学报 JournalofChinaPharmaceuticalUniversity 2019,50(1): 中药及保健品中非法添加物的分析技术研究进展侯晓芳, 施迎娣, 王嗣岑 ( 西安交通大学药学院, 西安 ) 摘要近年来, 中药及保健品中非法添加化学药物的事件时

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灿偃汲
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1 学报 JournalofChinaPharmaceuticalUniversity 2019,50(1): 中药及保健品中非法添加物的分析技术研究进展侯晓芳, 施迎娣, 王嗣岑 ( 西安交通大学药学院, 西安 ) 摘要近年来, 中药及保健品中非法添加化学药物的事件时有发生为此, 开发快速灵敏准确检测非法添加物的方法和技术十分重要通过查阅年国内外发表的相关文献资料, 本文从方法和技术的角度对中药和保健品中非法化学药物的分析技术研究进展进行了综述, 为进一步开发快速检测新方法和新技术提供理论参考关键词中药 ; 保健品 ; 非法添加物 ; 分析技术中图分类号 R917 文献标志码 A 文章编号 (2019) doi: /j.isn 引用本文侯晓芳, 施迎娣, 王嗣岑中药及保健品中非法添加物的分析技术研究进展 [J]. 中国药科大学学报,2019,50(1):33-40 Citethisarticleas:HOUXiaofang,SHIYingdi,WANGSicen ProgresintheanalysisofadulteratedadditivesintraditionalChinesemedicinesand healthcareproducts[j].jchinapharmuniv,2019,50(1):33-40 ProgressintheanalysisofadulteratedadditivesintraditionalChinesemedi cinesandhealthcareproducts HOUXiaofang 牞 SHIYingdi 牞 WANGSicen SchoolofPharmacy 牞 Xi anjiaotonguniversity 牞 Xi an 牞 China Abstract Inrecentyears 牞 casesofilegaladditionofchemicalsubstancesintothetcmsandhealth careprod uctshappenedregularly Therefore 牞 itisparticularlyimportanttodevelopfast 牞 sensitiveandaccurateanalysis methodsfordetectionoftheadulteratedchemicalsubstances Throughliteraturesurveyofrelevantpaperspub lishedin 牞 thisarticlesummarizestheapplicationofvariousanalyticaltechniquesforadulteratedchem icalsubstancestothetcmsandhealth careproductswithusefulinformationforthefurtherdevelopmentofnew methodsandtechnologiesinthisfield Keywords traditionalchinesemedicines 牗 TCMs 牘牷 health careproducts 牷 adulteratedadditives 牷 analyticaltech niques ThisstudywassupportedbytheNationalNaturalScienceFoundationofChina 牗 No 牘牞 andthenaturalsciencefoundation ofshaanxiprovince 牗 No 2017JQ8024 牘目前, 全球有近 40 亿人使用中草药产品, 占总人口的近 80% 全球中草药市场年交易额已接近 5 千亿元, 并以每年 10% ~20% 的速度递增然而, 近年来, 不法商贩为了谋求高额利润, 在中药及保健品中非法添加化学药物的案例时有发生, 而且添加的成分也越来越隐蔽和复杂, 对人民群众的用药安全产生了极大的威胁例如 : 二氢吡啶类钙拮抗剂药物临床效果好, 价格便宜并且容易获得, 适用于各型高血压尤其是重症高血压, 现已成为降压类健康产品非法添加的主要化学药物之一 [1] ; 将抗组胺的化学药物添加至中药制剂中 [2], 导致消费者产生药物过敏 ; 另外, 中药材及饮片染色情况也较为常见 [3] 这些危害性大影响面广的事件引发了制药行业和药政管理人员的广泛关注, 对于收稿日期通信作者 Tel: E mail:wangsc@mail xjtu edu cn 基金项目国家自然科学基金资助项目 (No ); 陕西省自然科学基金资助项目 (No 2017JQ8024)

2 34 学报 JournalofChinaPharmaceuticalUniversity2019,50(1):33-40 第 50 卷非法添加物的分析技术研究值得深入探讨日常检验过程中, 发现一些减肥类降血脂类和润肠通便类保健食品在功能宣传和非法添加的药物类型上往往具有交叉, 例如一些不法商家在降脂类保健食品中掺入泻下通便的药物, 既能迅速达到所宣传的功效, 又规避了非法添加降脂类化学药物的检测, 因此需建立全方位的检测方法, 打击此类多种 [4] 类隐蔽性强的非法添加行为徐硕等已在 2015 年对中药和保健品非法添加化学药物的类别检测技术发展方向以及监管对策等多方面进行了综述本文针对年间国内外学者采用高效液相色谱法液相色谱质谱联用法气相色谱质谱法离子迁移谱法红外光谱法和拉曼光谱法等方法检测中药及保健品中非法添加化学药物的文献进行全面综述, 为进一步开发快速检测新方法和新技术提供理论参考主要分析技术在非法添加物检测中的应用 1 1 高效液相色谱技术高效液相色谱法高效液相色谱技术因其稳定性好重复性好准确度高易于操作等优势, 在中药及保健品中非法添加剂的应用最为广泛在食品药品非法添加的监督检验工作中, 需要对海量样品中可能添加的多种化学成分进行快速分析, 这使得检测机构面临巨大的压力, 迫切需要高通量 [1] 快速检测方法陈国权等采用常规高效液相色谱技术建立了 40min 内同时测定氨氯地平硝苯地平尼群地平尼莫地平尼索地平和非洛地平 6 种抗高血压成分的方法, 检出限为 56mg/kg 对市场收集的 200 批样品进行测定, 非法添加二氢吡啶类化学成分的阳性样品有 15 批, 涉及成分有硝苯地平氨氯地平尼群地平和尼莫地平, 混合添加两种以上化学成分的占 53 3% 其中, 清脂降压素检出氨氯地平和尼群地平, 罗布麻胶囊检出硝苯地平尼群地平和尼莫地平等超高效液相色谱法相较与普通 HPLC, 基于 1 7μm 填料的超高效液相色谱仪 (UPLC) 具有更高的灵敏度更快的分析速度和更强的分辨率 [5] [6] 韩春晓等采用 UPLC 技术实现了 5min 内快速检测鱼腥草柴胡维生素 C 盐酸林可霉素黄芪多糖等注射液中的非法添加地塞米松磷酸 [7] 钠, 检出限为 10 0mg/L Heo 等采用 UPLC 技术建立了 30min 内同时测定氨氯地平阿替洛尔坎地沙坦西酯美开朗塞利洛尔地尔硫多沙唑嗪非洛地平依拉地平乐卡地平氯沙坦米诺地尔纳多洛尔硝苯地平尼伐地平尼索地平奥美沙坦喷布特罗酚妥拉明吲哚洛尔哌唑嗪普萘洛尔特拉唑嗪替米沙坦以及缬沙坦, 检出限为 0 2~1 0mg/L, 并应用于 15 种片剂 4 种硬胶囊 18 种软胶囊 22 种粉剂 19 种液体制剂以及 19 种丸剂等 97 种药品的检测, 其中分别在 1 种丸剂和 1 种片剂中分别检测到和 28 07mg/kg 阿替 [8] 洛尔黄芳等通过 UPLC 技术建立了同时测定 17 种壮阳类化合物的方法, 检测了包括胶囊片剂酒咖啡糖果等 300 多个保健样品, 其中检出频率最高的是西地那非和他达那非, 另有少部分检出羟基硫代豪莫西地那非去甲西地那非硫代豪莫西地那非等成分 ; 保健酒中药物的添加量一般为 0 01% ~0 05%, 咖啡中的添加量为 0 1% ~ 1 0%, 片剂及胶囊中的添加量为 0 2% ~20% 新型固定相考虑到 UPLC 价格较贵维护费用高抗污染能力差, 应用受到一定的限制为了达到低柱压高柱效的效果, 需要寻求粒径与压力的平衡点,Fused Core( 核壳或熔融 ) 技术应运而生它将多孔硅壳熔融到实心硅核上制备成色谱柱固定相, 其亚 3μm(2~3μm) 填料产生的柱压明显低于亚 2μm 填料产生的柱压, 可应用于常规 HPLC 仪器, 同时其柱效显著优于传统色谱填料 (4 5μm) [9] 因此, 基于 Fused Core 技术的亚 [10] 3μm 填料色谱柱开始成为关注焦点雷毅等采用 AgilentPoroshel120EC C 18 色谱柱 (50mm 4 6mm,2 7μm),1 5mL/min 的流速,20min 内同时快速测定壮阳类保健品中的 18 种非法添加物阿扑吗啡酚妥拉明育亨宾那红地那非红地那非氨基他达拉非艾地那非羟基豪莫西地那非豪莫西地那非那莫西地那非伪伐地那非硫代艾地那非羟基硫代豪莫西地那非硫代西地那非硫代豪莫西地那非他达拉非枸橼酸西地那非伐地那非,18 种添加物的检出限均为 1 0mg/kg 对市场收集的 500 批 ( 其中网购样品 50 批 ) 样品进行检测, 发现非法添加的样品有 42 批, 检出率为 8 4%, 涉及育亨宾西地那非羟基豪莫西地那非艾地那非他达拉非氨基他达拉非红地那非伐地那非硫代艾地那非硫

3 第 50 卷第 1 期侯晓芳, 等 : 中药及保健品中非法添加物的分析技术研究进展 35 代西地那非羟基硫代豪莫西地那非硫代豪莫西地那非等 12 种化合物非法添加频率较高的化合物依次为西地那非他达拉非硫代艾地那非, 还同时存在混合添加两种成分的情况 ; 主要剂型依次为胶囊剂片剂丸剂阳性样品主要来源于网购, 表明网络销售的壮阳类保健品存在 [11] 较大安全风险何睿等基于亚 3μm 核壳填料色谱柱技术建立了高效液相色谱法 20min 内快速筛查 21 种抗风湿类化合物, 乙酰氨基酚氨基比林甲氧苄啶水杨酰胺磺胺甲唑阿司匹林水杨酸非那西丁氢化可的松吡罗昔康地塞米松醋酸泼尼松酮洛芬萘普生芬布芬醋酸地塞米松保泰松双氯酚酸钠吲哚美辛布洛芬泼尼松盐酸奈福泮, 萘普生的检出限为 0 8mg/kg, 其余化合物的检出限为 2 0mg/kg 对 70 批抽检样品进行检测, 发现 18 批阳性样品定量分析 HPLC 法常采用的含量测定方法为外标法, 但在药品快速检测现场往往缺少对照品, 因此外标法不适用于快速检测时的含量测定采用相对校正因子法, 可在物理性质或结构相似的一类化合物中选择其中的 1 个化合物为内标, 检测时可少用或不用对照品, 加快检测分析速度 [12] 如采用相对容量因子和紫外光谱相似度双指标进行定性, 相对校正因子法进行定量分析中成药及保健食品中非法添加 9 种调血脂类药物成分 ( 普伐他汀钠苯扎贝特阿托伐他汀钙氟伐他汀钠氯贝丁酯美伐他汀吉非罗齐洛伐他汀辛伐他汀 ) 1 2 高效液相色谱串联质谱技术质谱技术因具有灵敏度高特异性好响应速度快等特点, 在食品安全药物分析和物证分析等领域得到了广泛应用确证非法添加物的一般模式为 : 将串联质谱法和 HPLC PDA 法结合起来, 相互佐证, 最大限度的提供非法添加物的信息, 为非法添加物的确证提供了双重保险若供试品中发现添加物, 采用 HPLC PDA 法进行初筛, 将所得添加物的紫外光谱图与已建立的数据库进行匹配, 若匹配成功, 找到疑似添加物, 用 HPLC PDA 法对添加物进行确证 ; 若匹配不成功, 用串联质谱法采集添加物质谱信息, 分析准分子离子峰并与已建立的一级质谱数据库进行匹配, 同时根据所给出的质谱信息推导结构特征, 找到疑似添加物, 再建立串联质谱法或 HPLC PDA 法对添加物进行确证表 1 为近年学者采用液质联用技术检测中药及保健品中非法添加剂的代表性文献可见,50% 的文献使用的是 Waters 公司 1 7μm 粒径的 BEH C 18 色谱柱, 采用 UPLC MS/MS 方法, 以多离子反应监测 (MRM) 为测定模式, 可实现多成分同时快速分析 [13-16] [13] 如, 宫旭等建立的方法可在 15min 之内同时测定 37 种具有减肥降脂通便功能的化 [16] 合物, 钱叶飞等建立的方法可在 15min 之内同时测定 38 种糖皮质激素类化合物表 1 HPLC MS/MS 法检测药品及保健品中非法添加化学药物的主要文献编号色谱柱及分析时间待测化合物 LOD 检测结果文献 1 AgilentEclipsePlusC 18 色谱柱 (2 1mm 50mm,3 5μm), 8min 氯雷他定盐酸苯海拉明盐酸赛庚啶盐酸西替利嗪盐酸异丙嗪咪唑斯汀和马来酸氯苯那敏 (7 种 ) 0 5~2 5 ng/ml 共检样 12 批, [2] 阳性结果 7 批, 阳性率 58% 2 WatersBEHShieldRP 18 色谱柱阿昔莫司烟酸麻黄碱氯噻嗪氢氯噻嗪咖啡因甲基安非 0 01~5 12 共检样 74 批,[13] (2 1mm 100mm,1 7μm), 15min 他明番泻苷 B 番泻苷 A 氨苯蝶啶氯噻酮呋塞米安非他酮芬氟拉明维拉帕米吲达帕胺布美他尼苄氟噻嗪酚酞氟西汀苯扎贝特 N 单去甲基西布曲明大黄酸西布曲明 N,N 双去甲基西布曲明吡沙可啶舍曲林芦荟大黄素氟伐他汀吉非罗齐洛伐他汀辛伐他汀非诺贝特大黄酚大黄素大黄素甲醚普罗布考 (37 种 ) ng/ml 阳性结果 9 批, 阳性率 12% 3 WatersAcquityBEH C 18 色谱柱对乙酰氨基酚阿司匹林非那西丁马来酸氯苯那敏罗非昔 0 3~5 0 共检样 55 批,[14] (2 1mm 100mm,1 7μm), 13min 布吡罗昔康氯诺昔康美洛昔康醋酸泼尼松舒林酸萘普生醋酸地塞米松保泰松奥沙普秦塞米昔布双氯芬酸钠吲哚美辛 (17 种 ) ng/g 阳性结果 26 批, 阳性率 47% 4 WatersAcquityBEH C 18 色谱柱硫酸特布他林 EH 茶碱咖啡因多索茶碱 CH TH BH FH 0 1~5 0 共检样 86 批,[15] (2 1mm 100mm,1 7μm), 12min 呋塞米吲达帕胺酚酞 SH 盐酸 N 单去甲基西布曲明盐酸 N,N 双去甲基西布曲明 (15 种 ) ng/g 阳性结果 74 批, 阳性率 86%

4 36 学报 JournalofChinaPharmaceuticalUniversity2019,50(1):33-40 第 50 卷续表 1 编号色谱柱及分析时间待测化合物 LOD 检测结果文献 5 WatersAcquityBEH C 18 色谱柱曲安西龙泼尼松龙氢化可的松泼尼松可的松甲基泼尼 0 37~1 62 共检样 13 批,[16] (2 1mm 50mm,1 7μm), 15min 松龙倍他米松氟米松倍氯米松曲安奈德氟氢缩松曲安西龙双醋酸酯泼尼松龙醋酸酯氟米龙氢化可的松醋酸酯地夫可特氟氢可的松醋酸酯泼尼松醋酸酯可的松醋酸酯甲基泼尼松龙醋酸酯倍他米松醋酸酯氢化可的松丁酸酯地塞米松醋酸酯氟米龙醋酸酯氢化可的松戊酸酯曲安奈德醋酸酯二氟拉松双醋酸酯倍他米松戊酸酯泼尼卡酯哈西奈德阿氯米松双丙酸酯安西奈德氯倍他索丙酸酯氟替卡松丙酸酯莫米他松糠酸酯倍他米松双丙酸酯倍氯米松双丙酸酯氯倍他松丁酸酯 (38 种 ) ng/ml 阳性结果 9 批, 阳性率 69% 6 PhenomenexC 18 色谱柱甲苯磺丁脲格列苯脲格列齐特格列吡嗪格列喹酮格列 1 5~10 共检样 31 批,[17] (4 6mm 100mm,2 6μm), 10min 美脲马来酸罗格列酮瑞格列奈盐酸吡格列酮盐酸二甲双胍盐酸苯乙双胍那红地那非红地那非伐地那非羟基豪莫西地那非西地那非豪莫西地那非氨基他打拉非他达拉 ng/ml 阳性结果 4 批, 阳性率 12 9% 非硫代艾地那非伪伐地那非那莫西地那非地西泮硝西泮氯硝西泮氯氮奥沙西泮马来酸咪哒唑仑劳拉西泮艾司唑仑阿普唑仑三唑仑苯巴比妥异戊巴比妥司可巴比妥氯美扎酮阿替洛尔盐酸可乐定氢氯噻嗪卡托普利哌唑嗪硝苯地平 (42 种 ) 7 AcquityUPLC HsT3 色谱柱 (2 1mm 100mm,1 7μm), 11min 二甲双胍苯乙双胍咖啡因氨苯蝶啶马来酸氯苯那敏伐地那非氯噻酮西地那非托拉塞米呋塞米卡马西平酚酞吲达帕胺他达那非格列吡嗪布美他尼格列齐特格列本脲尼群地平格列美脲大黄素格列喹酮非洛地平育享宾洛伐他汀立莫那班 (26 种 ) 8 ZorbaxSB C 18 色谱柱三唑仑阿普唑仑艾司唑仑地西泮硝西泮奥沙西泮劳拉 (2 1mm 150mm,3 5μm), 西泮 (7 种 ) 10min 9 ZorbaxSB C 18 色谱柱盐酸二甲双胍盐酸丁二胍盐酸苯乙双胍甲苯磺丁脲格列 (2 1mm 150mm,3 5μm), 吡嗪格列齐特格列波脲盐酸罗格列酮格列本脲盐酸吡 10min 格列酮格列美脲瑞格列奈格列喹酮 (13 种 ) 0 5~2 0 ng/g 0 1~2 1 ng/g 0 1~0 3 ng/ml 共检样 94 批,[18] 阳性结果 5 批, 阳性率 5% 共检样 13 批,[19] 阳性结果 0 批, 阳性率为 0 共检样 13 批,[20] 阳性结果 6 批, 阳性率 46% 四极杆 / 静电场轨道阱高分辨率质谱仪具有定量分析能力强和分辨率高的特点, 对化合物的分辨率可达 10 万, 相对质量偏差在 0 1~ 之间 [21-22], 目前已被广泛应用于蛋白质组学中药安全控制代谢组学和食品安全领域中小分子和大分 [21] 子的研究刘芸等采用四极杆 / 静电场轨道阱高分辨率质谱仪,Phenomenex 公司的 C 18 色谱柱 ( 粒径为 2 6μm) 所建立的方法, 实现了中药及保健品中非法添加的化学药物快速定性与定量测定, 可在 10min 内同时准确检测出声称缓解体力疲劳 ( 抗疲劳类 ) 辅助降血压类辅助降血糖类改善睡眠功能类共 4 类 42 种非法添加的化学药物测定了 31 批样品, 包括蜂胶胶囊功能饮料褪黑素鱼油胶囊大豆磷脂胶囊玛卡胶囊等在 4 批保健品中发现了非法添加的化学药物, 其中 3 批保健品 ( 褪黑素促睡眠胶囊中成药 ) 添加了盐酸二甲双胍, 添加量分别为和 3 6ng/g;1 批螺旋藻中添加了西地那非, 添加量为 83 3ng/g;1 批玛咖胶囊添加了羟基豪莫西地那非, 添加量为 12 6ng/g; 阳性样品的检出率为 12 9% 如詹淑玉课题组检测了减肥类中成药及保健食品共 86 个样品 ( 胶囊颗粒剂等不同基质类型 ) 中检出 74 批添加了化学药, 阳性率为 86 0% 样品中主要检出 SH(39 批 ) 呋塞米 (20 批 ) 酚酞 (23 批 ) 茶碱 (1 批 ) 咖啡因 (15 批 ), 其中检出 2 种的 22 批,3 种的 1 批可见非法添加现象普遍存在传统的质谱技术存在基体耐受性差, 需进行繁琐的样品预处理等不足 [23] [24] 2004 年,Cooks 等提出了在无需样品预处理情况下直接对表面样品进行质谱分析的电喷雾解吸电离质谱技术 (DESI MS), 掀起了基于直接离子化技术的常压质谱分析研究热潮目前, 常见的常压质谱分析技术主要包

5 第 50 卷第 1 期侯晓芳, 等 : 中药及保健品中非法添加物的分析技术研究进展 37 括实时在线分析介质阻挡放电电离低温等离子体探针空气动力辅助离子化电喷雾辅助激光解吸电离表面解吸常压化学电离和电喷雾萃取电离等其中, 一种衍生于电喷雾电离技术的常压电离质谱固体基质电离质谱 (solid substrateelectros prayionizationmasspectrometry) [25], 因具有操作简便取样量少灵敏度高分析速度快等特点, 已应用于人体内脏组织血液以及尿液等复杂基体样品化学成分的快速分析应用牙签电喷雾电离质谱 (Wooden tipesi MS) 技术建立了同时测定 33 种常见非法添加化合物的方法, 检出限达 0 1ng/ g, 分析速度达 15s, 极大地提高了分析效率他们将该方法应用于 144 种中草药的检测与传统的分析方法相比,Wooden tipesi MS 法具有无需样品预处理取样量少操作简便检出限低无化学试剂引入等优点, 可用于中草药等复杂基体物质中非法添加剂的快速分析 [26] 目前, 文献报道测定的样品剂型涵盖胶囊剂片剂丸剂粉剂液体制剂等因此对于含量大于 0 01% 的成分采用高效液相色谱紫外检测法定量更加准确可靠 ; 对于含量低的成分采用基质匹配标准溶液的方法以抵消基质效应, 满足定量的要求 [8] 另外对于基质复杂的胶囊样品, 直接用甲醇提取测定时, 由于部分成分存在基质抑制效应而导致回收率偏低分别在甲醇和胶囊空白基质中添加系列浓度的标准品, 配制基质混合标准溶液, 得到基质标准曲线, 考察基质效应 (matrixefect, ME) [27] 采用公式 ME=B/A 100% 计算 ( 式中 B 为基质标准曲线的斜率,A 为溶剂标准曲线的斜率 ) 若计算结果在 85% ~115% 之间, 则无需考虑基质效应 ; 若在这范围之外, 则需考虑采取固相萃取等措施消除基质干扰 [18-19] 1 3 离子迁移谱技术离子迁移谱 (ionmobilityspectrometry,ims) 是以离子漂移时间的差别来进行离子分离定性的一种技术 [28], 与传统的质谱色谱法比较,IMS 技术具有分析速度快灵敏度高无溶剂和气体消耗等优点尤其 IMS 技术在小型化以及微型化方面则具有其独特之处 : 第一, 不需要真空系统, 整个装置可以做得很小 ; 第二, 其灵敏度极高, 在不加任何富集的情况下,IMS 就可以达到皮克 (pg) 量级, 这些特点使得其很适合于现场在线快速分析 ; 第三, 具有很好的结构区分性, 能对同分异构体等实现很好的区分该技术在爆炸物毒品和化学毒剂等国土安全领域中使用很广泛, 但在药物筛查分析中的应 [29] 用还较少冯雪等建立了快速检测保健食品中非法添加的西地那非那红地那非他达拉非氨基他达拉非伪伐地那非那莫西地那非二乙胺他达拉非 7 种 5 型磷酸二酯酶抑制剂的离子迁移谱方法采用正离子模式, 离子源电压为 2 5kV, 迁移管电压为 7 5kV, 进气口温度和迁移管温度均为种 5 型磷酸二酯酶抑制剂迁移时间在 13 8~16 2ms 之间, 检出限为 0 05~2μg/mL 利用所建立方法对 20 批市售缓解体力疲劳类保健食品进行非法添加筛查,20 批市售样品中 13 批检出西地那非,2 批检出他达拉非,2 批同时检出西地那非与他达拉非, 与 LC MS 检测结果一致焦建东 [30] 等采用离子迁移谱技术, 建立改善睡眠类保健品中苯巴比妥异戊巴比妥司可巴比妥的非法添加快速检测方法采用离子迁移谱负离子模式, 离子源电压 1 9kV, 漂移管电压 7 5kV, 进气温度 180, 漂移管温度 180, 栅电压 45V, 栅脉冲宽度 120μs, 漂移管流速 1 2L/min, 排气泵 0 8L/min, 运行时间 30s, 光谱范围 25ms; 对市场中抽查的 9 批次改善睡眠类样品 ( 归枣睡博士活脑枣仁睡乐睡宝安睡贝齿金眠乐 ) 进行分析, 发现 2 个样品添加了苯巴比妥, 并通过 LC MS 进行了确认 1 4 气相色谱质谱技术近年来, 气相色谱质谱联用技术得到较快发展, 已广泛应用于各领域, 成为分析复杂混合物最 [31] 为有效的手段之一 Paraschos 等通过 GC MS 技术建立了天然乳香油的防伪方法, 他们采用手性色谱柱分离并测定了 30 种成分的含量, 确定其中两种主要成分 (-)/(+) alpha tpinene( 1%) 和 (-) alpha pinene/myrcene(1 9% ~11%) 可以作为鉴别天然乳香油是否掺假的标志物应用该方法测定了 25 份食品和化妆品等样品, 发现了 1 份样品属于人工伪造乳香油 1 5 表面增强拉曼光谱技术表面增强拉曼散射 (surfaceenhancementof Ramanscatering,SERS) 是指当一些分子被吸附到某些粗糙的金属 ( 如银铜金等 ) 表面上时, 它们的拉曼散射强度会增加 ~ 倍, 谐振

6 38 学报 JournalofChinaPharmaceuticalUniversity2019,50(1):33-40 第 50 卷时高达 ~ 倍, 解决了常规的 SERS 信号弱检测灵敏度低的问题 [32] [33] 王磊等建立了一种薄层色谱 (TLC) 结合表面增强拉曼光谱 (SERS) 用于快速检测抗精神失常类中药中非法掺杂化学成分的方法利用 TLC 对中药基质和掺伪 4 种化学药物成分, 即奋乃静卡马西平利培酮舒必利进行初步分离, 以三氯甲烷甲醇水 ( ) 为展开剂, 于 254nm 紫外灯下检视定位, 进而使用 SERS 技术对分离的微量物质进行鉴别, 检测限可低至 0 02mg/mL 与 HPLC 法相比, 该方法简单快速, 无需样品前处理, 在现场快速检测方面 [34] 具有广阔的应用前景王琳等采用表面增强拉曼光谱分析方法检测盐酸吡咯列酮盐酸罗格列酮和盐酸苯乙双胍, 当 ph 为 2 0 时, 上述 3 种降糖药的表面增强拉曼效应较显著, 检测限分别为 4 4 1μg/mL, 前处理与检测时间一共只需 15min, 适合现场快速筛查保健品中添加的盐酸吡咯列酮, [35] 盐酸罗格列酮与盐酸苯乙双胍张建红等采用拉曼光谱技术建立抗疲劳类保健品中非法添加化学药物的快速筛查方法, 并对在市场上抽样送检的上百种保健品进行了测试, 检测的准确率高于 95% 1 6 红外光谱技术近红外光谱技术 (12000~4000cm -1 ) 近年来发展比较迅速, 既可以定性, 还可以通过建模等方式实现准确定量, 是一种很有发展前途的筛查技术中红外光谱技术 (4000~200cm -1 ) 可以根据官能团进行定性和定量, 是最为常用的方法显微红外光谱 (Micro FTIR) [36] 与常规红外光谱技术 (IR) 相比, 显微红外光谱灵敏度高, 可以实现痕量样品的分析 ; 可避免溴化钾压片法时出现的水的吸收峰, 谱图清晰干净而 Micro FTIR 技术分析时不需要添加任何稀释剂, 能反映样品的本质光谱 ; 无损检测 ; 根据特征吸收峰在样品中的分布, [37] 可以判断官能团的空间分布许凤等将薄层色谱法和显微红外光谱法相结合, 建立了减肥保健食品中非法添加盐酸芬氟拉明的定性检测方法, 发现 9 批供试品中有 2 批含有盐酸芬氟拉明 1 7 核磁共振波谱技术目前主要集中在 H( 氢谱 ) 和 C( 碳谱 ) 两类原子核的波谱人们可以从核磁共振波谱上通过化学位移获取分子中化学官能团的数目和种类等信息一般用于蛋白质结构解析以及小分子化合物 [38] 的结构解析 Hachem 等等利用 H 1 NMR 技术检测天然减肥保健品中非法添加的化学药物, 从同一个包装箱不同泡沫盒中取样, 共测定了 164 个样品, 发现有 75 个样品涉及添加 6 种化学药物, 其中 43 个检出西布曲明,9 个检出酚酞,23 个检出混合药物,12 个检出西地那非, 还有 4 个样本检出氟西汀, 该结果同时用 LC MS/MS 进行了验证, 说明了 1 HNMR 技术作为检测非法添加化学药物的可靠性和准确性 1 8 基因检测技术 DNA 条形码技术是利用生物体 DNA 中一段保守片段对物种进行快速准确鉴定的新兴技术 [39] 该技术给中药鉴定学发展带来新的机遇, 中药材 DNA 条形码鉴定数据库及中草药 DNA 条形码生物鉴定体系的创建有利于推进中药鉴定标准化和国际化中药材 DNA 条形码分子鉴定法指导原则已纳入中华人民共和国药典 2010 版第三增补本, 为中药材基原物种鉴定提供强有力的技术支撑, 将在中药材及中成药流通监管道地药材鉴别保健食品和食品质量安全控制等领域发挥重要作用将中药材 DNA 条形码分子鉴定法与中华人民共和国药典规定的其他鉴别方法相结合, 能够对药品质量进行综合评价与有效监控总结与展望近年来, 中药及保健品中非法添加化学药物的现象时有发生不法商贩添加化学药物的隐蔽性也越来越强, 分析的难度也越来越大随着检测技术的提高和进步, 非法添加检测的实际应用范围逐渐增加所测定的中药及保健品种类包括降压类 [40-41] 抗风湿类 [16] 壮阳类 [8,42] 镇静类 [19] 减肥类 [15,43-44] 降脂类 [13] 降糖类 [20,45] 通便类 [13] 抗炎镇痛类 [14] [18] [2] 抗疲劳抗抑郁及抗过敏类等, 常用于添加的化学药物主要包括增强性功能类药物镇静催眠类药物抗糖尿病类药物抗病毒类药物抗生素类药物解热镇痛和抗炎类药物糖皮质激素类药物镇咳类药物抗高血压类药物减肥类药物和抑制胃酸分泌类药物等微红外吸收光谱法表面增强拉曼光谱法传感器技术等方法较为适用于现场快速分析和筛查 ;HPLC PDA 方法适用于非法添加物的常规定性与定量分析, 而 LC

7 第 50 卷第 1 期侯晓芳, 等 : 中药及保健品中非法添加物的分析技术研究进展 39 MS/MS 技术通常适用于最终的结果确认以及痕量物质的精确筛查和定量分析大力发展简便的样品预处理技术以及便携性的定量检测仪器是未来非法添加物筛查的发展方向参考文献 [1] ChenGQ,LeiY.HPLCdeterminationof6dihydropyridinechem icalsinhealthproductsforanti hypertension[j].phystestchem AnalB:ChemAnal( 理化检验化学分册 ),2016,52(7): [2] YeLH,XuS,WangLS,etal.Simultaneousdeterminationof7 antihistamineagentsadded intotraditionalchinesemedicine preparationbylc MS/MS[J].JPharmAnal( 药物分析杂志 ), 2016,36(11): [3] LianYL,DuJ,QiaoYF.Determinationofsevenyelowpigments ilegalyaddedintochinesemateriamedicabyhplc MS[J]. ChinTraditHerbalDrugs( 中草药 ),2016,47(18): [4] XuS,JinPF,XuQL,etal.Advancesinthechemicalsubstances ilegalyadulteratedintraditionalchinesemedicinesandhealth foods[j].chinnewdrugj( 中国新药杂志 ),2015,24(16): [5] NovakovaL,MatysovaL,SolichP.Advantagesofapplicationof UPLCinpharmaceuticalanalysis[J].Talanta,2006,68(3): [6] HanCX,LiY,LiHW,etal.Establishmentofdetectionmethods fordexamethasonesodiumphosphateininjectionsbyuplc PDA [J].ChinaAnim HusbVetMed( 中国畜牧兽医 ),2016,43 (10): [7] HeoS,YooGJ,ChoiJY,etal.Arapidmethodforthesimultane ousdeterminationof25anti hypertensivecompoundsindietary supplements using ultra high presure liquid chromatography [J].FoodAdditContamA,2016,33(11): [8] HuangF,WuHQ,HuangXL,etal.Simultaneousdetermination of17aphrodisiacchemicaldrugsilegalyaddedinhealthprod uctsandchinesepatentmedicinesbyhighperformanceliquid chromatography tandemmasspectrometry[j].chinjchrom( 色谱 ),2016,34(3): [9] CunlifeJM,MaloneyTD.Fused coreparticletechnologyasan alternativetosub 2 microm particlestoachievehighseparation eficiencywithlowbackpresure[j].jsepsci,2007,30(18): [10] LeiY,HuangT,ChenH,etal.Simultaneousrapiddetermination of18ilegaladditivesinimpotencehealthyproductsbyhplc [J].PhysTestChem AnalB:Chem Anal( 理化检验化学分册 ),2016,52(3): [11]HeRS,HuangYT,LeiY,etal.Rapiddeterminationof21adul terantsinanti rheumaticchinesepatentdrugsordietarysupple mentsbyhplc[j].jinstrumentalanal( 分析测试学报 ), 2016,35(11): [12] DengM,ZhuB,YinYH,etal.RapidHPLCtestingmethodfor lipid regulatingdrugsilegalyaddedintraditionalchinesemedi cinesandhealthfood[j].jpharm Anal( 药物分析杂志 ), 2016,36(9): [13] GongX,LuL,FengYL,etal.Determinationof37drugsilegaly addedinweight losing,lipid loweringandlaxativehealthfoods byuplc MS/MS[J].JPharmAnal( 药物分析杂志 ),2016,36 (5): [14] HuangYY,TuJH,XuHX,etal.Rapiddeterminationof17anti inflammatoryandanalgesicchemicalsilegalyaddedintochi nesepatentmedicineandhealthfoodsbyuplc MS/MS[J]. ChinTraditHerbalDrugs( 中草药 ),2016,47(2): [15] ZhanSY,ZhuQF,XuHX,etal.Rapiddeterminationof15 chemicaldrugsilegalyaddedintoslimmingchinesepatentmed icinesandhealthfoodsbyuplc MS/MS[J].ChinTraditHerbal Drugs( 中草药 ),2016,47(17): [16]QianYF,JiaPC,LuF,etal.Rapiddeterminationof38glucocor ticoidsiilegalyaddedintochinesepatentmedicinesanddietary supplementsbyuplc MS MS[J].ChinJExpTraditMedForm ( 中国实验方剂学杂志 ),2016,22(10): [17]LiuY,DingT,LiaoXQ,etal.Directdeterminationof42chemi caldrugsilegalyaddedinherbalmedicinesanddietarysupple mentbyhighperformanceliquidchromatography quadrurpole/ electrostaticfieldorbitraphighresolutionmasspectrometry[j]. ChinJAnalChem( 分析化学 ),2016,44(3): [18] ZhuWX,LiuYF,SunZL,etal.Simultaneousdeterminationof26 ilegaladditivesinhealth carefoodbyuhplc MS/MS[J].Phys TestChemAnalB:ChemAnal( 理化检验化学分册 ),2016,52 (11): [19] WangL.UPLC MS/MSdeterminationofsevenilegalyadded chemicalsedativesinhealth carefood[j].phystestchemanal B:ChemAnal( 理化检验化学分册 ),2016,52(6): [20] LinF,LiT,WangYX,etal.Simultaneousdeterminationof13 ilegalyaddedchemicaldrugsinhypoglycemichealthfoodsby ultraperformanceliquidchromatography[j].foodsci( 食品科学 ),2016,37(18): [21] OlsenJV,GodoyLMF,LiGQ,etal.Partspermilionmasaccu racyonanorbitrapmasspectrometervialockmasinjection intoac trap[j].molcelproteomics,2005,4(12): [22] MakarovA,DenisowE,KholomeevA,etal.Performanceevalua tionofahybridlineariontrap/orbitrapmasspectrometer[j]. AnalChem,2006,78(7): [23] ZhongT,ZhangZL,ZhangH,etal.Analysisofnavelorangejuice componentsbywooden tipelectrospraymasspectrometry[j].j MasSpectrom( 质谱学报 ),2016,37(1):75-81 [24] CooksRG,OuyangZ,TakatsZ,etal.Ambientmasspectrometry [J].Science,2006,311(5767): [25] YangYY,DengJW,YaoZP.Pharmaceuticalanalysisbysolid

8 40 学报 JournalofChinaPharmaceuticalUniversity2019,50(1):33-40 第 50 卷 substrateelectrosprayionizationmasspectrometrywithwooden tips[j].jamsocmasspectr,2014,25(1):37-47 [26] HuB,HuangYY,YinG,etal.Rapiddetectionofadulterated drugsinherbaldietarysupplementsbywooden tipelectrospray ionizationmasspectrometry[j].analyticalmethods,2016,8: [27] HubertP,Nguyen Huu J,BoulangerB,etal.Harmonizationof strategiesforthevalidationofquantitativeanalyticalprocedures ASFSTPproposal parti[j].jpharmbiomed,2007,45(1):70-81 [28] HilHH,SiemsWF,StlouisRH,etal.Ionmobilityspectrometry [J].AnalChem,1990,62(23):1201A-1209A [29] FengX,YinLH,JinSH,etal.Rapiddetectionofundeclared phosphodiesterasetype5inhibitorsindietarysupplementsbyion mobilityspectrometry[j].jpharm Anal( 药物分析杂志 ), 2016,36(2): [30] JiaoJD,LiJQ,WangJF,etal.Rapiddetectionofilegalyadded barbituratesinsleep improvinghealthyfoodsbyionmobility spectrometry[j].jpharm Anal( 药物分析杂志 ),2016,36 (2): [31]ParaschosS,MagiatisP,GikasE,etal.Qualityprofiledetermina tionofchiosmasticgum esentialoilanddetectionofadultera tioninmasticoilproductswiththeapplicationofchiralandnon chiralgc MSanalysis[J].Fitoterapia,2016,114:12-17 [32] KneippK,WangY,KneippH,etal.Singlemoleculedetection usingsurface enhancedramanscatering(sers)[j].physrev Let,1997,78(9): [33] WangL,ChenMY,LiX,etal.Rapiddetectionofchemicaldrugs inantipsychotictraditionalchinesemedicinesbytlc SERS [J].ResExplorLab( 实验室研究与探索 ),2016,35(5):22-26 [34]WangL,WangX,TianJM,etal.Surface enhancedramanspec troscopy(sers) asaymethodforpioglitazonehydrochloride, rosiglitazone hydrochloride and phenformin hydrochloride in healthcareproducts[j].scitechfoodind( 食品工业科技 ), 2016,37(13): ,303 [35] ZhangJH,WangHQ,XuL,etal.Inspectionofilegalyadded medicineinanti fatiguehealthfoodbyramanspectroscopy[j]. ChinJLightSct( 光散射学报 ),2016,28(3): [36] MarshalCP,JavauxEJ,KnolAH,etal.Combinedmicro fourier transform infrared(ftir)spectroscopyandmicro ramanspec troscopyofproterozoicacritarchs:anewapproachtopalaeobiolo gy[j].precambrianres,2005,138(3/4): [37] XuF,FengY,FuS,etal.Determinationoffenfluraminehydro chlorideaddedilegalyintoanti obesityandhealthcarefoodby TLC MicroIRmethod[J].ChinHospPharmJ( 中国医院药学杂志 ),2016,36(5): [38] HachemR,AsematG,MartinsN,etal.ProtonNMRfordetec tion,identificationandquantificationofadulterantsin160herbal foodsupplementsmarketedforweightlos[j].jpharmaceut Biomed,2016,124:34-47 [39] HebertPDN,PentonEH,BurnsJM,etal.Tenspeciesinone: DNAbarcodingrevealscrypticspeciesintheneotropicalskipper buterflyastraptesfulgerator[j].procnatlacadofsciusa, 2004,101(41): [40] LingHY,TangY,ZhuN,etal.Detecionof24chemicalsub stancesthatilegalyaddedintoantihypertensivetraditionalchi nesepatentmedicinesbyhplc Q TOF MS/MS[J].JChin Pharm( 中国药房 ),2016,27(33): [41] ChenL,WenJX,QiCY,etal.Rapiddetectionandconformation of21ilegalchemicaldrugsinanti hyertensiontraditionalchi nesemedicineandhealthyfood[j].jinstrumentalanal( 分析测试学报 ),2016,35(8): [42] ZhangJ,DingT,LiuY,etal.Directdeterminationof9ilegal addedanti impotencemedicinesindietarysupplementbyuplc MS/MS[J].EnvironChem( 环境化学 ),2016,35(2): [43] MaCY,FengSH,FengL,etal.Detectionoffluoxetineilegaly addedintoslimmingproductsbylc MS[J].ChinTraditPat Med( 中成药 ),2016,38(5): [44] LuH,QianYF,ZhangB,etal.Determinationofanthraquinones andilegaladditionofchemicaldrugsindietfoods[j].scitech FoodInd( 食品工业科技 ),2016,37(10):88-93 [45] MengL,ChenW,OUYangBS,etal.Simultaneousdetermination of9ilegalyaddedanti diabeticchemicalcomponentsinchinese patentmedicinesbyhplc MS[J].ChinJExpTraditMedForm ( 中国实验方剂学杂志 ),2016,22(19):66-69

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学报 JournalofChinaPharmaceuticalUniversity 2019,50(1): 中药及保健品中非法添加物的分析技术研究进展侯晓芳, 施迎娣, 王嗣岑 ( 西安交通大学药学院, 西安 ) 摘要近年来, 中药及保健品中非法添加化学药物的事件时