研究论文 www m 氯 氮 艹 地 西 泮 卓 实 验 选 择 甲 酸 为 流 动 相 添 加 剂 试 验 中 考 察 了 m 艾司唑仑 m 劳拉西泮 甲酸的分析结果 发现不同甲酸 m 硝西泮 m 奥沙西泮 m 浓度下测定各化合物的质谱响应变化不大 最终确 苯巴比妥 三唑仑 m 佐匹克 定流动相添

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1 中国药师 年第 卷第 期 C P m V N 安神类 保 健 食 品 中 非 法 添 加 化 学 物 质 的 UPLC ES Q MS分析 贾昌平 摘 要 张圆 陈丽波 闵春艳 顾炳仁 苏州市食品药品检验所 江苏苏州 目的 建立超高效液相色谱 质谱法 UPLCES Q MS 同时测定保健食品中 种违禁精神药品的检测方法 方法 样品经甲醇超声振荡提取 μm滤膜过滤后进样 分析 采用 E P C柱分离 流动相 甲酸 甲酸 甲醇 梯度洗脱 采用电喷雾离子源 正 负离子模式 利用 Q TOF的一 二级精密质量数进行定性 一级 种精神药品在线性范围内线性关系良好 相关系数均大于 检出限在 准分子离子峰定量检测 结果 m 之间 回收率为 相对标准偏差均小于 结论 该方法选择性强 灵敏度高 处理方法简单 可用 于保健品中违禁镇静安神类化学药品的筛查与测定 关键词 超高效液相色谱 质谱法 精神药品 保健食品 中图分类号 R 文献标识码 文章编号 X C m S H FUPLC ES Q MS J C Z Y C L M C G S F D C J S C STRCT Oj T UPLCES Q MSm M T w E P C mw m m m m T m m w m w m MS m w MS m R T UPLC MS m w w T m w C T m q m KEYWORDS UPLCES Q MS S H 随着现代生活压力的增加 越来越多的人面临 来普隆 青藤碱 罗通定 文拉法辛等 实验操作繁 焦虑 失眠等症状 安神类保健食品的市场需求也随 琐 目前尚未见报道同时测定这些成分 所以 本实 之日益增长 一些非法厂商为了宣传其产品的疗效 验拟运用液质联用技术 采用超高效液相色谱 明显 安神效果好 在保健品中非法添加某些化学成 超高分辨质谱法 建立了同时检测包含国家标准规 分 这些保健食品在使用后 会出现明显的不良反 定检验的所有物质的 种安神类化学成分的快速 应 对人们的身体健康造成极大的隐患 常见的化 检验方法 大大提高了检验效率 为更好打击不法行 学物质的添加主要有苯二氮艹 吩噻嗪类 抗组胺 卓类 为提供可靠的技术支持 类 巴比妥类等 以上大部分药品都属于常用的镇 材料与方法 静催眠药 是国家严格监管的一类药品 若使用不当 仪器与试药 或滥用将造成严重不良后果 禁止添加在任何保健 超高效液相色谱仪 ES Q 食品中 因此 进行保健品中非法添加化学药品的 MS质谱仪 m D 超 声 检测 对保障人民健康具有重要意义 波清洗机 德国 E m 甲醇 HONEYWELL 批号 安神类保健食品的检测中 国家食品药品监督 MEGH 乙腈 TED 批号 和甲酸均 管理局现已发布了 个药品检验补充检验方法和检 为色谱纯 实验用水为超纯水 电阻率 M Ω 验项目批准件 涉及到 个液相系统 包括 种化 m 保健食品样品均来自本实验室检品 学物质 苯二氮艹 种化学物质 巴比妥类 卓 类 种化学物质 及褪黑素 氯苯那敏 佐匹克隆 扎 种安 神 类 化 学 物 质 标 准 品 阿 普 唑 仑 m 异 戊 巴 比 妥 m 氯 硝 西 泮 基金项目 苏州市科学技术局科学计划项目 编号 SS 通讯作者 顾炳仁 T E m q q m

2 研究论文 www m 氯 氮 艹 地 西 泮 卓 实 验 选 择 甲 酸 为 流 动 相 添 加 剂 试 验 中 考 察 了 m 艾司唑仑 m 劳拉西泮 甲酸的分析结果 发现不同甲酸 m 硝西泮 m 奥沙西泮 m 浓度下测定各化合物的质谱响应变化不大 最终确 苯巴比妥 三唑仑 m 佐匹克 定流动相添加剂为 甲酸 隆 扎来普隆 巴比妥 柱温的选择 司可巴比妥 咪达唑伦 m m 有着直接的影响 升高色谱柱的柱温可以提高分离 柱温对液相色谱的分离性能 奋乃静 咪达唑仑 m m 文拉 效率 改善峰形 加快分析速度 降低有机溶剂的使 青藤碱 m 罗通定 法辛 用 本 试 验 分 别 考 察 了 柱 温 为 褪黑素 m 氯苯那敏 的色谱分离情况 发现 下各成分 出 峰 较 m 氯美扎酮 m 均购自中国食品药 慢 升高柱温出峰时间显著缩短 兼顾化合物的分 品检定研究院 离 最终确定 为分析柱温 标准溶液 精确称取一定量的固体标准品 置于 量瓶中 甲醇溶解 得浓度约为 m m 巴比 妥类 的标准储备液 于 冰箱中保存 质谱条件的优化 本试验分别考察了雾化气温度 雾化室压 力 碎 裂 电 压 种对照品溶液适量 置 分别精密量取上述 V 碰撞电压 V 进行了 m量瓶中 加甲醇定容至刻度 即得浓度均为 于 雾化 优化 最终确定质谱参数为雾化气温度 μ m 巴比妥类 的混合对照品储备液 室压力 碎裂电压 V 优化后的质谱图 样品处理 见图 图 取供试品 片剂 研细 胶囊剂 倾取内容物 口 服液直接取样 适量 置于 m量瓶中 加甲醇 m 称重 超声 W k H 提取 m 放冷 用甲醇补足重量 摇匀 于 m 离心 m μm滤膜过滤 进样 测定 试验条件 青藤碱 佐匹克隆 罗通定 氯苯那敏 褪黑素 色谱条件 色谱柱为 E P C柱 氯美扎酮 氯氮艹 文拉法辛 氯氮平 卓 mm mm μm 流动相 为 甲 咪达唑仑 扎来普隆 硝西泮 氯硝西泮 酸溶液 流动相 为 甲酸 甲醇 梯度洗脱程 艾司唑仑 阿普唑仑 三唑仑 奥沙西泮 序 m m m m m 流 速 m m 柱 温 进样体积 μ 质谱条件 电喷雾电离正离子模式 ES 和 负离 子 模 式 ES 喷 雾 电 压 k V或 kv 去溶剂气 N 流量 L m 雾 化器压力 毛细管温度 碎裂电压 劳拉西泮 奋乃静 地西泮 图 种精神类化学物质的 E C图 质谱定性结果 种安神类化学物质的质谱中主要表现为 M H 依据超高分辨质谱提供的精密 H 或 M 分子量信息 结合二级碎片 主要依据其相对丰度 建立了这些化合物的特征质谱数据库 结 果见表 V 结果 色谱条件的优化 流动相的选择 本试验考察了甲醇和乙腈 做为流动相时的分离效果和质谱响应 结果发现两 者的分离效果接近 峰形均可接受 但是 它们的质 巴比妥 苯巴比妥 异戊巴比妥 司可巴比妥 谱响应差别明显 乙腈做流动相时噪音较小 各成分 图 种精神类化学物质的 E C图 响应较低 综合考虑 决定采用甲醇做为分析用流动 方法学考察 有机相 标准曲线 添加剂的选择 结合预试验和参考文献 本 移取上述浓度均为 μ m 的混合对照品储备液 加甲醇稀释配制浓度分别为

3 中国药师 2015 年第 18 卷第 7 期 ChinaPharmacist2015,Vol.18 No.7 1,2,5,10,20μg ml -1 的系列标准溶液, 进样 测定 分别以各分析物的峰面积(Y) 和对应的浓度 (X, μg ml -1 ) 进行线性拟合, 得到线性方程和相关系数 (r), 见表 3 巴比妥 异戊巴比妥 苯巴比妥 司可巴比妥的线性范围为 2.000~ μg ml -1, 其他 20 种化合物的线性范围为 0.200~20.000μg ml -1 在线性范围内, 各分析物均有良好的线性 关系 (r 0.990) 表 2 24 种精神类化学物质的质谱裂解信息 检出限 (LOD) 定量限 (LOQ) 取混合对照品储备液用流动相稀释后进样测定, 以 3 倍信噪比时对应的各标准溶液浓度为检出限, 以 10 倍信噪比时对应的各标准溶液浓度为检出限各目标药物的定量限, 结果见表 3 序号 化合物 分子式 t R (min) ESI [M+H] + /[M H] - 碰撞能量 (ev) 特征碎片离子 (m/z)( 相对丰度 %) 1 褪黑素 C 13 H 16 N 2 O (100),159(58),131(30) 2 氯美扎酮 C 11 H 12 ClNO 3 S (28),154(100) 3 氯苯那敏 C 12 H 5 N 7 O (100),167(21) 4 文拉法辛 C 17 H 27 NO (18),173(15),147(44),121(100) 5 硝西泮 C 15 H 11 N 3 O (30),207(63),180(100) 6 地西泮 C 16 H 13 ClN 2 O (28),222(61),193(100),154(85) 7 奥沙西泮 C 15 H 11 ClN 2 O (100),163(24),104(95) 8 艾司唑仑 C 16 H 11 ClN (97),241(23),205(100) 9 氯氮艹卓 C 16 H 14 ClN 3 O (63),227(100),192(14) 10 扎来普隆 C 17 H 15 N 5 O (100),219(51)209(57) 11 阿普唑仑 C 17 H 13 ClN (58),205(100) 12 氯硝西泮 C 15 H 10 ClN 3 O (53),241(77),214(100) 13 劳拉西泮 C 15 H 10 Cl 2 N 2 O (26),275(100),229(46) 14 咪达唑仑 C 18 H 13 ClFN (100),249(39),223(43),209(37) 15 氯氮平 C 18 H 19 ClN (100),227(17),192(56) 16 青藤碱 C 19 H 23 NO (64),181(95),153(100) 17 三唑仑 C 17 H 12 Cl 2 N (93),253(27),239(100) 18 罗通定 C 21 H 25 NO (100),165(15) 19 佐匹克隆 C 17 H 17 ClN 6 O (100),217(16) 20 奋乃静 C 21 H 26 ClN 3 OS (82),143(100),100(32) 21 巴比妥 C 6 H 12 N 2 O _ (43),85(17) 22 异戊巴比妥 C 11 H 18 N 2 O _ (74),138(67) 23 苯巴比妥 C 12 H 12 N 2 O _ (98),85(100) 24 司可巴比妥 C 12 H 18 N 2 O _ (43),153(93) 化合物 线性方程 表 3 24 种精神类化学物质的线性范围 拟合方程 检出限 定量限 线性范围 (μg ml -1 ) 相关系数 r LOD LOQ (ng ml -1 ) (ng ml -1 ) 精密度 RSD(%) 平均回收率 (%) 回收率 RSD(%) 褪黑素 Y=709617X ~ 氯美扎酮 Y=140035X ~ 氯苯那敏 Y= X ~ 文拉法辛 Y= X ~ 硝西泮 Y= X ~ 地西泮 Y= X ~ 奥沙西泮 Y=700548X ~ 艾司唑仑 Y= X ~ 氯氮艹卓 Y= X ~ 扎来普隆 Y=887032X ~ 阿普唑仑 Y=861831X ~ 氯硝西泮 Y=825739X ~ 劳拉西泮 Y=302800X ~ 咪达唑仑 Y= X ~ 氯氮平 Y= X ~ 青藤碱 Y= X ~ 三唑仑 Y=89624X ~ 罗通定 Y= X ~ 佐匹克隆 Y=52363X ~ 奋乃静 Y=74652X ~ 巴比妥 Y=14760X-43, ~ 异戊巴比妥 Y=65663X-14, ~ 苯巴比妥 Y=40562X-56, ~ 司可巴比妥 Y=59582X-52, ~

4 研究论文 www 准确度和精密度 以检测结果阴性的样品 为基质 分别进行加标回收率测定 巴比妥 苯巴比 妥和异戊巴比妥的加标水平为 μ m 其他 种化合物的浓度为 μ m 平行测定 次 以评价该方法的准确度 所得到的平均加标回收率 和 RSD见表 结果满足测定要求 精密度测定以 浓度为 μ m 的 混 合 标 准 液 连 续 进 样 测 定 计算均值及 RSD 结果可见精密度良好 表 基质效应 为了比较样品基质对目标化合物 图 川奇牌安睡胶囊 的二级质谱图母离子 保留时间 m 特征碎片离子 与褪黑素一致 质谱响应的影响 以阴性样品制作空白基质溶液 分 别加入适量混合对照品 配制成浓度为 μ m 的模拟样品溶液 进样测定 结果发现巴比妥 苯巴 比妥 氯美扎酮的质谱响应减弱 奥沙西泮 氯硝西泮 的质谱响应增加 但其基质效应均小于 样品测定 分别按 项 方 法 处 理 种 样 品 依 法 测 定 结果表明 有 批样品中检出佐匹克隆 另 批 检出褪黑素为标注成分 表 图 图 川奇牌安睡胶囊 的一级 E C图 保留时间 m 与褪黑素一致 表 安神类保健食品非法添加检验样品信息 样品名称 批号 百邦睡得安梦香源胶囊 含量 含非法 添加物质 m 同仁堂牌珍珠春眠胶囊 美安颗粒 川奇牌安睡胶囊 褪黑素 川奇牌安睡胶囊 褪黑素 医美堂百邦牌梦香源胶囊 植物导眠 藤柏胶囊 佐匹克隆 图 川奇牌安睡胶囊 的一级质谱图 慧玉康牌睡康口服液 保留时间 m 与褪黑素一致 三勒浆抗疲劳液 晶润胶囊 注 表示未检出 图 川奇牌安睡胶囊 的二级质谱图 母离子 图 川奇牌安睡胶囊 的一级 E C图 保留时间 m 与褪黑素一致 保留时间 m 特征碎片 离子 与褪黑素一致 图 植物导眠 藤柏胶囊 的一级 图 川奇牌安睡胶囊 的一级质谱图 保留时间 m 与褪黑素一致 E C图 保留时间 m 与佐匹克隆一致 下转第 页

5 中国药师 年第 卷第 期 C P m V N 表 肾炎四味片中黄芩苷 汉黄芩苷 黄芩素 汉黄芩素含量测定结果 m 编号 企业代码 黄芩苷 汉黄芩苷 黄芩素 汉黄芩素 讨论 供试品制备方法的选择 供试品制备采用不同 浓度乙醇 甲醇采用超声与回流的方式进行提取 对 乙 提取方式 时间 溶剂进行了考察 结果采用 醇超声处理 W k H m 的方法制备供试 品溶液 能完全提取待测成分 且色谱图中杂质较少 流动相的选择 分别采用乙腈 磷酸溶液 甲醇 磷酸溶液 甲醇 冰醋酸溶液等流动相 进行试验 结果按 项下方法进行梯度洗脱 有待 测成分均能达到较好的分离度 峰形较对称 主峰保 留时间适中 理论塔板数较高 肾炎四味胶囊及其系列制剂标准对黄芩的质控 均体现为 黄芩苷 的含量 鉴于制定中药质量标准 应以中医临床用药中注重整体的观念为基础 黄芩的 抗炎作用是多种成分的综合作用 因此仅用某一个成 分作为衡量该药味质量的指标 就不能体现其内在本 质 所以建立多种有效成分或专属性成分的含量测定 方法 探讨多成分综合评价体系是非常必要的 本法 的建立为其系列制剂质量标准的提高提供了思路和 方法 参 考 文 献 杨红武 闵江莉 吴佳 等肾炎四味颗粒药理作用的 实 验 研究 J 中国药师 孟繁蕴 张胜海UPLC同时测定黄芩中黄芩苷 黄芩素 刘金欣 汉黄芩苷 汉黄芩素 千层纸素 J 中草药 徐丹洋 陈佩东 张丽黄芩的化学成分研究 J 中国实验方剂学 杂志 符洪 肖新月 张南平药用黄芩中主要化学成分分析 J 药物分 析杂志 潘鹏飞 孙菲 李延雪HPLC法同时测定黄芩中黄芩苷 黄芩素 汉黄芩素的含量 J 中国药师 收稿 修回 櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊 上接第 页 图 植物导眠 藤柏胶囊 的一级质 保留时间 m 与佐匹克隆一致 谱图 涵盖这些成分的色谱 光谱 质谱行为的数据库 经 方法学验证表明 本方法结果准确可靠 灵敏度较高 适用于安神类保健品中非法添加多种精神药品的筛 查 鉴定 为提高保健品质量 打击保健品行业中的非 法添加行为提供有效的保障 由于本试验采用 Q MS定性 利用超高分 辨质谱提供的精密一级分子量 相对丰度较大的二到 三个二级碎片信息 并结合色谱保留时间和标准品进 行比对 可以实现对这些化物成分的准确鉴定 但本 试验也有一些缺陷 如 UPLC TOF的定量的灵敏度相 对较低 线性范围较窄 因为保健品中非法添加的化 学成分为常量分析 所以这不影响本方法的适用性 参 图 植物导眠 藤柏胶囊 的二级质谱 保留时间 m 特征碎片 图母离子 离子 与佐匹克隆一致 讨论 本次试验中 采用 UPLC Q MS MS法建立 种非法添加化学药品的 起改善睡眠类保健食品中 同时检测方法 在现行的药品检验标准中 单针分析 艹类 时间分别约为 m 苯二氮 卓 个组分 m 巴比妥类 个组分 m 罗通定 青藤碱 m 文拉法辛 m 褪黑素 左匹克隆 氯苯 那敏 扎来普隆 本试验所建立的方法 采用 UPLC 色谱柱 梯度分离 在短时间 m 内完成分析 比 现行标准方法的效率更高 其次 本实验同时建立了 考 文 献 刘畅 夏晶 胡青 等 LC MS 法对中成药中非法添加 种镇静 催眠类化学药品 检测 方 法的 研 究 J 解放 军 药 学学 报 曲建国 徐秋阳HPLC法测定镇静催眠类中成药中非法添加化学 中国药师 药物成分 J 严爱花 李贤良 郗存显 液相色谱 串级质谱法同时检测中成药及 保健食品中 非 法添加 的 种苯 二 氮 卓类 药 物 J 分 析 化 学 高青 车宝泉 张? 等LC MS MS法检查中药制剂及保健食品 种镇静催眠药物 J 中国药科大学学报 中非法添加的 郭春 李丹LCMS MS法快速测定安神类中成药 保健 崔福春 食品中非法添加的 种化学成分 J 中 国 当 代医 药 收稿 修回

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