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1 河北大学课程教学大纲 课程编号 : 课程名称 : 环境微生物学实验 学分学时 : 1.5 学分 51 学时 开课单位 : 撰稿人 : 审核人 : 化学与环境科学学院 刘微 马建薇 2015 年 5 月 20 日制 ( 修 ) 订

2 环境微生物学 实验教学大纲 课程编号 : 课程英文名称 :Experiment of Environmental Microbiology 学分 / 学时 :1.5 学分 /51 学时 课程类型 : 通识通修课程 通识通选课程 学科基础必修课程 学科 ( 跨学科 ) 选修课程 专业发展核心课程 专业发展拓展课程 集中实践课程 适用专业 ( 专业类 ): 环境科学 先修课程 : 环境微生物学 环境生态学 一 课程简介与教学目标 环境微生物学实验 是环境工程专业学生必修的专业核心课程 本课程力求达到适应 21 世纪实施素质教育, 能力教育的要求 环境微生物学是一门理论与实践紧密结合, 应用性极强的学科, 实验课的教学是其中一个极其重要的环节 本课程的任务就是使学生得到微生物学实验基本操作技能的训练, 进一步加深对环境微生物学理论知识的理解, 培养学生具有从事科学研究与教学的基本素质 本课程的教学目标是使学生牢固掌握环境微生物学的基本实验技术, 加深对相关理论的理解, 培养学生独立进行观察 思考 分析问题和解决问题的能力, 启迪学生的创新思维 本课程要求学生课前进行预习 课上认真听讲 独立完成实验设计与操作, 课后认真总结实验结果 书写实验报告并回答课后思考题 二 教学方式与方法积极引进国际 国外先进的教学方式与方法, 结合国内学生的特点和我国的教学机制, 重视个性的发展, 鼓励个人潜能的开发 ; 倡导以学生为主体的教育思想, 使学生能够学会如何学习, 成为学习的主人 ; 课程以单元模块为单位, 既有统一要求, 又可适应个体需要 ; 整个教学不是以最后的考试为惟一考核依据, 平时的课业等也是衡量学生是否达到教学目的的主要标准 三 教学重点与难点 ( 一 ) 教学重点教学重点是微生物学基本操作技能, 包括显微镜的正确使用和保养, 微生物染色和形态观察, 无菌操作技术, 微生物分离纯化和培养技术, 环境微生物的检测, 环境保护与治理中微生物种类的鉴定及培养 ( 二 ) 教学难点对于环境工程专业学生来说, 教学的难点是无菌操作意识的培养 无菌操作技术的掌握以及微生物分离纯化和培养技术 四 学时分配计划 2

3 序号 实验项目名称 实验要求 实验类型 学时 一 培养基的制备和灭菌 必修 综合性 6 二 实验室环境和人体表面微生物的检查 必修 设计研究性 6 三 细菌纯种分离 培养和接种技术与菌落形态观察 必修 综合性 6 四 化学因素对微生物的影响 必修 设计研究性 6 五 细菌菌落总数的测定 必修 综合性 6 六 大肠菌群的测定 必修 综合性 7 七 光学显微镜的操作及微生物的简单染色 必修 验证性 5 八 细菌的革兰氏鉴别染色法 必修 验证性 6 九 显微镜直接计数法 必修 设计研究性 6 十 牛乳中细菌的检查 选修 验证性 6 十一 细菌淀粉酶的测定 选修 设计研究性 6 合计 66 注 :1. 实验要求 填写 必修 或 选修 ; 2. 实验类型 填写 演示性 验证性 综合性 设计研究性 或 其它 ; 3. 学时 合计 数应大于或等于该实验课程总学时数 五 教材与教学参考书 ( 一 ) 教材 1. 环境工程微生物学 ( 第三版 ), 周群英 高廷耀编著, 高等教育出版社,2005; 2. 微生物学实验 ( 第三版 ), 沈萍 范秀容 李广武编, 高等教育出版社,2005 ( 二 ) 教学参考书 环境微生物学, 乐毅 王士芬著, 化学工业出版社,2005 年 六 课程考核与成绩评定 考核类型 考试 考查 考核方式 开卷 闭卷 项目报告 / 论文 其它 :( 填写具体考核方式 ) 成绩评定 平时成绩 70%, 期末成绩 30% 七 课程内容概述实验一培养基的制备和灭菌 1. 熟悉玻璃器皿的洗涤 包装 棉塞的制作和灭菌前的准备工作 ; 3

4 2. 掌握培养基的配制 分装 斜面培养基和无菌水的制备方法, 熟悉常用培养基名称 ; 3. 了解高压蒸汽灭菌和干热灭菌的基本原理及应用范围, 掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项 ( 二 ) 知识点提示主要知识点 : 玻璃器皿的洗涤 包装和棉塞的制作, 培养基的配制 斜面培养基和无菌水的制备, 高压蒸汽灭菌的操作方法 教学重点 : 玻璃器皿的洗涤 包装和棉塞的制作, 培养基的配制, 高压蒸汽灭菌的操作方法 教学难点 : 玻璃器皿灭菌前的包装, 棉塞的制作, 培养基的配制 1. 玻璃器皿的洗涤和包装 ; 2. 培养基的制备 : 称量, 溶解, 调 ph, 分装, 包装 ; 3. 无菌水的制备 ; 4. 高压蒸汽灭菌 ; 5. 制备斜面 1. 培养基是根据什么原理配制的? 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基中不同成分各起什么作用? 2. 为什么湿热比干热灭菌优越? 实验二实验室环境和人体表面微生物的检查 1. 证明实验室环境和人体表面存在微生物 ; 2. 学习平板培养基的制作方法 ; 3. 体会无菌操作的重要性 ; 4. 观察菌落形态特征 ; 5. 比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量和类型 ( 二 ) 知识点提示主要知识点 : 平板培养基的制作 ; 无菌操作概念的建立和无菌操作技术的学习 ; 微生物培养条件的了解 ; 菌落形态的观察和菌落数的计数 ; 不同场所和条件下细菌数量的比较 教学重点 : 平板培养基的制作 ; 微生物培养条件的了解 ; 菌落形态的观察和菌落数的计数 ; 不同场所和条件下细菌数量的比较 教学难点 : 无菌操作概念的建立和无菌操作技术掌握 1. 平板培养基的制备 ; 2. 实验室细菌检查 ; 3. 人体细菌检查 ; 4. 细菌培养 ; 4

5 5. 菌落的观察 计数 1. 比较不同来源的样品, 哪一种样品的平板菌落数与菌落类型最多? 2. 通过本次实验, 在防止培养物的污染与防止细菌扩散方面, 你有什么体会? 实验三细菌纯种分离 培养和接种技术与菌落形态观察 1. 掌握从环境中分离培养细菌的方法 ; 2. 获得若干种细菌纯培养技能 ; 3. 掌握几种接种技术 ( 二 ) 知识点提示主要知识点 : 细菌纯种分离方法 ( 包括稀释平板分离法和平板划线分离法的学习 ); 斜面接种技术 教学重点 : 稀释平板分离法和平板划线分离法的学习 ; 斜面接种技术的掌握 教学难点 : 平板划线分离法 1. 取土壤样品 ; 2. 土壤样品的溶解和系列稀释 ; 3. 细菌纯种分离方法 : 稀释平板分离法, 平板划线分离法 ; 4. 斜面接种技术 ; 5. 菌落形态观察 1. 用一根无菌移液管接种几种浓度的土壤样品时, 应从哪个浓度开始? 为什么? 2. 你掌握了哪些细菌纯种分离方法? 实验四化学因素对微生物的影响 1. 了解常用化学消毒剂对微生物的作用 ; 2. 掌握滤纸片法测定抑菌作用的操作技术 ; 3. 掌握抑菌圈的测量方法 ( 二 ) 知识点提示主要知识点 : 细菌纯种分离方法 ( 包括稀释平板分离法和平板划线分离法的学习 ); 斜面接种技术 教学重点 : 了解常用化学消毒剂对微生物的作用 ; 滤纸片法测定抑菌作用的操作技术的学习 ; 抑菌圈的测量方法 教学难点 : 抑菌圈的观察和测量 5

6 1. 抑菌剂的配制 ; 2. 平板培养基的制备 ; 3. 菌液的涂布 ; 4. 浸有抑菌剂的滤纸片贴于含菌平板上 ; 5. 培养 ; 6. 抑菌圈的观察和测量 影响抑菌圈大小的因素有哪些? 实验五细菌菌落总数的测定 1. 学习水样的采集方法和水样细菌总数测定的方法 ; 2. 通过细菌菌落总数的测定, 了解其生化特性和作为水质指标的原理 ; 3. 了解水源水的平板菌落计数的原则 ( 二 ) 知识点提示主要知识点 : 细菌纯种分离方法 ( 包括稀释平板分离法和平板划线分离法的学习 ); 斜面接种技术 教学重点 : 细菌菌落总数的测定和水源水的平板菌落计数的原则 教学难点 : 水源水的平板菌落计数 1. 水样的采集和保藏 ; 2. 水样的稀释 ; 3. 接种 ; 4. 培养 ; 5. 细菌菌落计数 ; 6. 报告结果 1. 测定水中细菌菌落总数有何意义? 2. 根据我国饮用水水质标准, 讨论你这次实验的结果 实验六大肠菌群的测定 1. 学习测定水中大肠菌群数量的多管发酵法 ; 2. 通过大肠菌群的测定, 了解其生化特性和作为水质指标的原理 ; 3. 了解细菌在液体培养基中的生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义 ( 二 ) 知识点提示 6

7 主要知识点 : 测定水中大肠菌群数量的多管发酵法, 大肠菌群作为水质指标的原理, 细菌在液体培养基中的生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义 教学重点 : 学习测定水中大肠菌群数量的多管发酵法, 了解细菌在液体培养基中的生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义 教学难点 : 小导管的使用以及对产酸 产气现象的观察和判断 1. 培养基的配制 ; 2. 水样的采集和保藏 ; 3. 水样的稀释 ; 4. 接种 ; 5. 培养 ; 6. 产酸 产气现象的观察 ; 7. 大肠菌群测定结果报告 1. 大肠菌群的定义是什么? 2. 经检查, 水样是否合乎饮用标准? 实验七光学显微镜的操作及微生物的简单染色 1. 掌握光学显微镜的结构 原理, 学习显微镜的操作方法和保养 ; 掌握显微镜油镜的使用和保护法 2. 学习微生物的染色原理 染色的基本操作技术, 掌握细菌涂片标本的制备 ( 二 ) 知识点提示主要知识点 : 显微镜的操作方法 ; 微生物简单染色的原理和操作技术 ; 细菌涂片标本的制备 教学重点 : 学习显微镜的操作方法特别是油镜的使用和焦距的调节 ; 微生物简单染色的原理和操作技术 ; 细菌涂片标本的制备 教学难点 : 显微镜焦距的调节和细菌简单染色技术的掌握 1. 认识光学显微镜的结构 原理, 学习显微镜的操作方法和保养 ; 掌握显微镜油镜的使用和保护法 2. 简单染色 : 细菌涂片标本的制备, 简单染色, 显微镜观察 3. 污泥中原生动物的选择和观察 1. 用油镜观察时应注意哪些问题? 2. 如果你的图片未经热固定, 将会出现什么问题? 如果加热温度过高 时间过长, 又会怎样呢? 7

8 实验八细菌的革兰氏鉴别染色法 1. 学习革兰氏染色法的基本原理及其在细菌分类鉴定中的重要性 ; 2. 掌握革兰氏染色法的操作技术 ( 二 ) 知识点提示主要知识点 : 理解革兰氏染色法的基本原理及其在细菌分类鉴定中的重要性 ; 掌握革兰氏染色法的几个重要的操作环节 ; 学习对革兰氏鉴别染色结果的判断 ; 掌握边观察边绘制细菌个体形态的技巧 教学重点 : 掌握革兰氏染色法的几个重要的操作环节 ; 学习对革兰氏鉴别染色结果的判断 ; 掌握边观察边绘制细菌个体形态的技巧 教学难点 : 革兰氏染色法关键环节的掌握 1. 制片 ; 2. 初染 ; 3. 酶染 ; 4. 脱色 ; 5. 复染 ; 6. 镜检 ; 7. 混合涂片染色 ; 8. 染色结果的判断和细菌个体形态的绘制 乙醇脱色后复染之前, 革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌应分别是什么颜色? 实验九显微镜直接计数法 1. 了解血球计数板的构造 ; 2. 掌握使用血球计数板进行微生物计数的方法 ; 3. 进一步熟悉和掌握荧光显微镜的操作方法 ; 4. 学习用压滴法制作标本片 ( 二 ) 知识点提示主要知识点 : 了解血球计数板的构造 ; 掌握使用血球计数板进行微生物计数的方法 ; 学习用压滴法制作标本片 教学重点 : 掌握使用血球计数板进行微生物计数的方法 ; 学习用压滴法制作标本片 教学难点 : 正确使用血球计数板进行微生物计数 使用荧光显微镜对水体中微生物计数 1. 了解血球计数板的构造和使用方法 ; 了解荧光显微镜的使用方法 2. 压滴法制作标本片 ; 荧光染色法 3. 计数微生物个数 8

9 根据你的体会, 说明血球计数板计数的误差主要来自哪些方面? 荧光显微镜是否可以观察活细菌和死细菌? 为什么? 实验十牛乳中细菌的检查 了解牛乳的细菌学检查方法 显微镜直接计数法和美蓝还原酶实验法 ( 二 ) 知识点提示主要知识点 : 牛乳的细菌学检查方法 显微镜直接计数法和美蓝还原酶实验法 1. 显微镜直接计数 1) 在白纸上画出 1cm2 的方块, 然后将玻片放在纸上 2) 用 10μl 的微量吸液器吸取混匀了的生牛乳样品, 放在玻片 1cm2 区域的中央 3) 用接种针将牛乳涂匀, 并涂满 1cm2 的范围 4) 使涂片于空气中慢慢干燥 将铁丝试管架放在沸水浴中, 然后置已干燥的涂片于试管架上, 用蒸汽热固定 5 分钟, 待干 5) 浸于美蓝染液缶内染色 2 分钟 6) 取出玻片, 用吸水纸吸去多余的染料, 晾干 7) 再用水缓缓冲洗, 晾干 8) 油镜下观察细菌数, 共数 个视野 9) 计算 2. 美蓝还原酶试验法 1) 标记两个无菌试管 1 和 2 2) 分别向两个试管各加入 10ml 生鲜牛乳样品和质差牛乳样品 3) 分别向两管各加入 1ml 美蓝溶液, 盖紧管塞 4) 轻轻倒转试管约 4 次, 置 36. 水浴中, 并记录培养时间 5) 测试管在水浴中稳定 5min 后, 取出 轻轻倒转一次后再放回水浴中 6) 每隔 30min 观察记录试管中美蓝颜色的变化, 直至 3~6h 1. 在美蓝还原酶试验法中, 你所检查的生牛乳样品质量怎样? 2. 你所检查的生牛乳在显微镜视野下观察到的情况, 对照图 ⅩⅤ-1 是属于哪一种情况? 实验十一细菌淀粉酶的测定 了解淀粉酶的作用特点, 掌握测定方法 ( 二 ) 知识点提示主要知识点和教学重点 : 活性污泥混合液中的淀粉酶活性的测定, 细菌淀粉酶在固体培养基上的扩散 1. 活性污泥混合液中的淀粉酶活性的测定 ; 9

10 2. 细菌淀粉酶在固体培养基上的扩散实验 1. 在活性污泥混合液中的淀粉酶活性的测定中, 如果 1 号管中的蓝色一直不能褪去, 请分析其原因 2. 观察点种培养的结果并做分析 10

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