TM CommaXP N96 Plasmid Kit N96 质粒小提纯化试剂盒 本说明书适用于货号为 MNP019-1 的产品 所有的技术文献均可以从本公司网站 www.biocomma.cn 得到 请访问本公司网站以确保您所使用的技术手册为最新版本 版本号 :BP061-1 www.biocomma.com
TM CommaXP N96 Plasmid Kit N96 质粒小提纯化试剂盒 产品概述 CommaXP TM 系列产品采用经典的硅胶膜吸附技术 在高盐和低 ph 条件下, 硅胶膜专一性地 吸附 DNA; 而在低盐或水溶液状态下,DNA 解吸附而被洗脱下来, 从而得到纯化 此方法具有简便 无毒 回收率高和纯化效果好等特点 用 96 孔高通量质粒提取板提取的质粒 DNA 可适用于各种常规操作, 包括酶切 PCR 测序 连接 转化和转染多种细胞等实验 产品特点 独有的硅胶膜技术, 在特定溶液环境下, 对核酸的吸附能力强, 改变条件, 易洗脱核酸 ; 筛板比面积小, 静电小,DNA 吸附极低 ; 全自动装配, 柱间及批间差异小, 重复性好 ; 提取板与本公司的负压抽提装置配套使用, 操作方便快捷 适用范围 适用于高通量提取质粒 DNA 注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项 1. 若无特别说明, 所有的离心步骤均在室温完成 2. 由于 SolutionⅡ SolutionⅢ Buffer PD 含有刺激性物质, 使用时注意防护, 需穿实验服和带手套操作 ; 若溅到皮肤或眼睛, 需用大量清水或生理盐水进行冲洗, 必要时到医院进行治疗 1 本产品仅供科研使用 请勿用于医药 临床治疗 食品及化妆品等用途
试剂盒组成 产品组成 MNP019-1 (96 preps) 30 ml 30 ml 40 ml Buffer PD Buffer PW Elution Buffer RNase A DNAK9603 60 ml 40mL 20 ml 300 μl 1 个 储存条件 本试剂盒可以在室温下 (15-25 ) 保存 12 个月, 更长时间可储存在 2-8 第一次使用 SolutionⅠ Ⅰ时加入 RNase A 混匀, 置于 4 保存 实验准备 第一次使用前,Buffer PW 中加入指定体积的无水乙醇,SolutionⅠ 中加入 RNase A 混匀, 置于 4 保存 准备无核酸和核酸酶污染的 Tip 头 离心管 使用前, 观察溶液是否出现沉淀, 若有沉淀, 可在 37 水浴中加热溶解并冷却至室温后再使用 Elution Buffer 在 65-70 水浴预热, 可增加提取效率 本产品仅供科研使用 请勿用于医药 临床治疗 食品及化妆品等用途 2
操作步骤 1. 细菌裂解 : 取 1.0-2.0 ml 菌液加入 96 孔收集板中, 加盖硅胶垫或者封口膜,4000-8000 rpm(~2810 g~6124 g) 离心 5-10 min 收集菌体, 用移液枪或排枪吸出上清培养基并倒扣于吸水纸上除去残留的培养基 注意 : 如果质粒为高拷贝,1.0-2.0 ml 菌液即可 ; 若为低拷贝, 浓度较低, 菌液体积 3.0-5.0 ml 2. 向收集细菌培养物的 96 孔板中加入 250 μl 溶液 SolutionⅠ( 请先检查是否已加入 RNase A), 加盖硅胶垫或者封口膜, 使用漩涡混合器彻底悬浮菌体或者移液枪吹打 注意 : 溶液 Solution I 预先加入 RNase A 3. 向 96 孔板中每孔加入 250 μl 溶液 SolutionⅡ, 换新的硅胶垫或者封口膜封盖, 温和地上下翻转 8-10 次使菌体充分裂解, 瞬时离心, 使孔口液体落回板底 注意 : 温和地混合, 不要剧烈震荡, 以免打断质粒 DNA, 混匀后菌液应变得粘稠 4. 再向 96 孔板中每孔加入 350 μl 溶液 Solution Ⅲ, 加盖新的硅胶垫或者封口膜, 立即温和地上下翻转 6-8 次使其充分混匀 注意 : 溶液 Solution Ⅲ 加入后应立即混合, 充分混匀至出现白色絮状沉淀, 室温放置 5 min 5. 将裂解后的溶液转移到 96 孔过滤板中, 与一个新的 96 孔收集板叠放在一起,4000-8000 rpm(~2810 g~6124 g) 离心 5 min, 此时裂解液进入 96 孔收集板中 步骤 6-10 可以选择离心法或负压法进行质粒 DNA 的提取纯化 A. N96 质粒 DNA 的提取纯化 ( 离心法 ) 6A. 将裂解液完全转入 96 孔 DNAK 9603 提取板中 (DNAK 9603 可与步骤 5 中的 96 孔收集板叠放在一起 ),4000-8000 rpm(~2810 g~6124 g) 离心 5 min, 弃废液, 将 DNAK 9603 提取板重新放回收集板上 7A. 向 DNAK 9603 提取板每孔中加入 500μL Buffer PD,4000-8000 rpm(~2810 g~ 6124 g) 离心 5 min, 弃废液, 将 DNAK 9603 提取板重新放回收集板上 8A. 向 DNAK 9603 提取板每孔中加入 700μL Buffer PW( 请先检查是否已加入无水乙醇 ), 4000-8000 rpm(~2810 g~6124 g) 离心 5 min, 倒掉收集板中的废液 重复操作此步骤一次 3 本产品仅供科研使用 请勿用于医药 临床治疗 食品及化妆品等用途
9A. 将 DNAK9603 提取板重新叠放在 96 孔收集板上, 置于 4000-8000 rpm(~2810 g~ 6124 g) 离心 8 min, 去除残余的漂洗液 注意 :Buffer WB 漂洗后放置数分钟以除去乙醇, 否则多余的乙醇会影响后续的酶切反应 PCR 扩增等实验 10A. 将 DNAK9603 提取板放入一新的 96 孔收集板中, 向 DNAK 9603 提取板每孔的吸附膜中间部位悬空滴加 60-100 μl Elution Buffer 或者 ddh2o, 室温放置 5-6 min,4000-8000 rpm(~2810 g~6124 g) 离心 10 min 将质粒溶液收集到收集板中 注意 : 可将洗脱缓冲液置于 65-70 水浴中预热, 可提高洗脱效率 ; 如果提取的质粒用于下游实验, 且对 ph 值或 EDTA 敏感, 可以用灭菌水洗脱 洗脱液的 ph 值对于洗脱效率有很大影响 ; 若用 ddh2o 做洗脱液应保证其 ph 值在 7.0-8.5 范围内,pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率 ; 且 DNA 产物应保存在 -20, 以防 DNA 降解 B.N96 质粒 DNA 的提取纯化 ( 负压法 ) 6B. 将裂解液完全转入 96 孔 DNAK9603 提取板中, 将提取板放置入负压装置, 连接负压装置, 负压抽提, 吸尽提取板中的溶液 7B. 向 96 孔 DNAK 9603 提取板每孔加入 500 μl Buffer PD, 连接负压装置, 负压抽提, 吸尽 8B. 向 96 孔 DNAK9603 提取板每孔加入 700 μl Buffer PW( 使用前检查是否已加入无水乙醇 ), 调节负压装置, 吸尽提取板中的溶液 重复操作此步骤一次 注意 :Buffer PW 漂洗两次主要是除去多余的盐分 9B. Buffer PW 漂洗后, 将 DNAK 9603 提取板放置 2-5min, 以除去乙醇, 否则多余的乙醇会影响后续的酶切反应 PCR 扩增等实验 10B. 在负压装置槽中放入一新的 96 孔收集板, 向 96 孔 DNAK 9603 提取板每孔的吸附膜中间部位悬空滴加 50-100 μl Elution Buffer 或者 ddh2o, 室温放置 5-6 min, 调节负压装置, 吸尽提取板中的溶液, 将质粒溶液收集到收集板中 注意 : 可将洗脱缓冲液置于 65-70 水浴中预热, 可提高洗脱效率 ; 如果提取的质粒用于下游实验, 且对 ph 值或 EDTA 敏感, 可以用灭菌水洗脱 洗脱液的 ph 值对于洗脱效率有很大影响 ; 若用 ddh2o 做洗脱液应保证其 ph 值在 7.0-8.5 范围内,pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率 ; 且 DNA 产物应保存在 -20, 以防 DNA 降解 本产品仅供科研使用 请勿用于医药 临床治疗 食品及化妆品等用途 4
基因组 DNA 浓度及纯度检测 得到的基因组 DNA 片段的完整性与样品保存时间 操作过程中的剪切力等因素有关 可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测 DNA 片段的浓度与纯度 DNA 在 OD260 处有显著吸收峰,OD260 值为 1 相当于 50 μg/ml 双链 DNA 40 μg/ml 单链 DNA OD260/ OD280 比值应为 1.8-2.0, 如果洗脱时不使用 Buffer TE, 而使用 ddh2o, 比值会偏低, 因为 ph 值和离子存在会影响光吸收值, 但这并不表示纯度低 5 本产品仅供科研使用 请勿用于医药 临床治疗 食品及化妆品等用途