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1 色谱 - 质谱在天然药物及保健品 非法添加西药检测中的应用 吴惠勤研究员 ( 广州 ) 中国广州分析测试中心

2 内容提要 一 纯中药制剂及保健食品安全现状二 色谱 - 质谱技术简介三 非法添加药物筛查检测平台四 不同类别非法添加物检测

3 一 纯中药制剂及保健品安全现状

4 1 纯中药制剂及保健食品的真实面目 纯中药制剂或中成药是指以中药材为原料, 按照中医复方标准和中药制剂的要求, 经加工制成的携带方便 可以随时取用的现成药物 保健食品是具有特定保健功能或以补充维生素 矿物质为目的, 适宜于特定人群食用, 具有调节人体机体功能的食品 另根据 2009 年 6 月 1 日开始实施的 食品安全法 规定 : 声称具有保健功能的食品不得涉及疾病预防 治疗功能, 并且不得对人体产生急性 亚急性或者慢性的危害

5 抗风湿等 2 非法添加情况经常发生 (1) 新闻媒体常有保健食品非法添加西药的报道 ; (2) 我中心经常收到此类样品检测委托 ; (3) 具有以下功能的保健品是非法添加的重灾区 : 减肥 壮阳 降血糖 降血压 安神镇定 养颜美白 增强免疫力抗疲劳 降血脂 消炎镇痛

6 保健功能 减肥 常见保健食品中可能添加的违禁化学物质 类别 食欲抑制剂 能量消耗剂 抑郁剂 利尿剂 可能添加的违禁化学物质化合物名称或药物商品名 甲苯丙胺 苄甲苯丙胺 右苯丙胺 苯丁胺 氟苯丙胺 苯丙醇胺 苯甲吗啉 苯双吗啉 氯苯丁胺 邻氯苯丙胺 二乙胺苯酮 吗吲哚 环咪唑吲哚 芬氟拉明 右芬氟拉明 安非拉酮 西布曲明等 麻黄碱 伪麻黄碱 去甲基麻黄素 茶碱 甲基安非他明 咖啡因等阿米雷斯 氟西汀等 呋塞米 布美他尼 氢氯噻嗪 氯噻嗪 苄氟噻嗪 环噻嗪 氢氟噻嗪 甲氯噻嗪 氯噻酮 吲达帕胺等 降血糖 胃肠脂肪酶抑制剂泻药其他双胍类磺酰脲类胰岛素增敏药美格列脲类 西替利司他 利莫那班 赛利司他 奥利司他等 酚酞等 比沙可啶 芬那多松 去氢表雄酮等二甲双胍 苯乙双胍 苯乙福明 甲福明等格列本脲 格列美脲 格列吡嗪 格列齐特 甲苯磺丁脲 氯磺丙脲等 吡格列酮 格列喹酮 罗格列酮 环格列酮 恩格列酮等 瑞格列奈 米格列奈 那格列奈等 α- 葡萄糖甙酶抑制剂阿卡波糖 伏格列波糖等

7 保健功能 可能添加的违禁化学物质类别化合物名称或药物商品名 血管紧张素转化酶卡托普利 依那普利 福辛普利 培哚普利 苯那普利等抑制剂 钙拮抗剂 硝苯地平 氨氯地平 尼群地平 尼莫地平 尼索地平 非洛地平等 降血压 血管紧张素 ⅡAT1 受体拮抗剂 氯沙坦钾等 利尿剂 氢氯噻嗪 环戊甲噻嗪 氯噻酮 吲哒帕胺等 中枢神经和交感神利血平 可乐定等经抑制剂 β- 受体阻滞剂 美托洛尔 卡维地洛等 地西泮 劳拉西洋 氯硝西泮 硝西泮 氟西泮 奥沙西 苯二氮卓类 泮 对氯硝西泮 劳拉西泮 氯丙嗪 氯氮革 三唑仑 艾司唑仑 马来酸咪达唑仑 阿普唑仑等 巴比妥类 巴比妥 异戊巴比妥 司可巴比妥钠 苯巴比妥等 新型催眠药 扎来普隆等 养颜 雌激素类 雌三醇 雌二醇 炔雌醇 雌酮 己烯雌酚 美雌醇等 安神镇定 常见保健食品中可能添加的违禁化学物质

8 保健功能 壮阳 类别 磷酸二酯酶 -5 抑制剂 多巴胺激动剂 可能添加的违禁化学物质 化合物名称或药物商品名 伐地那非 西地那非 他达那非 阿伐那非 好猫西地那非 那猫西地那非 乌地那非 伪伐地那非 艾力达 乙烷西地那非 红地那非 蒙莫西地那非 海地那非 甲磺酸西地那非 那莫西地那非等 脱水吗啡等 肾上腺素能阻断剂育亨宾等睾酮 醋酸睾酮 丙酸睾酮 异己酸睾酮 庚酸睾酮 环戊丙酸睾睾酮酯类酮 葵酸睾酮 苯丙酸睾酮 十一酸睾酮等抗疲劳氢化可的松 可的松 曲安西龙 地塞米松 倍他米松 泼尼松 泼肾上腺皮质激素类尼松龙 倍他米松 氟轻松 倍氯米松等 HMG-CoA 还原酶普伐他汀 瑞舒伐他汀 苯扎贝特 阿托伐他汀 氟伐他汀 洛伐他降血脂抑制剂汀 非诺贝特 辛伐他汀等氯贝丁酯类吉非罗齐等阿司匹林 替诺昔康 吡罗昔康 舒林酸 萘普生 双氯芬酸 保泰非甾体类松 甲芬那酸 扑热息痛 芬布芬 吲哚美辛 布洛芬 氨基比林 去甲基安乃近 酮洛芬 非普拉宗等 增强免疫 消炎镇痛 常见保健食品中可能添加的违禁化学物质 阿片受体激动剂类可待因 双氢可待因 吗啡 美沙酮 曲马多 哌替啶等 其他 奈福泮 氯唑沙宗等

9 3 政府高度重视非法添加问题 据国家食药监局发布的 保健食品中可能非法添加的物质名单 ( 第一批 ) 的通知 显示, 声称有减肥功能 辅助降血糖 ( 调节血糖 ) 缓解体力疲劳( 抗疲劳 ) 增强免疫力( 调节免疫 ) 改善睡眠 辅助降血压 ( 调节血脂 ) 等功能的产品, 是非法添加的 重灾区, 涉及西布曲明 格列本脲 红地那非 他达拉非 盐酸可乐定等物质

10 序号保健功能可能非法添加物质名称检测依据 1 声称减肥功能产品西布曲明 麻黄碱 芬氟拉明 声称辅助降血糖 ( 调节血糖 ) 功能产品 声称缓解体力疲劳 ( 抗疲劳 ) 功能产品 声称增强免疫力 ( 调节免疫 ) 功能产品 5 声称改善睡眠功能产品 6 声称辅助降血压 ( 调节血脂 ) 功能产品 国家食药监局公布非法添加的物质名单 甲苯磺丁脲 格列苯脲 格列齐特 格列吡嗪 格列喹酮 格列美脲 马来酸罗格列酮 瑞格列奈 盐酸吡格列酮 盐酸二甲双胍 盐酸苯乙双胍 那红地那非 红地那非 伐地那非 羟基豪莫西地那非 西地那非 豪莫西地那非 氨基他打拉非 他达拉非 硫代艾地那非 伪伐地那非和那莫西地那非等 PDE5 型 ( 磷酸二酯酶 5 型 ) 抑制剂 那红地那非 红地那非 伐地那非 羟基豪莫西地那非 西地那非 豪莫西地那非 氨基他打拉非 他达拉非 硫代艾地那非 伪伐地那非和那莫西地那非等 PDE5 型 ( 磷酸二酯酶 5 型 ) 抑制剂 地西泮 硝西泮 氯硝西泮 氯氮卓 奥沙西泮 马来酸咪哒唑仑 劳拉西泮 艾司唑仑 阿普唑仑 三唑仑 巴比妥 苯巴比妥 异戊巴比妥 司可巴比妥 氯美扎酮 阿替洛尔 盐酸可乐定 氢氯噻嗪 卡托普利 哌唑嗪 利血平 硝苯地平 国家食品药品监督管理局药品检验补充检验方法和检验项目批准件 国家食品药品监督管理局药品检验补充检验方法和检验项目批准件 国家食品药品监督管理局药品检验补充检验方法和检验项目批准件 , 国家食品药品监督管理局药品检验补充检验方法和检验项目批准件 , 国家食品药品监督管理局药品检验补充检验方法和检验项目批准件 国家食品药品监督管理局药品检验补充检验方法和检验项目批准件

11 媒体报道的政府查处某些非法添加的事件 1 南方日报报道, 广州市保健食品非法添加每年检出率维持在 3.8% 左右, 虽然近年来监管力度不断加大, 但却屡禁不止 年 12 月, 山西省食药局向社会通报了 10 种非法添加化学 药物及 9 种严重违规宣传的保健食品, 并禁售这 19 种保健食品 对该省抗疲劳 减肥 调节血糖等保健品进行检测, 而检出率高达 20% 以上 10 种保健食品中非法添加有西地那非 他达拉非 西布曲明 盐酸二甲双胍等一种或多种化学药物, 长期服用或损害人体肝脏等器官, 甚至威胁生命

12 媒体报道的政府查处某些非法添加的事件 年, 太原市食药局共查获了 14 种保健食品中非法添加化学药物, 包括降糖类 减肥类和壮阳类药物, 检出含吡格列酮 苯乙双胍 西布曲明以及西地那非等化学药 ; 年, 杭州市食药局共采集 19 批次保健食品进行安全性监测评价, 主要包括减肥 增强免疫力和缓解体力疲劳等几类, 检测结果有 7 批次产品不合格, 合格率仅为 63.2%, 其中检出氨基他达那非 伐地那非 西布曲明等

13 4 非法添加西药成分的常见检测方法 1 薄层色谱法: 快速 简单 廉价, 但由于中药制剂和保健品成分复杂, 极易出现假阳性结果, 且重复性和精密度较差 ; 2 高效液相色谱法: 分析速度快, 分离效能高, 灵敏度好, 已有不少方法报道, 但它只能通过保留时间来定性, 在成分复杂的中药制剂和保健品中, 也容易出现假阳性结果, 对无对照品的物质无法进行定性分析, 且其样品前处理较为复杂 ; 3 色谱- 质谱联用法 : 结合了色谱高分离能力和质谱高鉴别能力的优势, 能实现对成分复杂的中药制剂和保健品准确的定量和定性分析, 极大地减少了假阳性结果, 且其样品前处理简单, 在非法添加检测中应用非常广泛

14 二 色谱 - 质谱技术简介 1 气相色谱 / 质谱 易挥发化合物 1.1 气相色谱 / 质谱 (GC/MS) 1.2 气相色谱 / 串联质谱 (GC/MS/MS) 2 液相色谱 / 质谱 难挥发化合物 2.1 液相色谱 / 质谱 (LC/MS) 2.2 液相色谱 / 串联质谱 (LC/MS/MS)

15 气相色谱 / 质谱 (GC/MS) 特点 适合分析易挥发化合物 灵敏度高, 可达 g 可分析混合物 有完善的质谱数据库, 可快速谱库检索定性 流动相为气体

16 气相色谱 / 串联质谱 (GC/MS/MS) 特点 灵敏度更高, 比 GC/MS 高 1~2 数量级, 可达 g 适合痕量目标物定量分析, 同时定量多个化合物 可分析混合物 有完善的质谱数据库, 可快速谱库检索定性 流动相为气体

17 液相色谱 / 质谱 (LC/MS) 特点 适合分析难挥发化合物 灵敏度较高, 可达 g 可分析混合物 无质谱数据库, 需标准品确证来定性 流动相为液体 极性 热不稳定化合物的分析测定 大分子量化合物 ( 包括蛋白 多肽 多糖 多聚物等 ) 的分析测定

18 液相色谱 / 串联质谱 (LC/MS/MS) 特点 灵敏度更高, 比 LC/MS 高 2~3 数量级, 可达 g 适合痕量目标物定量分析, 同时定量多个化合物 可分析混合物 无质谱数据库, 需标准品确证来定性 流动相为液体

19 液相色谱 / 质谱常用的两种离子源

20 液质联用常用的离子源 1 电喷雾电离源 (ESI) ESI 源工作原理示意图

21 电喷雾离子化过程 电场诱导 : 形成带电液滴 分析物离子 + 溶剂离子束盐 / 离子对中性化合物 溶剂蒸发 : 表面电荷密度增加 + 溶剂离子束 库仑爆炸 达到瑞利极限 : 表面张力等于静电斥力

22 电喷雾电离源 (ESI) ESI 的特点 软电离, 产生准分子离子正离子 :(M+H) +,(M+NH 4 ) +,(M+Na) +, 适于碱性物质负离子 :(M-H),(M+CH 3 COO),(M+Cl) 适于酸性物质 产生多电荷离子 :(M+nH) n+ ;(M-nH) n, 低分子量化合物一般产生单电荷离子 ( 失去或得到一个质子 ) 适应极性大的化合物

23 2 大气压化学电离源 (APCI) 液相洗脱液蒸发形成气溶胶 形成带电反应气 蒸气 分子离子作用电荷转移 电晕放电 分析物离子

24 大气压化学电离源 (APCI) APCI 的特点 软电离, 产生准分子离子正离子 :(M+H) +,(M+NH 4 ) +, ; 负离子 :(M-H),(M+CH 3 COO),(M+Cl), 主要产生单电荷离子 适于极性较小的化合物 不适于热不稳定性化合物

25 LC-MS( 离子阱质谱 ) 优点 限制 多级质谱功能 MS n 无法获得准确质量信息 快速扫描功能 定量的灵敏度比串联四极杆低 分辨率高 MS/MS 模式下离子阱中碎裂程度 全扫描 MS/MS 灵敏度高比串联四极杆低, 因为母离子在 自动产生 MS/MS 质谱图, 而离子阱中不会进一步碎裂, 对于且其灵敏度高于三级串联四极串联四极杆, 经常会发生碎片离杆 (QQQ) 子又进一步发生解离的过程, 然 母离子到子离子的碎裂途径简而这会导致 QQQ 的质谱图解析更单清晰, 能进行更清晰的解析加复杂

26 LC-MS( 四级杆质谱 ) 优点 耐用 分析成本低 使用方便 选择离子扫描的灵敏度高 优良的定量性能 限制 只能使用 源内碰撞诱导解离 进行结构解析 无法获得精确质量数 扫描速度比离子阱和飞行时间质谱慢

27 三 非法添加药物筛查检测平台 非法添加药物筛查检测解决方案 易挥发成分气相色谱 - 质谱 (GC-MS) 法气相色谱 - 串联质谱 (GC-MS/MS) 法 热不稳定 难挥发成分液相色谱 - 离子阱质谱 (LC-MS) 法液相色谱 - 串联质谱 (LC-MS/MS) 法 检测流程 提取 分离 结构确证 检测 定量分析 成分分析

28 筛查检测平台 先进的仪器

29 气相色谱 - 质谱仪 (GC/MS)

30 气相色谱 - 串联质谱仪 (GC-MS/MS)

31 高效液相色谱 - 串联质谱仪 (HPLC-MS/MS)

32 专业的团队 研究员 : 2 名高级工程师 : 2 名助理研究员 : 1 名助理工程师 : 6 名在读研究生 2 名

33 四 不同类别非法添加物检测 1 降血糖类西药成分检测 2 补肾壮阳类西药成分检测 3 减肥类西药成分检测 4 镇静安神类西药成分检测 5 抗风湿中药制剂中糖皮质激素类化学药检测

34 1 降血糖类西药成分检测 2006 年 10 月 22 日央视 每周质量报告 曝光了患者服用消糖静胶囊致死的新闻

35 1 降血糖类西药成分检测降血糖类中成药及保健品中的违禁添加物以 α- 葡糖苷酶抑制剂 双胍类和磺酰脲类降糖药为主 该类药物通过阻断碳水化合物分解, 或刺激胰岛素分泌, 或增加胰岛素对受体靶组织的敏感性, 来达到降血糖的功效 但有刺激胃肠道, 导致低血糖等副作用, 不得作为保健食品添加剂 该类药物主要采用 LC-MS 方法检测

36 测定方法 LC/MS 及 LC/MS/MS 法 样品处理取样适量, 研细, 加入适量甲醇溶解并超声, 过滤, 取适量用水稀释即可 LC 测定条件色谱柱 :Zorbax XDB-C18, mm 5μm; 流动相 :0.1% 甲酸水 - 乙腈, 梯度洗脱 ;0.6mL/min; 进样体积 : 10μL MS 测定参数仪器 :Agilent LC-MSD 离子阱,ESI 源 ; 源参数 : 氮气 10 ml/min,35psi,350,vcap 3500V, 正离子模式

37 LC-MS/MS 法同时测定 11 种口服降糖药的总离子流 (TIC) 图 x ESI TIC MRM CID@** (** -> **) 20-50ppb_5c.d Counts vs. Acquisition Time (min) 1 二甲双胍 ;2 苯乙双胍 ;3 罗格列酮 ;4 吡格列酮 ;5 格列吡嗪 ;6 甲苯磺丁脲 ;7 格列齐特 ; 8 瑞格列奈 ;9 格列美脲 ;10 那格列奈 ;11 格列喹酮

38 常见口服降糖药质谱筛查参数 No 化合物 化学式 分子量 碎裂电压 (V) 离子对 碰撞能 (V) 01 格列喹酮 528/403 5 C 27 H 33 N 3 O 6 S Gliquidone 528/ 格列吡嗪 446/321 5 C 21 H 27 N 5 O 4 S Glipizide 446/ 格列齐特 324/ C 15 H 21 N 3 O 3 S Gliclazide 324/ 甲苯磺丁脲 271/91 30 C 12 H 18 N 2 O 3 S Tolbutamide 271/ 二甲双胍 130/71 7 C 4 H 11 N Metformin 130/ 吡格列酮 357/ C 19 H 20 N 2 O 3 S Pioglitazone 357/ 格列美脲 491/352 5 C 24 H 34 N 4 O 5 S Glimepiride 491/126 20

39 常见口服降糖药质谱筛查参数 No 化合物化学式分子量 碎裂电压 (V) 离子对 (m/z) 碰撞能 (V) 格列苯脲 494/ C 23 H 28 ClN 3 O 5 S Glibenclamide 494/ 瑞格列奈 454/ C 27 H 36 N 2 O Repaglinide 454/ 罗格列酮 358/ C 18 H 1 9N 3 O 3 S Rosiglitazone 358/ 苯乙双胍 206/ C 10 H 15 N Phenformin 206/60 15 阿卡波糖 646/ C 25 H 43 NO Acarbose 646/ 那格列奈 318/ C 19 H 27 NO Nateglinide 318/120 10

40 应用实例 :LC-MS ( 离子阱 ) 检测某降糖保健胶囊中非法添加物 Intens. x Time [min] 某降糖保健胶囊的总离子流图 (TIC) 1. 二甲双胍 ( 含量 :6.8mg/g);2. 吡格列酮 ( 含量 :11.3mg/g)

41 二甲双胍结构式及质谱图 m/z 130 m/z 71 NH NH N N H NH 2 m/z 130 m/z 60 x ESI Product Ion:3 (0.157 min) Frag=80.0V CID@20.0 ( > **) Metformin_Unknow_ESI_Pos_PIScan.d Counts (%) vs. Mass-to-Charge (m/ z)

42 吡格列酮结构式及质谱图 Intens. x MS, 16.8min # 吡格列酮一级质谱图 (ESI+) ( 吡格列酮分子量为 356) m/z Intens. x MS2(357.1), 16.8min #1322 m/z m/z m/z m/z m/z

43 近年我中心检测出含降血糖类类药物的部分样品 No 检测时间 样品类型 检出成分 年 8 月 保健食品 / 胶囊 苯乙双胍格列苯脲 年 10 月 保健食品 / 胶囊 格列苯脲吡格列酮 年 10 月 保健食品 / 胶囊 二甲双胍吡格列酮格列苯脲 瑞格列奈 年 5 月保健品 / 粉末苯乙双胍 格列本脲 2011 年 8 月保健品 / 胶囊那格列奈 年 9 月 保健品 / 胶囊 二甲双胍格列本脲

44 2 补肾壮阳类西药成分检测壮阳保健食品中的违禁添加物以 PDE-5 抑制剂及其类似物 肾上腺素能阻断剂 多巴胺激动剂为主 通过扩张阴茎平滑肌, 增加血液流量, 或阻滞肾上腺素能受体 多巴胺受体而达到壮阳目的 但对神经系统 脏器具有一定的损伤, 且有依赖性, 不得作为保健食品添加剂 该类药物主要采用 LC-MS 方法检测

45 测定方法 LC/MS 及 LC/MS/MS 法 样品处理 取样适量, 研细, 加入适量甲醇溶解并超声, 过滤, 取适量用水稀释即可 LC 测定条件 色谱柱 :Zorbax XDB-C18, mm 5μm; 流动相 : 0.1% 甲酸水 - 乙腈, 梯度洗脱 ;0.6mL/min; 进样体积 :10μL MS 测定参数 仪器 :Agilent LC-MSD 离子阱,ESI 源 ; 源参数 : 氮气 10 ml/min,35psi,350,vcap 3500V, 正离子模式

46 常见壮阳类西药质谱筛查参数 No 化合物化学式分子量 碎裂电压 (V) 01 伐地那非 C 23 H 32 N 6 O 4 S 西地那非 C 22 H 30 N 6 O 4 S 西力士 C 22 H 19 N 3 O 育亨宾 C 21 H 26 N 2 O 氨基他达那非 C 21 H 18 N 4 O 豪莫西地那非 C 23 H 32 N 6 O 4 S 羟基豪莫西地那非 C 23 H 32 O 5 N 6 S 离子对 (m/z) 碰撞能 (V) 489/ / / / / / / / / / / / / /112 35

47 常见壮阳药及其类似物 No 中文名英文名化学式分子量 01 西地那非 Sildenafil C 22 H 30 N 6 O 4 S 红地那非 Acetildenafil C 25 H 34 O 3 N 羟基红地那非 Hydroxyacetildenafil C 25 H 34 N 6 O 豪莫西地那非 Homosildenafil C 23 H 32 N 6 O 4 S 羟基豪莫西地那非 Hydroxyhomosildenafil C 23 H 32 O 5 N 6 S Gendenafil C 19 H 22 N 4 O Thiosildenafil C 22 H 30 N 6 O 3 S Thiohomosildenafil C 23 H 32 N 6 O 3 S Hydroxythiohomosildenafil C 23 H 32 N 6 O 4 S Thioaildenafil C 23 H 32 N 6 O 3 S Piperidenafil C 22 H 29 O 4 N 5 S 伐地那非 Vardenafil C 23 H 32 N 6 O 4 S 他达那非 Tadalafil C 22 H 19 N 3 O 氨基他达那非 Aminotadalafil C 21 H 18 N 4 O 4 390

48 应用实例 1:LC-MS( 离子阱 ) 筛查某药酒中壮阳类化学药 Intens. x D: TIC +All MS Time [min] 某补肾药酒的总离子流图 (TIC) 1. 豪莫西地那非 ;2. 羟基豪莫西地那非

49 豪莫西地那非一级和二级质谱图 ntens. x MS, 5.9min # 豪莫西地那非一级质谱图 (ESI+) ( 豪莫西地那非分子量为 488) m/z Intens. x MS2(489.6), 5.9min #360 豪莫西地那非二级质谱图 m/z

50 羟基豪莫西地那非一级和二级质谱图 Intens. x10 8 +MS, 9.2min # 羟基豪莫西地那非一级质谱图 (ESI+)( 分子量为 504) m/z Intens. x MS2(505.7), 9.2min #589 羟基豪莫西地那非 2 二级质谱图 m/z

51 应用实例 2:LC-MS/MS 法同时测定 7 种壮阳药

52 检出西地那非

53 近年我中心检测出含补肾壮阳类药物的部分样品 No 检测时间样品类型检出成分及含量 保健品 / 补肾壮阳酒氨基他达那非 (300mg/L) 保健品原料 / 粉末 伐地那非 (42mg/kg) 西地那非 (63mg/kg) 他达那非 (22mg/kg) 保健品原料 / 粉末他达那非 (0.27%) 保健原料 / 粉末 保健品 / 胶囊 他达那非 (6.4mg/kg) 西地那非 (1.1mg/kg) 氨基他达那非 (7.3%) 羟基豪莫西地那非 (1.1mg/kg) 他达那非 (3.3%) 西地那非 (12.5mg/kg) 保健品 / 胶囊育亨宾 (258mg/kg) 保健原料 / 粉末 他达那非 (98.7mg/kg) 西地那非 (2.3mg/kg) 氨基他达那非 (6.7%) 保健原料 / 粉末伐地那非 (11.2%) 保健原料 / 粉末伐地那非 (1.2%) 西地那非 (3.9mg/kg)

54 3 减肥类西药成分检测减肥保健食品中的违禁添加物 : 食欲抑制剂 能量消耗剂 利尿剂 胃肠脂肪酶抑制剂 泻药 通过抑制食欲, 加速代谢, 少吸水, 或者帮助燃烧脂肪和储备的卡路里来达到减轻体重的目的 虽然减肥效果显著, 但对人体及其内环境平衡都有很大的损害, 我国严令禁止其在保健食品中使用 该类药物主要采用 LC-MS 方法检测

55 测定方法 LC/MS/MS 法 样品处理取样适量, 研细, 加入适量甲醇溶解并超声, 过滤, 取适量用水稀释即可 LC 测定条件色谱柱 :Hypersil BDS C18, mm 2.4μm;30 ; 流动相 : 水 / 乙腈 (50:50);0.3mL/min; 进样体积 :10μL MS 测定参数仪器 :Agilent 6410B TripleQuard,ESI 源 ; 源参数 : 氮气 10 ml/min,35psi,350,vcap 3500V, 正 负离子模式

56 常见减肥类化学药质谱筛查参数 No 化合物化学式分子量 碎裂电压 (V) 离子对 碰撞能量 (V) 西布曲明 280/ C 17 H 26 ClN Sibutramine 280/ 芬弗拉明 232/ C 12 H 16 F 3 N Fenfluramine 232/187 8 麻黄素 166/ C 10 H 15 NO Ephedrine 166/ 布美他尼 * 363/ C 17 H 20 N 2 O 5 S Bumetanide 363/ 吲达帕胺 * 364/ C 16 H 16 ClN 3 O 3 S Indapamide 364/132 26

57 常见减肥类化学药质谱筛查参数 ( 续表 ) No 化合物化学式分子量 碎裂电压 (V) 离子对 碰撞能量 (V) 06 比沙可啶 362/ C 22 H 19 NO Bisacodyl 362/ 氢氯噻嗪 * C 7 H 8 ClN 3 O 4 296/ S Hydrochlorothiazide 2 296/ 甲基安非他明 150/91 16 C 10 H 15 N Methamphetamine 150/ 苯丙醇胺 152/134 6 C 9 H 13 NO Phenylpropanolamine 152/ 注 以上带 * 标记的为负离子模式, 其余为正离子模式

58 No 检测时间样品类型检出成分及含量 保健品 / 胶囊西布曲明 (0.15%) 近年我中心检测出含减肥类药物的部分样品 保健品 / 胶囊 A 胶囊 B 胶囊 C 西布曲明 (14.3mg/kg,29.5mg/kg, 20.6mg/kg) 保健品 / 胶囊西布曲明 (0.11%) 保健品 / 胶囊西布曲明 (3.7%) 保健品 / 胶囊西布曲明 (7.2%) 保健品 / 胶囊西布曲明 (12.8%) 保健品 / 胶囊酚酞 (63mg/kg) 西布曲明 (0.08%) 保健品 / 胶囊酚酞 (29.8% 西布曲明 (1.9%) 保健品 / 胶囊西布曲明 (0.08%) 保健品 / 胶囊西布曲明 (4.8%) 保健品 / 胶囊西布曲明 (8.8%) 保健品 / 胶囊西布曲明 (0.28%)

59 4 镇静安神类西药成分检测 安神镇静保健食品中的违禁添加物以苯二氮卓类和巴比妥类为主 这些药物除具有镇静催眠作用外, 还有抗焦虑 抗惊厥和中枢性骨骼肌松弛的作用, 但能够对中枢神经系统产生抑制, 甚至麻痹呼吸中枢致死, 且易产生耐受性及依赖性, 是严格管控的药物, 严禁在保健食品中添加 该类药物可采用 GC-MS 或 LC-MS 方法检测

60 测定方法 GC/MS 法 样品处理取样适量, 研细, 加入适量甲醇溶解并超声, 过滤, 取适量用水稀释即可 GC 测定条件 DB-1 型石英毛细管柱 (30m 0.25mm 0.25μm); 载气 : 高纯氦气, 流量 1 ml/min; 柱温 :150, 以 10 /min 升至 290 ; 柱前压 100 kpa; 载气 :He; 进样口温度 :280 ; 进样量 :1.0μL; 分流比 :10:1 MS 测定参数 EI 离子源 ; 电子轰击能量 70eV; 离子源温度 :230 ;GC-MS 接口温度 :280 ; 四级杆温度 :150 ; 电子倍增器电压 :2300V; 扫描质量 :29~600amu; 扫描方式 :Scan

61 10 种常见镇静安眠类药物的总离子流色谱图 (TIC) 1 巴比妥 ;2 异戊巴比妥 ;3 司可巴比妥 ;4 苯巴比妥 ;5 地西泮 ;6 咪达唑仑 ;7 硝西泮 ;8 氯硝西泮 ;9 艾司唑仑 ;10 阿普唑仑

62 10 种常见镇静安神类药物的质谱特征离子 No 化合物名称分子式分子量特征离子 m/z 定量离子 1 巴比妥 Barbital C 8 H 12 N 2 O (100),98(20),112(18),141(89) 异戊巴比妥 Amylobarbitone C 11 H 18 N 2 O (44),55(31),141(81),156(100) 司可巴比妥 Secobarbital C 12 H 18 N 2 O (60),97(33),195(20),168(100) 苯巴比妥 Phenobarbital C 12 H 12 N 2 O (30.5),161(17.5),204(100),232(15.1) 地西泮 Diazepam C 16 H 13 ClN 2 O (31.5), 56(100),283(85.7),284(62.6) 咪达唑仑 Midazolam C 18 H 13 ClFN (9.9),310(100),312(30.2),325(23.4) 硝西泮 Nitrazepam C 15 H 11 N 3 O (63.3),234(65.0),253(100),280(99.7) 氯硝西泮 Clonazepam C 15 H 10 ClN 3 O (65.6),240(57.7),280(100),314(97.8) 艾司唑仑 Estazolam C 16 H 11 CIN (79),239(77),259(100),294(82) 阿普唑仑 Alprazolam C 17 H 13 ClN (86.8),273(76.9),279(100),308(87.0) 279

63 测定方法 LC-MS/MS 法 样品处理取供试品 0.3g, 加甲醇超声 20min, 用甲醇定容至 25mL 根据样品中含量, 稀释到仪器线性范围内进行测试 LC 测定条件色谱柱 :Kromasil C18( mm 3.5μm); 柱温 :40 ; 以 0.1% 甲酸 (A)- 甲醇 (B) 为流动相进行梯度洗脱 (0~15min,10% B 45%B;15~23min,45%B 85%B;23~30min,85%B; 30~34min,100%B;34~39min,45%B;39~45min,10%B); 流速 0.2mL/min; 进样体积 :5μL

64 测定方法 LC-MS/MS 法 MS 测定参数电喷雾离子源 (ESI), 正离子扫描, 多反应监测模式 (MRM), 干燥气温度 :350, 干燥气流速 :10 L/min, 雾化气压力 :40psi, 毛细管电压 :4000V

65 近年我中心检测出含镇静安神类药物的部分样品 No 检测时间 样品类型 检出成分 年 5 月 保健食品 / 胶囊 氯丙嗪地西泮 年 10 月 保健食品 / 散剂 艾司唑仑苯巴比妥 年 2 月 保健食品 / 片剂 氯丙嗪阿普唑仑奥沙西泮 氯氮平 年 9 月 保健品 / 胶囊 地西泮

66 5 抗风湿中药制剂中糖皮质激素类化学药筛查 抗风湿中药制剂中的违禁添加物以糖皮质激素类为主 这些药物治疗风湿性及类风湿性病, 但过多摄入糖皮质激素可引起水 盐 糖 蛋白质及脂肪代谢紊乱, 不法分子治疗上述疾病的纯中药制剂中非法添加糖皮质激素提高药效, 但对消费者健康造成危害 该类药物可采用 LC-MS 方法检测

67 测定方法 LC-MS/MS 法 样品处理取样品加入适量甲醇, 超声混匀 10 min, 用甲醇稀释定容, 过滤取续滤液为样品溶液 若样品为口服液或注射液, 则量取样品溶液 10mL 于分液漏斗中, 加水 10 ml, 再依次加入 ml 的三氯甲烷 - 乙腈 ( 体积比为 9:1) 提取, 提取液用水洗涤 2 次 将三氯甲烷层用无水硫酸钠干燥后, 蒸干, 残渣用甲醇 5 ml 溶解, 过滤, 取续滤液作为样品溶液

68 测定方法 LC-MS/MS 法 LC 条件色谱条件 : C18 色谱柱 ( 5 μm, 250mm* 4.6 mm ); 流动相 A 为水 - 四氢呋喃 ( 体积比为 100:1), 流动相 B : 乙腈 - 水 - 四氢呋喃 (80:20:1), 梯度洗脱 : 0~ 2 m in, A 由 80% 65%; 2~ 30m in, A 由 65% 20%; 30~ 32m in, A 由 20% 80%; 平衡 8 min; 流速 1mL /m in; 分流比 4:1; 紫外检测波长 240 nm; 柱温为室温 ; 进样量 10 μl MS 条件质谱条件 : ESI 源, 源电压 4.5 kv; 毛细管温度 270, 毛细管电压 20 V; 鞘气流速 50ml/min; 正离子检测, 扫描方式采用 MRM 模式

69 测定方法 LC-MS/MS 法

70 近年我中心检测出含抗风湿类药物的部分样品 No 检测时间样品类型检出成分 年 5 月中成药 / 绿色胶囊 年 6 月保健食品 / 胶囊 倍他米松醋酸氟氢可的松醋酸泼尼松泼尼松龙 年 12 月保健食品 / 胶囊醋酸曲安奈德 年 7 月保健品 / 粉末醋酸泼尼松 年 10 月保健品 / 胶囊 地塞米松 醋酸地塞米松

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