第期 " 4 7$ ' 法解析一种未知西地那非衍生物 (!$ 2 #$$2%!$4#% 3 2%$ $ %#2 #%& %! % $& $ #&$2%!$!"!" 2!" 2 #$$2%!$!" 2!" $ #% ' & % 4#%&%! % $& %% &&$ %2 $ # #%

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彰锻象
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1 第卷第期质谱学报年月!"#$%&%' && % % $% % ; 6$6 %./ 法解析一种未知西地那非衍生物周建良周哲陈碧莲马临科浙江省食品药品检验研究院浙江杭州赛默飞世尔科技中国有限公司上海摘要基于已知药物合成新的衍生物以避开法定检验方法是目前化学药物非法添加的趋势之一本工作采用超高分辨的线性离子阱 * 静电场轨道阱质谱 4 7$ ' 在标示中药来源的样品中检出一种未知的西地那非衍生物基于 4 7$ ' 超高分辨率细分同位素的能力并结合精确质量数准确地获得了未知衍生物的元素组成通过与西地那非和硫代艾地那非二级质谱的比较进一步推断了该衍生物的结构并对文献中离子的归属进行了纠正经核磁共振解析鉴定该衍生物为丙氧酚艾地那非 6 #% $2%!$ 系由艾地那非苯环上乙氧基衍生为丙氧基而成其结构与质谱推断的一致通过总结丙氧酚艾地那非的质谱裂解规律 " 4 7$ 质谱分析方法可有效地鉴定 0-* 型抑制剂及其衍生物这是打击此类化合物非法添加的有力手段关键词西地那非衍生物丙氧酚艾地那非线性离子阱 * 静电场轨道阱质谱 4 7$ ' 非法添加中图分类号文献标志码 1 文章编号 (* * (* 5 67 (, '+ ' ; "2 '/ ' #; 6$6 %./ $*$ "+->$*$ '1 $*3% #2.* ' (/" #! ' #% 0 & +. $& %2!$% 22$ $ # % 2%$ $ %&!3 2 & %& * #%&$5%2 2 &%2 $2 #%& %& > &$ 4 7$ ' 3 2%$ $ %!&$2%!$ &! 2$ & % #$ # & 3%2 & 2$ $"#$%&% %2$ $%&%6 $4#% %!! #% 3 2%$ $ % &" (+ ( ( #$ # &7 $%27&%2 #%&% $ $!$& $ %3&! *#$ #* %& $7 4 7$ ' 2 % && %& % % 4#%& %! #% 3 2%$ $ % &2%$ %27 $&! #%' & % $ # #&%!&$2%* 收稿日期 * *( 修回日期 * * 作者简介周建良男汉族浙江人副主任中药师从事中药活性成分研究及质量评价 -* $ 5# 通信作者马临科男汉族浙江人副主任中药师从事中药质量评价 -* $ $3%5

2 第期 " 4 7$ ' 法解析一种未知西地那非衍生物 (!$ 2 #$$2%!$4#% 3 2%$ $ %#2 #%& %! % $& $ #&$2%!$!"!" 2!" 2 #$$2%!$!" 2!" $ #% ' & % 4#%&%! % $& %% &&$ %2 $ # #% $2!' && $% 4' &! % #% % #% &&$ %!%! % $!" $ $ % % & % %2$ #$& %7 $&! #% % && 2$& $ 7 2 %4#% 3 2%$ $ % &!$ $2% $!$%2 & 6 #% $2%!$ 7 + " '>" ', #$ # %2 # $ $& %! #%2%$ %2 & %! #% 3 2%$ $ %7 4 7$ ' 4#$&2%$ $ % &7 $%2 7 & 7& $ $ #%% #6! #%7%5%%$ $%! $2%!$ #% 6 4#% &%2! % $ #! 6 #% $2%!$ && * $5%2 2 #% $ % " 4 7$ ' &2% % %2 4#$& % #2 $2% $! #% 0-*$#$7$ & 2 #%$2%$ $ %& #$ # 27% % #%$% 22$ $ 1 #" &&$2%!$ % 6 #% $2%!$ 4 7$ ' $% 22$ $ 枸橼酸西地那非他达拉非和伐地那非是美国 01 批准上市的磷酸二酯酶型 0-* 抑制剂类药物可用于治疗男性勃起功能障碍疾病目前在补肾壮阳类中药制剂及保健食品中非法添加 0-* 抑制剂类化学药物的现象屡见不鲜且有添加其衍生物的发展趋 * 势国家食品药品监督管理局于年出台了药品补充检验方法用于监管中药及保健食品中非法添加西地那非等种 0-* 型抑 ( 制剂的现象为了逃避药品监督检验一些不法分子开始合成和添加处于监管之外的新型 0-* 抑制剂衍生物如艾地那非硫代西地那非 *(* 丙氧基 *** * 二氢 * * 甲基 * * 氧代 ** 丙基 * +* 吡唑并 (2 嘧啶苯磺酰 *(* 甲基哌嗪等有关 0-* 型抑制剂及其衍生物的检测多采用液质联用法包括高效液相色谱 * 三重四极杆质谱法 + " *' * 和高效液相色谱 * 四极杆飞行时间质谱法 + " 4 *' * 等其中 *' 法灵敏度高选择性好但不能对化合物进行精确分子质量的测定在定性方面尚有欠缺 4 * ' 法能提供化合物精确的分子质量在定性分析中应用广泛但它一般只能提供二级质谱分析无法实现复杂的化合物裂解分析近年来线性离子阱 * 静电场轨道阱 * 高分辨质谱 4 7$ ' 因兼具离子阱和超高分辨质谱平行检测的能力在化合物的定性分析方面备受关注 4 7$ ' 的分辨率高达而且能对目标物进行多级质谱分析因此可在没有标准物质的情况下通过精确质量数和多级碎片信息对未知物进行快速筛查与结构确认本工作针对在强力型羊肚菌补肾精华粉标示来源为乌青莲冬虫夏草淫羊藿达米阿那和玛卡样品中发现的一种新型西地那非衍生物采用超高分辨的线性离子阱 * 静电场轨道阱质谱对其进行结构解析并通过核磁共振 ', 进行结果确证总结质谱裂解规律希望为鉴定 0-* 型抑制剂及其衍生物提供新的方法参考实验部分仪器与试剂 4 7$ %& 快速液相色谱 * 质谱联用仪美国 4#% $&#% 公司产品 "* 1 高效液相色谱仪日本岛津公司产品 '+5 核磁共振仪德国 > 3% 公司产品 ; - 电子分析天平瑞士梅特勒 * 托利多公司产品伐地那非 2%!$ 那红地那非 % $2%!$ 红地那非 1 % $2%!$ 羟基豪莫西地那非 + 26 # &$2%*!$( 枸橼酸西地那非 $2%!$ $ %

3 ( ( 质谱学报第卷豪莫西地那非 + &$2%!$ 氨基他达拉非 1 $ 2!$ 他达拉非 4 2!$ 硫代艾地那非 4#$$2%!$ 伪伐地那非 &% 2 2%!$ 和那莫西地那非 %&$2%!$ 等种 0-* 型抑制剂对照品纯度均大于 < 加拿大 4 " # "#% 公司产品强力型羊肚菌补肾精华粉样品来自食品药品监督管理局市场抽样乙腈甲醇甲酸均为色谱纯美国 '% 3 公司产品实验用水由 '$$* 系统制备实验条件色谱条件 1 $% A76,,+0 - $ &% &" 色谱柱 E E 柱温 = 流动相 1 为 < 甲酸水溶液 > 为乙腈梯度洗脱程序 $ <( <> $( < <> $ <> 流速 $ 进样体积质谱条件电喷雾离子源 -. 正离子模式高分辨检测模式 4' 分辨率 8+' 离子源温度 = 鞘气流速个单位辅助气流速个单位反吹气流速个单位喷雾电压 ( 3 毛细管温度 = 一级全扫描范围!" 二级质谱采用 +"0 和 ".0 两种碎裂方式 +"0 碰撞电压 <".0 碰撞电压 < 溶液制备对照品溶液的制备取适量上述种对照品溶液加入甲醇溶解并稀释至约供试品溶液的制备取样品粉末置于容量瓶中加入约 ( 甲醇超声 $ 冷却至室温加甲醇稀释至刻度摇匀过滤取适量滤液用甲醇稀释倍摇匀以 $ 离心 $ 取上清液 " 4 7$ ' 分析样品化合物的纯化 B &$" 制备色谱柱 E E 流动相为乙腈 * 水溶液 (C 11 流速 $ 检测波长取样品加入甲醇超声 $ 过滤取适量滤液进样分析收集主色谱峰成分减压蒸发除去溶剂即得纯化样品结果与讨论未知衍生物的发现和结构解析对照品溶液和供试品溶液的总离子流图示于图在供试品溶液中检测到个保留时间和精确分子质量与个对照品均不同的化合物!" ( 该未知化合物的质谱图示于图可见未知化合物的 '/ 同位素离子出现个裂峰且 '/ 同位素离子的相对丰度约为 (< 在超高分辨质谱中分辨率 8+' 含化合物的 '/ 同位素离子出现个裂峰分别为 ( 和 " / 或只含 " 且含的个数与其相对丰度正相关据此可推断该化合物含有元素且只含个其分子式可能为 " (+ ( ( 相对分子质量误差为 E? 样品同位素与理论值一致注伐地那非那红地那非红地那非 ( 羟基豪莫西地那非枸橼酸西地那非豪莫西地那非氨基他达拉非他达拉非硫代艾地那非伪伐地那非那莫西地那非图对照品溶液和供试品溶液的总离子流图 +! & '& + %)& & % 在二级质谱分析中该化合物与西地那非和硫代艾地那非有相同的碎片离子西地那非和硫代艾地那非的结构式于图其 +"0".0 质谱图分别示于图 ( 和图此结果表明该化合物可能是 0-* 型抑制剂的衍生物在

4 第期 " 4 7$ ' 法解析一种未知西地那非衍生物 ( 图未知化合物和在. 分辨率下理论化学式 $ 9 / 的质谱图./&% + '& ' ) $ 9 / #+ %) & )!! & ) &'. 图西地那非和硫代艾地那非的结构式 $! + & )) &'& '! ' +"0 碎裂方式下未知化合物与西地那非的共有碎片离子有!" 和根据 '&& $% 4' 软件分析!" 和!" 离子均由西地那非苯环 " 环上的 " 键和乙氧基发生裂解和重排产生离子!" 则在!" 离子的基础上继续重排产生此外 +"0 二级质谱中两组离子未知化合物!" " + ( / 西地那非!" " + ( / 未知化合物!" (" + ( ( / 西地那非!" " + ( ( / 均相差个 "+ 单元表明该未知化合物在西地那非除 0 环外的结构基础上多个 "+ 单元且该 "+ 单元很有可能增加在 1 环的丙烷基或 " 环的乙氧基上因未知化合物与西地那非有相同的!" 和!" 离子说明 1 环和 > 环及其基团并未发生衍生化改变由此推断 "+ 单元增加在 " 环的乙氧基上即乙氧基衍生为丙氧基未知化合物与硫代艾地那非相比在 +"0 二级质谱中具有相同的!" 离子该离子由硫代艾地那非 0) 环上的断裂产生而在 ".0 二级质谱中具有相同的!" 离子该离子由 " 环的 " 断裂产生因此推断该未知化合物具有 * 二甲基哌嗪 * * 基磺基结构综上推断该化合物的结构与西地那非相比其苯环的乙氧基衍生为丙氧基并且 (* 甲基哌嗪衍生为 * 二甲基哌嗪

5 ( 质谱学报第卷图 $2 模式下未知化合物西地那非和硫代艾地那非 + 的二级质谱图././&% + '& ' ) & '! ' + $2 图 $,2 模式下未知化合物和硫代艾地那非的二级质谱图././&% + '& ' )! ' $,2

6 第期 " 4 7$ ' 法解析一种未知西地那非衍生物 ( 9.( 结构确证通过 + " 和 0-4+'>" 谱对该未知化合物进行结构解析其氢谱示于图经与文献 ( 比较确定该衍生物为丙氧酚艾地那非 6 #% $2%!$ 其质谱裂解规律示于图在 ', 结构确证的基础上图未知化合物的氢谱 &% + ) '& ' ) 图西地那非衍生物丙氧酚艾地那非 % % #%! # ' 的质谱裂解规律 %& ' %!" #'& ' ) % % #%! # '

7 ( 质谱学报第卷对该衍生物的裂解规律进行解析并对 +"0 和 ".0 二级质谱的主要碎片离子进行归属结果表明该化合物的结构与本实验推断的结构一致讨论准确判定未知化合物的化学式是结构解析的重要部分在高分辨质谱中通过精确分子质量计算化学式时若限定的组成元素种类和数量不对则无法得到准确的化学式本实验利用 4 7$ ' 的超高分辨率准确判断了未知衍生物中含有元素且只含个结合精确质量数和同位素丰度比对获得了该化合物的化学式这为后续的结构解析奠定了基础该衍生物曾在新加坡的某保健品中被发 ( 现相关文献将样品中的!" 离子归属为 " + ( /!" 与实测值的质量误差达 E? 远超过了可接受的范围 E? 本实验经精确分子质量及 '/ 同位素离子丰度比较推断该离子为 " + ( /!" 与本实验样品中实测值的质量误差仅为 E? 与文献报道实测值的误差为? E? 均在可接受的范围之内其质谱图示于图图 7 西地那非衍生物的子离子 88 和在. 分辨率下理论化学式 $ 与 $ 9 / 离子的质谱图 7./&% + '% )+ 88 '& ' ) $ $ 9 / #+ %) & )!! & ) &'.

8 第期 " 4 7$ ' 法解析一种未知西地那非衍生物 ( 结论采用 4 7$ 超高分辨质谱对标示中药来源样品中的未知化合物进行结构解析推断其为西地那非类衍生物 6 #%* $2%!$ 并经 + " 和 0-4+'>" 谱对其进行结构确证该衍生物由艾地那非苯环上的乙氧基衍生为丙氧基而来因目前在国内外鲜有报道对其有效性和安全性更是知之甚少值得引起重视实验总结了西地那非硫代艾地那非和 6 #% $2%!$ 的质谱裂解规律发现西地那非类化合物主要产生!" 和等特征离子当西地那非 > 环发生硫代时会产生!" 和等特征离子此外若在未知化合物的二级质谱中出现!" ( 和等离子时应考虑苯环上的乙氧基衍生为丙氧基的可能性迄今为止已合成和报道的 0-* 型抑制剂及其衍生物有余种有非法添加报道的超过种 " 4 7$ 质谱分析方法可有效鉴定 0-* 型抑制剂及其衍生物是打击此类化合物非法添加的有力手段本实验总结的该类化合物的裂解规律可为 0-* 型抑制剂的新型衍生物的鉴定提供参考致谢感谢浙江工业大学楚楚博士浙江省药品化妆品审评中心张耀博士在 ', 测定和解析中给予的帮助参考文献 1,1.4 > B1 + 1 % % $%&! # %$5$ &$2%!$ 2%!$ 2!$ 2 #%$ %&$#%7 2$% & % % & 2 2% % $ %!%$ 2 & $$ #%&%2 & 4%2&$ 1 $ "#% $& * 向智敏张骊祝明等 + " 和 "*' ' 鉴定锁阳固精丸中非法添加的西地那非衍生物中国现代应用药学 * ;.19A#$ $A+19 $A+@ '$ %.2% $!$ $!&$2%!$ $% 22%2$ 2$% & % % &$ + " 2 "*' ' "#$%&%!'2%1 $%2 # * * $"#$%&% 邓鲲鹏罗卓雅雷毅补肾壮阳类健康产品中艾地那非的检测方法研究中国药学杂志 ( (( * ((( 0-9 B A# -.:$0% % * $! % %! #& #2$%& %&%*$#$7$* $2%!$$#% # % 2 &! * $ &%6! $ "#$%&% # % $* ( (( * ((($"#$* %&% ( 国家食品药品监督管理局药品检验补充检验方法和检验项目批准件补肾壮阳类中成药鲁艺邬晓鸥梁智渊等中药制剂及保健品中添加硫代西地那非的检测方法研究药物分析杂志 * :$ 8@ ;$.19 A#$ % 2 $2% $! #$&$2%!$ $6%2$% $ 2$ $"#$%&% %2$ $% 2#% # %!2 "#$%&%! # % $ 1 &$& * ($"#$%&% 孙健于泓胡青等一种新型西地那非衍生物的 *4 *' 鉴定药学学报 (( ( $:@ + +@ $ %.2% $!$* $! % &$2%!$ %7&%2 * 4 *' 1 # % $ $$ ( ( ( * $"#$%&% 李锐 "* *4 *' 法快速检测补肾壮阳类中成药中个 0- 型抑制剂类药物药物分析杂志 (( * (., $"+- 9 7$ $ % &2% % $* $! #& #2$%& %&%*$#$7$ & 22%2 $% $"#$%&% %2$ $% % $&!$* $ & "* *4 *' "#$%&%! # % $ 1 &$& (( * ($"#$%&% 于泓胡青张盨等补肾壮阳类中药及保健食品中种型磷酸二酯酶抑制剂的高分辨四级杆飞行时间质谱定性定量检测方法中国药学杂志 ( * :@ + +@ $ A+19 % $* $ % 2 $ $ % &$&! 0-*$* #$7$ &$ #%7 2 & 2 2$% & %* % " *4 *' "#$%&% #* % $ ( * $"#$%&%

9 ( 质谱学报第卷王美玲曾乐颜鸿飞等高效液相色谱 * 离子阱飞行时间串联质谱法快速筛查保健食品中非法添加的磷酸二酯酶 * 抑制剂及其类似物分析测试学报 ( *( 819 '%$$ A-9 % :1 +!%$ %, $2& %%$ 2!$ $!$% * 22%2 #& #2$%& &%*$#$7$ & 2 * %&$#% #!2&7 $ $2 # # * $ * $ %!!$ # 2% &&& % %!.& % 1 &$& ( *($"#$%&% 孙晶曹玲冯有龙等前体离子扫描法在快速筛查中药及保健食品中非法添加的型磷酸二酯酶抑制剂及其未知衍生物中的应用色谱 ( $ "1 $ -9 : % 1 $ $! % &$& $ % #2$ $2& %%$!$% 22%2 #& #2$%& %* &%*$#$7$ & 2 #%$ 3 2%$ $ %&$ "#$%&% 2$ $ % %2$ $%& 2 #% #!2& "#$%&%!"# # ( * $"#$%&% 黎永乐郑彦婕熊岑等液相色谱线性离子阱 * 静电场轨道阱高分辨质谱法快速筛查葡萄酒中的合成色素色谱 *.: %A+-9 : $%;. 9"%% & & %%$! #% $!$ $2 %&$ $%7 $ $2 # # # 7$2 $% $ * 7$ &&& % % "#$%&%!"# # *$ "#$%&% 仇镇武叶汝汉柳亚玲等一种新西地那非类似物的结构确证分析测试学报 (( *(.@ A#% :-, #.@ :$ % "!$ $! #%& %! % &$2%!$ %!.& % 1 &$& (( *( $"#$%&% '. :A+-A9@ 0 11& %!!& & %%$ 2$2% $!$ $!&! 2%$ $ %& $ %2$ $ %$ & % $%&7&%2 #%!$% $& $ %!$ %$ % #2 &$ *#$ #* %& $ &&& % % 1 $ "#$* $ 1 (((* (B--" 9-;B + + %.& $ 2 # %$5 $! 6 #% $3%2&$2%*!$ 2 #$&$2%!$ %&$#% #& %* % &! # % $ >$ %2* $ 1 &$& *

不同基源石斛属植物不同来源商品石斛

不同基源石斛属植物不同来源商品石斛徐蓓杨莉陈崇崇王峥涛徐珞珊建立黄草类石斛的薄层色谱定性鉴别方法采用薄层色谱法考察不同基源石斛及商品药材中专属性成分联苄类化合物毛兰素石斛酚杓唇石斛素和三羟基甲氧基联苄的薄层色谱行为对石斛药材进行定性鉴别通过种不同基源的石斛及批商品石斛的薄层色谱鉴别证明此方法专属性强操作简单重复性好为石斛的鉴别提供了一种准确有效的新方法本方法可用于黄草类石斛的鉴别为中药石斛的质量标准研究提供科学依据

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