厦门大学学位论文原创性声明 本人呈交的学位论文是本人在导师指导下, 独立完成的研究成果 本人在论文写作中参考其他个人或集体已经发表的研究成果, 均在文中以适当方式明确标明, 并符合法律规范和 厦门大学研究生学术活动规范 ( 试行 ) 另外, 该学位论文为 ( ) 课题 ( 组 ) 的研究成果, 获得
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- 圳也 许
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1 学校编码 :10384 密级 学号 : 硕士学位论文 TNFAIP8 在胃癌中表达及临床意义 The Expression and Significance of TNFAIP8 in Gastric Cancer 指导教师姓名 : 闻 * 强 专业名称 : 外科学 论文提交日期 : 论文答辩日期 : 刘忠臣副教授 2012 年 4 月 2012 年 6 月 2012 年 4 月
2 厦门大学学位论文原创性声明 本人呈交的学位论文是本人在导师指导下, 独立完成的研究成果 本人在论文写作中参考其他个人或集体已经发表的研究成果, 均在文中以适当方式明确标明, 并符合法律规范和 厦门大学研究生学术活动规范 ( 试行 ) 另外, 该学位论文为 ( ) 课题 ( 组 ) 的研究成果, 获得 ( 资助, 在 ( ) 课题 ( 组 ) 经费或实验室的 ) 实验室完成 ( 请在以上括号内填写 课题或课题组负责人或实验室名称, 未有此项声明内容的, 可以不作特别声明 ) 声明人 ( 签名 ): 年月日
3 厦门大学学位论文著作权使用声明 本人同意厦门大学根据 中华人民共和国学位条例暂行实施办法 等规定保留和使用此学位论文, 并向主管部门或其指定机构送交学位论文 ( 包括纸质版和电子版 ), 允许学位论文进入厦门大学图书馆及其数据库被查阅 借阅 本人同意厦门大学将学位论文加入全国博士 硕士学位论文共建单位数据库进行检索, 将学位论文的标题和摘要汇编出版, 采用影印 缩印或者其它方式合理复制学位论文 本学位论文属于 : ( )1. 经厦门大学保密委员会审查核定的保密学位论文, 于年月日解密, 解密后适用上述授权 ( )2. 不保密, 适用上述授权 ( 请在以上相应括号内打 或填上相应内容 保密学位论文应是已经厦门大学保密委员会审定过的学位论文, 未经厦门大学保密委员会审定的学位论文均为公开学位论文 此声明栏不填写的, 默认为公开学位论文, 均适用上述授权 ) 声明人 ( 签名 ): 年月日
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5 摘要 摘要 胃癌是最常见的消化道恶性肿瘤 虽然胃癌发病的确切机制尚不完全清楚, 但环境因素 遗传因素等在胃癌的癌前病变及肿瘤发生发展过程中均起重要作 用, 尤其免疫调节异常 肿瘤坏死因子 α 诱导蛋白 8(Tumor necrosis factor-α induced protein-8, TNFAIP8,TIPE) 在细胞凋亡 信号传导 肿瘤细胞增生 侵袭及转移等过程中具有重要的调节作用 为了研究 TNFAIP8 在胃癌发生发展中的作用及机制, 本实验对胃癌病人手术切除的组织进行了 TNFAIP8 的表达检测, 构建了 TNFAIP8 过表达质粒, 以抗 DR5 单克隆抗体为刺激剂, 检测 TNFAIP8 过表达的人胃癌细胞系 BGC823 的凋亡及相关分子的变化 实验发现胃癌患者肿瘤组织中 TNFAIP8 的 mrna 水平和蛋白水平的表达量都与胃癌的分化和分期密切相关,TNFAIP8 在低分化和进展期胃癌中的表达明显高于中分化和早期胃癌 ; 通过流式细胞仪分析发现,TNFAIP8 过表达减少了胃癌细胞的凋亡, 延长了细胞周期的 S 期, 并且, 酶原 caspase 8 \ 9 \ 3 蛋白的表达无明显差异, 而活化 caspase8 \ 9 \ 3 蛋白的表达在转染 TNFAIP8 后明显减少, 提示过表达的 TNFAIP8 可能通过影响 caspase 的活性负性调控胃癌细胞的凋亡 以此, 我们认为 :TNFAIP8 可能参与了胃癌的发生 发展 关键词 : 胃癌 ; TNFAIP8; caspase I
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7 Abstract Abstract Gastric cancer is the most common gastrointestinal malignancy. Although the precise pathogenesis of gastric cancer is remains unclear, environmental factors, genetic factors were central to the mechanism of gastric precancerous lesions and tumor development, Tumor necrosis factor-α induced protein- 8 ( TNFAIP8,TIPE) is a re-cently discovered antiapoptotic molecule. Recent data have demonstrated that TNFAIP8 is involved in the regulation of apoptosis, cellular signaling cascade andtumor proliferation. In order to study the role of immune mechanisms of TNFAIP8 in the devel opment of gastric cancer, first obtained clinical tissues from patients with gastri c cancer surgery: using immunohistochemical methods to detect the expression of TNFAIP8 in gastric carcinoma; Then constructed TNFAIP8 over-expression p lasmid;and then adopted anti-dr5 monoclonal antibody stimulate, detecting,casp ase and other protein. It was found that the mrna and protein level of TNFAIP8 expression in gastric cancer tumor tissue closely related to tumor differentiation and TNM stage, TNFAIP8 in poorly differentiated and advanced gastric cancer was significantly highe r than in the differentiation and early gastric cancer. After transfected BGC823 huma n gastric cancer cell lines, we found that caspase8/9/3 expresse significantly dif -ference before and after transfection, and have a certain impact on gastric can -cer cell apoptosis and cell cycle. Therefore, the expression of TNFAIP8 may play a important role in the process of development of gastric cancer and TNF -AIP8 may be involved in the gastric cancer development.so it is a new idea to provide to the further study of gastric cancer pathogenesis. Keywords:Gastric cancer;tnfaip8; caspase; II
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9 目录 目录 摘 要... I ABSTRACT... III 第一章前言... 1 一胃癌的发病因素 环境因素 遗传因素 免疫因素 癌前期变化 胃的癌前期状态 胃的癌前期病变... 2 二胃癌的相关临床表现 胃癌各期症状 胃癌病人体征 胃癌常见并发症... 4 三临床上常用的胃癌分型方法 根据胃癌的发生部位分型 根据具体形态分型 早期胃癌 中晚期胃癌 根据胃癌组织分型 根据组织结构分型 : 根据组织发生方面分型 :... 5 四临床常用的胃癌分期方法 UICC/TNM 分期法 JGCA 分期法... 6 五胃癌的诊断 :... 7 III
10 目录 1 实验室检查 X 线表现 纤维内窥镜检查 脱落细胞学检查 B 超 CT 检查 胃癌的 X 线表现 早期胃癌的 X 线表现 中晚期胃癌的 X 线表现 内镜检查 早期胃癌 中晚期胃癌 胃液检查 生物学与生物化学检查... 9 六胃癌的治疗 手术治疗 根治性切除术 姑息性切除术 短路手术 放射治疗 化学治疗 中医治疗 免疫治疗 中药治疗 具有较强的整体观念 可以弥补手术治疗 放射治疗 化学治疗的不足 不影响劳动能力 副作用小 七 TNFAIP8 家族的研究进展 TNFAIP8 家族及成员 TNFAIP8 的结构与组织分布 TNFAIP8 的生物学功能 IV
11 目录 7.4 TNFAIP8 与肿瘤 八细胞凋亡 细胞凋亡 凋亡细胞变化 细胞凋亡调控 细胞凋亡机制 细胞凋亡信号转导 重要的凋亡调控基因 九实验方案设计 研究目的和意义 研究内容 第二章胃癌患者肿瘤组织中 TNFAIP8 的表达情况研究及临床分析 一材料和方法 材料 实验标本收集 主要试剂及耗材 主要仪器及设备 主要溶液的配制 方法 RT-PCR 法检测胃癌患者肿瘤组织中 TNFAIP8mRNA 的表达情况 胃癌肿瘤组织中总蛋白的提取 Western blo 方法测定胃癌患者肿瘤组织中 TNFAIP8 蛋白表达情况 免疫组织化学方法测定胃癌患者肿瘤组织中 TNFAIP8 定位情况 统计学方法处理实验数据 二结果与分析 RT-PCR 方法检测胃癌患者肿瘤组织中 TNFAIP8 表达情况 Western-blot 方法检测胃癌患者肿瘤组织中 TNFAIP8 蛋白表达 免疫组织化学法检测胃癌患者肿瘤组织中 TNFAIP8 定位情况 综合检测结果 三讨论 V
12 目录 第三章 TNFAIP8 过表达质粒的构建和分析鉴定 一材料和方法 材料 TNFAIP8cDNA 酶切引物 质粒载体 主要试剂及耗材 主要仪器及设备 主要溶液的配制 方法 转化 pires2-egfp 质粒菌种的冻存与复苏 载体质粒 pires2-egfp 提取 质粒 pires2-egfp 酶切及回收 TNFAIP8cDNA 扩增 TNFAIP8 cdna 菌液 PCR 产物纯化回收 TNFAIP8 cdna 菌液 PCR 扩增产物双酶切 目的基因与载体的连接 重组质粒的转化 鉴定及测序 二结果与分析 pires2-egfp 质粒图谱和酶切位点 琼脂糖电泳鉴定 pires2-egfp 质粒双酶切产物 TNFAIP8 cdna PCR 扩增 TNFAIP8 cdna 菌液 PCR 扩增产物双酶切 TNFAIP8 过表达重组质粒鉴定及测序 三讨论 第四章转染 TNFAIP8 过表达质粒的 BGC823 细胞与细胞凋亡 机制的探讨 一材料和方法 材料 质粒 细胞株 抗 DR5 单克隆抗体 主要试剂及耗材 VI
13 目录 1.3 主要仪器及设备 主要溶液的配制 方法 人肾上皮细胞系 293T 细胞培养 人胃癌细胞系 BGC823 细胞培养 T/BGC823 细胞转染 adr5mab 应用方案 Westernblot 检测转染 TNFAIP8 过表达重组质粒 BGC823 细胞中 TNFAIP8 的表达 RT-PCR 检测转染 TNFAIP8 过表达重组质粒 BGC823 细胞中 TNFAIP8mRNA 的表达 Hoechse33342 染色检测 adr5mab 诱导的 BGC823 细胞凋亡 MTT 检测转染 TNFAIP8 过表达重组质粒 BGC823 细胞的凋亡 流式细胞仪检测转染 TNFAIP8 过表达重组质粒的 BGC823 细胞凋亡 流式细胞仪检测转染 TNFAIP8 过表达重组质粒的 BGC823 细胞周期 Westernblot 检测转染 TNFAIP8 过表达重组质粒 BGC823 细胞对 caspase 凋亡通路的影响 二结果与分析 T/BGC823 细胞培养及转染 转染重组质粒的 TNFAIP8 表达情况 Hoechse33342 和 MTT 检测 adr5mab 诱导的 BGC823 细胞凋亡 流式细胞仪检测过表达的 TNFAIP8 对 BGC823 细胞凋亡和周期的影响 Westernblot 检测过表达的 TNFAIP8 对 caspase 凋亡通路的影响 三讨论 总结 参考文献 致谢 VII
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15 Contents Contents ABSTRACT... III CHAPTER I INTRODUCTION... 1 I ETIOLOGY OF GASTRIC CANCER Environmental factors Hereditary factors Immunity factors Precancerous lesion Precancerous conditions Precancerous lesions... 2 II CLINICAL MANIFESTATIONS OF GASTRIC CANCER Symptoms Physical examinations Common complications... 4 III CLINICAL TYPING OF GASTRIC CANCER Locations Figures Early stage Advanced stage Tissue typing Tissue structure Tissue originate... 5 Ⅳ CLINICAL STAGING OF GASTRIC CANCER UICC/TNM JGCA... 6 Ⅴ DIAGNOSIS OF GASTRIC CANCER Laboratory examination X-ray Fiber endoscopy Cytology examination Type-B ultrasonic CT... 7 VIII
16 Contents 7 Results of X-ray Early stage Advanced stage Fiber endoscopy Early stage Advenced stage Gastric juice examination Biologic and biochemical examination... 9 Ⅵ TREATMENT OF GASTRIC CANCER Operation Radical operation Palliative operation By-pass operation Radiation therapy Chemiotherapy Chinese traditional therapy Immunotherapy Traditional Chinese medicine therapy More concept of wholism Cover the shortage of other treatments No influence of labor capacity Less side effect Ⅶ ADVANCES IN TNFAIP8 FAMILY TNFAIP8 family and its members TNFAIP8 structure and tissue distribution The biological function of TNFAIP TNFAIP8 and tumor Ⅷ APOPTOSIS Apoptosis Apoptotic cells change Regulation of apoptosis Mechanism of apoptosis IX
17 Degree papers are in the Xiamen University Electronic Theses and Dissertations Database. Full texts are available in the following ways: 1. If your library is a CALIS member libraries, please log on and submit requests online, or consult the interlibrary loan department in your library. 2. For users of non-calis member libraries, please mail to etd@xmu.edu.cn for delivery details.
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1999 4 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 1 2 1999 1 5 1998 7 2 3 97 7 37 12 4 5 1998 8 13 14 5 1997 10 15 6 27 36 16 Degree papers are in the Xiamen University Electronic Theses and Dissertations Database. Full texts
1 2.1 2.2 3.2 3.3 2 3 2.1 2.2 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 Degree papers are in the Xiamen University Electronic Theses and Dissertations Database. Full texts are available in the following ways: 1.
1 1 2 1 2 1 2 3 1 2 3 2 3 1 355 110 403 62 1979 1998 17 1979 2 1996 70 10 4000 200 332 17 80 3000 1.7 1% 300 4 1998 60% 3.4% 0.9 3.6 40.8 37.4 17.3 0.3 4.4 42.6 36.0 16.7 7.1 3.6 67.9 10.7 10.7 3.2 65.6
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-1-20 -2- -3- -4- -5- -6- -7- -8- -9- -10- -11- -12- -13- -14- -15- -16- Degree papers are in the Xiamen University Electronic Theses and Dissertations Database. Full texts are available in the following
10384 9707005 UDC 1 1 5 5 5 6 7 10 10 10 12 13 16 16 17 18 19 21 21 23 24 27 27 27 28 28 29 29 31 32 1789 1846 1857 1859 46 173 34 35 28 442 5 319 88 87 46 211 2 82 46 219 1862 1945 Degree papers
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10384 9715101 UDC MBA 2000 5 2000 6 2000 2000 1995 10 26 1995 1995 10 1999 7 1 1986 SEC, Securities Exchange Committee 20 7 1996 1998 1998 1 2 3 1999 4 1 1 3000 2 3 1997 5 Degree papers are in
10384 1 X9915063 UDC The Brand Marketing of Real Estate MBA 2002 8 2002 9 2002 2002 8 1 1 2...1...4...4...4...4...5...6...6...6...6...7...9...9...9...10...10...11...11...12...12...14...14 1 3...16...16...17...18...18...18...19...20...20...22...23...23...24...25...26...27...28...28...30...32...32...32...33...34...34
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Frost & Sullivan 2006 65% 1 50 2 IDCITUMII1990 1999 10%, 49.2% 1-1 1-1 3 4 2005 GSM 3 2006 3G 2008 GSM GPRSCDMA 5 6 7 8 Frost & Sullivan 2006 65% 9 Email Ovum 2005 19.7% 164 10 11 12 13 14 Jupiter Media
IPOs ... 1... 3...3...6... 8... 10... 12... 14...15... 15... 15... 16...16... 20...20...22... 24...24... 24... 25... 27 BP...28 RBF...31 MATLAB... 34 MATLAB...34 MATLAB... 34... 34... 35 MATLAB...36...
() MONORCHIIDAE SP
10384 B953404 UDC Monorchiidae sp ...2...3...5... 5... 5...8... 8....8....8 ()....12... 13....13....24...36.... 38....38....40...44 MONORCHIIDAE SP.... 47....47...49....50...51...53...57...58...61 1 2
2
10384 K9607315 U D C 1999 1999 1999 1999 3 2 30 1957 1953 1953 1958 1978 1955 1956 1979 60 1980 BG(! BHDFG3 FK3 K6 K2 K12 K3 K7F BHDG3 FK3 K20ZQ K3 K7F BHDG21 CD#4 CD#4 CD#12 BHDG5 FK33ZQF SQ*2 JY(Z
Supply Chain SCM IBM DRP
10384 9915114 UDC 2001 9 Supply Chain SCM IBM 21 1996 DRP Keywords Xiamen Overseas Chinese Electronic Co., Ltd Chinese Color TV Enterprise Transaction Cost the Management of Production, Marketing and Inventory
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10384 9832009 UDC 2001 6 1 2...3....3....3...5...5...6...9...9...12...15...15...18...38...42...43...46 3.. 7 2000 4 10 2000 8 www.wisecast.com 2000 12 22 4 5 1993 7 1 25% 1996 20 1997 67 1998 210 1999
% 6.7% % % / 1
1 1995 1995 50% 70 75% 1996 1996 9 30 5000 2000 1996 1999 1998 11 9 1999 5 9 5 1998 10 1999 30 200 2 1950 38 1999 2960 1950 40 1999 3585 1950 0.73 1999 28.3 20 12.1% 6.7% 1 1 2 1950 1978 1950 38 1978 466
2000.11 2000.11 2000 11 Abstract: Background: The development of autoantibodies in the sera of patients with cancers has been described, but the mechanism is still not clear. Objective: The aim of this
.1..2....2 2. 2.. 3..5 7.7.8..11 11..12...14 19...19 20 20 26.29 36 40...41 90 98 4 21 Network selling (Multilevel Marketing),, 1950 1 1 2 3 LeeMythnger WillianCasselberry 1959 60 60 200 60 1972 40 80%
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1998 5
10384 9511001 1998 5 1998 6 1998 1998 5 AICPA Internet/Intranet Internet/Intranet 1 2 2 2 4 6 10 10 10 12 13 13 14 18 18 18 19 19 20 Internet/Intranet 20 Internet/Intranet 23 21 25 28 28 28 30 32 32 32
厦门大学学位论文原创性声明 本人呈交的学位论文是本人在导师指导下, 独立完成的研究成果 本人在论文写作中参考其他个人或集体已经发表的研究成果, 均在文中以适当方式明确标明, 并符合法律规范和 厦门大学研究生学术活动规 范 ( 试行 ) 另外, 该学位论文为 ( ) 课题 ( 组 ) 的研究成果, 获
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59 (ii) (iii) (iv) (v) 500,000 500,000 59I 18 (ii) (iii) (iv) 200,000 56 509 (ii) (iii) (iv) (v) 200,000 200,000 200,000 500,000 57 43C 57 (ii) 60 90 14 5 50,000 43F 43C (ii) 282 24 40(1B) 24 40(1) 58
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南華大學數位論文
1 i -------------------------------------------------- ii iii iv v vi vii 36~39 108 viii 15 108 ix 1 2 3 30 1 ~43 2 3 ~16 1 2 4 4 5 3 6 8 6 4 4 7 15 8 ----- 5 94 4 5 6 43 10 78 9 7 10 11 12 10 11 12 9137
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Carl W.Buechner 2002 9 + CRM CRM 1 CRM Hans Peter Brondmo 2002 2 CEO 1 2 Hans Peter Brondmo 2002 1 WTO WTO 1 1000 2 3 ATM POS 4 CRM 2 1 2 3 4 Thibaut & Kelley Rusbult Polanyi Thibaut & Kelley 1959 Rusbult,1980
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...12...12...13...18...18...24 MSCI...27 FTSE...29...33...36................................................... 1 ...........................39...39...42...45...54.............................................
「香港中學文言文課程的設計與教學」單元設計範本
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