未命名 -1

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潮蚊毕
5 years ago
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1 TM CommaX Blood Genomic DNA Kit 血液基因组 DNA 提取试剂盒 ( 离心柱型 ) 本说明书 (1.0 版 ) 适用于货号为 MNP002-1 MNP002-2 的产品所有的技术文献均可以从本公司网站得到请访问本公司网站以确保您所使用的技术手册为最新版本版本号 :BP

2 血液基因组 DNA 提取试剂盒 ( 离心柱型 ) 产品概述本试剂盒采用酶裂解法裂解血液样本, 适用于从新鲜加抗凝血剂或冷冻的血液样本中提取基因组 DNA 离心吸附柱采用的硅基质材料为本公司特有新型材料, 可特异性高效专一吸附 DNA, 可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物提取的基因组 DNA 片段大, 纯度高, 质量稳定可靠使用本试剂盒回收的 D N A 可适用于各种常规操作, 包括酶切 P C R 文库构建 Southern 杂交等实验产品特点提取的基因组 DNA 含量可高达 40 μg 简单快速无毒,40 min 内即可获得超纯的基因组 DNA 获得的 DNA 纯度高, 可直接用于 PCR 酶切杂交等分子生物学实验提取得率材料哺乳动物全血禽类两栖类全血提取量 100 μl -1 ml 5 μl-20 μl DNA 得量 30 μg 40 μg 注意事项请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项 1 样品应避免反复冻融, 否则会导致提取的 DNA 片段较小提取量下降 2 若缓冲液 GLS 中有沉淀, 可在 37 水浴中重新溶解, 摇匀后使用 3 所有离心步骤均为使用台式离心机, 室温下离心 1 本产品仅供科研使用请勿用于医药临床治疗食品及化妆品等用途

3 试剂盒组成产品组成 MNP002-1 (50 preps) MNP002-2 (200 preps) Buffer CLS Buffer SS Buffer GLS Buffer PSC Buffer WSC Buffer TE Proteinase K 吸附柱 C2 收集管 (2 ml) 离心管 (1.5 ml) 60 ml 30 ml 1 ml 50 个 50 个 50 个 250 ml 50 ml 50 ml 120 ml 50 ml 60 ml 4X1 ml 200 个 200 个 200 个选配试剂 RNase A(50 mg/ml) 储存条件该试剂盒置于室温 (15-25 ) 干燥条件下, 可保存 12 个月, 更长时间的保存可置于保存条件下, 若溶液产生沉淀, 使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间, 必要时可在 37 水浴中预热 10 min, 以溶解沉淀本产品仅供科研使用请勿用于医药临床治疗食品及化妆品等用途 2

4 操作步骤使用前先在漂洗液 PW 中加入无水乙醇, 加入体积请参照瓶上的标签 1. 血液样本的处理 :( 本产品适用于处理 5 μl-1 ml 血液样品 ) 1 若是哺乳类血液样本, 当样本体积小于或等于 250 μl 时, 加入对应量 Buffer SS 补足到 250 μl 再进行下一步实验 ; 2 哺乳类血液样本体积超过 250 μl 时, 需要进行去除红细胞处理, 加入倍样本体积的 Buffer CLS, 充分混匀后于 12,000 rpm (~13,000 g ) 离心 1 min, 除去上清, 留下有核细胞沉淀 ( 如果裂解不彻底, 可重复裂解一次 ), 然后加入 250 μl Buffer SS, 振荡至彻底混匀后再进行下一步实验 ; 3 若是禽类两栖类等样品, 由于红细胞为有核细胞, 处理量约 μl, 然后加入 Buffer SS 补足 250 μl 后进行下一步实验注意 : 如果需要去除 RNA, 可加入 4 μl RNase A(50 mg/ml) 溶液 ( 客户自备 ), 振荡 sec, 室温放置 5 min 2. 加入 20 μl Proteinase K 溶液, 混匀 3. 加 250 μl Buffer GLS, 充分颠倒混匀, 于 58 孵育 min, 其间颠倒混匀数次, 溶液应变清亮 ( 如溶液未彻底变清亮, 请延长裂解时间至溶液清亮为止 ) 注意 : 加入 Buffer GLS 时可能会产生白色沉淀, 一般 37 放置时会消失, 不会影响后续实验如溶液未变清亮, 说明细胞裂解不彻底, 可能导致提取 DNA 量少和提取出的 DNA 不纯当血液体积 250 μl 且没有采用红细胞裂解处理, 或是样本储存条件不佳, 水浴后颜色可能为深褐色, 注意溶液中没有团块等沉淀 4. 加 200 μl 无水乙醇, 充分颠倒混匀, 此时可能会出现絮状沉淀 A. 离心法 5. 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱 C 2 中 ( 吸附柱 C 2 放入收集管中 ), 12,000 rpm (~13,000 g ) 离心 1 min, 倒掉收集管中的废液, 将吸附柱 C2 放入收集管中 6. 向吸附柱 C2 中加入 500 μl Buffer PSC,12,000 rpm (~13,000 g ) 离心 30 sec, 倒掉收集管中的废液, 将吸附柱 C2 放入收集管中 3 本产品仅供科研使用请勿用于医药临床治疗食品及化妆品等用途

5 7. 向吸附柱 C2 中加入 600 μl Buffer WSC( 使用前请先检查是否已加入无水乙醇 ), 12,000 rpm (~13,000 g ) 离心 30 sec, 倒掉收集管中的废液, 将吸附柱 C2 放入收集管中 ; 重复此操作步骤一次 8. 12,000 rpm (~13,000 g) 离心 2 min, 倒掉废液将吸附柱 C2 置于室温放置 5-10 分钟, 以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液注意 : 这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除, 漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应 ( 酶切 PCR 等 ) 实验 9. 将吸附柱 C2 转入新的 1.5 ml 离心管中, 向吸附膜中间位置悬空滴加 μl 洗脱 Buffer TE, 室温放置 2-5 min,12,000 rpm (~13,000 g ) 离心 2 min, 将溶液收集到离心管中注意 : 洗脱缓冲液体积不应少于 50 μl, 否则影响回收效率另外为提高得率, 可将离心得到的溶液再加入吸附柱 C2 中, 室温放置 2 min,12,000 rpm (~13,000 g ) 离心 2 min 洗脱液的 ph 对于洗脱效率有很大影响若用 ddh2o 做洗脱液应保证其 ph 值在范围内, 且 DNA 产物应保存在 -20, 以防 DNA 降解 B. 负压法 5. 将试剂盒中的吸附柱 C2 插到负压装置的接口上将上一步所得溶液和絮状沉淀转移到吸附柱中, 调节负压装置, 吸尽吸附柱中的溶液 6. 加入 500 μl 去蛋白液 Buffer PSC, 调节负压装置, 抽尽吸附柱中的溶液 7. 加入 700 μl Buffer WSC ( 含 75% 无水乙醇 ) 调节负压装置, 抽尽吸附柱中的溶液重复此操作步骤一次 8. 将吸附柱放入收集管中,12,000 rpm (~13,000 g ) 离心 2 min, 去除残余漂洗液 9. 将吸附柱放于一个新的 1.5 ml 离心管中, 室温放置 5-10 min, 尽量除去膜上的乙醇注意 :Buffer WSC 漂洗后把吸附柱管盖打开放置数分钟以除去乙醇, 否则多余的乙醇会影响后续的 ( 酶切 PCR 等 ) 实验 10. 在吸附膜中间部位加 μl 的 Buffer TE 或者 ddh2o, 室温放置 2 min,12,000 rpm (~13,000 g ) 离心 2 min, 将溶液收集到离心管中注意 : 可将洗脱缓冲液置于水浴中预热, 可提高洗脱效率 ; 另外洗脱液的 ph 值对洗脱效率的影响较大, 应控制洗脱液 ph 值在范围内本产品仅供科研使用请勿用于医药临床治疗食品及化妆品等用途 4

6 基因组 DNA 浓度及纯度检测得到的基因组 DNA 片段的完整性与样品保存时间操作过程中的剪切力等因素有关得到的 DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度 DNA 应在 OD260 处有显著吸收峰,OD260 值为 1 相当于大约 50 μg/ml 双链 DNA 40 μg/ml 单链 DNA OD260/ OD280 比值应为如果洗脱时不使用洗脱缓冲液, 而使用 ddh2o, 比值会偏低, 因为 ph 值和离子存在会影响光吸收值, 但并不表示纯度低本产品仅供科研使用请勿用于医药临床治疗食品及化妆品等用途 5

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未命名 -1 TM CommaX Plant Genomic DNA Kit 植物基因组 DNA 提取试剂盒 ( 离心柱型 ) 本说明书 (1.0 版 ) 适用于货号为 MNP006-1 MNP006-2 的产品所有的技术文献均可以从本公司网站 www.biocomma.cn 得到请访问本公司网站以确保您所使用的技术手册为最新版本版本号 :BP029-1 www.biocomma.com 植物基因组 DNA