宫颈癌的癌前病变亦称为宫颈上皮内瘤变 1 0 ) " )14 1 ) "1+4 )!)%B 少部分宫颈低级别鳞状上皮内病变 +3 ) 1! 2)5+2! " )14 1 ) 1!+" ;B 可进一步发展为宫颈高级别鳞状上皮内病变 ) 1! 2)5+2! " )14 1 ) 1!+">;B 只有, A

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磁庄韦
7 years ago
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1 文章编号中图分类号文献标志码!" # 在宫颈病变中的表达及其差异刁雯静孙红郭奇桑王丽陶祥隋龙复旦大学附属妇产科医院检验科上海摘要目的了解宫颈炎宫颈癌前病变及宫颈癌组织中 + "2 " 的表达情况初步评价 + "2 " 与宫颈癌变的相关性方法收集各个级别的宫颈癌前病变及可疑宫颈癌患者行诊断性或治疗性经宫颈环形电切割术 # 后的石蜡包埋组织标本例其中宫颈低级别鳞状上皮内病变 ;B 例宫颈高级别鳞状上皮内病变 >;B 例宫颈浸润癌 B%% 例以例宫颈炎患者作为对照组所有标本经兔抗人 + "2 " 多克隆抗体免疫组化链霉菌抗生物素蛋白过氧化物酶连结 ;# 法显示并评分在行宫颈 # 术之前取其宫颈脱落细胞宫颈炎患者经阴道镜下活检病理诊断为慢性宫颈炎后取其宫颈脱落细胞采用聚合酶链反应 #% 测定 )! 基因的 5 表达结果免疫组化结果显示除宫颈炎组与宫颈 ;B 组之间无差异 8 外其余各组间 + "2 " 蛋白表达差异均有统计学意义均 8 随着宫颈病变级别的逐渐升高 + "2 " 蛋白表达逐渐下降至 B%% 时表达明显降低 )! 5 的表达与其蛋白表达一致以 + "2 " 或阴性 / 作为筛查阳性指标检出宫颈 >;B 以上病变的敏感性为, 特异性为, 检出宫颈 ;B 以上病变的敏感性为, 特异性为, 结论 + "2 " 有望成为检测宫颈病变程度的标记物之一关键词 + "2 " 宫颈癌免疫组化 %! "! #!! -# % ( %3 " % (#" -. / ) "1+ %1 ) * + )+ /!*, + (!" " " +! 2 * 1 + "2 " 194 1!+"! " 1 0!! ) " )14 1 ) "1+4 )!)!21)" 1 0 ) )" 1!21 )" +10) 2) ") * ) +" + + "2 " ) " )14 1 ) "1+4 )!)!21 "! + ) + 4) ) "15 1 1!21!)54 1! ) " )14 1 ) "1+4 )!))"!2!4 +2! 1 0 ) )" 1 4) 1"!2" 1 +" !2 ) 19!+" # + ) "+!!+ 1) 51" 1* " 2 1 4) 1"!3 +3 ) 1! 2)5+2!" )14 1 ) 1!+" ;B 4) 1"! 3 ) 1! 2)5+2!" )14 1 ) 1!+">;B 4) 1"!3 "0)! ) )" 1 B%% )" 4) 1"! 3 1 0!31 11" + 1 )! +" B552"+! + 15! *! 14 )0 "41 +9 )!1 ;# 2!" ) ) 4+ * +") )" + *) )"! 25)" + "2 " 3)!)44 1 " )!)54 1! #+ *51 )!1 )" 1) +" #% 3)!2! ") +" + )! !+" " ) 4) 1"! 1 0 ) "4 14 * + + 1!!)54 1! ) # )" +" + +24! 1 0 ) "4 14 * + + 1!!)54 1!) 1! +4) + + * ) "+!! * + 4+! +4*!#"! B552"+! + 15! *! +31 ) !+" 101!+ + "2 " 31 1! " )" * 1 1" ! ) 1 311" ;B )" +" ' 1!101 * )!1)!1 " 1)!" !+" + + "2 " 1 1)!1 )" 1 1)!1! " )" * " B%% !+" + )! 5 3)! +"!! 1" 3 1 1!2!+ + "2 " 194 1!+" 101 B )7 " + "2 " 31)7 *4+! + "1 ) 01 /)! ! 11" " 1 0 ) >;B + 1 1!1"! 0 *3)!, )" 1!41 *3)!, " +! 11" " 1 0) ;B + 1 1!1"! 0 *3)!, )" 1!41 *3)!, #!! %+ "2 " 5 1+"1+ 12!1 2 5) 71! ) ) "+ 1"1!! ' $! %+ "2 " %1 0 ) )" 1 B552"+! + 15! * 基金项目中国癌症基金会资助项目作者简介刁雯静女年生硕士主治医师主要从事妇产科相关疾病的检验工作通讯作者孙红联系电话

2 宫颈癌的癌前病变亦称为宫颈上皮内瘤变 1 0 ) " )14 1 ) "1+4 )!)%B 少部分宫颈低级别鳞状上皮内病变 +3 ) 1! 2)5+2! " )14 1 ) 1!+" ;B 可进一步发展为宫颈高级别鳞状上皮内病变 ) 1! 2)5+2! " )14 1 ) 1!+">;B 只有, A, 的患者在年内进一步发展为宫颈浸润癌 "0)! ) )" 1 B%% 因此对于宫颈病变特别是宫颈 ;B 的早期发现以及恰当的治疗就显得格外重要目前学者们更致力于研究宫颈癌前病变的组织学分子生物学等方面的变化及其关系寻找并发现相关的敏感指标在帮助临床早期更准确诊断 %B 的级别从而制订个体化的治疗和随访方案在有效阻断宫颈癌前病变进一步发展的前提下尽量减少不必要的过度治疗等应用蛋白质组学分析了正常宫颈上皮 >;B 以及宫颈癌组织的激光捕获微切割 )!1 ) !1 +" %( 样本发现在个明确鉴定出的差异蛋白中 + "2 " 是唯一一个可以全部特异区分种不同性质组织的分子标志物在正常宫颈上皮 >;B 以及宫颈癌组织的表达水平呈逐级降低 + "2 " 又称为 % % 或 ; # 是融合基因家族中的一个新成员融合基因家族即中间丝相关蛋白该蛋白激酶家族定位于细胞浆内多串联重复而且在氨基端有手结构域即结合区域其被认为与表皮的终末分化密切相关随着研究的深入人们发现此家族成员在人体内参与调节表皮细胞生长及分化蛋白结构的稳定性并与肿瘤的发展及预后密切相关在表皮角化过程中与角质形成细胞的角蛋白丝相结合被认为是角细胞分化的重要标志物大多数宫颈癌存在角细胞分化障碍因此我们在等研究的基础上扩大了样本量并且设立了正常宫颈组织宫颈 ;B 宫颈 >;B B%% 个组欲了解 + "2 " 在宫颈病变的不同阶段的表达差异情况初步探讨 + "2 " 表达与宫颈癌前病变以及宫颈癌发生的相互关系材料和方法一病例来源及取材收集复旦大学附属妇产科医院宫颈科年月份至年月份收治的各个级别的宫颈癌前病变行经宫颈环形电切割术 !2 ) 19!+" # 后的标本例患者术前均经阴道镜下活检病理明确诊断且例患者阴道镜下活检病理与其 # 术后病理级别均一致将患者按病理结果分为宫颈 ;B 组例包括宫颈扁平湿疣例 %B B 例宫颈 >;B 组例包括 %B 例 %B A 例 %B 例 B%% 组例并收集例宫颈炎组织阴道镜病理诊断为慢性宫颈炎标本作为对照所有患者取材前未行妇科检查内无性生活并排除阴道炎症所有切片均经过两位病理科医生诊断复核二主要试剂一抗兔抗人 + "2 " 多克隆抗体英国 )5 公司 "!+" 试剂盒丹麦 & 公司 BE 合成试剂盒美国 B"0 + 1" 公司 & 合成试剂盒美国 1 51" )! 公司 ) 聚合酶链反应 4+ *51 )!1 )" 1) +" #% ()! 1 ( 9 试剂盒天根生化科技北京有限公司三免疫组织化学法免疫组化链霉菌抗生物素蛋白过氧化物酶连结! 14 )0 " )!1;# 法将组织标本进行脱蜡水化磷酸盐缓冲液 4 +!4 ) !) "1#$; 洗 A 次每次 5" 将,>, 甲醇滴加在玻璃片上室温静置 5"#$; 洗 A 次每次 5" 抗原修复置 5+ 枸橼酸缓冲液 4> 值中用煮沸微波炉可高火次每次 5" 自然冷却 5" 以上至室温 #$; 洗 A 次每次 5" 滴加正常山羊血清封闭液室温静置 5" 甩去多余液体滴加一抗兔抗人 + "2 " 多克隆抗体室温静置或过夜或如为过夜后需在复温 5" #$; 洗次每次 5" 滴加二抗羊抗兔 B A 室温或静置二抗中可加入, 311" #$; 洗次每次 5" & $ 显色 A 5" 在显微镜下掌握染色程度 #$; 或自来水冲洗 5" 苏木精复染 5" 盐酸酒精分化自来水冲洗 A 5" 最后脱水透明封片镜检

3 + "2 " 染色阳性以胞核和胞浆内出现棕黄色颗粒为主染色判读标准基本不着色为分着淡黄色为分着色适中为分着色深黄为分着色细胞占总细胞数., 为分, A, 为分, A, 为分 :, 为分将每张切片的着色程度得分和着色细胞数得分相乘为最后得分 A 分为阴性 / A A A 四宫颈脱落细胞 )! 基因逆转录 #% 101!1 )"! 4 +" 4+ *51 )!1 )" 1) +" #% 检测 )! 引物序列合成引物见表以 ) 为内参照总反应体系为含有 &?#% ()! 1 ( 9 每个引物浓度为 55+ 各扩增条件预变性 5" 变性! 退火! 延伸! 各待检基因循环数经过优化以确保各自反应处于指数增长期其中 )! 为个循环 ) 为个循环最后延伸 5" 表 ( 引物序列基因引物引物序列扩增片段 4 )! 上游 %%% % %% %% 下游 % % ) 上游 %% %% % % 下游 % 五统计学方法采用 ;#;; 软件进行统计分析各组间样本率比较用检验以. 为差异有统计学意义结果一 + "2 " 蛋白的免疫组化结果随着宫颈癌前病变级别的逐渐升高 + "2 " 蛋白的表达强度逐渐下降至 B%% 时表达明显降低见图和表宫颈炎组 + "2 " 蛋白表达与宫颈 >;B 组 B%% 组比较差异均有统计学意义值分别为 8 宫颈 ;B 组 + "2 " 蛋白表达与宫颈 >;B 组 B%% 组比较差异均有统计学意义值分别为 8 宫颈 >;B 组 + "2 " 蛋白表达与 B%% 组比较差异有统计学意义 8 8 宫颈炎组与宫颈 ;B 组之间 + "2 " 蛋白表达差异无统计学意义 8 8 注 ) 宫颈炎? 箭头所指处为强阳性表达宫颈 ;B? 箭头所指处为阳性表达宫颈 >;B? 箭头所指处为弱阳性表达 B%%? 箭头所指处为阴性表达图 ( 不同病理级别宫颈病变 + "2 " 蛋白的表达情况二 + "2 " 作为 B%% 及其癌前病变筛查指标的敏感性以及特异性以 + 52 " 或 / 作为筛查阳性指标对检出不同病理级别宫颈病变的敏特异性达到最高因此采用 + "2 / 作为 B%% 及其癌前病变的筛查阳性指标以 + 作为 B%% 及其癌前病变的筛查阴性指标结果显示检出宫颈

4 >;B 以上病变即宫颈 >;B B%% 的敏感性为, 特异性为, 检出宫颈 ;B 以上病变即宫颈 ;B 宫颈 >;B B%% 的敏感性为, 特异性为, 见表表, 各组 + "2 " 免疫组化染色结果例病理分组 + "2 " 表达总计宫颈炎宫颈 ;B 宫颈 >;B @@@ 筛查阳性率, 注表示以 + 52 " 或 / 作为筛查阳性表 - + "2 " 作为 B%% 及其癌前病变筛查指标的敏感性以及特异性, 筛查阳性标准 B%% 宫颈 >;B B%% 宫颈 ;B 宫颈 >;B B%% 三 )! 5 的 #% 结果除宫颈炎组与宫颈 ;B 组外其余各组间 )! 5 表达差异均有统计学意义均. 与 + "2 " 蛋白的表达同步见图和表注 A 为宫颈炎患者 A 为宫颈 ;B 患者 A 为宫颈 >;B 患者 A 为 B%% 患者图, 各组 )! 5 的 #% 结果表 )! 5 的 #% 结果组别 )! ) 宫颈炎组 - - 宫颈 ;B 组 - - 宫颈 >;B 组 - H - B%% 组 - H - 注与宫颈炎组比较. 与宫颈 ;B 组比较 H. 与宫颈 >;B 组比较. 讨论现已发现 B%% 的发生发展是多基因共同作用的结果尽早发现并且治疗宫颈癌前病变可有效降低宫颈癌的发病率和死亡率对于宫颈癌前病变准确的诊断和恰当的治疗不仅可有效阻断其向宫颈癌进一步发展同时也避免不必要的过度治疗提高患者的生活质量阴道镜下活检的准确性主要决定于阴道镜医生的经验和判断根据美国阴道镜检查与宫颈病理学会 51 )" ;+ 1 * + %+ 4+! +4* )" %1 0 ) #) + + * ;%%# 的诊疗指南经阴道镜下活检为宫颈 ;B 患者后续治疗主要是根据其新柏氏液基细胞学 "4 14 * + + 1! % 检测结果但前提是阴道镜下活检准确率在一定的质控范围内由于我国医疗资源的缺乏特别是偏远地区有资质的阴道镜医生有限有些医生甚至在肉眼下进行宫颈活检往往得出的结果是片面的宫颈病变漏诊率非常高后续的 # 术在弥补了许多病例可能漏诊的同时也提高了过度治疗的概率然而宫颈 ;B 的过度治疗亦存在很大弊端 # 也有高达, 的围术期并发症常见的有术中或术后出血感染等且发生率随切除组织量和深度的增加而升高部分病例 # 术后发生宫颈或颈管部位的子宫内膜异位 # 还与术后妊娠合并足月前胎膜早破早产及低出生体重儿风险增高有关

5 那么在缺乏医疗资源的地区怎样判断阴道镜下活检提示阳性者特别是宫颈 ;B 患者是否需要进一步行 # 术呢除了参考其 % 结果外还需要寻求更多准确客观地指标来进一步确诊其病理级别在不漏诊的前提下尽量避免不必要的治疗带来的身心损伤等发现了 + "2 " 是一个可以全部特异区分种不同性质宫颈组织的分子标志物鉴于宫颈 ;B 治疗的多样性和可选择性本研究在等的实验基础上加入了宫颈 ;B 组并且除了观察 + "2 " 蛋白的差异情况还增加了对 )! 5 的 #% 的研究结果显示除了宫颈炎即正常宫颈上皮组和宫颈 ;B 组之间 + "2 " 蛋白和 )! 5 表达差异无统计学意义 : 外其余各组之间无论 + "2 " 蛋白还是 )! 5 的表达差异均有统计学意义均. 关于 + "2 " 的生物学功能目前仍少有研究有研究发现 + "2 " 在鳞状上皮应激反应过程中表达增加提示其可能是一种热休克蛋白 )! 基因在舌鳞癌食管鳞癌宫颈癌组织中的表达均降低其可能在部分鳞癌的发生发展中通过细胞周期阻滞作用反向调节癌细胞的增殖由于, 以上的宫颈癌存在角细胞分化障碍 + "2 " 在宫颈癌组织中往往呈低表达本研究结果进一步证实了随着宫颈病变病理级别的逐渐升高 + "2 " 蛋白的表达强度逐渐下降至 B%% 时 + "2 " 蛋白表达明显减低并且 )! 5 的表达与其蛋白同步另外本研究以 + "2 / 作为阳性筛查指标检出宫颈 >;B 以上病变的敏感性为, 特异性为, 检出宫颈 ;B 以上病变的敏感性为, 特异性为, 因此将 + "2 " 作为筛查指标对于检出宫颈不同级别病变均有较高的特异性 + "2 " 可能有望成为辅助诊断宫颈 ;B 和宫颈 >;B 以上病变的特异性筛查指标临床上结合患者 % 病理诊断结果使有宫颈病变的患者可以得到一个更全面的评估可以给患者特别是宫颈 ;B 的患者提供更多元化的治疗方案然而 + "2 " 将来是否可以实际应用于临床仍需更大样本量更深层次的相关研究参考文献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收稿日期本文编辑龚晓霖

材料方法

材料方法生物技术通报姜燕采用鼠抗人血红蛋白单克隆抗体和胶体金标记鼠抗人血红蛋白单克隆抗体及对照抗体羊抗鼠利用双抗体免疫夹心反应原理特异性地结合人血红蛋白抗原在内可得到胶体金显色结果的原理研制便潜血单克隆一步法胶体金检测试卡用于诊断因各种原因引起的消化道出血疾病应用杂交瘤技术制备两株鼠抗人血红蛋白抗体方法检测效价免疫胶体金技术制备胶体金检测试卡法检测效价的结果显示鼠抗人