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1 7 3 Vol. 7 No Journal of Food Safety and Quality Mar., 王 聪, 梁 瑞 强, 曹 进 *, 王 钢 力, 丁 宏, 张 庆 生 (, ) 摘 要 : 目 的 9 - 方 法,, -, ACQUITY UPLC BEH C 18,,, 9 结 果 9, r 0.99; 0.226~23.5 μg/l, 1.79~70.6 μg/l, 结 论 9,, 关 键 词 : ; ; Determination of 9 kinds of fat-soluble vitamins in healthy foods by liquid chromatography-mass spectrometry WANG Cong, LIANG Rui-Qiang, CAO Jin *, WANG Gang-Li, DING Hong, ZHANG Qing-Sheng (National Institutes for Food and Drug Control, Beijing , China) ABSTRACT: Objective To establish a method for the simultaneous determination of fat-soluble vitamins in healthy foods by liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS). Methods The samples were extracted by ultrasonic in organic solvents, then determined by LC-MS. Quantitative ions of standards in external standard method were used as analysis of quantification. The chromatography and mass spectrometry was optimized using an ACQUITY UPLC BEH C 18 column. Nine kinds of fat-soluble vitamins added in health foods were determined qualitatively and quantitatively based on the information of molecular ion mass, specific fragment ions and chromatographic retention. Results The linearity of 9 kinds of fat-soluble vitamins was good with r>0.99. Limits of determination of 9 kinds of vitamins were 0.226~23.5 μg/l, and limits of quantitation were 1.79~70.6 μg/l. Precision, accuracy and repeatability was all satisfied. Conclusion This method is simple and reproducible, which can be applied in analysis of fat-soluble vitamins in healthy foods. KEY WORDS: healthy food; fat-soluble vitamin; liquid chromatography-mass spectrometry * 通 讯 作 者 :,, caojin@nifdc.org.cn *Corresponding author: CAO Jin, Professor, Institute for Food and Cosmetics Control, National Institutes for Food and Drug Control, Beijing. No.2, Tiantan Xili, Beijing , China. caojin@nifdc.org.cn

2 引 言, A D E K,, α- β- γ-, β- [1] β- A, A A A, A 1 ( ) A 2 ( ), A 1, A 2, A A [2] 1 A A, A [3] D 1,25- D, D 2 ( ) D 3 ( ) E,, α- β- γ- δ- 4 [4],, α β γ δ [5] K 2- -1,4-, K K 1 K 2,,,, 1-3 [6-15] - (liquid chromatography-mass spectrometry, LC-MS),,, -,,, 9,,, 2 材 料 与 方 法 2.1 仪 器 与 材 料 - (1290 Infinity, 6460 Triple Quad LC-MS, Agilent Technologies); 1/1 (AL204, Mettler Toledo); 1/10 (XP205, Mettler Toledo) (, Fisher); (, Fisher); (, ) ( MT4S153068, ); AD ( , ) A( LGA0031, 95%, ); A ( 31010, 98.3%, Dr. Ehrenstorfer GmbH); D 2 ( 23417, 100%, Accu Standrad); D 3 ( 40916, 99.9%, Dr. Ehrenstorfer GmbH); E( , 100%, Accu Standrad); E ( 41203, 98.5%, Dr. Ehrenstorfer GmbH); K 1 ( 41107, 99.9%, Dr. Ehrenstorfer GmbH); K 2 ( LC10207, 99.9%, Supelco); β- ( SLBG6787V, 95%, Sigma) 2.2 实 验 方 法 色 谱 条 件 ACQUITY UPLC BEH C 18 (2.1 mm 100 mm, 1.7 μm), 35, 0.5 ml/min, : 5 μl, A A D 3 E E K 1 K 2 β- 1, D 2 100% B 1 A B (min) 表 1 Table 1 流 动 相 及 梯 度 洗 脱 条 件 Gradient elution procedures A( : =10:90, V:V)% B( : =50:50, V:V)%

3 3, : 质 谱 条 件,,, 45 psi, 4500 V, 6 L/min, 10 μa D , 对 照 品 溶 液 制 备 K 1 : K 1 10 mg, 100 ml, 5.0 ml,, ; β- : β- 5 mg, 50 ml,, ; A A D 2 D 3 E E K 2 : 10 mg, 100 ml,, A A E 0.50 ml, E K ml, K ml, D ml, β- D ml 10 ml,,,, 供 试 品 制 备 : 20, 1.0 g 100 ml 3 ml 10 ml, 10 min,,,, 0.22 μm, : 20,, 0.1 g 100 ml, 5 ml 10 ml,,, 0.22 μm, 空 白 实 验 标 准 工 作 曲 线 的 建 立,,, 2.2.4,, A A E: μg/ml; E K 2 : μg/ml; K 1 : μg/ml; D 2 : μg/ml; β- D 3 : μg/ml Table 2 表 2 选 择 反 应 监 测 的 优 化 条 件 The retention time, qualitative ion pair and quantitative ion pair of vitamins /min /V /V A /93; 269/81 269/ ; 22 A /93; 269/81 269/ ; 22 D /107; 397/69 397/ ; 35 D /367; 385/ / ; 5 E /165; 431/ / ; 40 E /207; 473/ / ; 30 K /187; 451/57 451/ ; 30 K /187; 445/81 445/ ; 40 β /177; 538/ / ; 20

4 检 出 限 和 定 量 限, 3 10, 3, 精 密 度 及 稳 定 性, 9, 3, RSD, 12 h 表 3 9 种 脂 溶 性 维 生 素 浓 度 (μg/ml) Table 3 Concentration of 9 vitamins(μg/ml) A A D D E E K K β 回 收 率, 9, 3, RSD 含 量 测 定 及 重 复 性,, 6 AD, 3 结 果 与 分 析 3.1 空 白 实 验 9 ( ) 3.2 标 准 工 作 曲 线 的 建 立 , r 表 4 9 种 脂 溶 性 维 生 素 线 性 关 系 及 线 性 范 围 Table 4 Regression equation of 9 kinds of vitamins ( ) (μg/ml) (μg/ml) (μg/ml) A Y=3516.8X ~0.502 Y=2605.6X ~0.502 Y=2808.3X ~0.502 A Y=4910.2X ~0.523 Y=3187.7X ~0.523 Y=3396.5X ~0.523 D 2 Y=1386.9X ~0.406 Y=2768.5X ~0.406 Y=2637.5X ~0.406 D 3 Y=517.5X ~3.53 Y=333.1X ~2.89 Y=415.9X ~2.89 E Y=458.9X ~0.565 Y=685.7X ~0.548 Y=305.2X ~0.565 E Y=2035.7X ~0.292 Y=1202.5X ~0.292 Y=1387.1X ~0.292 K 1 Y=7119.9X ~0.212 Y=4094.4X ~0.212 Y=4802.2X ~0.212 K 2 Y=2141.9X ~0.269 Y=1272.6X ~0.269 Y=1236.6X ~0.269 β- Y=344.2X ~2.75 Y=358.5X ~2.54 Y=331.9X ~2.54

5 第3期 王 聪, 等: 液相色谱-质谱联用法测定保健食品中 9 种脂溶性维生素 995 注: (1)~(9)分别为维生素 A 维生素 A 醋酸酯 维生素 K2 维生素 D3 维生素 E 维生素 E 醋酸酯 维生素 K1 维生素 D2 β-胡萝卜 素 图中横坐标为时间, 纵坐标为丰度 图 种脂溶性维生素的液相色谱-质谱提取离子色谱图 Fig. 1 MRM of 9 kinds of vitamins 检出限 定量限 3.4 精密度与稳定性 分别以 3 倍信噪比 10 倍信噪比时的样品浓度 片剂中维生素 A 及其醋酸酯 维生素 D2 维生 为检出限 定量限, 结果见表 5 9 种维生素的检出 素 D3 维生素 E 及其醋酸酯 维生素 K1 维生素 限为 0.226~23.5 μg/l, 定量限为 1.79~70.6 μg/l K2 胡萝卜素的混合标准工作溶液室温放置 12 h 的

6 996 7 RSD 9.4% 8.5% 3.3% 6.3% 2.6% 7.2% 2.6% 7.1% 2.1%; 9 12 h RSD 2.2% 3.0% 1.3% 3.8% 4.3% 6.8% 4.1% 4.4% 2.4%, 12 h 9 0.9% 4.7% 3.3% 7.9% 6.3% 5.3% 4.1% 1.3% 2.5%; 9 3.0% 2.9% 2.2% 6.3% 4.9% 10.5% 5.3% 7.6% 4.6%; 9 5.6% 9.4% 5.4% 5.9% 2.2% 7.6% 2.8% 9.9% 14.6%; 9 2.2% 7.7% 4.2% 4.8% 5.9% 4.5% 4.2% 6.8% 12.7%, 15% 3.5 回 收 率 实 验, 6 7, 80%~120%,, 3.6 含 量 测 定 及 重 复 性, 8 9, 表 5 9 种 脂 溶 性 维 生 素 检 测 限 定 量 限 (μg/l) Table 5 Limits of determination and quantitation of 9 kinds of vitamins(μg/l) A A D D E E K K β 表 6 9 种 脂 溶 性 维 生 素 回 收 率 试 验 结 果 ( 片 剂 )(%) Table 6 Recovery experiments of tablets (%) RSD A A D D E E K K β

7 3, : 表 7 9 种 脂 溶 性 维 生 素 回 收 率 试 验 结 果 ( 软 胶 囊 )(%) Table 7 Recovery experiments of soft capsules (%) RSD A A D D E E K K β 表 8 Table 8 片 剂 中 9 种 脂 溶 性 维 生 素 的 含 量 测 定 结 果 (mg/g) The content of 9 kinds of vitamins in tables(mg/g) RSD(%) A A D D E E K K β 表 9 Table 9 软 胶 囊 剂 中 9 种 脂 溶 性 维 生 素 的 含 量 测 定 结 果 (mg/g) The content of 9 kinds of vitamins in soft capsules(mg/g) RSD(%) A A D D E E K K β

8 讨 论,,, 0.2 ml/min, E E β-,,,,, 0.5 ml/min,, A 328,, 269 A 286,, 269,, A,,, A, 1, E, E,,, E E β-, 3, ,, D 2, D 2,,, D 2 5 结 论 - 9,,, 参 考 文 献 [1],,,. β- [J]., 2008, 28(16): Wu CS, Huang JJ, Ai XL, et al. The review of research of β-carotene [J]. Chin Hosp Pharm J, 2008, 28(16): [2]. A β- [J]., 1998, 13: 17. Lin SM. The review of research of vitamin A and β-carotene in animal nutration [J]. China Feed, 1998, 13: 17. [3] GB [S]. GB Standard for the use of nutritional fortification substances in foods [S]. [4]. ( 7 )[M]. :, Zha XL. Biochemistry (Seventh edition) [M]. Beijing: People s Medical Publishing House Co., Ltd, [5],,,. HPLC A E [J]., 2015, 36(3): Jiang Bo, Hu WZ, Liu CJ, et al. Simultaneous determination of vitamin A and different configuration of vitamin E in vegetable oils by HPLC [J]. Sci Technol Food Ind, 2015, 36(3): [6] GB/T A E [S]. GB/T Determination of retinol and tocopherol in foods [S]. [7] GB A D E [S]. GB Determination of vitamin A, D, E in foods for infants and young children, milk and milk products [S]. [8] GB/T A [S]. GB/T Meat and meat products-determination of vitamin A content [S]. [9] GB/T [S]. GB/T Determination of carotene in foods [S]. [10] GB β- [S]. GB National food safety standard-determination of β-carotene in foods for infants and young children, milk and milk products [S]. [11] NY β- [S]. NY Determination of β-carotene in juice [S]. [12] GB/T E [S]. GB/T Meat and meat products-determination of vitamin E content [S] [13] NY/T E [S]. NY/T Determination of tocopherol content in edible vegetable oils [S].

9 3, : [14] GB/T K 1 [S]. 作 者 简 介 GB/T Determination of vitamin K 1 in vegetables [S]. [15] GB K 1 [S]. 王 聪, 博 士, 助 理 研 究 员, 主 要 研 究 方 向 为 食 品 化 学 检 测 wangcong351@126.com GB National food safety standard-determination of vitamin K 1 in foods for infants and young children, milk and milk products [S]. ( 责 任 编 辑 : 杨 翠 娜 ) 曹 进, 博 士, 研 究 员, 主 要 研 究 方 向 为 分 析 化 学 caojin@nifcd.org.cn

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