《实验用小型猪环境条件》编制说明

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平琶鄂
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1 中国实验动物学会团体标准实验动物小鼠诺如病毒诊断方法编制说明联系人 : 岳秉飞联系电话 : 编制单位 : 中国食品药品检定研究院时间 : 2016 年 10 月 20 日 1

2 2 ~

3 3

4 4 ~

5 5

6 6 A B

7 α μ μ μ 7

8 8 μ μ μ μ

9 9 μ μ

10 表 3 ELISA 检测重复性实验血清号第一次第二次第三次血清号第一次第二次第三次

31 63* + + 32 + + + 64 + + + * 加粗血清号表示 3 次测定不符的样本图 2 ELISA 检测方法灵敏度实验时间 OD 492 表 4 ELISA 检测稳定性实验 OD 492 时间阳性血清阴性血清阳性血清阴性血清 0d 1.902 0.007 8d 1.729 0.015 1d 1.904 0.005 9d 1.74 0.

11 31 63* * 加粗血清号表示 3 次测定不符的样本图 2 ELISA 检测方法灵敏度实验时间 OD 492 表 4 ELISA 检测稳定性实验 OD 492 时间阳性血清阴性血清阳性血清阴性血清 0d d d d d d d d d d d d d d d d

12 表 5 ELISA 检测试剂盒比对血清号 A B C 血清号 A B C 血清号 A B C * * * * * *

25 + + + 55 85 26 + + + 56 86 27 + + + 57 87 28 + + + 58 88 29 + + + 59 30 + + + 60 * 加粗血清号表示 3

13 * 加粗血清号表示 3 次测定不符的样本 A B C 分别代表本实验建立的重组抗原 ELISA 检测方法 XpressBio SMART-M35 ELISA 检测方法图 3 ELISA 法检测小鼠阳性血清 OD 492 分布状况 13

14 RAW264.7 细胞对照阴性血清阳性血清 ( 二抗 1:100) 阳性血清 ( 二抗 1:200) 图 4 鼠诺如病毒间接免疫荧光结果 α 14

15 15 反应体系体积 5 反转录酶缓冲液 5μl 无 Rnase 水 6.5μl dntp mixture(2.5mm each) 4μl 随机引物 1μl RNA 8μl AMV 反转录酶 (10U/μl) 0.5μl 总体积 25μl

16 α 引物引物序列 (5-3 ) 序列位置扩增子大小 (bp) MNV-4F CAGGAAYGCTCAGCAGTCTTTGT MNV-4R GGYTGAATGGGGACGGC 反应体系体积 SYBR Premix Ex Taq GC (2x) PCR Forward primer(10mm) PCR reverse primer(10mm) 10μl 0.4μl 0.4μl ROX Reference Dye II Template Rnase free water (50X) 0.4μl 2μl 6.8μl Total 20μl μ 16

17 μ μ μ μ μ μ μ μ 17

18 μ μ 图 5 MNV 荧光定量 PCR 扩增曲线图 6 MNV 扩增熔解曲线 μ μ 18

19 图 ~ copies/μl 标准质粒扩增曲线图 ~ copies/μl 标准质粒的标准曲线 19

20 图 9 MNV 特异性实验扩增曲线 μ μ 表 6 MNV qpcr 检测试验内重复性质粒标准品浓度试验次数 Mean SD CV(%) CT 定量拷贝数 CT 定量拷贝数 CT 定量拷贝数

21 表 7 MNV qpcr 检测试验间重复性质粒标准品浓度试验次数 Mean1 Mean2 SD CV(%) CT 定量拷贝数 CT 定量拷贝数 CT 定量拷贝数 μ μ μ μ μ μ μ 21

22 图 ~ copies/μl 标准质粒扩增曲线图 ~ copies/μl 标准质粒的标准曲线 22

23 23

24 [1] Wobus CE, Karst SM, ThackrayLB,et al.replication of norovirus in cell culture reveals a 24

25 tropism for dendritic cells and macrophages [J].PLoSBiol, 2004, 2(12):e432. [2] Karst SM, Wobus CE, Lay M, et al.stat1-dependent innate immunity to a Norwalk-like virus [J].Science, 2003,299(5612), [3] Ohsugi T, Matsuura K, Kawabe S, et al. Natural infection of murine norovirus in conventional and specific pathogen-freelaboratory mice[j].front Microbiol, 2013, 4:12.doi: /fmicb ecollection [4] 袁文, 张钰, 刘忠华, 等. 广东省实验小鼠自然感染鼠诺如病毒的调查 [J]. 中国比较医学杂志,2010,20(2): [5] 李晓波, 付瑞, 岳秉飞, 等. 鼠诺如病毒的体外分离与鉴定 [J]. 中国病毒学杂志,2011, 1(4): [6] Xiang Z, Tian S, Tong W, et al.mnv primarily surveillanceby a recombination VP1-derived ELISA in Beijing area inchina[j]. J Immunol Methods, 2014, doi.org/ /j.jim [7] Mähler M, K hl W. Aserological survey to evaluate contemporary prevalence of viral agents and mycoplasma pulmonisin laboratory mice and rats in western Europe [J].Lab Anim(NY), 2009, 38(5): [8] 向丹丹. RT-PCR 检测实验小鼠自然和实验感染鼠诺瓦克病毒及病毒株分离 [D]. 东华大学, [9]Thackray LB, Wobus CE, Chachu KA, et al. Murine noroviruses comprising a single genogroup exhibit biological diversity despite limited sequence divergence[j].j Virol, 2007, 81(19): [10]Kitajima M,Oka T, Takagi H, et al. Development and application of a broadly reactive real-time reverse transcription-pcr assay for detection of murine norovirus[j]. J Virol Methods, 2010, 169(2): [11]Hanaki K, Ike F, Kajita A, et al. A Broadly reactive one-step SYBR green I real-time RT-PCR assay for rapid detection of murine norovirus [J]. PLoS one, 2014, 9(5):e [12] Hsu CC, Riley LK, Wills HM, et al. Persistent infection withand serologic crossreactivity of three novel murinenovoviruses[j]. Comp Med, 2006, 56(4): [13]Chen X, Leach D, Hunter DA, et al. Characterization of intestinal dendritic cells in murine 25

26 norovirus infection[j].open Immunol J, 2011, 4: [14]Compton SR, Paturzo FX, Macy JD. Effect of murinenorovirus infection on mouse parvovirus infection[j]. J AmAssoc Lab Anim Sci, 2010, 49(1):

附件2：

附件2：中国实验动物学会团体标准实验动物肿瘤坏死因子 α 转基因关节炎小鼠模型饲养繁育规范编制说明联系人 : 李舸联系电话 :15011983691 编制单位 : 广东省实验动物监测所时间 : 2016 年 10 月 25 日中国实验动物学会团体标准人肿瘤坏死因子 α 转基因关节炎小鼠模型饲养繁育规范编制说明 GB/T1.1 2009 1 2011A081401005 2013B040400007