚 蒋 小 岗 郭 次 仪 中 草 药 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 8 期 10 年 8 月 1324 LDL C 非常明显升高 (
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疾 病 名 柯 萨 奇 病 毒 感 染 英 文 名 coxsackie virus infections 缩 写 别 名 ICD 号 A08.3 概 述 柯 萨 奇 病 毒 感 染 是 由 柯 萨 奇 病 毒 引 起 的 病 毒 性 感 染 性 疾 病 临 床 表 现 复 杂 多 样, 有 无 菌 性 脑 膜 炎 脑 炎 心 肌 炎 心 包 炎 流 行 性 胸 肌 痛 疱 疹 性 咽 峡 炎 等,
1 绪 论 1.1 大 米 的 概 况 水 稻 是 世 界 上 主 要 的 粮 食 作 物 之 一, 也 是 我 国 重 要 的 粮 食 作 物 在 全 世 界 水 稻 的 产 量 中, 我 国 单 产 和 总 产 都 处 于 先 进 行 列, 种 植 面 积 约 占 世 界 水 稻 种 植 总 面 积 的 1/4, 占 全 国 粮 食 播 种 面 积 的 1/3, 而 产 量 则 约 为 世 界
PCR专题改.doc
Primer3 http://frodowimitedu/cgi-bin/primer3/primer3_wwwcgi Primer5 Oligo665 Primer5 http://wwwbioonnet/dispbbsasp?boardid=25&id=38536 Oligo667 http://wwwbioonnet/dispbbsasp?boardid=25&id=40898 1 PCR 1
保健食品功能学评价程序和检验方法
保 健 食 品 功 能 学 评 价 程 序 和 检 验 方 法 (1996 年 7 月 18 日 卫 监 发 [1996]38 号 发 布, 自 发 布 之 日 起 实 行 ) 1. 主 题 内 容 和 适 用 范 围 本 程 序 和 检 验 方 法 规 定 了 评 价 食 品 保 健 作 用 的 统 一 程 序 和 检 验 方 法 本 程 序 和 检 验 方 法 适 用 于 评 价 食 品 的 免
Protein Labeling and Detection
ECL plex Product Specialist 1/ Western Blot 2/ Western Blotting- PI 3/ Western Blotting 1. 2 1 2. 3. 4. Y 3 4 5. 4/ 1. SDS- (SDS-PAGE) SDS ( β- ) --SDS 5/ SDS-PAGE - - - (Tris-HCL ph 6.8) glycine/chloride
期 刘茂军等 猪肺炎支原体 基因原核表达及免疫原性分析,')&%!&"! 7,,766*4,876,), 4* 猪支原体肺炎 *77,)3 (,>' 又称猪气喘病 地方流行性肺炎 该病分布广泛 发病率高 虽死亡率不高 但由于 7 能破坏呼吸道黏膜 纤毛屏障 从而继发其他致病菌的感染 主要表现为咳嗽
畜牧兽医学报 猪肺炎支原体 基因原核表达及免疫原性分析 刘茂军 张 悦 杜改梅 白 昀 王海燕 姜 平 邵国青 江苏省农业科学院兽医研究所 农业部兽用生物制品工程技术重点实验室 国家兽用生物制品工程技术研究中心 南京 南京农业大学动物医学院 南京 摘 要 > 蛋白是猪肺炎支原体的主要免疫优势蛋白 与其他支原体无交叉反应 常作为猪肺炎支原体检测的靶蛋白 本研究通过基因合成获得 基因中含有 个稀有密码子的前
M2 (M2e)23, M2e CRM197 CRM197-N389 CRM197-N190 N C SDS-PAGE A,M2e, (AUC),, M2e-(CRM197-N190)(CRM197- [8],M2e,, N190)-M2e, M2e,, (HBc) M2e (O19
![M2 (M2e)23, M2e CRM197 CRM197-N389 CRM197-N190 N C SDS-PAGE A,M2e, (AUC),, M2e-(CRM197-N190)(CRM197- [8],M2e,, N190)-M2e, M2e,, (HBc) M2e (O19](/thumbs/93/111474125.jpg "M2 (M2e)23, M2e CRM197 CRM197-N389 CRM197-N190 N C SDS-PAGE A,M2e, (AUC),, M2e-(CRM197-N190)(CRM197- [8],M2e,, N190)-M2e, M2e,, (HBc) M2e (O19")
33 4 2017 6 CHINESEJOURNALOF VIROLOGY Vol.33 No.4 June 2017 M2e CRM197 1 1 2 1, 2 1,2 1,2 1,2 * 1,2, (1., 361102; 2., 361102) :, M2 (M2e),, (CRM197) CRM197,M2eCRM197(aa1~535) CRM197-N190 (aa1~190) CRM197-N389(aa1~389)C
国内高等医学院校基础医学二级学科评价结果（1）
国内高等校基础医学二级学科竞争力评价简介 北京大学医学图书馆参考国内外各项评价指标体系, 建立了一套基础医学二级学科竞争力评价指标体系 分别从人才队伍 科学研究和教学成果三方面一共涉及 34 项指标, 对全国 39 家校的 12 个基础医学二级学科进行了评价 我们已经连续做了 4 年的评价,2012 年度的评价结果见下表或 http://library.bjmu.edu.cn/ 名 次 2012 年度国内高等校基础医学二级学科评价结果
<4D6963726F736F667420576F7264202D203231D3A4D3D7B6F9CAB3C6B7BACDC8E9C6B7D6D0D6ACB7BEB5C4B2E2B6A82E646F63>
中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 GB 5413.3 2010 食 品 安 全 国 家 标 准 婴 幼 儿 食 品 和 乳 品 中 脂 肪 的 测 定 National food safety standard Determination of fat in foods for infants and young children, milk and milk products 2010-03-26
基 础 研 究 食 品 科 学 2011, Vol. 32, No. 07 17 白 球 蛋 白 醇 溶 蛋 白 和 碱 溶 蛋 白 等, 发 现 白 果 中 的 蛋 白 质 主 要 以 清 蛋 白 和 球 蛋 白 为 主, 其 中 白 果 清 蛋 白 具 有 抗 氧 化 和 延 缓 衰 老 等 作
16 李 莹 莹 1, 吴 彩 娥 1, *, 杨 剑 婷 2, 范 龚 健 1 (1. 南 京 林 业 大 学 森 林 资 源 与 环 境 学 院, 江 苏 南 京 210037;2. 安 徽 科 技 学 院 食 品 药 品 学 院, 安 徽 凤 阳 233100) 对 白 果 的 主 要 过 敏 蛋 白 进 行 鉴 定, 并 对 其 过 敏 原 性 进 行 分 析 以 SDS-PAGE 和 Western-Blotting
Microsoft Word - 6--李铁松_news_.doc
重组七鳃鳗 PHB2 蛋白的原核表达及纯化 李铁松, 王颖, 高杨, 李庆伟 (, 116081) 摘要 : 为了研究 PHB2 蛋白的生物学活性及后续抗体的制备, 作者以前期构建的 pmd18-t-lm-phb2 质粒为模板, PCR 扩增 Lm-PHB2 基因全长 CDS 区, PCR 产物经 Hind III 和 EcoR I 双酶切后连接至表达载体 pet-32a, 构建重组质粒 pet-32a-lm-phb2
2017 7, (1),, 1.3 [12~14], 1 40,,, 3,200 g 1.1 5min 2mg 1 ml, min,, : 10mL15%, 40 min Mark:18~94ku, Thermo, 4 ml3%, : 800U/mg, Bioreagen
![2017 7, (1),, 1.3 [12~14], 1 40,,, 3,200 g 1.1 5min 2mg 1 ml, min,, : 10mL15%, 40 min Mark:18~94ku, Thermo, 4 ml3%, : 800U/mg, Bioreagen](/thumbs/91/105493900.jpg "2017 7, (1),, 1.3 [12~14], 1 40,,, 3,200 g 1.1 5min 2mg 1 ml, min,, : 10mL15%, 40 min Mark:18~94ku, Thermo, 4 ml3%, : 800U/mg, Bioreagen")
2017 7 Vol.33,No.7 Jul.2017 DOI:10.13652/j.issn.1003-5788.2017.07.002 Analysisofglycosylatedcaseininwholemilkpowder SUN Jing-li LI Lin-qiang ZHU Li-li TANG Lu WU Yuan (, 710119) (Colegeof Food Engineering
福建农业学报 材料与方法 毒株 主要仪器 主要试剂 引物设计 的培养 反应条件的建立 荧光定量 检测临床样本 结果与分析
福建农业学报 林 甦 朱春华 陈 珍 刘斌琼 施少华 江 斌 蔡国漳 林 羽 黄 瑜 甦 男 硕士 助理研究员 主要从事病毒学和动物传染病学研究 福建农业学报 材料与方法 毒株 主要仪器 主要试剂 引物设计 的培养 反应条件的建立 荧光定量 检测临床样本 结果与分析 林 甦等 鸡 亚型白血病病毒荧光定量 检测方法的建立 福建农业学报 讨 论 林 甦等 鸡 亚型白血病病毒荧光定量 检测方法的建立 责任编辑
校园之星
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中国科学技术大学 材料工程 05 校外调剂 0870 化学工程 吉林大学 应用化学 05 校外调剂 0870 化学工程 四川大学 制药
045700000787 东北大学 07030 分析化学 05 校外调剂 07030 无机化学 68 66 94 04 34 063700000004 沈阳药科大学 07030 分析化学 04 校内跨专业调剂 070303 有机化学 73 56 9 00 30 0007008903 北京大学 0780Z 药学类 05 校外调剂 070303 有机化学 75 67 09 8 4 085750830 苏州大学
卷 期 %"' "'" '# 草 业 科 学!! "#$"%" "& 植物生产层 林烟草 个防卫反应信号蛋白编码基因的 克隆及 植物表达载体的构建 路子峰 " 张超 " 李彦忠 草地农业生态系统国家重点实验室兰州大学草地农业科技学院 甘肃兰州 " " 中国农业科学院生物技术研究所 北京 % 摘要 为
卷 期 %"' "'" '# 草 业 科 学 "#$"%" 植物生产层 林烟草 个防卫反应信号蛋白编码基因的 克隆及 植物表达载体的构建 路子峰 " 张超 " 李彦忠 草地农业生态系统国家重点实验室兰州大学草地农业科技学院 甘肃兰州 " " 中国农业科学院生物技术研究所 北京 % 摘要 为了分析林烟草 基因对烟草花叶病毒 ()**+ ) *, -./ 产生抗性的信号途径 培育抗 / 植物新品种 选取!"#
贾 园等 甲型 /3 流感病毒 /0 基因在昆虫细胞中的截短表达 # 共编码至少 种蛋白 许多研究已经证实 血凝素 /0 是流感病毒最重要的表面抗原 /0 含有 ( 个结构域 信号肽 胞浆区 跨膜区和胞外区 本实验设计去掉 /0 信号肽 跨膜域和胞内域个结构域的基因序列 通过昆虫杆状病毒表达系统表达
中国生物工程杂志! 甲型 流感病毒 基因在昆虫 细胞中的截短表达 贾 园 沈 阳 邱亚峰 史子学 邵东华 王晓杜 邓绪芳 王皓婷 赵福广 马志永 中国农业科学院上海兽医研究所 上海 ( 吉林农业大学 长春 ) 摘要 目的 利用 "" * * +,-. 表达重组 /0 蛋白 1 及 0 方法鉴定其表达 方法 采用 方法扩增 0 2 ( #/3 /0 基因 将其克隆到 - /40 载体上 重组质粒 -
2012 年, 我 省 海 洋 环 境 保 护 和 海 洋 生 态 建 设 工 作 在 省 委 省 政 府 的 正 确 领 导 和 国 家 海 洋 局 的 关 心 指 导 下, 深 入 贯 彻 落 实 科 学 发 展 观, 全 力 服 务 蓝 黄 两 区 建 设, 加 快 推 进 海 洋 生 态 文
2012 年 山 东 省 海 洋 环 境 公 报 山 东 省 海 洋 与 渔 业 厅 二 〇 一 三 年 三 月 2012 年, 我 省 海 洋 环 境 保 护 和 海 洋 生 态 建 设 工 作 在 省 委 省 政 府 的 正 确 领 导 和 国 家 海 洋 局 的 关 心 指 导 下, 深 入 贯 彻 落 实 科 学 发 展 观, 全 力 服 务 蓝 黄 两 区 建 设, 加 快 推 进 海 洋
福建农林大学硕士学位论文番茄抗叶霉菌相关基因的鉴定及 TRV 16K 基因的功能分析姓名 : 郑璐平申请学位级别 : 硕士专业 : 分子病毒学指导教师 : 吴祖建 ; 蔡新忠 20070401 番茄抗叶霉菌相关基因的鉴定及 TRV 16K 基因的功能分析 作者 : 郑璐平
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年 月湖南师范大学自然科学学报 & & 第 卷第 期? -#( 1 () -( ' *"# " 1 #(# - ( #*5"-0*)/ '" & 6& 3&*0#& &&& 梅毒螺旋体多表位融合抗原的表达及免疫性研究 韩 雪 魏仙萍 黄亚辉 郑 义 孔令保 & 江汉大学生命科学学院 中国武汉 & 江西农业大学生物科学与工程学院病原微生物研究所 中国南昌 & 花都市人民医院检验科 中国花都 摘 要 设计梅毒螺旋体多表位融合抗原
4 : pcdna3.1(+) ;PLV-EF1A-EGFP(2A) 30s,41 30s,72 2min,35 ; Puro ; TG1; (Hu min 1% manembryonickidney293cels); (Ma- din-darbycaninekidneyce
33 4 2017 6 CHINESEJOURNALOF VIROLOGY Vol.33 No.4 June 2017 1# 2#,, 2, 2, 1 3* 1*,, (1., 511436; 2., 510230; 3., 510663) : HEK-293-HA RT-PCR HA, pcdna3.1(+ ), pcdna3.1(+ )-HA pcdna3.1(+)-ha PLV-EF1a-EGFP(2A)Puro
卫生检验学实习指导.doc
2007.3 1 ... 1 V B2... 4... 7... 9... 12... 14... 17... 19... 25... 29... 31... 34 2 1. 2. 3. ph= 3-9( ph=5-6) Fe 2+ lgk =21.3 510nm, 1.1 10 4 Fe 2+ Fe 3+ Fe 2+ Fe 2+ 1. 1 cm l ml2m15ml 25ml 2. 1. 000
各重點科系面試題目參考
各 重 點 科 系 面 試 題 目 參 考 文 史 哲 法 政 學 群 P1~P4 社 會 教 育 建 築 學 群 P4~P9 商 管 學 群 P9~P12 理 論 工 程 資 訊 學 群 P13~P16 醫 藥 衛 生 農 林 漁 獸 環 境 學 群 P16~P20 文 史 哲 法 政 學 群 中 文 相 關 學 系 1 你 喜 歡 讀 哪 一 類 文 學 作 品? 這 類 作 品 中 喜 歡 哪
- 国际流行病学传染病学杂志 年 月第 卷第 期!" #$% & 流感病毒为 & 病毒 目前已有 余种亚 ( 型 且持续变异 对流感的防控带来巨大挑战 根据核蛋白 ) 和基质蛋白 * 抗原性的不同 流感病毒可分为甲乙丙三型 其中甲型流感病毒引起的 ( 病症最严重 ) 在不同亚型的甲型流感病毒中高度保
国际流行病学传染病学杂志 年 月第 卷第 期!" #$% & 论著 甲型流感病毒核蛋白单克隆抗体制备及其初步应用 张儒轩沃恩康丁建祖方迪陈帅帅杨新燕郭潮潭 (--( 杭州 浙江省医学科学院生物工程研究所通信作者 郭潮潭 ) 1"9))(" #
实验一 氨基酸的分离鉴定—纸层析法
生 物 化 学 实 验 讲 义 内 蒙 古 科 技 大 学 生 物 与 化 学 工 程 学 院 基 础 生 物 教 学 部 2010 年 1 月 目 录 实 验 一 氨 基 酸 的 分 离 鉴 定 纸 层 析 法 2 实 验 二 琼 脂 糖 电 泳 法 分 离 DNA...3 实 验 三 乳 中 酪 蛋 白 的 分 离.5 实 验 四 3,5 二 硝 基 水 杨 酸 法 测 定 还 原 糖.6 实
《实验用小型猪环境条件》编制说明
中国实验动物学会团体标准 实验动物小鼠诺如病毒诊断方法 编制说明 联系人 : 岳秉飞 联系电话 :010-67095401 编制单位 : 中国食品药品检定研究院 时 间 : 2016 年 10 月 20 日 1 2 ~ 3 4 ~ 5 6 A B α μ μ μ 7 8 μ μ μ μ 9 μ μ 表 3 ELISA 检测重复性实验 血清号第一次第二次第三次血清号第一次第二次第三次 1 + + +
装 置 组 成 用 于 在 脊 椎 外 科 或 脑 外 科 手 术 后 涂 敷 在 脊 椎 或 脑 硬 膜 伤 口 外 表 面, 形 成 水 凝 胶 分 类 编 码 :6866 ( 八 ) 快 速 交 换 治 疗 灌 注 导 管 : 是 一 种 治 疗 灌 注 导 管, 导 管 末 梢 部 分 为
国 家 食 品 药 品 监 督 管 理 局 关 于 囊 袋 扩 张 环 等 158 个 产 品 分 类 界 定 的 通 知 国 食 药 监 械 [2012]241 号 2012 年 08 月 22 日 发 布 各 省 自 治 区 直 辖 市 食 品 药 品 监 督 管 理 局 ( 药 品 监 督 管 理 局 ): 为 适 应 医 疗 器 械 监 督 管 理 工 作 的 需 要, 国 家 食 品 药
* 北京大学学报 医学版 :3 73:09 ;: 9 8 ;:939;0 &35 * 提高乳腺癌细胞对抗微管生成药物的敏感性 & 研究还发现 ;3 的高表达与结直肠癌 乳腺癌等肿瘤的预后密切相关 是预后判断的潜在标志物 &&>&* 但 ;3 的生物学功能及其在肿瘤发生发展中的作用目
北京大学学报 医学版 57 3 8 92:3 73:09 ;: 9 8 ;:939;0 &35 * & 论著 抗! 3 单克隆抗体识别的抗原表位区域的确定 谢 玮 苏亚辉 刘彩云 寿成超 北京大学临床肿瘤学院 北京肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所生物化学与分子生物学研究室 恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室 北京 && * 摘 要 目的 确定已获得的多株抗突触蛋白 ;3 单克隆抗体识别的抗原表位区域
材料與方法
µ µ µ κ 17 18 19 20 µ µ µ 21 H 2 DCF-DA H 2 O 2 H 2 DCF-DA 酶 esterase H 2 DCF-DA deacetylation H 2 DCF H 2 DCF H 2 DCF DCF H 2 DCF DCF Bae et al., 1997; Vanden et al., 1997; Atlante et al., 1997; Wang
doc
1326 药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 2011, 46 (11): 1326 1331 EGFR/HER2 联合多肽表位疫苗的构建及体液免疫学分析 胡春萍, 蔡雪婷, 卢悟广, 王志刚, 季夏芸, 曹 * 鹏 ( 江苏省中医药研究院细胞与分子生物学实验室, 江苏南京 210028) 摘要 : 构建以乙肝病毒核心抗原 (HBcAg) 为载体的带有 1 个 EGFR 和
中国防痨杂志 年 月第 * 卷第 期 27!8-!$)&.(.7"*6 /&/!29!&-1 3$/!3.&!)&$/& /!&7&/$)$!4!& $.7&./$: &!&//$)$!&)!$/!3.&!/&.!"3.&!/2:!&/;$ 3&&& 结核病 $)&.$"/!/1 是由 ()
* 中国防痨杂志 年 月第 * 卷第 期 27!8-!$)&.(.7"*6 论著 结核分枝杆菌 -13 亚单位疫苗的构建与免疫原性研究 李志 达泽蛟 章国平 李瑞营 刘万波 苏娟 张颖 祝秉东 摘要 目的构建 ()-13 早期分泌抗原靶 复活促进因子 的原核表达载体 表达和纯化融合蛋白 并对其免疫原性进行研究 方法分别以 ()4 及临床株的基因组为模板 2 扩增 基因 依次插入 31 质粒并在大肠埃希菌
网址 : 电话 : 客服电话微信 : 邮箱 : 地址 : 烟台市开发区珠江路 32 号留创园 3 号楼 E 栋 247 室 Gel Free cl
Gel Free cloning TM 不跑胶载体构建试剂盒 Gel Free Cloning TM Kit Gel Free cloning 技术是一种简单 快速并且高效的载体构建技术, 可将插入片段定向克隆至任意载体的任意位点 该技术不受酶切位点限制, 也不需要线性化质粒, 只需要两步 PCR 即可将目的片段构建到载体的任意位点, 具有省时, 简便的特点 克隆阳性率可达 90% 以上 Gel Free
标题
第 35 卷第 3 期 2014 年 9 月 FOREIGN MEDICALSCIENCESECTION OF MEDGEOGRAPHY Vol.35No.3 Sep.2014 189 基础医学 含 mir-497 野生及突变结合位点的胰岛素受体 mrna3 UTR 区报告基因载体的构建和鉴定 王美晨 3 1,2 1,2 1,2 1,2, 王璇, 蓝茜, 李玥, 刘莉, 1,2 1,2 伊静, 李靖,
討論
MTT cell viability assay 1 [45] succinate dehydrogenase MTT Kreb s cycle 2 MTT 3-[4,5-Dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide DMSO 570 nm 15 3 MTT solution MTT Sigma Cat. M-2128 ( PBS ) 5
1. 將 所 有 洗 淨 瀝 水, 豬 後 腿 肉 泡 水 乾 香 菇 切 絲, 紅 蔥 頭 切 碎, 糯 米 洗 淨 浸 泡 2 小 時 後 磨 成 米 漿 2. 取 一 鍋 加 入 少 許 油, 將 紅 蔥 頭 放 入 爆 香, 再 加 入 蝦 米 香 菇 及 後 腿 肉 翻 炒 後 加 入 水
健 康 99 年 菜 - 十 大 超 級 健 康 食 物 入 菜 [ 菜 單 ] 台 大 醫 院 營 養 師 減 油 獻 上 農 曆 春 節 腳 步 將 近, 想 要 在 新 的 一 年 虎 虎 生 風 嗎? 吃 對 年 菜 就 很 重 要, 台 大 醫 院 營 養 師 團 隊 特 地 精 選 十 大 超 級 健 康, 設 計 了 一 套 健 康 年 菜, 讓 大 家 在 過 年 期 間 呷 健 康,
期 张 海等 牛乳头状瘤病毒贵州株 & 基因克隆及生物信息学分析 -0--%000-&0&-0&--%-0000 #00-:0'0-0-0#0000- #00--&&%-%-#000-#0--0 牛乳头状瘤是由牛乳头状瘤病毒 0- 引起的慢性
中国畜牧兽医 " # 牛乳头状瘤病毒贵州株 基因克隆及生物信息学分析 张 海 周碧君 杨忠成 廖 梅 王开功 文 明 程振涛 王 伟 冯旭芳 贵州大学动物科学学院 贵阳 贵州省动物疫病研究室 贵阳 贵州省畜禽遗传资源管理站 贵阳 摘 要 为分析牛乳头状瘤病毒贵州株 +@ 株 & 基因的分子特征 预测其编码蛋白的生物学功能 本试验对 +@ 株 & 基因进行 +27 扩增 克隆及序列测定 应用生物信息学相关软件及方法对
第 48 卷第 2 期洪流, 等 : 葡萄球菌核酸酶的制备及性质研究 215 中性粒细胞是先天免疫系统的重要组成部分, 属于炎症反应的一线细胞, 在抵抗微生物入侵中发挥着重要作用 [6-7] 活化的中性粒细胞会释放自身线粒体和核内染色质 DNA 到胞外, 包裹各种颗粒蛋白酶形成纤维网样结构, 称为中
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214 学报 JournalofChinaPharmaceuticalUniversity 2017,48(2):214-219 葡萄球菌核酸酶的制备及性质研究 洪流, 郎君超, 贺冬梅, 刘坤锋, 吴洁 ( 中国药科大学微基因药学实验室, 南京 210009) 摘 要 为获得纯度较高的葡萄球菌核酸酶 (SNase) 以研究其与糖尿病的关系, 构建基因工程表达菌 E colibl21/pet28a
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2018 年秋季报考博士上线考生名单 序号 准考证号 报考专业名称 学位类型外语成绩专业基础课成绩报考类别 备注 1 180371 病理学与病理生理学 科学学位 免考 免考 非定向 2 180393 病理学与病理生理学 科学学位 免考 免考 非定向 3 180427 病理学与病理生理学 科学学位 免考 免考 非定向 4 180436 病理学与病理生理学 科学学位 免考 免考 非定向 5 180474
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