实验部分试剂和样品所有种毒品标准品以及尿样均来源于某市公安客户甲酸乙酸乙酸铵乙酸乙酯异丙醇氨水购自 Dikma 公司, 乙腈 ( 质谱纯 ) 甲醇( 质谱纯 ) 购自 Merck 公司 (Kenilworth, USA) 水由 Milli-Q 超纯水系统制得仪器和设备 Agile

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缠万
5 years ago
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1 应用简报法医学采用 Agilent 67 三重四极杆液质联用系统分析毒驾样品中的种常见毒品作者蒋畅杨霞胡培斌安捷伦科技 ( 中国 ) 有限公司摘要本文采用 Agilent 9 Infinity Ⅱ 液相色谱系统和 Agilent 67 三重四极杆液质联用系统建立了一种分析毒驾样品 ( 血浆唾液和尿液 ) 中种常见毒品的方法结果表明, Agilent Captiva EMR Lipid 过滤柱和 Agilent Bond Elut Plexa PCX 固相萃取柱对目标化合物具有较高的回收率, 并且 Agilent 67 三重四极杆液质联用系统表现出优异的线性范围 ( pg/ml ng/ml) 和灵敏度 ( 定量限为 pg/ml pg/ml) 前言毒驾是指吸食注射鸦片海洛因 ( 冰毒 ) 吗啡大麻可卡因, 以及国家规定管制的其他能够使人形成瘾癖的麻醉药品和精神药品后驾驶车辆, 并且血液唾液中毒品含量达到或超过规定阈值的行为 [] 这种行为存在严重的安全隐患因毒驾引发的交通事故不断增多, 导致多人伤亡的恶性交通事故更是时有发生我国公安部于 7 年 5 月颁布了车辆驾驶人员体内毒品含量阈值与检验 (GA-7) [], 明确规定了种毒品在血液和唾液中的含量阈值, 但是该标准未对具体实验室检测方法做出规定本文使用了全新的 Agilent Captiva EMR Lipid 过滤柱和 Agilent Bond Elut Plexa PCX 固相萃取柱分别对血液和尿液进行前处理, 然后使用 Agilent 9 Infinity Ⅱ 液相色谱系统和 Agilent 67 三重四极杆液质联用系统对样品中种毒品的含量进行测定整个样品前处理过程简单快速, 分析过程只需 min, 灵敏度可达 pg/ml 级, 完全满足 GA- 7 的要求

2 实验部分试剂和样品所有种毒品标准品以及尿样均来源于某市公安客户甲酸乙酸乙酸铵乙酸乙酯异丙醇氨水购自 Dikma 公司, 乙腈 ( 质谱纯 ) 甲醇( 质谱纯 ) 购自 Merck 公司 (Kenilworth, USA) 水由 Milli-Q 超纯水系统制得仪器和设备 Agilent 9 Infinity Ⅱ 液相色谱系统, 配备 G7A 型二元泵 G767B 型自动液体进样器 G76B 型柱温箱和 G77B 型二极管阵列检测器 ; Agilent 67 三重四极杆液质联用系统 ; Eppendorf Mini Spain plus 离心机 ; Agilent Captiva EMR Lipid 过滤柱, ml( 部件号 59-); Agilent Bond Elut Plexa PCX 固相萃取柱, mg, ml( 部件号 8); Agilent Captiva Nylon. μm 滤膜液相色谱条件色谱柱 : Agilent ZORBAX Eclipse Plus-C8 色谱柱. mm 5 mm.8 μm( 部件号 ) 柱温 : 5 C 进样体积 : μl 流动相 : A).% 乙酸 + 5 mmol/l 乙酸铵水溶液 B) 甲醇运行时间 : min 流速 :. ml/min 梯度程序 : 时间 (min) B% 质谱条件采集极性 : 正模式 / 负模式鞘气温度 : C 鞘气流速 : L/min 干燥气温度 : 5 C 干燥气流速 : 6 L/min 雾化器压力 : psi 毛细管电压 : (+) 5 V;(-) V 喷嘴电压 : (+) V;(-) 5 V Delta EMV: (+) V;(-) 5 V 校准曲线的绘制用甲醇水溶液 ( 水 : 甲醇 = 5:5) 将种毒品标准品混合溶液稀释成 pg/ml ng/ml 的系列校准标样, 由此绘制标准曲线, 并用外标法进行定量血浆样品前处理在 Captiva EMR Lipid 过滤柱上加入 μl % 甲酸的乙腈溶液, 然后用移液枪加入 μl 血浆, 并用移液枪反复抽吸混合液体 5 次, 使蛋白质发生沉淀 ; 对过滤柱加压或抽真空 min ( 英寸汞柱 ); 收集滴落的液体, 直接上机检测唾液样品前处理取唾液样品.5 ml, 向其中加入.5 ml 乙腈, 使蛋白质发生沉淀 ; 在 5 rpm 的转速下离心, 取上清液上机检测尿液样品前处理取尿液 ml, 向其中加入 ml % 甲酸水溶液, 涡旋混合 ; 然后将溶液加载到经 ml 甲醇活化和 ml % 甲酸溶液平衡的 Bond Elut Plexa PCX 固相萃取柱上, 依次用 ml % 甲酸溶液和 ml 含 % 甲酸的 % 甲醇溶液淋洗 ; 在真空状态下抽干 5 min( 5 英寸汞柱 ); 再用 ml 新鲜配制的乙酸乙酯 : 异丙醇 : 氨水 (5:5:) 溶液洗脱, 将流速控制为每 5 秒一滴 ; 自然滴落结束后, 再加入 ml 乙酸乙酯 : 异丙醇 : 氨水 (5:5:) 溶液洗脱, 再次自然滴落, 将流速控制为每 5 秒一滴, 再用低真空抽滤 ( 英寸汞柱 ); 收集滴落的液体后, 在低于 7 C 的温度下用氮气吹至近干, 加入 μl.5 mol/l 盐酸溶液, 用氮气吹干, 再复溶于 ml 甲醇 : 水 (5:5) 中 ; 经. μm 滤膜过滤后上机检测

3 结果与讨论表列出了 GA-7 中涉及的种毒品的名称及其血液和唾液中的含量阈值表为种毒品的动态多反应监测 (dmrm) 离子对表. GA-7 中涉及的种毒品的名称及其血液和唾液中的含量阈值 [] GA-7 要求检验的目标化合物分子式分子量血液含量阈值唾液含量阈值 (ng/ml) (ng/ml) CAS 号 6- 单乙酰吗啡 C 9 H NO 吗啡 C 7 H 9 NO 可卡因 C 7 H NO 苯甲酰爱康宁 C 6 H 9 NO 四氢大麻酚 C H O 四氢大麻酸 C H 8 O / C H 5 N 苯丙胺 C 9 H N ,- 亚甲二氧基 C H 5 NO ,- 亚甲二氧基苯丙胺 C H NO 氯胺酮 C H 6 ClNO 表. 种毒品的 dmrm 离子对化合物名称母离子子离子碎裂电压碰撞能量池加速电压保留时间保留时间窗口 (V) (ev) (ev) (min) (min) 6- 单乙酰吗啡 (6-Acetylmorphine) 苯丙胺 (Amphetamine) 苯甲酰爱康宁 (Benzoylecgonine) 可卡因 (Cocaine). 8.. 氯胺酮 (Ketamine) ,- 亚甲二氧基苯丙胺 (MDA) ,- 亚甲二氧基 (MDMA) (Methamphetamine) 吗啡 (Morphine) 四氢大麻酚 (THC) 四氢大麻酸 (THC-COOH) 极性正正正正正正正正正负负

4 由于这种毒品化合物的极性跨度较大, 且包含苯丙胺类碱性化合物和大麻素类酸性化合物, 这对样品前处理的要求较高而且, 将样品酸化后, 苯丙胺类化合物带正电, 通过离子相互作用被保留在 Bond Elut Plexa PCX 固相萃取柱上 ; 而大麻素类的化合物则通过非极性作用吸附在 Bond Elut Plexa PCX 固相萃取柱上由于高浓度有机溶剂会洗脱掉吸附在该固相萃取柱上的大麻素类化合物, 因此在淋洗时并不适合采用 % 甲醇这样常用的淋洗溶剂, 所以最后选用含 % 甲酸的 % 甲醇溶液作为第二步淋洗溶剂另外, 苯丙胺类药物易于挥发, 且易在样品前处理过程中随溶剂蒸发而发生损失, 这样的情况下只能加入盐酸使其以盐的形式沉淀因此最好在氮吹即将结束时加入盐酸, 以避免形成氯化铵盐大麻素类化合物极易吸附在塑料容器的表面, 为了最大程度减小样品损失并保证方法的重现性, 建议使用新鲜配制的样品储备液和校准标准样品, 并采用经硅烷化或甲醇冲洗和干燥的玻璃器皿, 并在样品前处理结束后立即进行分析吗啡 6- 单乙酰吗啡苯丙胺,- 亚甲二氧基苯丙胺,- 亚甲二氧苯甲酰爱康宁氯胺酮可卡因四氢大麻酚四氢大麻酸 vs. 采集时间 (min) vs. 采集时间 (min) 图. 种毒品 (5 ng/ml) 的总离子流色谱图本方法的色谱分析时间为 min( 见图上图 ) 由于各种化合物极性差别较大, 且采集模式兼有正模式和负模式, 因此选择 dmrm 采集模式总离子流色谱图如图下图所示, 采用该梯度洗脱程序得到的色谱峰峰形良好为实现高通量超快速检测, 也可将分析时间压缩至 min 检测限和线性范围使用 67 三重四极杆液质联用系统对浓度极低的种毒品进行检测, 并对各种毒品在其定量限 (LOQ) 浓度下的检测稳定性进行考察, 连续进样 7 针后求其浓度相对标准偏差 (RSD), 并推算出各种毒品的仪器检测限 (IDL= t * %RSD * amount) 结果列于表中表. 种毒品的 LOQ 和 IDL 化合物名称 LOQ (pg/ml) RSD (%),n=7 IDL (pg/ml) 苯甲酰爱康宁 ,- 亚甲二氧基氯胺酮可卡因 8.57 吗啡 9.8 苯丙胺 5..9,- 亚甲二氧基苯丙胺.. 6- 单乙酰吗啡.. 四氢大麻酸四氢大麻酚 9..9 图为所得到的种毒品的校准曲线苯甲酰爱康宁 MDMA 氯胺酮苯丙胺的线性范围为 5 pg/ml ng/ml, 可卡因的线性范围为 pg/ml ng/ml, 吗啡 MDA 6- 单乙酰吗啡的线性范围为 pg/ml ng/ml, 四氢大麻酸的线性范围为 pg/ml ng/ml, 四氢大麻酚的线性范围为 ng/ml ng/ml 5 吗啡 y = * x R^ = 单乙酰吗啡 6 苯丙胺 y = * x R^ =

5 6 MDA(,- 亚甲二氧基苯丙胺 ) y = * x R^ = 单乙酰吗啡苯甲酰爱康宁 y = * x R^ = 可卡因 y = * x R^ = y = * x +.99 R^ = 四氢大麻酚 y = * x R^ =.9985 浓度 MDMA (,- 亚甲二氧基 ) 6 y = * x R^ = 氯胺酮 y = * x R^ = 四氢大麻酸 y = * x R^ = y = 8.99 * x R^ = 浓度图. 种毒品 ( 苯甲酰爱康宁 MDMA 氯胺酮苯丙胺可卡因吗啡 MDA 6- 单乙酰吗啡四氢大麻酸和四氢大麻酚 ) 的校准曲线 5

6 回收率实验根据 GA-7 中规定样品中的毒品检测阈值, 在空白样品中添加标准品并最终配制成相应浓度的样品 ( 血浆 ng/ml, 唾液 ng/ml, 尿液 ng/ml), 经过样品前处理后, 上机检测并计算回收率表. 种毒品在三种基质中的回收率化合物名称尿液唾液血浆 ( ng/ml) ( ng/ml) ( ng/ml) 苯甲酰爱康宁.%.% 97.% 8.7% 8.5% 96.% 96.8% 98.7%.6%.8% 96.%.9%,- 亚甲二氧基.%.% 95.% 5.9% 95.% 8.7% 氯胺酮 99.7%.% 9.% 5.% 9.8%.7% 可卡因.6% 5.5% 9.7% 5.% 9.5% 6.9% 吗啡 5.9% 5.9%.% 5.8% 5.9%.6% 苯丙胺 8.6% 88.% 98.% 8.6% 96.% 8.%,- 亚甲二氧基苯丙胺 89.% 9.7% 9.% 7.9% 96.9%.% 6- 单乙酰吗啡 6.% 65.% 9.8%.%.%.% 四氢大麻酸 65.% 7.8% 8.9% 97.% 78.% 9.% 四氢大麻酚 7.% 8.% 67.6% 79.5% 6.% 67.7% 在种毒品中, 吗啡的绝对回收率较低如果期望提高回收率, 可在样品前处理前加入同位素内标, 对吗啡的浓度进行校正, 以获得更准确的样品含量结论本文采用 9 Infinity Ⅱ 液相色谱系统 / 67 三重四极杆液质联用系统 (LC/MS/MS) 与全新的 Captiva EMR Lipid 过滤柱和 Bond Elut Plexa PCX 固相萃取柱相结合, 开发出一种对血液唾液和尿液中的种毒品化合物进行分析的方法结果表明, 除吗啡外, 其余种毒品均获得了良好的回收率该方法的线性范围和灵敏度均满足 GA-7 规定的含量阈值要求参考文献. GA-7 车辆驾驶人员体内毒品含量阈值与检验 6

7 安捷伦对本资料可能存在的错误或由于提供展示或使用本资料所造成的间接损失不承担任何责任本文中的信息说明和技术指标如有变更, 恕不另行通知安捷伦科技 ( 中国 ) 有限公司,8 8 年 5 月日, 中国出版 ZHCN

Captiva EMR-Lipid 结合 LC-QQQ 测定动物源性食品中硝基咪唑类药物

应用简报食品检测与农业 Captiva EMR-Lipid 结合 LC-QQQ 测定动物源性食品中硝基咪唑类药物作者安娟吴翠玲黄悯嘉安捷伦科技 ( 中国 ) 有限公司摘要本应用简报采用 Captiva EMR-Lipid 对鸡肉猪肉和猪肝样品中的 7 种硝基咪唑类药物进行萃取净化后, 在 Agilent 647 LC-QQQ 上进样分析前处理过程简单快速并且分析结果符合国家标准要求的检测限与定量限,