GENFINE BIOTECH (BEIJING) CO., LTD 版本号 :FRI1402 FinePure FFPE DNA/RNA Kit FinePure 固定组织 DNA/RNA 共提取试剂盒 ( 离心柱型 ) 目录号 :FR603 产品内容 : Contents Buffer FDA

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煤堕冯
5 years ago
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1 GENFINE BIOTECH (BEIJING) CO., LTD 版本号 :FRI1402 FinePure FFPE DNA/RNA Kit FinePure 固定组织 DNA/RNA 共提取试剂盒 ( 离心柱型 ) 目录号 :FR603 产品内容 : Contents Buffer FDA Buffer MDA Buffer GHL Buffer DW Buffer DW2 Buffer TB Proteinase K FR603 (50 preps) 40 ml 30 ml 12 ml 2 x 1.2 ml FinePure Mini Spin Columns 2 x 50 个 2 ml Collection Tubes 2 x 50 个 1.5 ml RNase Free Microcentrifuge Tubes 2 x 50 个 RNase A(10 mg/ml) 300 μl DNase I (2,000 U) DNase I Buffer Buffer RB Buffer FRW Buffer RW2 RNase Free ddh 2O 1 瓶 4 ml 40 ml 12 ml 储存条件 : 本试剂盒中的 DNase I 组分采用冰袋运输, 收到后立即将 DNase I 置于 2-8 保存, 其他试剂室温 (15-25 ) 保存本产品仅供科研使用请勿用于医药临床治疗食品及化妆品等用途 1

2 产品简介 : 本试剂盒可以从福尔马林固定石蜡包埋组织样本中同时提取基因组 DNA 和总 RNA 根据 DNA 和 RNA 在裂解液中的溶解度不同, 在特殊的裂解液条件依次释放组织切片中的 DNA 和 RNA, 克服了福尔马林交联造成的抑制效应该试剂盒通过特异性结合 DNA 和 RNA 的离心吸附柱和独特的缓冲液系统, 将高品质的 DNA 和 RNA 纯化至小洗脱体积中由于固定和包埋的条件不同,FFPE 样本中提取得到的 DNA 和 RNA 多为片段化的核酸, 完整性要低于新鲜或冷冻样本提取的 DNA 和 RNA 纯度高, 质量稳定可靠, 使用本试剂盒提取的 FFPE DNA 和 RNA 可适用于多种下游应用, 如 PCR 和 Real-time PCR;SNP 基因分析 STR 基因分析 ; 药物基因组学研究产品特点 : 样本广泛 : 可从福尔马林固定石蜡包埋组织福尔马林等固定液中的组织中分离纯化基因组 DNA 和 RNA 轻松提取 : 轻松提取纯化高品质, 高得率的即用型 DNA 和 RNA, 结果重复性好稳定可靠 : 彻底去除污染物和 PCR 抑制剂注意事项 : 1 拿到样品后要尽快在 4-10% 的福尔马林中固定, 固定时间以 8-24 h 内为宜, 时间过长导致基因组断裂, 影响下游实验 2 确保包埋前的样品彻底脱水, 残留的福尔马林会抑制 PCR 检测酶的作用 3 本产品适用于医学科学实验研究 4 本产品所提 DNA 的完整性依赖于样本类型储存时间以及固定条件如果甲醛固定时间过长或样本存放时间过久 (>1 年 ) 则易导致 DNA 完整性受损, 无法扩出长片段 5 若缓冲液 FDA MDA GHL RB 中有沉淀, 可在 60 水浴中重新溶解, 摇匀后使用 6 试剂盒中各试剂在使用前应按照说明书要求操作, 所有离心步骤均在室温下进行 DNase I 母液的配制 : 先用 1 ml 注射器吸取 550 μl RNase Free ddh 2 O, 然后打进装有 DNase I 干粉 (2,000 U) 的玻璃瓶中, 轻柔混匀, 分装后 -20 贮存 ( 可保存 9 个月 ) ( 如果需要另外购买 DNase I, 2

3 目录号 :RA102-01) 注意 : 从 -20 融化后的 DNase I 母液保存于 4 ( 可保存 6 周 ), 不要再次冻存操作步骤 : 使用前请先在 Buffer DW2 和 Buffer RW2 中加入无水乙醇, 加入体积请参照瓶上的标签 1. 样本处理 : a. 石蜡切片 : 取石蜡切片 (5-10 μm 厚,1 1 cm 2 大小 )5-8 张 b. 石蜡块 : 手术刀刮取约 30 mg 的组织样本 ( 尽量去除多余的石蜡 ) 注意 : 如果样品表面暴露于空气中, 最初刮取的 2-3 片弃掉不用 c. 福尔马林等固定液中的样本 : 取 30 mg 样本, 用手术刀切为数块, 置于 1.5 ml 离心管中, 加入 500 μl PBS(10 mm,ph7.4) 涡旋振荡混匀,12,000 rpm 离心 1 min, 重复 2 次, 然后从步骤 7 开始操作 2. 将石蜡切片或石蜡块样本装于 1.5 ml 无菌离心管中, 加入 1 ml 二甲苯, 剧烈涡旋 10 sec, 静置 1 min 3. 12,000 rpm 离心 2 min, 弃上清 ( 注意 : 不要倒掉沉淀 ) 4. 加入 1 ml 无水乙醇到上述管中, 涡旋混匀 10 sec 5. 12,000 rpm 离心 2 min, 弃上清 ( 注意 : 不要倒掉沉淀 ) 6. 室温放置 5-10 min, 充分挥发乙醇 7. 加入 150 μl Buffer FDA 和 10 μl Proteinase K 到上述沉淀块中, 涡旋振荡混匀 8. 置于 56 孵育 15 min 9. 冰上放置 3 min ,000 rpm 离心 15 min 11. 轻轻转移上清到新的离心管中进行 RNA 的提取 ( 步骤 12-25), 保留沉淀块进行 DNA 的提取 ( 步骤 ) RNA 的提取纯化 : 12. 将步骤 11 中的上清溶液置于 80 孵育 15 min 13. 加入 220 μl 的 Buffer RB, 涡旋混匀 14. 加入 660 μl 的无水乙醇, 涡旋混匀 ( 可能会出现沉淀 ) 15. 转移 700 μl 溶液和沉淀至吸附柱 FinePure Mini Spin Columns 中 ( 吸附柱放在收集管 3

4 中 ),12,000 rpm 离心 1 min, 弃掉收集管中的废液, 将吸附柱放回收集管中 16. 重复步骤 15 直到所有的溶液和沉淀完全通过吸附柱, 弃废液, 将吸附柱放回收集管中 17. 加入 350 μl Buffer FRW 到吸附柱中,12,000 rpm 离心 30 sec, 弃废液, 将吸附柱放回收集管中 18. DNase I 工作液的配制 : 取 10 μl DNase I 母液放入新的 RNase Free 离心管中, 加入 70 μl DNase I Buffer, 轻柔混匀 19. 加入 80 μl 的 DNase I 工作液向吸附柱中央, 室温放置 15 min 20. 加入 350 μl Buffer FRW 到吸附柱中,12,000 rpm 离心 30 sec 21. 将收集管中的滤液重新加入吸附柱中,12,000 rpm 离心 30 sec 22. 加入 500 μl Buffer RW2( 使用前请先检查是否已加入乙醇 ) 到吸附柱中,12,000 rpm 离心 30 sec, 弃废液, 将吸附柱放回收集管中 23. 重复步骤 ,000 rpm 离心 3 min, 倒掉废液将吸附柱置于室温放置数分钟, 以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液 25. 将吸附柱转入一个新的 1.5 ml RNase Free Microcentrifuge Tubes 中, 向吸附膜的中间部位悬空滴加 μl RNase Free ddh 2 O,12,000 rpm 离心 1 min, 得到 RNA 溶液注意 : 洗脱缓冲液体积不应少于 30 μl, 体积过小影响回收效率 RNA 溶液请于 -70 保存 DNA 的提取纯化 : 26. 在步骤 11 中得到的组织沉淀块中加入 200 μl Buffer FDA 和 20 μl Proteinase K, 充分混匀,56 孵育 1 h 直至样本完全裂解可选步骤 : 如果需要制备无 RNA 污染的 DNA, 加入 4 μl RNase A(10 mg/ml, FA101-02) 混匀后, 室温放置 2 min 27. 置于 90 静止孵育 1 h, 期间不要搅动, 然后冷却至室温 28. 加入 700 μl Buffer GHL, 涡旋震荡充分混匀, 短暂离心使管壁上的溶液收集到管底 29. 将上一步所得的混合液加入一个吸附柱 FinePure Mini Spin Columns 中,8,000 rpm 离心 2 min, 倒掉废液, 重新将吸附柱放回收集管中注意 : 吸附柱最大容量为 700 μl, 可将剩余液体重复上述步骤上柱 4

5 30. 加入 500 μl Buffer DW 到吸附柱中,8,000 rpm 离心 30 sec, 倒掉收集管中的废液, 将吸附柱放回收集管中 31. 加入 500 μl Buffer DW2( 使用前请先检查是否已加入乙醇 ) 到吸附柱中,8,000 rpm 离心 30 sec, 倒掉废液, 将吸附柱放回收集管中 32. 重复操作步骤将吸附柱放回收集管中,12,000 rpm 离心 3 min, 倒掉废液 34. 将吸附柱转入一个干净的离心管中, 向吸附膜的中间部位悬空滴加 65 预热的 μl Buffer TB 洗脱,12,000 rpm 离心 1 min, 将收集有 DNA 的离心管 -20 保存注意 : 洗脱缓冲液体积不应少于 30 μl, 体积过小影响回收效率为增加基因组 DNA 的得率, 可将离心得到的溶液再加入吸附柱中, 室温放置 2 min,12,000 rpm 离心 2 min 洗脱液的 ph 对于洗脱效率有很大影响, 若用 ddh 2 O 做洗脱液应保证其 ph 值在范围内,pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率 ; 且 DNA 产物应保存在 -20, 以防 DNA 降解 5

产品简介本试剂盒采用可以特异性结合核酸的离心吸附柱和独特的缓冲液系统, 样品裂解后, DNA 在高盐条件下与硅胶膜结合, 在低盐高 ph 值时 DNA 从硅胶膜上洗脱下来本试剂盒用于从小剂量的血液干血点血清 / 血浆微量组织漱口水毛发微切割组织等微量样品中提取基因组 DNA, 所得基

产品简介本试剂盒采用可以特异性结合核酸的离心吸附柱和独特的缓冲液系统, 样品裂解后, DNA 在高盐条件下与硅胶膜结合, 在低盐高 ph 值时 DNA 从硅胶膜上洗脱下来本试剂盒用于从小剂量的血液干血点血清 / 血浆微量组织漱口水毛发微切割组织等微量样品中提取基因组 DNA, 所得基 Order: 010-59822688 Toll-free: 800-990-6057 /400-810-6057 TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO., LTD 版本号 : DP121221 TIANamp Micro DNA Kit 微量样品基因组 DNA 提取试剂盒 ( 离心柱型 ) 目录号 :DP316 产品内容产品组成 DP316 (50 preps) 缓冲液 GA(Buffer