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畴针委
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1 尼克酸 ( 维生素 PP, 又称烟酸 ) 的测定方法此处介绍微生物法比色法以及复合维生素制剂中的烟酰胺测定方法 ( 分光光度法 ) 一微生物法 1. 原理一种微生物生长必需某一些维生素,Lactobacillus arabinosus 的生长需要尼克酸尼克酸是指具有尼克酸生物学活性的吡啶 3- 羧酸及其衍生物的总称它是白色晶体, 是维生素中最稳定的一种, 对酸碱热光及弱氧化剂都很稳定, 微溶于冷水, 易溶于热水及乙醇其检出限为 10ng 2. 适用范围本方法来源自 AOAC 和国标 GB 适用于食物及饲料中的尼克酸的检测 3. 仪器 (1) 电热恒温培养箱 (37±0.5 ) (2) 无菌室 ( 紫外灯消毒 ) (3) 电热手提式压力蒸汽消毒器 (121, 高压 30min) (4) 液体快速混合器 (5) 离心机 (3000 转,10min) (6) 碱式滴定管 (7) 硬质玻璃试管 4. 试剂所用试剂皆为分析纯 ; 所用水皆为蒸馏水 4.1 标准溶液的配制 (1) 尼克酸标准储备液 (0.1mg/ml): 准确称取 50.0mg 已干燥恒重并储于五氧化二磷干燥器中的尼克酸标准, 以 25% 乙醇溶液溶解并定容至 500ml, 于冰箱中保存 (2) 尼克酸标准中间液 (1ug/m): 吸取 1.00ml 尼克酸标准储备液, 置于 100ml 容量瓶中, 用 25% 乙醇溶液定容, 混匀, 于冰箱中保存 (3) 尼克酸标准工作液 (0.1ug/m): 临用时吸取 5.00ml 尼克酸标准中间液, 置于 50ml 容量瓶中, 用水定容, 混匀 4.2 其它试剂的配制 (1) 0.5mol/L 硫酸 : 于 2000ml 烧杯中加入 700ml 水, 加入 28ml H2SO4, 用水稀释至 1000ml (2) 10mol/L 氢氧化钠 : 溶 200g NaOH 于水中, 稀释至 500ml (3) 0.1mol/L 氢氧化钠 :, 取 10ml 10mol/L NaOH, 用水稀释至 1000ml (4) 0.04% 溴甲酚绿溶液, 称取 0.1g 溴甲酚绿于研钵中, 加 1.4ml 0.1mol/L NaOH 研磨, 加少许水继续研磨, 直至完全溶解, 用水稀释到 250ml (5) 酪蛋白 (sigma 公司 ): 称取 50g 不含维生素的酪蛋白, 加 200ml (3mol/L) 盐酸,121 磅压力下水解 6 小时, 将水解物转移至蒸发皿内, 在水浴上蒸发至膏状加 200ml 水使之溶解后再蒸发至膏状, 反复 3 次, 以除去盐酸注意 :* 酸解酪蛋白是为了去除酪蛋白中的维生素, 确保培养基中不含代测的尼克酸, 但酸解并不一定彻底, 因此选用不含维生素的酪蛋白 * 水浴蒸发时不可蒸干或使之焦糊, 若溶液被蒸干, 水解液所含营养物已被破坏用 10mol/L 氢氧化钠调节 PH 值至 3.5, 以溴酚蓝作外指示剂加 20g 活性炭, 振摇, 过滤, 反复操作至滤液无色滤液加水稀释至 500ml, 加少许甲苯置冰箱中保存 * 注意 : 活性炭不能在溶液中太久, 否则容易破坏酪蛋白的营养成分

2 (6) 溴酚蓝 : 称取 0.1g 溴酚蓝, 用 1+4 乙醇溶解后, 再加乙醇稀释至 100ml (7) 甲苯 (8) 4mol/L 盐酸溶液,V+V=1+4 (9) 5mol/L 生理盐水 : 取 9gNaCl 溶于 1000ml 水中 (10) 胱氨酸色氨酸溶液 : 称取 4gL- 胱氨酸和 1gL- 色氨酸溶于 800ml 水中, 加热至 70~80, 逐滴加入 20% 盐酸, 不断搅拌, 直至完全溶解为止冷至室温, 加水稀释至 1000ml 加少许甲苯于冰箱中保存 (11) 腺嘌呤鸟嘌呤尿嘧啶溶液 : 称取硫酸腺嘌呤, 盐酸鸟嘌呤及尿嘧啶各 0.1g, 加 75ml 水和 2ml 浓盐酸, 然后加热使其完全溶解, 冷却, 若有沉淀产生, 加浓盐酸数滴, 再加热如此反复, 直至冷却后无沉淀产生为止用水稀释至 100ml 加少许甲苯于冰箱中保存 (12) D- 泛酸钙对氨基苯甲酸盐酸吡哆醇溶液 : 称取 D- 泛酸钙对氨基苯甲酸盐酸吡哆醇各 10mg 于烧杯中, 以水溶解并稀释至 1000ml, 将此液置于棕色瓶中, 加少许甲苯于冰箱中保存 * 注意 : 此溶液见光分解, 因此储存于棕色瓶中 (13) 0.02mol/L 醋酸溶液 : 取 1.18ml 纯的冰醋酸, 稀释至 1000ml (14) 核黄素盐酸硫胺素生物素溶液 : 溶解 1mg 生物素结晶于 100ml mol/L 的醋酸中, 取此液 4ml( 相当于 40ug 生物素 ), 加入 20mg 核黄素和 10mg 盐酸硫胺素, 以 mol/L 醋酸溶解并稀释至 1000ml, 将此液置于棕色瓶中, 加少许甲苯于冰箱中保存 * 注意 : 此溶液见光分解, 因此储存于棕色瓶中 (15) 甲盐溶液 : 取 25g 磷酸氢二钾和 25g 磷酸二氢钾, 加水溶解后稀释至 500ml, 加少许甲苯于冰箱中保存 (16) 乙盐溶液 : 取 10g 硫酸镁 0.5g 氯化钠 0.5g 硫酸亚铁和 0.5g 硫酸锰, 加水溶解后稀释至 500ml, 加 5 滴浓盐酸, 加少许甲苯于冰箱中保存 (17) 乙醇溶液 V/V=1/3 (18) 溴酚蓝 : 称取 0.1g 溴酚蓝, 用 1+3 乙醇溶液溶解后, 再稀释至 100ml (19) 0.04% 溴麝香草酚蓝溶液 : 称取 0.1g 溴麝香草酚蓝于研钵中, 加 1.6ml,0.1mol/L NaOH, 研磨, 加少许水继续研磨, 直至完全溶解, 用水稀释至 250ml (20) 0.004% 溴麝香草酚蓝溶液 : 量取 100ml0.04% 溴麝香草酚蓝溶液, 加水稀释至 1000ml, 供滴定用 (21) 基本培养基储备液 : 酸解酪蛋白 50ml 胱氨酸色氨酸溶液 50ml 腺嘌呤鸟嘌呤尿嘧啶溶液 10ml D- 泛酸钙对氨基苯甲酸吡哆醇溶液 10ml 核黄素盐酸硫胺素生物素溶液 10ml 甲盐溶液 10ml 乙盐溶液 10ml 无水葡萄糖 10g 无水醋酸钠 10g ( 或结晶醋酸钠 NaAC.3H2O 16.6g) 将上列试剂混合, 用水稀释至 500ml 用氢氧化钠调 PH 至 6.8, 以溴麝香草酚蓝作外指示剂 (22) 琼脂培养基 : 无水葡萄糖 1g 醋酸钠 1g

3 蛋白胨 0.8g 酵母提取物干粉 0.2g 甲盐溶液 0.2ml 乙盐溶液 0.2ml 琼脂 1.2g 混合, 加水至 100ml, 加热至琼脂完全溶化, 以溴麝香草酚蓝为外指示剂, 用盐酸趁热调 PH 至 6.8, 尽快倒入试管中, 每管 3~5ml, 加塞棉塞, 于压力蒸汽消毒器中 121 灭菌 10min, 取出后竖直试管, 冷至室温后保存于冰箱中 4.3 菌种的制备与保存 (1) 菌种的制备与保存 : 以阿拉伯乳酸杆菌 Lactobacillus arabinosus 17-5 ATCC No.8014 简称 Lact.A? 纯菌种接入 2 个或多个琼脂培养基管中, 在 37±0.5 恒温箱中保温小时, 取出于冰箱中保存, 至多不超过两周保存数周以上的菌种, 不能立即用作制备接种液之用, 一定要在使用前每天转种一次, 连续 2-3 天, 方可使用, 否则生长不好 (2) 种子培养液的制备 : 加 5ml 0.1ug/ml 的尼克酸标准应用液于尖头试管中, 加入 5ml 基本培养基, 塞好棉塞, 于压力蒸汽消毒器内 ( 高压锅 )121 下消毒 10min, 取出, 置于冰箱中, 此管可保存数周之久 5. 操作步骤 5.1 样品制备 : 取含尼克酸约 5-50ug 的均匀样品于 100ml 三角瓶中, 加 0.5mol/LH2SO450ml 放入高压蒸汽锅 121 下水解 30min, 取出, 于水中冷却, 用 10mol/LNaOH 和 0.5mol/LH2SO4 调 PH 值至 4.5, 用溴甲酚绿做指示剂将三角瓶内的溶液转移到 100ml 容量瓶中, 用蒸馏水定容至 100ml, 滤纸过滤, 保存滤液于冰箱内备测 ( 保存期不超过 36 小时 ) * 用 0.5mol/L 硫酸水解, 可以断开尼克酸和其它物质结合的键, 使尼克酸游离出来 * 观察溴甲酚绿至草绿色为终点, 说明溶液 PH 值到了 4.5. 调 PH 值至 4.5 可以除去样品中刺激和抑制细菌生长的物质, 如 : 淀粉脂肪酸及磷脂许多蛋白质的等电点也在 PH4.5, 所以此 PH 值也可用来沉淀蛋白质 5.2 接种液的制备 : 使用前一天, 将阿拉伯乳酸杆菌菌种由储备菌种管移种于已消毒的种子培养液中, 可同时制备两管, 在 37±0.5 的恒温箱中培养小时取出离心 10 分钟 (3000rpm) 倾去上部液体, 用已消毒的生理盐水淋洗 2 次, 再加 10ml 消毒过的生理盐水, 将离心管置于液体快速混合器上混合, 使菌种成为混悬体, 将此液倒入已消毒的注射器内, 立即使用 5.3 样品标准曲线的测定 :3 组试管各加 0,0.5,1.0,1.5,2.0,2.5 和 3.0ml 工作液, 每管加水稀释至 5ml, 再加 5ml 基本培养基, 混匀, 加棉塞 5.4 试样的测定 : 在试管中分别加入 1,2,3,4ml 样液, 加水稀释至 5ml, 再加入 5ml 基本培养基, 用棉塞塞住试管, 将制备好的标准曲线和试样测定管放入高压锅 (121 ) 高压 10min, 冷至室温备用 5.5 接种和培养 : 每管种一滴接种液, 于 37±0.5 恒温箱中培养 72 小时 * 注意 : 接种后用振荡器振荡混匀试管中的液体 5.6 滴定 : 从恒温箱中取出后, 将试管中培养液倒入 50ml 三角瓶中, 用 5ml0.004% 溴麝香草酚蓝分二次淋洗试管, 洗液倒入该三角瓶中, 以 0.1mol/L 氢氧化钠溶液滴定, 呈绿色即为终点, 此时 PH 约 6.8, 绘制尼克酸标准工作曲线, 用测定管得到的值, 在标准曲线上查到测定管内所含尼克酸的量 * 水解液的 PH 值调至 6.8 是为了不同的试剂加入基本培养基时, 不致改变基本培养基的 PH 值 ( 此乳酸菌生长的适宜 PH 值为 6.8) 6. 计算以尼克酸标准系列的不同微克数为横坐标, 滴定所需 0.1mol/L 氢氧化钠毫升数为纵坐标, 作

4 为标准曲线 X=(C V/m) F (100/1000) X-- 样品中尼克酸的含量,mg/100g; C-- 每毫升样品中尼克酸含量的平均值,ug/ml; V-- 样品水解液定容总体积,ml; F-- 样品试液的稀释倍数 ; m-- 试样质量,g; 100/ 折算成每 100g 样品中尼克酸含量,mg 7. 举例取一螺旋藻样品 1.004g(m), 处理后定容为 100ml(V), 从中取 1ml 稀释至 25ml(F), 取 1, 2,3,4ml 入试管中, 加入水和培养基, 高压消毒, 培养, 滴定, 测量根据曲线分别得出四管 C 值为 0.037,0.073,0.110,0.136, 所以四管平均值为 C=( / / /4) /4=0.036 代入方程式为: X=(C V/m) F (100/1000)=( /1.004) 25 (100/1000)=8.96(mg/100g) 因此得出每 100 克螺旋藻中含 8.96 毫克尼克酸 8. 注意事项 (1) 当管中尼克酸的量少于 0.05 或多于 0.3ug, 即超过标准曲线范围时所得到的数值不能用于计算 (2) 3mol/L 盐酸的配制方法 : 取 250ml 浓盐酸, 加入 750ml 蒸馏水, 共配成 1L 3mol/L 的盐酸 (3) 试管应先用洗衣粉清洗后, 用水冲净, 再放入酸缸中浸泡 1 天左右, 捞出后再用自来水和蒸馏水清洗干净, 凉干, 方可再用二比色法 1. 原理烟酸和烟酰胺于 Ph=4.5 下用稀 NH4OH 提取, 再与 CNBr 溶液与 10% 对氨基苯磺酸反应, 测其比色值 2. 适用范围选自 AOAC; 适用范围 : 适用于药物食物和饲料 3. 仪器设备 (1) 容量瓶,100ml (2) 锥形瓶,250ml (3) 电热板 (4) 高压釜 (121,30min) (5) 离心管,5ml (6) 漏斗 (7) 通风橱 (8) 酸式滴定管比色计 ( 药物 nm, 谷物 470nm) 4. 试剂所用试剂皆为分析纯 ; 所用水皆为蒸馏水 4.1 尼克酸标准溶液 (1) 尼克酸标准储备液 (100μg/ml): 将 50mgUSP 烟道参比标准 ( 贮于 P2O5 干燥器中, 放于暗处保存 )

5 (2) 标准中间液 Ι(10μg/ml): 取少量贮备液放置至室温用蒸馏水将 10.0ml 贮备液稀释至 100ml (3) 标准工作液 Π(4μg/ml): 将恢复至室温的贮备液 2.0ml 用蒸馏水稀释至 50ml 4.2 其它试剂 (1) 稀氢氧化铵溶液 :5mlNH4OH 用 H2O 稀释至 250ml (2) 稀盐酸 :V+V=1+5 (3) 磷酸缓冲液 (ph=8): 将 60gNa2HPO4 7H2O 和 10gKH2PO4 溶于蒸馏水中并稀释至 200ml (4) 溴化氢溶液 (10%, 通风橱中制备 ): 将 370ml H2O 温热至 40, 并加入 40gCNBr 振荡至溶解冷却并稀释至 400ml 溶液在冰箱保存 *CNBr 剧毒, 切勿与皮肤接触, 必须在通风橱中操作 (5) 10% 对氨基苯磺酸溶液 : 按每次 1ml 将 NH4OH 加到 20g 对氨基苯磺酸和 170ml 蒸馏水的混合液中, 直至酸溶解为止用盐酸与蒸馏水溶液 (1:1) 调节 ph 至 4.5, 采用溴甲酚绿指示剂指示稀释至 200ml * 注 : 因为溶液有颜色会影响最后结果, 所以稀释结束后溶液应几乎无色 (6) 55% 对氯基苯磺酸溶液 : 在 55g 对氨基苯磺酸中加入 27ml 蒸馏水和 27mlNH4OH, 振摇至溶解 ( 必要时加温 ) 用 NH4OH 或 5NHCl 调 ph 为 7, 再用蒸馏水稀释至 100ml ( 保存在暗处 ) 5. 操作步骤 5.1 样品制备 (1) 药物 : 将药品研碎, 溶于蒸馏水中, 稀释定容取 10mL 样品于锥形瓶中, 加入 10mLHCl, 在电热板上加热蒸发至约 2mL, 冷却, 加入 25-50mL 蒸馏水, 用 40%NaOH 或 KOH 溶液调节 ph 值至过滤, 弃去 10mL 处液, 转移至容量瓶中定容, 使溶液含尼克酸约 4μg/mL * 注 : 溶液的尼克酸含量应在 μg/mL (2) 非谷类食品及饲料 : 称取约 28g 样品, 加入 0.5mol/L H2SO4200mL, 混匀, 在高压釜中 121 加热半个小时冷却, 用 10mol/LNaOH 调节 ph 值至 4.5, 以溴甲酚绿作外指示剂, 用蒸馏水稀释至 250mL, 过滤取 17g(NH4)2SO4 于 50mL 容量瓶中, 吸取 40mL 样品液, 用 H2O 稀释定容, 强力振摇过滤, 混匀, 取 1mL 作比色测定用如果样品中尼克酸含量为 16mg/1b 最终液浓度 3.2μg/mL 移取 40mL 标准工作液 Π 至盛有 17g (NH4)2SO4 的 50mL 容量瓶中, 用蒸馏水稀释定容, 此液含尼克酸 3.2μg/mL * 注 : 加入 H2SO4 主要是为了去除样品中的蛋白及其它杂质, 以防其对测量结果造成影响 (3) 谷类产品 : 随同样品做 1 试剂空白和 5 个浓度的工作标准液分别将 1.5gCa(OH)2 放入 7 个锥形瓶中, 移入 mL 标准中间液 Ι 和 2.5g 样品 ( 含 100μg 烟酸 ), 加入蒸馏水至 90mL, 振摇混匀高压 121 下 2 小时趁热混匀, 冷却至 40, 转移至 100mL 容量瓶中, 稀释定容从容量瓶移 50mL 上清液至离心管中, 冰浴 15min 或置于冰箱中 2 小时离心 15min, 吸取 20mL 上清液至盛有 8g(NH4)2SO4 和 2mL 磷酸盐缓冲液的离心管中振荡溶解并温热至离心 5min, 过滤 5.2 操作程序 (1) 药物制剂和非谷类食物和饲料 : 假如 10% 的对氨基苯磺酸溶液,CNBr 溶液, 在通风橱中用酸式滴定管滴入, 用标准工作液 Π, 如下表制备各管 : 试剂标准空白样品空白标准溶液 (ml) H2O(mL)

6 稀 NH4OH(mL) % 对氨基苯磺酸稀 HCl(mL) 样品溶液标准溶液 (ml) 稀 NH4OH(mL) CNBr(mL) % 对氨基苯磺酸 (ml) H2O(mL) 上海洪纪仪器设备有限公司 * 注 :CNBr 有毒, 注意通风每只样品都要分别制备样品空白将标准和样品移入试管中, 分别加入 5mL 蒸馏水作为标准空白和样品空白转动试管内的液体, 立即加入稀 NH4OH, 转动, 加对氨基苯磺酸, 再次旋转混合立即加入 0.5mL 稀 HCl, 混匀, 置于光电比色计上, 加入对氨基苯磺酸后约 30s 内在 430 和 450nm 波长之间任意波长调节仪器至 0 的 A 值从加入稀 NH4OH 开始按标准空白同样的方法处理标准溶液立即转动管子, 加 CNBr 溶液并再次转动混匀, 在加入 CNBr 溶液后 30s 后转动管子, 加入对氨基苯磺酸溶液, 再转动立即加入 0.5mL 蒸馏水, 混匀, 加塞, 测量 ( 加入对氨基苯磺酸溶液后 1.5min 时颜色最深, 保留 2min, 然后慢慢褪色 ) 将样品空白设在 0A, 测样品溶液的 A 值若标准和样品液含量大致相等, 则尼克酸含量与 A 值成正比 (2) 谷类制品 : 取 5 只试管, 其中两只加入 5mL 标准液, 两只加入 5mL 样品液, 另一只加入 5mL 蒸馏水做试剂空白于一只空白管, 一只标准管和一只样品管各加 10mL 蒸馏水, 将所有管置于冰中冰浴 30min 对剩下的管按顺序加入 10mL 冷的 CNBr,30s 后加入 1.0mL55% 对氨基苯磺酸溶液用标准空白在 470nm 处, 调比色计为 0A, 加入对氨基苯磺酸后 12-15min 读出其它各管的 A 值 * 放入比色计前, 试管必需冷却一致, 每管必需拭干如管呈雾状, 浸于热水中片刻, 测定前拭干 6. 计算将扣除试剂空白的标准 A 对尼克酸含量 μg/ml 作图, 画出适宜的直线, 从此图上求出已扣除样品空白和试剂空白后样品校正的 A 所对应的浓度 C Mg 尼克酸 /g 样品 =C/10ng 样品 7. 注意事项 (1) CNBr 溶液有毒, 要注意安全 (2) 样品不同, 处理方法不同, 不要混淆 (3) 注意通风橱的通风 (4) 因为采用比色法测量, 因此样品含有色素易干扰测定, 影响测定结果的正确性 (5) 试管应先用洗衣粉清洗后, 用水冲净, 再放入酸缸中浸泡 1 天左右, 捞出后再用自来水和蒸馏水清洗干净, 凉干, 方可再用三复合维生素制剂中的烟酰胺测定 ---- 分光光度法 1. 原理在 PH 约 4.5 处将烟酰胺抽提到 KH2PO4 溶液中, 再与 CNBr 和巴比士酸反应用分光光度法测定

7 反应产物烟酸含量超过烟酰胺三倍量时干扰烟酰胺测定 2. 适用范围选自 AOAC; 适用于复合维生素制剂检测 3. 仪器 (1) 搅拌器 (2) 量筒 (3) 锥形瓶 (4) 高压釜 (121,15min) 分光光度计 (550nm) 4. 试剂所用试剂皆为分析纯 ; 所用水皆为蒸馏水 4.1. 烟酰胺标准溶液 : (1) 标准储备液 (250μg/mL):50mgUSP 烟酰胺标准加 60% 乙醇溶解并稀释到 200mL 在 10 贮存 (2) 标准工作液 (5μg/mL): 将少量贮备液温热至室温取出 2mL 用 0.3%KH2PO4 溶液稀释至 100mL 4.2 其它试剂 (1) 溴化氰溶液 :10%, 将 370ml H2O 温热至 40, 并加入 40gCNBr 振荡至溶解冷却并稀释至 400ml 溶液在冰箱保存使用前需恢复到室温 * 注 :CNBr 剧毒, 切勿与皮肤接触, 注意在通风橱中操作 (2) 磷酸二氢钾溶液 : A. 13% 的磷酸二氢钾溶液 : 将 30gKH2PO4 用蒸馏水溶解并稀释到 1L B. 3% 的磷酸二氢钾溶液 : 将 3% 的磷酸二氢钾溶液用蒸馏水稀释 (1+9) (3) 巴比土酸缓冲液 : 按每批测定需用量计算, 按每 100mL3%KH2PO4 溶液加 2g 试剂级巴比土酸制备搅拌 1 小时, 用前过滤 5. 操作步骤 5.1 样品制备 : 取适量样品于锥形瓶中, 加入 0.3% 的 KH2PO4(KH2PO4 的量至少是估计的烟酰胺量的两倍 ) 若样品不易溶解, 则振摇使其分散并用高压釜在 121 下加热 15min 用 0.3% KH2PO4 溶液稀释至 5μg/mL 过滤用蒸馏水代替 CNBr 分别制备各样品的空白将 1mL 工作标准液或测定液置于分光光度计比色管中加 0.5mL CNBr 溶液, 混匀, 塞住, 放置 25-30min, 加 10mL 巴比土酸溶液并旋摇 * 注 : 若 30min 后不能加巴比土酸溶液将管置于碎冰浴中稳定 CNBr 反应 5.2 用蒸馏水代替 CNBr 做为适当的空白,(550nm, 分光光度计设定在 0A) 颜色最深时测定反应产物的吸光度 * 注 : 加入巴比土酸后 2-4min 时颜色最深, 稳定约 1min, 慢慢褪去 * 注 : 测定样品时, 其放置时间不应超过 30min 加入 CNBr 时应有规律的间隔 1-2min 6. 计算样品中烟酰胺含量 (mg)=(a 5 稀释倍数 )/(A' 1000) 式中 A- 样品吸光度 A'-- 标准吸光度 5-μg 烟酰胺 /ml 标准工作液

8 ( 结果用烟酰胺 mg/ 片报告 ) 7. 注意事项 (1) CNBr 有毒, 应在通风橱中操作 (2) 样品中烟酸含量超过烟酰胺含量的三倍量时会干扰烟酰胺的测定, 因此样品应有明确的烟酸和烟酰胺的含量 (3) 试管应先用洗衣粉清洗后, 用水冲净, 再放入酸缸中浸泡 1 天左右, 捞出后再用自来水和蒸馏水清洗干净, 凉干, 方可再用

实验室常用培养基的配制方法

实验室常用培养基的配制方法 Ampicillin( 氨卡青霉素 )(100 mg/ml) 100 mg/ml Ampicillin 50 ml 配制方法 1. 称量 Ampicillin 置于 50 ml 离心管中 ; 2. 加入 40 ml 灭菌水, 充分混合溶解后, 定容至 50 ml; 3. 用 0.22 µm 过滤膜过滤除菌 ; 4. 小份分装 (1 ml/ 份 ) 后,-20 保存 IPTG(