实验样品制备共收集到 4 份市售保健食品, 样品剂型分为胶囊和丸剂, 将样品研磨成粉状后, 分别称取样品 10 mg, 加入 MeOH/H 2 O=50/50 (v/v) 超声提取 10 min, 至终浓度 1.0 mg/ml, 备用 LC 条件系统 : ACQUITY UPLC I-Class 色

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仔宦
7 years ago
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1 [ 应用纪要 ] 范自全, 白旭沃特世科技 ( 上海 ) 有限公司应用优势本实验在 UNIFI 数据处理平台上, 针对已知和未知的非法添加成分, 成功地建立起一种快速准确的分析筛查方法该方法具有下列优势 : 采用 Waters 专利的 MS E 的数据采集模式, 一针进样即可得到所有峰的分子离子和相应的子离子信息采用基于 Oracle 关系型数据库的 UNIFI 系统鉴定已知或未知的成分, 数据库是开放性的, 用户可以自己添加化合物和编辑数据库功能强大的 UNIFI 软件提供多种工作流程, 将科学数据库和灵活数据处理及报告模板相结合, 使工作流程简单化, 大大提高工作效率简介随着人们生活节奏逐渐加快, 工作压力增大, 越来越多的人处于亚健康状态, 具有调节人体机能的保健食品逐渐受到人们的欢迎但保健食品不是药物, 不具有治疗效果市售的保健食品以纯天然, 效果佳无毒副作用等宣传手段博得消费者的青睐, 经中国消费者协会调查显示, 有相当比例的保健食品存在非法添加现象保健食品中非法添加的化学成分, 对食用者危害极大, 严重影响食用者的用药安全日趋严重的形势也得到了相关部门的重视, 随着国家对非法添加问题的重视程度与打击力度的加大, 非法添加现象得到一定程度的抑制, 但同时也出现了一些新的问题, 如添加的化学成分种类增多 1,2 对照品获取难等这些问题的出现给非法添加化学成分的检测带来了严重挑战因此, 需要建立一种快速准确专属性强的方法对非法添加成分进行筛查, 为保健食品的安全提供支持依据关键词保健食品, 非法添加, 成分筛查,UNIFI, 抗炎, 降血糖 1

2 实验样品制备共收集到 4 份市售保健食品, 样品剂型分为胶囊和丸剂, 将样品研磨成粉状后, 分别称取样品 10 mg, 加入 MeOH/H 2 O=50/50 (v/v) 超声提取 10 min, 至终浓度 1.0 mg/ml, 备用 LC 条件系统 : ACQUITY UPLC I-Class 色谱柱 : ACQUITY BEH C 18, mm,1.7 µm 柱温 : 40 进样量 : 1 µl 流速 : 400 µl/min 流动相 A: 0.2 mm 甲酸铵的水溶液 ( 含 0.1% 甲酸 ) 流动相 B: 乙腈 ( 含 0.1% 甲酸 ) MS 条件 MS 系统 : Waters Xevo G2-S QTof 采集模式 : 分辨率模式 ESI +,MS E 毛细管电压 : 3 kv 锥孔电压 : 30 V 源温度 : 150 雾化气温度 : 450 雾化气流速 : 800 L/h 锥孔气流速 : 20 L/h 采集质量范围 : Da Lock mass: 亮氨酸脑啡肽 (LE) 400 ng/ml 扫描时间 : 0.1 s 碰撞能量 : Low CE,6 ev High CE,15-40 ev 结果与讨论本实验采用超高效液相色谱与四级杆飞行时间质谱对收集到的 4 种保健食品进行检测, 采用 UNIFI 软件进行数据处理, 实验结果表明 :4 种保健品均含有非法添加成分, 结果如表 1 所示样品添加成分分子式未知胶囊 1 未知胶囊 2 未知胶囊 3 伸筋壮骨丸碎片离子数表 1. 4 种保健品的检测结果注 :a, 单位为 mda;b, 保留时间 ( 分钟 );c, 保留时间 ( 分钟 );d, 通过鉴定后添加成分 m/z a 误差数据库 RT b 实际 RT c 响应加合物吡咯昔康 C 15 H 13 N 3 O 4 S H, +Na 吲哚美辛 C 19 H 16 ClNO H, +Na d 双氯芬酸钠 C 14 H 11 Cl 2 NO H 盐酸苯乙酸胍 C 10 H 15 N H 马来酸罗格列酮 C 18 H 19 N 3 O 3 S H 格列本脲 C 23 H 28 ClN 3 O 5 S H, +Na 盐酸苯乙双胍 C 10 H 15 N H 格列本脲 C 23 H 28 ClN 3 O 5 S H, +Na 对乙酰氨基酚 C 8 H 9 NO H 甲氧苄啶 C 14 H 18 N 4 O H 吡咯昔康 C 15 H 13 N 3 O 4 S H, +Na 吲哚美辛 C 19 H 16 ClNO H, +Na 保泰松 C 19 H 20 N 2 O H, +Na d 双氯芬酸钠 C 14 H 11 Cl 2 NO H 2

3 本实验采用 ACQUITY UPLC I-Class 及 Xevo G2-S QTof 系统进行测定,UNIFI 软件进行数据处理, 对保健食品中非法添加成分建立了系统的筛查方法, 完成了 4 种市售保健食品中非法添加成分的快速筛查和鉴定准确的筛查结果取决于采集到的高质量质谱数据本方案中采用了具有沃特世专利的非数据依赖型 MS E 采集方式, 此方式由低碰撞能与高碰撞能两种扫描交替构成, 分别记录母离子及碎片离子信息, 使我们在一次液质分析中同时获得所有峰的精确母离子和相应的子离子碎片信息 ( 如图 1 所示 ) 图 1. MS E 数据采集方式采集的质谱图低碰撞能 ESI + 模式下的质谱扫描图 ( 上图 ) 提供母离子信息 ; 高碰撞能 ESI + 模式下的质谱扫描图 ( 下图 ) 提供子离子碎片信息根据检测目的的不同, 保健食品中化学成分添加检测分为两种 : 目标性分析和非目标性分析保健食品基质非常复杂, 所能添加的化学成分种类繁多, 样品中潜在的目标化合物的种类数量和浓度的差异性为非法添加检验工作也带来了相当大的挑战我们应用 UNIFI 科学数据库解决上述所有难题该数据库综合母离子碎片离子和保留时间等数据, 并将每个化合物做了药效学分类, 用户可根据化合物的中文名称英文名称或分类检索非法添加的成分这些成分的母离子碎片离子和保留时间数据均为基于标准品在同样的采集方法下采集到的数据本实验通过 UNIFI 软件对采集到的样品数据与数据库进行匹配, 针对数据库已有的目标性化合物, 该软件通过保留时间精确质量数及二级碎片等多种要素进行确证, 以提高检测准确度减少假阳性结果样品只需一针进样即可得到所有相关信息, 自动通过软件处理数据, 给出报告, 大大提高非法添加的分析效率 3

4 图 2. 非法添加数据库的基本结构及其包含的信息, 化合物的名称 ( 中文名与英文名 ), 化学结构分子式精确质量以及药效学分类随着造假手段的提高, 保健食品中添加的化学成分的种类趋向于完全未知的化合物常规的检测方法中, 对完全未知成分的定性是一项比较困难的工作 UNIFI 非法添加数据库可贵之处在于, 它可方便直观地确认和添加之前未知的化合物, 便于根据不同需求不断扩充完善功能强大的 UNIFI 软件提供了说明工具栏, 直接链接到 586 个在线数据库自动检索它提供手动鉴定元素组成分析碎片离子匹配及结构类似物的共有碎片离子 3 匹配等功能, 以实现对未知化合物的鉴定, 并可将结构直接倒回数据库中, 有利于提高未来分析的有效性, 让研究者不再受未知分析物的困扰图 3. UNIFI 软件提供了说明工具栏和多种未知化合物鉴定途径 4

5 通过 UNIFI 软件中预设的工作流程模板, 用户根据具体应用定制不同的工作流程并加以保存, 以提升数据查看的便捷性 UNIFI 自动对采集的质谱数据进行数据库匹配, 所得的结果经保留时间精确质量数及二级碎片等多种要素确证通过数据过滤器, 突出显示所选化合物, 并自动给出化学物结构, 显示样品图谱中确定的所有组分最终通过 UNIFI 自带的报告模板打印出报告, 整个流程简便快速且高度自动化, 提高了数据分析效率图 4. 通过 UNIFI 预设的工作流程模板处理的数据结果 5

6 结论参考文献本实验在 UNIFI 非法添加数据库的基础上, 建立了一种新型分析筛查方法该方法可以在单次分析过程中同时检测保健食品中已知和目前未知的非法添加成分, 采用功能强大的 UNIFI 软件处理数据, 方法简单有效采用固定的液相与质谱采集方法全扫描数据采用沃特世专利的 MS E 的数据采集模式, 一针进样就得到所有峰的母离子和相应的子离子信息, 让研究人员能够最大程度的排除假阳性结果, 并在单次筛查中轻松完成鉴定和确证 1. 郭志鑫, 董培智, 申国华, 裴社强, 保健食品非法添加化学药品的特点与监管建议. 中国药事,2013,27(11): 王震红, 杨永刚, 王新意, 薛娇, 中成药及保健食品中非法添加化学药品检验中的问题与对策. 实用药物与临床,2013,16(6): Salman Azimi, Nayan S. Mistry, and Michelle Wood. UPLC/MS/MS for the Screening, Confirmation, and Quantification of Drugs Illegally Added to Herbal/Dietary Supplements for the Enhancement of Male Sexual Performance. Waters Application Note. UNIFI 科学数据库综合了非法添加化学成分的母离子碎片离子和保留时间信息, 结合自动鉴定功能, 可快速完成从采样到数据处理, 到最后的报告打印步骤, 提高工作效率本应用同时对目前未知的非法添加成分进行了多种方式的定性检测, 并将结果直接倒回数据库中, 用户可根据实验需求不断扩充数据库, 有利于提高未来分析的有效性实验结果表明, 本实验建立的筛查方法能快速准确地对实际样品进行验证, 所有成分的定性分析工作皆由软件自动进行, 简化的工作流程提高了非法添加检测的工作效率沃特斯中国有限公司沃特世科技 ( 上海 ) 有限公司 Waters, UNIFI, ACQUITY UPLC, ACQUITY, Xevo 和 The Science of What's Possible 是沃特世公司的注册商标 QTof 是沃特世公司的商标其它所有商标均归各自拥有者所有 2014 年沃特世公司印制于中国北京 : 上海 : 广州 : 成都 : 香港 : 免费售后服务热线 :800 (400)

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不同基源石斛属植物不同来源商品石斛徐蓓杨莉陈崇崇王峥涛徐珞珊建立黄草类石斛的薄层色谱定性鉴别方法采用薄层色谱法考察不同基源石斛及商品药材中专属性成分联苄类化合物毛兰素石斛酚杓唇石斛素和三羟基甲氧基联苄的薄层色谱行为对石斛药材进行定性鉴别通过种不同基源的石斛及批商品石斛的薄层色谱鉴别证明此方法专属性强操作简单重复性好为石斛的鉴别提供了一种准确有效的新方法本方法可用于黄草类石斛的鉴别为中药石斛的质量标准研究提供科学依据