未命名 -1

Size: px

Start display at page:

Download "未命名 -1"

仓巫
5 years ago
Views:

1 TM CommaX Plant Genomic DNA Kit 植物基因组 DNA 提取试剂盒 ( 离心柱型 ) 本说明书 (1.0 版 ) 适用于货号为 MNP006-1 MNP006-2 的产品所有的技术文献均可以从本公司网站得到请访问本公司网站以确保您所使用的技术手册为最新版本版本号 :BP

2 植物基因组 DNA 提取试剂盒 ( 离心柱型 ) 产品概述本试剂盒采用独特的硅胶膜吸附技术, 能够快速提取植物基因组 DNA, 适用于从植物组织细胞中提取总基因组 DNA, 提取的基因组 DNA 最大长度可达到 50 kb 本试剂盒采用独特的缓冲液系统, 可最大限度的去除杂蛋白及其他有机物等杂质, 经裂解后的 DNA 可高效结合到吸附柱上, 残留的少量杂质可使用漂洗液进行去除, 最后使用洗脱液进行洗脱收集, 获得高纯度的基因组 DNA 用本试剂盒提取的植物基因组 DNA 可适用于各种常规操作, 包括酶切 PCR 文库构建等分子生物学下游实验产品特点处理样本量可多至 100 mg,1 h 之内可获得纯度比较高的植物基因组 DNA; 独有的硅胶膜技术和简单的离心步骤, 优化的缓冲液系统对核酸的吸附能力强, 改变条件, 易洗脱核酸 ; 筛板由特殊材料构成, 可承受高速离心, 非特异性吸附低适用范围材料提取量 DNA 得量植物组织 100 mg 3-30 μg 注 : 不同来源的植物组织材料中提取的 DNA 的量会有差异注意事项请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项 1 避免反复冻融样本, 否则会导致提取的基因组片段较小提取浓度下降 ; 2 第一次使用前请按照试剂瓶上标签说明加入无水乙醇; 3 由于 β- 巯基乙醇氯仿有毒和刺激性气味, 操作时注意安全, 须戴手套和口罩 ; 4 使用前观察试剂有没有产生沉淀, 若产生沉淀, 将产生沉淀的试剂瓶放入 56 水浴中溶解 ; 5 若提取的基因组 DNA 用于下游实验对 RNA 污染比较敏感时, 可加入 20 μl RNase A (20 mg/ml)( 本公司有售 ) 1 本产品仅供科研使用请勿用于医药临床治疗食品及化妆品等用途

3 试剂盒组成产品组成 MNP006-1 (50 preps) MNP006-2 (200 preps) Buffer GPA Buffer GPB Buffer GPD Buffer GW Buffer TE 40 ml 40 ml 30 ml 15 ml 15 ml 160 ml 160 ml 120 ml 2X30 ml 60 ml 吸附柱 C6 50 个 200 个 2.0 ml 收集管 1.5 ml 收集管 50 个 50 个 200 个 200 个自备试剂 :β- 巯基乙醇氯仿储存条件 1 本试剂盒可以在室温下(15-25 ) 保存 12 个月, 更长时间可储存在 2-8 ; 2 使用前先检查试剂盒内的缓冲液是否有沉淀产生, 如若有沉淀形成, 须将试剂盒内的缓溶液于 65 水浴中溶解 ; 3 本试剂盒于室温下(15-25 ) 运输本产品仅供科研使用请勿用于医药临床治疗食品及化妆品等用途 2

4 操作步骤使用前按照试剂瓶标签说明在漂洗液 GW 中加入无水乙醇 A. 植物组织前处理与裂解 1. 取植物新鲜组织约 100 mg 或干重组织约 mg, 加入液氮充分研磨 2. 将研磨好的粉末迅速转移 2 ml 离心管中, 加入 700 μl 65 预热 Buffer GPA 到离心管中 ( 实验前在预热的 Buffer GPA 中加入巯基乙醇, 终浓度为 0.1%), 迅速颠倒混匀后, 将离心管放在 65 水浴 20 min, 水浴过程中颠倒离心管以混合样品数次 3.( 可选步骤 ) 若后续实验对 RNA 敏感, 可在步骤 3 之后加入 20 μl RNase A (20 mg/ml) 溶液, 震荡混匀, 室温放置数分钟 4. 加入 700 μl 氯仿, 充分混匀,12,000 rpm (~13,400 g ) 离心 5 min 注意 : 若提取富含多酚或淀粉的植物组织, 可在第 3 步前, 用酚 : 氯仿 (1:1) 进行等体积抽提 5. 小心地将上一步所得上层水相转入一个新的 2.0 ml 离心管中, 加入 700 μl Buffer GPB, 充分混匀注意 : 转移上层水相过程中操作轻缓, 防止非水相物质转入离心管内, 造成提取基因组 DNA 浓度和纯度偏低 B. 基因组 DNA 的提取纯化 ( 离心法 ) 6. 将混匀的液体转入吸附柱 C6 中,12,000 rpm (~13,400 g ) 离心 30 sec-1 min, 弃掉废液注意 : 混匀的液体体积较大, 吸附柱容积只有 700 μl 左右, 可分次加入吸附柱内进行离心 7. 向吸附柱 C6 中加入 500 μl Buffer GPD,12,000 rpm (~13,400 g ) 离心 30 sec-1 min, 倒掉废液, 将吸附柱 C6 放入收集管中 8. 向吸附柱 C6 中加入 600 μl Buffer GW( 使用前请先检查是否已加入无水乙醇 ),12,000 rpm (~13,400 g ) 离心 30 sec-1 min, 倒掉废液, 将吸附柱 C6 放入收集管中 9. 重复操作步骤将吸附柱 C6 放回收集管中,12,000 rpm (~13,400 g ) 离心 2 min, 倒掉废液 3 本产品仅供科研使用请勿用于医药临床治疗食品及化妆品等用途

5 11. 将吸附柱 C6 置于室温放置数分钟, 以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液注意 : 这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除, 漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应 ( 酶切 PCR 等 ) 实验 12. 将吸附柱 C6 转入一个干净的离心管中, 向吸附膜的中间部位悬空滴加 μl Buffer TE 或超纯水, 室温放置 5-8 min,12,000 rpm (~13,400 g ) 离心 2 min, 将溶液收集到离心管中注意 : 洗脱缓冲液体积不应少于 50 μl, 体积过小影响回收效率 ; 将洗脱缓冲液置于水浴中预热, 可提高洗脱效率 ; 另外洗脱液的 ph 值对洗脱效率的影响较大, 应控制洗脱液 ph 值在范围内 C. 基因组 DNA 的提取纯化 ( 负压法 ) 6'. 将吸附柱 C6 插到负压装置的接口上, 然后把步骤 5 的水相液体转移到吸附柱 C6 中, 调节负压装置, 吸尽吸附柱中的溶液注意 : 由于上清液体体积不能一次性加入吸附柱内, 可分多次加入 7'. 向吸附柱 C6 中加入 500 μl Buffer GPD, 调节负压装置, 吸尽吸附柱中的溶液 8'. 向吸附柱 C6 中加入 600 μl Buffer GW( 使用前请先检查是否已加入无水乙醇 ), 调节负压装置, 吸尽吸附柱中的溶液 9'. 重复此操作步骤一次 10'. 将吸附柱 C6 放回收集管中,12,000 rpm (~13,400 g) 离心 2 min, 倒掉废液 11'. 将吸附柱 C6 置于室温放置数分钟, 以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液注意 : 这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除, 漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应如酶切 PCR 等实验 12'. 将吸附柱 C6 转入一个干净的离心管中, 向吸附膜的中间部位悬空滴加 μl Buffer TE 或超纯水, 室温放置 5-8 min,12,000 rpm (~13,400 g ) 离心 2 min, 将溶液收集到离心管中注意 : 洗脱缓冲液体积不应少于 50 μl, 体积过小影响回收效率 ; 将洗脱缓冲液置于水浴中预热, 可提高洗脱效率 ; 另外洗脱液的 ph 值对洗脱效率的影响较大, 应控制洗脱液 ph 值在范围内本产品仅供科研使用请勿用于医药临床治疗食品及化妆品等用途 4

6 植物基因组 DNA 浓度及纯度检测得到的基因组 DNA 片段的完整性与样品保存时间操作过程中的剪切力等因素有关得到的 DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度 DNA 应在 OD260 处有显著吸收峰,OD260 值为 1 相当于大约 50 μg/ml 双链 DNA 40 μg/ml 单链 DNA OD260/ OD280 比值应为 , 如果洗脱时不使用洗脱缓冲液, 而使用 ddh2o, 比值会偏低, 因为 ph 值和离子存在会影响光吸收值, 但并不表示纯度低 5 本产品仅供科研使用请勿用于医药临床治疗食品及化妆品等用途

未命名 -1

未命名 -1 TM CommaX Blood Genomic DNA Kit 血液基因组 DNA 提取试剂盒 ( 离心柱型 ) 本说明书 (1.0 版 ) 适用于货号为 MNP002-1 MNP002-2 的产品所有的技术文献均可以从本公司网站 www.biocomma.cn 得到请访问本公司网站以确保您所使用的技术手册为最新版本版本号 :BP024-1 www.biocomma.com 血液基因组 DNA